Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников

Крюк, Юлия Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников"

На правах рукописи

Крюк Юлия Васильевна

Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

О 3 г;др ?011

Москва-2011

4856649

Работа выполнена на кафедре клинической биохимии и лабораторно диагностики ФПДО ГОУ ВПО «Московский государственный медик стоматологический университет» Росздрава

Научные руководители: кандидат биологических наук, доцент

О.М.Кузнецова С.Н.Блохин

доктор медицинских наук

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.Л. Козельцев

доктор биологических наук, профессор Н.С.Сергеева

Ведущая организация: ГОУ ВПО Российский Государственны! медицинский университет Росздрава

Зашита диссертации состоится «18» марта 2011г. в «14.00» часов на заседании Диссертационного совета Д.212.203.13 при Российско университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.б

Автореферат разослан « »_2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук,

профессор

Введение

Актуальность темы. Рак яичников (РЯ) составляет около 4-6% всех злокачественных новообразований у женщин, но по показателям смертности занимает первое место среди всех гинекологических опухолей в России и экономически развитых западных странах (А.Ф.Урманчеева и соавт., 2008; В.В.Кузнецов и соавт., 2009; БЬаЬаЫ Б й а1., 2011). В России ежегодно выявляют более 11000 больных РЯ, что составляет 10,2:100000 женщин (В.И.Чиссов и соавт., 1998). За последние 10 лет прирост заболеваемости РЯ в России составил 8,5%.

Этиология РЯ не известна, патогенез изучен не до конца. При этом РЯ представляет гетерогенную группу новообразований (БЬаЬаЫ 8. е1 а1., 2011), а поверхностный эпителий, строма и первичные половые клетки дают начало различным по гистогенезу опухолям, проявляющимся одним или одновременно несколькими гис-тотипами (Ог1оз Я., 2003).

Рак яичников считают одной из наиболее агрессивных опухолей и у большинства пациенток заболевание диагностируется на достаточно поздних стадиях, когда опухоль уже распространена по брюшине (М.И.Давыдов и соавт., 2007). Опухолевых маркеров для выявления ранних стадий РЯ не существует, за исключением СА-125, уровень которого в сыворотке крови пропорционален объему поражения, а стало быть, характерен для более запущенных стадий болезни. Поэтому, повышенный уровень СА-125 до операции может служить существенным показателем для контроля над течением болезни в период лечения и последующего наблюдения (БрпввБ Б., 2003).

В последние годы большой интерес привлекает исследование матриксных ме-таллопротеиназ (ММП), которые считают одним из наиболее перспективных направлений в области изучения механизмов инвазии и метастазирования различных опухолей. И среди них ММП-2 - наиболее известна как протеаза, гидролизующая коллаген IV типа - основной компонент базальной мембраны эпителиальных опухолей, при этом она также разрушает другие существенные компоненты внеклеточного матрикса и обладает желатинолитической активностью. Регуляция активности ММП является сложным и до сих пор до конца не изученным процессом, важную роль в котором играют их тканевые ингибиторы (ТИМП). В экспериментальных исследованиях продемонстрирована важная роль ММП-2 в формировании

инвазивного потенциала клеток РЯ (Kenny H.A. et al., 2008, 2009), причем индукция ММП является одним из ключевых механизмов проявления проинвазивных эффектов эпидермального (EGF) (Ellerbrock S.M. et al., 2001а, 2001b) и ß-трансформирующего (ß-TGF) факторов роста (Lin S.W. et al., 2000; Nishikawa A. et al., 2000; Rodriguez G.C. et al., 2001). Показано также, что ММП-2, наряду с ММП-9 находятся в комплексном взаимодействии с ключевым активатором ангиогенеза -фактором роста эндотелия сосудов (vascular endothelial growth factor - VEGF). С одной стороны, коллагеназы индуцируют секрецию VEGF опухолевыми клетками, что способствует образованию асцита (Belotti D. et al., 2003; Manenti L. et al., 2003; Zhang A. et al., 2006), а, с другой - секретируемый опухолью VEGF регулирует экспрессию коллагеназ в строме, влияя на инвазивную способность опухоли (Wang F.Q. et al., 2006; Belotti D. et al., 2008).

Представленные данные современной литературы указывают на актуальность проведения одновременного сравнительного исследования содержания VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2 и ММП-2 в сыворотке крови и ткани опухоли больных злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников. Трудности ранней диагностики, высокий метастатический и инвазивный потенциал РЯ определяют необходимость углубленного изучения механизмов распространения опухоли, знание которых могло бы стать основой для создания новых препаратов, целенаправленно воздействующих на процессы метастазирования и инвазии. В этой связи исследование ММП при РЯ - одно из наиболее перспективных направлений в области изучения роли этой протеолитической системы в клиническом течении заболевания.

Вместе с тем, уже не вызывает сомнения тот факт, что опухоль не может развиваться и расти без образования в ней разветвленной сети сосудов, обеспечивающих снабжение клеток кислородом и питательными веществами (Folkman J., 1985; Salven et al., 1997; Piccino R. et al., 2002). Изучение молекулярных механизмов ангиогенеза позволило перейти от микроскопической оценки плотности сосудов в опухоли к исследованию конкретных молекул, участвующих в регуляции образования и роста новых сосудов в опухолевой ткани. Ведущая роль среди таких регуляторов, безусловно, принадлежит VEGF (С.В.Луценко и соавт., 2005; Ferrara et al., 1995; Donovan et al., 1997). Ряд фактов указывает на то, что VEGF не только обла-

дает проангиогенной активностью, но может и непосредственно участвовать в регуляции пролиферации клеток опухоли (8раппиШ\У.А. й а1., 2009).

Известно, что эффекты \TEGF опосредованы специфическими мембранными рецепторами и в процессах опухолевого ангиогенеза принимают участие два типа рецепторов УЕвР - УБвРЯ-ШЫ и УЕСР11-2/Р1Ы/ЮЖ Биологическая роль УЕОРИ.-1 и УЕОРЯ-2, по-видимому, различна: УБвРЯ-1 индуцирует протеазную активность в эндотелиальных клетках и стимулирует миграцию в опухолевую ткань макрофагов, а УЕОР11-2 вызывает дифференцировку, пролиферацию и миграцию клеток эндотелия (Е.С.Герцггейн и соавт., 20106). Различаются ли функции двух типов рецепторов УЕвР в опухолевых клетках, пока неясно.

Исследования последних лет позволили по-новому взглянуть на процессы протеолиза и неоангиогенеза в репродуктивной системе женщин, как при физиологических изменениях, так и при различных патологических состояниях, в том числе и РЯ (АгИш Р-в. й а!., 2008; 8Ьег I. й а!., 2009). Показана роль ангиогенных факторов в процессе васкуляризации опухолей, взаимосвязь экспрессии \TiGF и его рецепторов с прогнозом заболевания и эффективностью лечения, намечены новые направления терапевтических воздействий на злокачественный процесс. Все выше указанное определило актуальность проведения данного исследования.

Цель настоящего исследования - анализ клинических перспектив исследования матриксной металлопротеиназы 2 типа (ММП-2), фактора роста эндотелия сосудов (УЕСР) и его рецепторов (УЕСР11-1, УЕСР11-2) в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Иммуноферментным методом определить содержание ММП-2 в сыворотке крови и ткани опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.

2. Проанализировать соотношение концентрации ММП-2 в сыворотке крови с его содержанием в первичной опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.

3. Исследовать содержание ММП-2 в сыворотке крови и ткани опухоли больных

раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с учетом основных клинических (возраст, стадия заболевания, наличие асцита, репродуктивный статус) и морфологических (гистологическое строение и степень дифференцировки опухоли) характеристик заболевания и сопоставить с таковыми показателями при пограничных и доброкачественных опухолях яичников.

4. Изучить взаимосвязь содержания ММП-2, УЕвР, УЕОР11-1, УЕОР11-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с уровнем сывороточного опухолевого маркера СА-125.

5. Изучить возможность комплексного использования клинических, морфологических факторов и биохимических маркеров (ММП-2, УЕОР, УБОРЫ-1, УЕОР11-2, СА-125) в диагностике, оценке инвазивного и метастатического потенциала новообразований яичников.

Научная новизна исследования

Впервые в отечественной практике проведено одновременное сравнительное иммуноферментное определение содержания нескольких биохимических маркеров (ММП-2, УЕОР, УЕОРИ.-1, УЕОРЯ-2, СА-125) в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с учетом их связи с основными клинико-морфологическими характеристиками опухоли.

Показано, что уровни ММП-2 в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников достоверно не различалось. При этом концентрация ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражала основные клинические факторы заболевания: возраст, данные гинекологического анамнеза, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение, размер опухоли и не была связана с сопутствующими соматическими заболеваниями.

Обнаружено, что содержание ММП-2 в опухолях больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников не различалось достоверно. При этом в группе больных раком яичников установлена прямая достоверная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (г5=0,43; р=0,01), тогда как у больных доброкачественными и погранич-

ными новообразованиями яичников этой зависимости не выявлено.

Выявлены достоверно высокие уровни ММП-2 в сыворотке крови больных с двусторонним РЯ, которые положительно коррелировали с содержанием маркера в первичной опухоли (rs=0,64; р=0,001).

Наиболее высокие показатели ММП-2 обнаружены в сыворотке крови и опухоли при серозном РЯ, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, при распространенных III и IV стадиях заболевания, при метастазах опухоли в печени, при диссеминации процесса по брюшине и при наличии асцита.

Показано, что содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли не зависело от гистологического строения пограничных и доброкачественных новообразований яичников. При этом, у больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников сывороточные уровни CA-125 и ММП-2 не были связаны корреляционной зависимостью, а высокие концентрации CA-125 независимо от значений ММП-2 указывали на наличие РЯ и чаще при распространенном процессе.

Содержание VEGF в сыворотке крови практически здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников (медианы соответственно 201 и 318 пг/мл; р=0,001), при этом более высокие медианы VEGF выявлены в сыворотке крови больных раком, чем доброкачественными и пограничными опухолями яичников (соответственно 428, 289 и 167 пг/мл). Кроме того, обнаружено усиление обратной связи между уровнями ММП-2 и VEGF в ткани первичной опухоли по мере увеличения содержания СА-125 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников.

Не установлено достоверных различий в содержании VEGFR-1 и VEGFR-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опухолями яичников. Однако медиана концентрации VEGFR-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше по сравнению с больными РЯ, при этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между ММП-2 и VEGFR-1 в сыворотке крови (rs=0,4; р=0,017), которая отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями яичников.

У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная

корреляционная зависимость мевду содержанием ММП-2 и УЕСБ в ткани опухоли (г5=-0,44; р=0,0001), которая усиливалась по мере увеличения концентрации СА-125 в сыворотке крови.

Практическая значимость исследования Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение УЕОР/УЕСРЯ-1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных РЯ (р=0,003), что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках (чувствительность теста -83,9%; специфичность - 73,6%). Диагностическая ценность определения только СА-125 в сыворотке 1фови больных РЯ и доброкачественными новообразованиями яичников недостаточна (чувствительность теста - 89,2%; специфичность - 35,0%).

Высокие показатели ММП-2 и УЕСР выявлены в сыворотке крови у больных РЯ с ранним прогрессированием заболевания, чем у пациенток без такового.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Уровни ММП-2 в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников достоверно не различалось, а концентрация ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражала основные клинические характеристики заболевания (возраст, данные гинекологического анамнеза, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение, размер опухоли) и не связана с сопутствующими соматическими заболеваниями.

2. Содержание ММП-2 в опухолях больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников не различалось достоверно.

3. Наиболее высокие показатели ММП-2 выявлены в сыворотке крови и опухоли при серозном РЯ, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, ИГ-ГУ стадиях заболевания, при наличии асцита. Достоверно высокие уровни ММП-2 обнаружены в сыворотке больных с двусторонним РЯ.

4. Содержание \rEGF в сыворотке крови практически здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников. При этом, не установлено достоверных различий в содержании УЕСИ1-1 и

УЕ0Н1-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опухолями яичников

5. Медиана концентрации УЕОРЯ-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше по сравнению с больными РЯ, при этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между ММП-2 и УЕОРЯ-1 в сыворотке крови, которая отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями яичников.

6. У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и УЕвР в опухоли, которая усиливалась по мере увеличения концентрации СА-125 в сыворотке крови.

7. Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение УЕОР/УЕОР-Ш менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных РЯ (р=0,003), что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках. При этом, высокие показатели ММП-2 и УЕСБ выявлены у больных РЯ с ранним про-грессированием заболевания фоне проводимой химиотерапии.

Апробация работы Основные результаты диссертации доложены на: XVI Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 6-10 апреля 2009г.); научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 28-30 сентября 2009г.); международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 10-11 ноября 2009г.); XVII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.).

Материалы диссертации доложены на совместной научной конференции сотрудников кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики Московского Государственного медико-стоматологического университета, лаборатории клинической биохимии НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН и кафедры биохимии Российского университета дружбы народов 12 февраля 2011 г.

Публикации результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, 3 из них в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 156 страницах машинописного текста, включает введение, обзор данных литературы, главу «Материалы и методы исследования», главу «Результаты собственных наблюдений», обсуждение полученных данных, выводы, список цитируемой литературы, который состоит из 52 работ отечественных и 215 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 18 рисунками.

Материалы и методы исследования

В настоящее исследование включены 64 больных с новообразованиями яичников, проходивших обследование и лечение в Российском онкологическом научном центре им. Н.Н.Блохина РАМН в период с 2008 по 2009 гг. Из них 38 (59,4%) больных РЯ, 7 (11,0%) пациенток с пограничными новообразованиями яичников и 19 (29,6%) больных с доброкачественными новообразованиями яичников. Группу контроля составили 20 практически здоровых женщин.

Всем пациенткам выполняли УЗИ малого таза, брюшной полости и забрю-шинного пространства, а также допплеровское трансвагинальное УЗИ. С целью, уточнения распространенности опухолевого процесса больным выполняли колоно-скопию, гастроскопию и маммографию. Больным проводили также КТ и МРТ исследование для анализа распространенности опухолевого процесса и связи опухоли с окружающими кровеносными сосудами, мочеточниками и органами малого таза. У некоторых больных выполняли экскреторную урографию, сцинтиграфию скелета и лапароскопию для уточнения распространенности опухолевого процесса. Стади-рование РЯ проводили после хирургического удаления первичной опухоли и тщательного обследования органов малого таза, брюшной полости и забрюшинного пространства. У всех больных клинико-рентгенологический диагноз новообразованиями яичников подтвержден данными гистологического исследования удаленной опухоли.

Характеристика больных раком яичников. В исследование включено 38 больных РЯ в возрасте от 17 до 72 лет, средний возраст составил 51,0±2,2 года из них 16 (42,1%) в репродуктивном возрасте, 22 (57,9%) пациентки - в постменопаузе. Распределение 38 больных РЯ с учетом стадии заболевания по FIGO представлено в таблице 1.

Таблица 1.

Распределение больных раком яичников с учетом стадии FIGO

Стадия по FIGO Частота (абс. число) Частота (отн. число)

Ia 4 10,5%

Ic 7 18,4%

IIa 2 5,3%

IIb 1 2,6%

lila 1 2,6%

Illb 2 5,3%

IIIc 15 39,5%

IV 6 15,8%

Всего 38 100%

При гистологическом исследовании опухолей яичников выявлены следующие их варианты: серозная (25/65,8%), эндометриоидная (7/13,7%) и муцинозная (2/5,2%) аденокарциномы, светлоклеточный (1/2,6%) и смешанный (3/7,8%) рак.

У 9 из 20 (45%) первичных больных опухоль имела низкую степень диффе-ренцировки. Частота выявления низкой степени дифференцировки составила 2 из 8 (18,2%) у больных с 1-П стадиями и 7 из 11 (63,6%) у больных с ПНУ стадиями РЯ (р=0,066). Высокая и умеренная степень дифференцировки РЯ выявлена в 7/35% и 9/45% наблюдений соответственно. У 18 больных степень дифференцировки опухоли не определена ввиду проведения неоадьювантной химиотерапии.

У 24 из 38 (63,1%) больных выявлен двусторонний РЯ, который имел строение серозной аденокарциномы (84,0%).

У 9 (23,7%) больных выявлен асцит объемом от 2 до 10 л (все 9 пациенток с серозной аденокарциномой яичников, у 29 (76,3%) - асцит не выявили.

Всем 38 больным РЯ было проведено стандартное хирургическое лечение: удаление матки с придатками и резекция большого сальника. В послеоперационном периоде все они получали адъювантную химиотерапию. У 18 больных проведена неоадъювантная химиотерапия.

Характеристика больных пограничными опухолями яичников. Возраст 7 больных пограничными опухолями яичников колебался от 23 до 63 лет, составляя в среднем 42,0±9,5 лет, из них у 4 (57,1%) была сохранена репродуктивная функция и 3 (42,9%) были в постменопаузе. У 1 пациентки (14,3%) опухоль имела серозный вариант строения, у 5 (71,4%) - муцинозный, у 1 (14,3%) - эндометриоидный. Всем больным проведено хирургическое удаление опухоли.

Характеристика больных доброкачественными новообразованиями яичников. Возраст больных доброкачественными новообразованиями яичников колебался от 17 до 78 лет, составляя в среднем 51,4±4,б лет. 10 больных этой группы были в репродуктивном периоде и 9 - в постменопаузе. У 6 (31,5%) больных выявлена доброкачественная эндометриоидная опухоль яичников, у 5 (26,3%) - серозная аденома, у 4 (21%) - гранулезоклеточная опухоль, у 3 (15,7%) - дермоид, по 1 (5,2%) наблюдению выявлены муцинозна аденома и тератома. 7 (36,8%) больным доброкачественными новообразованиями яичников выполнена односторонняя ад-нексэктомия, 1 (5,2%) - резекция одного яичника, 11 (57,8%) - аднексэктомия с резекцией контрлатерального яичника.

Таблица 2.

Содержание Са-125 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников

разных групп

Новообразования Кол-во СА-125, Ед/мл, Р

яичников больных медиана (квартили)

Доброкачественные1 19 69,0 (14,0-140)

Пограничные2 7 98,1 (21,1-447) 1убЗ=0,005

Злокачественные11 38 236,0 (70,9-414)

Содержание СА-125 в сыворотке крови было достоверно ниже при доброкачественных новообразованиях яичников и повышалось у больных пограничными опухолями и РЯ (р=0,005) (табл. 2). Высокие значения СА-125 (>100 Ед/мл) обнаружены у 71% больных РЯ (чаще при серозной аденокарциноме яичников).

Специальные биохимические методы исследования Специальные биохимические исследования опухолевых маркеров (ММП-2, УЕОР, УТЮЖ-1, УЕОРЯ-2) проводили в сыворотке крови до лечения. Для полу-

чения сыворотки венозную кровь, взятую в чистую сухую пробирк , оставляли на 30 мин при комнатной температуре для формирования сгустка, затем центрифугировали в течение 30 мин на холоду при 4°С при 3500 об/мин при комнатной температуре. Надосадочную фракцию (сыворотку) разливали на аликвоты по 0,5 мл и хранили при -70°С до проведения иммуноферментного анализа.

Для проведения иммуноферментного анализа в опухолях и неизмененных тканях яичников получали их экстракты как описано ранее (Е.С.Герштейн и соавт., 2007). Образцы тканей лизировали в соотношении 1:3 в буфере следующего состава: 20 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ЭГТА, 1% Тритон Х-100, 2,5 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ ß-глицерофосфат, 1 мМ ортованадат натрия, 1 мкг/мл леупептина. Полученные лизаты центрифугировали в течение 30 мин при 20000 об/мин, 4°С (центрифуга OptimaTM TLX, Beckman, США).

ММП-2 определяли с помощью стандартного набора реактивов для прямого иммуноферментного анализа: «Human/Mouse/Rat ММР-2 (total)», (Quantikine®, «R&D Systems», США) в соответствии с инструкциями производителя. Измерения проводили на автоматическом универсальном ридере для микропланшет ELX800 (Bio-Tek Instruments, Inc., США). Концентрацию ММП-2 в сыворотке крови выражали в нг/мл, в тканях опухолей - в нг/мг общего белка, определенного по методу Лоури.

Концентрацию VEGF, VEGFR-1 и VEGFR-2 определяли в сыворотке крови и опухолях яичников с помощью стандартных наборов реактивов для прямого иммуноферментного анализа: «Human VEGF Immunoassay», «Human VEGFR1 Immunoassay», «Human VEGFR2 Immunoassay» (Quantikine®, R&D Systems, США) в соответствии с инструкциями производителя. Концентрацию исследованных показателей выражали в сыворотке крови: VEGF - в пг/мл, VEGFR-1 - в нг/мл, VEGFR-2 - в нг/мл; в ткани опухолей: VEGF - в пг/мг общего белка, VEGFR-I - нг/мг общего белка; VEGFR-2 - в пг/мг общего белка, определенного по методу Лоури.

Концентрацию опухолевого маркера CA-125 проводили иммуноферментным методом (ELISA) в сыворотке крови до лечения и в процессе проводимой терапии с помощью стандартных наборов реактивов фирмы («Roche», Швейцария). Измерения проводили на электрохемилюминисцентном анализаторе «ЕС-300» фирмы («Roche», Швейцария).

При подозрении на гранулезоклеточную опухоль яичника у больных иммуно-ферментным методом определяли концентрацию ингибина В в сыворотке крови реактивами фирмы («Diagnostic Systems Laboratories, Inc.» «DSL», США).

Статистические методы исследования При выборе статистических процедур учитывали методологические требования Международного конгресса по гармонизации GGP «Статистические принципы для клинических исследований». Все вычисления проводили на персональном компьютере с помощью пакета статистических программ «Statistica для Windows» и SPSS.

Результаты собственных исследований Содержание ММП-2 в сыворотке крови оценено у 64 больных новообразованиями яичников, а также у 54 пациенток в опухоли (табл. 3).

Таблица 3.

Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразования-

ми яичников и в контроле

ММП-2 Обследованные группы

Контроль Новообразования яичников

Доброкачественные | Пограничные | Злокачественные

ММП-2 в сыворотке к рови, нг/мл

N 8 19 7 38

Медиана 256 229 244 212

Квартили 190-281 188-245 189-355 172-256

Пределы 161-303 102-265 182-484 105-445

ММП-2 в опухоли, нг/мг белка

N - 19 7 28

Медиана - 28,4 19,2 15,5

Квартили - 15,3-42,1 14,3-45,6 10-33

Пределы - 8,6-106 4,8-49,7 2,9-86,7

Примечание: в опухоли Рдня-ря^Об.

Следует указать, что распределения обоих показателей отличались от распределения Гаусса, поэтому в качестве центральной характеристики применяли медиану, а при сравнении использовали непараметрические критерии. Содержание ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп и в контроле не различалось достоверно (р>0,05) (табл. 3). Установлено, что у больных пограничными опухолями и РЯ чаще выявляли значения ММП-2 в сыворотке кро-

ви более 303 нг/мл (то есть были выше, чем в контроле), соответственно 3 из 7/42,9% (р=0,006) и 10 из 38/15,8% (р=0,07), по сравнению с группой больных доброкачественными новообразованиями яичников (0%).

Кроме того, значения ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников были ниже таковых в контроле (менее 161 нг/мл): у 22,6% больных РЯ, у 5,3% больных доброкачественными новообразованиями и у 0% больных пограничными опухолями яичников.

Эти данные показывают, что значения ММП-2, отличные от нормы, достоверно чаще выявляли у больных РЯ (38,7%) и пограничными опухолями (42,9%), реже при доброкачественных новообразованиях яичников (5,3%) (р=0,02).

частота выявления

ММП-2 вне пределов 100%

нормы в сыворотке

крови, % 80%

®>303 нг/мл 60%

□ 161-303 нг/мл 40%'

0<161 нг/мл

20%

р=0,02

0%-

доброкачествежые пограничные РЯ перви^ые

группы больных новообразованиями яичников

Рис. 1. Частота выявления уровней ММП-2 выше пределов нормы в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп.

Содержание ММП-2 в опухоли больных новообразованиями яичников колебалось в широких пределах от 2,9 до 115 нг/мг белка и было наибольшим у больных доброкачественными новообразованиями яичников и наименьшим у больных РЯ (медианы соответственно 28,4 и 15,5 нг/мг белка; р=0,06 - тенденция к различию).

Определили коэффициент соотношения содержания ММП-2 в сыворотке крови к ММП-2 в опухоли. Так, у 18 больных доброкачественными новообразованиями яичников медиана соотношения равнялась 7,9, у 7 больных пограничными новообразованиями яичников была выше и составила 13,2, а у 28 первичных больных РЯ медиана соотношения равнялась 11,3. Различия выше указанного коэффициента

во всех группах больных были статистически недостоверными.

В группе больных РЯ установлена прямая достоверная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (г5=0,43; р=0,01). Тогда как в группе больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников этой зависимости не выявлено (гу=-0,31; р=0,13). Следовательно, у больных РЯ высоким значениям ММП-2 в опухоли чаще соответствовали высокие показатели фермента в сыворотке крови.

Подводя итоги проведенному анализу содержания ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников разных групп, отметим, что медиана содержания ММП-2 в сыворотке крови больных РЯ была наименьшей, а в контроле - наибольшей. При этом, медиана содержания ММП-2 в опухоли больных доброкачественными новообразованиями яичников была наибольшей, а при РЯ - наименьшей (тенденция к различию). Вместе с тем, только в группе больных РЯ установлена прямая достоверная корреляционная связь между содержанием ММП-2 в опухоли и сыворотке крови (г5=0,43; р=0,01).

Таблица 4.

Содержание ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яични-

ков с учетом максимального размера опухоли

Размер, см Доброкачественные Пограничные Злокачественные

ММП-2, п ММП-2, N ММП-2,

нг/мл нг/мл нг/мл

(медиана-квартили) (медиана-квартили) (медиана-квартили)

<5 7 229 (190-245) 2 248(182-313) 4 197(164-212)

5-9 6 241 (208-254) 1 223* 4 143 (105-155)'

>10 4 212 (186-238) " 4 300 (217-420) 6 209(172-235)

Двустороннее 2 146(102-189) - - 24 232 (192-270)''

Примечание: ^абсолютное значение; р1.2=0,01.

Содержание ММП-2 как в сыворотке крови, так и в опухоли не было связано значимо с возрастом больных новообразованиями яичников всех обследованных групп, а также с наличием сопутствующих соматических заболеваний. Вместе с тем, отмечена тенденция к повышению ММП-2 в сыворотке крови с увеличением размера первичной опухоли у больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников, а в группе больных с двусторонним РЯ отмечено достоверно высокие уровни ММП-2 в сыворотке крови (табл. 4). При этом выявленная

корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли усиливалась у больных РЯ с двусторонним опухолевым поражением до значения (г5=0,65; р=0,001).

Анализ уровней ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников с учетом гистологического строения опухоли не выявил достоверных различий в выше указанном маркере. Вместе с тем отмечены высокие значения ММП-2 в опухоли больных серозным РЯ (табл. 5).

Таблица 5.

Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных РЯ с учетом его гистологического варианта строения

Гистологический вариант строения РЯ ММП-2 в сыворотке крови, нг/мл ММП-2 в опухоли, нг/мг белка

п Медиана, квартили п Медиана, квартили

Серозный 25 232(191-270) 23 22,7 (13,6-45,8)

Эндометриоидный 7 185 (164-248) 3 6,3 (5,0-7,9)

Муцинозный 2 198* 1 11,9*

Смешанный рак 3 203* (126-204) 1 37,0*

Светлоклеточный рак 1 212* - -

Примечание: *абсолютное значение; все различия недостоверны.

При этом, в сыворотке крови 40% больных серозной аденокарциномой яичников выявлены значения ММП-2, отличные от таковых в контроле.

Отметим, что прямая корреляционная зависимость между ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных РЯ была характерна только для поздних IIIb-IV стадий (г=0,68; р=0,001). Тогда как у больных I-II стадий РЯ зависимость была недостоверной, как и у больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников.

Наибольшее содержание ММП-2 обнаружено при IV стадии РЯ как в сыворотке крови (медиана 285 нг/мл), так и в опухоли первичных больных (медиана 22,9 нг/мг белка) (табл. 6).

Следует указать, что уровни ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных

РЯ были наиболее низкими при высокодифференцированных новообразованиях.

Таблица 6.

Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных РЯ с учетом стадии заболевания по FIGO

Стадия РЯ ММП-2 в сыворотке крови, нг/мл ММП-2 в опухоли, нг/мг белка

N Медиана, квартили п Медиана, квартили

Ча 4 192 (168-213) 2 11,3(7,9-14,6)

21с 7 155 (143-202) 7 11,9(6,3-26,6)

J IIa 2 204 (203-204) 1 37,0

"IIb 1 160* 1 15,4*

5 Ilia 1 269* - -

6IIIb 2 281 (195-366) 2 18,7 (9,0-28,4)

7IIIc 15 235 (187-270) 12 17,9(12,1-50,1)

8IV 6 285 (211-359) 3 22,9 (13,4-76,9)

Примечание: *абсолютное значение; в сыворотке крови p2vs7,8=0,036.

Наименьшие значения ММП-2 в сыворотке крови установлены у больных РЯ без асцита и достоверно более высокие при наличии такового (медианы 197 и 256 нг/мл соответственно; р=0,006). Также заметно выше было содержание ММП-2 в опухоли больных РЯ с асцитом (медианы 23,7 и 15,0 нг/мг белка соответственно).

Установлена тенденция к более высоким значениям ММП-2 в сыворотке крови больных РЯ при выявлении опухолевых клеток в асцитической жидкости или в смывах из брюшной полости (р=0,05 Mann-Whitney U test). При этом, корреляционная зависимость между ММП-2 в опухоли и сыворотке крови усиливалась у больных РЯ с выявленными опухолевыми клетками в смывах из брюшной полости до значения (rs=0,6; р=0,004).

На рисунке 2 представлена частота выявления значений ММП-2 в опухоли больных РЯ, лежащих вне пределов условной нормы при различных признаках процесса. При неблагоприятных факторах чаще выявляли высокие значения ММП-2.

щя 11 33,3%

шш

шщ

Ш: тя ш

30,7%

10,3%

13,2% 1

Р ш

«Я

а ММР2>303 пг/мл ВММР2 161-303 пг/ыл □ ММР2<160пг/мл

24,1%

ЙВД

ЙЙ

22,7%

14,3%

33,3% ЕЕ ш

"/"•"'■У/. г/л-Х;

й'а:

Ж Щ

■ ■■ Ж

ж 28,6%

высокая умер7низк.

Опухолевые клетки асцит диссеминация степень стадия РЯ

дифференцировки

Рис. 2. Частота выявления ММП-2 в сыворотке крови больных РЯ вне пределов условной нормы при различных клинических признаках.

У больных новообразованиями яичников всех групп значения СА-125, определенные в сыворотке крови, не были связаны со значениями ММП-2 в сыворотке крови и опухоли корреляционной зависимостью. Однако, несмотря на то, что дисперсионный анализ не обнаружил связи СА-125 с содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли, в то же время, одновременное определение СА-125 и ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп выявило определенные закономерности. Так, для больных РЯ поздних Ш-ГУ стадий и пограничными новообразованиями яичников могут быть характерны при относительно невысоких значениях СА-125 в сыворотке крови (<200 Ед/мл) высокие уровни ММП-2 (>303 нг/мл). Очень высокие показатели СА-125 в сыворотке крови независимо от уровня ММП-2 указывают на наличие РЯ (чаще у пациенток с распространенным процессом).

Связь показателей ММП-2 с уровнями \'ЕСР, УЕСП1-1, УЕСРЯ-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованием яичников.

Проведен анализ содержания УЕОР и его рецепторов 1 и 2 типа в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников разных групп (табл. 7). Содержание УЕвР в сыворотке крови больных РЯ было недостоверно, а в ткани опухоли достоверно выше, чем у больных доброкачественными новообразованиями яичников. Содержание рецепторов (УЕОР11-1, УЕСРР-2) в указанных группах статистически не различалось. При этом, уровни УЕвР в сыворотке крови в группе

контроля были достоверно ниже, чем у больных РЯ (р<0,001), и достоверно ниже, чем у больных доброкачественными новообразованиями яичников (р<0,01).

Таблица 7.

Содержание УЕвР и его рецепторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников разных групп

Показатели Новообразования яичников (группы)

Доброкачественные Пограничные Злокачественные

п Медиана, квартили, пределы N Медиана, квартили, пределы п Медиана, квартили, пределы

В сыворотке крови

VEGF* (пг/мл) 19 289 168-465 68-872 7 167 135-273 129-365 38 428 252-564 16-1654

VEGFR-1 (нг/мл) 17 86 80,2-108 60,4-118 7 99,7 76,2-113 69,1-153 36 92 76,8-103 44,3-142

VEGFR-2 (нг/мл) 19 10,2 5,8-11,3 0-16,2 7 12,3 12-13,3 5,5-15,5 38 9,5 8,2-10,9 6,5-15,8

В ткани опухоли

VEGF** (пг/мг белка) 18 2,3 0-31 0-646 7 208 140-780 23-2459 34 350 9,9-521 0-1422

VEGFR-1 (нг/мг белка) 17 751 549-864 248-1260 7 707 254-805 121-951 34 686 527-796 301-1340

VEGFR-2 (пг/мг белка) 18 171 98-254 39,9-735 7 184 74,3-234 0-413 35 125 105-188 4,1-395

Примечание: »р^зЮ.Об Median test; *+Pi-2,3=0,004 Kruskal-Wallis test.

Показатели УЕОРК-1 в сыворотке крови женщин группы контроля составили по медиане 97,1 нг/мл, (нижняя и верхняя квартили равнялись соответственно 69,1 и 118 нг/мл, пределы колебания составили 50-130 нг/мл) и были достоверно выше по сравнению с группой больных РЯ (р<0,01).

Концентрация УЕОРЯ-2 в сыворотке крови женщин группы контроля не различалась достоверно по сравнению с группами больных новообразованиями яичников. Не выявлено корреляционной зависимости между ММП-2 и УЕйР, определенными в сыворотке крови больных новообразованиями яичников разных групп.

В то же время, у больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и УЕвР, определенными в опухоли (г5=-0,44; р=0,0001). Эти данные показывают, что в опухоли больных новообразованиями яичников независимо от характера новообразования при высоких значениях одного из выше указанных маркеров чаще выявляли низкие значения другого. Выявленная закономерность отсутствовала у больных новообразованиями яичников всех групп с концентрациями сывороточного СА-125 менее 35 Ед/мл (г=0,1), была слабой и недостоверной у больных со значениями СА-125 от 35 до 100 Ед/мл (г5=-0,27; р=0,4) и была наиболее выраженной у больных с повышенными значениями СА-125 (от 100 Ед/мл и более) (г8=-0,59; р=0,001). Стало быть, обратная связь между содержанием ММП-2 и УЕСБ в опухоли усиливалась по мере увеличения концентрации СА-125 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников.

У больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников не выявлено линейной зависимости между показателями ММП-2 и УЕОР11-1, определенными в сыворотке крови (г=0). В то же время в группе больных РЯ обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между этими показателями (г5=0,4; р=0,017). Зависимость была выражено линейной у больных с I стадией РЯ (г5=0,88; р=0,0016), но отсутствовала у пациенток с IV стадией (г=-0,2; р=0,8). Зависимость между ММП-2 и УЕСРЯ-1 также была более тесной у больных без асцита, без метастазов в большом сальнике, при отсутствии опухолевых клеток в смывах из брюшной полости, что вероятно, указывает на компенсаторный характер данной зависимости.

Не выявлено корреляционной зависимости между содержанием ММП-2 и УЕОРЯ-2, определенными в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников всех групп.

Диагностическая ценность \rEGF и коэффициентов соотношений УЕОР/УЕОР11-1, УЕОР/УЕОР11-2, определенных в сыворотке крови больных новообразованиями яичников, оказалась недостаточной (точность распознавания менее 70%). Отметим, что частота выявления сывороточного маркера СА-125 выше нормы (более 35 Ед/мл) составила 65,0% у 20 больных доброкачественными, 71,4% - у 7 больных пограничными и 89,2% - у 37 больных РЯ (р=0,08). Таким образом, ди-

агностическая ценность одного СА-125 при новообразованиях яичников также оказалась недостаточной.

Эти данные указывают, что все рассматриваемые показатели (СА-125, УЕОР, УЕОР11-1, УЕОР11-2), по отдельности не могут однозначно характеризовать какую-либо группу больных новообразований яичников. Тем не менее, использование 3-х маркеров, определенных в сыворотке крови до лечения (УЕОР, УЕОРЯ-1, ММП-2) повышает в дополнение к СА-125 вероятность выявления злокачественного характера новообразования яичников. Так, благоприятные значения СА-125 менее 100 Ед/мл, УЕОР/УЕОРЯ-1 менее 5 и ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% (11 из 15) больных доброкачественными, у 28,6% (2 из 7) пограничными и только у 16,1% (5 из 31) больных РЯ (р=0,003).

Полученные данные позволяют разработать решающее правило для определения злокачественного характера выявленного новообразования яичника, а определение маркеров в сыворотке крови можно проводить в 2 этапа: обязательный этап -определение СА-125 и УЕОР/УЕОР11-1, а при их благоприятных уровнях - дополнительное определение и ММП-2.

Подводя итоги анализа связи ММП-2 с УЕОР и его рецепторами УЕвРЯ-1 и УЕОРЯ-2, отметим: у больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и УЕОР, определенными в ткани опухоли (г5=-0,44; р=0,0001); у больных новообразованиями яичников всех групп с повышенными уровнями СА-125 в сыворотке крови (более 100 Ед/мл) зависимость между ММП-2 и УЕОР в ткани опухоли усиливалась, но отсутствовала у больных с концентрациями СА-125 в пределах нормы; для больных раком яичников с 1-Н стадиями характерна прямая корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и УЕОРЯ-1 (г5=0,88; р=0,0016) в сыворотке крови; диагностическая ценность определения СА-125 в сыворотке крови больных злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников недостаточна (чувствительность - 89,2%; специфичность - 35,0%); совместное определение СА-125, УЕОР и УЕОРЯ-1, а также ММП-2 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников позволяют дифференцировать злокачественный характер новообразования в яичнике от доброкачественного (чувствительность - 83,9%, специфичность - 73,6%).

Выводы

1. Уровни ММП-2 в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников не различалось, их медианы составили соответственно 256, 229, 244 и 208 нг/мл. Достоверно высокие уровни сывороточного ММП-2 обнаружены при двустороннем раке яичников.

2. Показатели ММП-2 в опухолях больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников не различались. При этом в группе больных раком яичников установлена прямая достоверная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (rs=0,43; р=0,01), у больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников этой зависимости не выявлено.

3. Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли не зависело от гистологического строения пограничных и доброкачественных новообразований яичников и было наиболее высоким при серозном раке яичников с умеренной и низкой степенью дифференцировки опухоли, при III-IV стадиях заболевания и наличии асцита. Показатели ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражали основные клинико-морфологические характеристики заболевания: возраст, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение и размер опухоли.

4. У больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников уровни CA-125 и ММП-2 в сыворотке крови не были связаны корреляционной зависимостью, а высокие концентрации CA-125 независимо от значений ММП-2 указывали на наличие рака яичников.

5. Содержание VEGF в сыворотке крови практически здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников (медианы соответственно 201 и 318 пг/мл; р=0,001), при этом более высокие медианы VEGF выявлены в сыворотке крови больных раком, чем доброкачественными и пограничными опухолями яичников (соответственно 428, 289 и 167 пг/мл). У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием VEGF и ММП-2 в опухоли (rs=-0,44;

р=0,0001), которая усиливалась по мере увеличения концентрации сывороточного CA-125.

6. Не установлено достоверных различий в содержании VEGFR-1 и VEGFR-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опухолями яичников. Однако медиана концентрации VEGFR-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше, чем у больных раком яичников, при этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между ММП-2 и VEGFR-1 в сыворотке крови (rs=0,4; р=0,017), которая отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями.

7. Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение VEGF/VEGFR-1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных раком яичников (р=0,003), что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках (чувствительность теста - 83,9%, специфичность - 73,6%).

Печатные работы

1. Дигаева М.А., Высоцкий М.М., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Аббасова С.Г., Манухин И.Б., Тулеуова A.A., Липкин В.М. Сравнительный анализ уровней растворимого Fas у больных раком и доброкачественными новообразованиями яичников // В материалах XVI Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 6-10 апреля 2009г.).-2009.-с.86.

2. Герштейн Е.С., Левкина Е.С., Дигаева М.А., Крюк Ю.В., Кушлинский Д.Н. Фактор роста эндотелия сосудов и его рецепторы 1 и 2 типа в опухолях и сыворотке крови больных новообразованиями яичников / Труды научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 28-30 сентября 2009г.) // М.-«Лабора».-2009,-с.31-32.

3. Дигаева М.А., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Высоцкий М.М., Аббасова С.Г., Кузнецов В.В. Фактор роста эндотелия сосудов и растворимый Fas в сыворотке крови больных новообразованиями яичников // В материалах Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 10-11 ноября 2009г.).-М.-ММА им. Сеченова И.М.-2009.-С.81-82.

4. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Кушлинский Д.Н., Аббасова С.Г., Кузнецов В.В., Лактионов К.П. Маркеры ангиогенеза, Fas-зависимого апоптоза и лептин в сыворотке крови больных раком и доброкачественными новообразованиями яичников // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.-2009.-№6.-с.25-29.

5. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Кушлинский Д.Н., Аббасова С.Г., Лактионов К.П., Ермилова В.Д., Бахоева К.А., Крюк Ю.В., Манухин И.Б. sFas, лептин и VEGF

в сыворотке крови больных раком и доброкачественными новообразованиями яичников // Бюлл. Экспер. Биол. Мед.-2009.-том 148, №11 .-с.564-568.

6. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Крюк Ю.В., Шарашинидзе O.A., Бахоева К.А., Кушлинский Д.Н., Галдава Д.Г., Манухин И.Б., Адамян Л.В. Сывороточные маркеры у больных новообразованиями яичников // В материалах XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.).-M.-2010.-C.70.

7. Высоцкий М.М., Дигаева М.А., Терешкина И.В., Крюк Ю.В., Кушлинский Д.Н., Лактионов К.П., Кузнецов В.В., Манухин И.Б. Сывороточные молекулярно-биологические маркеры у больных новообразованиями яичников // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.-2010.-№4.-с.20-26.

Аннотация

Проведено сравнительное иммуноферментное определение содержания биохимических маркеров (ММП-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, СА-125) в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников. Уровни ММП-2 в опухоли и сыворотке крови больных раком, пограничными, доброкачественными новообразованиями яичников и у здоровых женщин достоверно не различалось. Концентрация ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражала основные клинико-морфологические факторы заболевания. Выявлены достоверно высокие уровни ММП-2 в сыворотке крови больных с двусторонним раком яичников. Наиболее высокие показатели ММП-2 обнаружены в сыворотке крови и опухоли при серозном раке яичников, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, III-IV стадиях и при наличии асцита. Содержание VEGF в сыворотке крови здоровых женщин достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников, а более высокие медианы VEGF выявлены у больных раком, чем доброкачественными и пограничными опухолями яичников. Не установлено достоверных различий в содержании VEGFR-1 и VEGFR-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников, однако медиана концентрации VEGFR-1 в сыворотке крови здоровых женщин достоверно выше, чем у больных раком яичников. Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение VEGF/VEGFR-1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах 160-303 нг/мл выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и у 16,1% больных раком яичников, что может бьггъ использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках (чувствительность теста - 83,9%; специфичность - 73,6%).

Summary

Comparative immunoenzymatic determination of biochemical markers (MMP-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, CA-125) was performed in blood serum and tumors of patients with malignant, borderline and benign ovarian neoplasms. No differences were found between MMP-2 levels in the tumors and sera of cancer, benign or borderline tumor patients, and in control group. MMP-2 concentration in the serum of benign ovarian tumor patients was not associated with the main clinico-pathologic features of the disease. Significant increase of MMP-2 levels was revealed in the sera of patients with bilateral ovarian cancer. The highest MMP-2 values were found in blood serum and tumors in serous cancer, moderate and low tumor differentiation grade, stage III-IV disease, and in patients with ascites. VEGF concentration in the serum of healthy women was significantly lower than in the combined group of ovarian neoplasms patients, and higher median VEGF level was revealed in ovarian cancer than in benign and borderline tumor patients. No significant differences were found for serum and tumor VEGFR-1 and VEGFR-2 between patients with various ovarian neoplasms, but median VEGFR-1 concentration was significantly higher in the serum of healthy women as compared to ovarian cancer patients. CA-125 levels below 100 U/ml, VEGF/VEGFR-1 ratio <5, and MMP-2 levels in the range of 160-303 ng/ml were found in 73.3% of benign tumor patients, 28.6% of borderline tumor and 16.1% of ovarian cancer patients. This observation may be applied for discrimination of patients with high risk of malignant character of ovarian lesion (sensitivity - 83.9%; specificity - 73.6%).

Подписано в печать 1б.ог.и Формат 60><84/16 Бумага офисная «вуеШСору». Тираж 100 экз. Заказ № 193 Отпечатано на УМТ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Крюк, Юлия Васильевна

Список условных сокращений.5-5.

Введение.6-19.

ГЛАВА 1. РОЛЬ МАТРИКСНЫХ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ, АНГИОГЕННЫХ ФАКТОРОВ И ИХ РЕЦЕПТОРОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ И КЛИНИЧЕСКОМ ТЕЧЕНИИ РАКА

ЯИЧНИКОВ (обзор литературы).20-56.

Злокачественные опухоли органов репродуктивной системы у женщин.20-25.

Матриксные металлопротеиназы и метастазирование опухолей.25-28.

ММП-2.28-35.

Матриксные металлопротеиназы - потенциальные мишени для таргетной терапии рака яичников.35-38.

Ангиогенез в норме и при опухолевой трансформации.38-39.

Ангиогенез в опухолях.39-41.

Маркеры ангиогенеза.41-43.

VEGF.43-45.

Рецепторы VEGF.45-48.

Клинические исследования ангиогенеза в опухолях женской репродуктивной системы и его роль в прогнозе заболевания.48-51.

Антиангиогенная терапия рака яичников.51-56.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.57-74.

2.1. Общая характеристика больных новообразованиями яичников и групп контроля.57-58.

2.1.1. Характеристика больных раком яичников.59-67.

2.1.2. Характеристика больных пограничными опухолями яичников.67-69.

2.1.3. Характеристика больных доброкачественными новообразованиями яичников.69-70.

2.1.4. Сопоставление клинических факторов у больных злокачественными, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.71-72.

2.2. Специальные биохимические методы исследования.72-73.

2.3. Статистические методы исследования.73-74.

ГЛАВА 3. ММП-2, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2 В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ОПУХОЛИ БОЛЬНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ ЯИЧНИКОВ (результаты собственных исследований).75-107.

3.1. Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников и в контроле.7579.

3.2. Связь показателей ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников с возрастом пациенток.7982.

3.3. Связь содержания ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников с учетом сопутствующих заболеваний.82-83.

3.4. Зависимость содержания ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников с учетом их максимального размера.83-85.

3.5. Уровни ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников с учетом их гистологического строения.85-88.

3.6. Содержание ММП-2 в сыворотке крови и в ткани опухоли больных раком яичников с учетом стадии (FIGO).88-90.

3.7. Показатели ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком яичников с учетом степени его дифференцировки.90-91.

3.8. Связь показателей ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком яичников с характером диссеминации процесса.91-92.

3.9. Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком яичников с учетом наличия асцита.92-93.

3.10. Уровни ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком яичников с учетом выявления опухолевых клеток в смывах из брюшной полости.93-99.

3.11. Связь показателей ММП-2 в сыворотке крови и опухоли с уровнями сывороточного СА-125 до^ лечения« у больных новообразованием яичников.99-100.

3.12. Связь показателей ММП-2 с уровнями» VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2 в сыворотке крови и опухоли больных новообразованием яичников.100-107.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников"

Актуальность темы. Рак яичников составляет около 4-6% всех злокачественных новообразований у женщин, но по показателям смертности занимает первое место среди всех гинекологических опухолей в России и-экономически развитых западных странах (А.Ф.Урманчеева и соавт., 2008; В.В.Кузнецов и соавт., 2009; Shahabi S et al., 2011).

По данным Международного агентства по изучению рака (МАИР), ежегодно в мире регистрируется более 165000 новых больных со злокачественными опухолями яичников и более 100000 умирает от них (IARCI Sei. Publ. Lyon, 1997). Если удельный вес рака яичников в онкологической заболеваемости женщин во всех странах мира примерно одинаков, то частота заболеваемости на 100000 женского населения значительно варьирует. В' Европе, особенно в Северных странах и Великобритании, а также в Северной Америке, стандартизованные показатели заболеваемости наиболее, высокие (10 и более на 100000). При этом, наиболее высокая-заболеваемость регистрируется в развитых странах (США, страны* Западной Европы) - 12,5'случаев на 100000 женщин и более. Исключение составляет Япония, где заболеваемость раком яичников -2,7:100000 женщин, хотя-и в этой стране и других странах с низким риском (Индия, Сингапур, Португалия, Испания, Югославия, Польша) за последние годы отмечено повышение заболеваемости.

В 2003 году в США- зарегистрировано 23000 новых случаев рака яичника и 143001 летальных исходов от этой патологии. Заболеваемость в США остается довольно стабильной и составляет 17,1 на 100000 женщин (Banholtz-Sloan J.S. et al., 2003).

В России ежегодно выявляют более 11000 больных раком яичников, что составляет 10,2:100000 женщин (В.И.Чиссов и соавт., 1998). За последние 10 лет прирост заболеваемости раком яичников в России составил 8,5%. Вероятность заболеть раком яичников в течение жизни составляет 1,6%, т.е. заболевает каждая 63-я женщина.

Таким образом, рак яичников занимает 7-е место в структуре заболеваемости женщин злокачественными опухолями и 3-е место -опухолями женских половых органов (М.И.Давыдов и соавт., 2007).

Заболеваемость раком яичников увеличивается с возрастом и пик ее приходится на возраст 65-75 лет, достигая максимального значения 37,8:100000 женщин. Средний возраст при постановке диагноза 63 года (В.В.Кузнецов и соавт., 2009).

Этиология рака яичников не известна, патогенез изучен не до конца, а интерпретация показателей заболеваемости раком яичников крайне затруднительна, особенно в экономически развитых странах (А.Ф.Урманчеева и соавт., 2008). С одной стороны, необходимо учитывать широкое применение оральных контрацептивов, обладающих протективным эффектом, как роды и лактация. С другой стороны, сокращение в цивилизованных странах числа беременностей и родов, приводящее к «непрекращающейся овуляции», способствует, возможно, повышению риска развития неоплазии в яичнике, как и. применение препаратов, стимулирующих овуляцию в лечении бесплодия, и эстрогенов, в терапии климактерических расстройств. Кроме того, нельзя не учитывать фактор питания. Увеличение животных белков в рационе питания не исключает увеличения риска заболевания раком яичников.

При этом опухоли яичников представляют гетерогенную группу новообразований. Поверхностный эпителий, строма и первичные половые клетки дают начало различным по гистогенезу опухолям, проявляющимся одним или одновременно несколькими гистотипами (СЫоэ К., 2003).

Злокачественные эпителиальные опухоли составляют по данным разных авторов от 50 до 85% всех злокачественных новообразований яичников. Доказано, что возраст во время постановки диагноза, раса, стадия заболевания, степень дифференцировки и гистотип опухоли существенно влияют на прогноз (Shahabi S. et al., 2011).

Рак яичников является одной из наиболее инвазивных злокачественных опухолей, при этом у большинства больных заболевание диагностируется на достаточно поздних стадиях, когда опухоль уже распространена по брюшине (М.И.Давыдов и соавт., 2007). В большинстве индустриальных стран мира рак яичников имеет самые высокие показатели смертности среди всех гинекологических опухолей, что связано с поздней диагностикой заболевания. Летальность больных раком яичников на первом году после установления диагноза составляет 35% (М.И.Давыдов и соавт., 2009). По сводным данным популяционных раковых регистров стран Европы, 1-летняя выживаемость больных раком яичников составляет 63%, 3-летняя - 41%, 5-летняя - 35% (IARCI Sei. Publ. Lyon, 1999). Вместе с тем, сообщают об улучшении выживаемости женщин с первичным раком яичников в-течение последних трех десятилетий (Banholtz-Sloan J.S. et al., 2003). За последнее десятилетие в Европе отмечено увеличение 5-летней выживаемости больных злокачественными опухолями яичников на 3% (с 32 до 35%), а в США - на 4% (с 36 до 39%). Полагают, что это связано не столько с улучшением диагностики, сколько с применением более эффективных платина-содержащих препаратов в лечении диссеминированных форм рака яичников (Andrews S., 2011).

Опухолевых маркеров для выявления ранних стадий рака яичников не существует, за исключением СА-125, уровень которого в сыворотке крови пропорционален объему поражения, а стало быть, характерен для более запущенных стадий болезни, когда опухоль вышла за пределы капсулы. Поэтому, повышенный уровень СА-125 до операции может служить существенным показателем для контроля над течением болезни в период лечения и последующего наблюдения (Spriggs D., 2003). В тоже время экспрессия таких опухолевых маркеров как CA-15-3, CA-19-9 и лизофосфатидиловой кислоты происходит независимо от СА-125.

Определение общей активности ЛДГ, человеческого хорионического гонадотропина и альфа-фетопротеина целесообразно при диагностике различных типов герминогенных опухолей, а ингибин В используют как маркер гранулезоклеточных опухолей яичников (A.M. Бейшембаев и соавт., 2010; Shahabi S. et al., 2011).

Ранняя диагностика рака яичников остается главной нерешенной проблемой в онкогинекологии. К сожалению, предлагаемые скрининговые программы для выявления рака яичников не отвечают большинству требований, сформулированных экспертами ВОЗ к скринингам в онкологии. Во-первых, до настоящего времени не разрешены вопросы патогенеза заболевания, а именно, остается неясным вопрос прогрессии доброкачественной кисты яичника в пограничную, а той, в свою очередь, в инвазивную карциному. Во-вторых, предлагаемые диагностические тесты не являются строго специфичными для выявления рака яичников, особенно на ранних стадиях, так как дают высокий процент ложноположительных результатов. В-третьих, окончательно не определена лечебная тактика при различной степени распространения опухолевого процесса, а результаты лечения рака яичников остаются неудовлетворительными. Вместе с тем, главной из трех выше перечисленных причин, почему не может быть рекомендован скрининг для рака яичников, остается недостаточная чувствительность и специфичность трех основных диагностических методов: пальпации, влагалищного ультразвукового исследования органов малого таза и определения концентрации СА-125 в сыворотке крови. Скрининг с использованием этих методов не позволяет поставить окончательный диагноз, однако позволяет выявить пациенток с потенциально высоким риском в отношении рака яичников (А.Ф.Урманчеева и соавт., 2008). В настоящее время в США для оценки эффективности скрининга в целях раннего выявления рака яичников Национальный раковый институт проводит проспективное рандомизированное исследование, в котором будут сопоставлены результаты стандартного обследования с ежегодным определением СА-125 и трансвагинальным УЗИ. Исследование запланировано на 10 лет с обследованием 76000 женщин в возрасте от 60 до 74 лет (Kramer B.S. et al., 1993). Европейское международное исследование с координационным центром в Лондоне запланировало рандомизированное исследование, в котором будут сравниваться результаты скрининга, включающего трансвагинальное УЗИ с последующей допплерометрией и определением СА-125, со стандартным клиническим обследованием. В исследование будет включено 120000 женщин постменопау зального возраста.

Трудности ранней диагностики и высокий метастатический и инвазивный потенциал рака яичников определяют необходимость углубленного изучения механизмов возникновения и распространения опухоли, знание которых могло бы стать основой для создания новых препаратов, целенаправленно воздействующих на процессы метастазирования, инвазии и тесно связанного с ними ангиогенеза. Исследование биологических особенностей доброкачественных, и в особенности, пограничных новообразований яичников может оказаться полезным для оценки вероятности их малигнизации.

В последние годы большое внимание уделяется проблеме неоангиогенеза в злокачественных и доброкачественных опухолях. Уже не вызывает сомнения тот факт, что опухоль не может развиваться и расти без образования в ней разветвленной сети сосудов, обеспечивающих снабжение клеток кислородом и питательными веществами (Folkman J., 1985; Salven et al., 1997; Piccino R. et al., 2002). Изучение молекулярных механизмов ангиогенеза позволило перейти от микроскопической оценки плотности сосудов в опухолевой ткани к исследованию конкретных молекул, участвующих в регуляции образования и роста новых сосудов в опухолевой ткани. Ведущая роль среди таких регуляторов, безусловно, принадлежит фактору роста эндотелия сосудов (vascular endothelial growth factor - VEGF) i

СЛЗ.Луценко и соавт., 2005; Ferrara et ah, 1995; Donovan et al., 1997). Ряд фактов указывает на то, что VEGF не только обладает проангиогенной активностью, но может и непосредственно участвовать в регуляции пролиферации клеток опухоли (SpannuthW.A. et al., 2009).

Биологические эффекты VEGF опосредованы специфическими мембранными рецепторами. В настоящее время считается, что в процессах опухолевого ангиогенеза принимают участие два типа рецепторов VEGF -VEGFR-1/Flt-l и VEGFR-2/Flk- 1/KDR. Биологическая роль VEGFR-1 и VEGFR-2, по-видимому, различна: VEGFR-1 индуцирует протеазную активность в эндотелиальных клетках и стимулирует миграцию в опухолевую ткань макрофагов, a VEGFR-2 вызывает дифференцировку, пролиферацию и миграцию клеток эндотелия (Е.С.Герштейн и соавт., 20106). Различаются ли функции двух типов рецепторов VEGF в опухолевых клетках, пока неясно.

Исследования последних лет позволили по-новому взглянуть и на», процессы ангиогенеза в репродуктивной системе женщин, как при физиологических изменениях, так и при различных патологических состояниях (Sher et al., 2009; Artini et al., 2008). Показана роль ангиогенных факторов и их рецепторов в процессе васкуляризации опухоли, взаимосвязь экспрессии VEGF и его рецепторов с прогнозом заболевания и эффективностью лечения, намечены новые направления терапевтических воздействий на злокачественный процесс (Holtz et al., 2008). Появление в последние годы целого ряда молекулярно-направленных («таргетных») препаратов, специфически подавляющих активность VEGF и его рецепторов делает исследование этих показателей у больных различными новообразованиями, в том числе и раком яичников, особенно актуальным (Collinson et al., 2008).

Матриксные металлопротеиназы при раке яичников считают одним из наиболее клинически перспективных направлений в области изучения роли этой протеолитической системы при различных опухолях человека. ММП-2 наиболее известна как протеаза, гидролизующая коллаген IV типа — основной компонент базальной мембраны эпителиальных опухолей, или коллагеназы, но она также разрушает другие существенные компоненты экстрацеллюлярного матрикса и обладает желатинолитической (желатиназной) активностью. Регуляция активности коллагеназ является сложным и до сих пор до конца не изученным процессом, важную роль в котором играют тканевые ингибиторы ММП (ТИМП). В экспериментальных' исследованиях продемонстрирована важная роль ММП-2 в формировании инвазивного потенциала клеток рака яичников (Kenny H.A. et al., 2008, 2009), причем индукция ММП является одним из ключевых механизмов проявления проинвазивных эффектов эпидермального (EGF) (Ellerbroek S.M. et al., 2001а, 2001b) и ^-трансформирующего факторов роста ((3-TGF) (Lin S.W. et al., 2000; Nishikawa A. et al., 2000; Rodriguez G.C. et al., 2001). Показано также, что ММП-2, наряду с ММП-9 находятся в комплексном взаимодействии с ключевым активатором ангиогенеза - VEGF. С одной стороны, коллагеназы индуцируют секрецию VEGF опухолевыми клетками, что способствует образованию асцита (Belotti D. et al., 2003; Manenti L. et al., 2003; Zhang A. et al., 2006), a, с другой стороны, секретируемый опухолью VEGF регулирует экспрессию коллагеназ в строме, влияя на инвазивную способность опухоли (Wang F.Q. et al, 2006; Belotti D. et al., 2008). Активность ММП-2 и ММП-9 в культивируемых клетках рака яичников увеличивается и под действием гормонов стресса (катехоламинов), при этом в 2-3 раза возрастает инвазивность опухолевых клеток в тестах in vitro (Sood А.К. е al., 2004,2006; Lutgendorf S.K. et al., 2008).

Представленные данные современной литературы указывают на актуальность проведения представленного одновременного сравнительного исследования содержания VEGF и ММП-2 в сыворотке крови и ткани опухоли больных злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников. Трудности ранней диагностики и высокий метастатический и инвазивный потенциал рака яичников определяют необходимость углубленного изучения механизмов распространения опухоли, знание которых могло бы стать основой для создания новых препаратов, целенаправленно воздействующих на процессы метастазирования и инвазии. В этой связи исследование ММП и ангиогенных факторов при раке яичников - одно из наиболее клинически перспективных направлений.

Цель настоящего исследования - анализ клинических перспектив исследования- матриксной металлопротеиназы 2 типа (ММП-2), фактора роста эндотелия сосудов (УЕОБ) и его рецепторов (УЕОБ11-1, УЕОРЯ-2) в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.

Для- достижения поставленной цели необходимо было^ решить, следующие задачи:

1. Иммуноферментным методом определить содержание "ММП-2 в сыворотке крови и< опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников.

3. Исследовать содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с учетом основных клинических (возраст, стадия заболевания, наличие асцита, репродуктивный статус) и морфологических (гистологическое строение и степень дифференцировки опухоли) характеристик заболевания и сопоставить с таковыми показателями при пограничных и доброкачественных новообразованиях яичников.

4. Изучить взаимосвязь содержания ММП-2, УБвР, УЕОРЯ-1, УЕОРК-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с уровнем сывороточного опухолевого маркера СА-125.

5. Изучить возможность комплексного использования клинических, морфологических факторов и биохимических маркеров (ММП-2, УБвР, УЕСРЯ-1, \HEGFR-2, СА-125) в диагностике, оценке инвазивного и метастатического потенциала новообразований яичников.

Научная новизна исследования Впервые в отечественной практике проведено одновременное сравнительное иммуноферментное определение содержания нескольких биохимических маркеров (ММП-2, УЕОБ, УЕОРК-1, УЕОРЯ-2, СА-125) в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников с учетом их связи с основными клинико-морфологическими характеристиками опухоли.

Обнаружено, что содержание ММП-2 в опухолях больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников не различалось достоверно. При этом в группе больных раком яичников установлена прямая достоверная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (г3=0,43; р=0,01), тогда как у больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников этой зависимости не отмечено.

Выявлены достоверно высокие уровни ММП-2 в сыворотке крови больных с двусторонним раком яичников, которые положительно коррелировали с содержанием маркера в первичной опухоли (г5=0,64; р—0,001).

Наиболее высокие показатели ММП-2 обнаружены в сыворотке крови и опухоли при серозном раке яичников, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, при распространенных III и IV стадиях заболевания, при метастазах опухоли в печени, при диссеминации процесса по брюшине и при наличии асцита.

Показано, что содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли не зависело от гистологического строения пограничных и доброкачественных новообразований, яичников. При этом; у больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников сывороточные уровни СА-125 и ММГ1-2 не были связаны корреляционной зависимостью; а высокие концентрации СА-125 независимо от значений ММП-2 указывали на наличие рака яичников и чаще при распространенном процессе.

Содержание УЕОР в сыворотке крови практически; здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников (медианы соответственно 201 и 318 пг/мл; р—0,001), при этом более высокие медианы УЕ6Е выявлены в сыворотке крови больных раком, чем доброкачественными^ и пограничными опухолями яичников? (соответственно 428, 289 и 167 пг/мл). Кроме того, обнаружено усиление обратной связи между уровнями ММП-2 и УЕвР в ткани первичной опухоли по мере увеличения содержания СА-125 в сыворотке крови больных новообразованиями яичников.

Не установлено достоверных различий в содержании УЕОРК-1 и УЕОРК-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опухолями яичников. Однако медиана концентрации

УБОРЫ-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше по сравнению с больными раком яичников, при этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между ММП-2 и УЕОБК-1 в сыворотке крови (г5=0,4; р=0,017), которая отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями яичников.

У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и УЕвБ в опухоли (г3=-0,44; р=0,0001), которая усиливалась по мере увеличения концентрации СА-125 в сыворотке крови.

Практическая значимость исследования

Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение УЕвБ/УЕОБК-1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных раком яичников (р=0,003), что может быть использовано для» выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках (чувствительность теста - 83,9%; специфичность - 73,6%). Диагностическая ценность определения только СА-125 в сыворотке крови больных раком и доброкачественными новообразованиями яичников недостаточна (чувствительность теста - 89,2%; специфичность - 35,0%).

Высокие показатели ММП-2 и \TEGF выявлены в сыворотке крови у больных раком яичников с ранним прогрессированием заболевания, чем у пациенток без такового. ,

Основные положения, выносимые на защиту 1. Уровни ММП-2 в сыворотке крови • практически здоровых женщин, больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников достоверно не различалось, а концентрация ММП-2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражала основные клинические характеристики ¡заболевания (возраст, данные гинекологического анамнеза, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение, размер- опухоли) и не связана с сопутствующими, соматическими заболеваниями.

3. Наиболее высокие показатели ММП-2 выявлены в сыворотке крови и опухоли при серозном Р Я, умеренной и низкой степени дифференцировки опухоли, 1П-1У стадиях заболевания, при наличии асцита. Достоверно высокие уровни ММП-2 обнаружены в сыворотке больных с двусторонним РЯ.

4. Содержание УЕОБ в сыворотке крови практически здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников. При этом, не установлено достоверных различий в содержании УЕОБК-Г и УЕОР11-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опзгхолями яичников

5. Медиана концентрации' УЕОРК-ДГ в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно-выше по сравнению с больными РЯ, при? этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между ММП-2 и УЕбРЫ-Г в сыворотке крови, которая отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями яичников:

6. У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 и УЕОР в опухоли, которая усиливалась по мере увеличения-концентрации СА-125 в сыворотке крови.

7. Значения С А-125 менее 100 Ед/мл, соотношение УЕОР/УЕОР-К1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных РЯ (р=0,003), что может быть использовано для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках. При этом, высокие показатели ММП-2 и УБОР выявлены у больных РЯ с ранним прогрессированием заболевания фоне проводимой химиотерапии.

Апробация работы Основные результаты диссертации доложены на: ХУ1 Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 6-10 апреля 2009г.); научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 28-30 сентября 2009г.); международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 10-11 ноября 2009г.); XVII Российском Национальном Конгрессе «Человек и« лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.).

Публикации результатов исследования По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, 3 из них в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы Диссертация изложена на 156 страницах машинописного текста, включает введение, обзор данных литературы, главу «Материалы и методы исследования», главу «Результаты собственных наблюдений», обсуждение полученных данных, выводы, список цитируемой литературы, который

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Крюк, Юлия Васильевна

Выводы

2. Показатели ММП-2 в опухолях больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников не различались. При этом в группе больных раком яичников установлена прямая достоверная корреляционная-зависимость между содержанием ММП-2 в сыворотке крови и опухоли (г3=0,43; р=0,01), у больных доброкачественными и пограничными новообразованиями яичников этой зависимости не выявлено.

3. Содержание ММП-2 в сыворотке крови и опухоли не зависело от гистологического строения погр'аничных и доброкачественных новообразований яичников и было' наиболее высоким при серозном раке яичников с умеренной и низкой степенью дифференцировки опухоли, при П1-1У стадиях заболевания и наличии асцита. Показатели ММП-2 в -сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников не отражали основные клинико-морфологические характеристики заболевания: возраст, состояние репродуктивной функции, гистологическое строение и размер опухоли.

4. У больных раком, пограничными и доброкачественными новообразованиями яичников уровни СА-125 и ММП-2 в сыворотке крови не были связаны корреляционной зависимостью, а высокие концентрации СА-125 независимо от значений ММП-2 указывали на наличие рака яичников.

5. Содержание УЕОБ в сыворотке крови практически здоровых женщин было достоверно ниже, чем в общей группе больных новообразованиях яичников (медианы соответственно 201 и 318 пг/мл; р=0,001), при этом более высокие медианы УЕОБ выявлены в сыворотке крови больных раком, чем доброкачественными и пограничными опухолями яичников (соответственно 428, 289 и 167 пг/мл). У больных новообразованиями яичников всех групп обнаружена обратная корреляционная зависимость между содержанием УЕвР и ММП-2 в опухоли (г8=-0,44; р=0,0001), которая усиливалась по мере увеличения концентрации сывороточного СА-125.

6. Не установлено достоверных различий в содержании УЕ6РК-1 и УЕСРЯ-2 в сыворотке крови и опухоли больных раком, пограничными и доброкачественными опухолями яичников: Однако медиана концентрации УБвРИ-1 в сыворотке крови практически здоровых женщин была достоверно выше, чем у больных раком яичников, при этом у последних обнаружена достоверная прямая корреляционная зависимость между ММП-2 и- УЕОРК-1 в сыворотке крови (г3=0,4; р=0,017), которая, отсутствовала у больных доброкачественными и пограничными опухолями:

7. Значения СА-125 менее 100 Ед/мл, соотношение УЕОР/УЕОРК-1 менее 5 и уровни ММП-2 в пределах нормы (160-303 нг/мл) выявлены у 73,3% больных доброкачественными, у 28,6% пограничными и только у 16,1% больных раком яичников (р=0,003), что может быть использовано- для выявления пациенток с высоким риском злокачественного характера новообразования в яичниках (чувствительность теста - 83,9%, специфичность - 73,6%). к

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Крюк, Юлия Васильевна, Москва

1. Абелев Г.И., Эрайзер T.J1. На пути к пониманию природы рака // Биохимия.-2008.-том 73, №5.-с.605-617.

2. Барышников А.Ю., Степанова Е.В., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей // Успехи современной биологии.-2000.-том 120, №6.-с.599-604.

3. Бассалык Л.С. (Под ред.). Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека // М.-Медицина.-1987.-223с.

4. Бахоева К.А. Клиническое значение ингибиторов апоптоза у больных серозными новообразованиями яичников. Автореф.дисс. .канд.мед.наук // М.-ГОУ ВПО МГМСУ.-2010.-24с.

5. Бейшембаев A.M., Любимова Н.В., Абаев В.М., Жордания К.И., Хайленко В. А. Применение ингибина В при рецидивах гранулезоклеточных опухолей яичников // Опухоли женской репродуктивной системы.-2010.-№3.-с.68-72.

6. Беляева Л.Е., Шебеко В.И. Гинекологическая эндокринология: патофизиологические основы // М.-Медицинская литература.-2009.-256с.

7. Бережная Н.М., Чехун В.Ф. Цитокины и стимуляция роста опухолей. В кн.: «Иммунология злокачественного роста» // Киев.-Наукова Думка.-2005.-С.652-687.

8. Бокин И.И. Микрометастазы рака яичников в костный мозг (клинико-иммунологические особенности). Автореф.дисс.канд.мед.наук // М.-РОНЦ им. Н.Н.Блохина PAMH.-2010.-24c.

9. Винокуров В.Л. Рак яичников: закономерности метастазирования и выбор адекватного лечения больных // Сн.-Петербург.-Изд-во «Фолиант».- 2004.-336с.

10. Ю.Высоцкий М.М. Патогенетические особенности и выбор хирургического объема и доступа при лечении больных доброкачественными новообразованиями яичников // Автореф.дисс.докт.мед.наук.-М.-2006.

11. Герштейн Е.С. Эпидермальный и альфа-трансформирующий факторы роста и их рецепторы в некоторых опухолях человека: распределение, характеристика, клиническое значение // Автореф.дисс.докт.биол.наук // М.-РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН.-1996.

12. Герштейн E.G., Короткова Е.А., Щербаков* A.M. и соавт. Матриксные металлопротеиназы 7 и 9 и их тканевые ингибиторы 1 и 4 типа в опухолях и плазме крови больных раком толстой кишки // Бюлл эксп биол мед.-2007.-Уо11.143, №3.-р.438-441.

13. Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Молекулярные маркеры прогноза и лекарственной чувствительности рака молочной железы / Новое в терапии рака молочной железы / Под ред. Н.И.Переводчиковой // М.-1998.-е. 19-24.

14. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2008г. // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН.-2010.-том 21, №2 (Приложение 1).-160с.

15. Давыдов М.И., Кузнецов В.В., Нечушкина В .Ml (Под ред.). Лекции по онкогинекологии //М.-«МЕДпресс-информ».-2009.-432с.

16. Дбар Ж.Н. Экспрессия ангиогенных факторов при раке яичников III-IV стадии // Дисс.канд.мед.наук. М. - 2003.

17. Жордания К.И., Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. и соавт. Опухоли яичников. Глава в кн.: «Клиническая онкогинекология» (Под ред. профессораВ.П.Козаченко) // М.-Медицина.-2005.-с.220-269.

18. Жуков Н.В., Тюляндин С.А. Целевая терапия в лечении солидных опухолей: практика противоречит теории // Биохимия.-2008.-том 73, №5.-с.751-768.

19. Имянитов E.H. Молекулярная диагностика в онкологии // Мол. Биол.-2008.-ТОМ 42, №4.-С.772-785.

20. Карселадзе А.И. Клинико-морфологическая диагностика опухолей яичников // Архив патологии (приложение):-2005.-64с.

21. Киселев С.М., Луценко C.B., Северин С.Е., Северин Е.С. Ингибиторы опухолевого ангиогенеза // Биохимия.-2003.-том 68, №5.-с.611 -631.

22. Кузнецов В.В., Хайленко В.А. (Под ред.). Лекции по онкогинекологии //М.-000 «ЛЮКС ПРИНТ».-2009.-212с.

23. Кушлинский Н.Е., Е.С.Герштейн. Роль фактора роста эндотелия сосудов при раке молочной железы // БЭБМ.-2002. том 133, №6. -с.604-612.

24. Луценко C.B., Киселев С.М., Северин С.Е. Опухолевый ангиогенез / В книге «Рак молочной железы» (Под ред. Н.Е.Кушлинского, С.М.Портного, К.П.Лактионова) // М.-Редакционно-издательский совет при Президиуме РАМН.-2005.-С.110-162.

25. Луценко C.B., Киселев С.М., Фельдман Н.Б., Северин С.Е. Молекулярные механизмы ангиогенеза в физиологических и патологических процесса // В кн.: Введение в молекулярную медицину под ред. М.А.Пальцева.-М.-Медицина.-2004.-с.446-495.

26. Любченко Л.Н:, Поспехова Н.И., Параконная A.A., Лушникова A.A., Чевкина Е.М. Рак 'молочной железы и/или яичников- в составе наследственного онкологического синдрома // Опухоли женской репродуктивной системы.-2009:-№1-2.-с.59-63.

27. Манухин И.Б., Геворкян М:А., Кушлинский Н.Е. Синдром поликистозных яичников // М.-Медицинское информационное агенство.-2004.-190с.

28. Молчанов> O.E. Цитокинотерапия злокачественных опухолей интерлейкином-2 // Санкт.-Петербург.-2002.-39с.

29. Мясищева Н.В. Факторы роста и цитокины как модуляторы канцерогенеза // В кн.: «Канцерогенез» (Под ред. Д.Г.Заридзе).-М.-Научный мир.-2000.-с.287-289.

30. Назаренко Т.А. Стимуляция функции яичников (2-е издание) // М.-«МЕДпресс-информ».-2009.-272с.

31. Новикова Е.Г., Антошечкина Е.Т. Ошибки в диагностике и лечении злокачественных опухолей женских половых органов. Глава в кн.: «Ошибки в клинической онкологии» (Под ред. В.И.Чиссова и А.ХТрахтенберга) // М.-Медицина.-2001.-с.422-455.

32. Петров С.В., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека // Казань.-Издательство «Титул».-2004.-451с.

33. Полушкина И.Н., Степанова Е.В., Дбар Ж.Н. Молекулярно-биологические маркеры, характеризующие апоптоз, пролиферацию и ангиогенез при раке яичников // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН.-2004.-№4.-с.60-64.

34. Степанова Е.В., Полушкина И:Н;, Дбар Ж.Н., Ермилова В.Д., Шишкин Ю.В., Барышников A.IO:, Личиницер М.Р. Молекулярно-биологические маркеры рака яичников // Российскийбиотерапевтический журнал.-2002.-№4.-с. 14-20.

35. Тюляндин С.А., Жуков Н.В. Анти-VEGF терапия. Клиническая эффективность, влзможные механизмы противоопухолевого эффекта и резистентности//Вопросы онкологии>2009:-том^55, №3.-с.375-381.

36. Тюляндина А., Стенина М., Кузнецов В., Тюляндин С. Внутрибрюшная химиотерапия при распространенном раке яичников // Врач.-2010.-№6.-с.6-9.

37. Хансон К.П., Имянитов Е.Н. Молекулярная генетика рака яичников. Глава в кн.: «Практическая онкология: избранные лекции» (Под ред. А.Ф.Урманчеевой, С.А.Тюляндина, В.М.Моисеенко) II Санкт-Петербург.-Издательство «Центр ТОММ».-2008.-с.313-319.

38. Хохлова С.В. Новый взгляд на лечение рака яичников // Опухоли женской репродуктивной системы.-2010.-№1.-с.68-71.

39. Черноглазова Е.В., Дбар Ж.Н., Степанова Е.В. Молекулярные механизмы опухолевого неоангиогенеза // Успехи современной биологии.-2004.-том 124, №5.-с.480-488.

40. Юсифов А.И. Активаторы плазминогена урокиназного и ткаевого типа (иРА и tPA) и их ингибитор PAI-1 в опухолях костей. Автореф.дисс.канд.мед.наук // М.-РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН.-2001.-31с.

41. А1оп Т., Hemo II, Itin A. et al. Vascular endothelial growth factor acts as a survival factor for newly formed retinal vessels and has implications for retinopathy ofpermaturity //Nat. Med.-1995.-Vol.l.-p.l024-1028.

42. Andrews S. Злокачественные новообразования женских половых органов. Глава в руководстве «Противоопухолевая химиотерапия» (Под ред. R.T.Skeel) // М.-Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа».-2011.-С.441-479.

43. Angiolillo A.L., Sgadari С., Taub D.D. et al. Human interferon-inducible protein 10 is a potent inhibitor of angiogenesis in vivo И J. Exp. Med.-1995.-Vol.l82.-p.l55-162.

44. Apte S.M., Fan D., Killion J.J., Fidler IJ. Targeting the platelet-derived growth factor receptor in antivascular therapy for human ovarian carcinoma // Clin. Cancer Res.-2004.-Vol. 10, N.3.-p.897-908.

45. Armstrong D.K., Bundy B., Wenzel L. et al. Intraperitoneal cisplatin and paclitaxel in ovarian cancer//N. Engl. J. Med.-2006.-Vol.354.-p.34-43.

46. Artini P.G., Ruggiero M., Monteleone P. et al. Vascular endothelial growth factor and its soluble receptor in benign and malignant ovarian tumors // Pharmacother.-2008.-Vol.62.-p.373-377.

47. Asano, M., Yukita, A., Suzuki, H. Wide spectrum of antitumor activity of a neutralizing monoclonal antibody to human vascular endothelial growth factor//Jpn. J. Cancer Res.-1999.-Vol.90, N.l.-p.93-100.

48. Azad N.S., Posadas E.M., Kwitkowski V.E. et al. Combination targeted therapy with sorafenib and bevacizumab results in enhanced toxicity and antitumor activity // J. Clin. Oncol.-2008.-Vol.26, N.22.-p.3709-3714.

49. Bachelder R. E., Yoon S.-O., Franci C. et al. Glycogen synthase kinase-3 is an endogenous inhibitor of Snail transcription: implications for the epithelial-mesenchymal transition // J. Cell Biol.-2005.-Vol. 168.-p.29-33.

50. Baker A.H., Edwards D.R., Murphy G. Metalloproteinase inhibitors: biological actions and therapeutic opportunities // J Cell Sci.-2002.-Vol. 115 (Pt 19).-p.3719-3727.

51. Barnholtz-Sloan J.S., Schwartz A.G., Qureshi F., Jacques S., Malone J., Munkarah A.R., Ovarian cancer: changes in patterns at diagnosis and relative survival over the last three decades // Am. J. Obstet. Gynecol.-2003.-Vol. 189.-p. 1120-1127.

52. Belotti D., Calcagno C., Garofalo A. et al. Vascular endothelial growthfactor stimulates organ-specific host matrix metalloproteinase-9 expression and ovarian cancer invasion // Mol. Cancer Res.-2008.-Vol.6, N.4.-p.525-534.

53. Bergers G., Hanagan D. Models of resistance to anti-angiogenic therapy // Nat. Rev. Cancer.-2008.-Vol.8.-p.592-603.

54. Biagi JJ., Oza A.M., Grimshaw R. et al. A phase II study of sunitinib (SU11248) in patients with recurrent epithelial ovarian cancer, fallopian tube or primary peritoneal carcinoma-NCIC CTG IND 185 // J. Clin. Oncol.-2008.-Vol.26, abstract 5522.

55. Brand K., Baker A.H., Perez-Canto A. et al. Treatment of colorectal liver metastases by adenoviral transfer of tissue inhibitor of metalloproteinases-2 into the liver tissue // Cancer Res.-2000.-Vol.60, N.20.-p.5723-5730.

56. Bristow R.E., Del Carmen M.G., Pannu H.K. et al. Clinically occult recurrent ovarian cancer: patient selection for secondary cytoreductive surgery using combined PET/CT // Gynecol. Oncol.-2003.-Vol.90.-p.519-528.

57. Bristow R.E., Eisenhauer EX., Santillan A., Chi D.S. Delaying the primary surgical effort for advanced ovarian cancer: a systematic review of neoadjuvant chemotherapy and interval cytoreduction // Gynecol. Oncol.-2007.-Vol. 104.-p.480-490.

58. Buckanovich R.J., Sasaroli D., O'Brien-Jenkins A. et al. Tumor vascular proteins as biomarkers in ovarian cancer // J. Clin. Oncol.-2007.-Vol.25, N.7.-p.852-861.

59. Buckstein R., Meyer R.M., Seymour L. et al. Phase II testing of sunitinib: the National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group IND Program Trials IND. 182-185 // Current Oncology.-2007.-Vol. 14, N.4.-p. 154-161.

60. Campos S.M., Penson R.T., Matulonis U. et al. STAC: a randomized phase II trial of avastin or avastin + erlotinib as first line consolidation chemotherapy after standard therapy // British Gynecological Society

61. Meeting, 2008, abstract 93.

62. Cancer Incidence in Five Continents // IARC Sci. Publ. Lyon.-1997.-Vol.7.-143p.

63. Cannistra S.A., Matulonis U.A., Penson R.T. et al. Phase II study of bevacizumab in patients with platinumresistant ovarian cancer or peritoneal serous cancer//J. Clin. 0ncol.-2007.-Vol.25, N.33.-p.5180-5186.

64. Cao Y., Linden P., Farnebo J. et al. Vascular endothelial growth factor C induced angiogenesis in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1998.-Vol.95.-p.14389-14394.

65. Celiker M.Y., Wang M., Atsidaftos E.,et al. Inhibition of Wilms' tumor growth by intramuscular administration of tissue > inhibitor of metalloproteinases-4 plasmid DNA // Oncogene.-2001 .-Vol.20, N.32.-p.4337-4343.

66. Cho S.M., Ha H.K., Byun J.Y. et al. Usefulness of PDG PET for assessment of early recurrenr epithelial ovarian cancer // Am. J. Roentgenol.-2002.-Vol. 179.-p.391 -395.

67. Coleman R:L., Broaddus R.R., Bodurka D.C. et al. Phase II trial of imatinib mesylate in patients with recurrent platinum- and taxane-resistant epithelial ovarian and primary peritoneal cancers // Gynecologic 0ncology.-2006.-Vol.101, N.l.-p.l26-131.

68. Colombo N., Mangili G., Mammoliti S. et al. Aflibercept (VEGF Trap) for advanced epithelial ovarian cancer (EOC) patients (pts) with symptomatic malignant ascites: preliminary results of a pilot study // J. Clin. Oncol.-2008.-Vol.26, abstract 14598.

69. Curran S., Murray G.J. Matrix metalloproteinases: molecular aspects of their roles in tumour invasion and metastasis // Eur. J. Cancer.-2000.-Vol.36, N.13.-p.l621-1630.

70. Davidson B., Goldberg I., Gotlieb W.H. et al. High levels of MMP-2, MMP-9, MT1-MMP and T1MP-2 mRNA correlate with poor survival in ovarian carcinoma // Clin Exp Metastasis.-1999.-Vol. 17, N.10.-p.799-808.

71. Davidson B., Goldberg I., Gotlieb W.H. et al. The prognostic value of metalloproteinases and angiogenic factors in ovarian carcinoma // Mol Cell Endocrinol.-2002.-Vol. 187, N. 1 -2.-p.39-45.

72. Demeter A., Sziller I., Csapo Z. et al. Molecular prognostic markers in recurrent and in non-recurrent epithelial ovarian cancer // Anticancer Res.-2005.-Vol.25, N.4.-p.2885-2889.

73. Deryugina E.I., Quigley J.P. Matrix metalloproteinases and tumor metastasis // Cancer Metastasis Rev.-2006.-Vol.25, N.l.-p.9-34.

74. Deiyugina E.I., Quigley J.P. Pleiotropic roles of matrix metalloproteinases in tumor angiogenesis: contrasting, overlapping and compensatory functions // Biochim Biophys Acta.-2010.-Vol. 1803, N.l.-p.l03-120.

75. Dhanabal M., Ramchandran R., Waterman M. J. et al. Endostatin: yeast production, mutants, and antitumor effect in renal cell carcinoma // J. Biol. Chem.-1999.-Vol.274.-p.l 1721-11726.

76. Disaia P.J., Bloss J.D. Treatment of ovarian cancer: new strategies // Gynecol. Oncol.-2003.-Vol.90.-p.39-44.

77. Dome B., Hendrix M.J., Paku S., Tovari J., Timar J. Alternative vascularization mechanisms in cancer: pathology and therapeutic implications //Am. J. Pathol.-2007.-Vol.170.-p.l-15.

78. Donovan D., Harmey J.H. Toomey D., Osborne D.H., Redmond H.P., Bouchier-Hayes DJ. TGF beta-1 regulation of VEGF production by breast cancer cells see comments. // Ann. Surg. Oncol.- 1997.-Vol.4, N.8.-p.621-627.

79. Dubeau L. The cells of origin of ovarian epithelial tumors and the ovarian surface epithelium. Dogma: does the Emperor have no clothes // Gynaecol. Oncol.-1999.-Vol.72.-p.437-442.

80. Duffy M.J. Proteases as prognostic markers in cancer // Clin Cancer Res.-1996.-Vol.2, N.4.-p.613-618.

81. Duhoux F.P., Machiels J.-P. Antivascular Therapy- for Epithelial Ovarian Cancer // Journal of Oncology.-2009:-Vol.2010.-p. 1 -16.

82. Duncan T.J., Al-Attar A., Rolland P. et al. Vascular endothelial growth factor expression in ovarian cancer: a model for targeted use of novel therapies? // Clin. Cancer Res.-2008.-Vol. 14, N.10.-p.3030-3035.

83. Ebos J.M., Lee C.R., Cruz-Munoz W., Bjarnason G.A., Christensen J.G., Kerbel R.S. Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis // Cancer Cell.-2009.-Vol.15.-p.232-239.

84. Egeblad M., Werb Z. New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression //Nat. Rev. Cancer.-2002.-Vol.2, N.3.-p. 161-174.

85. Eisen T., Boshoff C., Mak I. et al. Continuous low dose Thalidomide: a phase II study in advanced melanoma, renal cell, ovarian and breast cancer //Br. J. Cancer.-2000.-Vol.82,.N.4.-p,812-817.

86. Ellerbroek S.M., Halbleib J.M., Benavidez M. et al. Phosphatidylinositol 3-kinase activity in epidermal growth factor-stimulated matrix metalloproteinase-9 production and cell: surface association // Cancer Res.-2001a.-Vol. 61 (5).-p.l855-1861.

87. Ellerbroek S.M., Wu Y.I., Overall C.M., Stack M.S. Functional interplay between type I collagen and cell surface matrix metalloproteinase activity // J Biol Chem.-2001b.-Vol. 276 (27).-p.24833-24842.

88. Fader A.N., Rose P.G. Role of surgery in ovarian carcinoma // J. Clin. Oncol.-2007.-Vol.25 .-p.2873-2883.

89. Feinberg R.N., Beebe D.C. Hyaluronate in vasculogenesis // Science.-1983.-Vol.220.-p. 1177-1179.

90. Ferrara N. The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis // Breast Cancer Res. Treat.-1995.-Vol.36, N.2.-p. 127-137.

91. Ferrara N., Carver-Moore K., Chen H., Dowd M., Lucy Lu K., CTShea S. et al. Heterozigous embrionic lethality induced by targeted inactivation of the VEGF gene // Nature.-1996.-Vol.380.-p.439-442.

92. Ferrara N., Davis-Smith T. The biology of vascular growth factor // Endocrinol. Reviews.-1997.-Vol.l, N.18.-p.4-25.

93. Ferrara N., Gerber H.-P., LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors //Nature Medicine.-2003.-Vol.9, N.6.-p.669-676.

94. Foekens J.A., Portengen H., van Putten W.L.J, et al. Prognostic value of receptors for insulin-like growth factor 1, somatostatin, and epidermal growth factor in human breast cancer // Cancer Res.-1989.-Vol.49.-p.7002-7009.

95. Folkman J. Angiogenesis. In: Harrison's Textbook of Internal Medicine, 15th Edition. Braunwald E., Fauci A.S., Kasper D.L., Hauser S.L., Longo D.L., Jameson J.L., eds. New York: McGraw-Hill.-2001.-p.517-530.

96. Folkman J. Tumor angiogenesis // Adv. Cancer Res.-1985.-Vol.43.-p.175-230.

97. Folkman J. What is the evidence that tumours are angiogenesis dependent? // J. Natl. Cancer Inst.-1990.-Vol.82.-p.4-6.

98. Folkman J., Cotran R. Relation of vascular proliferation to tumor growth // Int. Rev. Exp. Pathol.-1976.-Vol. 16.-p.207-248.

99. Fong G., Rossant J., Gertsenstein M., Breitman M. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium // Nature.-1995.-Vol.376.-p.66-70.

100. Furuya M., Ishikura H., Kawarada Y. et al. Expression of matrix metalloproteinases and related tissue inhibitors in the cyst fluids of ovarian mucinous neoplasms // Gynecol Oncol.-2000.-Vol. 78 (2).-P. 106-112.

101. Goldman S., Shalev E. MMPS and TIMPS in ovarian physiology and pathophysiology // Front Biosci.-2004.-Vol. 9.-P. 2474-2483.

102. Guidi A., Abu J.G., Tognazzi K. et al. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptors in endometrial carcinoma// Cancer.-1996.-Vol.86.-p.454-460.

103. Guidi A.J., Abu J.G., Tognazzi K., Dvorak H.F., Brown L.F. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptors in endometrial carcinoma // Cancer. 1996. - Vol. 78. - p. 464-460.

104. Hanahan D., Folkman J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis // Cell.-1996.-Vol.86.-p.353-364.

105. Harris A.L. Anti-angiogenesis therapy and strategies for integrating it with adjuvant therapy. Recent Results // Cancer Res. 1998. - Vol. 152. - p. 341-52.

106. Haubner R. Tracer for angiogenesis imaging: potential targets and recent progress // J. Labell. Compounds and Radiopharm.-2003.-Vol.4, Suppl.l.-p.33-34.

107. Hicklin D.J., Ellis L.M. Role of the vascular endothelial growth factor pathway in tumor growth and angiogenesis // J. Clin. 0ncol.-2005.-Vol.23, N.5.-p.l011-1027.

108. Hida K., Hida Y., Amin D.N., Flint A.F., Panigrahy D., Morton C.C., Klagsbrun M. Tumor-associated endothelial cells with cytogenetic abnormalities // Cancer Res.-2004.-Vol.64.-p.8249-8255.

109. Hillen F., Griffioen A.W. Tumour vascularization: sprouting angiogenesis and beyond // Cancer Metastasis Rev.-2007.-Vol.26.-p.489-502.

110. Hollingsworth H.C., Kohn E.C., Steinberg S.M., Rothenberg M.L., Merino M.J. Tumor angiogenesis in advanced stage ovarian carcinoma // Am. J. Pathol. 1995. - Vol. 147. - p. 33-41.

111. Hoskins W., Perez C.A., Young R.C. Principles and Practice of Gynecologic Oncology.-2000.

112. Hu X.X., Li L., Li D.R. et al. Inhibitory effects of antisense MMP-9 oligodeoxynucleotides on invasiveness and adherence of ovarian cancer cells. // Zhonghua Zhong Liu Za Zhi.-2006.-Vol. 28 (9).-P. 662-665.

113. Huang L.W., Garrett A.P., Bell D.A. et al. Differential expression of matrix metalloproteinase-9 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 protein and mRNA in epithelial ovarian tumors // Gynecol 0ncol.-2000.-Vol. 77 (3).-P. 369-376.

114. Ivy S.P., Wick J.Y., Kaufman B.M. An overview of small-molecule inhibitors ofVEGFR signaling //Nat. Rev. Clin: Oncol.-2009.-Vol:6.-p.569-579.

115. Jacobs J., Shepherd J.H., Oram D.H. et al. (editors). Ovarian cancer.-2002.

116. Kamat A.A., Fletcher M., Gruman L.M. et al. The clinical relevance of stromal matrix metalloproteinase expression in ovarian cancer // Clin Cancer Res.-2006.-Vol. 12 (6).-P. 1707-1714.

117. Kenny H.A., Kaur-S., Coussens L.M., Lengyel E. The initial steps of ovarian cancer cell metastasis are mediated by MMP-2 cleavage of vitronectin and fibronectin // J Clin Invest.-200B.-Vol. 118 (4).-P. 13671379.

118. Kenny H.A., Lengyel E. MMP-2 functions as an early response protein in ovarian cancer metastasis // Cell Cycle.-2009.-Vol. 8 (5).-P. 683688.

119. Kim K., Li B., Winer J., Armanini M., Gillett N., Phillips H., Ferrara, N. Inhibition of vascular endothelial growth factor induced angiogenesis suppresses tumour growth in vivo //Nature. 1993. - Vol. 362. - p. 841-844.

120. Klagsbrun M., D'Amore P. A. Regulators of angiogenesis // Ann: Rev. Physiol.-1991 .-Vol.53 .-p.217-239.

121. Kurachi K., Davie E.W., Strydrom D.G., Riordan J.F., Vallie B.L. Seguence of the cDNA and gene for angiogenenin, a human angiogenesis factor // Biochemistry. 1985. - Vol. 24, N. 20. - p. 5495.

122. Lau M.T., Wong A.S., Leung P.C. Gonadotropins Induce Tumor Cell Migration and- Invasion by Increasing Cyclooxygenases Expression and Prostaglandin E2 Production in Human Ovarian Cancer Cells // Endocrinology.-2010.-Vol.-P.

123. Leenders W., Lubsen N., Altena M. et al. Design of a Variant of Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A) Antagonizing KDR/Flk-1 andFlt-1 //Lab. Invest.-2002.-Vol.82.-p.473-481.

124. Lerner-Marmarosh N., Miralem T., Gibbs P.E.M., Maines M.D. Human biliverdin reductase is an ERK activator; hBVR is an ERK nuclear transporter and is required for MAPK signaling // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2008.-Vol.l05.-p.6870-6875.

125. Lewandowski K.C., Komorowski J., O'Callaghan C.J. et al. Increased circulating levels of matrix metalloproteinase-2 and -9 in women with the polycystic ovary syndrome // J Clin Endocrinol Metab.-2006.-Vol. 91 (3).-P. 1173-1177.

126. Lutgendorf S.K., Lamkin D.M., Jennings N.B. et al. Biobehavioral influences on matrix metalloproteinase expression in ovarian carcinoma // Clin Cancer Res.-2008.-Vol. 14 (21).-P. 6839-6846.

127. Maatta M., Santala M., Soini Y. et al. Matrix metalloproteinases 2 and 9 and their tissue inhibitors in low malignant potential ovarian tumors // Tumour Biol.-2004.-Vol. 25 (4).-P. 188-192.

128. Maatta M., Talvensaari-Mattila A., Turpeenniemi-Hujanen T., Santala

129. M. Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and -9 (MMP-9) and their tissue inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2) in differential diagnosis between low malignant potential (LMP) and malignant ovarian tumours // Anticancer Res.-2007.-Vol. 27 (4C).-P. 2753-2758.

130. MacLean A.B., Wendy R.M.N., Kerstin R.J. et al. Role of angiogenesis in benign, premalignant and malignant vulvar lesions // J. Reprod. Med.-2000.-Vol.45, N.8.-p.609-612.

131. Malemud C.J. Matrix metalloproteinases (MMPs) in health and disease: an overview//Front Biosci.-2006.-Vol. 11.-P. 1696-1701.

132. Markman M., Liu P.Y., Rothenberg M.L. et al. Pretreatment CA-125 and risk of relapse in advanced ovarian cancer // J. Clin. 0ncoll-2006.-Vol.24'.-p. 1454-1458.

133. Martin L., Schilder R. Novel'approaches in advancing the treatment of epithelial* ovarian cancer: the role of angiogenesis inhibition // J'. Clin: Oncol.-2007.-Vol.25, N.20.-p.2894-2901.

134. Matei D., Kelich S., Cao L. et all PDGF BB induces VEGF secretion, in ovarian cancer // Cancer Biology and Therapy.-2007.-Vol.6, N.12.-p.1951-1959.i

135. Matulonis U.A., Berlin S.T., Krasner C.N., Tyburski K., Lee J., Roche M., Ivy S.P., Lenahan C., King M., Penson R.T. Cediranib (AZD2171) is anactive agent in recurrent epithelial ovarian cancer // J. Clin. 0ncol.-2008.-Vol.26.-p.5501.

136. McCluskey L.L., Dubeau L. Biology of Ovarian Cancer // Current Opinions in Oncology.-1997:-Vol.9.-p.465-470.

137. Mendiola M., Barriuso J., Redondo A. et al. Angiogenesisrelated gene expression profile with independent prognostic value in advanced ovarian carcinoma II PLoS ONE.-2008.-Vol.3, N.12.

138. Menendez D., Inga A., Snipe J. et al. A single-nucleotide polymorphism in a half-binding site creates p53 and estrogen receptor control of vascular endothelial growth factor receptor 1 // Mol. Cell Biol.-2007.-Vol.27.-p.2590-2600.

139. Merritt W.M., Lin Y.G., Spannuth W.A. et al. Effect of interleukin-8 gene silencing with liposome-encapsulated small interfering RNA on-ovarian cancer cell growth // Journal of the National Cancer Institute.-2008.-Vol.100, N.-5.-p.359-372.

140. Mesiano S., Ferrarre N., Jaffer R.B. Role of vascular endothelial growtfe factor in1 ovarian^'tcancer II Ami J; Patholl 1998! - Vol. 153. - p.1249-1256: ' . ' ^

141. Mignatti P:, Rifkin D.B. Plasminogen activators and matrix metalloproteinases in angiogenesis // Enzyme Protein.-1996.-Vol.49.-p. 117137.

142. Nakajima M., Welch D:R., Wynn D.M. et al: Serum and plasma M(r) 92,000 progelatinase levels correlate with spontaneous metastasis of rat13762NF mammary adenocarcinoma // Cancer Res.-1993.-Vol. 53 (23).-P. 5802-5807.

143. Naylor M.S., Stamp G.W., Davies B.D., Balkwill F.R. Expression and activity of MMPS and their regulators in ovarian cancer // Int J Cancer.-1994.-Vol. 58(1).-P. 50-56.

144. Nelson A.R., Fingleton B., Rothenberg M.L., Matrisian L.M. Matrix metalloproteinases: biologic activity and clinical implications // J Clin Oncol.-2000.-Vol. 18 (5).-P. 1135-1149.

145. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors //FASEB J.-1999.-Vol.l3.-p.9-22.

146. Nicolson G. Organ specificity of tumor metastasis: role preferential adhesion, invasion and growth of malignant cells at specific secondary sites // Cancer Metastasis Rev. 1988. - Vol. 7. - p. 143-188.

147. Nicosia S.V., Bai W., Cheng J.Q. et al. Oncogenic pathways implicated in ovarian epithelial cancer // Hematol Oncol Clin North Am.-2003,-Vol, 17 (4).-P. 927-943.

148. Nilsson M.B., Langley R.R., Fidler I.J. Interleukin-6, secreted by human ovarian carcinoma cells, is a potent proangiogenic cytokine // Cancer Res.-2005 .-Vol.65, N.23 .-p. 10794-10800.

149. Nishikawa A., Iwasaki M., Akutagawa N. et al. Expression of variousmatrix proteases and Ets family transcriptional factors in ovarian cancer cell lines: correlation to invasive potential // Gynecol Oncol.-2000.-Vol. 79 (2).-P. 256-263.

150. Nolen B., Marrangoni A., Velikokhatnaya L., Prosser D., Winans M., Gorelik E., Lokshin A. A Serum based analysis of ovarian epithelial tumorigenesis // Gynecol. Oncol.-2009.-Vol.l 12, N.l.-p.47-54.

151. O'Toole S.A., Sheppard B.L., Laios A. et al. Potential predictors of chemotherapy response in ovarian cancer—how do we define chemosensitivity? // Gynecologic Oncology.-2007.-Vol. 104, N.2.-p.345-351.

152. Obermair A., Kurz C., Czerwenka K., Thoma M., Kaider A., Wagner T. et al. Microvessel density and vessel invasion in lymph-node-negative breast cancer: effect, on recurrence-free survival // Int. J. Cancer.-1995.-Vol.62.-p.126-131.

153. Olson T.A., Mohanraj D., Carson L.F., Ramakrishnan S. Vascular permeability factor gene expression in normal and neoplastic human ovaries // Cancer Res.-1994.-Vol.54.-p.276-280.

154. OzalpS., Tanir H.M., Yalcin O.T. et al. Prognostic value of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase-B) expression in epithelial ovarian tumors // Eur J Gynaecol Oncol.-2003.-Vol. 24 (5).-P. 417-420.

155. Ozlos R. (editor.) Atlas of Clinical Oncology Ovarian Cancer. American Cancer Society.-2003.

156. Paley P.J., Staskus K.A., Gebhard K., Mohanraj D., Twiggs L.B., Ramakrishnan S. Vascular endothelial growth factor expression early stage ovarian carcinoma // Cancer.-1997.-Vol.80.-p.98-106.

157. Palmer J.E., Sant Cassia L.J., Irwin C.J., Morris A.G., Rollason T.P. Prognostic value of measurements of angiogenesis in serous carcinoma of the ovary // International Journal of Gynecological Pathology.-2007.-Vol.26, N.4.-p.395-403.

158. Park J.E., Keller G.-A., Ferrara N. The vascular endothelial growth factor (VEGF) isifirms: differantional deposition into the subepithelial extracellular matrix and bioactivity of ECM-bound VEGF // Mol. Biol. Cell. -1993.-Vol. 4.-p. 1317-1326.

159. Paulsen T., Ree A.H., Kaern J. et al. Expression of matrix metalloproteinase-2 in serous borderline ovarian tumors is associated with noninvasive implant formation // Eur J«Gynaecol Oncol.-2007.-Vol. 28 (5).-P. 356-363.

160. Perigny M., Bairati I., Harvey I. et al. Role of immunohistochemical overexpression of matrix metalloproteinases MMP-2 and MMP-11 in the prognosis of death by ovarian cancer // Am J Clin Pathol.-2008.-Vol. 129 (2).-P: 226-231.

161. Piccino R., Puopolo M., Rigault De Longrais I.A. et al. Fattori di crescita e carcinoma epiteliale ovarico // Minerva ginecol.-2002.-Vol.54, N.l.-p.33-52.

162. Pintucci G., Bikfalvi A., Klein S., Rifkin D.B. Angiogenesis and the fibrinolytic system // Semin. Thromb. Hemost. 1996. - Vol. 22, N. 6. - p. 517-24.

163. Powell D.E., Puls L., Raqell I. Current concept in epithelial ovarian tumours: does bening to malignant transformation occur? // Human Pathol.-1992.-Vol.23.-p.846-847.

164. Pulaski H.L., Spahlinger G., Silva I.A. et al. Identifying alemtuzumab as an anti-myeloid cell antiangiogenic therapy for the treatment of ovarian cancer // J. Transl. Med.-2009.-Vol.7: 49 (Published online 2009, June 19).

165. Ramakrishnan S., Subramanian I.V., Yokoyama Y., Geller M. Angiogenesis in normal and neoplastic ovaries // Angiogenesis.-2005.-Vol.8.-p. 169-182.

166. Ramnath N., Creaven P.J. Matrix metalloproteinase inhibitors // Curr Oncol Rep.-2004.-Vol. 6 (2).-P. 96-102.

167. Ravindranath N., Little-Ihrig L., Phillips H. S., Ferrara N., Zeleznik A.J. Vascular endothelial growth factor messenger ribonucleic acid expression in the primate ovary // Endocrinology.-1992.-Vol.131.-p.254-260.

168. Reynolds K., Farzaneh F., Collins W.P., Campbell S., Bourne T.H., -Lawton F., et al. Association of ovarian malignancy with expression of platelate-derived endothelial cell growth factor // J. Natl. Cancer Inst-1994.-Vol.86.-p. 1234-1238.

169. Risau W. Mechanisms of angiogenesis // Nature.-1997.-Vol.3 86.-p.671-674.

170. Rodriguez G.C., Haisley C., Hurteau J. et al. Regulation of invasion of epithelial ovarian cancer by transforming growth factor-beta // Gynecol Oncol.-2001.-Vol. 80 (2).-P. 245-253.

171. Ryo К., Tadao Т., Shinji S., Akira Y. Serum soluble fas level as a prognostic factor in patients with gynecological malignancies // Clin. Cancer Res.-2000.-Vol.6, N.9.-p.3576-3580.

172. Sakata K., Shigemasa K., Nagai N., Ohama K. Expression of matrix metalloproteinases (MMP-2, MMP-9, MT1-MMP) and their inhibitors (TIMP-1, TIMP-2) in common epithelial tumors of the ovary // Int J Oncol.-2000.-Vol. 17 (4).-P. 673-681.

173. Salven P., Manpaa H., Orpana A., Alitalo K., Joensuu H. Serum vascular endothelial growth factor is often elevated in disseminated cancer // Clin. Cancer Res. 1997. - Vol. 3, N. 5. - p. 647-651.

174. Sato Y. Transcription factor ETS-1 as a molecular target for angiogenesis inhibition // Hum. Cell, 1998. - Vol. 11, N. 4. - p. 207-214.

175. Sawada K., Radjabi A.R., Shinomiya N. et al. c-Met overexpression is a prognostic factor in ovarian cancer and an effective target for inhibition of peritoneal dissemination and invasion // Cancer Res.-2007.-Vol. 67 (4).-P. 1670-1679.

176. Seaman S.,. Stevens J., Yang M.Y., Logsdon D., Graff-Cherry C., St Croix B. Genes that distinguish physiological and pathological angiogenesis // Cancer Cell.-2007.-Vol.l l.-p.539-554.

177. Serov S.F., Scully R.E., Sobin L.H. Histological typing of ovarian tumours //Intern. Histol. Classif. of Tumours.-№9, Geneva, WHO.-1973.

178. Shahabi S., Sohaib А. Рак яичников. В кн.: «Онкогинекологический атлас. Классификация и определение стадии опухолей. Принципы диагностики и лечения // М.-Практическая медицина».-2011 .-с.30-34.

179. Shield K., Riley C., Quinn M.A. et ah Alpha2betal integrin affects metastatic potential of ovarian carcinoma spheroids by supporting disaggregation and proteolysis//J Carcinog.-2007.-Vol. 6.-P. 11.

180. Sillanpaa S., Anttila M., Suhonen K. et all Prognostic significance of extracellular matrix metalloproteinase inducer and matrix metalloproteinase 2 in epithelial,ovarian cancer // Tumour Biol.-2007b.-Vol. 28 (5).-P. 280289.

181. Sood A.K., Bhatty R., Kamat A.A. et al. Stress hormone-mediated invasion of ovarian cancer cells // Clin Cancer Res.-2006.-Voh 12 (2).-P. 369-375.

182. Spriggs D. Optimal sequencing in treatment of recurrent ovarian cancer//Gynecol. Oncol.-2003.-Vol.90.-p.39-44.

183. Stewart P.A., Wiley M.J. Developing nervous tissue induces formation of blood-brain characteristics in invading endothelial cells: a study using quail-chick transplantation chimeras // Dev. Biol. 1981. - Vol. 84.-p. 183-192.

184. Strieter R.M., Burdick M.D., Mestas J., Gomperts B., Keane M.P., Belperio J.A. Cancer CXC chemokine networks and tumour angiogenesis // Eur. J. Cancer.-2006.-Vol.42, N.6.-p.768-778.

185. Struewing J.P., Watson P., Easton D.F. et al. Effectiveness of prophylactic oophorectomy in inherited breast/ovarian cancer families // Ann. Oncol.-1994.-Vol.55.-384p., A70.

186. Survival,of Cancer Patients in Europe: Eurocare 2 Study // IARCI Sci. Publ. Lyon, I999:-15p.

187. Symowicz J., Adley B.P., Gleason K.J. et al. Engagement of collagen-binding integrins promotes matrix metalloproteinase-9-dependent E-cadherin ectodomain shedding in ovarian carcinoma cells // Cancer Res.2007.-Vol. 67 (5).-P. 2030-2039.

188. Takada Y., Ye X., Simon S. The integrins // Genome Biol.-2007.-Vol.8.-p.215.

189. Tew W., Colombo N., Ray-Caquard I. et al. VEGF-Trap for patients with recurrent platinum resistant epithelial ovarian cancer // J. Clin. Oncol.2008.-Vol.25, N.18S, abstract 5508.

190. Tobler N.E., Detmar M. Tumor and lymph node lymphangiogenesis-impact on cancer metastasis // J. Leukoc. Biol.-2006.-Vol.80.-p.691-696.

191. Ramakrishnan S., Subramanian I.V., Yokoyama Y., Geller M. Angiogenesis in normal and neoplastic ovaries // Angiogenesis.-2005.-Vol.8.-p. 169-182.

192. Ramnath N., Creaven P J. Matrix metalloproteinase inhibitors // Curr Oncol Rep.-2004.-Vol. 6 (2).-P. 96-102.

193. Ravindranath N., Little-Ihrig L., Phillips H. S., Ferrara N., Zeleznik A.J. Vascular endothelial growth factor messenger ribonucleic acid expression in the primate ovary // Endocrinology.-1992.-Vol.131.-p.254-260.

194. Reynolds K., Farzaneh F., Collins W.P., Campbell S., Bourne T.H., -Lawton F., et al. Association of ovarian malignancy with expression of platelate-derived endothelial cell growth factor // J. Natl. Cancer Inst.-1994.-Vol.86.-p.l234-1238.

195. Risau W. Mechanisms of angiogenesis // Nature.-1997.-Vol:386.-p.671-674.

196. Rodriguez G.C., Haisley C., Hurteau J. et al. Regulation of invasion of epithelial ovarian cancer by transforming growth factor-beta // Gynecol Oncol.-2001.-Vol. 80 (2).-P. 245-253.

197. Ryo К., Tadao Т., Shinji S., Akira Y. Serum soluble fas level as a prognostic factor in patients with gynecological malignancies // Clin. Cancer Res.-2000.-Vol.6, N.9.-p.3576-3580.

198. Sakata K., Shigemasa K., Nagai N., Ohama K. Expression of matrix metalloproteinases (MMP-2, MMP-9, MT1-MMP) and their inhibitors (TIMP-1, T1MP-2) in common epithelial tumors of the ovary // Int J Oncol.-2000.-Vol. 17 (4).-P. 673-681.

199. Salven P., Manpaa H., Orpana A., Alitalo K., Joensuu H. Serum vascular endothelial growth factor is often elevated in disseminated cancer // Clin. Cancer Res. 1997. - Vol. 3, N. 5. - p. 647-651.

200. Sato Y. Transcription factor ETS-1 as a molecular target for angiogenesis inhibition // Hum. Cell, 1998. - Vol. 11, N. 4. - p. 207-214.

201. Sawada K., Radjabi A.R., Shinomiya N. et al. c-Met overexpression is a prognostic factor in ovarian cancer and an effective target for inhibition of peritoneal dissemination and invasion // Cancer Res.-2007.-Vol. 67 (4).-P. 1670-1679.

202. Seaman S., Stevens J., Yang M.Y., Logsdon D., Graff-Cherry C., St Croix B. Genes that distinguish physiological and pathological angiogenesis // Cancer Cell.-2007.-Vol.l l.-p.539-554.

203. Serov S.F., Scully R.E., Sobin L.H. Histological typing of ovarian tumours //Intern. Histol. Classif. of Tumours.-№9, Geneva, WHO.-1973.

204. Shahabi S., Sohaib А. Рак яичников. В кн.: «Онкогинекологический атлас. Классификация и определение стадии опухолей. Принципы диагностики и лечения // М.-Практическая медицина».-2 011.-С.30-34.

205. Shield K., Riley C., Quinn M.A. et al. Alpha2betal integrin affects metastatic potential of ovarian carcinoma spheroids by supporting disaggregation and proteolysis // J Carcinog.-2007.-Vol. 6.-P. 11.

206. Sillanpaa S., Anttila M., Suhonen K. et al. Prognostic significance of extracellular matrix metalloproteinase inducer and matrix metalloproteinase 2 in epithelial ovarian cancer // Tumour Biol.-2007b.-Vol. 28 (5).-P. 280289.

207. Sillanpaa S., Anttila M., Voutilainen K. et all Prognostic significance of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in epithelial ovarian cancer // Gynecol.Oncol.-2007a.-Vol. 104 (2).-P. 296-303.

208. Sim B.K.L. Angiostatin and endostatin: endothelial' cell-specific endogenous inhibitors of angiogenesis and tumor, growth // Angiogenesis.-1998.-Vol.2.-p.37-48.

209. Sood A.K., Bhatty R., Kamat A.A. et al. Stress hormone-mediated invasion of ovarian cancer cells // Clin Cancer Res.-2006.-Vol. 12 (2).-P. 369-375.

210. Spriggs D. Optimal sequencing in treatment of recurrent ovarian cancer//Gynecol. Oncol.-2003.-Vol.90.-p.39-44.

211. Stewart P.A., Wiley M.J. Developing nervous tissue induces formation of blood-brain characteristics in invading endothelial cells: a study using quail-chick transplantation chimeras //Dev. Biol. 1981. - Vol. 84.- p. 183-192.

212. Strieter R.M., Burdick. M.D., Mestas J., Gomperts B., Keane M.P., Belperio J;A. Gancer CXC chemokine networks and tumour angiogenesis // Eur. J. Cancer.-2006.-Vol.42, N.6.-p.768-778.

213. S true wing J.P., Watson P., Easton D.F. et al. Effectiveness of prophylactic oophorectomy in inherited breast/ovarian cancer families // Ann. Oncol.-1994.-Vol.55.-384p;, A70.

214. Tew W., Colombo N., Ray-Caquard I. et al. VEGF-Trap for patients with recurrent platinum resistant epithelial ovarian cancer // J. Clin. Oncol.2008.-Vol.25, N.18S, abstract 5508.

215. Tobler N.E., Detmar M. Tumor and lymph node lymphangiogenesis-impact on cancer metastasis // J. Leukoc. Biol.-2006.-Vol.80.-p.691-696.

216. Torng P.L., Mao T.L., Chan W.Y. et al. Prognostic significance of stromal metalloproteinase-2 in ovarian adenocarcinoma and its relation to carcinoma progression // Gynecol'Oncol.-2004.-Vol. 92 (2).-P. 559-567.

217. Ulku A.S., Schafer R., Der C.J. Essential role of Raf in Ras transformation and deregulation of matrix metalloproteinase expression in ovarian epithelial cells//Mol Cancer Res.-2003.-Vol. 1 (14).-P. 1077-1088.

218. Van den Berfhe H., Dal Cin P. Some aspects of ovarian tumours // Eur. J. Obst. Gynaecol. Reproduct. Biol.- 1998.-Vol.81.-p.283-287.

219. Visintin I., Feng Z., Longton G. et al. Diagnostic markers for early detection of ovarian cancer // Clin Cancer Res.-2008.-Vol. 14 (4).-P. 10651072.

220. Visse R., Nagase H. Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases: structure, function, and biochemistiy // Circ Res.-2003.-Vol. 92 (8).-P. 827-839.

221. Wang F.Q., Smicun Y., Calluzzo N., Fishman D.A. Inhibition of matrilysin expression by antisense or RNA interference decreases lysophosphatidic acid-induced epithelial ovarian cancer invasion // Mol CancerRes.-2006.-Vol. 4 (ll).-P. 831-841.

222. Wang F.Q., So J., Reierstad S., Fishman D.A. Vascular endothelial growth factor-regulated ovarian cancer invasion and migration involves expression and activation of matrix metalloproteinases // Int J Cancer.-2006.-Vol. 118 (4).-P. 879-888.

223. Wang H., Cai W., Chen K. et al. A new PET tracer specific for vascular endothelial growth factor receptor 2 // Eur. J. Nuclear Medicine and Molecular Imaging.-2007.-Vol.34, N.12.-p.2001-2010.

224. Weidner N., Semple J., Welch W., Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma // N. Engl. J. Med.-1991.-Vol.324.-p.l-8.

225. Westermarck J., Kahari V.M. Regulation of matrix metalloproteinase expression in tumor invasion // FASEB J.-1999.-Vol. 13 (8).-P. 781-792.

226. Wiggins D.L., Granai C.O., Steinhoff M., Calabresi P. Tumor angiogenesis as a prognostic factor in cervical carcinoma // Gynecol Oncol. 1995. -Vol. 56. - p. 353-356.

227. Willmott L.J., Fruehauf J.P. Targeted Therapy in Ovarian Cancer I I J. Oncol.-2009.-Vol.2010.-p. 1 -9.

228. Wu M., Shi Y., Xi L. et al. Construction of antisense MT1-MMP vector and its inhibitory effects on invasion of human ovarian cancer cells // J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci.-2005.-Vol. 25 (6).-P. 715-717.

229. Wu M., Xu G., Xi L. et al. Down-regulation of MT1-MMP expression suppresses tumor cell invasion in metastatic human SW626 ovarian cancer cells // Oncol Rep.-2006.-Vol. 15 (2).-P. 501-505.

230. Wu X., Li H., Kang L. et al. Activated matrix metalloproteinase-2~a potential marker of prognosis for epithelial ovarian cancer // Gynecol Oncol.-2002.-Vol. 84 (l).-P. 126-134.

231. Yoshiji H., Gomez D.E., Shibuya M., Thorgeirsson U.P. Expression of vascular endothelial growth factor. Its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer// Cancer Res.-1996.-Vol.56.-p.2013-2016.

232. Zhang A., Meng L., Wang Q. et al. Enhanced in vitro invasiveness of ovarian cancer cells through up-regulation of VEGF and induction of MMP-2 // Oncol Rep.-2006.-Vol. 15 (4).-P. 831-836.

233. Zhou H.Y., Wong A.S. Activation of p70S6K induces expression of matrix metalloproteinase 9 associated with hepatocyte growth factor-mediated invasion in human ovarian cancer cells // Endocrinology .-2006.-Vol. 147 (5).-P. 2557-2566.

234. Ziche M., Donnini S., Morbidelli L., Parenti A., Gasparini G., Ledda F. Linomide blocks angiogenesis by breast carcinoma vascular endothelial growth factor transfectants // Br. J. Cancer.-1998.-Vol.77, N.7.-p.l 123-1129.

Информация о работе

Крюк, Юлия Васильевна
кандидата медицинских наук
Москва, 2011
ВАК 03.01.04

Диссертация

Клиническая значимость матриксной металлопротеиназы 2 типа и ангиогенных факторов в сыворотке крови и опухоли больных новообразованиями яичников - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы