Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика серозных опухолей яичника

Репина, Наталья Борисовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика серозных опухолей яичника
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика серозных опухолей яичника"

На правах рукописи

РЕПИНА НАТАЛЬЯ БОРИСОВНА

ЮШНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЕРОЗНЫХ ОПУХОЛЕЙ ЯИЧНИКА

03.00.25 — Гистология, цитология, клеточная биология 14.00.14 - Онкология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Рязань - 2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Рязанский государственный университет

имени академика И. П. Павлова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Ухов Юрий Иванович

Доктор медицинских наук, профессор Куликов Евгений Петрович

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор

Виталий Георгиевич Папков Кандидат медицинских наук Андреева Юлия Юрьевна

Ведущее учреждение - ГОУ ВПО «Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова Росздрава»

Защита диссертации состоится «_

2005г. в

на заседании диссертационного Совета Д 208.084.02 Рязанского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова (390026, Рязань, ул. Высоковольтная, д.9)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Рязанского государственного медицинского университета им. акад. И. П. Павлова (390026, Рязань, ул. Шевченко, д.34).

Автореферат

2005г.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

На каждом этапе канцерогенеза значительное место занимают различные регуляторные факторы (Bramhall S.R. et all., 1997; Liotta L.A. et all., 1980, 1991). Важная роль в неопластической трансформации клеток и про-грессировании злокачественных опухолей принадлежит адгезивным молекулам (Potter Е et al., 1999; Hirohashi S., 1998) компонентам экстрацеллюлярно-го матрикса (Werb Z., 1997; Black Р.Н., 1980) матриксным металлопротеина-зам и их ингибиторам (Bramhall S.R., 1997; Furuya M., Ishikura H., Ogawa Y., 2000) протеинам, регулирующим клеточную гибель в опухоли (А.А. Ярилин, 1998; Staunton M. et al., 1995; Ben-Hur. H., 2000) и некоторым другим. Роль всех этих факторов для прогноза новообразований яичника изучена ещё недостаточно, имеющиеся данные противоречивы и дальнейшие исследования в этом направлении позволят пролить свет на молекулярно-биологические механизмы, лежащие в основе онкогенеза.

Значительная сложность проблем гистологии и гистогенеза опухолей яичников является причиной того, что на сегодняшний день в этой области имеется больше гипотез, чем твёрдо установленных положений. Даже часто встречающиеся опухоли яичников, как например эпителиальные опухоли, не являются в этом отношении исключением, не говоря уже о более редких. Это становится понятным, если учесть весьма сложный эмбриогенез яичников. Необычайная мозаичность микроскопической структуры новообразований женской гонады, многообразие их сочетаний, нечёткие границы между опухолями разной степени зрелости, обилие метастатических поражений - всё это существенно усложняет диагностический процесс и создаёт препятствия для рационального планирования лечения больных (А.И. Карселадзе, 2000).

Большинство опухолей яичников являются эпителиальными (80-90%) и первое место среди них занимают серозные (42%) опухоли (А.П. Коробейников, 1999). Считается, что источником развития эпителиальных опухолей служит покровный эпителий яичника - видоизмененный мезотелий. Наиболее частой патологией среди злокачественных опухолей является серозный рак (С.А.Борисенко, П.Г. Прокопенко, 1986; Я. Верморкен, 1999), макроскопические особенности роста и клиническое поведение которого и являются для широкой врачебной аудитории своего рода прообразом рака яичника. Среди больных с впервые установленным диагнозом на долю III и IV стадии приходится соответственно 37,2% и 27%. (И.Н. Полушкина, 2002).

Таким образом, вышеуказанные аргументы обосновывают необходимость и актуальность проведения исследования, рассматривающего серозные опухоли яичников как модель для изучения тех морфогенетических процессов, которые являются этапами неопластической трансформации клеток, размножения трансформированных клеток и приобретения ими инвазивных свойств сквозь призму современных патогенетических представлений.

Общность этиопатогенеза опухолей яичников с новообразованиями матки диктует необходимость оценки состояния эндометрия, миометрия и шейки матки у обследуемых пациенток. Актуален, также, анализ состояния противоположного яичника, что особенно важно для женщин с доброкачественными опухолями в плане решения вопроса о сохранении вторых придатков.

Цель: Комплексное изучение молекулярно-биологических факторов (показатели апоптоза, пролиферации, адгезии и миграции) при серозных-опухолях яичников с целью оптимизации их патоморфологической диагностики; выявление морфологических, иммуногистохимических и клинико-патогенетических особенностей, имеющих значение для установления прогноза (для обоснования рациональной тактики ведения данного контингента больных).

Задачи:

1. Изучить фенотип клеток серозных опухолей яичников.

2. Изучить экспрессию молекулярно-биологических маркеров апоптоза (ВАХ, Вс1-Х), пролиферации (Е1-67), адгезии (кадхерины) и миграции (ММР-

2. ММР-9), а также маркёра гистогенетической принадлежности опухоли — цитокератина - 7 при серозных опухолях яичника и в покровном эпителии неизмененного яичника.

3. Сравнить особенности экспрессии молекулярно-биологических маркеров апоптоза (ВАХ, Вс1-Х), пролиферации (Е1-67), адгезии и миграции (кадхерины, ММР-2, ММР-9) в клетках серозных опухолей яичников и определить их связь с инвазивным потенциалом клеток.

4. Определить корреляцию клинико-анамнестических данных (как факторов риска) и степени распространения опухолевого процесса.

5. Изучить морфологические особенности второго яичника и матки у пациенток с доброкачественными и злокачественными серозными опухолями яичников для установления возможности взаимного влияния патологических процессов между органами женской репродуктивной системы.

Научная новизна исследования.

Практическая значимость работы: Определены основные фенотипиче-ские характеристики серозных опухолей яичников. Полученные в работе данные могут быть использованы при верификации диагноза, для более точной и объективной оценки инвазивного потенциала опухоли. Выявлены ха-

рактерные клинико-морфологические особенности течения серозных опухолей яичников, что поможет врачу на дооперационном этапе прогнозировать биологическую активность опухоли и быть готовым к более радикальной тактике лечения пациентки.

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ Материалы диссертации изложены на 134 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов и списка использованной литературы, включающего 193 источника - 102 отечественных и 91 зарубежных работ. Текст диссертации иллюстрирован 39 фотографиями и 21 таблицей.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы доложены на научно-практической конференции молодых ученых РязГМУ им. акад. И.П. Павлова 28 апреля 2003г, на областной научно-практической конференции «Онкогинекология» (г. Рязань, 2004), на совместной научной конференции кафедр гистологии и биологии, онкологии с курсом лучевой диагностики ФПДО, акушерства и гинекологии с курсом акушерства и гинекологии ФПДО, патологической анатомии с курсом судебной медицины РязГМУ им. акад. И.П. Павлова 8 апреля 2005г.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1 .Фенотипические особенности клеток серозных опухолей яичников определяют инвазивный потенциал новообразований.

2.Оценка экспрессии и соэкспрессии молекулярно-биологических маркеров апоптоза, пролиферации, адгезии и миграции является независимым достоверным прогностическим фактором течения серозных опухолей яичников. 3. Общность этиопатогенеза опухолей яичников с новообразованиями матки обуславливает частое сочетание серозных опухолей яичника с фоновыми и предраковыми заболеваниями шейки и тела матки. Это предполагает более тщательное предоперационное обследование таких пациенток.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В процессе выполнения настоящей работы было проведено изучение клинико-морфологических и иммуногистохимических особенностей серозных опухолей яичников. Под нашим наблюдением находилось 80 пациенток с серозными опухолями яичников. Весь биопсийный материал был получен в результате оперативных вмешательств. Пациентки получали лечение на базе кафедры акушерства и гинекологии с курсом акушерства и гинекологии ФПДО (заведующий кафедрой профессор Чикин ВТ.) и на базе кафедры онкологии с курсом лучевой диагностики ФПДО (заведующий кафедрой профессор Куликов Е.П.) Рязанского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова в гор. больнице № 10 и РОКОД. Пациенты были оперированы в период с 1999 по 2001 год.

Для проведения клинико-морфологических параллелей изучались истории болезни, амбулаторные карты больных, собирались данные о выживаемости. Распределение больных по возрасту представлено в таблице № 1.

Таблица №1. Распределение больных по возрасту.

Возраст пациенток Группа 1 Группа 2

(пациентки с ЗОЯ) п=40 (пациентки с ДОЯ) п=40

Пременопаузальный 10(25%) 15 (37,5%)

период 45-52 года 45-51 год

Ранний постменопау- 17(42,5%) 18(45%)

зальный период 52-55 лет 51-55 лет

Поздний постмено- 13(32,5%) 7 (17,5%)

паузальный период 56-65 лет 56-62 года

Средний возраст обследуемых пациенток с доброкачественными образованиями яичников составил 50,6 года, пациенток с злокачественными ОЯ 54,2 лет.

В процессе обследования изучаемых больных применялись следующие методы:

1. Общий осмотр и жалобы больных. Частота выявленных жалоб и клинической симптоматики у обследованных женщин представлены в таблице №2.

Таблица №2. Жалобы и клиническая симптоматика у обследованных женщин.___

Характер жалоб и симптомов. Группа 1 Группа 2

ЗОЯ (п=40) ДОЯ (п=40)

Тянущие боли в нижней части живота. 8 14

Нарушение функции соседних органов. 5 5

Увеличение размеров, асимметрия живота. 6 -

Патологические кровянистые выделения. 3 9

Резкое снижение массы тела. 3 1

«Бессимптомное» течение. 15 11

Гинекологическое исследование включало осмотр наружных половых органов, осмотр шейки матки в зеркалах, влагалищно-абдоминальное исследование, ректо-абдоминальный осмотр. Для получения дополнительной информации по уточнению диагноза и распространенности патологического процесса применялись следующие диагностические методики: УЗИ органов малого таза, диагностическая лапароскопия.

Статистическая обработка полученных данных производилась на основе использования стандартных математических программ, используемых в медико-биологической статистике. Показатель достоверности различий (Р) определялся по таблице Стьюдента-Фишера. Различия считаются достоверными при р<0,05, что отвечает стандартам, принятым для медико-биологических исследований. 2. Морфологическое исследование.

Материалом исследования служили макропрепараты (матка с придатками) полученные при оперативном лечении пациенток. Материал фиксировали в 10%-ном растворе формалина, забуфференном по Лилли при рН-7,4, затем заливали в парафин по стандартному протоколу. После фиксации готовились тканевые образцы яичников, эндометрия, миометрия, маточных труб и шейки матки. Серийные срезы толщиной 3-5 мкм депарафинировали по стандартной схеме, затем окрашивали гематоксилином и эозином.

Для определения типа слизеобразования в клетках опухоли срезы окрашивали по Лизону - ШИК-реакция + докраска альциановым синим для вы-

явления нейтральных гликопротеинов, сульфомуцинов и сиаломуцинов. 3. Иммуногистохимическое исследование.

Иммуногистохимические методы изучения биомолекулярных маркеров с использованием высокоспецифичных антител проводили в патоморфологи-ческом отделении МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского (зав. отд., д.м.н., профессор Казанцева И.С.).

Исследование проводили в соответствии с методикой Taylor С. R., Cote R. и Sternberger L.A.

Для ИГХ исследования биопсийный материал фиксировали в 10%-ном растворе формалина, забуфференном по Лилли (рН 7,2), затем проводили по батарее спиртов и ксилолов и заливали в парафин по стандартной методике. Использовали парафин, который плавится при 54°С. Готовили серийные парафиновые срезы толщиной 3-5 мкм, которые наносили на стекла с полили-зиновым покрытием. Депарафинировали срезы по стандартной схеме.

Перед инкубацией со всеми первичными антителами, кроме цитокерати-на 7, срезы обрабатывали в микроволновом режиме при мощности 750 Вт, в цитратном буфере (с рН 6,0) - 2 раза по 5 минут. Перед инкубацией с цитоке-ратином 7 срезы предварительно обрабатывались раствором трипсина (фирмы SIGMA) 30 минут при 37оС. Затем на срезы наносились соответствующие первичные антитела (таблица №3). Для усиления специфической реакции применяли пролонгированную инкубацию с первичными антителами: 30 минут при комнатной температуре, затем еще 14-18 часов при 4°С. Срезы тщательно промывались в фосфатном буфере при рН 7,4-7,6. Затем на среды наносили EnVision (anti-mouse и anti-rabbit, фирмы DAKO) и инкубировали 30-40 минут при комнатной температуре. Срезы тщательно промывались в фосфатном буфере при рН 7,4-7, 6. Далее на срезы наносили красящий визуализирующий реакцию раствор. В качестве системы визуализации использовали раствор диами-нобензидина (ДАВ) - DAB+ фирмы DAKO, затем срезы отмывались в дистиллированной воде и докрашивались гематоксилином Майера.

Оценка иммуногистохимической реакции:

1) Экспрессия цитоплазматических маркеров (ЦК-7, В АХ, Бе1Х) оценивалась полуколичественным методом: 0 - отсутствие реакции; + (1) - слабая, ++ (2) умеренно выраженная и +++ (3) - интенсивная экспрессия.

2) Интенсивность экспрессии ММР-2 в клетках опухоли в разных участках варьировала и оценивалась в баллах: 0 - реакция отсутствует; 1 - небольшое количество клеток в зоне роста и инвазии опухоли позитивны к маркеру; 2 -позитивную реакцию дают не только клетки в зоне инвазии опухоли, но и в других участках; 3 - большинство или все клетки позитивны к ММР-2.

3) Экспрессия ММР-9 наблюдалась в цитоплазме клеток, отличалась по интенсивности окрашивания и соответственно оценивалась в баллах/плюсах:

О - реакция отсутствует; 1 — слабая; 2 — умеренная; 3 -интенсивная.

4) Определение индекса пролиферации К167 в ядрах клеток вычислялось как среднее от числа меченых ядер на 100 учтенных ядер (при учете 500-1000 опухолевых клеток). Подсчет меченых ядер проводился в репрезентативных полях зрения с относительно равномерным распределением опухолевых клеток, сверху вниз и слева направо.

5) Оценка экспрессии адгезивных молекул Е-кадхерина: мембранный, или нормальный тип экспрессии - равномерное распределение иммунореактивно-сти по всей клеточной мембране 0-1; смешанный мембранно-цитоплазматический - 2; аномальное распределение иммунореакивности в цитоплазме клеток — 3.

Таблица № 3. Иммуногистохимические маркеры — антитела.

Антитела Клон Развед Фирма

Цитокератин 7 0У-ТЫ2/30 DAKO

Ki67 В56 1:10 BD Bioscienses

ВАХ кроличьи А3533 1:50 DAKO

BclX кроличьи А3535 1:50 DAKO "

N-кадхерин ЗВ9 1:50 Zymed Laboratories Ins

Е-кадхенин 36В5 1:50 Novocastra

Металлопротеиназа- 2 А-вг1 УС2 1:20 PharMingen Technical

Металлопротеиназа- 9 2СЗ 1:40 Novocastra

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ НАБЛЮДЕНИЙ. 1. Гистологическое исследование.

Многокомпонентное строение яичника, сочетание в нём структур с разнонаправленными функциями, анатомические особенности органа обуславливают сложность изучения и понимания патогенетических механизмов развития опухолей яичника. В процессе эмбрионального развития одними из первых закладываются половые железы. Покров яичника - это модифицированный мезотелий, сохранивший черты выстилки целома, но способный развиваться в сторону эпителиальных структур. Покров яичника рассматривается как источник образования эпителиальных опухолей этого органа. Серозные опухоли - это опухоли, состоящие из эпителия, напоминающего эпителий фаллопиевой трубы или поверхностный эпителий яичника. Процесс становления, дифференцировки и малигнизации протекает в виде трех степеней зрелости опухолей - доброкачественной, пограничной и злокачественной.

В нашем исследовании в серозных опухолях встречались следующие морфологические варианты: наиболее распространенная морфологическая форма в серозных доброкачественных опухолях яичника - гладкостенная цистаденома, затем - цистаденопапилломатозные структуры, реже адено-фибромы, строма имеет склонность к склерозированию. Секрет, который мы выявляли при окраске по Лизону, выявлялся в небольших количествах, локализовался экстрацеллюлярно или в мелких железистых полостях.

При пограничных серозных опухолях наблюдается образование эпителиальных, лишённых стромы псевдососочков, нарастание процессов атипии клеток, что характеризует их как переходный этап между доброкачественными и злокачественными аналогами. Группа пограничных серозных опухолей яичников включает новообразования, для которых характерно наличие многих, но не всех, признаков злокачественных новообразований. Эти признаки в отдельных опухолях встречались в различных комбинациях: клеточная атипия, ядерный полиморфизм, увеличенная митотическая активность (больше, чем в доброкачественных, но меньше, чем в злокачественных опу-

холях) и другие, но обычно отсутствует явно выраженная инвазия. Клетки исследованных пограничных серозных опухолей продуцировали заметное количество муцинов, который располагался экстрацеллюлярно. В серозных раках прослеживаются переходы с пограничными и доброкачественными структурами. Это свидетельствует о последовательном процессе малигниза-ции покровного эпителия яичников. Секрет определялся в незначительных количествах и локализовался внеклеточно, очень редко в виде небольших внутриклеточных включений. В 2 опухолях имелось значительное количество PAS-позитивного секрета, который преимущественно располагался в просвете кистозных полостей. 2. Иммуногистохимическое исследование.

Были исследованы 33 серозные опухоли яичников, из которых 8 доброкачественных, 4 пограничных и 21 злокачественных (1-группа с высокой выживаемостью, 2-группа с низкой выживаемостью). 20 больных злокачественными опухолями имели III ст. заболевания, а одна больная I ст. в сочетании с аденокарциномой эндометрия (данная пациентка вошла в группу с высокой выживаемостью). Объём операции оценивался как условно-радикальный. Все пациентки после хирургического лечения получали полихимиотерапию.

При исследовании экспрессии различных иммуногистохимических маркеров в серозных опухолях яичников в качестве контроля использовали ткань нормальных яичников - 6, полученную при выполнении диагностических биопсий или при аутопсии у пациентов без патологии яичников.

С помощью таких ИГХ маркеров, как цитокератины часто удается определить гистогенетическую принадлежность опухоли и её метастазов.

Цитокератины экспрессируют все клетки серозных (и муцинозных) опухолей яичников, что позволяет выявить минимальные инвазивные комплексы или отдельные клетки опухоли, а также оценить по наличию или отсутствию опухолевых клеток в зоне резекции, удалена ли опухоль в пределах здоровых тканей.

Клетки однослойного эпителия серозных аденом и пограничных опухолей интенсивно и равномерно экспрессировали цитокератин 7. Интенсивную реакцию с ЦК-7 давали клетки эпителия сосочков и папиллярных структур пограничных опухолей. Для серозных раков характерна более вариабельная по интенсивности экспрессия, что соответствовало полиморфизму их строения: она варьировала от интенсивной, до умеренно и даже слабо выраженной. Участки, где имелись более дифференцированные структуры, характерные в частности для пограничных опухолей, реакция была равномерной и более интенсивной.

Для оценки пролиферативной активности с помощью иммуногистохи-мических методов используют антитела к антигену пролиферативной активности — Ю-67. Эти моноклональные антитела позволяют оценить пролиферацию на основании анализа белков ядра, связанных с репликацией ДНК. В клетках эпителия нормальных яичников индекс пролиферации был невысоким и в среднем он составил 1%. В серозных аденомах значения этого индекса варьировали в пределах 1-5%, в среднем составив 3,25%, а в пограничных серозных опухолях были в пределах 3-10% (в среднем 6,15%).

Самый высокий индекс пролиферации Ю67 был в серозных злокачественных опухолях: 9,2-56,8% (в среднем 27,92%). В одной группе из 10 опухолей индекс Е167 варьировал в пределах 9,2-15,6% (в среднем 13,2%). А в остальных 11 (2 группа) был высоким - 28,6-56,8% (в среднем 40,3%), т.е. примерно в 3 раза выше, чем в 1 группе. В опухолях 2 группы стабилизация наблюдалась только в 2 опухолях из 11 (18,1 %), а в опухолях 1 группы в 4 из 10 (40%). В то же время в группе пограничных опухолей 2 новообразования, индекс пролиферации которых был равен 6,4-10%, очевидно, по про-лиферативной активности ближе к злокачественным новообразованиям 1 группы (рис.1).

Рис.1. Экспрессия Ki67 в покровном эпителии неизмененного яичника и в серозных опухолях.

Исследование показало, что наиболее злокачественные опухоли 2 группы обладают и наиболее высоким индексом пролиферации Ki67 - более 25%. Следовательно, увеличение индекса Ki67>10% свидетельствует о возможной злокачественной трансформации пограничных опухолей, а увеличение Ki67>20% - об агрессивном потенциале опухоли (р<0,05).

Семейство протеинов Bel в настоящее время является наиболее изученными факторами, вовлеченными в регуляцию апоптоза. Bcl-Х функционирует как ингибитор апоптоза. Молекулы, обладающие свойством ингиби-ровать апоптоз - Ьс12 и Bcl-Х, локализуются на мембранах митохондрий, а протеин ВАХ, функционирующий как индуктор апоптоза, в норме локализуются в цитоплазме. Изменение соотношения продукции протеинов Bcl-Х/ВАХ влияет на баланс в ткани популяций пролиферирующих и гибнущих клеток. В клетках эпителия нормальных яичников наблюдалась слабая экспрессия ВАХ (0,5-1 балла) и отсутствовала экспрессия BclX. В клетках серозных аденом яичников экспрессия ВАХ становилась более выраженной -от 1 до 2,5-3 баллов (в среднем 1,9), a BclX слабой - 0-1 балла (среднее 0,6) (р<0,01), а соотношение ВАХ/ BclX равнялось 1,9/0,6= 3,2 (рис.2)

Рис. 2. Экспрессия Вс1-Х и ВАХ в покровном эпителии неизмененного яичника и в серозных опухолях.

Для пограничных опухолей характерно увеличение интенсивности экспрессии и ВАХ и Бе1Х. Интенсиность экспрессии ВАХ была 1,5-3 балла (в среднем 2,2), экспрессия Бс1Х менее выраженной - 1,5-2 (в среднем 1,5) (р<0,01), а соотношение ВАХ/Бс1Х соответственно уменьшалось до 1,5. В злокачественных опухолях 1 группы экспрессия ВАХ во всех, кроме двух опухолей, была интенсивной (3 балла, в среднем 2,6), а экспрессия Бс1Х 1-3 балла (в среднем 1,9) (р<0,001). Соотношение ВАХ/Бс1Х в этой группе опухолей соответственно было 2,6/1,9 = 1,4. В злокачественных опухолях 2 группы экспрессия ВАХ была в 1-3 балла (в среднем 1,75), экспрессия Бс1Х 1-3 (в среднем 2,1) (р<0,001). Соотношение ВАХ/Бс1Х в этой группе опухолей было соответственно 1,75/2,1=0,83. Очевидно, что, хотя в отдельных опухолях и в каждой группе имеются отклонения в ту или иную сторону, но в целом тенденция сохраняется - пролиферативная активность опухоли тем больше, чем меньше становится соотношение ВАХ/Бс1Х, то есть чем интенсивнее в клетках опухоли экспрессируется ингибитор апоптоза Бс1Х (рис.3).

ДОЯ ПОЯ ЗОЯ1 ЗОЯ 2 группа группа

Рис.3. Соотношении экспрессии протеинов Вс1-Х и ВАХ в серозных опухолях яичника.

Матриксные металлопротеиназы (ММР-зы) объединены в большое семейство цинксодержащих эктрацеллюлярных эндопротеаз, которые связаны с клеточной мембраной, обладают способностью разрушать ЕСМ. ММР-2 и ММР-9 способны разрушать колллагены соединительной ткани.

В клетках эпителия нормальных яичников и серозных цистаденом яичников ММР-2 не экспрессировалась. Из 8 серозных цистаденом 2 (25%) и 1 из 4 (25%) пограничных слабо экспрессировали ММР-9 (р<0,2).

Из пограничных опухолей только в одной (1/4, или 25%) в папиллярных структурах, расположенных на периферии, а особенно в гроздьевидных комплексах и группах клеток, которые отделялись от основного узла в просвет кистозных полостей, наблюдалась интенсивная экспрессия ММР-2 (р>0,2) (рис.4).

Рис. 4. Экспрессия ММР-2 и ММР-9 в покровном эпителии неизмененного яичника и в серозных опухолях.

В злокачественных опухолях 1 группы ММР-2 и ММР-9 экспрессиро-вали клетки всех 10 опухолей (100%), но интенсивность экспрессии была не велика (интенсивность экспрессии ММР-9 не превышала 0,5-1,5). Очаговая экспрессия ММР-2 наблюдалась в клетках, локализованных зоне роста опухоли (0-1 балла). Только в двух опухолях этой группы (20%) имелась достаточно большая популяция клеток, которые экспрессировали ММР-2. Эти клетки располагались как в зоне инвазии, так и в других участках опухоли (р<0,002).

В злокачественных опухолях 2 группы интенсивная экспрессия ММР-2 наблюдалась в 7 из 11 опухолей (63,6%), а в остальных 4 (36,4%) опухолях экспрессия ММР-2 отсутствовала. Достаточно интенсивная экспрессия ММР-9 наблюдалась в 6 опухолях (54,5%), в которых индекс пролиферации был самым высоким. В 4 случаях (36,3%) экспрессия ММР-9 была слабой - 1 балл, а в 1 (9,2%) вообще отсутствовала (р<0,001).

Таким образом, наиболее агрессивные клоны, как показано в нашем исследовании, характеризуются интенсивной экспрессией в клетках опухоли матриксных металлопротеиназ 2 и 9 типов.

По сравнению с соответствующими нормальными клетками, для клеток опухолей характерно уменьшение или полная утрата адгезивных свойств, что ведет к дезорганизации ткани и хаотичности расположения отдельных гистологических структур. Одну из важных ролей в этом процессе играют молекулы кадхеринов. Кадхерины представляют собой трансмембранные гликопротеины, которые с помощью своих экстрацеллюлярных участков осуществляют гемофильные взаимодействия и Са+зависимую межклеточную адгезию.

В клетках эпителия нормальных яичников и серозных аденом яичников экспрессия Е-кадхерина была нормальной, мембранной. Во всех 4 (100%) пограничных опухолях экспрессия Е-кадхерина была нормальной мембранной, но в 1 (9%) имелись небольшие очаги клеток, в которых экспрессия вообще отсутствовала. При этом участки, в которых отсутствовала экспрессия Е-кадхерина соответствовали участкам, где наблюдалась сверхэкспрессия ММР-2. В клетках всех 10 (100%) злокачественных опухолей 1 группы экспрессия Е-кадхерина была аномальной - в 0,5-2 балла, а мембранная экспрессия практически отсутствовала. Наиболее выраженные аномалии экспрессии Е-кадхерина (2 балла) наблюдались в двух опухолях (20%), которые характеризовались быстрым послеоперационным рецидивированием. В злокачественных опухолях 2 группы экспрессия Е-кадхерина была аномальной — в 1- 3 балла, а мембранная экспрессия отсутствовала (р<0,001).

Экспрессия Ж-кадхерина изучалась только в группе злокачественных опухолей. В злокачественных опухолях 1 группы в 4 (40%) опухолях была нормальная мембранная экспрессия этих адгезивных молекул, а в остальных 6 (60%) экспрессия была цитоплазматической (2 балла). В злокачественных опухолях 2 группы мембранная экспрессия отсутствовала, минимальные аномалии экспрессии Ж-кадхерина (1 балл) наблюдались только в 1 опухоли

(9,2%), а в остальных опухолях аномалии были более выраженными: по 4 опухоли (36,3% и 36,3%) 1,5 и 2 балла, 2 (18,2%) - 2,5 балла.

Наиболее агрессивные клоны опухолевых клеток выявляются в зоне роста и инвазии опухоли. Интенсивная экспрессия в клетках зоны инвазии матриксных металлопротеиназ 2 и 9 сочетается с наиболее выраженными аномалиями экспрессии адгезивных молекул Е-кадхерина (рис.5), что определяет патологическую подвижность клеток и их способность к миграции.

у больных с серозными опухолями яичников.

Следующей задачей исследования явилось обоснование онкологической настороженности и установления возможности взаимного влияния патологических процессов между органами женской репродуктивной системы. Исследованию были подвергнуты тело матки, шейка матки и второй яичник пациенток с ЗОЯ и ДОЯ.

Патологические изменения во втором яичнике у пациенток с серозными опухолями яичников встретились с частотой 52% (рис.6).

60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00%

■ Группа №1 (пациентки с ЗОЯ) п=36

Ш Группа №2(пациентки с ДОЯ)п=19

Рис.6. Состояние второго яичника у пациенток с ДОЯ и ЗОЯ. (р<0,05).

Оценка морфологического состояния яичников показала, что у пациенток с ДОЯ патологические изменения противоположного яичника составляют 21,2%, это в 3,2 раза ниже чем у пациенток с ЗОЯ- 66,5%. Следует обратить внимание на достаточный процент атрофических изменений в непораженном яичнике в группе пациенток с ЗОЯ - 19,5%. Атрофические процессы в организме всегда представляют гораздо большую опасность в плане возникновения на их фоне опухолевого роста, чем гипертрофические, так как возникающий при этом дефицит необходимых клеткам для дальнейшей специализации факторов роста предоставляет преимущество тем аномальным клеткам, которые утратили зависимость от факторов роста.

С целью выявления возможных параллелей в патогенезе опухолей тела матки и серозных опухолей яичников, а также для установления взаимного влияния патологических состояний тела матки и яичников было проведен морфологический анализ состояния эндометрия (рис.7) и миометрия у пациенток с ДОЯ и ЗОЯ.

60,00% 50,00% 40,00% 30,00% 20,00% 10,00% 0,00%

■ Группа № 1 (пациентки с ЗОЯ) □ Группа №2 - (пациентки с ДОЯ)

Рис.7. Состояние эндометрия у пациенток с ДОЯ и ЗОЯ. (р<0,05).

Так, морфологическая картина эндометрия и миометрия у пациенток с ДОЯ характеризовалась преимущественно дисгормональными патологическими состояниями эндометрия (железистая гиперплазия 27% и 14,3% соответственно), а также превалирующим количеством случаев миомы матки (54% и 28,5% соответственно) и эндометриоза (19% и 8,5% соответственно), по сравнению с женщинами, имеющими ЗОЯ. Частота выявляемости атипической гиперплазии среди обследуемых групп значительно преобладала у пациенток с ЗОЯ (в 2 раза -6,5% и 11,5%). Аденокарцинома эндометрия была обнаружена у 3 женщин с ЗОЯ, в группе пациенток с ДОЯ злокачественных новообразований эндометрия не выявлено. Роль эндокринно-обменных нарушений в патогенезе такого сочетания неоспорима и первое место в гормональном канцерогенезе здесь, конечно же, отводится эстрогенам с их бивалентными эффектами (эндокринный и генотоксический).

Гистологическое исследование шейки матки показало, что в большинстве случаев у этого контингента больных имеются те или иные изменения её (57,5%) (рис.8). В структуре выявленной патологии превалировали фоновые заболевания у пациенток с ДОЯ и с ЗОЯ (52%): эктопия, полипы шейки матки. Лейкоплакия, предраковые процессы и рак характерны для пациенток с ЗОЯ (соответственно 4:1). В последние годы всё большее внимание привле-

кают вирусы, как этиологические факторы опухолей различной локализации. В работе Антонеевой И.И. показано, что в клетках малигнизированной ткани яичников (в эпителиальных опухолях) в 100% выявлены онкогенные типы папилломавируса человека в низкодефференцированных опухолях, в 60% -при умеренной дифференцировке и в 90% при высокодифференцированных серозных опухолях; вирус простого герпеса выявлен у 28% больных раком яичников. Это даёт возможность думать о возможной корреляции патологии шейки матки (особенно более тяжёлой) с возникновением эпителиальных новообразований яичников.

Рис.8. Морфологическая характеристика состояния шейки матки у больных с серозными ДОЯ и ЗОЯ. (р<0,05).

Таким образом, при обследовании пациенток с серозными опухолями

яичников особое внимание следует уделять своевременной диагностике бла-стоматозного процесса.

Заключение.

В заключении хотелось бы отметить, что анализ взаимоотношения факторов апоптоза, пролиферации, межклеточной адгезии и миграции является полезным в исследовании такого специфического биологического процесса как неопластическая трансформация клеток вообще, и клеток мезоте-лия в частности. Показателями, отражающими этапы онкогенеза, могут быть,

например, индекс пролиферации, соотношения протеиновбе, регулирующих апоптоз (ВАХ: Вс1Х), а также уровни экспрессии факторов межклеточной адгезии (Е-кадхерины) и миграции (ММР-2 и 9).

Следовательно, с развитием исследований в области молекулярной онкологии и, особенно, в области одного из новых разделов — протеомики, появляется всё больше данных, свидетельствующих о чрезвычайно сложном механизме возникновения и развития опухолей, но, эти перспективные научные направления позволяют вести поиск специфических белковых маркеров для диагностики, а также белков-мишений для разработки новых терапевтических подходов в лечении.

выводы

1.Фенотип клеток доброкачественных серозных опухолей яичников характеризуется интенсивной и равномерной экспрессией ЦК-7, нормальной мембранной экспрессией Е-кадхерина, отсутствием экспрессии матриксной ме-таллопротеиназы 2, при индексе пролиферации К167 менее 5%.

2.Фенотип клеток злокачественных серозных опухолей яичников характеризуется аномальной экспрессией Е-кадхерина, индексом пролиферации К167 более 10%. Наиболее агрессивные клоны выявляются в зоне роста и инвазии опухоли. Интенсивная экспрессия в клетках зоны инвазии матриксных ме-таллопротеиназ 2 и 9 сочетается с наиболее выраженными аномалиями экспрессии адгезивных молекул Е-кадхерина и увеличением пролиферативной активности клеток опухоли. Очевидно, что между сверхэкспрессией ММР-2 и 9 (по нашему мнению особенно ММР-2) и аномальной экспрессией Е-кадхерина имеется прямая зависимость.

3.Увеличение индекса К!67>10% свидетельствует о возможной злокачественной трансформации «пограничных опухолей», а увеличение индекса К!67>20% - об агрессивном потенциале опухоли (Р<0,05).

4.Неблагоприятными факторами прогноза следует считать также увеличение интенсивности экспрессии антиапоптозного протеина Вс1Х и уменьшение интенсивности экспрессии индуктора апоптоза ВАХ, которое выражается в уменьшении соотношения ВАХ: Вс1Х (1,4\0,83 соответственно в группах больных с ЗОЯ; 3,2 - в группе больных с ДОЯ).

5.При серозном раке яичников низкую выживаемость и неэффективность химиотерапии предсказывает повышенная экспрессия Вс1-Х, ММР-2 и ММР-9, аномального Е-кадхерина, что предполагает возможность применения тар-гетных препаратов, разрабатываемых в молекулярной медицине.

6.Клиническими особенностями серозных опухолей яичников являются: возрастное повышение встречаемости злокачественного типа опухоли, более выраженная наследственная отягощенность у пациенток с ЗОЯ и снижение у них в анамнезе репродуктивной функции.

7.Серозные опухоли яичника (особенно ЗОЯ) часто сочетаются с фоновыми и предраковыми заболеваниями шейки и тела матки, что предполагает более тщательное предоперационное обследование таких пациенток.

Условные обозначения: ИГХ-иммуногистохимия

ПАП-пероксидазно-антипероксидазный метод АТ-антитела

ДОЯ-доброкачественные опухоли яичников ЗОЯ-злокачественные опухоли яичников ЕСМ- экстрацеллюлярный матрикс БМ-базальная мембрана ММР-металлопротеиназы УЗИ-ультрозвуковое исследование

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Морфологические особенности патологии шейки матки у женщин с эпителиальными серозными опухолями яичников в перименопаузе// Материалы V Рос. форума «Мать и дитя»: тез. докл. -М., 2003.- С.432-433.- (В соавт.: В.Г. Чикин, Е.П. Куликов).

2. Морфологические параллели репродуктивной системы женщин периме-нопаузального возраста с доброкачественными серозными опухолями яичника//Материалы науч.-практ. конф. молодых ученых,- Рязань, 2003,-С. 147-148.

3. Морфологическая характеристика матки у больных серозными доброкачественными опухолями яичника в перименопаузальном перио-де//Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении: тез. докл. V Контр, с междунар. участием.-М., -2003.-С.81-82. - (Прил. к журн.: Паллиативная медицина и реабилитация.-2003.-№2).- (Совм. с: В.Г. Чикин, Е.П. Куликов).

4. Морфологическая характеристика противоположного яичника у больных серозными доброкачественными опухолями яичника в перименопаузаль-ном возрасте// Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении: тез. докл. V Контр, с междунар. участием.-М., -2003.-С.81-82. -(Прил. к журн.: Паллиативная медицина и реабилитация.-2003.-№2).-(Совм. с: В.Г. Чикин, Е.П. Куликов).

5. Биомолекулярные маркеры как факторы прогноза при серозных опухолях яичников у женщин//Тез. докл. VIII Рос. онкол. контр.- М., 2004.-С.237.-(В соавт.: Л.Е. Гуревич, Е.П. Куликов,, Ю.И. Ухов).

6. Вопросы этиологии и патогенеза эпителиальных опухолей яичников//Рос. медико-биол. вестник, им. акад. И.П. Павлова.-2004.-№1-2.-С.87-94.

7. Клинические проявления и особенности течения заболевания у женщин с эпителиальными серозными опухолями яичников// Материалы V Рос. форума «Мать и дитя»: тез. докл. -М., 2004.- С.458.- (В соавт.: Е.П. Куликов).

Заказ № 2574. Тираж 100 экз. Подписано в печать 25.05.05г. Бумага офсетная. Печать ризографическая

Отпечатано в ООО «НПЦ «Информационные технологии» Лицензия серия ПЛД № 66-16 от 20 июля 1999 г. г. Рязань, ул. Островского, 21/1. Тел.: (0912) 98-69-84

'^vJ4 \

И НЮ/1 2005

Щ-.

1319

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Репина, Наталья Борисовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННОЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ О ПРОБЛЕМЕ ОПУХОЛЕЙ ЯИЧНИКОВ С ПОЗИЦИИ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ПАТОЛОГИИ И ОНКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОСТОЯНИЯ ОРГАНОВ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ У ЖЕНЩИН С СЕРОЗНЫМИ ОПУХОЛЯМИ ЯИЧНИКОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Факторы риска и вопросы клинической морфологии опухолей яичников.

1.2. Онкогенез и прогностическое значение ряда биомолекулярных маркеров^

1.3. Клинико-морфологическая характеристика сочетанной патологии органов женской репродуктивной системы у женщин с серозными опухолями яичников.

ГЛАВА 2. КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ

И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая клиническая характеристика больных и оценка факторов риска.

2.2. Методы исследования;

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ НАБЛЮДЕНИЙ.

3.1. Морфологическое и иммуногистохимическое исследование серозных опухолей яичников.

3.1.1. Гистологическое исследование.

3.1.2. Иммуногистохимическое исследование.

3.2. Морфологическая характеристика органов репродуктивной системы у больных с серозными опухолями яичников.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика серозных опухолей яичника"

Актуальность проблемы.

Изучение таких молекулярно-биологических механизмов как пролиферация и гибель клеток, межклеточная адгезия и миграция представляет собой одну из фундаментальных проблем гистологии, эмбриологии и клеточной биологии, поскольку эти процессы являются этапами и эмбриогенеза и канцерогенеза. В настоящее время выделяют три основных последовательных этапа в канцерогенезе (А.И. Агеенко, 2004): трансформация нормальных клеток в опухолевые, размножение трансформированных клеток и прогрессия возникшего новообразования. На каждом из этих этапов значительное место занимают различные регуляторные факторы (Bramhall S.R. et all., 1997; Liotta L.A. et all., 1980, 1991). Важная роль в неопластической трансформации клеток и прогрессировании злокачественных опухолей принадлежит адгезивным молекулам (Potter Е et al, 1999; Hirohashi S., 1998) компонентам экстрацеллюлярного матрикса (Werb Z., 1997; Black P.H., 1980) матриксным металлопротеиназам и их ингибиторам (Bramhall S.R., 1997; Furuya М., Ishikura Н., Ogawa Y., 2000; JI.E Гуревич, 2003) протеинам, регулирующим клеточную гибель в опухоли (А.А. Ярилин, 1998; Staunton М. et al., 1995; Ben-Hur. Н., 2000) и некоторым другим. Роль всех этих факторов для прогноза новообразований изучена ещё недостаточно, имеющиеся данные противоречивы и дальнейшие исследования в этом направлении позволят пролить свет на молекулярно-биологические механизмы, лежащие в основе онкогенеза.

Опухоли яичников — патология, которая часто встречается у женщин.

Большинство опухолей яичников являются эпителиальными (80-90%) и первое место среди них занимают серозные (42%) опухоли (А.П. Коробейников 1999). Считается, что источником развития эпителиальных опухолей служит покровный эпителий яичника - видоизмененный мезотелий (B.JI. Быков, 2001). Спектр микроскопических структур, составляющих эти опухоли, чрезвычайно широк, градации по степеням их дифференцировки трудно устанавливаются.

Весьма ограничен арсенал эффективных методов лечения, особенно не хирургического плана. (Карселадзе А.И. 2000).

Преимущественно опухоли яичников - это доброкачественные опухоли. По данным разных авторов, они составляют 66,8-90,3% всех новообразований яичников (Н.Д.Селезнева, Б.И.Железнов 1982). Поскольку значительная часть злокачественных опухолей этого органа возникает именно в доброкачественных новообразованиях, следует считать, что своевременное распознавание и удаление доброкачественных опухолей половой железы являются действенной профилактикой рака. Но, несмотря на это, во всем мире имеется тенденция к увеличению заболеваемости и смертности от рака яичников. Среди больных с впервые установленным диагнозом на долю III и IV стадии приходится 37,2% и 27%, соответственно (Полушкина И.Н. 2002).

Проблема рака яичников обусловлена трудностями ранней диагностики, недостаточно изученным патогенезом, многообразием клинико-морфологических особенностей, агрессивным клиническим течением, неудовлетворительными результатами лечения (Жордания К.И 1992.).

РЯ остается одним из наиболее распространенных злокачественных опухолей у женщин в развитых странах мира. К настоящему времени накоплен большой научный и клинический материал, однако выживаемость больных с данной патологией остается весьма низкой. Средние международные показатели заболеваемости РЯ и смертности составляют соответственно 8,1 и 6,6 на 100000 женского населения. (Kennedy A., Hart W., 1996). По данным эпидемиологического исследования этих американских ученных, РЯ в тот или иной период жизни может возникнуть у 1,4%, или у 1 из 70 девочек.

Адекватное прогнозирование клинического течения заболевания влияет на эффективность проводимого лечения. До последнего времени клиницисты могли опираться на такие важные факторы прогноза как возраст больной, стадия заболевания, степень дифференцировки опухоли и размер остаточной опухоли после операции. Так, чрезвычайно велика роль адекватного стадирования, которое включает в себя цитологическое исследование выпота, тщательную ревизию брюшной полости, биопсию со всех подозрительных участков брюшины, между тем на практике такое стадирование производится далеко не всегда (Бохман Я.В., 1993). В свою очередь, при оценке степени дифференцировки нельзя исключить некоторую долю субъективизма, которая зависит от профессионализма морфолога, к тому же зачастую различные участки опухоли могут иметь разную степень дифференцировки (Карселадзе А.И., 1989).

Важное значение имеет вопрос о том, существует ли корреляция между биологическими параметрами опухоли и её клиническим поведением. Например, известно, что в пределах даже одной и той же гистологической формы опухоли с одинаковой стадией заболевания прогноз может существенно варьировать. В биологии опухолей яичников ещё многие вопросы требуют ответа. Какие объективные характеристики определяют различие между доброкачественными, пограничными и злокачественными опухолями яичников? На основании каких критериев можно выделить больных с наиболее злокачественным течением заболевания?

За последнее десятилетие достигнут значительный прогресс в понимании молекулярной биологии клетки. Стали известны многие механизмы контроля клеточного деления и смерти, поддержания генетической стабильности, путей передачи сигнала от рецепторов в ядро. Одним из современных путей прогнозирования течения новообразований яичников и выработки лечебной тактики является изучение молекулярно-биологических маркеров в ткани опухоли. Необходимо найти понимание клинической ситуации, когда сравнимые по распространенности и гистологической структуре опухоли различаются по агрессивности течения заболевания. Инвазивные свойства опухолевых клеток и их способность формировать метастазы в конечном итоге и определяют прогноз новообразований.

Следующим, не менее актуальным вопросом серозных опухолей яичников является онкологические аспекты состояния матки. Общность этиопатогенеза опухолей яичников с новообразованиями матки диктует необходимость оценки состояния эндометрия, миометрия и шейки матки у обследуемых пациенток. Также, имеет значение анализ состояния противоположного яичника, что особенно важно для женщин с ДОЯ в плане решения вопроса о сохранении вторых придатков.

Сопоставление полученных данных морфологического и иммуногистохимического исследований приведет к пониманию природы и характера пролиферативных процессов и клеточной гибели, межклеточной адгезии и миграции, что позволит оптимизировать тактику ведения данного контингента больных.

Цель: Комплексное изучение молекулярно-биологических факторов (показатели апоптоза, пролиферации, адгезии и миграции) при серозных опухолях яичников с целью оптимизации патоморфологической диагностики опухолей яичников; выявление морфологических, иммуногистохимических и клинико-патогенетических особенностей, имеющих значение для установления прогноза (для обоснования рациональной тактики ведения данного контингента больных). Задачи:

1. Изучить фенотип клеток серозных опухолей яичников.

2. Изучить экспрессию молекулярно-биологических маркеров апоптоза (ВАХ, Bcl-Х), пролиферации (Ki-67), адгезии (кадхерины) и миграции (ММР-2, ММР-9), а также маркёра гистогенетической принадлежности опухоли - цитокератина - 7 при серозных опухолях яичника и в покровном эпителии неизмененного яичника.

3. Сравнить особенности экспрессии молекулярно-биологических маркеров апоптоза (ВАХ, Bcl-Х), пролиферации (Ki-67), адгезии и миграции (кадхерины, ММР-2, ММР-9) в 1слетках серозных опухолей яичников и определить их связь с инвазивным потенциалом клеток.

Научная новизна исследования.

В настоящей работе впервые проведено комплексное исследование биомолекулярных маркеров апоптоза, пролиферации, межклеточной адгезии и миграции клеток, а также маркёра гистогенетической принадлежности опухоли — цитокератина - 7 при серозных опухолях яичников различной степени зрелости. Показана роль биомолекулярных маркеров как факторов прогноза. Использование в практике определения изучаемых нами молекулярно-биологических маркеров позволит прогнозировать течение серозных опухолей яичников и разработать новые терапевтические подходы в лечении. Практическая значимость работы: Определены основные фенотипические характеристики серозных опухолей яичников. Полученные в работе данные могут быть использованы при верификации диагноза, для более точной и объективной оценки инвазивного потенциала опухоли. Выявлены характерные клинико-морфологические особенности течения серозных опухолей яичников, что поможет врачу на дооперационном этапе прогнозировать биологическую активность опухоли и быть готовым к более радикальной тактике лечения пациентки.

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы диссертации изложены на 134 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов и списка использованной литературы, включающего 193 источника, публикации которых относятся преимущественно к 1995-2005гг и состоят из 102 отечественных и 91 зарубежных работ. Текст диссертации иллюстрирован 39 фотографиями и 21 таблицей.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Репина, Наталья Борисовна

выводы

1. Фенотип клеток доброкачественных серозных опухолей яичников характеризуется интенсивной и равномерной экспрессией ЦК-7, нормальной мембранной экспрессией Е-кадхерина, отсутствием экспрессии матриксной металлопротеиназы 2, при индексе пролиферации Ki67 менее 5%.

2. Фенотип клеток злокачественных серозных опухолей яичников характеризуется аномальной экспрессией Е-кадхерина, индексом пролиферации Ki67 более 10%. Наиболее агрессивные клоны выявляются в зоне роста и инвазии опухоли. Интенсивная экспрессия в клетках зоны инвазии матриксных металлопротеиназ 2 и 9 сочетается с наиболее выраженными аномалиями экспрессии адгезивных молекул Е-кадхерина и увеличением пролиферативной активности клеток опухоли. Очевидно, что между сверхэкспрессией ММР-2 и 9 (по нашему мнению особенно ММР-2) и аномальной экспрессией Е-кадхерина имеется прямая зависимость.

3. Увеличение индекса Ki67>10% свидетельствует о возможной злокачественной трансформации «пограничных опухолей», а увеличение индекса Ki67>20% - об агрессивном потенциале опухоли (Р<0,05).

4. Неблагоприятными факторами прогноза следует считать также увеличение интенсивности экспрессии ангиапоптозного протеина BclX и уменьшение интенсивности экспрессии индуктора апоптоза ВАХ, которое выражается в уменьшении соотношения ВАХ: BclX (1,4\0,83 соответственно в группах больных с ЗОЯ; 3,2 - в группе больных с ДОЯ).

5. При серозном раке яичников низкую выживаемость и неэффективность химиотерапии предсказывает повышенная экспрессия Bcl-Х, ММР-2 и ММР-9, аномального Е-кадхерина, что предполагает возможность применения таргетных препаратов, разрабатываемых в молекулярной медицине.

6. Клиническими особенностями серозных опухолей яичников являются: возрастное повышение встречаемости злокачественного типа опухоли, более выраженная наследственная отягощенность у пациенток с ЗОЯ и снижение у них в анамнезе репродуктивной функции.

7. Серозные опухоли яичника (особенно ЗОЯ) часто сочетаются с фоновыми и предраковыми заболеваниями шейки и тела матки, что предполагает более тщательное предоперационное обследование таких пациенток.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Репина, Наталья Борисовна, Рязань

1. Абраменко И.В. Оценка параметров апоптоза в диагностике онкологических заболеваний, их прогнозе и оптимизации схем терапии/ И.В. Абраменко, А.А. Фильченков // Вопр. онкологии. -2003.- №1.- С.21.

2. Агеенко А.И. Новая диагностика рака/А.И. Агеенко. -М.,- 2004.-С.21-37.

3. Агеенко А.И. Новая общая теория канцерогенеза и на её основе универсальный метод диагностики злокачественных опухолей/А. И. Агеенко., И.Е. Бахлаев, B.C. Ерхов/ЯТроблемы биомедицины на рубеже XXI века / РАЕН.-М.,- 2000.-С.31-34.

4. Акунц К.Б. Менопауза/ К.Б. Акунц. М.: Триада-Х,- 2004.-78с.

5. Антонеева И.И. Экспрессия антигенов вирусов папилломы человека, простого герпеса и фенотип рецепторов эстрогенов и прогестерона в малигнизированных эпителиальных опухолях яичников: Дис. . канд. мед. наук/И.И. Антонеева. -СП6.-2003.-С.З-4.

6. Апоптоз в гормонально-зависимых тканях и репродуктивной системы/Г.Т. Сухих, М.М. Дементьева, В.Н. Серов, А.В. Жданов и др.// Акушерство и гинекология. 1999.- №5.-С. 12-15.

7. Белохвостов А.С. Онкомаркеры. /А.С. Белохвостое, А.Г. Румянцев.- М.,-2002.-С.84.

8. Берпггейн Л.М. Современная эндокринология гормонозависимых опухолей/ Л.М. Берпггейн //Вопр. онкологии.- 2002.- №4.- С.500.

9. Борисенко С.А. Опухоли яичников/С.А.Борисенко, П.Г. Прокопенко.-М., 1986.- С.61-65.

10. Ю.Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии/Я.В. Бохман.-Л.,1989.- С. 386;392.

11. П.Быков В.Л. Топографические и временные характеристики овуляции у человека/В.Л. Быков //Пробл. репродукции. -2000.- № 4.- С. 13.

12. Быков B.JI. Частная гистология человека/В.Л. Быков, СПб., 2001.-186 с.

13. Верморкен Я. Эпителиальный рак яичников: состояние проблемы/Я. Верморкен//Материалы Второй Рос. онкол. конф.-М., 1999. С.85-88.

14. И.Винокуров В.Н. Пограничные опухоли яичников/ В.Н. Винокуров, М.Е. Лившиц, Л.Е. Юркова//Новые подходы к лечению гинекологического рака.-СПб., 1993.-С.49-63.

15. Вихляева Е.М. Руководство по эндокринной гинекологии/ Е.М. Вихляева.- М., 2000,- С. 176-179.

16. Вишневская Е.Е. Предопухолевые заболевания и злокачественные опухоли женских половых органов/Е.Е. Вишневская. -Минск, 2002.-С.5.

17. Вишневская Е.Е. Ошибки в онкогинекологической практике/Е.Е. Вишневская, Я.В. Бохман.- Мн.; Выш.шк., 1994. -256с.

18. Вишневский А.С. Опухоли яичников/А.С. Вишневский, О.Н. Скрябин//Журн. акушерства и женских болезней.-1999.- №4.- С.54-55.

19. Владимирская Е.Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста/ Е.Б. Владимирская, А.А. Масчан, А.Г. Румянцев//Гематоллогия и трансфузиол. -1997,- №5.- С.4-10.

20. Выявление и уточняющая диагностика предраковых заболеваний женских половых органов./Е.Р.Новикова, Т.В. Аркадьева, М.Г. Леонов и др. М., 2000.-С .20-26.

21. Галицкий В.А. Канцерогенез и механизмы внутриклеточной передачи сигналов/В.А. Галицкий//Вопр. онкологии.- 2003,- № 3.- С.284.

22. Гедерим М.Н. Факторы прогноза при начальных стадиях рака яичников: Автореф. дис. . канд. мед. наук/М.Н. Гедерим.М., 2000.-С.4.

23. Гилязутдинова З.Ш. Онкогинекология: Руководство/3.Ш. Гилязутдинова, М.К. Михайлова. -М.: МЕДпресс, 2000.- 376с.

24. Глазунов М.Ф. Опухоли яичников/М.Ф. Глазунов,-М., 1961.-С.72-76.

25. Гольберг З.В. Морфология рака/З.В. Гольберг, Т.А. Лавинкова //Ранняя онкологическая патология/Под ред. Б.Е. Петерсона,-М., 1985. С.56-70.

26. Гормонально-метаболический статус онкологических больных при поздно наступившей менопаузе/ JI.M. Берштейн, А.Е. Чернобровкина,

27. B.Б. Гамаюнова, Е.В. Цырлина//Вопр. онкологии. -2003. -№2,- С. 152-154.

28. Губина О.В. Особенности клинического течения и лечения пограничных опухолей яичников: Дис. . канд. мед. наук/О.В. Губина.-М.Д995.-С.65.

29. Гуревич JI.E. Иммунногистохимическое исследование фенотипа и инвазивного потенциала опухолей поджелудочной железы: Автореф. Дис. . д-ра биол. наук/JI.E. Гуревич. -М., 2003.- С.5.

30. Дильман В.Н. Эндокринологическая онкология: Руководство/В.Н. Дильман.- Л. Медицина, 1983,- 408 с.

31. Жорданиа К.И. Злокачественные эпителиальные опухоли яичников/К.И. Жорданиа// Совр. онкология.- 2000. №2.- С.51.

32. Жорданиа К.И. Оптимизация диагностики и лечения рака яичников. Дис. . д-ра. мед. наук/К.И. Жорданиа.-М., 1992.-С.25.

33. Имянитов Е.Н. Молекулярная генетика опухолей человека/Е.Н. Имянитов//Вопр. онкологии. 1998. -№1,- С.95-100.

34. Ймянитов Е.Н. Молекулярные аспекты первично-множественных опухолей/Е.Н. Имянитов, К.П. Хансон//Рос. Онкол. Журн. -1998.- №5.1. C.47-51.

35. Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека/Под ред. Н.Т. Райхлина, С.В. Петрова.- Казань, 2004.- С.65.

36. К вопросу о взаимоотношениях между органами и опухолью в организме/ И.П. Шабалкин, А.С. Ягубов, П.И. Шабалкин, ВюИ. Минаев//Рос. онкологич. журн.-2002.- № 2.-С. 26-27

37. Казанцева И.А. Закономерности морфогенеза, критерии дифференциальной диагностики и прогнозирования опухолей эндокринных желез/И.А. Казанцева, Л.Е. Гуревич, Г.А. Полякова// Альманах клинич. медицины: Юбил. сб. -М., 2003. -T.IV. — С.302.

38. Карселадзе А.И. Морфология эпителиальных опухолей яичников: Дис. . докт. мед. наук/А.И. Карселадзе.-М.,1989.- С.66-70.

39. Карселадзе А.И. Некоторые проблемы клинической морфологии эпителиальных опухолей яичников/А.И. Карселадзе/ТПрактич. онкология.- 2000.- № 4.- С. 14-18.

40. Киласония JI.B. Клинико-гормональная характеристика климактерия у женщин после овариоэктомии в переходном возрасте: Автореф. Дис. . канд. мед. наук/JI.B. Киласония. -М., 1986.-С.23.

41. Клинико-морфологические факторы прогноза у больных раком яичников. /И.В.Паниченко, В.Н. Богатырёв, К.И. Жорданиа, В.П. Козаченко //Акушерство и гинекология. М.-№6.-2004.-С.28.

42. Ковальский Г.Б. Морфо-функциональные особенности яичников в раннем репродуктивном периоде, при эндокринном бесплодии и климаксе: Дис. . канд. мед. наук/Г.Б. Ковальский,- СПб., 1987.- С.54.

43. Ковальский Г.Б. Структурные основы генеративной и эндокринной функции яичников в норме и патологии/Б.Г. Ковальский, Э.М. Китаев.-СПб., 1996.-С. 19-20.

44. Козаченко В.П. Диагностика и лечение рака яичников/В.П. Козаченко// Гинекология. -1999.-№2.- С.39-42.

45. Колосов А.Е. Опухоли яичников и прогноз для больных: Руководство/ А.Е. Колосов,-Киев, 1996. -С.240.

46. Коробейников А.П. Значение альфа 2-микроглобулина фертильности в диагностике и лечении опухолей яичников у женщин постменопаузального возраста: Дис. . канд. мед. наук/А.П. Коробейников.-М., 1999.-С.7-11.

47. Краевская И.С. Рак яичника/И.С. Краевская.- М., 1978.- С. 18-19.

48. Краевский Н.А. Руководство по патологоанатомической диагностике опухолей человека/ Н.А. Краевский, А.В. Смольяников.- М., 1976.- 481с.

49. Кузнецов С.Л. Атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии/С.Л. Кузнецов, Н.Н. Мушкамбаров, В.Л. Горячкина. М.:МИА.,-2002.-374с.

50. Кулаков В.И. Менопаузальный синдром. Клиническая диагностика, профилактика и заместительная гормонотерапия/В.И. Кулаков, Е.М. Вихляева.-М., 1996.- С.67.

51. Кулинич С.И. Факторы риска возникновения опухолей яичников и возможности ранней диагностики: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук/С.И. Кулинич.- СПб., 1993.- 54с.

52. Лопухов Д.Л. Клинико-диагностическая характеристика сочетанной доброкачественной патологии в перименопаузе: Автореф. Дис. . канд. мед. наук/Д.Л. Лопухов.-М.,1992,-С.29.

53. Лушников Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз)/Е.Ф. Лушников, А.Ю. Абросимов,-М., 2001.-С.173-175.

54. Майер И.О. Состояние яичников при миоме и эндометриозе тела матки (к вопросу об органосохраняющих операциях)/И.О. Майер, В.В. Власюк// Современные методы диагнгостики и лечения перименопаузального периода: Сб. науч. тр.-Тбилиси., 1986.-С. 101-106.

55. Макаров О.В. Патогенетические основы диагностики и лечения опухолей яичников: Автореф. Дис. . д-ра. мед. наук/ О.В. Макаров.-М.,-1990.- 42с.

56. Манухин И.Б. Избранные лекции по гинекологии/И.Б.Манухин М.М. Высоцкий, О.Г. Харлова.- М., 2003.С.41-44.

57. Манухин И.Б. Клинические лекции по гинекологической эндокринологии/И.Б.Манухин, Л.Г.Тумилович, М.А.Геворкян.-М., Мед. информ. Агенство- 2001. С.247.

58. Марченко А.С. Профилактика рака яичников (клинико-эпидемиологическое исследование). Автореф. дис. . канд. мед. наук/ А.С. Марченко. -Томск., 1993.-С.6.

59. Медик В.А. Новые подходы к скринингу, диагностике и лечению опухолей яичников: Материалы науч.-практ. конф./В.А. Медик, В.Г. Черенков, М.А. Локтионова.- Великий Новгород; СПб., 2001.- С.73.

60. Менопауза: Докл. науч. группы ВОЗ/ВОЗ.- М.: Медицина, 1984. -124с.

61. Мерабшивили В.М., Урманчеева А.Ф., Протасов Д.А. и др.// Материалы Научно-практической конф. "Новые подходы к скринингу, диагностике и лечению опухолей яичников'\-Великий Новгород; СПб, 2001.- С 74.

62. Металлопротеиназы матрикса нормальных тканей человека//П.З. Хасигов, О.В. Подобед, С.А. Кцоева и др./Биохимия.-2001.-Вып.2.-С.167-179.

63. Митрохина М.В. Клинико-морфологическая характеристика и отдаленные результаты лечения доброкачественных эпителиальных опухолей яичников: Автореф. дис. . канд. мед. наук/М.В. Митрохина. -Л.,1980.-27с.

64. Мушкамбаров Н.Н. Молекулярная биология//Н.Н. Мушкамбаров, С.Л. Кузнецов. М.:МИА.,2003.-544с.

65. Нарзуллаева Е.Н. Структура патологии шейки матки у женщин в перименопаузальном периоде/Е. Н. Нарзуллаева, С.М. Мухамадиева, Л.Э. Кузнецова// Мать и дитя: Материалы V Рос. форума.-М., 2003.- С.406.

66. Нечаева И.Д. Опухоли яичников/И.Д. Нечаева Л., 1987,- С.7-12; 27-32.

67. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель/В.С. Новиков.-СПб., 1996.-С.111.

68. Новиков А.И. Инфекции, передаваемые половым путём, и экзоцервикс/ А.И. Новиков, А.В. Кононов, И.Г. Ваганова М. -2002.-С.55-57.

69. Новикова Е.Р. Особенности эпидемиологии и современные методы диагностики злокачественных опухолей яичников/Е.Р.Новикова, Е.А. Ронина/Гинекология.- 1999.- №2.- С.43-45.

70. Носов Д.А. Механизмы регуляции внутриклеточной передачи сигнала и апоптоза: успехи и неудачи целенаправленной терапии/ Д.А. Носов// Материалы VIII Рос. онкол. конгр.-М. 2004.-С.63-64.

71. Паниченко И.В. Факторы прогноза у больных раком яичников: Дис. . канд.мед.наук/И.В. Паниченко.-М.1998.- С.9-12.

72. Пасман Н.М. Проблемы перименопаузы: современные направления терапии./Н.М. Пасман и др.//Тезисы докладов Международного

73. Конгресса «Профилактика, диагностика и лечение гинекологических заболеваний». М.,-2003.-С. 51.

74. Патолого-анатомическая диагностика опухолей человека/Под ред. Н.А. Краевского, А.В. Смолянникова, Д.С. Саркисова. -М., 1993. -Т2.-С.114-136.

75. Перегудова М.В. Ультраструктурное и радиоавтографическое исследование яичников при кистозных изменениях и доброкачественных опухолях: Дис. . канд.мед.наук/М.В. Перегудова.- Новосибирск, 1998.-С.87.

76. Пожарисский К.М. Значение иммуногистохимических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний/ К.М. Пожарисский, Е.Е. Леенман//Арх. патологии. -2000. -№5. С.3-11.

77. Полушкина И.Н. Биомолекулярные маркеры как факторы прогноза при серозном раке яичников III-IV стадии: Автореф. Дис. . канд.мед.наук/ И.Н. Полушкина.- М., 2002,- С.4-5.

78. Протеомика — новое направление в изучении опухолевых маркеров при раке яичников/А.И. Арчаков, О.В. Макаров, В.М. Говорун, А.Н. Грицай и др./Акушерство и гинекология. 2003.-№6.- С.9-10.

79. Райхлин Н.Т. Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и в опухолях/Н.Т. Райхлин, А.Н. Райхлин//Вопр. онкологии.-2002.-№4.-С. 166.

80. Роль металлопротеиназ матрикса и их ингибиторов в процессах опухолевой инвазии и метастазировании//П.З. Хасигов, О.В. Подобед, Т.С. Грачёва и др./Биохимия.- 2003,- Вып.7. -С. 869-876.

81. Рыжова О.В. Миома матки у женщин перименопаузального возраста: Дис. . канд. мед. наук/ О.В. Рыжова.- М., 2002.- С. 13.

82. Сакс Л.О. Остановка злокачественного роста путём принудительной дифференцировки клеток/Л.О. Сакс//В мире науки.-1986.-№3.-С.14-22.

83. Селезнева Н.Д. Доброкачественные опухоли яичников/Н.Д. Селезнева, Б.И. Железное.-М.,1982.- С.31;35.

84. Серов В.Н. Доброкачественные опухоли и опухолевидные образования яичников/В.Н. Серов, Л.И. Кудрявцева. М.,2001.- С.6-8.

85. Сидорова И.С. Анализ причин запоздалой диагностики рака яичников/И.С. Сидорова, А.Н. Саранцев, М.Р. Марутян//Акушерство и гинекология.-2004.-№3.-С.34-35.

86. Сметник В.П. Руководство по ютимактерию/В.П. Сметник, В.И. Кулаков.- М.: МИА.,2001.- 685с.

87. Сметник В.П. Неоперативная гинекология: Руководство/В.П.Сметник, Л.Г.Тумилович.-М.: Мед. информ. агенство.- 2000.- 592с.

88. Сметник В.П. Заместительная гормонотерапия: дискуссионные вопросы/ В.П.Сметник// Мать и дитя: Материалы V Рос. форума. М.,2003.-С.460.

89. Современные взгляды на этиологию, патогенез и профилактику наследственного рака органов женской репродуктивной системы (обзор литературы)/Л.В. Акуленко, И.Б. Манухин, Н.В. Шабалина, М.М. ВысоцкийШробл. репродукции.- 2000.- №1.- С. 14.

90. Солопова А.Г. Современные подходы к диагностике рецидивов злокачественных опухолей яичников/А.Г. Солопова//Мать и дитя: Материалы V Рос. форума. М.,2003.- С.465.

91. Состояние онкологической службы в Рязанской области и перспективы её развития/Е.П. Куликов, Н.В. Шомова, Т.П. Зубарева, A.M. Лебедев и др.//Сб. Вопросы диагностики, лечения и реабилитации онкологических заболеваний. Рязань, 1999.-С.79-82.

92. Специфические особенности ангиогенеза в увеальной меланоме/ЯО.И. Ухов, Г.Г. Зиангирова, В.Г. Лихванцева, С.Е. Астахова/Рос. медико-биологический вестник. Рязань-Москва, 2004.-№1-2.-С.7-12.

93. Татарчук Т. Ф. Эндокринная гинекология/Т. Ф. Татарчук, Я.П. Сольский. -Киев, 2003.-Ч.1.- С.186-187.

94. Тихомиров А.Л. Патофизиология климактерия и новые возможности заместительной гормональной терапии у женщин в постменопаузе/А.Л. Тихомиров, Ч.Г.Олейник // РМЖ.- 2003.- №16,- С. 919-920.

95. Тюляндин С.А. Рак яичников/ С.А. Тюляндин.- М., 1996.- 63 с.

96. Урманчеева А.Ф. Диагностика и лечение опухолей яичника: Пособие для врачей/А.Ф. Урманчеева, Г.Ф. Кутушева. СПб., 2001.-С.5.

97. Урманчеева А.Ф. Вопросы эпидемиологии и диагностики рака яичников/А.Ф. Урманчеева, И.Е. Мешкова//Практич. онкология. 2000.- № 4.- С.7-13.

98. Урманчеева А.Ф. Эволюция терапии рака яичника/А.Ф. Урманчеева// Вопр. онкологии.- 2002.- №4-5.- С.536.

99. Усольцева В.Е. Возможности диагностики патологии эндо- и миометрия в постменопаузе на доклинической стадии заболевания: Автореф. дис. . канд. мед. наук/В.Е. Усольцева.- Барнаул, 1999.-С.27.

100. Фролова О.Г. Репродуктивное здоровье жензцин/О.Г. Фролова// Качество жизни. Медицина. -2004.- №3.- С.9-13.

101. Хансон К.П. Молекулярная генетика рака яичников/ К.П. Хансон, Е. Н. Имянитов//Практич. онкология.- 2000.- № 4.- С.3-6.

102. Чернобыльский Б.В. Иммуногистохимическая диагностика опухолей яичников/Б.В. Чернобыльский//Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека/Под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина.- Казань, 2004,-Гл. 12. С. 125-132.

103. Чиссов В.И. Злокачественные новообразования в России в 2001 году/В.И. Чиссов., В.В.Старинский, Г.В.Петрова.-М., 2003.-С.20-26.

104. Шаталова Т.М. Рак яичников у женщин пожилого и старческого возраста (клиника, лечение, прогноз): Автореф. Дис. . канд. мед. наук/Т.М. Шаталова. -М., 2003,- С.4-5.

105. Baekelandt. М. Expression of apoptosis-related proteins is an independent determinant of patient prognosis in advanced ovarian cancer/M. Baekelandt, R. Holm, J. M. Nesland //J-Clin-Oncol.-2000.-Vol. 18, №22.-P. 3775.

106. Baekelandt. M. Clinical significance of apoptosis-related factors p53 ,Mdm2, and Bcl-2 in advanced ovarian cancer/M. Baekelandt//J-Clinical-Oncol.-1999.-Vol.17, №7.-P.2061.

107. Bandera C.A. BRCA 1 gene mutations in women with papillary serous carcinoma of the peritoneum/C.A. Bandera, M.G. Muto, J.O. Schorge//Obstet, Gynecol. 1998.-Vol.-92.-№4(Ptl): P.596-600.

108. Behrens P. The characteristic invasive seroses epithelial ovarian tumors are conditioned Ets-1, MMP-1 and expression MMP-9/P. Behrens, M. Rothe, A. Florin et all.// Int. J. Mol. Honey.- 2001.- Vol. 8, №2,- P.149-154.

109. Ben-Hur. H. Apoptosis and apoptosis-relatid proteins in the epithelium of human ovarian tumors: immunohistochemical and morfometric /Н. Ben-Hur //Eur-J-Gynaecol-Oncol. 1999.-Vol.20, №4.-P.249-253.

110. Ben-Hur. H. Apoptosis and apoptosis -related proteins (Fas,Fas ligand, Blc-2,p53) in lymphoid elements of human ovarian tumors / H. Ben-Hur //Eur-J-Gynaecol-Oncol.-2000.-Vol.21, №1.- P.53-57.

111. Berchuck A. Mutations of the E-cadherin gene in human gynecologic cancers/A. Berchuck, M.F. Kohler, J. Boyd //Nat. Genet. -1994. Vol.7. -P. 98-102.

112. O.Boise L.H. Bcl-x, bcl-2 regulated gene that functions as a dominant regulator of apoptotik death/L.H. Boise, M. Gonzales-Garsia, C.E. Postema // Cell. -1993.-Vol.74.- P.598-603.

113. Boyd J. Hereditary ovarian cancer: Molecular genetics and clinical implication/! Boyd//ASCO Educational Book.- 2000.-P. 532-540.

114. Bramhall S.R. The matrix metalloproteinases and their inhibitors in the pancreatic cancer/S.R. Bramhal//IntJ. Pancreatol. -1997. Vol. 21. - P. 1-12.

115. Brenner P.F. The menopause/P.F. Brenner//West J. Med.-1992.-Vol. 136, №3.-P. 305-312.

116. Burke W. Recommendations for follow-up care of individuals with an inherited predisposition to cancer BRCA 1 and BRCA 2/ W. Burke, M. Daly, J. Garber//JAMA.-1997.-Vol.277.-P. 997-1003.

117. Burnet F.M. Cellular immunology/F.M. Burnet// Melburne University Press; Cembridge University Press.-1969.-529 p.

118. Cherbonnel-Lassere C. Supression of apoptpsis by Bcl-2 and Bcl-xL promotes susceptibility to mutegenesis/C. Cherbonnel-Lassere, S. Gauny, A. Kronenberg//Oncogene. -1996. Vol. 13. -P.1489- 1497.

119. Citton S.A. TGFp a role in systematic sclerosis? (Mini-review)/ S.A. Citton, A.L. Herrick, M.I.V Jayson. //J.Pathology. -1998. - Vol.184. - P. 4-6.

120. Cordon-Cardo C. Mutation of cell gene regulators. Biological and clinical implications for human neoplasia/C. Cordon-Cardo//Am. J. Phatol.- 1995.-Vol. 47.-P. 545-560.

121. Cummings M. Apoptosis/M. Cummings, C. Winteflord//Am. J.Surg.Pathol. -1997. Vol.21, №1. - P. 88-99.

122. Dachs G.U. Targeting gene therapy to cancer: A review/G.U. Dachs //Oncology Research.- 1997.-Vol. 9, № 6-7.- P.313-325.

123. Davidson B. Ovarian carcinoma cells in serum outpouring show MMP-2 and level TIMP-2 mRNA/R. Reich, A. Bever//Cancer Eur. J.- 2001.- Vol. 37, №16.-P. 2040-49.

124. Fathalla M.F. Incessant ovulation-9 faktor in ovarian neoplasia/ M.F Fathalla// Lanset. -1971.-Vol. 2.-P.34.

125. Folkman J. Tumor angiogenesis/J. Folkman//Adv. Cancer Res.-1985.-Vol.43.-P. 175-200.

126. Furuya M. The analysis of matrix metalloproteinases and their inhibitors in the cyst seroses ovarian tumors/M. Furaya, H. Ishikura, Y. Ogawa// Pathobiology.- 2000.- Vol. 68, №6.-P. 239-244.

127. Galis Z S. Cytokine-stimlated human vascular smooth muscle cells synthesizea complement of enzymes required for extracellular matrixdigestion/Z S. Galis, M. Muszynski, GK. Sukhova //Circ. Res. -1994. Vol. 75.-P. 181-189.

128. Garzetti GG. The raised whey 72-KDa metalloproteinasein seroses ovarian tumors: comparison with experiment ,125/ GG. Garzetti, A. Ciavattini, G. Lucani //Anticancer Res.- 1996.- Vol.16, №4A.- P. 2123-2127.

129. Garzetti GG. Fabrics and whey metalloproteinase expression (MMP-2) in ovarian seroses cystoadenocarcinomas: clinical and foreshandowing sense/ GG. Garzetti, A. Ciavattini, G. Lucani // Anticancer Res.- 1995.- Vol. 15.-№6.-P. 2799-2804.

130. Giannelli G. Induction of Cell Migtion by Matrix Metalloproteinase-2 Cleavage of Laminin-5/G. Giannelli, J. Falk-Marziller, O. Schiradi //Science. -1997.-Vol.277.-P. 225-228.

131. Godard B. Risk factors for famillial and sporadic ovarian cancer among French Canadians; f case-control stady/B. Godard, W. Foulkes, D. Prowvencher //Am J Obstet. Gynecol. -1998.-Vol. 62.-P 676-689.

132. Goldfarb R.H. Proteolitic enzymes in tumor invasion and degradation of host extracellular matrix. Mechanisms of Cancer Metastasis/R.H. Goldfarb, K.V. Honn, W.E. Powers//Ed.s.: Boston, 1986.-P. 341-375.

133. Gress TM. Balance of expression of genes coding for extracellular matrix proteins and extracellular matrix degrading proteases in chronic pancreatitis/TM. Gress, F. Muller-Pillash, MM. Lerch//Z. Gastroenterol. -1994. -Vol. 32.-P. 221-225.

134. Greenlu R.T. Cancer/ R.T. Greenlu, T. Murray // Cancer statistics. -2000.-Vol. 4, № 2.-P.108.

135. Gurevish. P. Expression of apoptosis and apoptosis-related proteins in microvessels of human ovarian epithelial tumors/P. Gurevish//Index-Medicus.-2001.-Vol.21, №2B.-P. 1335.

136. Hefler L. Serum soluble Fas levels in ovarian cancer/L. Heller, K. Mayerhofer, A. Nardi // Obstet. Gynecol. 2000.-Vol.96.- P. 65-69.

137. Hirohashi S. Inactivation of the E-cadheein-mediated cell adhesion system in human cancer/ S. Hirohashi//Am. J Pathol. -1998. Vol. 153. - P. 333-339.

138. Hoskenbery D. Bcl-2 is an inner mitohondrial membrane protein that blocs programmed cell death/ D. Hoskenbery, G. Nunez, C. Milliman // Nature (London), 1990.-P. 334-336; 343.

139. Hotary K. Regulation of cell invasion and morphogenesis in a three-dimensional type 1 collagen matrix by membrane-type matrix metalloproteinases 1, 2 and 3/ K. Hotary, E. Allen, A. Punhuieri //J.Cell Biol. -2000.-Vol. 149.-P. 1309-1323.

140. Huang D.C. The anti-apoptosis function of Bcl-2 can be genetically separated from its inhibitory effect on cell cycle entry/D.C. Huang, L.A. O, Reilly, A. Stasser //EMBO J. -1997. Vol. 16. - P. 4628-4638.

141. Huang LW. The differential expression of the matrix metalloproteinase-9 and inhibitors fabrics matrix metalloproteinase-1 squirrel and mRNA in epithelial ovarian tumor/ LW. Huang, AP. Garrett, DA// Bell Gynecol. Oncol.- 2000.-Vol. 77, №30.-P. 369-376.

142. Jacobs I. Prevention of ovarian cancer: a survey of the practice of prophylactic oophorectomy by fellows and members of the Royal College of Obstetricans and Gynecologist/1. Jacobs, D. Oram //Br. J. Obstet. Gynecol. -1989.-Vol.96.-P. 510.

143. Kaplan B.Y. Familial papillary serous carcinoma of the cervix, peritoneum fnd ovary: report of the first case/ B.Y. Kaplan, T.A Caputo, P.U. Shen// Gynecol. Oncol.- 1998.- Vol. 70, №2.-P. 289-294.

144. Kimmig R. Prevention of ovarian cancer / P. Wimberger, P. Hillemans// Gynecol. Oncol. 2002. - Vol. 84, №1.-P. 21-31.

145. Kuijak A., Jukic S., Kupesic S. A combined Doppler and morphopatological study of ovarian tumors. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1997. Feb. 71 (20. P. 147-150.

146. Lauritzen G. The hypothalamic anterior pituitary sistem in the climacteric age period/ G. Lauritzen//Basel.- 1975.- №3. P. 20-31.

147. Liotta LA. Tumor invasion and metastsis: An imbalance of positive and negative regulation/LA. Liotta, WG. Stetler-Stevenson //Cancer Res. -1991. -Vol. 51,(Supp2). P. 5054-5059.

148. Luciano A. Hiperprolactinemia in polycystic ovary syndrome/ A. Luciano, F. Chapler, B. Sherman/ZFertil. Steril., 1984.-Vol. 41.- №5.-P. 719-725.

149. Mackey S.E. Ovarian cancer screening/S.E. Mackey, W.T. Creasman// J Clin Oncol.- 1995.-Vol. 13. -P. 783-793.

150. Matias-Guiu X. Molecular pathology of ovarian carcinomas/X. Matias-Guiu, J. Prat // Virchows Arch.- 1998.- Vol.433, №2. -P. 103-111.

151. McDonnell TJ. Importance of the Bcl-2 family in cell death regulation/ TJ. McDonnell, A. Becham, M. Sarkiss //Experential Biol. 1996. - Vol. 52. - P. 1008-1017.

152. McMenamin M.E. Extent in apoptosis ovarian serous carcinoma: relation to mitotic and proliferative indices, p53 expression, and survival/ M.E. McMenamin, A.J. 0"Neil, E.F. Gafftiey// Mol. Pathol. -1997.-Vol.50.-P. 242246.

153. Miyamoto Y. Immunohistochemical analisis of Bcl-2, BAX, Bcl-X and Mcl-1 expression in pancreatic cancers/Y. Miyamoto, R.H.M. Wada, J.-U. Lee //Oncology. -1999.- Vol. 56. P. 73-82.

154. Munakata S. Expressions of Fas ligand and other apoptosis-related genes and their prognostic significance in epithelial ovarian neoplasms/ S. Munakata, T. Emonoto, M. Tsujimoto//Brit. J. Cancer. -2000.-Vol.82.-P. 1446-1452.

155. Munstedt K. Steroid hormone receptors and long term survival in invasive ovarian cancer/ K. Munstedt, J. Steen, A.G. Knauf // Cancer (Philad).-2000.-Vol.89.-P. 1783-1791.

156. Narod S.A. Oral contraceptives and the risk of hereditary ovarian cancer/ S.A. Narod, H. Rich, R. Moslehi//N Engl. J Med.- 1998.-Vol. 339. P. 424-428.

157. O'Reilly LA. The cell death ingibitor Bcl-2 and its homologues influens control of the cycle entry/LA. O'Reilly, DC. Huang, A. Stasser/ZEMBO. -1996. -Vol. 15.-P. 6979-6990.

158. Perl A.K. Acausal role E-cadherin in the transition from adenomato carcinoma/A.K. Perl, P. Wilgenbus, U. Dahl//Nature. -1998. Vol. 392. - P. 190-193.

159. Piver M.S Characteristics of familian ovarian cancer: report of the 1,000 families in the Gilda Radner Familial Ovarian Cancer Registry/M.S. Piver, J.M.Goldberg, Y. Tsukada//Eur J Gynecol. Oncol. -1996.-Vol.13.- P.120-122.

160. Potashnik G. Frequency, sequency and side of ovulation in wumen menstruating normally/ G. Potashnik, V. Meizner, M. Sternberg//Br Med J.- 1987.-Vol. 294.-P. 219.

161. Potter E. The cadherin-catenin system: implications for growth and differentiation of endocrine tissues/E. Potter, C. Bergwitz, G. Brabant //End. Rev. -1999. -Vol. 20, №2. P. 207-239.

162. Powell D.E. Current concept in epithelial ovarian tumours: does benign to malignant transformation occur?/D.E. Powell, L. Puis, I. Ragell //Human Pathol.- 1992.-Vol. 23.-P. 846-847.

163. Quaranta V. Cell migration through extracellular matrix: membrane-type metalloproteinases make the way/V. Quaranta //J. Cell Biol. -2000. -Vol. 149. -P. 1167-1170.

164. Reed J.C. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death/ J.C. Reed //J.Cell Biology. -1994. Vol. 124. -P. 1-6.

165. J. Staunton, E. Gaffiiey //Anat. Pathol. -1995. Vol.103. - P. 300-307. 174.Stetler-Stevenson W.G. Dynamics of the Turnover during Pathologic remodeling of the extracellular matrix/W.G. Stetler-Stevenson //Am. J.Pathol. -1996.-Vol. 148-P. 1345-1351.

166. Takeichi M. The cadherins: Cell-cell adhesion molecules controling animal morphogenesis/M. Takeichi//Development. 1988. - Vol. 102. - P. 639-655.

167. Takeichi M. Cadherine-cell adhesion receptor as morphogenetic regulator/M. Takeichi //Science. -1991. Vol. 251. -P. 1451-1455.

168. Tang D.G. Apoptosis: A current molecular analysis/D.G. Tang, AT. Porter //Oncology Research. 1996. - Vol.3, №30. -P. 117-131.

169. Taraboletti G. Shedding of the Matrix Mettalloproteases ММР-2, MMP-9 and MTl-MMP as Membrane Vesicl-Associated Components by Endotelice Cells/ G. Taraboletti, S.D'Ascerzo, P. Borsotti //Am.J.Pathol. 2002. - Vol.160. -P.673-680.

170. Taylor C. R. Immunomicroscopy a diagnostic tool for the surgical pathologists/C. R Taylor, Cote R. J// W.B. Saundeus. 1994.-P.

171. Thompson G.B. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease/ G.B. Thompson // Science. 1995.-Vol.267.-P. 1456-1462.

172. Thompson J.D. Linde*s Operative Gynecol. Hysterectomy/J.D. Thompson, J.A. Rock//Philadelphia: Lippincot, 1992.-663p.

173. Vakkala M. Apoptosis during carcinoma progression/M. Vakkala, K. Lahteenmaki, H. Raunio //Clin. Cancer Res.- 1999.-Vol.5.-P.319-324.

174. Van den Berfhe H. Same aspects of ovarian tumors/H. Van den Berfhe, P. Dal Cin //Europ. J. Obstet. Gynecol. Reproduct. Biol.- 1998.- Vol. 81. P. 283286.

175. Von Georgi R. The immune system, apoptosis-related proteins in human ovarian tumors / R. Von Georgi, F.E., Franke, K. Munstedt // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. -2003.-Vol. Ill, №2.-P. 189-196.

176. Vu Т.Н. Matrix metallproteinases: Effectors of development and normal physiology/T.H. Vu, Z. Werb//Genes&Development. 2000. -V.14. - P. 21232133.

177. Werb Z. ECM and Cell Surface Proteolysis: Regulating Cellular Ecology/ Z. Werb //Cell. 1997. - Vol. 91. -P. 439-442.

178. Yamasuki F. Apoptotic index in ovarian carcinomas: correlation with clinicopathologic factors and prognosis/F. Yamasuki, O. Tokunada, H. Susimori // Gynecol. Oncol.- 1997. Vol. 66,- P. 439-448.

179. Yang E. Bad, a heterodimerik partner for Bcl-XL and Bcl-2, displaces Bax and promotes cell death/ E. Yang J. Zha, J. Joskel // Cell.- 1995.-Vol. 80.- P. 285-291.

180. Yoshida Н. Survivin, bcl-2 and matrix metalloproteinase -2 raises the passing of the clear cell- and seroses- type ovarian carcinoma/ H. Yoshida, O. Ishiko, Y. Matsumoto// Int. J. Oncol.- 2001.- Vol. 19, № 3.- P. 537-542.

181. Yu Q. Cell surface-localized matrix metalloproteinase-9 proteolytically activates TGF(3 and promotes tumor invasion and angiogenesis/Q. Yu, I. Stamenkovie //Genes&Development. 2000. - Vol.14. - P. 163-176.

182. Yubushita H. Vascular endothelial factor of the growing, actuated matrix metalloproteinase in ascetic liquid spreading ovarian cancer/H. Yubushita, M. Shimazu, M. Noguchi// Turnips Oncol.- 2003.-Vol.10, №1.- P. 89-95.

183. Zusman. I. The immune system, apoptosis-related proteins in human ovarian tumors/1. Zusman // Int-I-Oncol.-2001.-Vol. 18, №5.-P.965-972.

Информация о работе

Репина, Наталья Борисовна
кандидата медицинских наук
Рязань, 2005
ВАК 03.00.25

Диссертация

Клинико-морфологическая и иммуногистохимическая характеристика серозных опухолей яичника - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы