Коллекция представителей рода Yersinia: некоторые аспекты биологических свойств и лабораторной диагностики

Гурлева, Галина Георгиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Коллекция представителей рода Yersinia: некоторые аспекты биологических свойств и лабораторной диагностики
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Коллекция представителей рода Yersinia: некоторые аспекты биологических свойств и лабораторной диагностики"

РГь ОД

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ "МИКРОБ"

ГУРЛЕВА Галина Георгиевна

Коллекция представителей рода Yersinia: некоторые аспекты биологических свойств и лабораторной диагностики

03.00.07-микробиология

Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук в форме научного доклада

Саратов 1995

Работа выполнена в Ростовском-на-Дону государственном ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском противочумном инспггуте.

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Б.Н. Мишанькин.

Официальные оппоненты; доктор медицинских наук, профессор JI.B. Самойлова, '"доктор медицинских наук, профессор A.B. ЛипницкиЙ, доктор медицинских наук, профессор Л .Ф. Зыкин.

Ведущая организация: Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт.

Зшщгга состоится "¿г марта 1995 г. в часов па заседании Специализированного Совета Д 074. 32 01 по присуждению учёной степени доктора наук при Российском научно-исследовательском противочумном инспггуте "Микроб" Госкомсанэпиднадзора Российской Федерации (410071, г. Саратов, ул. Университетская,46).

С диссертацией можно ознокоытъся в на>чноЙ библиотеке института "Микроб".

Автореферат разослан февг^ля 1995 г.

Учёный секретарь Специализированного С'овега ' доктор биологических наук Г.А.Корнее»

1. Общая характеристика работы

1.1. А ггуальность проблемы

На 7 Международном конгрессе коллекции культур (Пекин, 12-16 октября 1992 г.) было отменено, что известные в настоящее время

¡¿»¿^0 UiuiwiU iiiiiiui U&ikiiU Hovlblu niXiu liA

огромного разнообразия в природе. Считают, что описанные виды прнблтительно составляют не более 1-5% су чествующих на Земле (Калакуцкий,1993).

Процесс выявления новых видов микробов и уточнение их систематического положения продолжается. В частности, за последние полтора десятилетня значительно изменилось представление о таксономическом положении возбудителей чумы а псевдотубсркулеза. Ранее эти микроорганизмы относились к роду Pasteurella семейства Brucellaceae и их нисновалн P.pestis н Pseudotuberculosis. J.Van Loghem (1944) предложил выделить эти мшроорганизмы в самостоятельный род Yersinia, назвав его в честь французского исследователя Иерсена, открывшего возбудителя чумы. Род Yersinia был предлодеш, чтобы отделить P.pestis и Р pseudotuberculosis от видов собственно пастерелл (P.multocida, P.haemolitica н др.), от которыл они отличались по оксидазному гесту и, как было установлено ■ H.Mollaret (1965), H.Mollaret и др. (1982), по составу оснований днк.

E.Thai (1954) предложил включить род Yeisinia в ссмейство «

Enterobactcriaceac. В дальнейшем в род Yersinia был включен возбуддпгль иереншюза Y.enterocolitica. Это было сделано в 1967 г. Подкомитетом по таксономии пастерат Международного комитет» по таксономии и номенклатуре бактфий и нашло отражение в 8-м издании "Определителя бактерии" Берги (1974), в котором род Ytreinia входит в семейство эмтеробактерий и состоит из 3-х видов: Y.peslis, Y.pseudotuberculosis и Y.entcrocolitica.

Представители вида Y.enterocolitica чрезвычайно разнообразны по биохимической активности. Это побудило исследователей к переоценке видообразования в роде Yersinia. Don J.Brenner с соавт. (1980), применив ДНК-гнбрнднзацнонныи метод, показали, что штаммы Y.enterocolitica делятся на 4 группы. Каждая ДНК -родственная группа характеризовалась различным отношением к рамнозе, рафииозе, мелибиозе и а-мстил-й-гтокознду. На основании биохимических н генетических исследований H.Bercovier с соавт. (1980) вьщелены виды иерсиний: 1) Y.enterocolitica sensu stricto, 2)Yircderikscuii, 3) Y.intermedia, 4) Y-kristensenii, 5) Y.xl, 6) Y.x21ши Y.aldovae.

Однако, s 9-м издании "Определителя бактерий Берги" (1984) предложение H.Bercovier и соавторов (1980) полностью не реализовано. В этом издании в род Yersinia, кроме Ypestis и Y.pseudotubcrculosis, включены следующие виды: Y.enterocolitica s. s., YJcristensenii, YJrederiksenii, Y intermedia, Y-ruckeri.

Вид Y.ruckcri включен в род Yersinia потому, что содержание оснований гуанин-цитозин в ДНК этих микроорганизмов составляет 48%, что сближает их с иерсиниямн. Вместе с тем фенотипнческая характеристика Y.ruckery отличается от других biwob этого рода. По-видимому таксономическое положение этих микроорганизмов должно быть пересмотрено (Austin и яф.,1982).

Огромную роль в поддержании и сохранении микроорганизмов в их первозданном виде играют коллекции культур. Следует иметь в виду, что "стрем ительчое возрастание темпов разрушения биологического разнообразия Земли в наше время ставит на первый план задачу гарантированного сохранения Генетического пула микроорганизмов н их многообразия ддя будущих поколений. Одним . in наиболее эффективных способов охраны микробиологических ресурсов яипнетея их поддержание в современных коллекциях, имеющих инлчимосп. как источники генофонда для фундаментальных

исследований и развертывання новых бнотехнологнческнх производств" (Ившчна, 1993).

Работа по коллекционированию связана с экспериментами для подтверждения видовой принадлежности микроорганизмов и сопровождается материальными и трудовыми затратами.

В музее живых культур Ростовского-на-Дону противочумного инстгпуг; (РПЧИ) тр^ттттгтог;, -?т?я*гтттегтт,тгог котлг-*«7Т5? штаммов чумного и псевдогубергсулезного микробов, вьщеленных в разные годы в различных очагах. Культуры были охарактеризованы, как правило, лишь при выделении ц не всегда достаточно полно. Часто паспортные данные штамма не отражали его реальные свойства. Некоторые штаммы были не изучены. Такое положение затрудняло выбор штамма для исследования.

Накопленные к настоящему времени сведения о свойствах штаммов чумного и псевдотуберкулезного микробов обусловливают необходимость расширенной характеристик)! биологических свойств хранящихся в музее культур. Это позволит Создать банк данных и оптимизировать использование коллекции в прикладных целях.

Имеющиеся официальные методические материалы о паспортизации культур возбудителен ООИ не содержат единых и четких рекомендаций по изучению свойств чумного микроба с использованием унифицированных методик сбора обработки и хранения первичных Данных. Система обработки и глнтралшованного хранения собранной информации к ьачалу исследования не была разработана.

Кроме указанных двух видов рода УегеМд, в музее института на протяжении 2-х десятилетий собрана значительная коллекция штаммов У.мпегосоииса, выделенных на разных территориях СССР (ныне Россия и ближнее зарубежье), а также полученныу из-за рубежа. Эта коллекция ьключала штаммы, отклонявшиеся по ряду признаков от типичных представителей вида У.еШегосоКиса. Для

выявления новых видов иерсиний необходимо было изучить коллекцию в соответствии с предложенными H.Bercovier с соавторами (1980) тестами дифференциации. В связи с этим возникла задача разработки технологии изготовления типовых иеренниозных сывороток и способа их применения для серологической' идентификации. На территории страны такие препараты не изготавливали.

Проведенные исследования позволили усовершенствовать диагностику широко распространенных на территории России заболеваний, обусловленных иерсиниями, отработать методики для выделения иерешшн на основе существующих в практических баклабораторнях питательных сред и реактивов.

1.2. Цель работы состояла в создании охарактеризованной коллекции представтелей разных видов рода Yersinia и банка данных для обеспечения фундаментальных и прикладных исследований.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

-Изучить биологические свойства штаммов чумного и псевдотуберкулезного микробов, выделенных в различные годы в разных очягах и собранных в музее живых культур Ростовского-на-Дону противочумног о института.

•Охарактеризовать биологические свойства штаммов, полученных в течение ряда лет под общим названием Yersinia cnterocolitica, по расширенному набору тестов. Разделить их на разные виды в соответствии с таксономическим положением рода Yosinia.

•Создать препараты для серологической идентификации Y.cnterocolitica.

•Усовершенствовать серологическую и бактериологическую диагностику собственно Yersinia cnterocolitica, YJrederiksenii, Y.iniaincdia, YJiristensenii. .

-Изучить распространенность У-еШегосоШка различных сероваров на территории Союза.

-Изучить возможность применения методов формализованного анализа для характеристики коллекционных культур, а также для поиска и отбора штаммов с определенными заданными свойствами,

-Создать информационно-поисковоую систему для изученных иалиа05. У<т«т<я в целях накопления банка

данных.

-Составить каталоги коллекционных штаммов персиинй.

I .З.Научная новизна

-Создана коллекция различных представителен рода Versinia на основе расширенной характеристики биологических свойств.штаммов, выделегных в разных регионах СНГ н дальнего зарубежья от людей, животных и из объектов внешней среды. ;

Разработана система унитерм-карт для поиска н отбора штаммов с определенными свойствами.

-Создан if функционирует кгмпькзтерный <5анк данных, обеспечивающий накопление, хранение и поиск штаммов боте?, чем по 100 признакам

-Составлены каталоги представителей рода Yersinia коллекцш. РПЧИ.

-Среди штаммов, идентифицированных ранее как Y.enterocofitica, наряду с Y.enterocoWlica sensu stricto, выявлены представители новых видов: YJrederiksenii» YJcristemenii, V.inUvmedia, Y.aIdovae и Y.xl.

-Разработана, технология приготовления О-моиовалеитиых диагностических сывороток к штаммам Y.cnterocoiitica для реакции агглютинации.

-Предложена упрощенная схема серологической идентификации иерсиний. .

-Показана принципиальная возможность замены типирующих сывороток коагглютинирующнми препаратами.

-Единой методикой и набором потовых сывороток определена серологическая принадлежность штаммов иерсиний, циркулирующих в f азных регионах Союза.

-Выявлены 7 серологических вариантов иерсиннй, отличающихся от типовых представителей коллекции G.Wauters и соавт. (1971.1972).

-Определены общие O-aimu-енные факторы у Y.entTocp!Uica s. s., Y.frederiksenij, Y.intermedia, Ykristensenii, .

-Предложена схема и методические подходы к выявлению и Идентификации \ .enterocolitica s. s. на основе существующих в

практических баклабораториях питательных сред и разработанных

препаратов.

1.4. Научно-практическое значение результатов исследования и пути их реализации

Создание коллекции представителей рода Yersinia и решение ряда вопросов лабораторной диагностики определили значимость и актуальное", проблемы для научных исследовании и практического здравоохранения.

Итоги работы, имеющие наибольшую научно-практическую ценность:

1) Наличие охарактсризоьанных коллекций нерешшй разных Пилон. формали jonawnwii метод анализа для поиска и отбора штаммов с заданными свойствами и компьютерный банк , данных создают оптимальные условия при подборе штаммов для фундаментальных и ирикзааных нлуцн^х исследований. (Методические рекомендации

1983 г., уга.Ученым Советом института, протокол №11 от 12.09.83 г.; Методические рекомендации, 1985 г., утв.Ученым Сов том института, протокол № 10 от 7.09.85 г.)

2) Усопершенствование методов бактериологической и серологической идентификации штаммов У.етегосо1Шса способствует выделсшао этих микроорганизмов и быстрому определению их

сгргз*1рп:ц?Г05 рекомендации, г.. «чляниме

Минздравом СССР; Методические рекомендации, 1986 г., изданные Минздравом СССР; Методическое руководство, 1993 г., ута. Ученым Советом института, протокол № 9 от 06.07.93 г.).

3) Разработанные методики приготовления О-моновалентных сывороток диагностических к У.етегосо1Шса сухих для реакции •агглютинации положены в основу нормативно-технической документации - ЭПР и ВФС, утвержденных а 1989 г.. Техническая документация передана в институт им.Пастера в Санкт-Петербурге для освоения производства.

4) Выявленные 7 серологических' вариантов иерсиний, отличающихся от типовых представителей коллекции ОЛУаШегс и соаат., включены в набор штаммов для получения типнрующих сыворЬток, что расширяет возможности серологической идентификации иерешшй н Эпидемиологического анализа обусловленных ими заболевании. (Авт. свидетельства №М г 473349, 1515*83, 1552628, 1612583,1789558,1805660).

Предложен споооб серологической дифференциации бруцеллеза и кишечного иерсипноза серовара 09.

6) Созданные каталоги штаммов иерсиний разных видов являются основой информационного обеспечения научно-исследовательских учреждений России и зарубежных стран. (Каталоги представителей рода иерсиний, 1992,1994).

1.5. Основные положения, выносимые на зацигту

1.5.1. Созданная охарактеризованная коллекция представителей рода Yersinia оптимизирует условия работы Научных сотрудников, противочумных учреждений.

1.5.2. Метод "Унитерм" с инвертированной организацией справочного аппарата позволяет оперативно выдавать информацию о штаммах.

1.5.3 Информационно - поисковая система на основе сетевой версии СУБД Fox Pro 2.5 на компьютере IBM PC AT (386) позволяет нактгшшать, хранить и находить еведения о штаммах.

1.5.4. Разработанная технология получения монорецепторных диа. ностических агглютинирующих сывороток является основой для производственного изготовления этих препаратов.

1.5.5. Предлагаемый нами принцип составления групповых смесей сыворотох с учетом антигенных особенностей Y.enterocolitica s s. и близкородственных микроорганизмов упрощает методику определения их сфовара, сокращает расход препаратов, времени и объем работы.

1.5.6. Возможность замены агглютинирующих сывороток для идентификации Y.cnterocolitica s s. и родственных микроорганизмов коагглютинирующими диагностикумами.

1.5.7. На территории СНГ распространены разнообразные серовары Y.enterocolitica с преобладанием третьего ееровара среди штаммов, выдел-мних от людей.

1.6. Апробация

Диссертация в форме научного доклада обсуждена на конференции в Ростовском-на-Дону НИ11ЧИ 20.07.94 г. и рекомендована к '¿ашнгс.

Основные положения, еыводы и рекомендации изложены в 66 научных работах, в том числе 36 в централ,ной печати, из них 6 авторских свидетельств, в пяти методических руководствах.

Фрагменты работы доложены на одной Международной и пяти Всесоюзных конференциях, на заседаниях разных обществ, институтских конференциях, на семинарах . в Белорусской Регпу^ЧИКйНСКОЙ 3 РОСТСЗСКОП Сил.СЗС. Ам1Хй»1«ДеК(Ж,

Новороссийской, Ленинградской, Одесской и Молдавской противочумных станциях.

Материалы диссертации представлены в 0 отчетах о научно-исследовательских работах.

1.7. Материалы и методы

Предметом изучения явились штаммы рода Yersinia.

Штаммы чумного микроба, хранившиеся в муз^е or 3 до 39 лет в лиофилизированном состоянии, были выделены ©г животных разных видов и их эктопаразитов в различных очагах. Количество штаммов по очагам представлено в таблице 1.

Кроме того, для изучения были взяты 10 штаммов из Китая, 3 -из Индии, I - из Африки и 54 штамма, полученные из Франции, собранные H.Mollaret из разных зарубежных коллекций. В работе также изучены 14 ауксотрофных мутантов, 3 вакцинных штамма возбудителя чумы и 5 субкультур штамма EV улразных источников.

Для исследования были взяты 163 штамма возбудителя псевдотуберкулеза коллекции Ростовского противочумного института, а также 380 - коллекции Ленинградской противочумной станции. Штаммы выделены в Ленинграде, Новгороде, Сухуми, Одессе, Саратове, на Дальнем Востоке, Сахелине и др. местах, а также получены из-за руйежа (ФРГ, Швеция, Англия, Франция).

■ и

Таблица 1

Количество использованных в работе штаммов чумного микроба из различных

Тип очага Природный очаг Шифр Автономный очаг или мезоочаг К-во штамм.

Среднеазиатский 27 Кызылкумский 4

Песчаночий пустынный 23 Мангышлакский 25

24 Приаральско-Каракумский 20

25 Каракумский 32

30 Прибалхашский 3

18 Урапо-Эмбинский 27

28 Муюнкумский 2 .

Закавказский 09 Кабысган 9

равнинно-предгорный 11 08. Джейранчель Бозчель Мезоочаг неизвестен 12 I 3

Полевочим Закавказский 04 Ле,шнаканский 5

высокогорный 06 Зангезуро-Карабахский 59

Сурочий Алайский 35 21

Пищуховый - Горно-А/тгайский 36 1

Тянь-Шань ский 33 Аксайский 24

Сусликовый Прикаспийский 14 Прикаспийский

степной 02 северо-западный Терско-Сунженский ннзкогорный 113 1

03 Дагестанский равнинно-предгорный 3

15 Волго-Уральский 39

Забайкальский 38 19

Тувинский 37 4

(вторично-сусликовый)

Центрально- |

Кавказский 01

Всего 430

В работе использовали типовые штаммы возбудителя кишечного иершииоза, полученные из Франции и ФРГ Сведения о тнлопых штаммах коллекции ОЛУаШеге и сопвт. приведены п таблице 2.

Таблица 2

Сведения о типовых штаммах О. Wagters и соавт.(1971,1972) различных сероваров Y.enterocoiitica.

Ив». О-анти- J Источник Дата От кого получен

штзмиа РПЧИ гены 1 выделения поступления в РПЧИ штаии

64 5505 1.23.3 человек 1972 от доктора Mollarct

178 5506 2а,2Ь,3 •

134 5507 3 • •

96 5508 4.32 неизвестен • *

1476 10767 4,"<3 1980 ' ш

124 5509 5 лошадь 1960 от доктора Knapp

885 5510 $.27 неизвестен 1972 от доктора MoHaret

102 5511 6,30 в ■ •

1477 10766 6,31 1980 •

106 $512 7.8 ■ 1972 ■

$53 5514 7,13

161 5513 8 человек 1969 от доктора Knapp

S42 5529 8.19 неизвестен 1972 от доктора Mölleret

383 5515 3 человек ■

500 5516 10 неизвестен

551 5517 10 (К1)

105 5518 11,23

841 5519 11,24

490 5520 12,25 •

103 5521 12,26 человек

480 5523 14 ■

614 5524 15 а - т

1475 5525 16 неиэвес Ген ■ •

867 5526 16,29 а

955 5527 17 *

846 5528 18

• 845 •5530 2U • •

то 5531 21 • ■ »

1367 5532 22 » •

1647 5522 25,35 » • ■

1474 5533 28 « Л. N

1501 5534 34

"Рабочая коллПсция" культур, поступивших ь музей института под видовым названием У.етогосо1Шса, насчитывала около 50С штаммов. Для изучения были взяты методом случайного отбора 327 из них, выделенных на разных территориях Советского Союза и за рубежом. Сведения о них приведены в таблицах 3 >1'4.

Таблица 3

Сведения о зарубежных штаммах. У.еп1егосо1Шса и близкородственных микроорганизмов

Территории, Объект выделения

на которых

выделены человек грызуны внешняя другие неизвес- итого

штаммы среда виды животных тен

Алжир 0 0 0 I 0 1

Америка 1 0 0 0 1 2

Бельгия 1 0 0 0 0 1

Дания 1 0 0 1 0 2

Монголия 85 1 0 0 0 86

Франция 0 7 0 7 2 16

Финляндия 1 0 0 0 0 1

Швейцария I 0 0 0 0 1

неизвестно 6 0 0 2 23 31

итого 96 8 0 11 26 141

Таблица 4

Сведения об отечественных штаммах У.еп<егосо1Шса и близкородственных микроорганизмов

Территория, на которых выделены штаммы Объект выделения . итого

человек грызуны внешняя среда другие виды животных неизвестен

Белорусам 6 0 0 0, 15 21

Бурятия 16 1 0 0 0 17.

Молдавия 4 5 0 0 0 9

РФ , Краснодарский край 11 38« 2 1 4 56

РФ , Приморье 3 2 3 0 21 29

РФ , Северо-Запад 5 4 ■ 0 0 И 20

Туркмения 0 11 0 2 . 0 13

Украина 0 5 0 0 6 14

неизвестно 0 5 0 и 2 7

итого 45 74 5 3 59 ' 186

Серологическая принадлежность изучена у 777 штаммов Y.enterocolitica коллекции противочумного института Сибири и Дальнего Востока, 1082 штаммов, выделенных на Северо - Западе РСФСР, 76 - в Краснодарском крае, 114 - в Забайкалье.

Для проверки специфичности бактериологических препаратоь были вэятм VH штаммоя возбудителя чумы, 32 - тситгтсгнсго иерсиниоза, 141 штамм других предстаьителей семейства Enterobacteriaceae и 32 штамма пастерелл.

В работе использованы методы: бактериологический и серологический - для изучения феношпических признаков штаммов иерсиний • разных видов, бактериологический - при разработке методики получения клоповых культур /6/, серологический - для приготовления диагностических препаратов; некоторые молекулярно-бнологнческие методики - для характеристики генофора отдельных штаммов. Результаты исследований обрабатывали статистически (Ашмарин, Воробьев, 1962).

2. Результаты исследования

Материалы выполненной работы изложены в порядке изучения отдельных видов пода Ye rsinia.

2.1. Изучение биологических свойств штаммов чумного микроба, выделенных в различные годы в разных очагах, и создание коллекции.

2.1.1. Разработка способа получения клоновых культур чумного микроба.

При изучении ряда биологических свойств микроорганизмов -питательных потребностей, чувствительности к антибиотикам, кальций-зависимости, в опытах по генетической рекомбинации и др. -используют клоновые культуры. К.В. Косиков (1952) предложил простой метод изоляции отдельных дрожжевых клеток in желатинового мазка с помощью тонкой платановой иглы под

контролем микроскопа. В литературе не было сведений о получении клоповых культур чумного микроба. Однако применение метода Косикова при работе с культурами возбудителя чумы не дало положительных результатов. В связи с этим нами был предложен способ выделения клонов из колоний, развившихся из отдельно лежащих клеток на плотной питательной среде под контролем микроскопа с фазовоконтрастной установкой /6/.

С помощью этой методики удалось наблюдать образование чумной колонии из одной микробной клетки. Бактерии находились в состоянии покоя 2-3 ч, затем они набухали и увеличивались в размере, через 3-4 ч - делились, к 6-10 ч появлялись короткие нити, которые, постепенно удлиняясь и закручиваясь,.образовывали клубкообразные сплетения к концу первых суток. В течение двух суток клубочки уплотнялись и превращались в оформление колонии.

Разработанная методика использованг нах.и и сотрудниками при изучении питательных потребностей штаммов чумного микроба.

2.1.2. Свойства штаммов чумного микроба, выделенных в различные годы в разных очагах.

. Изучение большой коллекции чгтаммов чумного микроба, собранных сотрудниками ^Ростовского противочумного института в очагах чумы на территории Союза и полученных го дальнего зарубежья, показало, что на разных территориях встречаются, главным образом, типичные представители возбудителя чумы /70/. Все изученные штаммы ферментировали с образованием кислоты без газа глюкозу, маннит, маннозу, ксилозу, арабинозу, íjc сбраживали сорбит, дульцнт, не образовывали индола и уреазы. В присутствии сахарозы большинство культур кислоту не образовывало. Исключение составили "1,54? о штаммов (нив. 146, 160, 308, 1229. 1317, 1477, 1481, 1680), выделенных в различных очагах от 1рызунов разных видов и их блох, у которых кислота в прнсутлвин этого субстрата была зафиксирована на 4-14 сут. Ферментация плшкрина, »

основном, наступала в поздние сроки - 4-14 сут. Все штаммы Армянского нагорья сбраживали рамнозу до образования кислоты. Кроме того, бактерии 92 штаммов (17,/%) из разных очагов и вакцинного штамма EV (субкультура из Китая) также ферментировали рамнозу в сроки от 1 до 14 сут.

Штаммы большей части коллекции были тактозонегатнвными, но 3S из S20 сбраживали лактозу до образования кислогы на 7-14 сут, что составило 6,7%. В литературе есть указания на то, что чумной микроб разлагает лактозу в поздние сроки - на 12-15 день. Известно, что лактозу усваивают только те бактерии, которые имеют активный фермент р-гйлактозидазу (Мартиневский,1969). На возможное присутствие этого фермента у штаммов чумного микроба указывали Н. MoNaret и L. Le Minor (1962).

Изучены питательные потребности штаммов чумного микроба, I ыделенных в разных очагах.

Песчаночий Среднеазиатским очаг. Подтверждена зависимость штаммов от фенилаланина, метнонина, треонина и цистеина. Однако потребность в этих аминокислотах оказалась неодинаковой. В мегноннне нуждались все ИЗ штаммов из этого очага (100%), в фенилаланине - 93 (82,3%), в треонине - 33 129%), в цистеине - 26 (23%), в лейшше - 14 (12,4%). Большая часть этих штампов выделена б Урало- Эмбинском междуречье. В Каракумском мезоочаге рыделен штамм, рост которого зависел дополнительно от аргинина и vpamma.

Сусликовые очаги - Прикаспийский степной, Забайкальский и Тувинский. Штаммы из этих оча1 ов также проявляли зависимость от метнонина, треонина, фенилаланина и цистеина. Для роста метионин был необходим 168 штаммам из 179 (97,3%), цистенн - 105 (58,7%), фенилаланнн - 65 (36,3/о), треонин - 20 (И,2%). Штаммам, которым не требовался метионин, для роста необходимы были аргинин, лейцин и фенплаланин.

Закавказский равнинно-предгорный очаг. Зависимость тотько от метионина была характерна для 28% штаммов. Один штамм из Джейранчельского мезоочага, ' выделенный от краснохвостой песчанки, проявил нетипичную для очага зависимость от аргинина, лейцина и цистеина. Четыре штамма имели зависимость от метионина, треонина и феннлаланина, шесть - от метионина и фенилаланина, два - от метионина и цистеина.

Закавказский высокогорный очаг. Штаммы были, в основном, однородными по своим питательным потребностям. Из 64 штаммов 32 росли в присутствии аргинина, метионина, тиамина и фенилаланина. Исключение составили шесть штаммов. Два из них требовали дополнительно тирозин и лейцин, один - цйстеин, треонин, глицин и триптофан, три - росли в присутствии метионина и цистеина.

Прикаспийский степной очаг. Здесь выявлено наибольшее разнообразие зависимостей бактерий чумы от четырех аминокислот -метионина, треонина, фенилаланина и цистеина. Так, 15 штаммов были Met-; 87 - Met'Cys-; 24 - Met'Phe-; 10 - MefThrPhe-; 8 - MefPhe Cys"; 5 - Met"ThrPhe-Cys". Кроме того, два штамма из Волго--Уральского мезоочага нуждались дополнительно в лейцине, один штамм id Северо-Западного Прикаспия требовал дополнительно аргинин, один - валин. Независимость от метионина отличает только 6 ю 430 изученных штаммов (1,4%). Метнонин, по-видимому, является практически всегда незаменимым фактором роста для чумного микроба.

Штаммы чумного микроба, полученные из Индии, были, как правило, зависимы от метионина, но один штамм рос только в присутствии валина, нзолсйцнна, метионина, треонина, фенилаланина и цистеина.

Полученные данные свидетельствуют о неоднородности исследованной выборки штаммов чумного микроба tw признаку

ауксотрофности, выделенных не только из одного природного очага, ио даже в пределах относительно небольших участков его территории.

Не исключено, что на формирование характера питательных потребностей чумного микроба может оказывать влияние организм основного хозяина (Атчабаров и соавт., 1989).

Разработан принцип «предеяшнл шшимальнмх потребностей в фякторях роста при 28°С у свежсвыделенных штаммов чумного микроба из различных очагов с учетом основных зависимостей для большинства штаммов н дополнительных для редко встречающихся /76/.

Для дальнейшей характеристики штаммов чумного микроба изучали антигенный состав. В целях выявления фракцчн 1 с помощью антительных эритроцнтарных днагностнкумов культура рыращивали на среде ЛХАТ, которая приготовлена ВЛ.Пустоваловым на основе сернокислого казеинового гндролизата и является высоконитателыюй

средой, предназначенной для выращивания чумного микроба при

(

37°С. Фракция 1 обнаружена у подавляющего большинства культур -95,2%. У разных штаммов ее выявляли в присутствии различного количества микробных клеток - от 75 1ыс. ро 5 млн. Из этого можно заключить, что продукция кансулыюго антигена у штаммов неодинаковая. При вырашцванни культур на агаре Хогпшгера при 37°С фракцию 1 продуцировали лишь единичные штаммы. Кансульный антиген не обнаружен у шести зарубежных штампов, у штамма ЕУ, полученного из Китая, у ЖВ11 261. Он также не пыявлен у двух штаммов полёвочьей разновидности из Закавказского высокогорного очага, пяти штаммов из Среднеазиатского, восьми из Прикаспийского степного, адьдаго из Алтайского и одного из Тяньшаньского очагов.

Изучено 220 штаммов на продукцию "мышиного" токсина, фракции 1 и пестшшна 1 методом преципитации в геле три использовании монорсцснторных сывороток против этих ашигаюв,

!<>

приготовленных в лаборатории, руководимой В.И.Марченковым (Алутин и др., 1989).

Установлено, что большая часть штаммов образует "мышиный" токсин, пестицин 1 и фракцию 1. Обнаружены штаммы, которые не продуцируют одновременно Fra, tox(mur) и Pst, не образуют только капсульныи антиген или пестицин 1, а так«се такие, которые не обладают двумя пртнакамн в разных сочетаниях.

Среди изученных штаммов дефектные по продукции одновременно Tox(mur) и Pst, Fra и Pst, Fra и Tox(mur) факторов составили соответственно 0,4%, 4,1% и 2,2%. До 2,4% штаммов не обладали фракцией J, "мышиным" токсином и пестицином 1. Не продуцировали только Fra-9,9%, Pst-6,3% и Tox(mur)-0,4% штаммов.

Проанализирован плазмидный состав 92 штаммов чумного микроба /44/. Установлено, что большинство из них независимо от срока хранения содержали плизмиды. Из 92 исследованных 24 штамма имели все три характерные для возбудителя чумы плазмиды: 65 МД (pYT), которая дегерминнрует "мышиный" токсин и капсульный антиген, 47 МД (pYV), ответственную за Ca -зависимость, синтез VW-антигенов и 6 МД (pYP), детермншфующую пестициногенность, синтез фнбрииолизнна и плазмокоагулазы.

Штаммы TRU, 64/105 Nhatraung, Jawa и ЖВЯ-19 оказались лишенными всех трех плазмндных репликонов, характерных для чумного микроба, что полностью соответствует их фенотипическим свойствам. Остальные штаммы, исключая те, которые содержали три плазмиды, имели их различное сочетание.

Обнаружены штаммы, которые содержали вместо типичных по молекулярной массе плазмнд или дополнительно к ним плазмиды молекулярными массами около 9, 15, 55,90 и 150 МД. B.C. Иванова и С.Л.Лебсдсва провели исследования, которые позволили предположить высокую степень гомологии плазмид чумного микроба молекулярнами массами 65. 90 и 80 МД. Несколько большие массы

последних, вполне возможно, обусловлены либо дупликацией отдельных фрагментов глазмиды 65 МД, либо наличием в ее ДНК дополнительных нендентифицированных фрагментов. Для выявления функциональной зависимости вновь выявленных плазмид штаммов --хозяев необходимы дополнительные исследования.

Шак, хранившиеся в музее в лиофиличнровациом состояшпт 3 течение длительного времени штаммы чумного микроба, содержат резидентные плазмнды и могут служить источником для их выделения при проведении экспериментальных работ.

Культуры штаммов чумного микроба были охарактеризованы по способности образовывать на среде с гемином пигментированые колонии. Большая часть штаммов - 58,6% - образовывали беспигментные колонии. Пигментированные колонии формировали только 5,8% штаммов, слабопигментнрованныг - 10%. Авирулентные для белых мышей штаммы образовывали беспигментные колонии. Вирулентные штаммы формировали разные типы колоний - только пигментированные, только беспигментные и смешанные. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии строгой корреляции между пигмеитообразовзнием и вирулентностью, что подтверждает сведения целого ря за отечественных исследователей /70/.

Так как мы кг располагали сведениями об исходной вирулентности ряда штаммов и сроках их первой лиофилизации, дать анализ возможному изменению вирулентности в процессе хранения штаммов в музее живых культур не представляется возможным.

Вместе с тем, проведенные наблюдения свидетельствуют, что из 120 изученных штаммов 1/3 сохранила вирулентные свойства. Целый ряд поступивших в институт из Китая штаммов через 27 лет сохранил зысокую вирулентность. [.050 для белых мыш?й составила от 3,1 доверительный интервал не определяется) до !0(4*1Ь;; м.к. Культуры юзбудителя чумы, выделенные в 1947 - 1948 гг. в Сеперо-Заппаном

Прикаспии, полностью утратили вирУлентные свойства для белых мышей.

Свежевыделенные штаммы из Средне-Азиатского пустынного очага, высушенные сразу после поступления, сохранит! исходную вирулентность на протяжении трех лет. LD50 для белых мышей одного штамма составила 3,1, двух - 10(4+18), трех 31,6(10+56,6) и еще трех -100(75+140) м.к.. Это свидетельствует, что принятый в музее режим сушки культур обеспечивает сохранение такого важного свойства чумного микроба, как вирулентность.

Изученные 520 штаммов оказались чувствительными к антибиотикам группы аминогликозвдов (стрептомицину, мономнцину, канамицину). МПК находилась в границах от 1,6 до 50,0 мкг/мл. Наибольшей чувствительностью чумной микроб обладал к ампициллину. МПК для 344 штаммов (66% от числа изученных) равнялась 0,2 мкг/мл, а самая высокая МПК ампициллина не превышала 1,5 мкг/мл для 5,5% штаммов. Такая же высокая чувствительность всех 520 штаммов возбудителя чумы (0,2-3,2 мкг/мл) наблюдалась и к тетрациклину. МПК левомицетина колебалась в пределах от 1,6 до 25,6 мкг/мл (87% штьчмов приходилось на меньшие концентрации препарата). Чумной микроб оказался высокочувствительным к рифампнцину - МПК составляла 3,2-6,4 мкг/мл. МПК невиграмона для основной части штаммов чумного микроба равнялась 3,2-12,8 мкг/мл.

Таким образом, проведенные in vitro исследования показали, что в природных очагах, в основном, циркулируют штаммы, чувствительные к большому набору лекарственных препаратов.

Сделана попытка подобрать фаги и провести фаготнпированне коллекции штаммов чумного микроба. Для этой цели были отобраны чумные, Т-нечетные и псевдогуберкулезные фаги /70/. Изучение чувствительности бактерий чумы различных штаммов к чумным фагам - 2662 N2, JI-413, псевдотуберкул<уным - ЗМ, Котляровон, 2391.

22 , - - -РБТ, кишечной палочки -ТЗ и Т7 показало, что культуры в основной массе - 67,6% - чувствительны к перечисленным фагам и нечувствительны к фагу ТЗ при использовании 10 ДРТ. Однако при таких условиях, помимо этой основной группы, были выявлены еще 15 с небольшим числом штаммов в каждой (от 1 штамма до 59). Попытка использовать изученную группу фагов для типппоязпил аиаым«н чумного микроб а показала, ЧТО микроорганизмы этого вида, по-•тщдмому, можно будет дифференцировать таким путем, если будут введены дополнительные фаги, позволяющие разделить первую группу штаммов на несколько подгру пп /70/.

Полученные в результате проведенных исследований сведения и методические приемы были обобщены и явились основанием для составления "Методических рекомендаций по изучению свойств и паспортизации культур чумного микроба", 1983. В рекомендациях Приведены следующие разделы: классификацил природных очагов чумы на территории Союза, общие сведения о возбудителе чумы с указанием особенностей штаммов чумного микроба, циркулирующих в отдельных очагах, методики, используемые для изучения коллекционных штаммов /76/.

2.1.3. Создание коллекции штаммов чумного микроба ее каталога.

Изучение основных биологических свойств штаммов чумного микроба позволило создать охарактеризованную коллекцию микроорганизмов этого вида и каталог составивших ее штаммов.

В коллекцию включены штаммы, выделенные в рззные годы в различных очагах, типичные и атипичные представители очагов, штаммы дефектные по продукции капсульного антигена, "мышиного" токсина, пестпцина 1, вирулентные и авирулентные для белых мышей, с разными питательными потребностями, чувствительные и устойчивые к чумному бактериофагу, вакцинные штаммы.

В каталоге приведен инвентарный номер штамма коллекции Ростовского-на-Дону противочумного института, номер штамма, тип очага, природный очаг, автономные' очаги или мезочаги, место выделения, объект выделения, дата выделения. Отмечено наличие или отсутствие продукции "мышиного" токсина, пестишша I, указаны' питательные потребности. Приведено, откуда получен штамм (табл.5).

Таблица 5

Пример записи штаммов чумного микроба в каталоге

JAn/n № Нив. Сведения о иггаммах

903 Р-903; 813 Место выделения: тип очага - песчаночий, природный очаг - Среднеазиатский пустынный, мезо-очаг - Мангышлахскнй, Сегеиддаский район. Выделен от блох Xenopsylla skijabini из норы Rhombomis opimus 12. 09. 55. Свойства: Met- Thr- Phe- Fra+ Pst- Tox(mur)+ Получен из Гурьевской ПЧС в 1955 г.

2 1313 90; 217 (Азербайджанская ПЧС) Место выделения: тип очага - полевочий, природный очаг - Закавказский высокогорный, мезоочаг-Зангезуро - Карабахский, Заягеданский район. Выделен от блох Ceratophyllus inmis из норы Meriones persicus 12.04.57. Свойства: Met- Rhe- Fra+ Pst- Tox(mur)+ Получен из Азербайджанской ПЧС г, Баку в 19о0 г.

Таким образом, нами создана коллекция штаммов чумного мнкпоба, охарактеризованных по большому набору признаков. На вошедшие в коллекцию штаммы состаглен каталог, в котором приведены их основные паспортные сведения. Характер описания каждого штамма й каталоге отличается от общепринятого, но является высоконнформатнвным для исследователей.

2.2. Некоторые биологические свойства штаммов возбудителя псевдотубе; кулеза, отработка методических приемов доя серотипироваиия культур и создание коллекции.

Длительное время считаля, что псевдотуберкулез среди людей встречается редко. Однако в конце пятидесятых и начале шестидесятых годов было установлено, что ?та инфекция широко распространен« на Дальнем 13 о сток с, *де была описана под названием дальневосточная скарлатнноподобная лихорадка (ДСЛ). В настоящее время она зарегистрирована во многих регионах страны (Сомов, \979).

Широкое распространение заболевания среди людей, большое сходство микроорганизма по биологическим свойствам с возбудителем чумы побуждало к совершенствованию имевшихся и разработке новых методов лабораторной диагностики псевдотуберкулеза.

Вначале мы располагали небольшим количеством штаммов, выделенных от диких и синантропнмх грызунов. Затем 5ытн получены штаммы, выделенные от люден - на Северо-Западе РСФСР, в Краснодарском крае, на Украине, в Забайкалье, на Дальнем Востоке, в Монголии.

Все 163 штамма псевдояуоеркулезного микроба имели типичные культурально-морфологические свойства. Онн были подвижны при температуре ниже 27°С, оксодазонОгативны, обладали уреазной активностью, не продуцировали индол, на средах Гисса с соответствующим набором углеводов и спиртов образоьывали кислоту без газа. Не образовывали ацетнлметилкарбинол при 22°С я 37'С. Ни одна культура не обладала плазмокоагулирующей и фибринолитической активностью. Чумная агглютинирующая сьяворотка агглютинировала различные штаммы 6 разведениях от 1:320 до 1:2560 /43, 49/. Капсульный антиген с помощью РИГА выявить не удалось /11,12/.

Проба чумным поливалентным фагом была отрицательной в 93,4%. Псевдотуберкулезные фаги 3Mi PST, 2344, 2391, Котляровой лизировали от 70% до 92% штаммов псевдотуберкулезного Микроба. Эти же фаги лизировали культуры чумного микроба в большем проценте случаев - от 88,7% до 98,9%. Фаг кишечной палочки Г7 лизировал культуры чумного микроба в 94,8%, а псевдотуберкулезного - в 48,0% /17/.

В связи с довольно широким распространением псевдотуберкулеза на территории страны представляло интерес изучить чувствительность возбудителя к лекарственным прешратам в опытах in vitro и in vivo.

Изучена in vitro чуьствительность 230 штаммов Y.pseudotuberculosis, выделенных в различных регионах страны и за рубежом, к 14 антибактериальным препаратам. Из них 229 штаммов характеризовались высокой чувствительностью к препаратам груплы аминогликозидов (стрептомицину, мономицину, канамицину, неомицину, гентамицину), ампициллину, тетрацшелинам, рифампицину, невнграмону, а также к фуразолидону и фурагину калия. Среди изученных "диких" штаммов обнаружен лишь один с устойчивостью к стрептомицину, левомицетину, тетрациклинам и пенициллинам, детерминируемой трансмиссивной R-плазмндой /48/.

В экспериментах на белых мышах, весом 18-20 г, зараженных подкожно или через рот 10-20 LD50 вирулентного штамма псевдотуберкулезного микроба, лечение антибактериальными препаратами начинали через 24 ч после инфицирования и продолжали в течение 7 дней (один раз в сут).

Несмотря на высокую чувствительность микроорганизмов к нитрофуранам in vitro, терапевтической активностью эти препараты не обладали.

Аминогликознды - стрептомицин, мономицнн, канамицин и • гентамицин - при внутримышечном введении оказались высокоэффективны уже при лечебной дозе в 0,1 мг/мышь в сутки.

Тетрациклины обладали выраженным терапевтическим действием в дозах0,5-1,0-2,0 мг/мышь при внутримышечном введении.

Подтверждена высокзя активность л^вомицетина (2,5-i,0 мг/мышь) при пероральном введении -ыгшлснн чффсктшшосгь дсиомицетинп сукшшата иатрпд (0,25-0,5-1,0-2,5 мг/мышь) при внутримышечном применении.

Терапевтическая активность ампициллина показана при использовании его перорально (2,5-5,0-10,0 Mi/мышь) и внутримышечно (5,0 мг/мышь). Бензилпеницшшин оказался эффективен при внутримышечном введении в дозе 4,0 мт 'мышь. Терапевтической активностью оксацяллии не обладал.

Выраженный терапевтический эффект наблюдали при использовании для лечения пролонгированных сульфаниламидов -ортосульфина и сульфамономегоксина (50 мг/мышь).

Высокую активность in vivo проявили рифамппцнн (0,5-1,0-2,э мг/мышь) и невиграмон (2,5-5,0 мг/мышь).

Сравнительная характеристика терапеыически активным препаратам дана в опытах на белых мышах, зараженных псевдотуберкулезным микробом через рот. В этих экспериментах проводили поэтапное вскрытие животных на 2-3-5-7-10-14-30 сут после заражения с высевом из подчелюстны: лимфатических узлов, крови, селезенки, печени, легких, кишечника. Для лечения использовали стрептомицин, гентамиции и тетрациклин внутримышечно (2,0 мг/мышь), хлортеграциклин, левомицетин, ампициллин, невиграмон, рифампнцин и ортосульфин через рот (5,010,0 мг/мышь). В этих опытах подтверждена высокаятсрапевтическая активность всех изученных препаратов. Наибольший лечебный эффект выявлен при использовании геятамицнна и рифамшшпна.

Полученные результаты подтверждают целесообразность включения в схему лечения псевдотуберкулезной инфекции амнногликозндов, левомицетнна (хлораыфеникола), тетраниклинов /51-56/.

Известно, что псевдотуберкулезный микроб неоднороден по О-антигену. Thal (1966) установил наличие 5 серологических вариантов. Наиболее полно антигенная структура возбудителя псевдотуберкулеза представлена в схеме M.Tsubocura и соавт. (1984). На территории СССР зарегистрированы только I - V серовары.

Культуры возбудителя псевдотуберкулеза тнпнровали обычно при помощи реакции" агглютинации, которая не лишена некоторых недостатков. Один из них - наличие в иммунных сыворотках групповых антител, в связи с чем возможны перекрестные реакции. Другим существенным недостатком этого метода является возможность спонтанной агглютинации, которая особенно часто наблюдается с шероховатыми формами культур.

В целях устранения перечисленных недостатков нами совместно с Е.П.Ерохиным был отработан способ типнрования культур возбудителя псевдотуберкулеза при помощи реакции непрямой гемагглютннацнн с применением эритроцитов, сенсибилизированных гамма-глобулинами кроличьих иммунных сывороток /40,6е?/.

В работе использовали 18 штаммов известных сероваров - с I по VI, 113 коллекции РПЧИ, 380 коллекции Ленинградской ПЧС, выделенных на Северо-Западе РСФСР, и 50 свежевыделенных штаммов от обезьян в Сухумском институте Экспериментальной патологии и терапнп АМН СССР. Специфичность эрнтроцнтариых дпагностикумов проверяли с 50 штаммами возбудителя чумы, 32 -Y.cntcrocolitica. 32 - P.multoeida, 17 - Ii.coli.

С типовыми штаммами наблюдали агглютинацию сенсибилизированных эритроцитов только с микробной взвесью сортвсгствуюпито серовара, чи> снидетчьетвовало о высокой

специфичности диагностикумов. При исследовании штаммов музейных коллекций перекрестных реакций также не обнаруживали. Из 113 штаммов коллекции РГ1ЧИ 88 отнесены к I серовару, 4 - к Ш, 7 - к IV и 14 штаммов не типировались. Из 380 исследованных штаммов Ленинградской коллекции 244 принадлежали к 1 сероиару, 10 - ко II, 3 - к III и 123 штамма не типировались /40.68/ R<r Сйслсвыдлпгнные в Сухуми шыммы во^оулнтеля пссвдслуберкулеза оказались I серологического варианта. Точность определения сероварэ подтверждается тем, что культуры всех штаммов проявили чувствительность к иестицину 1 /38,39/. Известно, что к пестицину 1 чувствительны штаммы только I серовара (Brubaker, Surgalla, 1961).

В практике противочумных учреждений возникает необходимость проводить дифференциальный диагноз между возбудителями чумы и псевдотуберкулеза. М.Ф.Шмутер и Л.М.Осадчая (1969) предложили использовать в этих целях антительный эритроцитарный диагностикум, определяющий фракцию 1 у чумного микроба. ч

Для совершенствования указанной методики нами предложено использова'гь эритроциты, сенсибилизированные гамма-глобулинамк I-VI сероиа|К)в возбудителя псеидотуберкулеза дня дифференциации бактерий чумы и иссвдотуберкулеза. Для этого необходимо иметь набор из 7 диагностикумов - чумного антительного и антительных I-VI сероваров возбудителя псевдотуберкулеза /68/. Преимущество такого i+абора состоит в том, что с его помощью можно определить капсульнын вариант возбудителя чумы и сероцэр нсевдотуберкул<»зного микроба.

Таким образом, показана принципиальная возможность

получения тнпоспецифических антительных эритроцитарных

диагностикумов возбудителя псевйотуберкулеза, а также целесообразность их применения для серологической диагностики и дифференциации возбудителей чумы и псевдотуберкулеза. С помощью диагностикумов удалось типировать 100% свежевыделенных штаммов и от 67,3% до 83,6% культур старых музейных штаммов. Все свежевыделенные штаммы отнесены к I серовару, а среди музейных, обнаружены единичные представители II, III и IV сероваров.

Углубленное изучение штаммов псевдотуберкулезного мгссроба позволило создать охарактеризованную коллекцию, в которую были включены типовые представители разных сероваров, полученные, из-за рубежа, а также штаммы, выделенные на территории СССР от больных людей, диких и синантропных грызунов, изолированные из смывов с овощей и т.п.. На коллекционные штаммы составлен каталог. Образец записи штаммов в каталоге приведен в табл. 6.

Таблица 6

Пример записи штаммов возбудителя псевдотуберкулеза в каталоге

Мп/п №инв. Сведения о штаммах

121 1982 881 Место выделения: Франция Выделен от человека Свойства: серовар I Получен из iui-та им. Пастера в Париже в 1966 г.

133 1995 506 Место выделения:Гермшв1Я Выделен от зайца t Свойства: серовар IV Получен из iui-та им. Пастера в Париже в 1966 г.

2.3. Создание коллекции Y.enterocolitica, Y.frcderiksenii, Y.intermedia, YJoistensenii

Коллекция чумного микроба, как уже было указано, создана на основе массива шгамчов. которые накоплены в течение длительного

времени сотрудниками Ростовского-на-Дону противочумного института» Штаммы же возбудителей кишечного иерснниоза собраны нами в течение ряда лет из разных регионов Советского Союза, Франции и ФРГ. В нашей стране не была разрг.ботана лабораторная диагностика кишечного иерснниоза, не производили диагностических препаратов для иерсиний, в связи необходимо Сшло

угляершен^вовять способы бяктерноло! ической и серологической

идентификация Y.enterocolitica.

2.3.1. Изучение ряда биологических свойств штаммов Y.enterocolitica и усовершенствование метода бактериологической диагностики.

Первые сведения о Y. enterocolitioa появились в США, где в 1939 г. Schleifstein и Coleman опубликовали работу о выделении от больных людей 5 штаммов неидентнфнцированных микроорганизмов /7/. Принимая во внимание картину заболевания у детей, от которых выделена большая часть штаммов, Schleifstein и др. (1943,1947) назвали возбудителя Bacterium enterocoliticum. Позже микроорганизмы с аналогичными свойствами были получены на севере Африки и в Европе от больных людей и животных. Впервые на территории нашей страны Y.enterocolitica была выделена от человека в 1968 г. М.А. Беловой и Г.В. Ющенко. Появились сообщения о значительной роли Y.erterocolitica в патологии человека /60,1/.

Работники практического здравоохранения нашей страны не располагали надежными методическими приемами го выделению и изучению свойств культур Y.enterocolitica. Надлежащее пособие можно было разработать только на основе изучения биологических

свойств штаммов, выделенных на разных территориях.

В конце 60-х и в 70-х годах мы имели зарубежные штаммы Y.enterocolitica и отечественные - выделенные на. Северо-Западе РСФСР, Дальнем Востоке /67,69/ и в Забайкалье /41, 42/.

При изучении ряда биологических свойств штаммов Y.enterocolitica оказалось, что нуклеотидный состав ДНК их равен

47,2±0,118 мол% Г+Ц,и он был идентичен таковому возбудителя чумы /45/. Эти микроорганизмы не обладали индофенолоксидазой, как зсе представители семейства ЕШегоЬа Депасеае, образовывали уреазу и каталазу, при 22°С - ацетилметилкарбннол, не дезамннировали 0-•фенилаланнн, не обладали декарбоксилазами лизина и аргинина, были подвижны при 22°С и неподвижны при 37°С; не обладали плазмокоагулнрующей и фибринолитической активностью, гиалу-ронидазу и бактериоцины типа пестицинов не продуцировали, были чувствительны к колицинам Н и О; ферментировали с образованием кислоты глюкозу, маннит, арабинозу, глицерин, маннозу. Представители У.еЩеюсоНиса были разделены на 5 биохимических типов на основании способности образовывать ивдол, липазу, нитратредуктазу, ацетилметилкарбннол, ферментировать салицнн, ксилозу, трегалозу, сорбит, сахарозу, сорбозу /3/,35,8,36,4,13,41,16/.

При гоучении отношения У.еШегосоНиса к антибиотикам установлено, что культуры зарубежных и отечественных штаммов . чувствительны к препаратам тетрациклинового ряда и аминоглнкозидам. По своей антибактериальной активности в отношении иерсиний аминогликозиды располагались следующим образом: гентамицин, тобрамнцнн, стомицин, канамицин, стрептомицин.

Все исследованные штаммы У.еп1егосо1Шса оказались резистентными к препаратам пеннциллинового ряда (МПК-100-2500 ед/мл). Выявлена продукция пеипциллпназы, с которой, возможно, связана устойчивость к пенициллину /3,18,19/.

Представители видов У.спЮгосоПИса и У.р5еисШиЬегси1о515 резко отличались по чувствительности к антибиотикам, группы пенпциллннов. Возбудитель псевдотуберкулеза прояв1Ш к ним высокую чувствительность. Устойчивость к этим препаратам у У.аттосоНИса является видовым признаком, который можно

32 ,

использовать для дифференциации с Y.pseudotubcrculosis/18/.

В связи с тем, что микроорганизмы обоих видов вызывают у людей сходную клиническую картину, для лечения больных нерационально использовать антибиотики пенициллинового ряда до определения видовой принадлежноеш возбудителя /18/.

Французские исследователи H.Mollaret, P.Nicolie (1965), P.Nicolie и др. (1967), P.Nicolie 1iQ?5) сообщили о широком распространении явления лизогашп у уозбудителя кишечного исрсиииоза. Нам удалось выделшь 7 бактериофагов из 10 штаммор Y.enterocolitica, которые были использованы перекрестно как потенциальные индикаторы и продуценты. В бульонной культуре одного штамма был обнаружен фаг в титре Ю5. Получить чистые линии фагов не представлялось возможным, так как у индикаторных культур отмечалась спонтанная фагопродукция. В момент выделения дикие расы фагов никогда не лнзировалн бактерии штаммов, из которых они происходили. Спектр литической активлостн изучен с 75 штаммами чумного микроба, 130 - возбудителя псевдотуберкулеза, 30 Pasteurella multocida, 4 - P.haemolyiica, 23 - Salmonella paratyphi A, 23 - S.paratjphi В, 13 - S. typhi abdominalis, 16 - Escherichia coli. Выделенные бактериофаги оказались высокоспецифичными, они не лизнровали ш одну из перечисленных культур/9, 10/.

Определена чувствительность иерсиний к поливалентному фагу возбудителя чумы, фагу PST Кнаппа, псевдотуберкуяезному фагу Р-239i, а также к колнфагу ТЗ. Чу мной бактериофаг не лизиродал ни одного штамма. Выявлена чувствительность некоторых штаммов к фагам PST, Р-2391 и ТЗ (№№ штаммов - 2010, 2011,2012, 2014).

Приведенные данные свидетельствуют о широко распространенной лпзогеннн среди штаммов Y.cr,terocolit:c?, что отличало этот вид микроорганизмов от Y pseudotuberculosis. В святи с тем, что некоторые фаги представителей семейства кишечшлх

бактерий обладают способностью лизировать Y.enterocolitica, это обстоятельство необходимо учитывать при фагодиагностике /15/.

При изучении роста Y.enterocolitica на 4 известных элективных средах - Эндо, Плоскирева, Левина, висмут-сульфитной - показано, что оптимальной из испытанных является среда Эедо как по числу прорастающих колоний, так и но их морфология /30/. Кроме того, предложена специальная элективная среда для выделения Y.enterocolitica, содержащая среди прочих компонентов сухую желчь и пенициллин /75/.

В результате проведенной работы отобран ряд важных в таксономическом отношении тестов для использования при идентификации Y.enterocolitica и Y.pscudotuberculosis. К таковым относятся образование оксидазы, уреазы, /З-фенилаланина, подвижность при 37°С и 25е С, ферментация глюкозы, лаюозы, арабинозы.

Кардинальным признаком, который позволяет отнести указанные микроорганизмы к; семейству Enterobacteriaceae, является отсутствие способности образовывать индофенолокендазу. На основании остальных признаков можно провести дифференциацию между представителями рода Yersinia - Y.enterocolitica и Y.pscudotuberculosis - с одной стороны и таковыми родов Salmonella, Shigella, Proteus, Escherichia, Hafnia, Klebsiella. Нами составлена таблица основных тестов для дифференциации возбудителей кишечиого нереннноза и псевдотуберкулеза от других представителей семейства Enterobacteriaceae (табл. 7) /69,75/.

С помощью других тестов - ферментации сахарозы, рамнозы, адоннта, образования декарбокенлаз лизина, орнитина, дипщролазы аргинина, пенпцпллпназы, лизабельности поливалентным неевдотуберкулезньщ фагом - мы предложили схему дифференциации возбудителен кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Ход лабораторного анализа представлен в "Методических рекомендациях

34 •

но лабораторной диагностике кишечного иерсиниоза" /75/ и л методическом руководстве "Лабораторная . диагностика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза" /78/. Методические приемы нашли широкое применение в практических лабораториях страны.

Гашища 7

Диффер пщиация Y.enterocolitica и Y.pseudotrberculosis от представителей других родов семейства Enterobacteriaceae

Роды Рессель Подвижность Фермент да: Образование

или виды глю- лак- пря саха- рам- ман- сор- ара- УРе- .реиил-

нвуроорганизиов коза тоза 22°С зге розы яозы нита бита би-нозы азы алаиин- деза- иияазы

Yersinia + + - + + + + -

enterocolitica

Yersinia + + _ + + + + -

pseudotuberculosis

Salmonella +,г 4+) + + + +

Shigella + - +- - +-

Proteus +M-) + ■Н-) - - +

Rschcnclm _ + + + + + + + -

Halnia +- + М-) + + - + -

Klebsiella + + - + , + + + + ___

Примечание:

"+" наличие признака; "-" отсутствие признака

"+,-" наличие или отсуктвне признака у равного чиспа штаммов (+),(-) наличие или огсук гвие признака всцкчаекч редко

2.3.2. Усовершенствование и разработка методов серологической

вдентификашн! возбудителя кишечного иерсиниоза.

Микроорганизмы вида Y.eiuerocolitica неоднородны по

серологическим свойствам /14/. Их сероло1 ическую характеристику

могут определять только в нескольких лабора юриях мира

(Swaminathan и др., 1982>. G.Wauters и соавт. (1971, 19^2), G.Wauíers

(1981), O.Wauter , и соавт. (1987), S.Winblad (1982), продолжая р. эоту,

начатую S.Winblad (1968), описали 35 О-антигенных факюров,

которые присущ гвовали у микроорганизмов по одному, два и.ш три »

различных сочетаниях. Ими же подобраны типовые штаммы дли

получения антисывороток.

В свою очередь эти штаммы были использованы нами для получения кроличьих агглютинирующих сывороток по усовершенствованной методике /67/. Большое значение в определении специфичности сывороток имеет состояние культуры, взятой для реакции агглютинации. Если в популяции появляются клетки, образующие OR- или R-колонии, возможны неожиданные перекресты. Большую роль при изучении специфичности сывороток играет температура выращивания культур /72/.

Итогом работы по изготовлению агглютинирующих сывороток к различным сероварам Y.enterocolitica явился экспериментально-производственный регламент № 220-89 "Сыворотки диагностические к Yersinia enterocolitica О-моновалентные сухие для РА" и временная фармакопейная статья 42-200 ВС-89. Временная фармакопейная статья распространяется на сыворотки диагностические к Yersinia enterocolitica О-моновалентные для реакции агглютинации на стекле, которые представляют собой прегараты, полученные из крови кроликов, гнперпммунизированных взвесью бактерий. Моновалентные сыворотки 11 наименований содержат агглютинины к О-ангигенам: 3,5,8,9,10,14,15,18,20,21,22 и адсорбированные сыворотки 10 наименований к О-антигенам: 1,2а,7,13,19,27,30,31,32,33. Документация составлена совместно с сотрудниками Ленинградского ННИЭМ им. Мастера на сыворотки к антигенам наиоолее часто встречающихся сероваров /29.79.34/.

Для определения серовара но схеме G.Wauters и соавт. испытуемые ш гаммы необходимо исследовать в реакции .•шлюгинацин с 32 сыпорогками; а для уточнения ряда сероваров исрспннн еще и с моногыворопсамн. Нами предложен упрощенный способ определения сероваров исрсишдй, позволяющий рационально расходовать СЬШиР^тки, сократить ург-мя и объем рабош при серологической идентнфидацW цпаммш! /72,2:>,31/. Для -этvrcr сыворотки к стде/ьнум геремрам/ С'-иш ^ъедмнены в шесть групп

(табл.8) и по реакции"агглютинации с одной пз смесей определяли минимальный набор моновалеитных сывороток, необходимых для окончательного установления серовара исследуемого штамма.

Чаблица 8

Состав групповых сывороток против У.еп1егосо1Шса

Групповая

^ 1

NN сывороток,юответствую-щп» ти «к»!Я» плана ¿и_

«4 178 134 867 1475

О-антигены типовых шшио«

01,2а,3 02а,2в,3

03 016,29 016

124 885 480 614 1474

490 103 1647 1110

1367 96

1476 102

1477 383 955

845 106 161 553

846 842 551 500 105 841 1501

05 05,27

014

015 028

012.25

012.26 025,3^

021 _022 " 04,32 П4.33 1.6.30 Об,31

09 417 О20 07,8

С8 013,7 018

010[КТ|

010 011,23 ОИ.24

(»34

В о лгу ¡руину объединяли сыворотки, имеющие антител« к родственным антигенам. При группировке титры сццороток уравнивали по наименьшему значению (1:1280». Каждый компонент в смесях при обьешнешш сывороток разводился 1:5, а в группе 4 - 1.7. Полученные сыворотки контролировали на активность в развернутой реакции агглютинации со штаммам», к которым получены шкороши, п стк'Инфичиосп. С(> ниаммамн лруч их серонаров, См<;п1 раятдилн

1:10 н разведение каждой сыворотки, входящей в группу, составляло 1:50 или 1:70 (в группе 4).

Первой групповой сыворотке соответствовал набор моновалентиых сывороток: 1;2в;3;16;29; второй - 5;27; 14; 15;28; третьей - 25;26;21;22;35; четвертой - 9;17;20;30;31;32;33; пятой - 7;8;13;18;19; шестой-К1;10;23;24;34.

На основании результатов реакции агглютинации, полученных с типовыми штаммами п групповыми сыворотками, а затем моновалентнымн, нами составлена таблица, позволяющая определить серовар исследуемого штамма (табл. 9).

Таблица 9

Определение серовара культур У.еп1егосо1Шса по результатам реакции агглютинации (РА) с монорецепторнмми иерсимиозными

сыворотками

РА полояотль- Возможные варианты поло- Сероаяр, определмммй на

на с |рзт11ШВой жигельньной РА с моно- основам» положительной

широтой валенпшми овортгепи РА с моновалентюи

сыворотка*«

01 и ОЗ 01,2я,3

I 02в и О 3 02«,2вЗ

ОЗ ОЗ

016 016

016 н 029 016.29

05 05

И овиогт 05.27

014 ОМ

015 015

028 028

012II025 012.25

III 012и02б 012,26

025 и ОЭ5 025,35

021 021

022 022 ,

032 СМ .32

IV ОЗЗ 04ДЗ

ОМ 06,30

031 06.31

09 09

017 017

020 020

07 н О» (»7.8

V С)8 08

ОИ||()1 013.7

018 018

019и08 С >19.8

К1и()10 ОНЧК11

010 010

VI 02.« < И 1.23

024 <>11.24

ОМ 1)^4

Подобранные тнтры сывороток позволяют получить чегкуг» агглютинацию на аекле, которая наступает в течение 1 мни Oía доступная п прат,' ическом отношении методика чатла широкое применение при изучении распространения серологических варнантоп иерсиннп, выделенных на территории СССР.

В 80-х годах получила распространение реакция коагглютпнации (РКОА), которая является быстрым и удобным ciiooonoM выявления п типпрования микроортаншмов. П пенях усовершенствования серологической идентификации иерсиний нами приготовлены коагглютшшруюиие препараты, предназначенные для бпределения сероваров, широко распространенных среди штаммов, выделенных от людей: 0,3; 04,32; 0,5; 05,27; 06,30; Э7,8; 09; 016. Для сенсибилизации золотистого стафилококка (штамм Cowan) использованы сыворотки с титрами 1:2560 - 1:5120. Коагтлготиннрую-щие препараты хранили в высушенном состоянии, в качестве стабилизатора использовали среду Файбича.

Дпагностикумы проявили высокую активность и специфичность. Установлено, что для дифференциации родственных сероваров необходимо иметь КОА-препараты, приготовленные из адсорбированных моновалентных сывороток и лишь при отсутствии таких КОА-препаратов можно пользоваться сорбнропанными :ыворотками и реакцией агглютинации на стекле.

В перспективе агглютинирующие сыворотки для серологической идентификации Y.enterocolitica вполте могут быть заменены гоагглютшшрующими диагностнкумами /73, 32, 59/.

. Особое место среди серологических вариантов Y.enterocolitica анимает вариант 09. P.Ahvonen (1969) обнаружил, что серовар 09. ызывающий у людей наиболее. тяжелые заболевания, имеет нтнгенноеродство с бруцеллами. Нами подтверждено существование фологического родства между иерашпчмн серовара 09 и руцеллами всех видов /72/. Из бруиелл ввда абортус выделен

фенольным методом антиген, общий с иерсиниями серовара 09 и охарактеризованный как белково-липндо-полнсахаридный комплекс. Путем истощения этим антигеном сывороток против Y.enterocolitica серовара 09 приготовлена высокоспецифическая сыворотка, вступающая в реакции только с иерсиниями данного серовара /57, 58/. На основе этой сыворотки создан коагглютнннрующий препарат для идентификации иерсиний серовара 09 /72/. Антигенные детерминанты, присущие только серовару 09, расположены, по-видимому, в клеточг.ых стенках /20/. В диссертационной работе, выполненной под нашим руководством аспирантом Е.Е.Соколовой (5986), показано, что с помощью сконструированного активного абсорбента можно провести серологическую дифференциацию бруцеллезных и нерсиниозных антител.

Диагностические сыворотки к Y.enterocolitica групповые и моновалентные предложены нами для использования в реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). Эт.'» реакция проста в постановке, экономична, может быть применена не только дл>» серологической идентификации иерсиний, но в клинической и противоэпидемической практике/77/.

2.3.3. Изучение распространения Y.enterocolitica различных сероваров на территории Советского Союза.

Для выяснения распространенно'!!! различных серологических Bapuai гов Y.enterocolitica в разных регионах Саюза изучены коллекции микроорганизмов этого вида с помонпЬо единой методики И сывороток,'приготовленных но разрабо1анной нами телне югин! Серологическая принадлежность изучена приблизительно у 2-х с половиной тысяч штаммов, выделенных сотрудниками нриннючумной системы и других учреждений в Северо-Заичдны* районах, в Ьелоругской ССР. на Украине, Краснодарской крае, в Сибири, на Да/н.иом Восюке и Туркмении. Кулы>ры июлнроианы oi людей,.*ивогных>пшц1.;!|1тисгож>ги\~ nui обьолов внешней ербды..

В результате серологической идентификации у 1593 (66,9%) штаммов , удалось установить принадлежность к 32 известным сероварам. У штаммов, выделенных от люден, серовзр определили и 78,9% случаев, от грызунов - в 62,6%, из смывов с овощей - в 53,1%.

Во всех указанных выше регионах выявлены нерсинии сероваров 03; 05; 06,30; 07,8; 010; 012,25; 016. Среди них повсеместно преобладали представители серологических вариантов 06,30; 07,8; 03. Штаммы перечисленных сероваров на различных территория» составляй! и сумме от 3-1,5 до 66,8% серологически идентифицированных культур.

Частота обнаружения штаммов серовара 65 в Краснодарском крас и на Северо-Западе РСФСР составила 16,4% и 12,1%. Представители серовара. 016 преобладали в Краснодарском крае. Иерсинии серовара 010; 012,25 выявлены во всех регионах в незначительном проценте. Представители остальных антигенных вариантов Y.enterocolitica обнаруживали с низкой частотой и на отдельных территориях страны.

Особенностью коллекции штаммов, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке, явилась сравнительно частая встречаемость серовара 05,27 (19,8%) ir более низкая (1,3%) - серовара 05, в то время как на других территориях" чаще выявляли представителей серовара 05 (9,1%) в сравнении с сероваром 05,27 (1%). Следует также отметить, что частота встречаемости иерсиний серовара 09 в Сибири и на Дальнем Востоке была выше, чем в Европейской части Союза, что составило соответственно 4,4% и 0,3%. ,

При анализе распространения Y.enterocolitica среди людей обращает на себя внимание Преобладание случаев инфицирования микроорганизмами серовара 03. Из 1049 штаммов 527 (50,2%) составит культуры »тою варианта. Сравнительно часто определяет» геровары Q5: 07.8: < >6,30; 09; <15.27; 016. Представители указанных вариянюп составили 27.8V, Нерсинии остальных сероваров

обнаруживал« в единичных случаях /72, 21, 22, 5, 33, 46, 24, 47, 2, 2: 27, 25, 50/.

2.3.4. Выявление среди музейных штаммов, поступивших по видовым названием Y.enterocolifica, представителей новых вндо иерснний, новых сероваров и создание коллекции.

Широкое изучение микроорганизмов, отнесенных к вид Y.enterocolitica, было начато в 60-е годы. Уже тогда исследоватеот отмечали, что у представителей этого вида чрезвычайно вариабеяьш фенотипические признаки. Штаммы, отклоняющиеся по ряду тестов ферментации рамнозы, сахарозы, образованию ацетилметил карбинола, способности утилизировать цитрат и др. - стали называя энтероколитикоподобными (Brenner и да., 1980).

Прежде чем приступить к изучению отечественных и зарубежны) штаммов, было проведено исследование коллекции G.Wauters и соавт (1971, 1972), G.Wauters (1981) в соответствии с дополнительным* тестами, предложенными H.Bercovier и соавт." (1980). Все 32 типовьи штамма изучены на видовую принадлежность по морфологиче ким и тинкториальным свойствам, на способность образовывать индофеночокевдазу, орнитиндекарбоксилазу, ß-галактозндазу, уреазу, Ш1дол, ацетилметилкарбннол, окислял, и ферментировать лактозу, сбраживать глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, рамнозу, арабинозу, машину, ксилозу, 1-сорбозу, d-рафинозу, d-целлобиозу, d-мелибиозу, d-rpení)io3y, ферментировать маннит, глицерин, сорбит, инозит, адонит, дульцит, салицин. При этом оказалось, что типовые штампы, иостушшшие как Y.enterocolitica, - представители сероваров 011,23; ОН,24; 012,25; 012,26;025,35; 016; 0">8 (соответственно номера 105, 841, 490, 103, »047, 1475, 1474) по своим свойствам могут быть отнесены к виду Y-kríitensenii, представитель серовара 016,29 (штамм № 867) - к ьид) ^ .¡rctlenksc.iii. Микроорганизмы серовара 02а, ,2в 3 (штамм № 178) имели танина, характерные iруине xl, а сероваров 017 (штамм ы SSSJ м 04.33 (ÜIIUMM .Ny N76) Ги-иш онксены (ч виду Vmteimediu.

Остальные штаммы идентифицированы как Y.enterocolitka sensu stricto /26,74/.

Как уже было указано, взятые в работу отечественные и зарубежные штаммы поступили в музей РПЩ1 под единым видовым названием Y.enterocolitica, хотя' часть из них отклонялись по некоторым признакам. После изучения фенотипических признаков с помощью тестов, предложенных H.Bercovier й соавт. (1980), оказалось, что основная масса штаммов (255) относится к виду Y.enterocoliHra sensu stricto, 28 - к Y.frederik?erJi, - T kmtfnscnu. J2 - Y.intcrmcuia, i - Y.s! и 3 - Y.«!dovnc.

Y. enterocolitica sensu stricto

По биохимической активности штаммы оказались, в основном, однородными, однако у ряда представителен была отрицательная реакция с некоторыми субстратами: 3,1% штаммов не ферментировали сорбит, 10,2% - сорбозу, 2,3% - трегалозу и 5,1% - целлобиозу. Наибольшее число штаммов среди отклоняющихся' по биохимической активности было серовара 03.

Большинство штаммов относились к биотипам 3 и 1 - 103 и 94 штамма из 255. Среди представителей "биотипа 3 основную часть составляли серовары 03 и 09 (65 и 29 штаммов). Шесть других серологических вариантов представлены единичными штаммами. Биошп I имеет более широки!! набор сероваров. Однако они включают всего .от 1 ДО' 8 штаммов, • кроме сероваров 05 и 06,30, которые составили группы из 17 и 30 штаммов.

Всего первый биотип представлен 24 серологическими вариантами, второй биотип - 18. .. •

Биотип 4 насчитывает 16 штаммов, из них 11 -варианта 03. К биотипу 5 отнесены только три штамма, выделешшх за рубежом.

Один из них имеет антигенную формулу Ol ,2а,3, два других - 011,25 ПА!.

Y. kristensenii

Среди изученых . 327 штаммов нами выделено 30 сахарозонегативных. Эта группа отличалась от Y.enterocolitica sensu stricto биотипов 1-4 тем, что не ферментировала сахарозу, в реакции Фогес-Проскауэра также регистрировали отрицательные результаты. От 5 биотипа эти штаммы отличались способностью образовывать кислоту с трегалозой, восстанавливать нитраты в нитриты, а от-: Y.aldovae - ферментировать целлобнозу и сорбозу. Штаммы Y-kristei senii выделены от человека, грызунов и из внешней феды в Приморском крае, Новороссийске, Сочи, Одессе, в Белорусйи. Семь штаммов получены из Франции как типовые представители сероваров Y.enterocolitica.

Штаммы YJcristensenii распределились в 11 серогруппах, большинство оказались сероваров 011 • и 012 /74/. У двух представителей определить серологическую принадлежность не удалось.

Y.frederiksenii

Среди изученные 327 штаммов Y.enterocolitica s.s., взятых в работу. 28 ферментировали рамиозу и сахарозу. От Y.enterocolitica S.S., Y-krisiei^enii и Yersinia биотипа xl их отличала способность^ сбраживать рамнозу. От Y.aldovae упомянутые штаммы от/ичались отсутствием у госледней активности в отношении сахарозы, а от Y.intermedia - ферментацией мелибдазн.

Y.frederiksenii выделены в Приморье, на Украине, в Молдавии, Краснодарском грае, на Северо-Западе РСФСР.

При определении серологической принадлежности штаммов У.Ггес1епк5еп11 15 не агглютинировались набором типовых сывороток. К ссооварам 09 и 016, соответственно, отнесены 2 и 5 штаммов /74/. Остальные 6 принадлежали шести разным сероварам.

Улгйетте&а

Групп?. 1п 12 Ш7>Шмов проявила ферментативную 'активность з отношении мальтозы, мелибнозы, рамнозы, рафинозы, сорбита, сорбозы, сахарозы, трегалозы, целлобиозы; культуры этих штаммов рсУсли на цитрате Симмонса, продуцировали ацетилметилкарбинол. Такие свойства характерны для У-виегтесИа. От У.еп1етосо1Шса е.«., У.кп51еп5епН, У-ГгейетУсзетш, Y.aldovae, У.х1 микроорганизмы этого вида отличались способностью ферментировать мелнбиозу, рафинозу. От возбудителя псевдотуберк}леза - положительными реакциями с сорбозой, сорбитом, сахарозой, целобнозой, инозитом, способностью образовывать индол. Все штаммы были более активны при температуре 22 -28°С. Метаболическая активность при 37°С была значительно ниже или отсутствовала совсем. Утилизацию цитрата на среде Симмонса при 37°С не наблюдали. Десять штаммов У.Метте&а не ферментировали мелибиозу при 37° С, пять- рафинозу. Эти данные согласуются со сведениями Ооп Хргеппег и соавт.(Г980), которые считают, Что штаммы, замедленно ферментирующие рамнозу, рафинозу или же не растущие на цитрате Симмонса при 37°С, являются самыми характерными представителями Ул'ШеппесМа.

Штаммы выделены на Северо-Западе РСФСР, в Краснодарском крае, Монголии. Серовар определить не удалось у 4 из них. остальные отнесен I к 5 серологическим вариантам по 1, 2 и 3 представителя: ОЗ; 04.32; 016,29; 017; 042/74/.

Y. aldovae (x2)

Свойствами, характерными для микроорганизмов этого вида, обладал только один штамМ. Серологическая принадлежность штаммй не установлена, получен из Одессы в 1985 г./74/.

Yersiniaxl

К этой группе иерсиний, не имеющей пока видового названия, отнесем штамм 5506 (178), полученный из Франции в 1972 г.. Он является типовым представителем серовара 02а,2в,3 /74/. -

При серологическом типнровании иерсиний микроорганизмы ряда штаммов не агглютинировались ни групповыми, ни° моновалентными сыворотками. Были отобраны 7 в то время свежевыделенных штаммов для возможного выявления у них О антигенных факторов, отличающихся от известных 35 по антигенной схеме G.Wauters и соавт. (1971, 1972). Шесть штаммов были выделены в районе г. Сочи от кустарниковых, полевок и лесных мышей, один - в г.Одессе из смыва с капусты. Два штамма идентифицированы как YJcristensenii, остальные - как Y.enterocolitica s.s.

В антигенном отношении указанные штаммы отличались от представителей известных серологических вариантов иерсиний.

Цля доказательства их антигенной оригинальности к каждому из 7 шта- шов были получены по 3 серии кроличьих сывороток-. Полученные сыворотки агглютинировали культуру только гомологичного лггамма в разведениях 1:1280-1:5120 и не реагировали ни с одним из 6 штаммов,' взятых одновременно в работу. |3се 7 штаммов были депонированы а контрольном институте нм.Тарасевнча, им присвоены номера и формула О-фактора (табл 10). '

На 6 штаммов получены авторские свидетельства /61,62,63,64,65,66/.

Среди представителей коллекции обнаружена антигенные аналога новых типовых Штаммов, не выявленные пока только у сероваров 039 и 041. Аналоги сероьара 036 - б штаммов изолированы в Молдавии в детской инфекционной больнице из фекалий больных детей. Штаммы отнесены к виду Y.enterocolitica s.s. биотипа 2.

. . *вбдаца 10 G-фвктсгюв новых сероваров Y.enterocolitica S.S. и Y. kristensenii и номера типовых штаммов

Видовая принадлежность ¡и типовых штаммов, присвоенные в РПЧИ типовых штаммов, присвоенные вГИСКим. Тарасевича Формула О-факторов

Y.kristensenii Р-12717 165 4 ОЗб

Y.enterocolitica Р-12821 170 037

Y.enterocolitica Р-12824 168 038

Y.eníerocoliffca Р-12831 167 039

Y.enterocolitica Р-12741 166 040

Y.enterocolitica Р-12714 169 041

Y.kristensenii Р-12933 171 - ' 042 |

Включение сывороток к новым сероварам в набор диагностических иерсиннознь х сывороток расширит возможности серологической Ущентификашш иерсиний, что может быть использовано для эпидемиологического анализа.

S.Aleksic и J.Bockemuhl (1984) показали, что О-антигены 11,23; 11,24; 12,25; 12,26. и 28 связаны исключительно с видом Y. kristensenii. Антиген 016 эти авторы обнаруживали только у штаммов YJcristensenii и YJfrederksenii, а представителей сероваров 04,33 и 017 • у Y. intermedia. Мы же не проследили такой четкой закономерности. Среди штаммов Y.enterocolitica s.s. нами идентифицировано б -

серовара 012,25; l - 011,23; 1 - 016; 1 - 04,33 и 1 - 017. Большая часть штаммов YJmstensenii были действительно отнесены нами к сероварам 011 и 012 (17 штаммов из ЗО). Три представителя серовара 028 также обладали свойствами YJcristensenii/74/.

В результате проведенной работы создана охарактеризованная по большому набору тестов коллекция нерсиний разных видов. Представители вида Y.enterocolitica s.s. разделены на 5 биохимических типов, охарактеризованы по чувстрмтельности к антибиотикам.

Штаммы, вошедшие в коллекцию, выделены от больных людей при групповых и спорадических заболеваниях, от диких и., синантропных грызунов, из внешней среды.

В коллекции собраны штаммы из разных регионов СССР: Дальнего Востока, Средней Азии, Северо-Запада РСФСР, Белоруссии,. Украины, Краснодарского края, Туркмении, Молдавии, а также штаммы из-за рубежа.

На коллекционные штаммы составлен каталог, в квтором приведены порямковые, инвентарные номера, номер штамма, место выделения, объект выделения, время выделения, биотип (там, где он есть), серологический вариант, указано, откуда поступил штамм, штаммы сгруппированы по видам (табл.11).-

Т-блица 11

Пример записи штаммов в каталоге_

№ illa Сведения о штаммах

70 < Ю149 Р-10149; 135 Место выделения: Новороссийск Выделен от серей крысы в 1977 г. Свойства; Ьиотип 1, серовар ОЗ Получен из Новороссийской ПЧС в 1977 г.

71 Ю152 54 Место выделеяия:Владивасток Выделен из смыва с нових ведер в 1974 г. Свойства: биотип 1, серовар 5 Получен из Владивостокского НИИЭМ в '975 г-

' 3. Разработка системы

многоаспектного формализовано™ анализ.! для работы с коллекциями штаммов микроорганизмов

Работа, связанная с учетом и хранением патогенных микроорганизмов, изучением их свойств, а затем с обработкой и выдачей информации, является пк«м!тсй и трулоемкой, чаттмйст много времени. Применение автоматизированных систем анализа, Поиска и выдачи информации значительно сокращает время работы и расширяет возможности для повышения качества и эффективности научных исследований. Несмотря на большие возможности

электронно-вычислительной техники, в настоящее время остается

актуальным использование средств и методов малой механизации при работе с коллекциями культур.

Совместно с И.Е. Киселевой /71,77/ нами применены информационно-поисковые системы с прямой и' инвертированной организацией поискового аппарата. При прямой организации поискового аппарата в качестве единицы хранения »'•пользуется источник информации - документ (паспорт) или заменяющая его карта При ннвертчрованной - единицей хранения является поисковый прислан. Одним т способов инвертированной организации поисковсл? аппарата является унитерм-метод, реализуемый с помощью массива уннтерм-карт (на каждую то Которых записан только один признак), и единого набора поисковых признаков -дескрипторов (Ржанович, Иваненков, 1971; Черный, 1975).

Метод прямой организации поискового аппарата применен нами при работе с коллекциями возбудш-елей сапа и мелг лщоза.

Инвертированная организация поискового аппарата была испытана на массиве 500 штаммов возбудителя чумы.. Установлено, что унитерм-метод пригоден для работы с большим количеством

штаммов с разнообразными характеристиками и позволяет осуществлять многоаспектный поиск штаммов с заданными свойствами. В результате проведенной апробации рекомендуется следующий порядок работы. Информационно-поисковая система "Унитерм" для работы с коллекциями культур различных возбудителей должна состоять из двух массивов.

1) Массив паспортов.

На каждый поступивший в музей штамм заводят паспорт, в" который заносят полученные в результате изучения характеристики. Вносят' также сведения о времени и месте выделения штамма, указывают объект выделения, проставляют номер штамма и порядковый номер паспорта. Порядковые номера присваиваются' ш> спортам последовательно по мере их заполнения. Номера не повторяют. Паспорта раскладывают в папки по перядку номеров.

2) Поисковый массив уннтерм-карт.

Массив состоит из уннтерм-карт, соответствующих поисковым признакам, на каждую карту заносят номера документ (паспортов) первого мпссива. Каждая карта соответствует одному признаку. Карты расставляют по алфавиту признаков.

В качестве унитерм-кар? используют стандартные перфокарты размером 205 х 145 мм. Карты делят на 10 вертикальных граф, обозначенных цифрами от О до 9. В верхнею часть унитерм-карты по горизонтали вписывают соответствующий поисковый признак^ характеризующий штамм возбудителя. В качестве войскового признака используют характеристики, приведенные в паспорте

В вертикальные графы последовательно вносят номера паспортов на штаммы, отобранных по этому признаку. Запись номеров паспорта на унитерм-карту проводят по последней цифре номера паспорта, т.е. в ту гр$фу, номер которой (цифры в верхней части карты) соо1ветствует последней цифре номера документа.

При поиске штамма с заданными свойствами (признаками) все вынесенные на уннтерм-карты признаки расценивают как дескрипторы, и поиск проводят как в обычной информационно -поисковой системе с использованием словаря дескрипторов. Для этого все поисковые термины включаются в общий алфавитный список поисковых признаков. Главный дескриптор объединяет все поисковые синонимы.

Поисковые признаки объединены в группы: время ввдсления, мсао выделения, объект выделения, природный очаг, биохимическая актшзность, чувствительность к фагам, к антибиотикам, к бактерноцннам, питательные потребности, содержание различных антигенов, вирулентность. В пределах группы выделены внутригрупповые показатели, цифровые (год выделения), описательные (место выделения), количественные (минимальная задерживающая концентрация антибиотика, средняя летальная доза для экспериментальных жнвотлых) и альтернативные (наличие -отсутствие признака). Каждый поисковый признак включен в унитерм-карту, которая является основным элементом в работе данной системы.

При поиске штамма с заданными свойствами в словаре дескрипторов находят соответствующие поисковым признакам дескрипторы. Из массива унитерм-кпрт отбирают заполненные карты с этими дескрипторами (признаками)" и выделяют номера паспортов на штаммы, одинаковые на всех отобранных картах.

При отборе сравнивают колонки, оканчивающиеся одной цифрой. Для этого карты накладывают одна на одну, колонка под колонкой.' Со падающие номера на картах с каждым заданным признаком определяют паспорт штамма с искомыми свойствами (рис.1)/"70.71,79/«

Очаг Среднеазиатский, мезоочаг Каракумский

О 1 2 3 4 5 6 7 8 9

80 31 82 83 84 85 86 87 78 89

Ю 81 92 93 94 95 96 97 88 259

480 491 432 436 258

492 438

Пестицин! - чувствительность +

О 1 2 3 4 5 6 7 .8 9

2Ю 21 282 143 264 275 146 267 18 219

230 81 292 213 274 295 266 277 208 229

280 271 542 273 294 365 296 297 278 279

290 301 293 304 ЗОб 307 L288 289

ХЮ 311 ЗОЗ 298 299

ЗЮ 308 309

Питательные потребности - метионин фенилаланин

О 1 2 3 4 1 5 6 7 8 9

80 31 2 73 84 15 86 7 ^ !8 9

170 81 22 83 94 85 Ю6 77 68 79

180 91 82 ЮЗ 124 Ю5 126 87 78 89

340 221 342 373 234 245 336 367 238 319

350 241 352 393 254 255 346 387 258 339

530 321 372 403 344 335 366 427 348 349

341 402 413 354 345 376 368 359

391 442 503 364 375 436" 378 419

401 374 435 439

421 414 449

441

I. Поиск паспорта штамма чумного микроба по запросу: выделен в Каракумском мезоочаге, чувствителен # песшцнну 1, потребность в факторах роста - метионин, фенилалапин

4. Разработка компьютерной информационно-поисковой системы по коллекционным штаммам

Наряду с созданием системы многоаспектного 4фрмалшо-ванного ана;шза для раболы с коллекционными штаммами

микроорганизмов в музее живых культур РПЧИ разработака компьютерная информационно-поисковая система (ИПС) по накоплению, хранению и поиску сведений о штаммах микроорганизмов. Система создана научным сотрудником А.Г.Варивода с нашим участием.

При этом использована информация по коллекционым штаммам музея живых культур, на оснопянии тссгсруй создаич структуры данных систем накопления и справочники. Структуры данных включают комплекс фено- и генотипических характеристик микроорганизмов, сведена о природных очагах, объектах выделения штаммов.

В программной реализации системы использована СУБД (система управления базами данных) FoxPro фирмы Microsoft.

Система представляет собой единый программный комплекс, состоящий из следующих модулей: <

1) Программный модуль "Картотека" (Electronic Cards, ЕС), предназначенный для формирования и ведения банка данных коллекционных штаммов с изученными свойствами.

2) Программный модуль "Журнал" (Electronic Registerer, ER), позволяющий поддерживать локальные базы данных находящихся в работе штаммов по уточнению тех или иных свойств, а также свежевыделенных штаммов.

3) Программный модуль "Справочник" (Electronic Handbook, EH), предназначенный для автомгтизации ведения и использоваши справочной информации,-

4) Про1раммный модуль "Поиск" (Search), предназначенный для осуществления поисковых запросов к базам данных, выборки массивов штаммов по заданным свойствам, подготовки и печати отчетов, каталогов, паспортов, таблиц и т.д..

Программные модули полностью взаимосвязаниы и позволяют осуществлять доступ к данным из любого модуля и осуществлять к'рек.тюченпе .между собой.

Основной единицей хранения является паспорт штамма, в котором максимально отражены свойства данного микроорганизма.

Паспорта объединены в базы данных по видам, а базы данных видов связаны между собой по родовой принадлежности штаммов. Выбор баз данных для работы осуществляется поиском в дереве (рис.2).

Vibrio

cholerae Ol

cholerae non Ol

| Yersinia

pesfis

pseudotuberculosis |

enterocotitica sensu stricto

.....|н т.д.|

Рис. 2. Пример родового дерева.

После выбора вида открывается экран ввода и корректировки паспорта (рис. 3).

Y*nhbputk(l)

Инвентарный номер I2S9

ШшшМ) 280а (Аригасод ПЧС)

Особое наэкагве "Andramau"

Объект выделения блоха Cteuophthalmw terms,

счесаяные с Micro[и< ervalii (полет сери)

Мп од выделения пр'шой посев

Дата выделена* 23.05.195»

Мь.то в ыдслеши Леяшикансгое ПЧО, 15ш на восток от с.Эуйгдюр

Тип очага Полевочнй .

Природный очаг Закавказский высокогорный

Мезооиг Лешшахшскнй

Пооучев г) Зяастяшхой ПЧС

Дата по< Туплеши 19.01.1960

Рис. 3. Пример экрана ввода и корректировки паспорта.

Структуры баз данных доступны для редактирования, что позволяет вводить новые свойства штаммов, не прибегая к перепрограммированию системы. В связи с тем, что числе признаков может достигать 100 и более, предусмотрен механизм формирования пользовательского экрана с вмбором списка полей, необходимых в работе. Количество пользовательских экранов не ограничено.

В качестве языка ч«прессз hüiuíimomh.JJQL (Structured English Query Language) реализации FoxPro. Этот язык запросов используется подав^шощим большинством современных СУБД и позволяет с максимальной скоростью осуществлять выборку необходимых "штаммов, при этом, не требуя организации сложных систем индексирования. Запросы генерируются в диалоговом окне путем выбора логических функций и атрибутов полей и могут сохраняться в виде текстовых файлов с возможностью последующе! о использования.

По результатам запросов можно генерировать локальные базы данных, которые будут поддерживаться в модуле "Журнал", сливать базы данных, получать текстовые файлы (каталоги), строить графики, осуществлять целенаправленный п^иск с уточнением.

Подсистема справочника позволяет оперативно накапливать информацию по территориям, откуда был выделен тот или иной штамм, очагам, хранить информацию об объектах выделения, поддерживать словарь ключевых слов.

. Система находится в стадии эксплуатации. Разработаны структуры данных для родов Vibrio и Yersinia, введена информация по коллекции вибрионов и иерсинин, проводится работа по накоплению информации о свежевыделенных штаммах. Система позволила упорядочить музейную информацию, обеспечить оперативный поиск штаммов с заданными свойствами,- а также выпустить несколько каталогов патогенных вибрионов и иерсиний. В дальнейшем планируется организация работы системы в локальной сети института

и через модемную связь, что позволит обеспечить экспериментаторов оперативным доступом к музейной информации.

Заключение

Для обеспечения непрерывности в передаче исследователям разнообразных генетических ресурсов необходимо устойчивое существование коллекций культур (Да Сильва, Калакуцкий, Сун Дакан;1991). В последние годы появились новые методические подходы для выявления неизвестных ранее биологических активностей у микроорганизмов, сохраняемых в различных коллекциях. Установление новых особенностей коллекционных штаммов расширяет возможности практических и теоретических исследований. Примером тому может служить обнаужение среди холерных вибрионов, собранных в разные годы в коллекции института, штаммов, содержащих ген холерного токсина. Это позволило исследователям с новых позиций ретроспективно проанализировать события, которые развивались на территории Советского Союза в период 7 пандемии.

Сохранявшиеся в Ростовском-на-Дону НИПЧН штаммы рода Yersinia практически не бььщ изучены. Проведенная нами расширенная характеристика штаммов чумного микроба позволила систематизировать их и выявить типичные и атипичные ш аммь? среди выделенных в разные годы в Среденеазиатском, Закавказском равнинно-предоориом, Закавказском высокогорном, Алайском, Горно-алтайском, Тяньшаньском, Тувинском, Прикаспийском степном, Забайкальском, Центрально-Кавказском природных очагах чумы, а также полученных нз-за рубежа.

Емесfe с тем, среди штаммов возбудителя псевдогуберкулеза, выделенных ь Ленинграде, Краснодарском крае,на Дальнем Востоке, в Забашсалье, Монголии, на Украине, также изученных по всем

таксономическим тестам, выявлены представители разных серологических вариантов. Определение чувствительности к антибиотикам позволило обнаружить штамм, обладающий лекарственной устойчивостью.

Коллекция штаммов, поступивших под. ввдовым названием Y.enterocolitica, разделена на шесть видов . Основная масса штаммов отнесена к Y.enterocolitica sensu stricto, микроорганизмы выделены w» Северо-Западе РСФСР, в Краснодарском крас, ' Забайкалье, на Дштнем Востоке, в Вслоруссии, на Украине, в Монголии, Туркмении. В коллекцию вошли штаммы 32 серологических вариантов по схеме OAVauters и соавт.(1971, 1972) и семь новых сероваров, выявленных нами.

В связи с тем, что в стране не было диагностических препаратов для определения сероваров водбудителя псевдотуберкулеза, нами были приготовлены соответствующие антительные эрнтроцитарные диагностикумы и показана целесообразность их использования для идентификации возбудителя псевдотуберкулеза и дифференциации его с бактериями чумы. Кроме того, проведены исследования по усовершенствованию и разработке методов серологической идентификации возбудителя кишечного иёрсиниоза.. Приготовлены моновалентные и групповые сыворотки, предложен упрошенный способ определения сероваров Y.enterocolitica s.s. и близкородственных Микроорганизмов.

Созданные нами каталоги штаммов представителей рода Yersinia и информационно-поисковая система позволяют в короткие сроки отбирать для научных и практических целей штаммы с заданными свойствами.

Заложенные щнНшпы формирования коллекции и созданная информационно - поисковая система обеспечивают совершенствование базы данных о различных видах нерснннй за счет

вновь поступающих и выявляемых при дальнейшем изучении штаммов с новыми оригинальными свойствами.

ВЫВОДЫ

1. В Ростовском-на-Дону противочумном институте создана охарактеризованная коллекция представителей рода Yersinia- Y.pestis, Y. pseudotuberculosis, Y.enterocolitica s.s., Yirederiksenij, YJcristensenii, Y.intermedia, Y.aldovae, Y.xl.

2. Коллекция штаммов Y. pestis представлена микроорганизмами из 22 природных мезо» или автономных очагов, изученными по морфологическим, культуральным и ферментативным свойствам, питатель: ным потребностям, продукции фракции 1, пестицина 1,"мышиного"

токсина, по чувствительности к бактериофагам и антибиотикам.

Штаммы Y.pseudotuberculosis также охарактеризованы по морфологическим и культуральным свойствам, ферментативной активности, чувствительности к бактериофагам и антибиотикам. Кроме того, определена их принадлежность к серологическим вариантам.

Коллекция типичных и атипичных штаммов Y.enterocolitica в результате изучения по расширенному набору тестов разделена на 5 видов. Выявлены общие серовары у Y.enterocolitica,Y.frederiksenii, Y kris-, tensenii, Y.intermedia.

3. Для работы с большим количеством штаммов с разнообразными характеристиками и оперативной выдачи информации предложено и пользовать информационно-поисковую систему с инвертированной организацией справочно-поискового аппарата, основанную на методе "Унитерм" и реализуемую на уровне малой механизации.

4. Создана и функционирует информационно-поисковая система (ИПС) по поиску, накоплении) и хранению сведений о штамма* микроорганизмов на основе сетевой версии СУБД F хРго2.5. Система обеспечивает характеристику штаммов более ч#м;по 100 признакам. ИПС позволяет осуществлять поиск штаммов с заданными свойствами в пределах натшенаой ннформащш.

5. Получены диагностические препараты для серологической идентификации Y.enterocolitica s.s. и близкородственных микроорганизмов. Утверждена нормативно-техническая документация на их изготовление: экспериментально-производственный регламент, временная фармакопейная статья и инструкция по применению.

6. Разработана упрощенная методика серологической идентификации Y.enterocolitica s.s. и близкородственичт ';!гсрсорганшмов с помощью набора групповн* it моновалентных кроличьих агглютинирующих сывороток. Предложена таблица Ьгфеделения серовара по результатам реакции агглютинации с моновалентными сыворотками.

7. Показана возможность серологической дифференциации кишечного иерсиниоза, обусловленного сероваром 09, и бруцеллеза. Для устранения антител в иерсиниозных сыворотках серовара 09 к антигену, общему с бруцеллами, использована фенольная фракция, выделенная из Br. abortus.

8. Отработана технология получения коагтлютинирующих препаратов, предназначенных для определения сероваров Y. enterocolitica, широко распространенных среди штаммов, выделенных от людей: ОЗ; 04,32; 05; 05,27; Об,ЗО; 07,8; 09, 016. Показано, что сыворотки для серологической идентификации Y.enterocolitica s.s. и родственных микроорганизмов могут быть заменены коагглютиннруюшимн диагностикумами.'

9. Впервые единой .методикой и набором групповых моновалентных типовых сывороток изучена антигенная принадлежность около двух с половиной тысяч штаммов нерсинпн, выделенных на Северо-Западе РС<Т>С.Р, в Белоруссии, Краснодарском крае, Забайкалье, на территории Сибири И Дальнего Востока, в Туркмении Обнаружены штаммы, принадлежащие 39 серологическим вмрияшлч.

На территории страны среда штаммов, выделенных от людей, преобладают представители серовара ОЗ - 50,2%.

10. Среди нетипирующихся штаммов Y.entsrocolitica s.s. и-близкородственных микроорганизмов выявлены семь с оригинальными антигенами, отличающимися от антигенов типовых представителей схемы G.Wauters и соавт.. Штаммам присвоены антигенные формулы от ОЗб до 042. В коллекции выявлены аналоги новых сероваров, кроме 039 и 041.

• СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ИНСТРУКТИВНО-МЕТОДИЧЕСКИХ ДОКУМЕНТОВ, НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКОЙ

ДОКУМЕНТАЦИИ И ОТЧЕТОВ ПО ЗАВЕРШЕННЫМ ТЕМАМ

1. Агабабова Э.Р., Алекберова З.С., Гурлева Г.Г., Сидельникова С,М. Yersinia enftrocolitica и ревматические заболевания (обзор литературы) // Вопр. ревматизма.- 1978.- N4.- С.65-70.

2. Ващенок Г.И., Андрейчик Э.П., Ващенок B.C., Гурлева Г.Г. и др. Иерсинлозы в Ленинграде // Профилактика природно-очаговых инфекций. Тез. докл. Всесоюзной научне-практической конференции.-Стазрополь, 1983.- С. 17-18.

3. Григорьян Э.Г., Гурлева Г.Г., Мншанькнн Б.Н., Халяпина Е.Е.

О чувствительности Yersinia enterocolitica к антибиотикам // «

Антибиотики. - 1975.-NH.-С. 994-998.

4. Григорьян Э.Г., Гурлева Г.Г, Кириллова HJI. О биохимической активности Yersinia enU -ocolitica // Жури, кшкробиол., эпвдемиол. и нммунобнол.- 1975,-N7,-С. 131-¡32.

5. Григорьян Э.Г., Гурлева Г.Г. Определение серо- ч биоваров Зарубежных и отечественных шта/чмов Yersinia eiuerocolitica /, Журн. микробиол.,эиндемиад.ииммунобнол.-1979.- Nil.-С. 57-61.

6. Гурлева Г .Г., Лебедева С.А., Сучков Ю.Г., Халяпина Е.Е. Способ получили клоновых культур //Лаб. дело.-1967. - N3. - С. 166167. ' .

7. Гурлева Г.Г., Домарадскнй И.В. Новый вид рода Пастерелл // Физиология и генетика микроорганизмов: Матер, конф.микробиологов Сев. Кавказа,- Ростов н/Д, 1969.- С. 156-159.

8. Гурлева Г.Г., Кольцова Е.Г., Домарадскнй И.В. О чувствительности к колицинам некоторых ппелстптпггелей рода Пастепетт ./.' "Внехромссомные факторы наследственности у бактерий": Матер, межинститут, конф. по генетике. - М.,1969. -С. 409. Гурлева Г.Г., Токарев С.А., Домарадскнй И.В. и др.

Электронно-микроскопическое строение бактериофагов Pasteurella X и

Pasteurella multocida // Физиология и генетика микроорганизмов:

Матер, конф. микробиологов Сев. Кавказа.- Ростов н/Д, 1969.- С. 159162.

10. Гурлева Г.Г., Халяпина Е.Е., Домарадскнй И.В. Бактериофаги Pasteurella X // Физиология и генетика микроорганизмов: Матер, конф. микробиологов Сев. Кавказа.Ростов н/Д, 1969.- С. 165167.

11. Гурлева Г.Г., Домарадскнй И.В. Псевдотуберкулез // Диагностика особо опасных инфекций. Лабораторные методы исследования. - 1970.-Ростов н/Д - С. 262-269.

12. Гурлева Г.Г., Домарадскнй И-В-. Смоликова Л.М. и др. Биологические свойства возбудителя пйевдотуберкулеза, выделенного от больных скарлатиноподобной лнхоркадкой // Журн. микробиол., »шшемноли нммунобиол..- 1973, - N9.- C.I25-130.

13. Гурлева Г Г., Грнгорьян Э.Г., Домарадскнй И.В. и др. Сравнительные свойства штаммов' Y.enterocolitica, выделенных в зарубежных странах и в Ленинграде // Пробл. ООИ. - Саратов, 1975.-Вып. 2.-С.127-129.

14. Гурлева Г.Г., Григорьян Э.Г., Шошиев JI.H. Антигенные и серологические свойства Yersinia enterocolitica // Журн.микробиол., эиидемиол. и иммунобиол..-1976. - N8.-C. 36-40.

15. Гурлева Г.Г., Григорьян Э.Г., Шошиев JI.H. О бактериофагии и бактериоциногении Yersinia enterocolitica // Журн.микробиол., эчидемиол. и иммунобиол..-1979.-N4,-С.9-13.

16. Гурлева Г.Г., Попов В. Ф., Зосименко B.C., и др. Некоторые . биологические свойства штаммов Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica, выделенных от больных с острым гепатитом желтушной формы на территории юго-западного Забайкалья и МНР // Пробл.. прлродной очаговости чумы: Тез. докл. 4-ой Сов. - Монг. конф.. -Иркутск, 1980.- Ч.З.-С. 22-23.

17. Гурлева Г.Г., Арутюнов Ю.И., Халяпина Е.Е Серологическое родство и специфичность действия псевдотуберкулезных и коли-дизентерийных фагов //Журн. микробиол., эиидемиол. и имммунобиол..-1981,- N5,- С. 65-67.

18. Гурлева Г.Г., Корганов Я.Н., Ма'каровская Л.Н. и др. Чувствительность к антибиотикам Yersinia enterocG.itica и Yersinia pseudotuberculosis, выделенных от больных гепатитом желтушной формы И Антибиотики,- 1982.- Т.27, N1.- С. 37-40.

19. Гурлева Г.Г., Корганов Я.Н., Мчкаровская Л.Н. и др.Чувствительность к антибиотикам штаммов Yersinia enterocolifica, выделенных от грызунов и больных людей на территории Краснодарского края //Антибнот.ши.- 1984. - Т.29, N3. - С.195-197.

20. Гурлева Г.Г., Соколова Е.Е., Гофман Е.Л., Король В.В. Выделение поверхностных структур Yersinia enterocolitica серологического варианта 09 // Мол. биол., генетика и иммунол. возбудителей ООИ: Тез. докл. Всесоюз. конф.- Ростов н/Д, 1984.- С. 150-152.

¿1 Гурлева Г.Г., Ващенок Г.И., Смоликова Л.М. и др. Распространение различны*серологических вариантов Y .enterocolitica

в Ленинграде и Краснодарском крае Н V Всерос. съезд микробиологов

и эпидемиологов: Тез. докл. - М.,1985,- С.10. _ . . - -

^ • •" .....

22. Гурлева Г.Г., Миронова Л.П., Головачева В.Я. Серологические варианты штаммов Yersinia enterocolitica, выделенных в Сибири и на Дальнем Востоке II Современные аспекты систематики микроорганизмов, новые формы и коллекции культур: Тез.УН съезда Всесоюз. микробнол. о-ва.- Алма-Ата, 1985.-Т.1.- С. 18.

23. Гурлева Г.Г., Ценева Г.Я., Митпик^а Д.Л. и <тр. Серологические вар{ШГШ Yersinia entcrocolitica, циркулирующие в различных ' географических зонах Советского Союза // Журн. Чппфобиол., эпвдемнол. и иммунобиол.- 1985.- N10.- С.39-42.

24. Гурлева Г.Г., Невенчанная Л.В., Смоликова Л.М. и др. Распространение возбудителя иерсиниоза в районах Сочи // Актуальные вопр. иммунодиагностики ООН: Тез .докл. Всесоюз. науч.-практ. конф.- Ставрополь, 1986.- Ч.1.- С.77-80.

25. Гурлева Г.Г., Смоликова Л.М., Иванютенко M.II. и др. Серологические варианты штаммов Yersinia enterocolitica, выделенные в Белорусской ССР Н Иерсиннозы. Микробиология, эпидемиология, клиника, патогенез, иммунология. Тез. Всесоюз. науч.-практ. конф.-Владивосток, 1986.- С. 30-31.

26. Гурлева Г.Г. Смоликова Л.М., Халяьнна Е.Е., Санамянц Е.М. Видовая принадлежность нерсиний - типовых представителей серологических вариантов Wauters и соавторов // Иерсиниозы. Микробиология, эпидемиология, клиника, патогенез, иммунология, Тез. Всесоюз. науч -практ. конф;- Владивосток,1986.- С. 31-32.

27. Гурлева Г.Г., Смоликова Л.М., Халяпина Е.Е., Санамянц Е.М. Распространение Yersinia enterocolitica различных сероваров на территории Советского Союза // Пробл. мед. и сан.микробнологии юрода: Тез. обл. конф.: - Ростов н/Д, 1987.- С: 67-69.

28. Гурлева Г.Г. Упрощенный способ определения серологических вариантов Yersinia enterocolitica // Лаб. дело.-1989.-N7.-C.70-72.

29. Гурлева Г.Г. Возбудитель иерсиниоза и его серологическая идентификация // Иерсиниозы. Микробиология, эпидемиология, клиника, патогенез, лаб. диагностика: Тез. Всесоюз. науч.-практ.конф.:- Владивосток, 1989.-Ч.1.- С 22-23.

30. Гурлева Г.Г., Колгаисова Л Д. Сравнительная оценка роста Yersinia enterocolitica на разных элективных средах // Лаб. дело.- 1989.

- N4.-Ь. 71-72. ' •

31. Гурлева Г.Г., Смоликова Л.М., Подладчикова О.Н. и др. Случай обнаружения Y.enterocolitica и Y.pseudotuberculosis в клинических изолятах больных псевдотуберкулезом // Иерсиниозы.-Микробиология, эпидемиология, клиника,патогенез, лаб.диагностика: Тез. Всесоюз. науч.-практ. конф.-Владавосток, '989,- Ч.1.- С. 23-24.

3? Гурлева Г.Г., Халяпнна Е.Е., Смоликоча Л.М. и др. Коагглютинирующие диагностикумы для серологической идентификации Yersinia enterocolitica II Лаб.дело. 1989. - NIO. - С.66-68.

33. Гурлева Г.Г., Невенчанная Л.В., Брудиый Р.А. и др. Изучение распространения возбудителя иерсиниоза в районах Сочи и прилегающих зонах И Микробиол. журн. -1990. - Т.52. - N5,- С.72-74.

34. Гурлева Г.Г., Смоликова Л.М., Халяпина Е.Е. и др. Экспериментально - производственный регламент и временная, фармакопейная статья на сыворотки диагностические к Y.enterocolitica и-моновалентнь»е сухие Для РА // Мед. наука - пра^гикелЛетод. разработки, рекомендуемые для широкого внедрения в мед. практику.

- Новосибирск, 1991,- С. 1,7.

35. Domaradbkii I.V., Gtirteva G.Q. Some preliminary data obtained' in cou.parative studies of Pasteurella genus metabolism // International

symposium on Pseudotuberculosis: Symp. Series immunoHol. Standard (Paris,1967).-New York,1968. - Vol.9.- P.261-264.

36. Domaradskij I.V., Gurleva G.O., Kolcova E.G., Suckov Ju. Colicins and Pasteureilae taxonomy // X Congreso internacional de microbiologia: Resúmenes. - México,1970.-Vol.8.-Ad-5.

37. Домарадскин И.В., Гурлепа Г.Г., Грнгорьян Э.Г. и др.О бактерноциногенности, плазмокоягулирующей. Аийри^слитичсской и гналуронмч»~пс-П активности предсгавит;л?;1 рода Пастерелла // 5-ая Объед. науч. конф. мед.н науч. -нсслед. ин-тов г. Ростова-на-Дону. Ростов -на-Дону, 1968. -4.1. - С. 259-260.

38. Джнкидое Э.К., Бадаева ЕЛ., Пекерман С.М., Крылова Р.И., Заплатана С.И., Гурлева Г.Г., Смоликова JI.M. Псевдотуберкулез среда* обезьян // Лаб. животные в мед.исследоваииях: Тез. докл. конф. -М., 1974. - С.239-240.

39. Джнкндзе Э.К., Крылова Р-И-. Беляева Е.Я., Гурлева Г.Г. и др. Спонтанный и экспериментальный псевдотуберкулез у обезьян // Verhandlungsbericht des 22 Internationalen Symposiums fiber die Erkrankungen der Zootiere. Amhem, 1980. - Berlin, 1980.- S.l 11-116.

40. Ерохин Е.П., Гурлева Г.Г., Домарадский И.В. и .др. Типизация возбудителя лсевдотуберкулеза при помощи реакции непрямой гемагглютинацтг Я Журн. микроб., эпндемиол. и нммукобиоп. - 1974,- N7,- С. 143-144. .

41. Зоснменко B.C., Попов В.Ф., Гурлева Г.Г. и др. XapaKTepucnncá вспышки псевдотуберкулеза и иерошиоза желтушной формы в Забайкалье // Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов.- Сб.науч.тр.- М..1979.-С.188-195.

42. Зоснменко B.C., Попов В.Ф., Жамба Г., Гурлева Г.Г. и др. Выделение Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica от больных с острым гепатитом желтушной формы // Журн.мнкробиол., «шдемнол. и кммунобиол.-1981.- N2.- C.103-I04.

43. Зайденов A.M., Морозов A.A., Костюковский В.М., Гурлева Г.Г. и др. Псевдотуберкулез в Краснодарском крае. Клинико-эпидемиологические особенности заболеваемости и биологические свойства штаммов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол..^ 1991.-N4,-С. 26-28.

44. Иванова B.C., Лебедева С.А., Гончарова H.A., Гурлева Г.Г. Скрининг плазмид у музейных штаммов чумного микроба, выделенных из разных природных очагов // • Мол. генетика, микробиол. и вирусол.. -1990.-N3.-С. 16-18.

45. Марченков В.И., Домарадский И.В., Гурлева Г.Г. и др. О нуклеотидном составе ДНК некоторых представителей рода Pasteurella //Пробл. ООП,- Саратов, 1971. Вып. 3,- С. 116-121.

46. Меницкая Л.Е., Седина С.Г., Святая Т.В., Гурлева Г.Г. К' выделению культур кишечного иерсиниоза от больших песчанок // 10-я Всесоюз. конф. по природно-очаговым болез!шм: Тез. докл.-Душанб?, 1979,-Вып.2,-С. 138-139.

47. Митрикова Л.А., Ценева Г.Я., КуляшоВа Л.Б., Гурлева Г.Г. и др. Распространенность нерсиний и их серологические варианты у больных острыми кишечными заболеваниями неустановленной этнологии в Ленинграде И Журн. микробиол., - эпидемиол. и иммунобиол..- 1989.- N8.- С. 17-20.

48. Новосельцев H.H., Рыжко И.В., Гурлева Г.Г. Обнаружение штамма псевдотуберкул~зного микроба - носителя фага и плазмиды множественной лекарственной устойчивости // Генетика микроорганизмов: Тездогл. VI гьезда Всесоюз. микробиол. о-ва.-Ригг, 1980,-Т.2, С. 16.

49. Плотников В.А., Брудный P.A., Морозов A.A., Демина Г.И., Кутишевскзя Е.Ф., Ус З.И., Сухнова Г.М., Краснова Н.В., Нагорная А.Ф., Гурлева Г.Г., Григорьян Э.Г. О выделении Yersinia enterocoütica от грызунов в Краснодарском крае // Журн.микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1979,-N8.-C.114.

50. Плотников В.а:, Брудный Р.А., Морозов А.А., Ус З.И., Кутишевская Е.Ф., Сухн^па Г.М., Нагорная А.Ф., Децнна Г.И., Павлова И.В., Краснова Н.В., Гурлева Г.Г., Григорьян Э.Г., Щека В.Г. Случаи выделения Yersinia enterocolitica от людей в Новороссийске // Журн. мнкробнол., эпидемиол. и иммунобиол.. -1981. - N2.-C.107.

51. Рогозина М.И., Гурлева Г.Г., Рыжко И.В., и др. Действие гетраицпслинов на псенг-отуберкулезныи микроб в опыте» *nvíír¿ ¿¡ на гффгхшаиюгь fipff -?гссП£р11Менталкном пссздо туберкулезе белых

мышей И Эпвдемиол., диагностика и профилактика кишечных,

/ ■ ■

респираторных и природноочаговых иифащнй: Сб. науч.работ. -' ÍT.;to?5.- С. 176-177.

52. Рогозина М.И;, Гурлева Г.Г., Рыжко И.В, и др. Действие гетрациклииов на псевдотуберкулезный микроб в опытах in vitro и их эффективность при экспериментальном псевдотуберкулезе белых мышей //Антибиотики.-I977.-T.22,- NJ. - С. 455-457.

53. Рогозина М.И., Рыжко И.В., Гурлева Г.Г. и др. Сравнительное ' изучение чувствительности . к различным антибиотикам штаммов псевдотуберкулезного микроба, циркулирующих в Ленинграде И Химиотерапия бактериальных инфекций: Тез. Докл. Всесоюз. конф..- М.,1979- С. 208-209.

54. Рыжко И.В . Рогозина М.И., Гурлева Г.Г. и ЛР- Сравнительное изучение действия антибиотиков-амнногликозндов на зсевдотубсркулезный микроб in vitro и in vivo // Антибиотики.-197б.-Т. l\, N5.-C.426-429

55. Рыжко И.В., Рогозина М.И., Гурлева Г.Г., Макаровская Л.Н. "рашштелыюе тучение действия антибактериальных препаратов -шнкоглнкозидоз, тетрацнклннов, пенишшлинов, левомицетнна, гульфаннлаыцдов, рифампицина , и невиграмона - на

тевдотуберкулезный мшфоб in vitro и írt vivo // Химиотерапия

"" * • * •

>актериальных инфекций: Тез. докл. Всесоюз. конф..- M.J979.-C.56-57.

5£. Рыжко И.В., Гурлева Г,Г., Рогозина М.И. Макаровская Л.Н. Сравнительное изучение действия 16 антибактериальных препаратов на псевдотуберкулезный микроб в опытах in vitro и in vivo ,// Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций: Тез. докл. Всесоюз. конф. спец. противочуы. учрежд.- Иркутск, 1984. - 4.3. г €.52--53. . • '

57. Соколова БЕ., Яговкнн Э.А., Гурлева Г.Г. Получение высокоспецифической сыворотки против . Y.enterocolitica серологического варианта 09 // Современные аспекты профилактики зооношых инфекций: ' Тез. докл. Всесоюз. конф^ спец. протнвочуч.уэрежд..- Иркутск, 1984.- Ч.З.- С .53-54.

58. Соколова Е.Е., Яговкин ЗА., Гурлева Г.Г. Использование феиольиой фракции из бруцелл для получения специфической сыворотки против Yersinia enterocolitica сероваров 09 // Журн. микробиол., эпидемией. и иммунобиол.-1985. - N5.- С. 49-52.

59. Соколова. Е.Е., Гурлева Г.Г. Получение высокосиецнфическогс коагглютицнрующего препарата для серологической идентификации Yersinia enterocolitica серологического варианта 09 // Актуальные вопр. иммунодиагностики ООН: Тез. докл. Всесоюз.науч.-практ. конф..-Ставрополь, 1986,- 4.2. - С. ЮЗ-106.

60. Шошиев Л.Н., Гурлева Г.Г., Григорьян Э.Г. Клиника и эпидемиология заболеваний у человека, вызванных Yersinia enteroco/itica//Сов. медицина. - 1977.-N5.-С.М9-121.

Авторски« свидетельства

61. Гурлева Г.Г., Смолйкова Л .М., Невенчанная Л.В. и ХалЯйина Е.Е. Штамм бактерий Yersinia enterocolitica серовара 038, используемый для получения диагностической агглютинирующей сыворотки. А.С. N 1552628. Заявка N 4461801. Приоритет изобретения

18.07.88. Зарсгнтгрировано в Государственном реестре изобретений СССР 22. П.89.

62. Гурлепа Г>Г.,Сшидако£а Л.М.,Невенчанная Л.В.,Санамянц

Е.М. - Штамм бактерий Yersinia enterocolitica 039 серовара,

используемый для получети диагностической агглютинирующей моноварной шпоротки. A.C. N 1473349. Заявка N 4297466. Приоритет изобретения 14.08.87. Зарегистрировано-»^дгй^иявед»«»?? растре ¡ио>*ретятяй СССР iSj? 8*.

63. Гурлева Г.Г., Невенчанная Л.В., Смолнкова Л.М., Хрртонопа Т.И. Штамм бактерий Yersinia enterocolitica 040' ¿ерорара, используемый для получена диагностической агглютинирующей моноварной сыворотки. A.C. N 1515683. Заявка N 43740Ю. Приоритет изобретения 2.02.83. Зарегистрировано в Государственном реестре тобретений СССР 15.06.89.

64. Гурлева Г.Г., Смоликова rt.M., Невенченная Л.В. Штамм бактерий Yersinia enterocolitica 037 серовара, используемый для получения диагностической агглютинирующей моноварной сыворотки. A.C. N 1789558. Заявка N 491 ЮН. Приоритет изобретения 18.02.91. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 22.09.92.

65. Гурлева. Г.Г., Невенчанная Л.В., Смоликова Л.М., Харитонова Т.Н. Штамм бактерий Yersinia kristensenii серовара 036, используемый для .получения диагностической агглютинирующей монетарной сыввротки- A.C. К 1805660. Заявка N 4887880. Прнор1Гтет изобретения . 18.02.91. Зарегистрировано в Государственном реестре тобретений СССР 9.10.92.

66. Андреева Г.С., Гурлева Г.Г. Штамм бактерий Yersinia kristensenii Ö42 серовара, используемый для получения диагностической агглютинирующей моноварной сьворотки. A.C. N 1612583. Заявка N 4709905. Приоритет изобретения 26.06.89

Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР 8.08.90.

Заключительные отчеты . о научно-исследовательских работах

67. Домарадский И.В., Гурлева Г.Г. - руководители (рук.). Серологическое типирование Pasteurella multocida и Yersinia enterocoiitica.- Ростов н/Д, 1973. - 47 С.

68. Гурлева Г.Г. (рук.). Серологическая типизация бактерий псевдотуберкулеза.-Ростов н/Д, 1976. - 44 С.

69. Гурлева Г.Г. (рук.). Серологическое типирование Yersinia enterocoiitica.- Ростов н/Д, 1979. - 54 С.

70. Гурлева Г.Г. (рук.). Изучение биологических свойств штаммов чумного микроба, выделенных в различные годы в разных очагах. Ростов н/Д, 1982. - 67 С.

71. Киселёва И.Е., Гурлева Г.Г. (рук.)« Разработка системы многоаспектного формализованного анализа для работы с коллекциями штаммов возбудителей особо опасных инфекций.- Ростов н/Д, 1984. - 22 С.

72. Гурлева Г.Г. (рук.). Изучение распространения серологических вариантов Yersinia enterocoiitica, выделенных на территории Советского Союза,- Ростов н/Д, 1985 - 79 С.

7j. Гурлевд Г .Г. (рук.). Совершенствование серологической идентификации нерсшша энтероколитика,- Ростов и/Д, 19ь8. - 25 С.

74. Гурлева Г.Г., Марченков В.И. (рук.). Таксономическое тучение представителей вида Yersinia etnterocolitica.- Ростов ч/% 1992. - 54 С.

Методические руководства н нормативно-техническая документация

75. Методические рекомендации по лабораторной диагностике кишечного иерсиниоза / Сост.: Тимофеева Л.Л., Гурлева Г.Г., Миронова Л.П. и др.. Утв. МЗ СССР. ГУКИ;- Иркутск, 1979.-31 С.

76. Методические рекомендации по изучению свойств и паспортизации культур чумного микроба /чСост.: Гуппр»» Г.Г., Халяпииа Е.Е.. О.Г. и ,1р.. !Лв. як? Госн>ык. н/Д ед011»ному«?<!Н1-та Милютиным В.Н.12.09.83.- Ростов и/Д, 1983.-32 С.

77. Организация работы с коллекционными культурами патогенных микроорганизмов. Хранение и выдача информации (на примере возбудителей особо опасных инфекций) : Метод, рекомендации / Сост. : Гурлева Г.Г., Киселёва И.Б. Санамянц Е.М., Адамов Л.Б. Утв. и.о. дцр. Ростовсх. и/Д противочум. нн-та Тнтечко М.Т: 7.09.85.- Ростов н/Д, 1985.-10 С.

78. Реакция непрямой нммунофлуоресценции при иерешшозах. Методические рекомендации / Сост.: Ценёва Г.Я., Гурлева Г.Г. Утв. МЗ СССР. ГУКИ.-Л., 1986,-14 С.

79. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза: Метод, руководство / Сост. Гурлева Г.Г.'Смолгаова Л.М., Грачёв Ю.Л., Мессорош В.Г. Утя. яир.Ростовск. и/Д противочум. ни-га Ломовым Ю.М. 8.12.93.- Ростов н/Д, 1993.- 44 С.

80.экспфнмснтально-производстве1во,!й регламент N 220-89. "ывороткн диагностически«* к Уегаша «иегосоНиса О-моновалентные :ухие для РА. "Согласовано" с директором Государственного ш-пнута стандартизации и контроля медицинских биологических ¡рспаратов им. Л.А, Тарасевнча Медуннцыным Н.В. 20.12.89. / Гост.: Гурлева Г.Г.. Смоликова Л.М., Халяпннд ЕЕ. и др..

Информация о работе

Гурлева, Галина Георгиевна
доктора медицинских наук
Саратов, 1995
ВАК 03.00.07

Автореферат

Похожие работы