Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изыскание питательной среды и оптимизация условий культивирования сальмонелл

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Галиакберова, Назия Илдаровна

1.Введени е.

2. Обзор литературы.

2.1. Систематика сальмонелл, культурально-морфологические, биохимические и антигенные свойства возбудителей сальмонеллеза сельскохозяйственных животных.

2.2. Питательные потребности сальмонелл и питательные среды для их культивирования.

2.3.Современные способы культивирования микроорганизмов.

3. Собственные исследования.

3.1. Материал и методы исследования.

3.2. Результаты исследований.

3.2.1.Изучение культурально-морфологических, серологических и биохимических свойств сальмонелл.

3.2.2. Определение питательной потребности сальмонелл.

3.2.3. Физико-химические показатели основного ферментативного гидролизата плацентарно-эмбриональной массы (ФМПГ).

3.2.4. Сравнительная оценка эффективности различных питательных сред.

3.2.5. Изучение биологических свойств сальмонелл при культивировании на питательных средах, приготовленных из ФМПГ.

3.2.6. Влияние посевной дозы, аэрации и перемешивания на рост сальмонелл при культивировании в ФМПГ.

3.2.7. Определение экономической эффективности питательной среды, приготовленной из ФМПГ.

4. Обсуждение результатов исследований.

5. Выводы.

6. Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изыскание питательной среды и оптимизация условий культивирования сальмонелл"

Актуальность темы. В условиях, рыночной экономики обеспечение сохранности и повышение продуктивности животных, наряду с другими факторами, имеет важное значение в производстве конкурентоспособной и высококачественной продукции животноводства.

В связи с этим недопущение возникновения и распространения инфекционных заболеваний среди сельскохозяйственных животных является актуальной задачей. Среди инфекционных болезней молодняка большой удельный вес занимает сальмонеллез, который распространен повсеместно, наносит большой ущерб животноводству и представляет угрозу здоровью людей (Б.Ю. Шустер, Ю.А. Малахов, 1981; Б.Ю. Шустер, 1987; Ф.С. Сибгатуллин с соавт., 1994; A.M. Алимов, 1998; A.B. Иванов, М.А. Сметанин, 2000).

В основе борьбы с сальмонеллезом наряду с общими ветеринарно-санитарными и диагностическими мероприятиями, большую роль играет специфическая профилактика. Для специфической профилактики сальмонеллеза сельскохозяйственных животных широкое применение получили живые и инактивированные вакцины (Б.Ю. Шустер, A.A. Бывальцев, 1974; К. Linde, 1980; A.M. Алимов, 1998; P.M. Ахмадеев, Х.Р. Ахмадеева, 2000). Их производство сопряжено использованием питательных сред с целью получения бактериальной массы.

В нашей стране в качестве основы для приготовления питательных сред применяют мышечную ткань (В.И. Заерко, 1996; А.З. Равилов с соавт., 1999), которая является дорогим и ценным пищевым продуктом. Поэтому изыскание более дешевых белковых источников для приготовления бактериальных питательных сред давно привлекает внимание исследователей. С этой целью рекомендованы белки молока (A.M. Алимов, O.A. Котылев, 1975; Д.В. Абрамов, 1990), казеиново-дрожжевые и кровяно-дрожжевые лизаты (JI.A. Коротеева, 1984; Н.Г. Шептун, 1989), куриные эмбрионы (В.И. Заерко, 1996), раститель

-5 ные белки, отходы рыбной промышленности (Л.Я. Телишевская, 2000), плацента человека, плацентарно-эмбриональная масса крупного рогатого скота (J1.A. Дерябина, 1971; С.Х. Хаертынов, В.А. Никитина, 1991) и т.д.

Некоторые из них широко применяются в производстве биопрепаратов и лабораторной работе. В связи с расширением производства биологических препаратов потребность в питательных средах растет. Поэтому необходимость поиска новых и стандартизация существующих питательных сред остается актуальной задачей.

Вместе с тем, сохраняется необходимость усовершенствования технологии культивирования сальмонелл для получения бактериальной массы при изготовлении диагностикумов и вакцин, что вызвано с растущими потребностями животноводства в биологических препаратах, вследствии широкого распространения сальмонеллеза среди сельскохозяйственных животных. В этом аспекте перспективным является культивирование микроорганизмов в ферментерах при аэрации и перемешивании (A.M. Алимов, 1972; B.C. Русалеев, В.Ю. Кулаков, 1995; В.И. Ситьков с соавт., 2000; В.И. Заерко, 2000; A.M. Алимов с соавт., 2000; Т.Г. Колотилова с соавт., 2000), которое обеспечивает наибольший выход бактериальной массы, обладающей высокими антигенными и иммуно-генными свойствами. Однако вопрос оптимизации культивирования сальмонелл, особенно при использовании новых более дешевых питательных сред, остается недостаточно разработанным.

Цель и задачи исследований. Целью работы явилось изучение питательных потребностей сальмонелл, изыскание непищевого белкового источника и разработка на его основе технологии изготовления питательной среды и усовершенствование условий культивирования сальмонелл.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить биологические свойства разных штаммов сальмонелл и определить их питательные потребности.

-62. Разработать технологию приготовления питательной среды на основе ферментативного маточно-плацентарного гидролизата.

3. Оценить пригодность питательной среды, приготовленной из ФМПГ, для стационарного и глубинного культивирования сальмонелл.

4. Оптимизировать условия глубинного культивирования сальмонелл

Научная новизна. Впервые на основании определения питательных потребностей сальмонелл разработана технология изготовления питательной среды на основе ферментативного маточно-плацентарного гидролизата и доказана ее пригодность для наработки бактериальной массы сальмонелл методом глубинного культивирования.

Установлено, что сальмонеллы для своего роста в синтетической среде в качестве органического азотистого источника могут использовать каждую из 19 белковых аминокислот и их рост в синтетической среде значительно стимулируют цистин, гистидин, фенилаланин, триптофан, аланин, глицин, серин, аспа-рагиновая и глутаминовая кислоты. В отношении отдельных аминокислот имеются штаммовые различия.

При культивировании вакцинного и вирулентных штаммов сальмонелл в питательных средах из ферментативного маточно-плацентарного гидролизата их основные биологические свойства остаются стабильными. Оптимизированы условия глубинного культивирования вакцинного штамма сальмонелл ТС-177 в среде из ФМПГ.

Практическая значимость. Разработана технология приготовления питательной среды из отходов мясной промышленности - маточно-плацентарной массы, которая рекомендуется для использования при производстве диагности-кумов, живых и инактивированных вакцин против сальмонеллеза. Данная питательная среда в 4,8-9,4 раза дешевле традиционных питательных сред, изготавливаемых с использованием мышечной ткани.

Разработана "Методическая рекомендация по изготовлению питательной среды из гидролизата маточно-плацентарной массы крупного рогатого скота

- 7 для культивирования сальмонелл", которые одобрены научно-методическим советом (протокол № 8 от 19 декабря 2001 г.) и утверждены директором ВНИВИ (27 декабря 2001 г.). Оптимизированы условия глубинного культивирования сальмонелл при изготовлении живой вакцины против сальмонеллеза. Для наработки бактериальной массы целесообразнее глубинное культивирование сальмонелл с аэрацией, перемешиванием и периодической коррекцией рН среды.

Апробация работы. Основные положения работы были доложены и обсуждены на:

1. Научных сессиях ВНИВИ в 1998-2001 гг.;

2. Республиканской научно-производственной конференции "Актуальные проблемы животноводства в ветеринарии" (Казань, май, 1999);

3. Всероссийской конференции молодых ученых "Молодые ученые - агропромышленному комплексу" (Казань, март, 2000);

4. Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета КГАВМ (Казань, май, 2000);

5. Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 30-летию института (Щелково, 8-9 июня 2000);

6. Международной научной конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, май-июнь, 2001);

7. Международной научной конференции "Научные основы производства ветеринарных и биологических препаратов" (Щелково, май, 2001 г.).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- Питательные потребности различных штаммов сальмонелл и их биологические свойства;

- Эффективность питательной среды, приготовленной из ферментативного маточно-плацентарного гидролизата, для культивирования сальмонелл;

-8- Оптимизация условий глубинного культивирования сальмонелл с использованием питательной среды из ферментативного маточно-плацентарного гидролизата.

Публикация. По материалам диссертации опубликовано 7 работ в материалах международных, всероссийских и республиканских научных конференций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 115 стр., состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложения, списка литературы. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 1 рисунком. Список использованной литературы включает 206 источников, из них 60 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Галиакберова, Назия Илдаровна

-85 -5. Выводы

1. На основании изучения роста сальмонелл в синтетических средах установлено, что исследуемые штаммы в качестве органического источника азота могут использовать каждую из 19 белковых аминокислот. Однако наиболее значительно стимулировали рост сальмонелл цистин, гистидин, фенилаланин, триптофан, аланин, глицин, серин, аспарагин, аспаргиновая и глутаминовая кислоты.

2. По интенсивности роста в синтетических средах с отдельными аминокислотами выявлены штаммовые отличия. Рост Salmonella cholerae suis ТС-177 значительно усиливали цистин, аспарагиновая кислота, аспарагин, фенилаланин, триптофан, аланин, глицин, серин, норвалин, цистеин, норлейцин, треонин и гистидин (опт. пл. 0,40-0,65 ед.). У Salmonella typhimurium шт. 371 наиболее интенсивный рост отмечался в присутствии цистеина, цистина, гистиди-на, аспарагина, аспарагиновой кислоты, триптофана, аланина, глицина, серина (опт. плотность составляла 0,42-0,47 ед.). Для Salmonella enteritidis характерна более высокая питательная потребность по сравнению с Salmonella cholerae suis и Salmonella typhimurium, о чем свидетельствуют данные по выходу бактериальной массы при культивировании их в одинаковых условиях.

3. На основании сравнительного изучения роста сальмонелл на разных питательных средах разработана технология изготовления питательной среды на основе ферментативного маточно-плацентарного гидролизата, доказана ее пригодность для культивирования сальмонелл и наработки бактериальной массы методом глубинного культивирования.

4. Многократное пассирование сальмонелл на средах, приготовленных из ферментативного маточно-плацентарного гидролизата и глубинное культивирование в них, не оказывает существенного влияния на культурально-морфологические, биохимические, антигенные и иммуногенные свойства сальмонелл.

- 865. Наибольший выход бактериальной массы при глубинном культивировании вакцинного штамма сальмонелл ТС-177 достигается при аэрации воздухом - 2 л/мин на 1 л питательной среды и перемешивании со скоростью 100 об/мин с периодическим подравниванием рН и добавлением глюкозы. При этом наиболее оптимальной является посевная доза 100 млн. м.к. на 1 см"5 питательной среды из культуры, находящейся в экспоненциальной фазе роста. В этих условиях культивирования максимальное число живых клеток к 14 часам составило 43,7±2,9 млрд. м.к./см .

6. Вакцинные препараты, изготовленные методом глубинного культивирования в среде из ФМПГ, обладали высокой иммуногенностью (90,0%) и по этому признаку были сходны с культурами, полученными в бульоне Хоттингера (86,6%).

7. Использование питательной среды на основе ФМПГ в 4,8-9,4 раза экономичнее по сравнению с бульоном Хоттингера и мясопептонной средой.

- 87

6. Практические предложения

1. Для первичного выделения, пересевов и наработки бактериальной массы сальмонелл рекомендуется дешевая питательная среда на основе ферментативного маточно-плацентарного гидролизата, приготовленная согласно "Методической рекомендации по изготовлению питательной среды из ферментативного, маточно-плацентарного гидролизата крупного рогатого скота для культивирования сальмонелл" (одобрены научно-методическим советом ВНИВИ и утверждены директором института, 2001 г.).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Галиакберова, Назия Илдаровна, Казань

1. Абрамов Д.В. Технология гидролизатов сывоточных белков молока для ветеринарных целей, их физико-химические и биологические свойства. Автореферат. дисс. канд. биол. наук. -М. -1990, -24 с.

2. Акатов В.А., Булганов Н.М., Зверева Г.В., Субботина Л.Г., Шипилов B.C. Практикум по акушерству гинекологии и искусственному осеменению с.-х. животных -М.: Колос, -1968. -295 с.

3. Акимов Е.К. Культурально-морфологические свойства бруцелл шт.82 при периодическом и хемостатном методе культивирования. //Материалы международной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженер-ного факультета. -Казань, -2000, С. 284.

4. Алимов A.M. Изменение аминокислотного состава питательной среды при глубинном культивировании вакцинного штамма листерий АУФ // Ученые записки КВИ, -Казань, -1972, -т. 113, -с. 93-97.

5. Алимов A.M. Изучение аминокислотного обмена и иммунохимии листерий различной вирулентности. Дисс. канд.биол.наук. Казань, 1974, -202 с.

6. Алимов A.M., Котылев O.A. Сравнительная оценка питательных сред при культивировании вакцин, штамма листерий АУФ. -Казань, -1991, 40 с.

7. Алимов A.M., Сазонова Т.Я. Эффективность различных питатаельных сред для культивирования бруцелл. // Актуальные вопросы ветеринарии и зоотехнии. Тез. докл. Респуб. научно-производственной конф. -Казань, 1992,-с. 41.

8. Аристовская Т.В., Шапиро Н.И. Новая питательная среда из горохового ав-толизата для выращивания дизентерийных бактерий //Материалы по обменуопытом. М. -1954, -№ 1. - С .44.

9. Ю.Аткинсон Б. Биохимические реакторы. М.: Пищ. пром., -1979, -280 с.

10. Ахмедов A.M. Сальмонеллезы молодняка. М.: Колос. -1983. -256 с.

11. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. -Ленинград, -1962. 250с.

12. Бакулов И.А., Третьяков А.Д. Руководство по общей эпизоотологии. М.: Колос, -1979, - 424 с.

13. Баснакьян И.А. Патология и физиология микробов. Усовершенствование технологии культивирования // Микробиология. -1982. №12. -С. 28-33.

14. Баснакьян И.А. Оптимизация культивирования микроорганизмов в иммуно-биотехнологии //Микробиология, 1989. № 5,- С. 90-96.

15. Баснакьян И.А., Дубинина Г.П. Морфологические особенности в сопоставлении с физиолого-биохимическими закономерностями жизнедеятельности микроорганизмов при периодическом и непрерывном культивировании // Микробиология. 1974. -№ 7,- С. 3-8.

16. Баснакьян И.А., Боровкова В.М., Запорожцев JI.H. Классификация процессов культивирования микроорганизмов //Тр. Моск. науч. -исслед. ин-та вакцин и сывороток им.Мечникова, -М. -1981. -С.5-17.

17. Баснакьян H.A., Боровкова В.М., Кузьмин С.Н. Патология и физиология микробов. Сообщение 1. Общие вопросы //Микробиология. 1981. -№ 9. -С.14-19.

18. Краткий определитель бактерий Берги. Под ред. Г.А.Заварзина Пер. с англ. М.Ш.Тер-Казарьяна. М.: Мир, 1980, - 496 с.

19. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим методам исследования. -М.: Медицина. -1973. -453с.

20. Благовещенский В.А., Мармалевская Л.Я., Кузьмина А.Н. Метод концентрации и очистки анатоксинов Perfrinqens, приготовленных на казеиновых средах //Материалы по обмену опытом. М. -1960. - 2/58. -С. 68-75.

21. Блохина И.Н., Носова Л.С. Некоторые особенности аминокислотного обмена энтеробактерий. //В сб. "Биохимия микробов". -Горький, -298 с.

22. Богачева Р.И., Алферова В.Б. М-концентрация бактерий Флекснера в процессе глубинного выращивания //Микробиология и эпидемиология бактериальных и вирусных болезней в Узбекистане, -Ташкент, 1959. С .73-76.

23. Бондаренко В.А., Лемешко В.В., Белоус A.M. Нарушение структуры мембран митохондрий при воздействии замораживания-оттаивания //Криобиология и криомедицина. Харьков, -1977. -вып.З. - С.41-43.

24. Бруснигина Н.Ф., Быкова С.А., Зямских Н.В. Специфические фаги сальмонелл как средство индикации обсемененности внешней среды. //Иммунология и биотехнология. Межвузовский сборник НИИ эпидемиологии и микробиологии, -Горький. -1989. -С. 59.-91

25. Булатов A.C. Материалы научно-производственной конференции. Влияние экологических факторов на биологические свойства сальмонелл. Калининград,-1998.-280с.

26. Бутьянов Д.Д., Корпуть И.М., Якубовский М.В. и др. Справочник по болезням сельскохозяйственных животных. 2-ое изд., перераб. и доп. М.: Урожай, -1990, - С. 74-352.

27. Вейсман И.Ш. Предпосылки комплексной оценки физиологического состояния бактерий и их популяций //Микробиологии, 1984. -№ 4,- С.3-8.

28. Вершаков Д.С., Сидоров Е.А., Нестеров Б.В. Приборы для культивирования микроорганизмов. //В сб. "Биофиз. микробов и биоинженерия". Л., -1976. -С. 101-108.

29. Виноградова H.H. Использование протеолитических ферментов плесневых грибов в производстве питательных сред для глубинного выращивания // Научные основы производства вакцин и сывороток. -М., -1955. С. 83-87.

30. Виноградова H.H. Новые питательные среды и их применение в производстве бактериальных препаратов //Проблемы эпидемиологии и микробиологии. -М., 1959.-№ 2,-С. 141-152.

31. Висстур У.Е., Кристапсонс М.Ж., Былинкина Е.С. Культивирование микроорганизмов. -М.: Пищевая промышленность, -1980, -231 с.

32. Власова В.Е., Виноградова И.Н., Палкина H.A. Получение анатоксина С1. ocdematiens на питательной среде из гидролизата казеина и изучение его антигенных иммуногенных свойств //Микробиология. -1960. -№ 2. -С. 108-114.

33. Волик Е.К., Плотникова В.А. Глубинный способ выращивания бактериальных культур для получения биопрепаратов //Труды н.-контр, ин-та ветеринарных препаратов. -М., 1954. -№3,-С.241-250.

34. Воробьев A.A. Проблемы физико-химической биологии и биотехнологии в микробиологии и иммунологии //Микробиологии, -1982, -№ 11. С. 3-8.

35. Воронкина И.М. Казеиновая среда для дизентерийного бактериофага //Сб. тр. Горьковского ин-та эпидемиол. и гигиены. -Горький, 1959. -№ 4,- С. 125128.

36. Воскресенский Г.В., Лебедева З.И. Антигенные и иммуногенные свойства стафилококковых анатоксинов, приготовленных на мясных и казеиновых средах//Микробиология, 1958. -№ 9. С.16-20.

37. Выгодчиков Г.В. Комбинированные препараты для активной профилактики раневых инфекций //Проблемы эпидемиол. и микробиол. М., 1959. -№ 2. -С. 3-13.

38. Геккер В.Д., Яковлева A.B. Применение синтетических сред для приготовления кишечных вакцин //Вопросы активной иммунизации против кишечной инфекции. М., 1955. - С. 9-20.

39. Герна Р. Хранение микроорганизмов //Методы общей бактериологии. Под ред. Ф.Герхардта и др.: Пер. с англ. М.: Мир, 1983. - т. 1. - С. 512-534.

40. Глизман М.П., Червяков М.П., Старобинец Г.М. Среды для получения сильного столбнячного токсина //Тр.Мечниковского института, 1935. т.1. -№ 2. - С.379-380.

41. Голубева И.В., Килессо В.А., Киселева Б.С. и др. Энтеробактерии: (Руководство для врачей). М.: Медицина, 1985. -321с.

42. Григорьева Л.В. Справочник по санитарной микробиологии. -Кишинев: Картя Молдовеняскэ, -1981. -206 с.

43. Грубер И.М., Жданова Л.Г., Нисилева В.Ф. и др. Кинетика процессов периодического культивирования в зависимости от физиологического состояния посевной культуры //Микробиология, -1986. -№ 2. -С. 3-7.

44. Грушина Т.А., Ременцова М.М., Меньшиков Л.Ф., Ишанова Р.Ж. Испытание бета-глобулиновых сред для выращивания бруцелл //Тр. института эпидемиол. и инфекц. болезней М.З. Казах. ССР. -1978, -т. 15, -С. 59-65.-93

45. Губарев Е.М. Основные процессы обмена веществ у микробов. -М.: Медгиз. -1961. -150с.

46. Демина Н.С., Лысенко C.B. Действие дегидратации на микроорганизмы //Науч. докл. высш. шк. Биол. науки, -1987. -№ 8,- С.50-62.

47. Дерябина JI.A. Плацента человека как перспективный источник для получения белковых гидролизатов. Автореф. дис. канд. мед. наук. -Рига, -1971, -22 с.

48. Джавец Э., Мельник Д.Л., Эйдельберг Э.А. Руководство по медицинской микробиологии. Пер. с англ. М.: Медицина, -1982. -С. 366.

49. Долинов К.Е. Научно-проблематические основы технологии изготовления сухих биопрепаратов //Сб. тр.межинст.науч. конф. -290с.

50. Дубинина Г.П., Баснакьян И.А., Волкова Н.В. Особенности морфологии и инфраструктуры тифозных бактерий в условиях лимита и избытка глюкозы //Микробиология, -1977. -№ 8. С. 20-26.

51. Звягин Н.В. Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов //Экспресс-информ. Всесоюз. науч,-иссл. и техн.ин-та биол.пром., -1978. вып. 7. стр.3.

52. Иванов A.B., Сметанин М.А. Ветеринария на службе человека. -Казань. -2000, 53с.

53. Иванов В.Н., Угодчиков Г.А. Клеточный цикл микроорганизмов и гетерогенность их популяций. Киев: Наукова Думка, -1984. -157с.

54. Имшенецкий A.A., Жильцов Г.К. Возможность обнаружения "нуклеоидов" в клетках бактерий в зависимости от возраста их культур //Микробиология, 1965. т. 34. - С. 305-312.

55. Карпов А. М., Жуков В.Н., Улумнев А. А. Сублимационная сушка в биологической промышленности //Обзор информ. ОНТИТЭИ микробиопром. Сер. 6,-1975. С. 75.

56. Кириллова В.В. Токсичность и иммуногенность производственных штаммов Salmonella typhimurium, выращенных в реакторе// Тр. Всесоюз. гос. науч,-контр. ин-та ветпрепаратов, -1978. т.27. -С. 57-60.

57. Ковалева Н.И. Экспериментальное обоснование технологии производства кишечных вакцин, приготовленных из бактерий, выращенных на синтетических средах в глубинных культурах с аэрацией. Дис. док. мед. наук М.,1958. -209с.

58. Ковалева Н.И., Кузьмина А.Г. Динамика потребления питательных веществ бактериями кишечной группы в процессе роста на синтетической среде в условиях аэрации //Вопросы активной иммунизации против кишечных инфекций. М., -1955. - С.41-57.

59. Ковалева Н.И., Яковлева А. В. Закономерности размножения бактерий ки-шечно-тифозной группы на синтетических средах в глубинных культурах с аэрацией //Микробиология, 1960. -№ 6, -С. 31-34.

60. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология.- Омск.: Изд-во ОМГАУ, -1996. - 552 с.

61. Коляков Я.Е. Ветеринарная микробиология. М.: Колос, 1965. - 432 с.

62. Коротеева J1.A. Питательные среды на основе ферментативного козеинова дрожжевого гидролизата (ФКДГ) для культивирования вакцинных штаммов колибактерий и пастерелл. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -М.: -1984, -22 с.

63. Кононенко А. Б., Бритова C.B. Применение полимеразной цепной реакции для обнаружения сальмонелл в кормах и продуктах животноводства. //Материалы научно-производственной конференции. Калининград, -1998.- С. 97-98.

64. Лабинская А. С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. -М.: Медицина, -1978. -240с.

65. Лебедев Н.Е. Новые методы выращивания микроорганизмов и изготовление бактериальных препаратов. Автореф.дис. докт., -М., -1950. -18с.

66. Литинский Ю.И., Юдицкая Н.М., Герок Г.И., Голованова М.А. Оценка эффективности элективно-дифференциальных сред и их сочитаний для выделения шигелл и сальмонелл //Лаб. дело, -1986, -№ 10, -С. 66-69.

67. Лозицкая Н.Д. Методы консервации бактерий Pseudomonas denitrificans

68. Конф. мол. ученых: Тез. докл. Рига, 1987. - С. 138.

69. Лукьянов Ю.П. Бактериологические методы острых кишечных инфекций //Военно-мед.ж., 1982. -№ 8,- С. 31-35.

70. Матвеев К.И. Ботулизм. М.: Медгиз, 1959. -150с.

71. Машилова Г.М., Левина Л.А., Рагинская В.П. и др. Оптимизация процесса культивирования бактерий рода Провиденция и изучение антигенной активности культур //Тр. Моск. науч.-исслед. ин-та вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, 1981. С.25-39.

72. Мельникова В.А., Баснакьян И.А., Ражникова Т.К. и др. Патология и физиология микробов. Сообщение 3. Критерии оценки функциональных состояний/Микробиология, 1984. -№ 1, С. 42-46.

73. Методическое руководство по физико-химическому методу контроля ингредиентов, питательных средств и биопрепаратов. -М. -1970, -С. 11-13.

74. Методическое руководство по лабораторной оценке качества бактерийных и вирусных препаратов. -М. ГКИ им. Тарасевича. -1972.

75. Методические рекомендации по физико-химическому и биологичскому контролю белковых гидролизатов для бактериологических питательных сред. ВНИ и ТИБП, ВГНКИ. -М. -1983, -26 с.

76. Нечаева А. С., Варгина А. К. Усвоение микробами кишечной группы питательных веществ в процессе выращивания с аэрацией и накопление ими антигена//Поливакцины. М., 1956. -С.294-310.

77. Никитин Е.Е., Звягин И.В. Замораживание и высушивание биологических препаратов. М.: Колос, -1971. - 343 с.

78. Осин Н.С., Петухов В.Г., Осипова Н.В. и др.//Тр.Моск. науч.-исслед. ин-та вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, -1978. -Вып.4. С.213-217.

79. Перепелица Л.Г. Разработка селективной среды для выделения сальмонелл //В кн.: Вопр. физиол. метаболизма и идентификации микроорганизмов. -М. -1987, -С.74.75.

80. Петровская В.Г. Проблема вирулентности бактерий. -Л.: Медицина, Ленин-97 градское отделение. -1967, -263 с.

81. Петрович C.B., Утмелидзе О.Г. Влияние возраста культур и концентрации спор дерматофитов на устойчивость к высушиванию //Бюл. Всесоюзн. ин-та эксп. ветеринарии. -1981. Вып. 42. - С.25-26.

82. Покровский В.И., Ющук Сальмонеллез. Руководство по инфекционным болезням. -Москв, "Медицина". -1986, -462 с.

83. Потапова O.A. Испытание стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 на выживаемость сальмонелл из культуры патологического материала //В кн.: Диагностика, лечение и профилактика заболевания с.-х. животных. -Ставрополь. гос. с.-х. академия, -1996, -С. 21-24.

84. Прокофьева Г.И. Опыт освоения глубинного производства вакцин //Сб. трудов Горьковского ин-та эпидемиол. и гигены. -Горький. -1959. -№ 3, С.З-16.

85. Пушкарь Н.С., Белоус A.M., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования.-Киев: Наукова Думка, -1984. -264 с.

86. Работнова И.Л. Теория и практика непрерывного культивирования микроорганизмов //Микробиология. Итоги науки и техники. -М. -1975, -т. 4, -209 с.

87. Работнова И.Л. Об изучении физиологического состояния исследуемых микроорганизмов //Микробиология. -1980. -т. 49, -вып. 4. -С.634-638.

88. Работнова И.Л. Культивирование микроорганизмов //Микробиология. Итоги науки и техники. -М. -1981, -т. 11, -214 с.

89. Равилов А.З., Гильмутдинов Р.Я., Хусаинов М.Ш. Микробиологические среды. Казань: ФЭН, 1999. - 398 с.

90. Рахманкин H.A. Испытание политропной среды для дифференциации эн-теробактерий //Ветеринария, 1984. -№ 2. С.76-77.

91. Рево М.В., Жукова М.Д. Ветеринарная микробиология.-М.: Государственное издательство сельскохозяйственной литературы. -1958.104а. Рокицкий П.Ф. Введение в статистическую генетику. -Минск, 1978, 448с.

92. Рубан Е.Л. и др. Биосинтез аминокислот микроорганизмами. -М.: Наука.-981968, -296 с.

93. Рубинков П.Н., Хафизов Д.Ф., Игнаткин В.И. Влияние температуры хранения и замораживания-высушивания на выживаемость микроорганизмов в суспензиях//Тр. Всесоюз. науч.-иссл. ин-та ветеринарной санитарии, -1982. -С .45-48.

94. Русалеев B.C., Кулаков В.Ю. Рецептура питательной среды для сальмонелл //Тез. докл. Всерос. научно-практической конф. "Вирусные болезни с,-х. животных". -Владимир. -1995, -С. 224.

95. Рычков P.C., Попов В. Г. Биотехнология перспективы развития //Под ред. А.А.Баева /Биотехнология. - М., -1984. - С. 13-20.

96. Сибгатуллин Ф.С., Сафин М.А, Хисамутдинов А.Г. Болезни животных передающиеся от животных человеку. -Казань.: Татарское книжное издательство. -1994, -107 с.

97. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопато-генных микроорганизмов. -М.: Колос, -1995.

98. Лаб. дело, -1982. -№ И. С. 685-687.

99. Тарасов В.Н. Итоги науки и техники. Аппаратура для культуральнотех-нических процессов в микробиологии. Серия микробиология. Том 14. Под ред. И.Л.Работновой. М., 1984. -305с.

100. Татаренко И.Ф. Влияние условий культивирования на размножение брюшнотифозной палочки //Вопросы эпидемиологии и микробиологии кишечных инфекций. -Киев, -1960. С .80-82.

101. Телишевская Л.Я Белковые гидролизаты. -М.: -2000. -295с.

102. Тец В.В., Каминский Г.Д. Фазовые изменения в периодических бактериальных культурах //Микробиология. 1984. -№ 8. -С. 24-30.

103. Тимаков В.Д. Микробиология -М.: Медицина. -1973, -432 с120. . Тимаков В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной медицинской микробиологии. М.: Медгиз, -1968.

104. Токаревич К.Н. Важнейшие инфекционные болезни, общие для животных и человека. Ленинград: Медицина, -1979. - С.219.

105. Торанюк 3. Е. Производство холерной вакцины глубинным методом. Ав-тореф.дис. .канд.мед.наук. Горький, -1959, -18 с.

106. Углова Г.В., Никулнинкова Н.С., Шапиро Н.И., Элькин С.В. Усовершенствование методики глубинного культивирования бактерий кишечной группы //Материалы по обмену опытом. -М., -1960, -№ 2, -57 с.

107. Фатеева М.В., Никитина Т.Н., Шерман Ф.Б. Выживаемость и диагностические свойства дрожжей после лиофилизации и хранения // Изв. АН СССР. Сер.биол., -1976. -№ 4, С.611-617.

108. Хаертынов С.Х., Никитина В.А. Новые бактериологические и питательные среды для культивирования микроорганизмов. -Казань, -1991, -22 с.

109. Хаертынов С.Х., Никитина В.А. Новые бактериологические и питательные среды из гидролизатов белок содержащих отходов мясокомбинатов.-100

110. Ветеринария, -1991, -IV, -63 с.

111. Хазипов Н.З., Котылев O.A., Алимов A.M. Изучение аминокислотной потребности листерий при глубинном культивировании // Мат. Всесоюзной конференции, посвященной 100-летию Казанского ордена Ленина ветеринарного института, -Казань, 1974, том № 113, -190с.

112. Хватов Б.П. Строение и физиологические изменения половой системы само домашних животных. -Симферополь,- 1955, -53 с.

113. Хейфец М.А., Закардонец B.C. Анализ мясо-костной муки на сальмонеллы. //Ветеринария. -1979, -№ 4.

114. Шептун Н.Г. Биохимические обоснования к получению и использованию гидролизатов фибрина и отходов производства препаратов и иммуноглобулинов. Автореф. дисс. . канд. биол. наук. -Воронеж, -1989, -22 с.

115. Шлегель Г. Общая микробиология. Перевод с немецкого Л.В.Алексеевой, Г.А.Куреллы и Н.Ю.Несытовой под редакцией С.Н.Кондратьевой. -М.: Мир,- 101 -1987.- 567 с.

116. Шур И.В. Заболевание сальмонеллезной этиологии. -М.: Медицина, -1970

117. Шустер Б.Ю. Сальмонеллезы у животных. //В кн.: Инфекционные болезни животных. Справочник. -М.: ВО "Агропромиздат", -1987. 195с.

118. Шустер Б.Ю., Малахов Ю.А., Соловьева B.C. Сальмонеллезы и колибак-териоз //Ветеринарные препараты. М., -1981. -С .216-236.

119. Шустер Б.Ю., Лиходед В.Г., Сергеев В.В. и др. Трансдукционный анализ вирулентности ревертантов стрептомицинзависимых мутантов //Микробиология. 1971. -№ 12. - С. 58-62.

120. Шустер Б.Ю., Малахов Ю.А. Штамм № 6 для использования вакцины против сальмонеллеза телят //Авторское свидетельство СССР № 1197186, -1984.

121. Шустер Б.Ю., Сергеев В.В., Елкина С.И. Получение стрептомицинзависимых мутантов сальмонелл методом трансдукции //Микробиология. 1970. - № 9, -С. 83-84.

122. Шустер Б.Ю., Лиходед В.Г, Экспериментальное изучение стабильности авирулентных свойств и иммуногенности супрессорных ревертантов стрептомицинзависимых мутантов сальмонелл //Микробиология. 1970, -№ 1. - С. 39-44.

123. Шустер Б.Ю., Сергеев В.В., Елкина С.И. Патогенные и иммуногенные свойства, стрептомицинзависимых мутантов //Микробиология. 1970 - № 1.- 102 -С.144-145.

124. Шустер Б.Ю., Сергеев В.В., Елкина С.Л. и др. Вирулентные свойства ре-вертантов стрептомицинзависимых мутантов сальмонелл //Микробиология. -1971,-№7, -С. 29-33,

125. Эфроимсон В.П. Иммуногенетика -М.: Медицина.-1971, 335с.

126. Anderson J.О., Nath Т., Harner E.G. Effects of freezepreservation on some pollen enzyms. Freezing and freezedrying stresses // Cryobiol. -1978. -Vol.15. -N4. -p.469-477

127. Bager F. Petersen J. Sensitivity and specifity of different methods for the isolation of salmonella from pigs // Acta, Vet. Scand., 1991, V.32, N4, p.473-481.

128. Barach J.T., Enders G.L., Kamara B.J., Improved stability of freeze-dried cultures. Патент 0259739 (ЕР). МХИ C12Nl/04/(USA) Заявл. 31.08.87; Опубл. 16.03.88. Bull. 88/11-1 ОС.

129. Bartolome R., Xairo M., Olsina M. et al. Nuevo medio de cultivo para 1992 // Enferm. infeec. у microbiol. clin., 1992, c.10, Supl. N2, p.93.

130. Behrens O.K., Ensminger P.N. Pertussis vaccine preparation // Patent N 2. -CI. 167-78.-USA. -1958.

131. Bergander E. Verfahren zur Herstellung eines zur Weiterverarbeitung auf Mikrobennaehrboeden geeigneten Hefeextraktes // Patent N 8707. -Kl. 30h. 14. -1954.

132. Ceddia Т., Giota G., Mancini A. et al. Simplified identification of bacteria belonging to the genus salmonella // Zbl. Bacteriol., Microbiol und Hud., 1987, A266, N3-4, p.438-442.- 103

133. Chen H., Fraser A., Vamazaki H. Modes of inhibition of Foodborne NonSalmonella Bacteria by Selenite Cystihe Selective Broth //Jnt. J. Food Microbiol., 1994, V.22, N2-3, p.217-222.

134. Cohen G.N. The Regulation of Cell Metabolism, Hermann Raris. 1968. p.236-239.

135. Delia S., Lagana P., Milici G., Bella F. Nostre esperienze sulhiso del Rambach Agar in campo umano // Riv. ital. ig., 1993, V.53, N1, p.34-39.

136. Denis F., Villeval F., Doleans F., Evalution d'un nouveau milieu avec substrat3 chromogenes pour la recherche de sallmonelles dans les corpocultures; de rates milieu. SMID // Rev. fr. lab., 1994, V.23, N27.

137. De Smedt J., Bolderdijk R., Milas J. Salmonella detection in cocoa and choca-late by motility enrichment on modified semisolid Rappaport Vassibiadis Medium-collaborative study // J. Aoac Jnt., 1994, V.77, N2, p.365-373.

138. Dicker D.T., Higgins L. Cell cycle changes in the biogant density of exponential-phase cells of Streptococcus faecium // J. Bacteriol. -1987. Vol.169. N3. -p.1200-1204.

139. Dolezal L, Kapralek F. Physiological characteristics of chemostatically grown Cytobacter freundii as a function of the specific growth rate and type of nutrient limitation// Folia Microbiol. -1976. -Vol.2. -N3. -p. 165.

140. Fluas J.M., Cherry A., Pons M. -N. et al. Estimation de l'état physiologique des microorganismes dans un bioprocede // APII. -1990, -Vol.23. -N3. -p.211 -220.

141. Freydiere A., Gille V. Detection of Salmonellae by using Rambach Agar and by a C8 esterase spot test // J.Clin Microbiol., 1991, v.29, p.2357-2359.

142. Cossens H., Butzler J.-P. Jsolation of campyloboeter spp. from stool specimens with a semisolid medium // J. Clin. Microbiol., 1991, V.29, N11, p.2681.

143. Habeeb A.F. A study of bacteriological media, the examination of peptides in casamin E 11 Canad. J. Microbiol. -1960. -N6. -p.237-242.

144. Hine E., Steffen E., Wagner J. New semisolid agar for the detection of motile salmonellas // J.Clin. Microbiol., 1988, V.26, N5, p.875-878.

145. Hottinger R. Nachpruefung und Kritik der ueblichen Bouillonbereitung // Zbl. -Bakt. -1913. -1. -V.67. -N3. -S. 178-206.

146. Humbert F., Salvat G., Colin P. et al. Rapid identification of salmonella from poultry meat products by using «Mucap test» // Jnt J. Food. Microbiol., 1989, V.8, N1, p.79-83.

147. Jensen A.M., Feld N., Nielsen B.B., Schirmer A.L., Madsen E.B. Salmonella dublin infection Оценка результатов программы ликвидации сальмонеллеза в восьми стадах молочных коров (Дания)., s.397-403. Dansk. Veter.-Tidsskr, 1994, Arg.77, N9.

148. Johansen E. Survival of L. bifidus after freezedrying // Appl. Bact. -1972. Vol. 35. -N3. -p.415-421.

149. Kucsera C.J., Wong J.C., Eis R.L. Developmen of a chemically altered Pas-teurella multocida vaccinal atrain // Am.J.Vet.Res. -1981. Vol.42. -N8. -p.1389- 105

150. Kuhn H., Wonde В., Reissbodt R. Evaluation rambach agar for detection of salmonella subspecies I-IV // Appl. Environ. Microbiol., 1994, V.60, N2, p.749-751.

151. Kussovsky V.K., Veljanov D.K. Investigation into phagocytosis sensitivity of certain salmonellae, depending on the phase development of the culture in vitro // докл. Болг. АН. -1985. -Vol.38. N10. -p.1363-1365.

152. Larsen S., Vig J.L., Pedersen O.G. Salmonella i en dansk svinebesaetning K проблеме распространения сальмонеллеза среди свиней в Дании. Dansk veter. -Tidsskr, 1994; Arg. 77, N5. -s.215-216.

153. Le Hir M., Sarhel С., Bourlioux P. Actualité du depista-gebes salmonella en pathologie infectieuse: etude critique et experimentale // Fereill. biol., 1991, N183, p.25-33.

154. Lederberq J. Isolation and Characterization of Biochimical mutants of Bacteria. Methads in Med. Restarch., 1950, 3, 5, 22.

155. Linde К. Herstellung von stabilen Salmonella-Iinpfstammen Durch Kopplung von zwei unabhängig voneinander nichtvermehrungbegrenzenden attenuierenden Markern // Arch.Exp.Vet.Med. -1980. N34. -p. 19-32.

156. Marshall B.J., Cocte G.G., Scott W.J. Effect of various gase son the survival of dried bacteria during storage // Appl. Microbiol. -1973. -Vol.26. -N2. -p.206-210.

157. Meiners M., Rupmundt W., Wania N. et al. Analysis of process dynamics in bioreactors// J. Chem. Teclrn. Biotechnol. -1983. -Vol.33. N3. -p.164-176.

158. Patil M., Parhad N. Growth of salmonellas in différend enrichment media // J. Appl. Bacteriol 1986, v.61, N1, p.19-24.- 106

159. Perales J., Erkiaga E. Comparison between semisolid Rappaport and modified semisolid Rappaport Vassiliadis media, the isolation of salmonella spp from foods and feeds // Jnt. J. Food Microbiol 1991, v. 14, N1, p.51-58.

160. Petersen L.A. Comparison of EF-18 agar and modiffed brilliant green agar with lutensit for isolation of Salmonella from poultry samples // Acta vet. scand, 1997, v.38, N1, p.79-85.

161. Pignato S., Giammanco G., Gammanco G. Rambach agar and SM-JD medium sensitivity for presumptive idenfication of salmonella subspecies J-VI // J. Meg. Microbiol., 1995, v.43, N1, p.68-71.

162. Quail E., Mc Gibbon L., Fricker C. A.stuby of the relative efficiencies of three commercially avialable de sydrated Rappaport -Vassiliadis media // J. Hug., 1986, v.96, N3, p.425-429.

163. Rambach A. New plate medium for faciliatet differentiation of salmonella spp. from Rroteus spp. and other enteric bacterua // Appl. Environ. Microbiol., 1990, v.56, p.301-303.

164. Robertson D.S., McCullough W.G. Glucose catabolism of Erysipelothrix rhu-siopatiae // J. of Bacteriology. -1968. -Vol.95. -N6. -p.2112-2116.

165. Schechata T.E., Marr A.G. Effect of nutrient concentration on the growth of Escherichia coli // J. Bacteriol. -1971. -Vol.107. -Nl. -p.210-216.

166. Smith P., Bolton F., Gayner V., Eceles A. Improvements to a lysine medium for detection of salmonellas by electrical conductance // Lett. Appl. Microbiol., 1990, v.ll, N2, p.84-86.

167. Smith B. Bovine salmonellosis: experimental production and choracterization of the disease in calves, using oral challenge with salmonella typhimurium // Am. J. Vet. Res. 1979. 40, 11: 1510-1513.

168. Svastova A., Skalka B., Smola J. A modified medium for salmonellasiolation be the selective motility test // Zbl. Veter. -Med. Reilie B., 1984, Bd.31,H.5, s.396-399.-107

169. Turowsky G., Kusiak В. Аэрированная глубинная культура hemophilus pertussis в применении к продукции вакцины // Med. Doswiadczalna i Microbiol. -1959. -v.10. -p.4. -p.493-499.

170. Ushiba D., Yoshioka M., Iwaliata R. Studies on the immunity of experimental typhoid. II. Effect on the immunization with killed vaccines of Salmonella enteriti-dis infection of mice // Keio J. Med. -1953. -v.2. -N75. -p.90-92.

171. Ushiba D., Iwahata R., Saito K. Studies of the immunity of experimental typhoid. III. A compararive study of active and passive immunization against the infection of mice with Salmonella enteritidis // Keio J. Med. -1954. -v.3. -N2. -p.73-78.

172. Vaggessen D., Wegener H. Ravisning of Salmonella hos svin // Dansk Veter. -Tidsskr., 1993, Agr.76, N23, s.1017-1022.

173. Vrana D., Votruba J., Placek J. Age related changes in the physiological state of budding yeast cells // Exp. Cell. Res. -1982. -Vol.138. -Nl. -p.57-62.

174. Walker A.A. Note of th Jnhibition of Preudomonas aeruginosa by a modification of brilliant green agar for Improved Salmonella isolation //J. Appl. Bacteriol., 1981, v.51, N3, p.405-408.

175. Приготовление ферментативного маточно-плацентарногогидролизата (ФМПГ)

176. Определение триптофана по М.А. Пешкову- ш

177. Метод дает завышенные результаты для питательных сред, но удобен для сравнительных исследований в процессе гидролиза.

178. Реактивы: 1% р-р хлорамина Б (хлорамин Б содержит 26-29% свободного хлора) 1 г сухого хлорамина растворяют в 99 мл воды и фильтруют.1. Ход определения

179. Расчет: X = А • 100, где %

180. X количество триптофана, мг%;

181. А количество хлорамина, пошедшее на титрование, мл;100 пересчет на 100 мл испытуемого р-ра.

182. Определение общего азота по методу Къельдаля

183. После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляют 10-12 мл дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому.

184. Последняя порция смывных вод должна оставаться желтой.

185. В приемную колбу аппарата Къельдаля наливают 20 мл 0,1н раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо.

186. Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо ферментативного маточно-плацентарного гидролизата берут 1 мл дистиллированной воды.

187. Содержимое общего азота (X) в ферментативном маточно-плацентарномгидролизате вычисляют по формуле, мг%:

188. У,,- У/,,„) • 0,0014 ■ 100 А- -—-, где.2

189. Определение содержания аминного азота методом формольного титрования по Зеренсен-Гаврилову в ФМПГ

190. Определение аминного азота проводят методом формольного титрования по Зеренсен-Гаврилову. Метод основан на титровании карбоксильных групп аминокислот и низких полипептидов, эквивалентно связанных формальдегидом аминогруппам.

191. Непосредственно перед работой формольную смесь (не менее 30 мл) нейтрализуют 0,1н р-р ЫаОН до рН-7.

192. Н объем 0,1н ЫаОН для титрования испытуемой пробы.

193. Приготовление питательной среды из основного ФМПГ

194. Для приготовления питательной среды основной ферментативный маточ-но-плацентарный гидролизат разводят дистиллированной водой до содержания 150-200 мг% аминного азота.

195. Потребное количество основного гидролизата рассчитывают по следующей формуле:д1. X = — х К, где Б

196. X потребное количество основного гидролизата плацентарно-эмбриональной массы для приготовления питательной среды (л);

197. А требуемое количество аминного азота в питательной среде (мг%); Б - концентрация аминного азота в основном ферментативном маточно-плацентарном гидролизате (мг%);

198. К количество питательной среды, которое необходимо приготовить (л). После установления в питательной среде рН (7,4-7,6) и аминного азота 150-200 мг% к ней добавляют следующие ингредиенты ( на 1 л объема):

199. Двузамещенный фосфорнокислый натрий, безводный 8,5 г (Ш2НР04 ГОСТ 11773-66)или 12-водный (Ка2НР04 ■ 12Н20) 21,3 г

200. Однозамещенный фосфорнокислый калий (КН2Р04) 998 мг ГОСТ 4198-65)

201. Лимоннокислый натрий 400 мг4. Сернокислый аммоний 1,0 г

202. Лимоннокислое железо 50 мг6. Сернокислый магний 100 мг

203. Приготовленную питательную среду фильтруют и автоклавируют в автоклаве при 1 атм (120°С) в течение 30 минут.

204. Стерильность приготовленной питательной среды определяют инкубацией 2-3 пробирок со средой в термостате при 37°С в течение 7 суток.