Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Маркеры биологической агрессивности гормонально-зависимых опухолей при измененном тиреоидном статусе

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Маркеры биологической агрессивности гормонально-зависимых опухолей при измененном тиреоидном статусе"

ГЛУШАКОВ

Руслан Иванович

МАРКЕРЫ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АГРЕССИВНОСТИ ГОРМОНАЛЬНО-ЗАВИСИМЫХ ОПУХОЛЕЙ ПРИ ИЗМЕНЕННОМ ТИРЕОИДНОМ СТАТУСЕ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 14.01.12- онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

9 ОЕ3 2С

Санкт-Петербург

2012

005010259

Работа выполнена на кафедре онкологии с курсом лучевой диагностики и лучевой терапии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научные руководители:

доктор медицинских наук доктор медицинских наук профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор доктор медицинских наук профессор

Ведущее учреждение:

Федеральное государственное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М.Кирова» Министерства Обороны Российской Федерации

Защита диссертации состоится «2?/» февраля 2012 года в часов на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, доктора наук Д 208.087.01 при ГБОУ ВПО СПбГПМА Минздравсоцразвития России по адресу; 194100, Санкт-Петербург, ул. Литовская, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной педиатрической медицинской академии по адресу: 194100, Санкт-Петербург, ул. Кантемировская, 16.

Автореферат разослан » января 2012 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор Наталья Рафаиловна Карелина

Сергей Николаевич Прошин Наталья Игоревна Тапильская

Валентина Филипповна Мельникова Евгений Наумович Имянитов

Актуальность исследования. Заболевания щитовидной железы занимают первое место среди всех болезней эндокринной системы, причем женщины болеют в 3-10 раз чаще мужчин. В структуре эндокринных заболеваний диффузный токсический зоб занимает третье место после сахарного диабета и аутоиммунного тиреоидита, встречаемость заболевания у женщин также отмечается в 8-10 раз чаще, чем у мужчин [Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская В.М., 2007]. Эпидемиологические исследования, выполненные в последние десятилетия, продемонстрировали, что длительный гипертиреоз в анамнезе увеличивает относительный риск развития рака яичника на 80% [Ness R.B., Grisso J.A., Cottreau С. et al, 2000], рака молочной железы на 45-60% [Shering S.G., Zbar А.Р., Moriarty М. et al., 1996]. Развитие профилактической направленности здравоохранения является приоритетной целью национального проекта «Здоровье» в России. В рамках подпрограммы "Онкология" Федеральной целевой программы "Предупреждение и борьба с социально значимыми заболеваниями (2007 - 2011 гг.)" утверждена модель регионарной программы профилактики рака, которая подразумевает формирование групп повышенного риска, что является частью комплексной профилактики злокачественных новообразований и преследует цель сохранение здоровья и работоспособности населения, а также сокращение сроков лечения и реабилитации.

Существующая концепция об инициации и промоции канцерогенеза постулирует, что существенными факторами риска возникновения злокачественных опухолей, является нарушение метаболизма и гормонального статуса [Аничков Н.М., Кветной И.М., Коновалов С.С., 2004]. Одним из подтверждений роли метаболических процессов в канцерогенезе является концепция Я.В. Бохмана о двух патогенетических вариантах рака эндометрия [Бохман Я.В., 2002]. Также одной из важных задач современной онкологии является поиск признаков и свойств опухолей, на основе которых можно было бы прогнозировать течение заболевания и определять адекватную терапию. Важнейшими характеристиками злокачественного новообразования помимо клинической стадии является его гистологический вариант, степень дифференцировки и биологическая агрессивность. В последние годы усилия морфологов и онкологов направлены на выявление дополнительных прогностических признаков, которые позволят выяснить причины различного поведения опухолей при одинаковой клинической стадии и степени дифференцировки [Винокуров B.JL, 2010; Завалишина Л.Э., 2006]. Как известно, оценить биологическую агрессивность первичной опухоли можно, исследуя показатели ее пролиферативной активности, активности апоптоза, состояние ряда основных регуляторных рецепторов и систем. Для этого, различными современными молекулярно-биологическими методами, исследуются белки-регуляторы клеточного цикла, гены-супрессоры опухолей и их продукты, белки, регулирующие запрограммированную клеточную гибель,

многочисленные факторы роста и их рецепторы, интерлейкины, цитокины и многие другие регуляторные системы клетки. Помимо вышеперечисленного биологическая агрессивность опухолей проявляется в инвазивном росте и метастазировании. Однако существующая таргетная противоопухолевая терапия, направленная против мишеней белкового происхождения, не всегда демонстрирует свою эффективность в клинической практике, что диктует необходимость изучения опухолевых субстратов небелковой природы. Показано, что опухоли, характеризующиеся изменением уровней экспрессии определенных типов ассоциированных с опухолью аотигенов углеводной природы (ТАСАя), демонстрируют меньший метастатический потенциал и склонность к прогрессированию, чем опухоли, обладающие более высоким уровнем ТАСАв, что отражается на выживаемости пациентов [РппеШ А., АигеИ М., Нккй О. е1 а1., 2010]. Изучение способности опухолевых клеток к инвазии и метастазированию особенно на ранних стадиях имеет не только теоретический интерес, но и может дать возможности прогнозирования течения болезни. В связи с вышеизложенным, представляется актуальным изучение свойств опухолей, на основе которых можно было бы прогнозировать течение злокачественных опухолей, и заболеваний, повышающих риск возникновения злокачественных новообразований.

Цель исследования. Изучить взаимосвязь между тиреоидным статусом и уровнем экспрессии маркеров биологической агрессивности гормональнозависимых опухолей (дисиалоганглиозидов) в злокачественно измененных тканях.

Задачи исследования:

1. Определить частоту возникновения опухолей при индуцированном длительном тиреотоксикозе и гипотиреозе на модели животных (мышей линии СЗН-А).

2. Оценить степень распространенности опухолевого процесса в эксперименте при индуцированном длительном тиреотоксикозе и гипотиреозе на модели животных.

3. Определить особенности гистологического строения тканей молочной железы и яичника у животных с индуцированным длительно протекающим гипер- и гипотиреозом.

4. Оценить экспрессию маркеров биологической агрессивности опухоли - ганглиозидов вБ1а и СОЗ в злокачественно измененной ткани при раке яичника у пациенток с тиреотоксикозом в момент выявления злокачественного новообразования и тиреотоксикозом в анамнезе.

5. Оценить экспрессию ганглиозидов ОБ 1а и СЭЗ в ткани опухоли при раке молочной железы у пациенток с тиреотоксикозом в момент выявления злокачественного новообразования и тиреотоксикозом в анамнезе.

6. Провести ретроспективную оценку частоты возникновения злокачественных опухолей у пациенток с длительным тиреотоксикозом в анамнезе по сравнению с пациентками с эу- и гипотиреозом.

Научная новизна. Впервые определена частота возникновения опухолей молочной железы и степень распространенности опухолевого процесса при длительно протекающем гипер- и гипотиреозе умеренной и тяжелой степени в эксперименте.

Впервые определены уровни экспрессии длсиалоганглиозидов 001а и

003 в злокачественно измененных тканях яичника и молочной железы при различном тиреоидном статусе.

Впервые проведено эпидемиологическое исследование онкозаболеваемости у пациенток с тиреотоксикозом в анамнезе в Санкт-Петербурге и Ленинградской области.

Теоретическая и практическая значимость. В эксперименте показано, что длительно протекающий гипертиреоз увеличивает частоту возникновения спонтанных опухолей молочной железы. Кроме того, как показано в эксперименте, гипертиреоидное состояние усугубляет тяжесть течения злокачественного новообразования, что выражается в диссеминации опухолевого процесса. У пациенток с гипертиреозом в момент выявления и лечения рака яичника и рака молочной железы выявлено достоверное снижение уровня экспрессии дисиалоганглиозида С01а, что коррелирует с увеличением биологической агрессивности опухоли. На основании эпидемиологического исследования установлено, что у пациенток с тиреотоксикозом в анамнезе увеличена частота возникновения рака ободочной кишки, рака яичника, рака молочной железы и глиальных опухолей. Включение пациенток с длительно протекающим гипертиреозом в анамнезе в группу повышенного риска позволит оптимизировать вторичную профилактику злокачественных новообразований.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При длительно существующем индуцированном в эксперименте гипертиреозе увеличивается частота возникновения рака молочной железы и степень распространенности опухолевого процесса. В группе животных с индуцированным гипертиреозом возникновение опухолей молочной железы опережает по срокам по сравнению с группами сравнения на протяжении всего эксперимента.

2. В ткани опухоли, полученной от больных раком яичника и раком молочной железы, снижен уровень экспрессии маркеров биологической агрессивности опухолей - ганглиозидов СВ 1а и вБЗ, что является неблагоприятным прогностическим фактором течения заболевания.

3. У пациенток с длительным тиреотоксикозом в анамнезе увеличивается частота возникновения злокачественных новообразований, в том числе и гормонально-зависимых опухолей, по сравнению с пациентками с эу- и гипотиреозом.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на 10-м и 12-м Всероссийском форуме «Мать и дитя» (г. Москва), 3-ем съезде физиологов стран СНГ (г. Ялта, 2011), на заседании Санкт-Петербургского научного общества иммунологов (2011).

Публикации. Основные результаты диссертации изложены в 7 печатных работах, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованном ВАК, и 4 тезисов.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 3 глав, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертационная работа изложена на 144 страницах машинописного текста, содержит 40 рисунков и 31 таблицу. Библиографический указатель содержит 146 наименования, в том числе 10 отечественных и 136 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Методы экспериментального исследования. Экспериментальное исследование выполнено в течение 44 недель с 1 октября 2010 года по 05 августа 2011 года. Объектом исследования служили 33 половозрелые инбредные мыши линии СЗН-А (поставщик - питомник РАМН «Рапполово», Ленинградская область, Рапполово), являющиеся экспериментальной моделью рака молочной железы человека. Возраст лабораторных животных составил 40±10 сут, масса 18-20 г.

Животные первой (гипертиреоидной, 15 мышей) и третьей (контрольной, эутиреоидной, 8 мышей) группы получали чистую воду из автопоилок ас1 ПЫсЬт. На лабораторных животных первой группы воспроизведена модель экспериментального гипертиреоза посредством внутрибрюшинного введения раствора Ь-тироксина (РУП «Белмедпрепараты», г. Минск) в количестве 200 мкг на 100 г веса (препарат был разведен в 2,0 мл физиологического раствора) 1 раз в двух суток. У лабораторных животных второй (гипотиреоидной, 10 мышей) группы воспроизведена модель экспериментального пропилтиоурацилового гипотиреоза путем замены воды в автопоилке на 0,5% раствор пропилтиоурацила («Мегск», Германия). По расчетным данным каждое животное получало примерно 1,9-2,2 мг пропилтиоурацила на 100 г массы тела в сутки. Мыши третьей группы составили контрольную группу. Для корректности эксперимента животным второй и третьей групп выполнялось внутрибрюшинное введение 0,9%-го физиологического раствора 1 раз в течение двух суток.

Экспериментальная работа проводилась в соответствии с требованиями, предъявляемыми к проведению экспериментальных исследований на животных. Животные содержались в виварии в стандартных условиях освещения и питания в соответствии с Приказом М3 СССР 1179 от 10 октября 1983 г. «Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник». Обращение с животными проводилось в соответствии с международными стандартами.

Методы морфологического исследования. Для определения морфологической картины индуцированной у мышей опухоли молочной железы, осуществлялась посмертная экстирпация первичной опухоли и опухолевых узлов. Опухолевая ткань заливалась 10 %-м формалином на сутки, после чего помещалась на более длительный срок хранения в 10 %-м

формалине до проведения гистологической проводки. Для гистологического анализа опухолевый узел заливали парафином, готовили серию срезов толщиной не более 4-6 мкм, окрашивали гематоксилином Карации. Гистологический анализ проводили на микроскопе ZEISS Axio Scope.Al.

Методы иммуногистохимичсского исследования. Из каждого парафинового блока раковой опухоли яичника и молочной железы на микротоме Leica SM 2000R (Sliding Microtome for Routine Applications) были получены срезы толщиной около 4 микронов. Для детекции связывания первых антител (анти-GDla, Millipore, USA; aimi-GD3, Thermo Scientific Pierce Antibodies, USA) с искомыми антигенами (клетки опухоли) использовали набор VectaStain. Подсчет клеток, в которых экспрессировались ганглиозиды, проводился при увеличении 400х в исследуемом образце. Затем высчитывался процент клеток, в которых экспрессировался данный антиген. Частоту клеток, позитивных в иммуногистохимической реакции с моноклональными антителами на экспрессию искомых гликосфинголипидов, выражали в процентах (%). Оценивалось не менее 10 полей зрения (400х).

Методы эпидемиологического исследования. Проведенное эпидемиологическое исследование представляло ретроспективное клиническое одномоментное аналитическое исследование типа «случай-контроль» среди контингента, отобранного для изучения распространенности злокачественных новообразований среди популяции. Проведено ретроспективное изучение историй болезни пациенток, находившихся на стационарном лечении в 1-й клинике (кафедры) терапии (усовершенствования врачей) (зав. кафедрой -доктор медицинских наук, профессор Шустов С'.Б.) Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова с 2000 по 2006 гг. Сформированы две группы пациенток. Основную группу составили 136 женщин в возрасте от 24 до 73 лет (средний возраст 47,9±8,9 лет) с выраженным тиреотоксикозом, обусловленным основным заболеванием (диффузный токсический зоб, узловой токсический зоб). Группу сравнения составили 104 пациентки, находившиеся на стационарном лечении в 1-й клинике терапии (усовершенствования врачей) Военно-медицинской академии им.С.М.Кирова по поводу сердечно-сосудистой патологии в аналогичный период времени с эу- и гипотиреоидным статусом. У всех пациенток контрольной группы диагностирован аутоиммунный тиреоидит (АИТ), причем 87 (83,7%) больных получали заместительную гормональную терапию L-тироксином. Критерии исключения были одинаковыми для основной и контрольной группы: болезни крови,

тромбоэмболия, острый инфаркт миокарда, инсульт в анамнезе, вирусные гепатиты, тяжелая форма сахарного диабета, сахарный диабет I типа, ожирение III степени. Онкозаболеваемость в исследуехмых группах оценивалось с помощью баз данных статистического учета но факту обращаемости в специализированные лечебно-профилактические учреждения и/или факту смерти. Использовались базы данных Городского клинического онкологического диспансера г.Санкт-Петербурга, Ленинградского областного онкологического диспансера, популяционного ракового регистра г.Санкт-

Петербурга, а также база данных Всеармейского ракового регистра МО РФ и базы данных статистического учета больных «МАИС-Эрмедис» Военномедицинской академии имени С.М.Кирова. Также факт заболеваемости злокачественным новообразованием оценивался путем прямого общения по телефону с пациентками или их родственниками.

Статистическая обработка результатов исследования. Математическую и статистическая обработку результатов исследования проводили на персональном компьютере с использованием стандартного пакета программ STATISTICA и SPSS 13,0 for Windows. Достоверность различий определяли, используя параметрический (критерий Стыодента), в случае распределения, близкого к нормальному, и непараметрический (критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) методы. Изучение различий в группах эпидемиологического исследования проводилось непараметрическими методами (критерий Манна-Уитни, Вилкоксона, Краскела-Уоллиса, хи-квадрат, двусторонний вариант точного критерия Фишера). Для изучения корреляционных взаимоотношений использован коэффициент корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Первым этапом нашего исследования явилось определение частоты возникновения злокачественных опухолей молочной железы при индуцированном длительном тиреотоксикозе и гипотиреозе на животной модели мышей линии СЗН-А. На протяжении всего эксперимента частота возникновения опухоли молочной железы в гипотиреоидной группе экспериментальных животных оказалась достоверно ниже по сравнению с эутиреоидной и гипертиреоидной группой. Первые опухоли были зарегистрированы на 21-й, 29-й, 36-й неделе эксперимента для

гипертиреоидных, эутиреоидных, и гипотиреоидных групп соответственно. Частота возникновения опухолей молочной железы по завершении эксперимента составила 86,67%, 62,5%, и 30,0% для гипертиреоидной, эутиреоидной, и гипотиреоидной групп соответственно. Частота регистрации опухолей достигла 25% на 27-й, 33-й и 44-й неделе эксперимента для гипертиреоидной, эутиреоидной, и гипотиреоидной групп соответственно. Гипертиреоидная и эутиреоидная группы достигли 50%-й частоты возникновения опухоли к 36-й и 39-й неделе эксперимента соответственно, в то время как по завершению эксперимента только у 30% гипотиреоидных мышей выявлены опухоли.

В результате обследования регионарных лимфатических узлов после вскрытия животных обнаружено, что число пораженных опухолью лимфоузлов составляло 10±1,14, 9,25+0,96 и 7,0 лимфоузлов для гипертиреоидной,

эутиреоидной, и гипотиреоидной групп соответственно. Число метастатически измененных лимфоузлов, размерами 2 мм и более составило 65,9±16,7%, 28,6% и 53,9±7,2% для животных с индуцированным гипертиреозом, индуцированным гипотиреозом и контрольной группы соответственно. Достоверное снижение числа пораженных лимфатических узлов и снижение числа лимфоузлов

размерами менее 2 мм отмечалось в группе животных с индуцированным и длительно протекающим гипотиреозом (р < 0,05). Наряду с регионарными метастазами у двух мышей из гипертиреоидной группы выявлены метастазы в позвоночник, что проявлялось клинически парезом задних лапок, а впоследствии было подтверждено морфологически.

оЛ Число заболевших мышей линии СЗН в эксперименте

..... м.... гипертиреоз — — гипотиреоз контроль

Рис. 1. Частота выявления опухолей молочной железы в эксперименте.

Таблица 1

Степень распространения опухолевого процесса у лабораторных животных

группа число живот- ных число забо- левших живот- ных число животных с метастазами среднее число метастати- чески изменен- ных лимфо- узлов размер метастатически измененных лимфоузлов Отда- ленные метаста- зы, число живот- ных

<2 мм > 2 мм

гиперти- реоидная (первая) 15 13 11 10,1±1,14 34,1±17,5% 65,9+16,7 % 2

гипоти- реоидная (вторая) 10 3 1 7,0 71,4% 28,6%

контроль- ная 8 5 4 9,25±0,96 46,1±8,5% 53,9±7,2 % -

У мышей первой группы определялись следующие морфологические изменения. В дольках визуально была значительно сокращена численность млечных ацинусов за счет заместительного разрастания соединительной ткани с большим количеством жировых клеток и инфильтрацией немногочисленными

лимфоидными клетками. Определялось снижение высоты клеток выстилки концевых отделов; в просвете многих из них были видны скопления серозных масс увеличенной плотности. Просвет внутридольковых млечных протоков был расширен, высота клеток его эпителиальной выстилки снижена. В молочной железе некоторых мышей второй группы на первый план выступали атрофические изменения эпителия как млечных ацинусов, так и млечных протоков (внутридольковых и междольковых). Эпителий выглядел резко уплощенным, а просветы этих структур - расширенными. Каких-либо существенных изменений со стороны соединительной ткани в дольках и между ними выявлено не было. Строма долек выглядела слегка отечной и была инфильтрирована единичными лимфоидными клетками.

В тканях яичника мышей первой группы были выявлены следующие значительные морфологические изменения. Мезотелий и белочная оболочка яичников выглядела утолщенной. На всем ее протяжении определялась преимущественно диффузная инфильтрация немногочисленными лимфоидными клетками, единичными макрофагами. Примордиальные фолликулы в большей части среза отсутствовали или были единичными. Железистые клетки яичника были представлены небольшими группами, формирующие розетки и тубулоподобные комплексы в некоторых участках между миофибробластами коркового вещества. Строма яичника была диффузно инфильтрирована лимфоидными клетками, плазмоцигами, единичными макрофагами. Желтые и атретические тела в яичнике значительной части мышей отсутствовали, у отдельных животных в яичнике были видны единичные зрелые и предовуяяторные фолликулы, уменьшенные в размерах со значительно истонченной и прерывистой текой.

В тканях яичника у мышей второй группы, в целом, изменения были однотипные с изменениями при тиреотоксикозе. Различие заключалось в отсутствии всех фолликулоподобных структур, большей степени утолщенности белочной оболочки и разрастании тубулярных железистых комплексов в корковом веществе, выстланных мономорфными кубическими и низкими кубическими эпителиальными клетками, окружающими отчетливый, часто широкий, просвет.

На втором этапе исследования нами была проведена оценка уровней экспрессии маркеров биологической агрессивности опухоли (дисиалоганглиозидов) в ткани опухоли при раке молочной железы и раке яичника у пациенток с тиреотоксикозом в момент выявления и лечения злокачественного новообразования (ЗНО) (первая группа), пациенток с длительно протекающим тиреотоксикозом в анамнезе (вторая группа) и пациенток группы сравнения.

Средний уровень экспрессии дисиалоганглиозида 001 а в опухолевой ткани рака яичника у пациенток первой, второй и группы сравнения составил 3,4±1,1%, 6,1±1,5% и 6,0±1,4% соответственно, причем достоверных различий между уровнем экспрессии и степенью дифференцировки опухоли в каждой группе не получено (рис. 2).

8

7

6

5

*4

З

2

1

О

первая группа вторая группа группа сравнения

єі-6ііі а єі г 63! ■ він

Рис. 2. Уровень экспрессии ганглиозида ОБ 1а в злокачественно измененной ткани яичника.

Средний уровень экспрессии дисиалоганглиозида вБЗ в опухолевой ткани рака яичника у пациенток первой, второй и группе сравнения составил 2,8±0,9%, 6,8±1,1% и 6,7±1,3% соответственно, причем достоверных различий между уровнем экспрессии и степенью дифференцировки опухоли в каждой группе не получено (рис. 3).

8

7

6

5

3

2

1 о

первая группе вторая группа группа сравнения

61-6ІІІ □ 61 □ 611 Я 6111

Рис. 3. Уровень экспрессии ганглиозида вБЗ в злокачественно измененной ткани яичника.

Таким образом, уровни экспрессии дисиалоганглиозидов ОБІ а и (ЮЗ в опухолевой ткани рака яичника были достоверно ниже (р < 0,05) в группе пациенток с тиреотоксикозом в момент выявления злокачественного новообразования (первая группа) и не отличалась у пациенток с гипертиреозом в анамнезе (вторая группа) и у пациенток группы сравнения (рис. 4).

6

5

4

3

2

1

ООЛа

003

0 вьтвлениГзно0"6”1 И гипертиреоз в анамнезеЦ группа сравнения

Рис. 4. Уровень экспрессии дисиалоганглиозидов в01а и СйЗ в опухолевой ткани у больных раком яичника.

Средний уровень экспрессии дисиалоганглиозида СБ1а в опухолевых тканях рака молочной железы у пациенток первой, второй и группы сравнения составил 2,8±1,1%, 6,3±1,9% и 5,4±1,4% соответственно. Достоверных различий между уровнем экспрессией 001а в зависимости от степени злокачественности опухоли в каждой группе не получено (рис. 5).

8

7

6 5 ж4 3

2 1 О

первая группа вторая группа группа сравнения

И 61-0111 (И61 □ €11 в <3151

Рис, 5. Уровень экспрессии ганглиозида вШа в злокачественно измененной ткани

молочной железы.

Средний уровень экспрессии дисиалоганглиозида ОБЗ в опухолевых тканях рака молочной железы у пациенток первой, второй и третьей (группы сравнения) группы составил 2,6±],7%, 5,5+2,0% и 6,2±1,9 % соответственно.

Получены достоверные различия между уровнями экспрессии ганглиозида GD3 у пациенток первой и третьей группы с низкой (3,6±0,4% и 7,8±1,1% соответственно) и высокой (1,2±1,1% и 3,7±2,2% соответственно) степенью злокачественности опухоли (р < 0,05). Получены достоверные различия между уровнями экспрессии ганглиозида GD3 у пациенток первой и группы сравнения с низкой (3,6±0,4% и 7,8И,1% соответственно) и высокой (1,2±1,1% и 3,7±2,2% соответственно) степенью злокачественности опухоли (р < 0,05). Достоверных различий между уровнем экспрессии ганглиозида GD3 в зависимости от степени злокачественности опухоли во второй группе не получено (рис. 6).

9

8

7

6

5

ж

4

3

2

1

О

первая группа вторая группа группа сравнения

S 61-6111 И 61 GH И6Ш

Рис. 6. Уровень экспрессии ганглиозида GD3 в злокачественно измененной ткани

молочной железы.

Таким образом, у пациенток с гипертиреозом в момент выявления злокачественного новообразования (первая группа) получены достоверные различия в уровне экспрессии дисиалоганглиозида GDla (р < 0,05) по сравнению с пациентками с гипертиреозом в анамнезе (вторая группа) и пациентками группы сравнения. Достоверных различий между уровнем экспрессии GDla у пациенток второй и третьей групп не получено. Достоверных различий в уровнях экспрессии дисиалоганглиозида GD3 между группами пациенток с РМЖ не получено (рис. 7).

Средний уровень экспрессии ганглиозида GD3 у HER-2/пеи-позитивных и негативных пациенток первой группы составил 0,9±0,7% и 3,9±0,8% соответственно. Средний уровень экспрессии ганглиозида GD3 у HER-2/neu-позитивных и негативных пациенток второй группы составил 2Д±1Д% и 7,0±1,0% соответственно. Средний уровень экспрессии ганглиозида GD3 у HER-2/пеи-позигивных и негативных пациенток группы сравнения составил 2,1±1,0% и 7,5±1,2% соответственно. Таким образом, средние уровни экспрессии ганглиозида GD3 у HER-2/пеи-позитивных пациенток всех групп (рис. 8) были достоверно ниже средних уровней экспрессии у HER-2/neu-

негативных пациенток и составили 1,6±1,3% и 6,4±1,8% соответственно (р<0,05). Достоверных различий в уровне экспрессии дисиалоганглиозида СО 1а в зависимости от НЕК-2/пеи-статуса опухоли не получено.

6РХа

<ЗРЗ

П №яїл"иия3ЗНО°'1'0"Т Ш шлертчмм® ■«»<■«*□ группа ср-гшіиния

Рис. 7. Уровень экспрессии дисиалоганглиозидов 001а и йГО в опухолевой ткани у больных раком молочной железы.

8

7

б

%5

4

3

2

1

О

_1.Б±1.3

6,4±1,8

7,<Ы),9

3.9+0. В

Пг9+Пт7

І

ш И

все группы первая группа вторая группа группа сравнения п=4б

||| НЕ!3-2/пеи позитив НЕЯ-2/пеи негатив

Рис. 8. Уровень экспрессии ганглиозида 003 в опухолевой ткани у больных раком молочной железы в зависимости от НЕК.-2/неи-статуса

Третьим этапом нашего исследования явилось проведение эпидемиологического исследования, которое представляло ретроспективное

клиническое одномоментное аналитическое исследование типа «случай-контроль» среди пациенток с длительно протекающим тиреотоксикозом в анамнезе.

Таблица 2

Анализ заболеваемости злокачественными новообразованиями у пациенток

эпидемиологического исследования.__________________________

группы зарегистрированное ЗНО без выявленного ЗНО всего

группа пациенток с длительно протекающим гипертиреозом в анамнезе 14 (А) 122 (В) 136 (А+В)

группа пациенток с эу- и гипотиреозом 5(С) 99 ф) 104 (С+О)

всего 19 (А+С) 221 (В+Б) 240 (А+О+С+О)

ОШ = 2,27, ОР = 2,14 при 95% доверительном интервале (ДИ) 0,79 - 6,44. Уровень полученного показателя с учетом 95% ДИ подтверждает, что длительно протекающий тиреотоксикоз в анамнезе в среднем в 2,14 раз (диапазон от 0,79 до 6,44) повышает риск возникновения злокачественных новообразований.

Таблица 3

Анализ заболеваемости гормонально-зависимыми опухолями пациенток

эпидемиологического исследования___________________________

группы зарегистрированное ЗНО без выявленного ЗНО всего

группа пациенток с длительно протекающим гипертиреозом в анамнезе И (А) 125 (В) 136 (А+В)

группа пациенток с эу- и гипотиреозом 4(С) 100 (Б) 104 (С+О)

всего 15 (А+О 225 (В Ю) 240 (А+В+С+О)

ОШ = 2,20, ОР = 2,10 при 95 % доверительном интервале (ДИ) 0,68 - 7,02. Уровень полученного показателя с учетом 95 % ДИ подтверждает, что длительно протекающий тиреотоксикоз в анамнезе в среднем в 2,10 раз (диапазон от 0,68 до 7,02) повышает риск возникновения гормональнозависимых злокачественных новообразований.

Средний возраст пациенток основной группы в момент регистрации злокачественного новообразования составил 54,5 ± 8,7 лет (от 43 до 69 лет), средний возраст пациенток группы сравнения в момент регистрации злокачествешюго новообразования составил 57,6 ± 4,9 лет (от 51 до 65 лет). У пациенток основной группы интервал между регистрацией заболевания щитовидной железы, сопровождающегося тиреотоксикозом, и выявлением злокачественного новообразования составил в среднем 3,6 лет (от 2 до 5 лет).

Средний возраст пациенток в момент регистрации злокачественного новообразования составил 54,5 ± 8,7 года (от 43 до 69 лет). У пациенток группы сравнения интервал между регистрацией заболевания щитовидной железы (аутоиммунный тиреоидит) и выявлением злокачественного новообразования составил в среднем 6 лет (от 2 до 15 лет). Средний возраст пациенток в момент регистрации злокачественного новообразования составил 57,6 ± 4,9 года (от 51 до 65 лет).

ВЫВОДЫ

1. Частота возникновения рака молочной железы при индуцированном длительно протекающем тиреотоксикозе и гипотиреозе на модели животных составила 86,7 % и 30,0 % соответственно (р < 0,01).

2. Ко времени окончания эксперимента метастазы в лимфатические узлы обнаружены у 73,3 % животных с индуцированным длительно протекающим гипертиреозом, в группе животных с индуцированным гипотиреозом - 10 %, причем первые опухоли были зарегистрированы на 21-й и 36-й неделе эксперимента для гипертиреоидной и гипотиреоидной групп соответственно. У 13,3% животных из гипертиреоидной группы обнаружены отдаленные метастазы.

3. Особенности гистологического строения тканей молочных желез животных с индуцированным гипертиреозом заключаются в выраженных атрофических изменениях, заместительном разрастании соединительной ткани (фиброз). Опухолевая ткань рака молочной железы была представлена высоко-и умереннодифференцированной протоковой аденокарциномой. Особенности гистологического строения яичников у мышей с индуцированным и длительно протекающим гипер- и гипотиреозом выражаются глубокими атрофическими изменениями его герминативных компонентов, отсутствии генеративной функции, процессом хронического продуктивного воспаления, возникновением доброкачественных тубулярных железистых комплексов. Эти изменения в яичнике более выражены при индуцированном гипотиреозе.

4. Уровни экспрессии дисиалоганглиозидов ОБ 1а и СВЗ в злокачественно измененных тканях яичника у пациенток с тиреотоксикозом в момент выявления злокачественного новообразования были достоверно ниже уровней экспрессии б группе пациенток с тиреотоксикозом в анамнезе и группе сравнения и составили 3,4±1,1% и 2,8±0,9% соответственно (р < 0,05).

5. Уровень экспрессии дисиалогапглиозида 001 а в злокачественно измененных тканях молочной железы у пациенток с тиреотоксикозом в момент выявления злокачественного новообразования были достоверно ниже уровня экспрессии в группе пациенток с тиреотоксикозом в анамнезе и в группе сравнения и составил 2,8±1Д% (р < 0,05). Достоверной разницы в уровне экспрессии ганглиозида СОЗ в группах сравнения не получено.

6. У пациенток с тиреотоксикозом в анамнезе по сравнению с пациентками с эу- и гипотиреозом частота возникновения злокачественных новообразований в момент сравнения (2011 г.) оказалась в два раза выше и составила 10,3 и 4,8%, в

гормонозависимых органах - 8,1 и 3,8% соответственно. Относительный риск возникновения злокачественных новообразований у пациенток с длительно протекающим гипертиреозом в анамнезе составил 2,14 (ОЩ 2,27, 95% ДИ 0,796,44; х2=2,43, Q=0,39; р < 0,03). Относительный риск возникновения гормонально-зависимых новообразований у пациенток с длительно протекающим гипертиреозом в анамнезе составил 2,10 (ОШ 2,20, 95% ДИ 0,687,02;; x2=l,89,Q=0,38;p< 0,03).

Практические рекомендации

1. Согласно подпрограмме "Онкология” Федеральной целевой программы "Предупреждение и борьба с социально значимыми заболеваниями (20072011 гг.)", которая подразумевает формирование групп повышенного риска, пациентки с длительно протекающим гипертиреозом в анамнезе должны быть включены в группу повышенного риска возникновения злокачественных новообразований.

2. Определение экспрессии ганглиозидов в злокачественно измененной

ткани целесообразно расценивать как маркера биологической агрессивности опухоли, что создает основу для выработки индивидуального

морфологического прогноза течения заболевания. Определение предлагаемых показателей рекомендуется проводить в крупных региональных

онкологических научно-практических центрах.

3. Материалы диссертации следует включить в программы тематического усовершенствования и сертификационные циклы последипломного образования врачей.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Глушаков Р.И., Манихас Г.М., Лисянская A.C., Тапильская Н.И. Связь

заболеваний щитовидной железы с этиологией злокачественных

новообразований репродуктивной системы // Материалы 10-го юбилейного

Всероссийского форума «Мать и дитя». - М., 2009. - С.280 - 281.

2. Прошин С.Н., Глушаков Р.И., Сайковская JI.B., Семенова И.В., Тапильская Н.И. Значение экспрессии TLR рецепторов для выбора фармакологической коррекции патологии шейки матки и эндометрия // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2011. - Том 6, N° 1. -С. 1-7.

3. Глушаков Р.И., Соболев И.В., Шмидт A.A., Козырко Е.В., Тапильская Н.И. Заболеваемость злокачественными новообразованиями среди женщин с эпизодом тиреотоксикоза в анамнезе. Материалы 12-го Всероссийского форума «Мать и дитя». М.,2011. -С.261.

4. Глушаков Р.И., Прошин С.Н., Тапильская Н.И., Карпова И.В., ГаиповТ.М., Соболев И.В. Значение длительно протекающего гипер- и гипотиреоза на пигментацию шерсти у мышей, генетически предрасположенных к раку молочной железы // Научные труды III Съезда физиологов СНГ. - Под ред. А.И. Григорьева, O.A. Крышталя, Ю.В. Наточина, Р.И. Сепиашвили. - М.: Медицина. - Здоровье, 2011. - С.167-168.

5. Глушаков Р.И., Прошин C.H., Лебедев A.A., Тагшльская Н.И., Карпова И.В. Влияние длительного индуцированного гипертиреоза на свободное поведение мышей, генетически предрасположенных к раку молочной железы // Научные труды III Съезда физиологов СНГ. - Под ред. А.И. Григорьева, O.A. Крышталя, Ю.В. Наточина, Р.И. Сепиашвили. - М.: Медицина. - Здоровье, 2011.-С.168.

6. Лисянская A.C., Манихас Г.М., Прошин С.Н., Глушаков Р.И., Тапильская Н.И. Экспрессия ароматазы и ганглиозидов в ткани опухоли при раке яичника - предиктор опухолевой прогрессии или новая мишень противоопухолевой терапии? // Мед. алфавит, Больница. - 2011. - №4. -С. 12-15.

7. Глушаков Р.И., Прошин C.H., Тапильская Н.И. Роль тиреоидных гормонов в регуляции ангиогенеза, клеточной пролиферации и миграции // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. -2011. - Том 6, № 4, -С. 12-18.

Глушаков Р.И. Маркеры биологической агрессивности гормонально-зависимых опухолей при измененном тиреоидном статусе // Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. СПб., 2012. 20 с.

Лицензия № 020383 от 14 апреля 1998 г.

Подписано в печать 18.01.2012. Бум. офс., ф-т 60x84/16. Объем 1,0 п.л. Тираж 100 экз. Зак. № 3

Издание ГПМА, 194100, Санкт-Петербург, Литовская ул., д.2 Центр множительной техники СПбГПМА