Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения кафорсена при лечении животных с переломами, асептическими артритами и артрозами
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных
Автореферат диссертации по теме "Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения кафорсена при лечении животных с переломами, асептическими артритами и артрозами"
На правах рукописи
Якимчук Елена Александровна
КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ КАФОРСЕНА ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЖИВОТНЫХ С ПЕРЕЛОМАМИ, АСЕПТИЧЕСКИМИ АРТРИТАМИ И
АРТРОЗАМИ
06.02.01 - Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
1 о ЯНВ 2013 ""5048348
Саратов-2012
005048348
Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова»
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Анников Вячеслав Васильевич
Официальные оппоненты: доктор ветеринарный наук, доцент кафедры
анатомии, патологии и биологии животных ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» Домницкий Иван Юрьевич
доктор ветеринарных наук, доцент кафедры ветеринарной хирургии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» Шакирова Фаина Владимировна
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»
Защита состоится 25 января 2013 года в 9.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.01 при ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет» им. Н.И. Вавилова по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал. 9
Отзывы просим высылать по адресу: ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет» им. Н.И. Вавилова, 410012, г. Саратов, Театральная площадь, д. 1, ученому секретарю диссертационного совета Д 220.061.01; е-таі1:усІсіи5І@таіІ.ги.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова».
Автореферат разослан /$> . , 2012 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
С/
А.В. Егунова
Общая характеристика работы
Актуальность темы. Иммунная система первой реагирует на костную травму усиленной выработкой и экскретированием из депо резервов фагоцитирующих клеток (нейтрофилы, лимфоциты, NK-клетки) (Бабаева А.Г., Зотиков Е.М., 1987, Yoshida К., van den Berg ТК., Dijkstra C.D., 1993, Карелина Е.А., 2003). Т-лимфоциты (хелперы и супрессоры) обладают способностью не только распознавать «чужие» клетки, но и «свои» и несущих на своей поверхности SC-антиген (Донцова В.И., 1998г). Возможно, именно за счет этого лимфоциты вызывают пролиферацию фибробластов и выделяют лимфокины, специфичные для данной популяции клеток (Кассирский И.А., Алексеев Г.А., 1970, Петров Р.В., 1987, D. М. Formen, 1998, Ярилин A.A., 1999). Также известен факт коррекционного действия Т-лимфоцитов здорового организма на процесс остеопетроза (D. М. Formen, 1998). Помимо этого, фагирующие клетки несут на своей клеточной мембране рецептор к паратиреоидному гормону, который, как известно, активизирует деятельность остеокластов, не имеющих к нему собственных рецепторов (Horowitz M., Vignery A., Gershon R., Baron R., 1984r; Schneider G.B., Relbsom M., 1984r). Таким образом, клетки иммунной системы могут участвовать не только в резорбционных процессах костной ткани, но и консолидирующих (Ватников Ю.А., 2004г; Гессе И.Ю., 2008г). Между тем количество неудач при терапии травматологически и ортопедически больных животных остается существенным, что заставляет искать дополнительные пути решения данной задачи.
Еще одной актуальной проблемой в патологии мелких непродуктивных животных являются артриты и артрозы, часто регистрируемые в практике ветеринарного врача (Pickup J.C., Mattock М.В., Crook M.A., Chusney G.D., Burt D., Fitzgerald A.P., 1995, Шапошникова Ю.Г., 1997, Ширер Патрик, 2012). Генетическая детерминация, нарушение рациона кормления без достаточного моциона — основные причины, приводящие к развитию дисплазии и, как следствие, остеоартритов (Шапошников Ю.Г., 1997, Самошкин И.Б., Слесаренко H.A., 2008).
Существующие на сегодняшний день медикаментозные методы лечения при данных суставных патологиях имеют ряд негативных моментов: малая эффективность, побочное негативное влияние на органы пищеварения, мочеотделения, высокая стоимость, необходимость повторных курсов терапии и т.д. (Баскевич М.Я., 1989, Ширер Патрик, 2012).
Известны работы Карповой А.И. (2010, 2011), посвященные клинико-морфологическому обоснованию эффективности применения кафорсена при костной травме. Однако в них не дана оценка иммунологической перестройке, происходящей в организме при переломах. Исходя из этого нами были проведены клинико-иммуноглогические исследования у животных с переломами трубчатых костей, а также гематологические, биохимические и морфо-рентгенологические при моделировании асептических артритов и артрозов, дан анализ морфофункционального состояния клинически больных животных с данными патологиями для научно-обоснованного и объективного подхода для активизации иммуноиоэза травматологически больных животных и ранней нормализации обменных процессов в хряще при асептических артритах и артрозах.
Целью исследования явилось обоснование терапевтической эффективности применения кафорсена при переломах трубчатых костей, а также при лечении собак с артритами и артрозами асептического происхождения на основании клинико-рентгенологических, гематологических, биохимических,
иммунологических, цитологических и гистологических исследований.
В соответствии с целью были определены следующие задачи:
1. На основании динамики иммунологических показателей крови и цитологического исследования костного мозга оценить иммунопротективное влияние кафорсена при терапии животных с переломами трубчатых костей.
2. С учетом гистологических изменений дать заключение о влиянии кафорсена на центральные и периферические органы иммунопоэза.
3. Оценить динамику гематологических и биохимических показателей при терапии животных с асептическими артритами и артрозами.
4. При анализе гистологических изменений определить влияние кафорсена на процесс восстановления поврежденных тканей сустава.
5. Опираясь на изменения биохимических и цитологических показателей синовиальной жидкости обосновать терапевтическую эффективность кафорсена при лечении животных с асептическими артритами и артрозами.
6. На основании клинико-рентгенологических, гематологических, биохимических и цитологических исследований дать рекомендации по терапии и контролю лечения животных с асептическими артритами и артрозами.
Объект исследования. Предметом на первом этапе исследований послужили шестимесячные кролики породы «Белый венский» в количестве 10 голов, массой 3,5 - 4,0кг, подобранные по принципу аналогов и разделенные на две группы. Животные содержались в одинаковых условиях согласно рекомендациям по кормлению и содержанию лабораторных животных (ГОСТ РИСО 10993).
Во второй серии экспериментов моделировали артрит и артроз. Предметом исследования послужили шестимесячные кролики породы «Нидерландская красная», массой 3,5 - 4,0 кг, подобранные по принципу аналогов и разделенные на две группы: артрит (1-я группа) и артроз (2-я группа). Содержание животных аналогично таковому в первой части экспериментов. Артрит и артроз были смоделированы путем интраартикулярного введения дексаметазона в дозе 4 мг/кг.
Для клинической апробации разработанной схемы лечения асептических артритов и артрозов было подобрано 25 собак с диагнозом артрит и 35 — артроз различных пород и половозрастных групп. В качестве монопрепарата был использован кафорсен интраартикулярно в дозе собакам менее 5кг - 0,2-0,Змл; от 5 до 10кг- 0,3-0,5мл; от 10 до 25кг- 0,5-1,0мл; более 25кг- 1,0-1,5мл.
Научная новизна. Впервые:
доказано с помощью цитологических и иммунологических исследований позитивное влияние кафорсена на гемо- и иммунопоэз у травматологически больных животных;
^ выявлено с использованием гистологических исследований, что применение кафорсена при переломах трубчатых костей у животных не оказывает токсического воздействия на органы иммунной системы;
^ установлено на основании гематологических и биохимических исследований крови животных с асептическими артропатиями, что кафорсен способствует снижению воспалительных процессов в полости сустава;
✓ определено с помощью биохимических и цитологических исследований синовиальной жидкости животных с асептическими артритами и артрозами, что кафорсен обладает ярко выраженной противовоспалительной активностью;
■S разработан и внедрен в ветеринарную практику на основании рентгенологических, биохимических, цитологических исследований способ лечения больных животных с асептическими артритами и артрозами.
Теоретическая и практическая значимость работы. На основании комплексного подхода, включающего клинические, рентгенологические, гематологические, биохимические, цитологические и гистологические методы исследования, научно обоснована высокая терапевтическая эффективность кафорсена при терапии животных с асептическими артритами и артрозами.
Результаты проведенных исследований были использованы при разработке инструкции по применению кафорсена.
Материалы диссертационной работы используются в практической работе врачей гг. Саратова и Саратовской области, Энгельса, Волгограда, Казани, Москвы, а также в учебном процессе на кафедре морфологии, патологии и биологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова», кафедре терапии и клинической диагностики с рентгенологией ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины», кафедре морфология и физиологии ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В .Я. Горина».
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения» (Саратов, 2010-2011гг.); ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава СГАУ им. Н.И. Вавилова (Саратова, 2010-2011гг.); Международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного производства» (Курск, 2010); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы животноводства, ветеринарной медицины, переработки сельскохозяйственной продукции и товароведения» (Воронеж-Курск, 2010); Международной научно-практической конференции «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству» (Троицк, 2010); VII Всероссийской дистанционной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России» (п. Персиановский Ростовской обл., 2010); III Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века» (Ульяновск, 2010); I международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития научной мысли» (Одесса, 2010): VIII научно-практическая конференция «Пространство и время- система координат развития человечества» (Одесса, 2011); Международной научно-практической конференции «Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии» (Троицк, 2011); Международном научно-практическом симпозиуме «Ветеринарная медицина» (Саратов, 2011); V научно-практической конференции «Современные тенденции развития медицины, ветеринарии и фармакологии» (0десса,2011); Международном инновационной форуме (Ульяновск, 2011); конкурсе научных проектов молодых ученых ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ» «Инновационная наука — молодой взгляд в будущее» (Саратов, 2011); VII miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencjy «Aktualne
ргоЫету пошосгеэтсИ паик-2011» (Р1гетус1, 2011); Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений МСХ РФ по ПФО (Казань, 2012).
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 2 печатных работы, из них 5 в изданиях, рекомендованных ВАК, в том числе патент. Две статьи в международных изданиях. Общий объем работ составляет 5,0 печ.л., из них 3,0 печ.л. принадлежит лично автору. Основные положения, выносимые на защиту:
1. особенности иммунологических проявлений при терапии животных с переломами трубчатых костей;
2. терапевтическая эффективность кафорсена при асептических артритах;
3. терапевтическая эффективность кафорсена при артрозах.
Объем и структура диссертации. Рукопись диссертации состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Изложена на 166 страницах машинописного текста Приложения содержат сведения о проделанной работе. Иллюстрирована 31 рисунком, 11 таблицами, 4 диаграммами. Список литературы включает 195 источников, из них отечественных - 131, зарубежных - 64.
Материалы и методы исследований.
Работа выполнена в 2009 - 2012 годах на базе кафедры «Паразитология, эпизоотология и ВСЭ» и клинического стационара ФВМиБ ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им Н.И. Вавилова». Клиническую часть работы проводили на базе ВП ИП «Анников В.В.». Отдельные исследования проводили на кафедре «Терапия, акушерство и фармакология» и лаборатории лучевой диагностики Саратовского ГАУ, Саратовском НИИ травматологии и ортопедии.
1-я серия
Рис. 1. Схема опыта первой серии эксперимента.
Для постановки опыта под нейролептаналгезией был смоделирован флексионный перелом костей голени в средней трети диафиза по оригинальной методике и установлены аппараты внешней фиксации (В.В. Анников , 2006). В послеоперационный период всем животным проводили превентивную
антибиотиксггералию и санацию остеофиксаторов до момента демонтажа аппарата Животным опытной группы дополнительно вводили 1мл кафорсена внутримышечно в течение 10 дней.
2-я серия опытов
Кролики (п=10) _ * _
Вакцинация, обработка против эймерий
Методы исследования
з:
Клинический (п=510)
Биохимический (п=200)
Рентгенологический (п=160)
Клиническая апробация (п=60)
Гематологический (п=200)
Гистологический (п=200)
Цитологический (п=200)
Статистический
Рис. 2. Схема опыта первой и второй серии эксперимента.
Материалом для исследования послужили: кровь, рентгенограммы, красный костный мозг, синовиальная жидкость, селезенка, регионарные лимфатические узлы, эпиметафизарные части костей, образующих коленный сустав кроликов.
В своей работе мы использовали клинический, рентгенографический, цитологический, гематологический, иммунологический, биохимический, гистологический, статистический методы исследования.
Клинические исследования проводили по классическим методикам (Постников B.C., 1986). Рентгенологические исследования в экспериментальной части проводили на 3, 8, 12 и 42-е сутки в группе артрита и на 45, 52, 60 и 105-е- в группе артроза. Общий анализ крови проводили на полуавтоматическом анализаторе «Mindray ВС-2300», подсчет лейкограммы - по общепринятой методике (Быкова Н.Д., 2007). Биохимические исследования крови и синовиальной жидкости выполняли на аппарате «Biosystems BTS-350». Из иммунологических показателей исследовали клеточное и гуморальное звено иммунитета (Т- и В-лимфоциты и их субпопуляции в периферической крови) (Фролов В.М., 1991), функциональное состояние фагоцитоза и нейтрофилов (Смирнов А.П. и др., 1981). Гистологическое и цитологическое исследования проводили по методике Меркулова Г.А. (1969), Ленченко Е.М. (2009). Цитологический анализ мазков красного костного мозга и синовиальной жидкости проводили после их высушивания на воздухе. Окраску проводили набором «Лейкодив-200». Микроскопия проводили в иммерсионной системе на микроскопе Olympus М250. При этом просматривали весь мазок (степень увеличения 1500 раз). Статистическую обработку осуществляли с помощью программы Statistica 6 на компьютере Intel Celeron.
Результаты собственных исследований Динамика клинико-нммунологических показателей при инициированной
костной травме Клинические изменения при использовании кафорсена
У экспериментальных животных обеих групп в первые сутки после постановки аппарата внешней фиксации стержневого типа наблюдали реакцию, характерную для оперативного вмешательства. Она проявлялась отеком мягких тканей конечности, где установили аппарат, их болезненность при пальпации, повышенной местной температурой, гиперемией кожи, незначительным количеством экссудата в месте введения остеофиксатора в мягкие ткани.
У животных опытной группы к пятым суткам эксперимента нами было выявлено отсутствие симптомов воспаления мягких тканей. Одновременно с этим у животных контрольной группы визуально обнаруживали незначительную отечность, слабую гиперемию и небольшую экссудацию из-под осгеофиксаторов. Такая картина наблюдалась вплоть до десятых суток исследования.
Определение типа хромоты и степени вовлечения животными поврежденной конечности в стато-локомоторный акт было затруднительно из-за особенности биомеханики передвижения кроликов. Тем не менее, было заметно, что момент начала вовлечения конечности в акт передвижения пришелся на вторые сутки после операции у кроликов обеих групп. Однако движения были скованными, передвижение было осторожным. Полное восстановление опороспособности поврежденной конечности отмечали в опытной группе на пятые, а в контрольной — лишь на десятые сутки. Восстановление опороспособности поврежденной конечности и вовлечение ее в полноценный локомоторный акт в группе опыта наступило намного быстрее, чем в группе контроля (на пять суток).
Динамика иммунологических показателей экспериментально больных животных при использовании кафорсена
Перед началом эксперимента содержание таких иммунологических показателей, как Т- и В-лимфоциты у животных контрольной группы составили 5б,4±3,43 (2,03±0,12х10'/л) и 5,2±0,39% (0,19±0,03х109/л) соответственно (рис. 3 и 4). К 3-м суткам исследования количество Т-лимфоцитов снизилось в 1,52 раза по отношению к исходным данным. К 14-м суткам наблюдений динамика Т-лимфоцитов продолжала оставаться отрицательной, составив 33,7±2,21% в относительных и 1,21±0,09хЮ9/л в абсолютных величинах. К окончанию исследования (30-е сутки) абсолютное количество Т-лимфоцитов увеличилось по сравнению с показателем на 14-е сутки на 6,1%, однако по сравнению с исходным показателем оставалось низким (в 1,42 раза). Динамика клеток гуморального иммунитета у животных контрольной группы носила характер, аналогичный Т-лимфоцитам. На 3-й сутки их количество снизилось до 3,7% (в абсолютных величинах-до 0,13х107л). К 14-м суткам динамика оставалось тождественной для 3-х суток - снижение относительного и абсолютного количества В-лимфоцитов до 3,1% и 0,11х109/л соответственно. К окончанию эксперимента количественный показатель клеток гуморального иммунитета повысился до 0,12x10% в абсолютных показателях и 3,4% в относительных. Данное состояние свидетельствует о нормализации показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Также данные факты свидетельствуют не только об отсутствии токсического влияния кафорсена на иммунную систему, но и иммунопротекивном.
У животных опытной группы наблюдалась выраженная динамика снижения показателей как клеточного (с 64,1±3,35% на первые сутки исследования до 43,8±2,28% на 3-й сутки и до 36,3±2,55 % на 14-е сутки репаративного остеогенеза), так и гуморального (с 4,9% первоначально, до 2,9% на 3-й сутки и до 2,6% к 14-м суткам исследования) звеньев иммунитета. Абсолютные показатели за перечисленные сутки наблюдения также носили отрицательную динамику. К моменту демонтажа аппарата разность показателей Т-лимфоцитов между последними и исходными данными составила 23,4% в относительных и 0,94х109/л в абсолютных величинах или в 1,58 раза. Количество В-клеток к 3-м суткам снизилось в 1,7 раза, а к 14-м суткам исследования - в 1,9 раза по отношению к исходным показателям. Однако к моменту окончания эксперимента их количественный показатель увеличился, составив 3,4% или 0,14х 109/л. Это ниже аналогичных показателей, которые были определены до начала репаративного остеогенеза, в 1,4 раза.
Отрицательную динамику содержания Т-лимфоцитов в послеоперационный период вплоть до 14-х суток, на наш взгляд, можно объяснить иммунодепрессией, связанной с травмой. А именно, преобладанием процессов катаболизма над процессами анаболизма, нарушением микроциркуляции в месте травматизации. Длительность иммунодепрессии подтверждается нашими исследованиями. Даже на 30-е сутки относительное и абсолютное количество Т-лимфоцитов находилось на уровне 3-х суток послеоперационного периода.
2,50 2,00 1.50 -В 1,00 -1 0,50 -§ 0,00
у уV
0 Т-лимфоциты
а
□ В-лимфоциты
3
г* -И
0,5 о
ит-
лимфоцмты
а в.
лимфоциты
Рис. 3. Динамика Т- и В-лимфоцигтов кроликов контрольной группы при
Рис. 4. Динамика Т- и В-лимфоцитов кроликов опытной группы при
инициированной костной травме (х105/л) инициированной костной травме (х109/л)
0,8 -0,6 0,4 0,2 -
ж
ОйШ.
14 сутки
гШІ
□ Т-киллеры, контроль Гл Т-хелперы, контроль 2е Т-киллер, опыт ЙЇ Т-хелперы, опыт
Рис. 5. Динамика содержания фракций Т-лимфоцитов в крови кроликов при инициированной костной травме (*10'/л)
Также нами была проанализирована динамика субпопуляций Т-лимфоцитов кроликов обеих групп. У животных контрольной группы на момент начала
проведения исследования
гч9
уровень Т-киллеров находился на отметке 0,51±0,01х Ю7л, Т-хелперов - 0,53±0,01х109/л (рис. 5). В последующем наблюдалось их снижение: Т-киллеров до 0,36±0,02* 109/л, Т-хелперов до 0,24±0,02хЮ9/л, в 1,42 и 2,21 раза соответственно. Затем данные показатели практически выровнялись с исходными, составив, соответственно, 0,47±0,01х 109/л и 0,50±0,01 х 109/л. К окончанию исследования количество Т-киллеров находилось на уровне 0,50±0,01*109/л, а Т-хелперов - 0,61±0,01х109/л. При анализе динамики субпопуляций Т-лимфоцитов у животных опытной группы отмечали следующее. Их уровень до оперативного вмешательства составил - Т-киллеров 0,58±0,01х109/л (Р<0,001), Т-хелперов - 0,55±0,01хЮ9/л. В дальнейшем произошло резкое снижение популяции CD44 до 0,29±0,01 х 109/л (Р<0,005), что соответствует падению в 1,9 раза. При этом снижение клеток CD8+ происходила более плавно, составив на 3-й сутки 0,42±0,01хЮ9/л (в 1,4 раза, Р<0,001). К 14-м суткам исследования уровень Т-киллеров составил 0,52±0,01хЮ9/л (Р<0,001), Т-хелперов-0,56±0,01х109/л. Числовой показатель последних превышал исходные данные на 0,01хЮ9/л. К моменту демонтажа аппарата популяция CD4+ составила 0,70±0,01х109/л (Р<0,001), a CD8+ - 0,61±0,01х109Лг (Р<0,001). Оба показателя превысили исходные данные на 0,15 х 109/л и 0,03 х 109/л.
Снижение содержания в периферической крови супрессоров у животных обеих групп в первые сутки исследования говорит о наличии воспалительных явлений и начале репаративных процессов в месте формирования костной ткани. Последующее усиление индукции киллеров и в большей степени супрессоров свидетельствует о нормализации процессов регенерации через регуляторную функцию клеточного звена иммунитета. Это также подтверждается физиологически нормальным состоянием животных и отсутствием воспалительных явлений вплоть до окончания исследования.
- фагоцитарная активность, % (контроль)
-бактерицидная активность, % (контроль)
- НСТ-тест, ед (контроль)
- фагоцитарная активность, % (опыт)
- бактерицидная активность. % (опыт)
- НСТ-тест, ед (опыт)
Рис. 6. Динамика некоторых факторов естественной резистентности крови кроликов при инициированной костной травме
Из данных рис. 6 видно, что фагоцитарная активность у животных контрольной группы до начала репаративного остеогенеза составила 43,7±3,39%, в опытной группе - 45,7±1,75%. Спустя 3 суток после проведенной операции процент фагоцитировавших клеток снизился в обеих группах, в контрольной - в 1,3 раза, составив 33,4±2,31%. В опытной группе - в 1,2 раза (38,4±1,84%). К 14-м суткам тенденция к минимизации клеток-фагоцитов оставалась: в контрольной группе до 31,8±2,17%, в опытной- 37,2±1,32%. Необходимо заметить, что активней снижение шло в группе контрольных животных (в 1,4 раза против опытной группы - в 1,2 раза). К окончанию эксперимента данный показатель составил 37,2±2,7% и
\
41,5±1,36% в контроле и опыте соответственно. Разница между первоначальными и последними количественными данными в контрольной группе составила 6,5 %, в опытной - 4,2%. Это свидетельствует о том, что кафорсен не только не оказывает негативного влияния на функциональное состояние лейкоцитов периферической крови, но и в определенной степени стимулирует его.
Изначально показатель НСТ-теста в группе контроля составил 63,1±1,85 ед. Своего числового минимума данный показатель достиг к 14-м суткам - 51,4±1,78 ед. (на 11,7 ед. меньше первоначального показателя). К моменту демонтажа аппарата внешней фиксации количественный показатель НСТ-теста составил 57,4±1,8 ед. (положительная динамика 6,0 ед.). Проводя параллель между животными первой (контрольной) и второй (опытной) группы по данному показателю, можно констатировать, что его посттравматическое снижение происходило менее резко. При этом разница между максимальным и минимальным значениями НСТ-теста составила 9,5 ед.
Бактерицидная активность первоначально была на одном уровне у животных контрольной (57,3±2,59%) и опытной группы (59,4±2,47%). Последующее снижение наиболее резко происходило в группе контроля - на 18,8 % против 17% в опытной группе. К 14-м суткам в контроле продолжалось снижение до 37,2±2,35%, в группе опыта, наоборот, повышение до 43,7±2,17%. Разница между показателями в эти сутки составляет 6,5%. К завершению исследования количественные показатели обеих групп получили положительную динамику: 49,7±2,38% в контрольной группе и 55,9±2,95% в опытной. Разность между первоначальными и заключительными анализами составила 7,6% и 3,5 у животных в контроле и опыте соответственно.
Снижение показателей неспецифической резистентности организма кроликов обеих групп в первые сутки после остеосинтеза говорит об угнетении клеточного звена иммунной системы. В данный период наиболее вероятно развитие воспалительных процессов. Однако к 14-м суткам бактерицидная активность показала положительную динамику, ознаменовав адаптацию иммунокомпетентных клеток животных к травме. Дальнейшие исследования показали, что в группе опыта восстановление неспецифической резистентности происходило намного активнее, чем в группе контроля. Данный факт косвенно может свидетельствовать об отсутствии воспалительных процессов в месте перелома в частности и репарации системы иммунитета в целом. Цитологическая характеристика красного костного мозга травматологически
больных животных
Согласно данным таблицы 1, к 30-м суткам эксперимента в первой группе среднее количество миелобластов находилось на уровне 1,3±0,3%; во второй же группе 0,8±0,3%. Уровень миелоцитов и метамиелоцитов животных первой группы существенно превышал аналогичные показатели у животных второй группы: 11,5±0,9%; 13,0±1,1% против 7,5±0,3%; 10,8±0,5% соответственно. При этом среднее количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов (ПЯП и СЯП) в первой группе составило 11,0±1,2% и 18,8±0,9% соответственно. Во второй же группе эти показатели были на уровне 12,3±0,9% и 21,5±1,7%. Это свидетельствует о том, что у животных первой группы наблюдалось расширение белого ростка крови на уровне миелобластов, миелоцитов и метамиелоцитов. У животных же второй группы расширение белого ростка происходило за счет ПЯП и СЯП. Увеличение количества последних говорит о функциональном угнетении
костного мозга. Уровень эозинофилов и моноцитов отличался незначительно как у животных первой (1,3±0,3% и 2,3±0,3% соответственно), так и у животных второй группы (1,8±0,5% и 2,5±0,3% соответственно). Среднее количество лимфоцитов у животных обеих групп составило 16,0±2,2% и 16,0±0,7% соответственно.
Таблица 1 - Показатели красного костного мозга кроликов (п=10, М±т)
Показатели (%) Первая группа (п=5) Вторая группа (п=5)
Миелобласгы 1,3±0,3 0,8±0,3
Миелоциты 11,5±0,9 7,5±0,3
Метамиелоциты 13,0±1,2 10,8±0,5
Палочкоядерные псевдоэзинофшш (ПЯП) 11,0±1,2 12,3±0,9
Сегментоядерные псевдоэозинофилы (СЯП) 18,8±0,9 21,5±1,7
Эозинофилы 1,3±0,3 1,8±0,5
Моноциты 2,3±0,3 2,5±0,3
Лимфоциты 16,0±2,2 16,0±0,7
Эритробласгы 0,8±0,3 1,5±0,3
Нормо-циты Базофильные 3,8±0,3 4,3±0,5
Полихромагофильные 16,0±1,0 14,51-0,7
Оксифильные 3,5±0,3 3,3±0,3
Индекс лейко/эритро (ИЛЭ) 1,5±0,1 1,4±0,1
Уровень эритробластов у животных первой группы к этому сроку составил 0,5±0,3%, а у животных второй - 1,8±0,3%. Возможно, это говорит об угнетении гемопоэза у животных обеих групп. Среднее количество базофильных (3,8±0,3% в первой и 4,3±0,5% во второй) и оксифильных (в опыте 3,5±0,3%; в контроле 3,3±0,3%) нормоцитов в обеих группах находилось примерно на одинаковых уровнях. Уровень полихроматофильных нормоцитов у животных первой группы составил 16,0±1,0%; во второй - 14,5±0,7%. Эти данные свидетельствуют о незначительном угнетении кроветворения, которое значительнее выражено у животных первой группы. С нашей точки зрения, это напрямую связано с травматической болезнью, характеризую степень ее проявления.
Соотношение клеток красной и белой крови костного мозга (ИЛЭ) говорит о наличии в организме животных либо воспаления (при расширении ростка белой крови на уровне ПЯП и СЯП), либо анемии (при расширении ростка красной крови). В первой группе данный индекс составил 1,5±0,1 и во второй группе 1,4±0,1. Это говорит о том, что у животных опытной группы к 30-м суткам эксперимента воспалительные процессы в области перелома существенно снизились, так как увеличение этого индекса связано с расширением белого ростка на уровне миелобластов, миелоцитов и метамиелоцитов, а не за счет ПЯП и СЯП.
Гистологические изменения в органах гемоиммунопоэза при использовании
кафорсеиа
При гистологическом исследовании лимфатических узлов травмированной конечности животных контрольной группы было обнаружено: отсутствие нарушения тинкториальных свойств ткани, компактно размещенное лимфоидное вещество, хорошо заметны герминативные центры, лимфатические фолликулы средних размеров, незначительный отек стромы органа, но выраженный в синусах, полнокровие, гиперплазия лимфоидного вещества. Значительное количество митотически активных лимфоцитов свидетельствует о присутствии признаков воспаления на данной конечности. При микроскопическом исследовании
лимфатических узлов противоположной конечности выявили сохранение структуры органа, компактное расположение лимфоцитов, лимфатические фолликулы средних размеров, в единичных фолликулах умеренная макрофагальная реакция, незначительный отек сгромы, умеренный отек паренхимы и синусов, гиперплазия лимфоидного вещества.
Микроскопический анализ гистосрезов лимфоузлов травмированной конечности животных опытной группы выявил тонкую фиброзную капсулу, не инфильтрованную окружающую жировую клетчатку, сохраненную гистокартину строения, хорошо выраженные лимфатические фолликулы с наличием в них герминативных центров, незначительный отек стромы органа. При исследовании лимфатических узлов с левой не травмированной конечности животных контрольной группы обнаружили тонкую фиброзную капсулу, сохраненную гистологическую картину строения органа (выраженность границ лимфатических фолликулов, присутствие герминативных центров), лимфоидные фолликулы средних и мелких размеров со светлыми центрами, незначительный отек синусов.
Гистологически селезенка животных контрольной группы выглядела следующим образом: фиброзная капсула местами утолщена, отмечалось компактное расположение лимфоидной ткани, красная пульпа умеренно кровенаполнена, отек стромы органа и сосудов, незначительное количество мелких лимфоидных фолликулов, лимфоидные элементы различной степени зрелости. У животных опытной группы фиброзная капсула тонкая, лимфоидные фолликулы средних размеров с нечеткими границами, красная пульпа кровенаполнена, лимфоидные элементы различной степени зрелости.
Гиперплазия лимфатических узлов, отек стромы и синусов органов у животных обеих групп говорит о вовлечении этих органов в ответную реакцию на костную травму. Незначительные различия в гистологической картине органов иммунной системы животных обеих групп указывает на отсутствие токсического влияния кафорсена на иммунокомпетентные органы.
Клинико-рентгенологическая характеристика инициированных асептических артритов и артрозов
Хромота, нежелание животного передвигаться проявились через трое суток после провокации артрита. В случае синовита обнаруживали припухлость самого сустава При пальпации места отмечали повышение температуры, ощущался отек мягких тканей. Амплитуда движений в конечности с пораженным суставом была ограничена. Однако уже к пятым суткам наблюдения хромота у животных отсутствовала, при передвижении локомоторный акт не был нарушен. При пальпации пораженных суставов отек мягких тканей и местная температура отсутствовали, амплитуда движений практически полностью восстановилась.
Клиническая картина проявления артроза была разнообразна и сложна. Признаки патологии сустава появились к 45-м суткам с момента моделирования. К этому времени развилась хромата опирающего типа, при пассивных движениях прослушивалась крепитация, амплитуда движений была ограничена. Признаков синовита выявлено не было. К восьмым суткам терапии хромота не наблюдалась, однако, пассивные движения в пораженном суставе все еще были ограниченными, крепитация прослушивалась. К моменту окончания терапии (60-е сутки исследования) локомоторный акт всех животных был физиологически правильным, крепитация отсутствовала, пассивные движения не ограничивались и не вызывали
беспокойства у животных. В отдаленный период наблюдений рецидивов болезни выявлено не было.
Рентгенологически на третьи сутки эксперимента в группе животных, которым был смоделирован артрит, наблюдали начальные стадии остеопороза, неровность поверхностей суставных контуров. На седьмые сутки рентгенографические признаки артрита носили ярко выраженный характер: прогрессирующий остео пороз, деструкция суставного хряща, неравномерное сужение суставной щели, переостальная реакция. На рентгенограммах, выполненных на 12-е сутки исследования (после проведенного лечения) переостальная реакция была минимальной, наблюдался незначительный остеопороз. Поверхность суставов была ровной. Данные факты свидетельствуют о нормализации обменных процессов в фибробластах и активной регенерации хондроцитов. На рентгенограммах, сделанных в отдаленный период наблюдений (45-е сутки эксперимента), переостальная реакция и остеопороз отсутствовали, хрящевая поверхность образующих сустав костей была ровной, деструкция хряща не выявлена.
На 45-е сутки эксперимента в группе артроза на рентгенограммах выявляли шероховатость суставной поверхности, неравномерность сужения полости сустава, остеосклероз хряща, остеофиты. К 52-м суткам исследования неровность суставной поверхности была незначительной, размер остеофитов и процент остеосклероза снизились. К окончанию лечебных мероприятий (60-е сутки эксперимента) обнаруживали присутствие минимального количества суставных мышей, контуры хряща были ровными с незначительными неровностями. Остеосклероз отсутствовал.
Гематологические и биохимические изменения в крови животных, больных асептическими артритами
200 -щи, 180 -160 -140 -120 -100 80 60 40 20
шш
£3 Гемоглобин, г/л
Ш Гематокрит,
%
□ Щелочная фосфатаза.
и/ь
0 Аспириновый тест, оптич ед.
ИД - исходные данные. Рис. 7. Динамика некоторых показателей крови кроликов при артрите
ИД - исходные данные. Рис. 8. Динамика СРБ и сиаловых кислот крови кроликов при артрите
Анализируя показатели крови экспериментальных животных с инициированным артритом, установили следующую взаимосвязь. До начала исследования количественный показатель гемоглобина составил 107±3,84 г/л, гематокрита - 30,9±1,54% (рис. 7). Перечисленные показатели находились в рамках референтных величин. Уровень С-реактивного белка (рис. 8) составил 1,03±0,15 мг/л. Неспецифические показатели воспаления не превышали верхнюю границу физиологической нормы. Щелочная фосфатаза составила 63,53±8,11 и/Ь, сиаловые
НС-реактивный белок, мг/л
■ Сиаловые кислоты, Оіггкч.ед
кислоты - 1,07±0,19 оптических единиц. Показатель аспиринового теста - 17,9±1,36 оптических единиц. На 3-й сутки исследования (момент проявления клинических признаков асептического артрита) уровень гемоглобина снизился до отметки 73,67±2,03 г/л, гематокрита - 2б,57±1,64%. Неспецифический фактор резистентности (С-реактивный белок) вырос, ознаменовав наличие воспалительных процессов (4,3±0,3 мг/л). Уровень сиаповых кислот, щелочной фосфатазы и показатель аспиринового теста повысились в 3,0 (3,2±0,26 оптич. единиц), 2,7 (172,27±20,88 и/Ь) и 1,9 раза (33,4±б,74 оптические единицы) соответственно. Данный факт свидетельствует в пользу наличия ярко выраженных воспалительных явлений.
К середине лечения количественный показатель таких показателей красной крови, как гемоглобин и гематокрит вырос на 14,33 г/л и 3,06% соответственно. Биохимический анализ крови в середине лечения показал снижение количества С-реактивного белка в 4 раза, как одного из маркеров воспалительных процессов, (до 1,1±0,09 мг/л), щелочной фосфатазы в 1,7 раза (79,6±20,69 и/Ь), сиаловых кислот в 2,8 раз (1,14±0,04 оптич. единиц), аспиринового теста в 1,6 раза (21,5±2,19 оптич. единиц).
К моменту окончания лечения показатели СОЭ и эритроцитов снизились до 1,67±0,67 мм/ч и 4,59±0,24*106/мм3 соответственно. Количество гематокрита и гемоглобина увеличилось до 31,5±1,53% и98±4,51 г/л соответственно. Маркеры воспаления (СРБ и аспириновый тест) показывали незначительную отрицательную динамику - 0,94±0,06 мг/л и 18,3±1,03 оптических единиц соответственно. Количественный показатель сиаловых кислот также претерпел незначительное снижение - до 0,9±0,2! оптических единиц.
При заключительном исследовании крови показатели приблизились к первоначальным значениям. Количество С-реактивного белка было незначительным (1,08±0,03 мг/л). Количественные показатели сиаловых кислот и аспиринового теста продолжали снижаться - до 0,73±0,15 и 15,1± 1,36 оптических единиц соответственно. Количество щелочной фосфатазы составило 43,13±5,69 и/Ь, глюкозы - 8,59±1,89 ммоль/л.
Нормализация содержания С-реактивного белка, сиаловых кислот и аспиринового теста к исходным количественным значениям свидетельствует об отсутствии воспалительных явлений в суставной полости коленного сустава, подверженного моделированию. Восстановление уровня гематокрита говорит об отсутствии токсичного влияния на уровне периферической крови.
Гематологические и биохимические изменения в крови животных, больных
артрозами
На момент начала исследования гематологические показатели выглядели следующим образом. Количество эритроцитов составило 5,78±1,35х106/'мм3, С-реактивный белок выявлен не был, уровень сиаловых кислот составил 0,11 ±0,02 оптических единиц, щелочной фосфатазы - 65,43±1,11 и/Ь (рис. 9, 10). К 45-м суткам проявились клинические признаки артроза, поэтому на данном этапе было произведено взятие крови. При анализе отмечалась полученных данных положительная динамика содержания эритроцитов - в 2,2 раза. При исследовании биохимических показателей очевидно было появление в крови С-реактивного белка — 0,17±0,03 мг/л, однако он находился в рамках физиологических величин (рис. 10). Количество сиаловых кислот увеличилось почти в 3 раза (до 0,32±0,03 оптических единиц), щелочной фосфатазы в 2,1 раза (136,6±1,11 и/Ь).
И Щелочная фосфатаза
.иЛ
ШЭритроциты
Ш СРБ, мг/л
□ Сиаловые кислоты, оптич. ед.
ИД 45 суши 52 сутки 60 сутки 105 сутки
ИД 45 52 60 105 сутки сутки сутки сутки
Рис. 9. Динамика некоторых показателей крови кроликов при артрозе
Рис. 10. Динамика щелочной фосфатазы крови кроликов при артрозе
кафорсеном
произошло снижение таких как эритроциты (11,36±0,44х10б/мм3). Количество
В середине курса лечения гематологических показателей, С-реактивного белка осталось на уровне 0,43±0,07 мг/л. Что также соответствовало физиологической норме. Количество сиаловых кислот снизилось до 0,17±0,02 оптических единиц, щелочной фосфатазы - до 128,33±9,51 (снижение на 8,27 1)/Ь).
К моменту окончания лечения (60 сутки эксперимента) количество эритроцитов снизилось (З,48±0,52х10б/мм3). Из биохимических показателей положительную динамику носили сиаловые кислоты - 0,21±0,02 оптические единицы. Произошло снижение С-реактивного белка до 0,23±0,03 оптических единиц и щелочной фосфатазы - 90,б7±7,89и/Ь.
. В отдаленный период наблюдений (105-е сутки опыта) наблюдалось увеличение количества эритроцитов на 2,69±х 106/мм3 (6,17±0,35ХЮ/мм), лейкоцитов на 2,62*106/мм3 (7,51±0,33><103/мм3). К первоначальному значению стремились количественные показатели сиаловых кислот (0,10±0,02 оптических единицы) и щелочной фосфатазы (79,63±8,34 11/Ъ). Уровень СРБ оставались в пределах физиологических величин (0,2±0,06 мг/л).
Отсутствие значительных изменений в показателях красной крови кроликов, нормализация уровня С-реактивного белка, щелочной фосфатазы, сиаловых кислот говорит об отсутствии воспалительных и дегенеративных процессов в полости сустава
Физические и биохимические показатели синовиальной жидкости при артритах и артрозах
ИД 3 сутки 8 сутки
21 сутки
42 сутки
□ Уроновые кислоты, ммоль/л
□ Глюкоза, ммоль/п
21 42 сутки сутки сутки
Рис. 11. Динамика некоторых показателей кроликов при артрите
Рис. 12. Динамика ЛДГ крови кроликов крови при артрите
До начала эксперимента объем синовиальной жидкости составил 0,2±0,03 мл (рис. 11). Количество уроновых кислот - 1,4±0,15 ммоль/л, глюкозы — 4,7±0,2 ммоль/л, ЛДГ - 136,5±4,03 и/Ь (рис.12). К моменту проявления клинических признаков артрита объем синовиального выпота составил 0,8±0,06 мл, количественный уровень уроновых кислот - 12,37±0,38 ммоль/л, содержание глюкозы снизилось до 1,9±0,15 ммоль/л. Повышение первого свидетельствует о разрушении протеогликанов, второго - о наличии провоспалительных белков. Уровень ЛДГ синовиальной жидкости прямо пропорционален содержанию в ней С-реактивного белка. Это свидетельствует о его наличии в суставе, а, следовательно, и о воспалении. Количество лактатдегидрогеназы повысилось до 372,8±13,57 и/Ь. В середине курса лечебных мероприятий объем синовиальной жидкости снизился до 0,5±0,04 мл. Показатель глюкозы повысился до 3,1 ±0,17 ммоль/л, количество уроновых кислот и ЛДГ снизилось до 9,85±0,18 ммоль/л и 266,3±0,1 и/Ь соответственно. После проведенного лечения объем синовиальной жидкости составил 0,3±0,04 мл, количество уроновых кислот снизилось до 2,13±0,14 ммоль/л, лактатдегидрогеназа - до 142,1±3,85 и/Ь. Следует обратить внимание, что содержание глюкозы повысилось до 4,2±0,14 ммоль/л. Через 30 суток после проведенного курса лечения цвет, вязкость и прозрачность синовиального выпота не изменились по сравнению с аналогичными показателями на 21-е сутки опыта. Количество жидкости изменилось незначительно - 0,2±0,04 мл. Уровень уроновых кислот сравнялся с исходными, составив 1,36±0,11 ммоль/л. Показатель глюкозы был ниже исходного значения, но выше, чем на 12-е сугки опыта - 4,4±0,09 ммоль/л, ЛДГ - 135,8±4,55 и/Ь.
Анализ показателей синовиальной жидкости экспериментальных животных свидетельствует о наличии воспалительных процессов в полости сустава. Нормализация же физических и биохимических показателей жидкости даже в отдаленный период наблюдений говорит о высоком противовоспалительном влиянии кафорсена.
а
ид 43 сутки
52 сутки
60 сути
105 сутки
□ уроновые кислоты, ммоль/л
□ глюкоза, ммоль/л
160 -Г:
140 120 100 80
20 48 0
| В ЛДГ, ЦД |
45 52 60 ЗОВ сутки сутки сутки сутки
Рис. 13.Динамика показателей синовиальной жидкости кроликов при артрозе
Рис. 14.Динамика ЛДГ в синовиальной жидкости кроликов при артрозе
На момент начала исследования синовиальный выпот кроликов при смоделированном артрозе составил 0,2±0,03 мл, (рис.13). Количество уроновых кислот - 1,37±0,04 ммоль/л, глюкозы - 4,63±0,15 ммоль/л, щелочной фосфатазы -61,3±0,03 и/Ь (рис.14). К 45-м суткам опыта (время проявления клинических признаков артроза) количество суставной жидкости составило 0,3±0,06 мл. Концентрация уроновых кислот возросла до 2,24±0,05 ммоль/л, глюкозы снизилась до 3,2 ммоль/л. Данные факты свидетельствуют о незначительных воспалительных
процессах в полости сустава и разрушении внутрисуставных протеогликанов. Уровень щелочной фосфатазы возрос до 148,3*3,39 U/L, что говорит о разрушении хряща и субхондральной пластины. К середине терапевтических манипуляций объем жидкости незначительно возрос до 0,5±0,06 мл. Количество щелочной фосфатазы и уроновых кислот снизилось до 92,5±2,12 U/L и 1,58±0,05 ммоль/л. Данный факт свидетельствует о замедлении разрушения новых и восстановлении поврежденных хондроцитов. Уровень глюкозы составил 3,88±0,14 ммоль/л, что говорит о снижении активированных воспалительных процессов в полости сустава. К 60-м суткам опыта объем синовиального выпота составил 0,33±0,02 мл. Среди показателей уроновых кислот и щелочной фосфатазы продолжала прослеживаться отрицательная динамика - 1,28±0,05 ммоль/л и 67,63±2,29 U/L. Количество же глюкозы продолжало расти, составив 4,43±0,11 ммоль/л. К 105-м суткам объем изменился незначительно (0,23±0,02 мл). Небольшими отклонениями от исходных значений характеризовалось количество показателей уроновых кислот (1,33±0,05 ммоль/л), глюкозы (4,68±0,05 ммоль/л) и щелочной фосфатазы (60,28±1,96 U/L).
Таким образом, анализ показателей суставной жидкости в полной мере дает возможность судить о том, что как при воспалительных, так и при дегенеративных явлениях в суставе кафорсен дает стойкий терапевтический эффект, который сохраняется даже в отдаленный период исследований (артрит -42, артроз - 105-е сутки).
Цитологическая характеристика синовиальной жидкости в процессе лечения животных с артритами и артрозами
Одним из наиболее значимых показателей суставной жидкости является цитоз. На момент начала исследований уровень клеток составил в группе артрита 0,52±0,04*109/л. Рагоциты (нейтрофилы со специфическими включениями в цитоплазме) в мазке не выявлялись. К 3-м суткам опыта количество клеток достоверно увеличилось, составив 7,51±0,11х10'/л. Следует отметить также появление рагоцитов в синовиальной жидкости (21,6±0,76%). К середине проводимых лечебных манипуляций количество клеточного пула пораженного сустава составило 2,66±0,1 * 109/л. Число рагоцитов снизилось до 2,3±0,17%. Данный факт, по нашему мнению, свидетельствует о снижении воспалительных процессов непосредственно в полости сустава и нормализации его гомеостаза. По окончанию лечебных процедур цитоз снизился до отметки 0,83±0,04х10/л. Рагоциты выявлены не были. В отдаленный период наблюдений (42-е сутки опыта) клеточный пул суставного выпота составил 0,47±0,03* 109/л. Рагоциты отсутствовали. Данная динамика, возможно, говорит в пользу противовоспалительного эффекта кафорсена, который сохраняется даже в отдаленный период наблюдений.
В группе артроза исходное значение клеток синовиальной жидкости составило 0,62±0,03*Ю9/л. В отличие от воспалительного процесса, при деструкции хряща рагоциты не выявляются. Поэтому целесообразней было проследить динамику нейтрофилов. Изначально они в мазке отсутствовали. К 45-м суткам исследования - время проявления клинических признаков артроза - цитоз достоверно увеличился, составив 0,81±0,02><109/л. Также в мазке появились нейтрофилы — 17,23±0,19%. Данные факты свидетельствуют о появлении незначительного воспаления и возрастании дегенеративных изменений со стороны хрящевой ткани. К 52-м суткам количество клеток суставной жидкости составило 0,74±0,01 хЮ9/л. Уровень нейтрофилов также снизился, составив 2,6±0,14%.
Отрицательная динамика цитоза и клеток воспалительного характера свидетельствует, вероятно, о подавлении воспалительных процессов в полости сустава и частичной задержке дегенерации хондроцитов. К моменту окончания курса терапии кафорсеном численность клеток достигла исходного уровня — 0,6±0,02* 10%. Лейкоциты выявлены не были. Через 45 суток после проведенного курса лечения анализ синовиальной жидкости показал, что цитоз продолжал оставаться на одинаковом уровне по сравнению с исходным значением (0,63±0,02х109/л). Клеток воспалительного характера выявлено не было.
Таким образом, анализ цитологических показателей синовиальной жидкости показал высокую терапевтическую эффективность применения кафорсена как при асептических артритах, так и при артрозах, о чем могут свидетельствовать полное отсутствие рагоцитов и снижение цитоза у животных группа артрита, а также нейтрофилов и цитоза в группе артроза.
Гистологические изменения в хряще при арт ритах и артрозах При исследовании гистологических срезов хряща коленного сустава при артрите на 7-е сутки эксперимента (момент проявления клинических признаков) наблюдали кровоизлияния в субхондральной пластине, лимфоидную инфильтрацию желтого костного мозга, отек и незначительное разволокнение хрящевой ткани. Наблюдались зоны различной плотности, деструкция межклеточного матрикса. Данные процессы свидетельствуют о наличии воспалительного процесса в хряще коленного сустава. При гистологическом исследовании на 21-е сутки эксперимента (момент окончания терапии кафорсеном) обнаружили нарушение тинеториальных свойств ткани и гидропическую дистрофию отдельных групп хондроцитов, однако, просматривлись их изогенные группы и снижение лимфоидной инфильтрации субхондральной пластины. К окончанию эксперимента (42-е сутки) гистологическая картина выглядела следующим образом. Отмечалось правильное расположение хондроцитов и их изогенпых групп в зоне зрелого хряща Также наблюдалась правильная окраска матрикса, в зоне молодого хряща были заметны хондроциты, отек отсутствовал, лимфоидная инфильтрация костного мозга была минимальна
При гистологическом исследовании тканей сустава при артрозе на момент появления клинических признаков обнаружили отек матрикса, малодифференцированные группы хондроцитов, нарушение тинкториальных свойств околоклеточного пространства хондроцитов, незначительная лимфоидная реакция костного мозга, поверхностная пластина местами была деформирована вплоть до полного оголения субхондральной кости. Выявлялась структурная гетерогенность клеток хрящевой ткани. К середине терапевтических мероприятий (52-е сутки эксперимента) гистологическая картина представляла собой деформацию и отек хрящевой ткани, большая часть изогенных групп хондроцитов находились в состоянии гидропической дистрофии, в зное зрелого хряща наблюдались группы малодифференцированных клеток хрящевой ткани. По окончании курса лечения микроскопическая картина хрящевой ткани выглядела следующим образом: сохраняющаяся гидропическия дистрофия, однако уже меньшего количества групп хондроцитов, минимальная лимфоидная реакция со стороны костномозгового канала, поверхностная пластина сустава имела незначительные дефекты. В отдаленный период исследования (105-е сутки эксперимента) изогенные группы были хорошо выражены, однако их количество не достаточно. Все слои имел четкую дифференциацию.
Отсутствие воспалительных клеточных элементов и отек хрящевой ткани у кроликов с артритом свидетельствуют о явно выраженном противовоспалительном влиянии кафорсена. Наличие минимальных изменений в хрящевой ткани, восстановление целостности поверхности хряща коленного сустава свидетельствуют о хондропротективном влиянии кафорсена.
Результаты лечения клинически больных артритами животных
Заключительным этапом исследований явилась клиническая апробация предлагаемого способа лечения больных асептическими артритами и артрозами. Работа была проведена на собаках в возрасте от 1 года до 7 лет от 10 до 50 кг разной породной и половой принадлежности. В качестве монопрепарата был назначен кафорсен интраартикулярно один раз в трое суток в следующих дозировках: собаки менее 5кг— 0,2-0,Змл; от 5 до 10кг- 0,3-0,5мл; от 10 до 25кг-0,5-1,0мл; более 25кг- 1,0-1,5мл. Курс лечения составлял 3-5 инъекций.
Всем животным проводили мониторинг гематологических показателей, анализ биохимических изменений в крови и синовиальной жидкости, цитологические исследования пунктата суставов (на момент обращения за ветеринарной помощью, на 6, 15, 30 и 180 сутки наблюдений). Рентгенографическое исследование проводили в указанные сроки.
При анализе показателей крови выявлено, что изначально был повышен уровень СОЭ, С-реактивного белка, сиаловых кислот, показателя аспиринового теста Синовиальная жидкость была мутной с низкой вязкостью желтого цвета. Содержала рагоциты, повышенное количество уроновых кислот и ЛДГ, цитоз был высоким. Количество глюкозы было низким. В дальнейшем наблюдали нормализацию показателей (к 15 суткам терапии кафорсеном) таких, как СОЭ, общее количество лейкоцитов, С-реактивного белка, щелочной фосфатазы, сиаловых кислот, аспиринового теста. При анализе показателей синовиальной жидкости на себя обратило внимание снижение ее объема, повышение вязкости, изменение цвета на светло-соломенный, прозрачный. Рагоциты отсутствовали, содержание уроновых кислот и ЛГД заметно снизилось, показатель глюкозы достиг максимального своего значения, но оставался в пределах физиологической нормы. Количество клеток также имело отрицательную динамику.
Исходя из вышеизложенного материала, можно сказать, что кафорсен способствует нормализации обменных процессов в полости сустава за счет блокады дегрануляции тучных клеток, снижения про- и воспалительных цитокинов, а также восстановлению реологических свойств синовиальной жидкости.
Результаты лечения клинически больных артрозами животных
В нашей работе проведено лечение 35 собак с диагнозом артроз. Молодых животных было 6, 12 голов принадлежали зрелой группе животных, остальные - в возрасте старше 10-и лет, разной породной и половой принадлежности. В качестве монопрепарата был назначен кафорсен интраартикулярно один раз в трое суток в следующих дозировках: собаки менее 5кг - 0,2-0,Змл; от 5 до 10кг - 0,3-0,5мл; от 10 до 25кг - 0,5-1,0мл; более 25кг - 1,0-1,5мл. Курс лечения составлял 5-8 инъекций.
Всем животным проводили мониторинг гематологических показателей, анализ биохимических изменений в крови и синовиальной жидкости, цитологические исследования пунктата суставов (на момент обращения за ветеринарной помощью, на 12, 24, 60 и 180 сутки наблюдений).
В периферической крови больных артрозом собак обнаруживали снижение уровня сиаловых кислот и щелочной фосфатазы, что свидетельствует о замедлении процессов дегенерации хрящевой ткани даже в отдаленный период исследования. Незначительное повышение уровня С-реактивного белка и лейкоцитов на 12-е сутки терапии свидетельствует о присутствии незначительного воспаления -обострении артроза и переходе в остеоартрит. Дальнейшая нормализация гематологических и биохимических показателей свидетельствует о выраженном противовоспалительном и хондропротективном влиянии кафорсена. Повышение уровня цитоза, появление в синовиальной жидкости нейтрофилов, увеличение ее объема и понижение содержания глюкозы подтверждает данные гематологических изменений и свидетельствует о нарастании дегенерации. Специфический показатель разрушения хрящевой ткани (уроновые кислоты) свидетельствует о замедлении данного процесса на фоне применения кафорсена.
Выводы
1. Повышение фагоцитарного числа в опытной группе до 7,3±0Д5 ед., а в контрольной до 6,0±0,13ед. и фагоцитарного индекса в опытной группе до 20,7±0,17 ед., а в контрольной до 18,2±0,27 ед., незначительная разница между показателями Т- и В-лимфоцитов говорят об активации кафорсеном клеточном и гуморального звеньев иммунитета у животных с костной травмой.
2. Расширение белого ростка крови у животных опытной группы на уровне миелобластов (1,3±0,3%), миелоцитов (11,5±0,9%) и метамиелоцитов (13,0±1,2%) свидетельствует о существенном снижении воспалительных процессов в области перелома, а в контрольной расширение происходило на уровне ПЯП (12,3±0,9%) и СЯП (21,5±1,7%).
3. Наличие герминативных центров лимфоидных фолликулов лимфатических узлов, их крупные размеры, отсутствие гиперплазии, незначительный отек стромы и синусов, а также отсутствие незначительных различий в гистологической картине органов иммунной системы животных обеих групп (за исключением вышеперечисленных) говорит об отсутствии токсического влияния кафорсена на иммунокомпетентные органы.
4. Нормализация гематологических показателей животных с моделированными асептическими артритом и артрозом к моменту окончания лечения и в отдаленный период наблюдений свидетельствует об отсутствии токсического влияния кафорсена на эритропоэз на уровне периферической крови и снижение уровня С-реакгивного белка с 4,3±0,3 мг/л до 1,08±0,03 мг/л, щелочной фосфатазы со 172,27±20,88 Т_Г/Ь до 43,13±5,96 и/Ь, сиаловых кислот с 3,2±0,26 оптических единиц до 0,73±0,15 оптических единиц, показателей аспиринового теста с 33,4±1,89 оптических единиц до 15,1±1,36 оптических единиц в группе артрита свидетельствуют о противовоспалительном влиянии кафорсена
5. Снижение С-реактивного белка с 0,43±0,07 мг/л до 0,2±0,06 мг/л, сиаловых кислот с 0,32±0,03 оптических единиц до 0,1±0,02 оптических единиц, щелочной фосфатазы со 136,6±19,52 Ы/Ь до 65,43±1,11 и/Ь свидетельствуют о хондропротективном действии кафорсена при артрозах асептического происхождения.
6. Отсутствие к 42-м суткам после окончания применения кафорсена воспалительных клеточных элементов и отека хрящевой ткани у кроликов с артритом свидетельствуют и явно выраженной противовоспалительной эффективности кафорсена. Восстановление целостности поверхности коленного
сустава, отсутствие гидропической дистрофии хондроцитов и расположение их изогенными группами у кроликов группы артроза свидетельствуют о хондропротективном влиянии кафорсена.
7. Введение кафорсена способствует нормализации количества суставного экссудата, его цвета, прозрачности и вязкости и восстановлению биохимических показателей синовиальной жидкости (снижение уроновых кислот с 12,37±0,38 ммоль/л до 2,13±0,14 ммоль/л, лактатдегидрогеназы с 378,2±13,57 U/L до 142,1±3,85 U/L, исчезновение рагоцитов и повышение уровня глюкозы с 1,9±0,15 ммоль/л до 4,2±0,14 ммоль/л) при асептических артритах и артрозах.
8. Кафорсен при лечении животных с асептическими артритами и артрозами позволяет в короткие сроки нормализовать биохимические показатели крови, а также синовиальной жидкости спонтанно больных животных в среднем на 6 суток и дает стойкий терапевтический эффект в зависимости от стадии заболевания и состояния хряща и субхондральной пластины на момент обращения за ветеринарной помощью.
Практические предложения
1. При лечении пациентов с переломами трубчатых костей рекомендуется включать в комплексную постоперационную терапию кафорсен для коррекции посттравматической иммуносупрессии, начиная с первых суток в дозе 1 мл на 10 кг тела.
2. Для нормализации обменных процессов в полости сустава при артропатиях асептического характера рекомендуется использование кафорсена. Собакам менее 5кг - 0,2-0,Змл; от 5 до 10кг - 0,3-0,5мл; от 10 до 25кг - 0,5-1,0мл; более 25кг — 1,0-1,5мл. Курс терапии определяется в зависимости от тяжести патологического процесса (5-8 инъекций).
3. Гемобиохимический мониторинг больных артритами следует проводить по таким показателям, как СОЭ, количество лейкоцитов, С-реактивного и общего белка, щелочной фосфатазы, сиаловых кислот, аспиринового теста на 6, 15 и 30-е сутки, больных артрозами - сиаловые кислоты, щелочная фосфатаза на 12, 24 и 60-е сутки терапии.
Список работ, опубликованных по теме диссертации в изданиях, рекомендованных ВАК РФ
1. Якимчук, Е.А. Гематологические изменения и состояние красного костного мозга при форсированном репаративном остеогенезе //Е.А. Якимчук, В.В. Анников // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И.Вавилова — Саратов,2010. - №12. С.35-39. (0,3/0,16 п.л.)
2. Якимчук, Е.А. Клинико - гистологическая оценка состояния иммунокомпетентных органов при использовании кафорсена /Е.А. Якимчук, В.В. Анников, О.В. Матвеева, Е.В. Гладкова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2010. - №4 - С.Петербург. - С.172-175. (0,25/0,06 п.л.)
3. Якимчук, Е.А. Анализ гематологических и гистологических данных травматологически больных животных при использовании кафорсена /Е.А. Якимчук, В.В. Анников // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2011. - №4(31). - С. 114-117. (0,25/0,125 п.л.)
4. Якимчук, Е.А. К вопросу о лечении артропатий у собак / Е.А. Якимчук, В.В. Анников // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2011. - №4 - С.Петербург. - С.34-38. (0,3/0,16 п.л.)
5. Якимчук, Е.А. Динамика гистологических изменений в суставном хряще при терапии экспериментальных артритов и артрозов // Е.А. Якимчук, В.В. Анников // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2012. -№4/2. - С.Петербург. - С.105-108. (0,25/0,125 п.л.)
6. Способ лечения артритов и артрозов у животных [Текст]: пат. 2449802 Рос. Федерация: МПК А61К 36/00 (2006.01) / Анников В.В, Якимчук Е.А.; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ». - № 2011104748/15; заявл. 09.02.11; опубл. 10.05.2012, Бюл. № 13.
В других изданиях
7. Якимчук, Е.А. Предварительные результаты оценки состояния костного мозга при использовании кафорсена / Е.А. Якимчук, В.В. Анников // «Научное обеспечение агропромышленного производства»: матер. Международной научно-практической конференции, 20-22 января 2010г. - Курск, 2010. - ч.2. - С.86-88. (0,2/0,1 п.л.)
8. Якимчук, Е.А. Влияние кафорсена на органы гемоиммунопоэза при переломах трубчатых костей животных /Е.А. Якимчук, В.В. Анников // «Актуальные проблемы животноводства, ветеринарной медицины, переработки сельскохозяйственной продукции и товароведения»: матер, международной научно-практической конференции. - Воронеж - Курск, 2010. - С.187-188. (0,125/0,06 п.л.)
9. Якимчук, Е.А. К вопросу о состоянии костного мозга при использовании кафорсена у травматически больных животных / Е.А. Якимчук, Е.В. Гладкова, lVf.R. Федотова // «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», ИЦ «Наука», Саратов, 2010. - С.472-475. (0,25/0,08 п.л.)
10. Якимчук, Е.А. Клеточный состав костного мозга при форсированном остеогенезе / Е.А. Якимчук, В.В. Анников // «Актуальные вопросы гомеопатии. Место и возможности гомеопатического метода в практическом здравоохранении»: матер. XX научно-практической конференции 25-26 июня 2010г. - СПб, 2010. -С.75-76. (0,125/0,06 п.л.)
11. Якимчук, Е.А. Состояние гемоиммунопоэза костного мозга при форсированном остеогенезе /Е.А. Якимчук, В.В. Анников // «Труды Всероссийского совета молодых ученых и специалистов аграрных образовательных и научных учреждений»: матер. Международной научно-практической конференции «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству», 21-24 сентября 2010г. - Москва - Троицк, - Т.З. - С.139-142. (0,25/0,125 п.л.)
12. Якимчук, Е.А. Иммунологическая оценка эффективности кафорсена при переломах трубчатых костей / Е.А. Якимчук, В.В. Анников // матер. Седьмой Всероссийской дистанционной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России». - п. Персиановкий, 2010. - С.65-67. (0,2/0,1 п.л.)
13. Якимчук, Е.А. Оценка состояния органов иммунной системы при форсированном остеогенезе /Е.А. Якимчук, В.В. Анников // матер. III Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наукаXXI века», 23-26 ноября 2010г. -Ульяновск, 2010. - Т.1. -. С.171-173. (0,2/0,1 п.л.)
14. Якимчук, Е.А. Микроскопическая картина иммунотропных органов на фоне оптимизации репаративного остеогенеза / Е.А. Якимчук // матер, первой Международной научно-практической конференции «NOTA BENE. Современные тенденции развития научной мысли». - Одесса, 2010. - С. 22-24. (0,2 п.л.)
23
/
У
15. Якимчук, Е.А. Гистологические изменения в иммунотропных органах при форсированном остеогенезе / Е.А. Якимчук, В.В. Анников // «Вавиловские чтения 2010»: матер. Международной научно - практической конференции 25-26 ноября 2010. - Саратов, «Саратовский ГАУ», 2010. - С. 128-129. (0,125/0,06 п.л.)
16. Якимчук, Е.А. Наш подход к лечению артритов у животных /Е.А. Якимчук // матер. Первой международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития научной мысли»; сб. науч. работ. - Украина, Великобритания, заочно - интерактивная форма, 2010. (0,3 п.л.)
17. Якимчук, Е.А. Перспективы применения кафорсена при лечении больных артритом животных /Е.А. Якимчук, В.В. Анников // Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии 16 марта 201: матер. Международной научно-практической конференции. - Троицк: УГАВМ, 2011. - С.259-262. (0,25/0,125 п.л.)
18. Якимчук, Е.А. Синовиальная жидкость - зеркало состояния сустава / Е.А. Якимчук // «Ветеринарная медицина»: матер. Международного научно-практического симпозиума. - С.306-309. (0,25 п.л.)
19. Якимчук, Е.А. Анализ клинико-биохимических показателей животных при лечении кафорсеном /Е.А. Якимчук // «Ветеринарная медицина»: мат. Международного научно-практического симпозиума - Саратов: ИЦ «Наука», 2011. -С.309-313. (0,3 пл.)
20. Якимчук, Е.А. Альтернативный путь лечения артропатий у животных / Е.А. Якимчук // VIII научно-практическая конференция «Пространство и время -система координат развития человечества» с б няуч рябот — Укпяиня, Великобритания, заочно - интерактивная форма, 2010. (0,25 п.л.)
21. Якимчук, Е.А. Клинико-биохимическое обоснование необходимости применения кафорсена при лечении больных артритом животных / Е.А. Якимчук // матер. научно-практических конференций 2 специализированной агропромышленной выставки «САРАТОВ-АГРО. 2011» 1-3 ноября 2011. — Саратов: ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», 2011. - С. 72-74. (0,2 п.л.)
22. Якимчук, Е.А. Анализ гематологических и гистологических данных травматологически больных животных при использовании кафорсена / Е.А. Якимчук, В.В. Анников, И.В. Родионов, Ю.В. Пигарева // «Aktualne problemy nowoczesnich nauk-2011». Материалы VII международной научно-практической конференции. Volume 24. Geografía I geología, rolnictwo, weterynaria Pizemycl. Nauka i studia 2011. - C38-43. (0, 4/0,1 пл.)
23. Якимчук, Е.А. Обоснование целесообразности применения кафорсена при переломах длинных трубчатых костей животных // Е.А. Якимчук, В.В. Анников, И.В. Родионов // Strategiczne pytania swiatowej nauki-2012. Meterialy VIII miedzynarodovvej naukowi-praktycznej konferencji. Volume 27, Rolnictwo, weterynaria Nauka I studia, 2012,- C.60-63. (0,25/0,08 пл.)
Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Подписано в печать 17.12.2012 Гарнитура Times. Печать Riso. Усл. печ. л. 1,00. Тираж 100 экз. Заказ 0504
Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии
ИП «Экспресс тиражирование» 410005, Саратов, Пугачёвская, 161, офис 320 9 27-26-93
Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Якимчук, Елена Александровна
ВВЕДЕНИЕ.
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.И
1.1. Филогенез, морфофункциональная характеристика некоторых органов гемоиммунопоэза и их реакция на травму.
1.2. Классификация артритов и артрозов.
1.3. Клиническое проявление и диагностика артритов.
1.4. Клиническое проявление и диагностика артрозов.
1.5. Тактика лечения при асептических артритах и артрозах.
1.6. Терапевтическая эффективность применения кафорсена.
II. ПРЕДМЕТ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Структура опыта.
2.2. Методы исследования.
2.2.1. Клинический.
2.2.2. Еистологический.
2.2.3. Гематологический.
2.2.4. Биомеханический
2.2.4. Цитологический.
2.2.5. Иммунологический.
2.2.6. Рентгенографический.
2.2.7. Статистический.
III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Клинико-иммунологическая характеристика инициированной костной травмы на фоне применения кафорсена.
3.1.1. Клинические изменения при использовании кафорсена.
3.1.2. Динамика иммунологических показателей экспериментально больных животных при использовании кафорсена.
3.1.3. Цитологическая характеристика красного костного мозга травматологически больных животных.
3.1.4. Гистологические изменения в органах гемоиммунопоэза при использовании кафорсена.
3.2. Клинико-морфологическая характеристика инициированных асептических артритов и артрозов.
3.2.1. Клинико-рентгенологическая характеристика инициированных артритов и артрозов.
3.2.2. Гематологические и биохимические изменения в крови животных, больных асептическими артритами.
3.2.3. Гематологические и биохимические изменения в крови животных, больных артрозами.
3.2.4. Физические и биохимические показатели синовиальной жидкости при артритах и артрозах.
3.2.5. Цитологическая характеристика синовиальной жидкости в процессе лечения животных с артритами и артрозами.
3.2.6. Гистологические изменения в хряще при артритах и артрозах.
3.2.7.Результаты лечения клинически больных артритами животных
3.2.8. Результаты лечения клинически больных артрозами животных. 116 IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ
ИССЛЕДОВАНИЙ.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения кафорсена при лечении животных с переломами, асептическими артритами и артрозами"
Все чаще в ветеринарной медицине BCiaei вопрос оптимизации репаративного остеогенеза посредством малотоксичных, эффективных и доступных средств [4, 7, 8, 20, 31, 36, 48, 52, 56, 67, 71, 81, 93, 104, 105, 119, 128, 136, 179, 184].
Высокий уровень урбанизации не все1да являются i данными причинами ухудшения статистики травматизации домашних животных. Плохая экологическая обстановка, искусственно выведенные породы собак и кошек [11, 23, 57, 63, 97, 1 10, 138, 171], несовершенство рациона кормления [23, 194] зачастую являются пусковым механизмом патологических состояний. Неоспоримым является тот факт, что все процессы, протекающие в организме животных, контролируются различными системами [12, 14, 35, 41, 149, 153, 160, 164, 179]. Одной из них является иммунная система. Именно она первой реагирует на перелом усиленной выработкой и экскрет ированием из депо резервов фагоцитирующих клеток (нейтрофилы, лимфоциты, NK-клетки). Т-лимфоциты (хелперы и супрессоры) обладают способное 1ью не только распознавать «чужие» клетки, но и «свои» и несущих на своей поверхности SC-антиген (Донцов В.И.1998г). Возможно, именно за счет этого лимфоциты вызывают пролиферацию фибробласюв и выделяют лимфокины, специфичные для данной популяции клеток. Также известен факд коррекционного дейс1вия Т-лимфоцитов от здорового организма на процесс остеопетроза. Помимо этого, фагирующие клетки несут на своей клеточной мембране рецептор к паратиреоидному гормону, который, как известно, активизирует деятельность остеокластов, не имеющих к нему собственных рецепторов (Sakarya S, Ri fat S, Zhou J, et al, 2004). Таким образом, клетки иммунной системы могут участвовать не только в резорбционных процессах костной ткани, но и консолидирующих (Ватников 10.А., 2004г; Гессе И.Ю., 2008г).
Для стимуляции репаративных процессов предлагается целый ряд разнообразных средств: кальций- и фосфорсодержащие добавки («Поливит-кальций», «Кальциум Д», «СА-37» и др.), ос геопротек горы, мясокостная мука и рыбий жир, диетические рационы различных фирм («Royal Canin Mobiliti 4 support», Purina JM, «Hill's», «Eucanuba»). Также с этой целью используется достаточное количество иммуностимулирующих препаратов (миелопид, полиоксидоний, иммунофап, Т-активин и прочие). Однако количество неудач при терапии таких животных остается существенным, что заставляет искать новые пути решения данной задачи.
Еще одной актуальной проблемой современного животноводства являются артропатии - артриты и артрозы. Артриты наносят существенных экономический ущерб не только владельцам домашних, но и сельскохозяйственных животных. Обилие калорийной и белковой пищи без достаточного моциона, дисплазии - основные причины, приводящие к развитию данной патологии.
Следствием запущенного артрита может стать артроз. Они в силу особенностей клинического проявления и отдаленных последствий плохо поддаются терапевтическому лечению и могуч привести к раннему выводу животных из племенного дела и даже к эвтаназии. Чаще всего артрозом страдают собаки крупных пород с избыточным весом или имеющие предрасполагающие факторы (порода, нарушенный минеральный обмен, наличие у родительской пары дисплазии и прочее). Кошки страдают данным заболеванием реже, однако не менее тяжело [23, 164, 167, 171, 174].
Существующие на сегодняшний день медикаментозные методы лечения данных суставных патологий имеют ряд негативных моментов: малая эффективность, патологическое действие на систему пищеварения, дороговизна, необходимость повторных курсов терапии и прочие.
Комплексный гомеопатический препарат кафорсен, включающий сверхмалое количество минеральных компонентов, при назначении его травматологически больным животным сокращает срок консолидации костных отломков [106].
Цель исследования
Обосновать терапевтическую эффективность применения кафорсена при переломах трубчатых костей, а также при лечении собак с артритами и артрозами асептического происхождения на основании клинико-рентгенологических, гематологических, биохимических, иммунологических, цитологических и гистологических исследований.
Задачи исследования
• На основании динамики иммунологических показателей крови и цитологического исследования костного мозга оценить иммунопротективное влияние кафорсена при 'терапии животных с переломами трубчатых костей.
• С учетом гистологических изменений дать заключение о влиянии кафорсена на центральные и периферические органы иммунопоэза.
• Оценить динамику гематологических и биохимических показателей при терапии животных с артритами и артрозами.
• При анализе гистологических изменений определить влияние кафорсена на процесс восстановления поврежденных тканей сустава.
• Опираясь на изменения биохимических и цитологических показателей синовиальной жидкости обосновать терапевтическую эффективность кафорсена при лечении животных с асептическими артритами и артрозами.
• На основании клинико-рентгенологических, гематологических, биохимических и цитологических исследований дать рекомендации по терапии и контролю лечения животных с асептическими артритами и артрозами.
Научная новизна
Впервые: доказано с помощью цитологических и иммунологических исследований позитивное влияние кафорсена на гемо- и иммунопоэз у травматологически больных животных; выявлено с использованием гистлогических исследований, что применение кафорсена при переломах трубчатых костей у животных не оказывает токсического воздействия на органы иммунной системы; установлено на основании гематологических и биохимических исследований крови животных с асептическими артропатиями, что кафорсен противовоспалительной активностью: определено с помощью биохимических и цитологических исследований синовиальной жидкости животных с асептическими артритами и артрозами, что кафорсен способствует снижению воспалительных процессов в полости сустава; разработан и внедрен в ветеринарную практику на основании рентгенологических, биохимических, цитологических исследований способ лечения больных животных с асептическими артритами и артрозами.
Теоретическая и практическая значимость
На основании комплексного подхода, включающего клинические, рентгенологические, гематологические, биохимические, цитологические и морфологические методы исследования, выявлены особенности течения асептических артритов и артрозов у животных. Научно обосновано отсутствие депрессивного воздействия на различные звенья иммунной системы, что дает возможность оптимизации репаративного остеогенеза препаратом кафорсен.
Результаты проведенных исследований были использованы при разработке инструкции по применению кафорсена.
Материалы диссертационной работы используют в своей практической работе ветеринарные врачи гг. Саратова и Саратовской области, Энгельса, Волгограда, Казани, Москвы, а также в учебном процессе на кафедрах морфологии, патологии и биологии животных ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», терапии и клинической диагностики с рентгенологией ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины», кафедре морфологии и физиологии ФГБОУ ВГ10 «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Я. Горина».
Положения, выносимые на защиту
• особенности иммунологических проявлений при терапии животных с переломами трубчатых костей
• терапевтическая эффективность кафорсена при асептических артритах
• терапевтическая эффективность кафорсена при артрозах
Свн$ь исследования с научной программой
Диссертационная работа выполнена в рамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР СГАУ им. Н.И. Вавилова, регистрационный номер 2323-С от 11.11.2009 г.
Апробация работы и публикации результатов исследования
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:
• Международной научно-практической конференции «Вавиловские чтения» (Саратов, 2010-201 1 гг.);
• Ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава СГАУ им. Н.И. Вавилова (Саратова, 2010-201 1гг.);
• XX научно-практической конференции «Актуальные вопросы гомеопатии. Месю и возможности гомеопатического метода в практическом здравоохранении» (Санкт-Петербург, 2010);
• Международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного производства» (Курск, 2010);
• Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы животноводства, ветеринарной медицины, переработки сельскохозяйственной продукции и товароведения» (Воронеж-Курск, 2010);
• Международной научно-практической конференции «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству» (Троицк, 2010);
• Седьмой Всероссийской дистанционной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Современные проблемы устойчивого развития агропромышленного комплекса России» (п. Персиановский Ростовской обл., 2010);
• III Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века» (Ульяновск, 2010);
• Первой международной научно-практической конференции «Современные тенденции развития научной мысли» (Одесса, 2010);
• VIII научно-практическая конференция «Пространство и время-система координат развития человечества» (Одесса, 2011);
• Международной научно-практической конференции «Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии» (Троицк, 2011);
• Международном научно-практическом симпозиуме «Ветеринарная медицина» (Саратов, 201 1);
• пятой научно-практической конференции «Современные тенденции развития медицины, ветеринарии и фармакологии» (Одесса,2011);
• конкурсе научно-технического творчества молодежи Приволжского Федерального округа «Международный инновационный форум» (Ульяновск, 2011);
• конкурсе научных проектов молодых ученых ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» «Инновационная наука - молодой взгляд в будущее» (Саратов, 201 1);
• VII miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencjy «Aktualne problemy nowoczesnich nauk-201 1» (Pizemycl, 201 1);
• Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений МСХ РФ по ПФО (Казань, 2012).
По материалам диссертации опубликовано 23 печатных работы, из них 6 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в том числе патент «Способ лечения артритов и артрозов у животных».
Объем и структура работы
Рукопись диссертации состоит из введения, девяти глав, в том числе заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Изложена на 166 страницах машинописного текста. Приложения содержат сведения о проделанной работе. Иллюстрирована 31 рисунком, 11 таблицами, 4 диаграммами. Список литературы включает 195 источников, из них отечественных - 131, зарубежных - 64.
Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Якимчук, Елена Александровна
VI. выводы
1. Повышение фагоцитарного числа в опытной группе до 7,3±0,15 ед. а в контрольной до 6,0±0,13ед. и фагоцитарного индекса в опытной группе до 20,7±0,17 ед., а в контрольной до 18,2±0,27 ед. незначительная разница между показателями Т- и В-лимфощггов говорят об активации кафорсепом клеточном и гуморального звеньев иммунитета у животных с костной травмой.
2. Расширение белого ростка крови у животных опытной группы на уровне миелобласгов (1,3±0.3%), миелоцитов (11.5±0.9%) и мекгмиелоцитов (13.02:1.2%) свидс1ельствус1 о существенном снижении воспалительных процессов в области перелома, а в контрольной расширение происходило на уровне Г1ЯП (12.3*0.9%) и С>111 (21.5±1.7%).
3. Наличие герминативных центров лимфоидпых фолликулов лимфатических узлов. их крупные размеры. отсутствие I иперплазпи. незначительный отек стромы и синусов, а также отсутствие незначительных различий в гистологической картине органов иммунной системы животных обеих групп (за исключением вышеперечисленных) говорит об 01сутствии токсического влияния кафорсена на иммунокомпетентные органы.
4. Нормализация гематологических показателей ' животных с моделированными асептическими арфитом и артрозом к моменту окончания лечения и в ощаленнып период наблюдений свидетельствует об отеу1Ствии токсического влияния кафорсена на эритропоэз на уровне периферической крови и снижение уровня С-реакгпвного белка с 4.3±0.3 мг/л до 1.08±0.03 мг/л. щелочной фосфатазы со 172.27-t20.88 и/Г до 43.13^5.96 и/Г. сиаловых кисло 1 с 3.2±0.26 оптических единиц до ().73±0.15 оптических единиц, показателей аспиринового теста с 33.4-1.89 оптических единиц до 15.1±1.36 оптических единиц в группе артрита свидетельствуют о противовоспалительном влиянии кафорсена.
5. Снижение С-реакгпвного белка с 0.43±0.07 мг/л до 0.2±0.06 .\п/л. сиаловых кислот с 0.32±0.03 оптических единиц до 0.1 ±0.02 оптических единиц, щелочной фосфатазы со 136,6±19.52 и/Г до 65.43±1.11 и/Г свпдетельсгвуют о хондронро1СК1ивном действии кафорсена при артрозах асептического происхождения.
6. Отсутствие к 42-м суткам после окончания применения кафорсена воспалительных клеточных элементов и отека хрящевой ткани у кроликов с арфигом свидетельствуют и явно выраженной противовоспалительной эффективности кафорсена. Восстановление целостности поверхности коленного сустава, отсмсгвие гидроиической дистрофии хоидроцитов и расположение их изогснными группами у кроликов группы артроза свидс!сльствую1 о хондропротективном влиянии кафорсена.
7. Введение кафорсена способствует нормализации количества сусшвиого экссудата. его цвета, прозрачное г и и вязкости и восстановлению биохимических показателей синовиальной жидкости (снижение уроновых кислоте 12.37±0.38 ммоль/л до 2,13±0.14 ммоль/л. лактатдегидрогеназы с 378.2±13.57 и/1, до 142.1 ±3.85 и/1., исчезновение раюцитов и повышение уровня глюкозы с 1.9-10.15 ммоль/л до 4.2±0.14 ммоль/л) при асетических артритах и арIрозах.
8. Кафорсен при лечении животных с асептическими артритами и артрозами позволяв в короткие сроки нормализовать биохимические показатели крови, а также синовиальной жидкости споптаппо больных животных в среднем на 6 суток и даем сюикий юрапсвшчсский зффек! в зависимости 01 С1адии заболевания и состояния хряща и субхондральной пластины на момент обращения за ветеринарной помощью.
VII. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. При лечении пациентов с переломами трубчатых костей рекомендуется включать в комплексную постоперационную терапию кафорсен для коррекции посттравматической иммуносупрессии начиная с первых суток в дозе 1 мл на 10 кг тела.
2. Для нормализации обменных процессов в полости сустава при артропатиях асептического характера рекомендуется использование кафорсена как в качестве монопрепарата, так и совместно с традиционными препаратами. Кафорсен при артршах следует вводить собакам менее 5кг — 0,2-0,Змл; от 5 до 10кг - 0,3-0,5мл; от 10 до 25кг - 0,5-1,0мл; более 25кг - 1,01,5мл, при артрозах дозировка аналогична, курс терапии зависит от тяжести патологического процесса, составляя в среднем от 5 до 8 инъекций.
3. Гемобиохимический мониторинг больных артритами следует проводить по таким показателям, как СОЭ, количество лейкоцитов, С-реактивного и общего белка, щелочной фосфатазы, сиаловых кислот, аспиринового теста на 6, 15 и 30-е сутки, больных артрозами - сиаловые кислоты, щелочная фосфатаза на 12, 24 и 60-е сутки терапии.
V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные иммунологические исследования свидетельствуют о том, что кафорсен способствует активизации некоторых звеньев иммунной системы (бактериальная и фагоцитарная активность, фагоцитарный индекс и число, количество 13-лимфоцитов, 11СТ-тест), не оказывая при этом токсического влияния на органы гемо- и иммунопоэза. Это подтверждается результатами клинических и цитологических исследований.
Проведенные биохимические и гистологические исследования показали, что кафорсен на ранних этапах нормализует обменные процессы в хрящевой ткани, за счет чего происходит снижение воспалительных и дегенеративных процессов в полости сустава. Это подтверждается клиническими, гематологическими, рентгенографическими, цитологическими данными.
Согласно полученным данным, кафорсен не оказывает негативного влияния на органы иммунной системы, а наоборот, способствует ранней активизации некоторых ее показателей - неспецифической резистентности организма; клеточного и гуморального звеньев иммунитета. После 14-х суток прослеживается активное восстановление всех показателей иммунной системы. Наиболее показательно эта динамика наблюдается в бактерицидной и фагоцитарной активности, фагоцитарном индексе и фагоцитарном числе, НСТ-тесте. Сопоставление исходных и заключительных показателей свидетельствует о быстром приближении последних к фоновым. Однако незначительная разница между ними свидетельствует о достаточно тяжелых изменениях в системе иммунитет при костной травме.
Цитологическая характеристика красного костного мозга, который принимает непосредственное участие в процессах восстановления целостности костной ткани, гемо- и иммунопоэзе, указывает на отсутствие угнетающего действия кафорсена на производство и дифференцировку клеток красной и белой крови.
При исследовании влияния кафорсена на процесс воспаления в коленном суставе, отметили, что наибольшая динамика из показателей красной крови проявлялась в содержании гемоглобина, гематокрита и эритроцитов. Однако к окончанию эксперимента они находились в рамках референтных величин. Из биохимических показателей примечательны нормализация уровня С-реактивного белка, щелочной фосфатазы и аспиринового теста. Этот факт свидетельствует о снижении процессов воспаления в полости сустава и прекращении вовлечения в данный процесс хрящевой ткани. При дегенеративных изменениях в коленном суставе наиболее показательно снижение содержания сиаловых кислот и щелочной фосфатазы на фоне применения кафорсена, что подразумевает прекращение разрушения хряща и отсутствие негативного влияния кафорсена на составляющие сустава.
Биохимическое и цитологическое исследование синовиального выпота коленного сустава кроликов обеих групп достоверно позволило убедиться в отсутствии токсического влияния препарата кафорсен на хрящевую ткань. Данный факт подтверждается и результатами гистологического исследования.
Выполненные диссертационные исследования являются новым научным подходом в решении проблемы оптимизации репаративного остеогенезе у животных с переломами длинных трубчатых костей, а также артритов и артрозов асептического характера. Использование кафорсена в тактике лечения животных с переломами костей различных отделов скелета, больных асептическими артритами и артрозом способствует активации различных звеньев иммунной системы. Это позволяет сократить срок консолидации костных отломков и нормализовать обменные процессы в полости сустава.
Полученные результаты дают основание сделать определенные выводы и дать практические рекомендации ветеринарным врачам, занимающимся вопросами травматологии и ортопедии, иммунологии.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Якимчук, Елена Александровна, Саратов
1. Александров, И.Д. Т- и В-активины и протективные свойства вакцины БЦЖ. / И.Д. Александров, И.П. Хабудов, Н.С. Лодан // Ветеринария. М.: Колос. - 2000. - № 1. - С. 23-28.
2. Артро-медулярное шунтирование при лечении локальных дефектов суставного хряща (экспериментальное исследование) / И.Б. Самошкин и др. // Травматология и ортопедия. Материалы XIX Московского международного ветеринарного конгресса. М.: 2001. С. 2-10.
3. Афанасьев, Ю.И., Юрина, H.A., Алешин, Б.В. Гистология / Ю.И. Афанасьев, H.A. Юрина, Б.В. Алешин. М.: Медицина, 1989. - 672 с.
4. Бабаева, А.Г., Зотиков, H.A. Иммунология процессов адаптивного роста, пролиферации и их нарушений / А.Г. Бабаева, Е.А. Зотикова М.: Наука, 1987.- 214 с.
5. Барков, A.B. Управляющий остеосинтез и репаративная регенерация переломов костей / A.B. Барков // Новая технология в медицине: материалы научно-практической конф. Курган, 2000. - С. 25-26.
6. Барта, И. Селезенка Будапешт: изд. Ан. Венгрии. - 1976. 26 с.
7. Баскевич, М.Я. Лечение пострадавших с множественными и сочетанными переломами длинных костей / М.Я. Баскевич, Н.Я Прокопьев, Ю.Н. Дорофеев // Ортопедия, травматология и протезирование. 1989, №6. -С. 10-13.
8. Безин, А.Н. Клинико морфологический статус и иммунокоррекция при травмах у животных: Автореф. . д-ра вет. наук. А.Н. Безин.-СП., 2000.-32 с.
9. Берглезов, М.А. Лазеротерапия в травматологии и ортопедии / М.А. Берглезов, В.В. Вялько, В.И. Угнивенко // Вестник травматологии и ортопедии им. Н.И. Приорова. 1996. - № 3. - С. 5 1-54.
10. Бирман Б.Я. Эхинацея природный иммуностимулятор / Б.Я. Бирман, Д.С. Голубев // Международный вестник ветеринарии. - СПб. 2006. -№ 1.-С. 23-26.
11. Болезни суставов в практике семейного врача / Пособие для врачей. Под ред. Г.В. Дзяка. Киев, 2005. - 144 с.
12. Бочкарев, В.Н. Комплексное гомеопатическое лечение эндометрита собак / В.Н. Бочкарев, H.A. Кучуева, Л.А. Рябуха // Материалы XV Московского международного ветеринарного конгресса по болезням мелких домашних животных. М., 2007. - С. 133-134.
13. Будчанов, Ю.И. Предмет и задачи иммунологии. Понятие об иммунной системе. Антигены. ЦКМС ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России Тверь, 2008. 12 с.
14. Быков, В.Л. Цитология и общая гистология / В.Л. Быков. Санкт-Петербург, Сотис. - 2002. - 520 с.
15. Бышевский, А.Ш. Биохимия для врачей / А.Ш. Бышевский, O.A. Терсенов. Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994. - 384 с.
16. Бяловский, Ю.Ю., Глобин В.И., Шустова С.А. Анализ гематограмм: теория и практика/ Ю.Ю. Бяловский, В.И. Глобин, С.А. Шустова. Рязань: Медуниверситет. - 84 с.
17. Васильев, Н.В. Система крови и неспецифическая резистентность в экстремальных климатических условиях / Н.В. Васильев, Ю.М. Захаров, Т.И. Коляда // Новосибирск,-1992.-257 с.
18. Ватников, Ю.А. Показатели эритро- и лейкопоэза в патогенезе асептической травмы / Ю.А. Ватников // Ветеринария, 2002. №7. - С.36-38.
19. Ватников, Ю.А. Структурная и функциональная организация репаративиого остеогенеза животных / Ю.А. Ватников. М.: Франтера. -2004. - 144 с.
20. Вилянский, М.П. Регионарная перфузия конечностей при остеомиелите / М.П. Вилянский, A.A. Беляков, Ю.В. Рябов; науч. ред. д-р мед. наук, проф. И.И. Клюев. Саранск: Мордов. ин. изд-во, 1975. - 142 с.
21. Винников, Н.Т. . Ветеринарная лабораторная диагностика / Н.Т. Винников. Саратов, 2003. - 360 с.
22. Витте, Филипп, Скотт, Гарри. Ортопедические заболевания стареющих кошек / Витте Филипп, Гарри Скот // Veterinary focus. №21.2. — С. 18-23.
23. Волкова, О.В. Основы гистологии с гистологической техникой/ О.В. Волкова. М., 1982. - 303 с.
24. Волосовец, А.П. Применение препарата «Траумель-С» в практике современной неонатологии и педиатрии / А.П. Волосовец и др. // Национальный медицинский университет им. A.A. Богомольца, Киев, 2006. -30 с.
25. Волошин, H.A., Григорьева, Е.А. Реакция покровного синовиального слоя хряща потомства на введение гидрокортизона беременным / 1 I.A. Волошин, Г.А. Григорьева // В i с н и к морфологи. №16(1). -2010.-С. 23 -28.
26. Воронцов, A.A. Артроскопические методы диагностики и лечение патологий суставов у собак / A.A. Воронцов // Травматология и ортопедия. Материалы XIX Московского международного ветеринарного конгресса. М.: 2001.-С. 11.
27. Воронцов, A.A. Морфологическая оценка мозаичной артропластики при остеохондропластике у собак: Автореф. . канд. вет. наук. A.A. Воронцов. М.: РУДН, 2004. - 16 с.
28. Выренков, Ю.В. Актуальные проблемы лимфологии // Актуальные проблемы лимфологии и антиологии. М., 1981. С. 5-14.
29. Галактионов, В.Г. Эволюционная иммунология. М.:ИКЦ «Академкнига», 2005. 408 с.
30. Гессе, И.10. Иммуноморфологическис аспекты цитокиновой оптимизации репаративиого остеогеиеза у собак в условиях внешней стержневой фиксации. Дис. . канд. вет. наук. Саратов, 2008. - 193 с.
31. Гольдберг, Е.Д. Справочник по гематологии / Е.Д. Гольдберг. -Томск, 1989.-412 с.
32. Гордиевский, Н.И. Влияние гепарина на кровообращение в тазовой конечности собаки при удлинении голени по Илизарову / Н.И. Гордиевский, B.C. Бунов // Матер. XI Московского Междунар. ветеринарного конгресса. М., 2003. - С. 148-149.
33. Давыденков, В.Н. Гомеопатический метод в ветеринарной практике / В.Н. Давыденков, Р.Н. Фоменко // Ветеринария Поволжья. 2004. - № 1 (7). - С. 44-46.
34. Дейл, М.М., Формен, Дж. К. Руководство по иммунофармакологии / М.М. Дейл, Дж. К. Формен. М.: Медицина, 1998. -332 с.
35. Дерхо, М.А. Динамика биохимических показателей в ходе остеогенеза после травмы различных костей скелета у собак: Дис. . д-ра биол. наук. М., 2004. - 3 16 с.
36. Десятниченко, К.С. Некоторые аспекты механизма декальцинации скелета при переломах трубчатых костей у собак / К.С. Десятниченко, М.А. Дерхо // сборник научн. трудов.: современные вопросы вет. медицины и биологии. Уфа, 2000. - С. 127-129.
37. Динамика изменения синовиальной жидкости, суставного хряща и опорно-двигательной функции конечности при лечении вторичногоостеоартроза крупных суставов у собак препаратом Хионат / С.А. Ягников,138
38. ЯЛ Кулешова, М.М. Захарова, С.Г. Роденска-Лоповок // Ветеринарная клиника. № 12(31). - 2004. - С.20-24.
39. Донцов, В.И. Регуляция лимфоцитами клеточного роста соматических тканей и новая иммунная теория старения / В.И. Донцов // Профилактика старения. 1998. - №1. - С. 94-96.
40. Жарикова, H.A. Периферические органы иммунного ответа / H.A. Жарикова // Минск, Беларусь. 1979. - 224 с.
41. Жданов, Д.А. Общая и частная физиология лимфатической системы. Л., 1952. 336 с.
42. Заварзии, A.A., Основы общей цитологии / A.A. Заварзин, А.Д. Харазова. Л.: Изд-во ЛГУ, 1982. - 239 с.
43. Захаров, Ю.М., Рассохин А.Г. Эритробластический островок/ Ю.М. Захаров, А.Г. Рассохин // М.: Медицина. 2002. - 280 с.
44. Земсков, A.M., Земсков, В.М., Караулов, A.B. Клиническая гематология / A.M. Земсков, В.М. Земсков, A.B. Караулов // М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. 112 с.
45. Иванова, К.Н. Принципы и сущность гомеопатического метода лечения./ К.Н. Иванова // Биологическая медицина. 2000. - №2 3. - С. 12-20.
46. Игнатов, Г1.Е. Иммунитет и инфекция / П.Е.Игнатов. М.: Время, 2002. -352 с.
47. Иммунология / Л.П. Михайлова и др.. 2004. - № 3. - С. 152154.
48. Иммунотерапия рекомбинантным интерлейкином-2 тяжелых ранений и травм / В.Ф. Лебедев и др. // СПб.: издательство С. 11етербургского университета, 2002. 72 с.
49. Иегер, Л. Клиническая иммунология и аллергология. М.: «Медицина», 1990.- 201 с.
50. Капай, H.A. Фоспасим как нейротропное средство для комбинированного наркоза / H.A. Капай, М.Б. Славецкая // Труды Московского международного ветеринарного конгресса. М., 2009. - С.83-84.
51. Карелина, Е.А. Изучение влияния иммунокорекции на репаративный остеогенез при переломах костей у собак / Е.А. Карелина // Материалы XI Московского Международного ветеринарного конгресса. М.: 2003.-С.159.
52. Карпенко, Л.Ю. Биохимические характеристики крови собак при гипотиреозе / Л.Ю. Карпенко // Междунар. ветерин. конгресс, 8-й: Матер. -М„ 2000.-С. 4-7.
53. Кассирский, И.А., Алексеев, Г.А. Клиническая гематология / И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев // М.: Медицина, 1970. 800 с.
54. Козинец, Г.И. Атлас клеток / Г.И. Козинец // М.: Медицина, 1998. 160 с.
55. Козинец, Г.И. Интерпретация анализов крови и мочи и их клиническое значение. М.: Триада-Х, 1998. - 122 с.
56. Коляков, Я.Е. Ветеринарная иммунология / Я.Е. Коляков. М.: агропромизда1. 1987. - 272 с.
57. Кондрахин, И.П., Левченко В.И. Диагностика и терапия внутренних болезней животных / И.П. Кондрахин, В.И. Левченко // М.: Аквариум, 2005. 830 с.
58. Корр, Сандра. Аспирация синовиальной жидкости из сустава / Сандра Корр // Veterinary focus. №21.2. - С. 47 - 48.
59. Костная денситометрия в клинической практике / И. Дедов и др.//Ж. Медицинская газета, 2001. №47. - С. 12-13
60. Кузнецов, А.К. Ветеринарная хирургия, офтальмология и ортопедия / А.К. Кузнецов. Л., 1980. - 447 с.
61. Лабораторное дело. / Ю.И. Бажора, В.Н. Тимошевский, П.З. Протченко, А.П. Головченко// 1981, №4.-С. 198-200.
62. Липин, А.В. Конституциональный подход в гомеопатии и принцип подбора препаратов / А.В. Липин // Ветеринарная клиника №10. -октябрь, 2004. С. 5-6.
63. Марийо, Ж. Хирургическое лечение с помощью артроскопа / Жером Марийо//Ветеринар. -№1(9). 1999.-С. 29-30.
64. Марков, Д. А. Стимуляция рспаративного остеогенеза при лечении диафизарных переломов длинных костей : автореферат дис. . канд. мед. наук : 14.00.22. Саратов, 2008. - 22 с.
65. Марьяновский, A.A. Современная гомеопатия: признание официальной наукой / A.A. Марьяновский // Биологическая медицина. -1998. С. 16-26.
66. Мейер Денни, Харви Джон. Ветеринарная лабораторная медицина. Интерпретация и диагностика/ Денни Мейер, Джон Харви. М.: Софион, 2007.- 456 с.
67. Мендоса, С.Л. Философия старения суставов. / С.Л. Мендоса, В.М. Прохорова // Материалы X Московского Международного ветеринарного конгресса. М., 2002. - С.50-5 1.
68. Насонов, ЕЛ. Лечение ревматоидного артрита: современное состояние проблемы / ЕЛ. Насонов // Русский медицинский журнал. №8. -том 14. - 2006. -8 с.
69. Оперативная хирургия селезенки / В.Я. Овсянников и др. // Нижний Новгород, Изд-во Нижегородской государственной медицинской академии, 1998. — 64 с.
70. Осипенко, A.B. Оценка иммунной системы собак в научно -исследовательской и ветеринарной практике/ A.B. Осипенко // методические указания. Екатеринбург, 1993. - 11 с.
71. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1987.414 с.
72. Пигаревский, П.В. Морфология / П.В Пигаревский. 1998. - №6. -С. 47-49.
73. Плотник, Мартин, Смит, Альта. Биомодуляция при остеоартрите / Мартин Плотник, Альта Смит // Биологическая терапия. № 2. - том 2. -2008.-С. 4-7.
74. Предварительные результаты цитокиновой оптимизации репаративного остеогенеза при переломах трубчатых костей / И.Ю. Гессе, В.М. Скорляков, В.В. Анников // Материалы XIV Московского Международного ветеринарного конгресса. М.: 2006. - С. 90 - 91.
75. Приказ Минздрава СССР от 10.03.1966 №163 "О нормах кормления лабораторных животных и продуцентов".
76. Применение метода клеточно-регенеративной терапии при лечении патологий суставов и сухожилий у собак и лошадей / A.A. Калиновский и др. // Травматология и ортопедия. Материалы XIX Московского международного ветеринарного конгресса. М.: 2001. С. 12.
77. Райт, Д. Морфологическая диагностика патологии лимфатических узлов / Д. Райт, Б. Эддис, Э. Леонг. М.: Мед. лит., 2008. -176 с.
78. Ройт, А. Основы иммунологии / А. Ройт. Пер. с англ. Мир, 1991. -442 с.
79. Романов, В.В. Опыт применения гомеопатического композитума энтифа при инфекционном энтерите птиц / В.В. Романов, Ф.Л. Радун // Тезисы седьмой международной конференции но проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных. М., 1999. - С. 286-289.
80. Ротанов, Д.А. Морфофункциональная характеристика эритропоэза у собак в острый посттравматический период Автореф. дис. канд. вет. наук. - М.: 2007. - 19 с.
81. Самошкин, И.Б., Слесаренко, H.A. Реконструктивно -восстановительная хирургия опорно двигательного аппарата у собак (клинико-морфологические параллели) / И.Б. Самошкин, H.A. Слесаренко // М., 2008.-200 с.
82. Сапин, M.Р., Ревазов, B.C. Селезенка и костный мозг / М.Р. Сапин, B.C. Ревазов // Здоровье. 1984. - С. 22-34.
83. Сапожникова, М.А., Тверитнева, Л.Ф., Ильницкая, Т.Н. // Архив патологии, 1987.-№12.-С. 31-35.
84. Саркисян, А.Г. Регуляция репаративной регенерации при переломах длинных трубчатых костей: Дис. . канд. мед. наук. Ереван, 1982. - 146 с.
85. Сахно, Н.В. Стимуляция репаративных процессов костной ткани при переломах трубчатых костей у мелких домашних животных и профилактика хирургической инфекции// Орел. 2009. - 123 с.
86. Сергеев, К.С., Воробьев, Д.П., Иванов, C.B. и др. Декомпрессивно- стабилизирующие операции при дегенеративном и спондилолизном спондилолистезе нижних поясничных позвонков // Росбиомед. 2005. -№ 6. (84). С. 203-204.
87. Серых, М.М., Зайцев, В.В. Современные представления о филогенезе и онтогенезе иммунитета у животных / М.М. Серых, В.В. Зайцев // Вестник Сам ГУ-Естественнонаучная серия. 2006. №9(49). - С.246-253.
88. Скорая помощь и интенсивная терапия мелких домашних животных / Пер. с англ. Лисициной Т.В. М.: Аквариум-Принт, 2008. - 560 с.
89. Слесаренко, H.A. Структурные корреляторы функциональных нарушений костного гомеостаза у собак текст. / H.A. Слесаренко // Мат. междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2006 г. - С. 270-272.
90. Слуцкин, II.И. Механизм действия гомеопатических препаратов / Н.И. Слуцкин, C.B. Зепин // Моск. междунар. конф. «Нерешенные вопросы гомеопатии»: Матер. 1997-С. 14-16.
91. Смирнов, А.П. и др. Методическое пособие к лабораторным занятиям по основам научных исследований / под ред. Смирнова А.П.и др. Саратов, 1981. 11 1 с.
92. Смит, Альта. Движение и матрикс / Альта Смит // Биологическая терапия,-№2.-том 2.-2008.-С. 13-15.
93. Созинов, В.А., Ермолина, С.А. Современные лекарственные средства для лечения собак и кошек / В.А. Созинов, С.А. Ермолина. М.: Аквариум принт, 2004. - 496 с.
94. Соколов, Е.И. Клиническая иммунология / под ред. Е.И. Соколова, М.: Мед., 1998.-91 с.
95. Сошенко, J1. Гомеопатия в лечении эндометритов / Л. Сошенко, А. Таджиева // Животноводство России. январь 2009. - С.35-36.
96. Стимуляция остеогенеза при переломах костей у собак при использовании цитотоксической остеогенной сыворотки / Н.Р.Бетнарь, С. Ю. Концевая // Материалы XII Московского Международного ветеринарного конгресса. -М.: 2004. С. 106-108.
97. Стимуляция остеорегенерации у собак с применением гомеопатического препарата кафорсен. / Родин И.А. и др. // Материалы XVII московского международного ветеринарного конгресса. М., 2009. - С. 103-105.
98. Структурно-функциональная характеристика селезенки у представителей семейства Candidae / E.B. Кузьмичева // Материалы XVI Московского Международного ветеринарного конгресса. М.: 2004. -С.1 17.
99. Суровцева, И.В. Сравнительная эффективность медикаментозного, аккупункурного и гомеопатического методов лечения коров при миокардите. Автореф. . уч. степ. канд. вет. наук. Саратов, 2006. -20 с.
100. Терентьева, Э.И., Шишканова, З.Г. Атлас ультраструктуры клеток кроветворной ткани. М.: Медицина, 1972.-428 с.1 10. Травматология и ортопедия / Руководство для врачей: в 3 томах. Т. 1. Под ред. 10.Г. Шапошникова. М.: Медицина, 1997.-656 с.
101. Ужанский, Я.Г. Физиологические механизмы регенерации крови // М.: Медицина, 1968. 264 с.
102. Уколова, М.В. Гомеопатическая терапия гепатопатий собак / М.В. Уколова // Матер. X Московского междунар . ветеринарного конгресса. -М., 2002.-С. 130-131.
103. Федоров, Г.Н., Леонов, С.Д. Роль селезенки в поддержании гомеостаза организма // 2006. 98 с.
104. Фрейдлин, И.С. Загадки тимуса. Возраст и иммунитет // Соросовский образовательный журнал,№5 1997г С. 26-29.
105. Хлыстова, З.С. Становление системы иммуногенеза плода (морфологические основы). М.: Медицина, 1978. С.70-95.1 18. Ходорович. A.C., Рубина, С.М., Шарафулина, Д.Б. // Сб. научных трудов. Ташкент. - 1986. - С. 102-105.
106. Цеулина, Е.Г1. Стимуляция репаративного остеогенеза методом лазерной остеоперфорации при лечении переломов трубчатых костей у собак/ Е.П. Цеулина // Междунар. ветеринар, конгр., 16-й: Матер. М., 2008. -С. 62-63.
107. Чернигов, Ю.В. Экспериментально теоретическое и клиническое обоснование лечения собак с повреждениями тазобедренного сустава: Автореф. . д-ра вет. наук. - М., 2008. -42 с.
108. Чертков, И.Л., Фриденштейн, А.51. Клеточные основы иммунитета. М.: Медицина, 1969. 255 с.
109. Чертков, И.Л., Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы кроветворения (кроветворные клетки-предшественники) / И.Л. Чертков, А.Я. Фриденштейн // М.: Медицина, 1977. 272 с.
110. Шаймарданова, Л.Р. Ультрамикроскопические изменения клеток костного мозга под действием ксеногенной спинномозговой жид кости.//Морфология. 2010. T.1V. - №4. - С.67-72.
111. Шерстнев, C.B. Чтение рентгеновских снимков. Рентгенодиагностика травматических повреждений, заболеваний, инородных тел у кошки и собаки / C.B. Шерстнев // Филантроп. 2002. - 118 с.
112. Ширер, Патрик. Статистические данные об ортопедических болезнях / Патрик IIJирер // Veterinary locus. №21.2. - С. 24 - 25.
113. Шмольц, М., Оттендорфер, Д. Иммунная система наш персональный телохранитель / М. Шмольц, Д. Оттендорфер // биологическая медицина. - т. 18, № 1. - 2010. - С. 16-21.
114. Щукин, М.В. Рентгенодиагностика заболеваний внутренних органов и костно суставного аппарата животных / Методические указания. -М„ 1989. - 12 с.
115. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин // М.: Медицина, 1999.-607 с.
116. Ярцев, М.Н., Яковлева, К.П. Иммунная недостаточность: клинико-лабораторная оценка // Иммунология, 2005. № 1. - С.36-44.
117. Acuto, О, Bartolo, V.D, Michel, F. Tailoring T-cell receptor signals by proximal negative feedback mechanisms. Nat Rev Immunol 2000; 8 (9): 699712.
118. Acuto, O, Michel, F. CD28-mediated co-stimulation: a quantitative support for TCR signaling. Nat Rev Immunol 2003; 3 (12): 939-951.
119. Aminoti, D.1998. Methods for the quantitative estimation of JV-acetylneuraminic acid and their application hydrolyzates of sialomucoids. Biochem. J. 81, 384-392.
120. Anderson, G.M. Circular external skeletal fixation stabilization of antebrachial and crurar fractures in 25 dogs / G.M. Anderson et al.// J. Am. Anim. Hosp. Assoc., 2003. № 5. - P. 479-498
121. An jure, F. et al. // Blood. 1999. - Vol.93, №2. - P.590-598.
122. Anthony, R.M., Rutitzky, L.I., Urban, J.F., Stadecker, M.J., Gause, W.C. Protective immune mechanisms in helminth infection. Nat Rev Immunol 2007; 7 (12): 975-987.
123. Barrios, L. et al. //ActaPhysiol Pharmacol Ther Latinoam. 1998. -Vol.48, №1. - P. 18-24.
124. Bclkaid, Y. Regulatory T-cell and infection: a dangerous necessity. Nat Rev Immunol 2007; 7 (12): 875-888.
125. Biron, C.A., Gazzinelli, R.T. Effects of IL-12 on immune response to microbial infections: a key mediator in regulating disease outcome. Curr Opin Immunol 1995; 7: 485-96.
126. Bisci, L., Poor, G. Effecacy and tolerability of oral chondroitin sulfate as a symptomatic slow acting drug for osteoarthritis (SYSADOA) in the treatment of knee osteoarthritis. Osteoarthr. Cart. 1998; 6 (suppl. F): 39-46.
127. Bitter, T. & Muir, H.M. A modified uronic acid carbazole reaction. Analyt. Biochem. 4, 330-334.
128. Blanco, F.J., Lopez, M.J., Maneiro, E. Mitohondrial dysfunction in osteoarthritis. Rheumatology. 2004. (4): 715-728.
129. Carol J. Baker, Dennis L. Kasper. Identification of Sialic Acid in Polysaccharide Antigens of Group B Streptococcus. Infection and immunity, American Society for Microbiology. Jan. 1976, Vol. 13, No. 1. P. 284-288.
130. Clamp, J.R., Bhatti, T. and Chambers, R.E. The determination of carbohydrate in biological materials by gas liquid chromatography. In Methods ofBio- chemical Analysis, Vol. 19, pp. 229-344. 1962. Ed. D. Glick. John Wiley and Sons, Inc., New York.
131. Creamer, P., Hochberg, M.C. Osteoarthritis. Lancet 1997; 350: 503508.
132. Dantas, F. Do homeopathic remedies provoke adverse effect? A systematic review / F. Dantas, H. Rampcs // Br. Homeopathic Journal. No. 89. -Supl 1.-2000.-P. 35-38
133. E. Leikola, Elna Ieminen, Anna-Maija Teppo. New sialic acid-containing sulfolipid: «ungulic acid» / E. Leikola, Elna Ieminen, Anna-Maija Teppo // Journal lipid research volum 1 0, 1969. P. 440-444.
134. Everson, M.P. et al. // J Interferon Cytokine Res. 1998. - Vol.18, №2.-P. 103-115.
135. Felson, D.T., Lawrence, R.C. et al. Osteoarthritis: new insight. Part 1: The disease and its risk factor. Ann. Intern. Med. 2000; 133: 635-646.
136. Ghadiri, A.R. Radiographic findings of hypertrophic osteodystrophy in a mongrel puppy / A.R. Ghadiri, R. Avizeh, A. Veshkini // Iranian Journal of veterinary research. Vol. 8. - No. 2. - Ser. No. 19. - 2007
137. Goebel, J.C., Watrin-Pinzano, A., Bettembourg-Brault, I. et al. Age-related quantitative MRI changes in healthy cartilage: preliminary results // Biorheology. 2006. (3) 547-551.
138. Hardie, E.M., Roe, S.C., Martin, F.R. Radiographic evidence of degenerative joint disease in geriatric cats: 100 cases (1994-1997). J Am Vet Med Assoc 2002;220:628-632.
139. Heine, H, Schmolz, M. Induction of the immunological bystander reaction by plant extracts. Biomed Ther 1998; 16 (3):224-226.
140. Janeway. Ch., Travers, P. Immunobiology. L.: Curr. Biol. Ltd. 1994.
141. Kapitonova, M.Y., Othman, M. Ultrastruetural characteristics of synovial effusion cells in some arthropathies // Malays J. Pathology. 2004. (2): 7387.
142. Karina P. Gopaul, Martin A. Crook. Sialic acid: A novel marker of cardiovascular disease? Clinical Biochemistry 39 (2006) 667-681.
143. K.B., Patel, P.S., Chawda, J.G. Shah. Clinical significance of total and lipid bound sialic acid levels in oral pre-cancerous conditions and oral cancer. J Oral Pathol Med 2005; 34: 263-7.
144. Kealy, R.D., Lawler, D.F., Ballam, J.M., et al. Evaluation of the effect of limited food consumption on radiographic evidence of osteoarthritis in dogs. J.Am Vet Med Assoc; 217:1678-1680.
145. Kubo, S. et al. // Hepatogastroenterology. 1998. - Vol.40, №24. -P.2270.
146. LaFond, E, Breur, CC. Breed susceptibility for development orthopedic diseases in dogs. J Am Vet Med Assoc 2002; 38: 467-477.
147. Lifelong diet restriction and radiographic evidence of osteoarthritis of the hip in dogs / Smith GK, Paster R, Powers, et al. // J Am Vet Med Assoc 2006;229:690-693.
148. Lund, E.M., Armstrong, P.J., Kirk, C.A., et al. Health status and population characteristics of dogs and cats examined at private veterinary practices in the United States. J Am Vet Med Assoc 1999; 214: 1336-1341.
149. Mazieres, B., Combe, B., Phan, Van V. et al. Chondroitin sulfate in osteoarthritis of the knee: a prospective, double blind, placebo controlled multicenter clinical study. J. rheumatol. 2001; 28: 1 73-1 81.
150. Micallef, M.J. et al. //Cancer Immunollmmunother. 1999. -Vol.48, №2.-P. 109-107.
151. Mrosek, L.H., Lahm, A., Erggelet, C. et al. Subchondral bone trauma causes cartilage matrix degeneration: an immunohistochemical analysis in a canine model // Osteoarthritis Cartilage. 2006. (2): 171-178.
152. Nathan, C. Neutrophils and immunity challenges and opportunities. Nat Rev Immunol 2006; 6 (3): 173-182.
153. N leminen, L., E. Leikola, M. Koljonen, U. Kiistala, and K. K. Mustakallio. 1967. Acta Dermato-Venereol. 47: 327.
154. Passariello, R. Bone densitometry in clinical practice/ R. Passariello, C.V. Albanece, M Krasnova // European Radiology. 1997. - Vol. 7. - P. 2-10
155. Paul, Whiteman. The Quantitative Determination of Glycosaminoglycans in Urine with Alcian Blue 8GX. Printed in Great Britain. Biochem. J. (1973) 131, 351-357.
156. Pickup, J.C., Mattock, M.B., Crook, M.A., Chusney, G.D., Burt, D., Fitzgerald, A.P. Serum sialic acid concentration and coronary heart disease in NIDDM. Diabetes Care 1995; 18: 1 100-3.
157. Pilin, A., Pudil, A., Bencko, V. Changes in colour of different human tissues as a marker of age // Int. J. Legal Med. 2007. (2): 158-162.
158. Pizarro, A.R., Galaspy, Y.W., Nawas, S. et al. Splenosis and the gynecologist patient: a case report and revive of literature. Y La State Med Soc. 2000. 152(7). 345-8.
159. Pongponratn, E. et al. // Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1989. - Vol.20, jYl»1. - P.3 1-39.
160. Razwi, E.S., Weisch, R.M. Apoptosis in viral infections. Adv Virus Res 1995; 45: 1-60.
161. Romero, P.J., Romero, E.A. // Blood Cells Mol Dis. 1999. - Vol.25, №1. - P.9-19.
162. Runge, J.J., Biery, D.N., Lawel, D.F., et al.J The effects of lifetime food restriction on the development of osteoarthritis in the canine shoulder/ Vet Surg 2008;37:102-107.
163. Sakarya, S, Rifat, S, Zhou, J, et al. Mobilization of neutrophil sialidase activity desialylates the pulmonary vascular endothelial surface and increase resting neutrophil adhesion to and migration across the endothelium. Glycobiology 2004;14:481-94.
164. Schneider, C, Klein, P, Stolt P, Oberbaum, M. A homeopathic ointment preparation compared with 1% diclofenac gel for acute symptomatic treatment of tendinopathy. Explore 2005; l(6):446-452.
165. Shivananda, Nayak B, Geetha, Bhaktha. Relationship between Sialic acid and metabolic variables in Indian type 2 diabetic patients. Lipids in Health and Disease 2005, 4:15 doi: 10.1 186/1476-51 1X-4-15.
166. Simon, J.C. et al. // ExpDermatol. 1993. - Vol.2, №3. - P. 133-138.
167. Singer, S.R., Amit-Kohn, M, Weiss S, Rosenblum, J, Lukasiewicz, E, Itzchaki, M, Oberbaum, M. Efficacy of a homeopathic preparation in control of post-operative pain A pilot clinical trial. Acute Pain 2007; 9 (1 ):7-12.
168. Spahn, D.R., Cerny, V., Coats, T.J et al. Management of bleeding following major trauma: a European Guidline. Crit. Care 2007. 11(1). - R17.
169. Spence, D. Homeopathic treatment for chronic disease: A-6-Year, university-hospital outpatient observational study / D. Spence, E. Thompson, S. Barron // J. A Item Complement Med. No. 5. - 2005. - P. 793-798
170. Stuart, L.M., Ezekowitz, R.A. Phagocytosis and comparative innate immunity: Learning on the fly. Nat Rev Immunol 2008; 8(2): 131-137.
171. Thimme, R, Blum, H. T-Zell-Antwort gegen Viren. Eine neue nicht-zytotoxische antivirale Strategie. Dtsch Med Wochenschr 1998; 123: 1007-8.
172. Thomas, D.B. Ital J AnatEmbryol / D.B. Thomas 1995. - Vol.100, №1,-P.245-251.
173. Voskooinik, 1, Smith, MJ, Trapani, J A. Perforin-mediated target-cell death and immune homeostasis. Nat Rev Immunol 2006; 6 (12): 940-952.
174. Wallace, D.L., Beverley, P.C. / Immunology // D.L. Wallace, P.C. Beverley 1993. - Vol.78, №4. - P.623-628.
175. Yang, H. Neuroimmunomodulation / H. Yang et al. 1998. - Vol.5, №1. - P.53.
176. Yoshida, K., van den Berg, T.K., Dijkstra, C.D. Immunology / K. Yoshida, TK. van den Berg, C.D. Dijkstra 1993. - Vol.80, jYl> 1. - P.34-39.
177. Ziegler, D, Hutchison, H. Coupled enzyme system for measuring viral neuraminidase activity. Appl Microbiol 1972; 23: 1060-5.
-
Якимчук, Елена Александровна
-
кандидата ветеринарных наук
-
Саратов, 2013
-
ВАК 06.02.01
- Клинико-морфологическое обоснование эффективности применения кафорсена при переломах трубчатых костей у животных
- Влияние естественных регуляторов метаболизма на морфофункциональные характеристики суставов у крыс в норме и при экспериментальном артрите
- Оптимизация репаративного остеогенеза при костных травмах у мелких домашних животных
- Биохимические изменения в тканях суставов при дегенеративно-дистрофических заболеваниях и способы их направленной биологической коррекции
- Патогенетическая терапия асептического и гнойного артрита у собак и телят
