Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение влияния условий замораживания-оттаивания и хранения в жидком азоте на биологические свойства культуры Bacillus Thuringiensis Subsp. Galleriae

ВАК РФ 03.00.22, Криобиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Похиленко, Виктор Данилович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Перспективность применения микроорганизмов в защите растений от вредных насекомых.

1.2. Биологические свойства энтомопатогенных бактерий Bacillus thuringiensis Berliner

1.3. Методы сохранения микроорганизмов.

1.4. Влияние охлаждения и условий замораживания на микробные клетки.

ЭКСПЕРШЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

Глава 3. Влияние возраста культуры, концентрации клеток и среды суспендирования на выживаемость Вас. thuringiensis subsp.galleriae при действии замораживания-оттаивания.

Глава 4. Влияние криопротекторов и длительности консервации в жидком азоте на выживаемость и пролиферативную активность бацилл.

Глава 5. Сохранность морфокультуральных, физиолого-био-химических, антигенных и инсектицидных свойств Вас.thuringiensis subsp.galleriae после криоконсервации.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение влияния условий замораживания-оттаивания и хранения в жидком азоте на биологические свойства культуры Bacillus Thuringiensis Subsp. Galleriae"

В настоящее время в связи с интенсивным развитием микробиологической промышленности в научно-исследовательской работе и в цроизводстве постоянно возникает необходимость сохранения активности биопрепаратов.

В решениях ХШ съезда КПСС и в Продовольственной программе СССР намечены крупные меры по созданию новых эффективных средств защиты растений от вредителей, болезней и сорняков, регуляторов роста и других препаратов для сельского хозяйства. Предусматривается значительное увеличение выпуска микробиологических средств защиты растений. Мшфобиологическая промышленность нашей страны выпускает ряд бактериальных и грибных препаратов против насекомых - вредителей сельского и лесного хозяйств. Среди них наибольшее распространение получили инсектицидные препараты на основе бактерий группы Bacillus thuringien-sis . Ценность этих микроорганизмов заключается в способности образовывать целый ряд метаболитов, токсичных для вредителей растений, кровососущих насекомых и безвредных для человека, животных, растений, насекомых-опылителей. Однако,-масштабы производства и использования инсектицидных препаратов на основе кристаллообразующих бацилл пока не достаточны для эффективной борьбы с вредителями.

Требуют доработки чрезвычайно важные вопросы стабилизации инсектицидных свойств исходных штаммов, так как использование традиционных методов поддержания (периодические пересевы, хранение под маслом, высушивание) в ряде случаев не обеспечивает их сохранение.

В последнее время в нашей стране и за рубежом для хранения культур широко применяются лиофильное высушивание и замораживание. Эти методы консервирования позволяют длительное время сохранять жизнеспособность и функциональную активность микроорганизмов. Вместе с тем известно, что у лиофилизирован-ных культур гораздо чаще, чем у замороженных, наблюдаются генетические и морфологические изменения, повреждения ферментных систем, ДНК, нарушения проницаемости клеточных мембран. Поэтому замораживание по сравнению с лиофильным высушиванием является более надежным методом хранения микробных культур. Однако, при использовании низких температур для целей консервации возникает необходимость защиты клеток от их губительного действия. Разработка эффективных способов защиты биологических объектов от действия низких температур связана как с выявлением повреждающих факторов, так и с изучением механизмов их действия.

В доступной нам литературе отсутствуют систематические исследования по изучению вопросов УСТОЙЧИВОСТИ Bac.thuringien-sis к воздействию замораживания-оттаивания, сохранности биологических свойств этих культур в условиях низких температур, что затрудняет понимание механизмов вриоповреждений клеток и ограничивает использование метода низкотемпературной консервации для хранения штаммов яристаллообразугощих бацилл.

Целью нашей работы была разработка и научное обоснование метода консервации Вас. thuringiensis в жидком азоте на основании изучения жизнеспособности, морфокультуральных, биохимических, инсектицидных свойств бацилл при действии различных условий замораживания-оттаивания и в процессе 1фиоконсер-вации.

Для достижения намеченной цели наш решались следующие задачи:

1. Изучение зависимости выживаемости культуры от возраста, концентрации клеток в среде замораживания, состава этой среды и скоростей замораживания-оттаивания.

2. Изучение щжозащитного действия глицерина, сахарозы, полиэтиленоксида и твина-80 при замораживании и хранении бацилл в жидком азоте, при размораживании. Выбор оптимальных режимов замораживания-оттаивания культуры.

3. Влияние оптимальных условий криоконсервации, ее продолжительности на морфокультуральные, физиолого-биохимические, антигенные и инсектицидные свойства бацилл.

Научная новизна. Впервые исследованы ультраструктура, интенсивность биосинтеза нуклеиновых кислот, белка, дыхательная И пролиферативная активность культуры Bac.thiu?ingiensis subsp. gaiieriae при действии замораживания-оттаивания, что позволило выявить степень криоповреддений бацилл и определить оптимальные условия их консервации в жидком азоте.

Обнаружено, что выживаемость криоконсервированной вегетативной формы культуры коррелирует с дыхательной активностью и зависит от возраста клеток, их концентрации, скорости охлаждения, скорости оттаивания, химического состава среды замораживания. Криоустойчивая споровая форма существенно не снижает жизнеспособности и после 30 циклов замораживания-оттаивания.

Установлено, что снижение числа жизнеспособных вегетативных клеток связано с их повреждениями при замораживании-оттаивании и не зависит от длительности хранения в жидком азоте. Показана необходимость применения криоцротекторов - глицерина, сахарозы, полиэтиленоксида мол. массы 400 Да и твина-80 цри низкотемпературной консервации вегетативной формы культуры.

Практическое значение. Разработаны условия для длительной консервации в жидком азоте вегетативной и споровой форм культуры Вас.thuringiensis . Полученные результаты используются во ВНИИ прикладной микробиологии при хранении штаммов кристаллооб-разующих бацилл. Материалы диссертации докладывались на конференции молодых ученых (г.Харьков, 1978) и на Всесоюзном симпозиуме молодых ученых (г.Рига, 1979). Основные положения диссертационной работы опубликованы в трех статьях.

Теоретическое значение цредставляют результаты изучения зависимости сохранности биологических свойств бацилл от условий замораживания-оттаивания, исследований характера и причин криоповреждений вегетативных клеток.

Основные вопросы, выносимые на защиту:

1. Выживаемость криоконсервированных бацилл зависит от концентрации клеток в замораживаемой суспензии, возраста культуры, химического состава среды суспецдирования, скорости замораживания и условий оттаивания.

2. Снижение жизнеспособности культуры при криоконсервации обусловлено процессами замораживания и отогрева и не зависит от времени хранения в жидком азоте.

3. Биохимические и энтомопатогенные свойства культуры Бас. thuringiensis полностью сохраняются в пробах, консервированных с использованием 1фиопротекторов.

Заключение Диссертация по теме "Криобиология", Похиленко, Виктор Данилович

ВЫВОДЫ

1. Сохранность вегетативной формы культуры Вас.thuringiensis subsp. galleriae при криоконсервации зависит от возраста, концентрации клеток в суспензии, присутствия в ней хлористого натрия, криопротекторов, скорости замораживания и условий отогрева.

2. Максимальная гибель вегетативной формы культуры при кратковременной криоконсервации наблюдается в условиях медленного замораживания и медленного оттаивания в присутствии хлорис- • того натрия. Морфологические изменения криоконсервированных вегетативных клеток выражаются в повреждении клеточных стенок, плазмолизе и разрушении отдельных бактерий.

3. На сохранность споровой формы бацилл присутствие хлористого натрия в среде консервации и условия замораживания-оттаивания влияния не оказывают.Эта форма культуры, в отличие от вегетативной, устойчива к криоконсервации. Даже после 30-кратного воздействия замораживания-оттаивания гибнет не более 18$ спор.

4. Эффективными криопротекторами для вегетативных клеток культуры являются глицерин, сахароза, ПЭ0-400 в концентрации 5$ и твин-80 в концентрации 1$. Под защитой этих веществ выживает при криоконсервации до 90% бацилл. Для криопротекции вегетативных клеток' может быть использован и мясопептонный бульон.

5. Исследуемые криопротекторы не ингибируют пролифератив-ную активность культуры. Поэтому деконсервированные пробы бацилл могут непосредственно использоваться в качестве посевного материала, минуя процесс отмыва от криопротектора.

6. Консервация в жидком азоте в течение трех лет не приводит к гибели и дополнительным повреждениям бацилл, возникающим в процессе кратковременного замораживания.

7. Обнаружена задержка роста вегетативных клеток, консервированных без криопротекторов, которая, однако, не приводит к изменениям функциональных, биохимических и антигенных свойств культуры. Установлена коррелятивная зависимость между дыхательной активностью криоконсервированных проб бацилл и количеством в них жизнеспособных вегетативных клеток.

8. Консервация вегетативной формы бацилл под защитой глицерина, сахарозы, ПЭ0-400, твина-80 и хранение в жидком азоте в течение трех лет позволяет получить культуру, не отличающую^ ся от исходной по морфо куль тура льным, биохимическим, антигенным и инсектицидным свойствам.

9. Разработан метод криоконсервации Вас.thuringiensis, заключающийся в получении концентрата бацилл из культуры в стационарной фазе роста, суспендировании его в растворе одного из криопротекторов - глицерина (5%), сахарозы (5%), ПЭ0-400 (5%), твина-80 (1%) до концентрации не ниже 10 млн клеток/мл, распределении в герметичные емкости, замораживании со скоростью около 400°С/мин, хранении в жидком азоте и отогреве на водяной бане цри температуре 40°С.

ВБЩРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

1. Разработанный метод криоконсервации кристаллообразующих бацилл применяется в музее живых культур ВНИИ прикладной микробиологии с целью хранения культур энтомопатогенных бацилл (акт о внедрении от 23.05.83, утвержден зам.директора института и подписан председателем и членами комиссии по внедрению результатов НИР).

2. По материалам диссертации опубликовано три работы в открытой печати.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Похиленко, Виктор Данилович, Харьков

1. Азизбекян P.P., Белых P.A., Нетыкса Е.М., Погосбексша M.P. Сравнительная характеристика спорообразугацих и аспорогенных штаммов Bacillus thuringiensis .-Генетика, 1978, т.14, № 3, с.510-517.

2. Азизбекян P.P., Богданова Т.Л., Миненкова И.Б., Михайлов А.А., Смирнов В.Б., Якубова P.M. Характеристика выделенных из почвы фагов спорообразующих бактерий.- Микробиология, 1977, т.46, № 3, с.554-559.

3. Азизбекян P.P., Нетыкса Е.М. Сравнительная фагочувствитель-ность R- и s -штаммов Bacillus thuringiensis .- Микробиология, 1978, т.47, вып.З, с.527-533.

4. Азизбекян P.P., Нетыкса Е.М. Особенности развития фагов в спорообразующих и аспорогенных штаммах Bacillus thuringiensis- Генетика, 1978, т.14, № 4, с.666-672.

5. Акопян Г.М., Туманян В.Г., Африкян Э.К., Чил-Акопян Л.А., Назаретян Н.А. Сравнительная характеристика фаголизиса у разновидностей Bacillus thuringiensis Биол. журн. Армении, 1980, т.33, JG 4, с.446

6. Алешина О.А. Научные основы производства микробиологических препаратов для защиты растений.- В кн.: Микробиологические методы борьбы с вредителями сельскохозяйственных растений. Л., 1976, вып.47, с.64-67.

7. Алешина О.А., Покидова Н.В., Капитанова Т.А. Использование некоторых энтомопатогенных грибов в борьбе с вредными насекомыми.- М.; ,0НТИ ТЭИмикробиопром, 1979, с.44.

8. Аливердиев А.А. 0 сохранении микроорганизмами жизнеспособности при сверхнизких температурах.- Микробиология, 1965, т.34, № 2, с.265-267.

9. Ангус Т.А., Лути П. Рецептура микробиологических инсектицидов.- В кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М., Колос,1976, с.495-506.

10. Аркадьева З.А. О хранении культур микроорганизмов. Научные доклады высшей школы.- Биол. науки, 1974, № 7, с.103-107.

11. Аркадьева З.А. Простые методы хранения микроорганизмов.-Биол. науки, 1979, & 7, с.104-105.

12. Асланян P.P. Действие некоторых физических факторов и протео-литических ферментов на мицелий и споры актиномицетов.- Прикл. биохим. и микробиол., 1975, т.II, J6 6, с.933-937.

13. Африкян Э.К. Бактериальные инсектициды.- Вестн. АН СССР, 1969, & 6, с.46.

14. Африкян Э.К. Аэробные спорообразующие бактерии и их энтомо-патогенные свойства.- Автореф. дисс. на соиск. ученой степени доктора биол. наук. М., 1970.- 38 с.

15. Африкян Э.К. Энтомопатогенные бактерии и их значение.- Ереван: Изд-во АН Арм. ССР, 1973.- 420 с.

16. Африкян Э.К. Биология и систематика энтомопатогеншх бактерий.-М1кроб1олоПчшй журн., 1973, 35, вып.1, с.58-64.

17. Африкян Э.К. Энтомопатогенные бактерииВжУспехи микробиологии. М.: Наука, 1974, вып.10, с.142-172.

18. Африкян Э.К., Чил-Акопян Л.А. Бактериальный инсектицидный препарат БИЛ и биологические особенности культур Bacillus thuringiensis var.caucasicus .- Биол. журн. Армении,1980, т.33, Jfc 4, с.355-365.

19. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.-Л., 1962.- 265 с.

20. Барджес Г.Д., Томсон Э.М. Стандартизация и испытание микробиологических инсектицидов.- В кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.; Колос, 1976, с.468-494.

21. Белоус A.M., Шраго М.И., Пушкарь Н.С. Криоконсерьанты.-Киев:Hayкова думка, 1979, 198 с.

22. Белякова Л.А., Лаврова Л.Н., Кудрявцев В.И. Хранение культур грибов.- В кн.: Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов. М.:Наука, 1967, с.7-54.

23. Белякова Л.А., Надирова И.М., Фатеева М.В. I Международная конференция по коллекциям культур (7-12.10.1968г.,Токио).-Микробиология, 1970, т.39, К I, с. 179-182.

24. Бенцианова Т.Г. Влияние длительного хранения на биологические свойства штаммов S» typhi в сб.:Стандарты, штаммы и методы контроля бактерий и вирусных препаратов. М., 1976, вып.2, с.71-75.

25. Беспалова И.А., Москаленко Л.Н., Раутенштейн Я.М., Тихоненко А.С Электронно-микроскопическое изучение внутриклеточного развития фага, специфического для Bacillus thuringiensis var.gallerie . Микробиология, 1976, т. 45, № 5, с. 884-887.

26. Беттхер К. Исследование лецитиназной активности у некоторыхпочвенных споровых бактерий.- Микробиология,1961, т.30, № 4, с.673-678.

27. Бланков Б.И., Клебанов Д.Л. Применение лиофилизации в микробиологии . М.: Медгиз, 1961263 с.

28. Бланков Б.И. Сохранение жизни микроорганизмов.- В кн.: Анабиоз и преданабиоз микроорганизмов. Рига: Зинатне, 1973,с.31-40.

29. Бобович В.Т. Микробиологический метод борьбы с насекомыми -вредителями растений.- В кн.: Использование микроорганизмов в сельском хозяйстве.- Л.,М.: Сельхозиздат, 1962, с.300-304.

30. Бонд Р.П.М., Бойск К.Б.К., Рогов М.Г., Шай Т.Г. Термостабильный экзотоксин Bacillus thuringiensis в кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.; Колос, 1976, с.219-242.

31. Бондаренко Н.В. Биологическая защита растений.- Л., 1978,255 с.

32. Бурцева Л.И., Гулий В.В. Идентификация энтомопатогенных бактерий и вирусов. (Обзор).- М.: СОНТИ микробиопром, I97I.-3I с.

33. Бурцева Л.И., Пожидаева А.В., Мелихова Р.Е. Селекция вирулентных форм Вас. thuringiensis var galleriae В кн.: Микробиология народному хозяйству. Тр. биол. ин-та СО АН СССР. Новосибирск: Наука, 1974, вып. 27, с.46-53.

34. Бурьян Н.И. Сравнительное изучение различных методов хранения винных дрожжей в музее. Тр.ВНИИ виноделия и виноградарства "Магарач", I960, т.9, с.53-81.

35. Бюржержон А., Мартуре Д. Определение круга хозяев Bacillus thuringiensis и его значение.- В кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.:Колос, 1976, с.243-259.

36. Вейзер Я. Микробиологические методы борьбы с вредными насекомыми .-М.:Колос, 1972.- 640 с.

37. Витанов Т., Петухов В.Г. Действие низких температур на бактерии и защитный эффект поливинилпирролидона различного молекулярного веса.- Микробиология, 1973, т.42, Jfc 4, с.647-650.

38. Гаврилов В.П. Физико-химические изменения при охлаждении бактериальных суспензий П. Анализ электропроводности клеток.-Биофизика, 1976, т.21, & 5, с.845-847.

39. Гоготов И.Н., Аркадьева З.А. Действие лиофилизадии на нитро-геназную активность Azotobacter vinelandii .- Микробиология, 1975, т. 20 , }£ 3, с.534-537.

40. Горин Е.Е., Хлебникова Г.М., Звягинцев Д.Г. Замораживание почвенных образцов в сухом льду как способ хранения для микробиологических исследований.- Микробиология, 1978, т.47, № I,с.173-174.

41. Гризон П. Координация международных усилий и индустриализация микробиологической борьбы.- В кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.:Колос, 1976, с.539-544.

42. Гриценко И.Н., Соколова М.Я., Черепанова Н.Е., Юдина Е.В.,

43. Частота выделения из природы Bacillus thuringiensis var.galleriae В кн. :Тр.Виол.ин-та. Сиб. отд. АН СССР, 1975, вып. 25, о,106-119.

44. З^укасян А.Б. Микробиологические методы борьбы с вредными насекомыми.- М.: Изд-во АН СССР, 1963.

45. Гукасян А.Б. Таксономическое положение кристаллоносной бациллы Bacillus insectus Guk .-В сб.: Кристаллоносные микроорганизмы и перспективы их использования в лесном хозяйстве. М.,1967, с.5-20.

46. Гукасян А.Б. Микробиологический метод борьбы с сибирским шелкопрядом в темнохвойных лесах.- Лесн. хоз-во, 1973, .№ 7, с.66-67.

47. Гукасян А.Б., Гукасян В.М., Олех С.А. Биосинтез и динамика образования субмикроскопических кристаллов энтомопатогенны-ми бактериями.- В кн.: Биология микроорганизмов и их использование в народном хозяйстве. Иркутск, 1976, с.179-185.

48. Гулевская С.А., Кац JI.H., Михайлов А.В., Вульфович Ю.В., Константинова Н.Д. l -формы стрептококка в сканирующем электронном микроскопе. Сообщение I. О структурных элементах L -колоний.- Журн. микробиол., 1976, Л 8, с.29-32.

49. Далин М.В., Фиш Н.Г. Белковые токсины микробов.- М.: Медицина, 1980.- 224 с.

50. Далмедж Г.Т., Роде Р.А. Производство патогенов на искусственных средах.- В кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.: Колос, 1976, с.402-426.

51. Долинов К.Е. Основы технологии сухих биопрепаратов.- М.: Медицина, 1969.- 231 с.

52. Дубинина Г.П., Баснакьян И.А., Шадрина И.А. Морфология микроорганизмов в различных физиологических состояниях популяции при периодическом и непрерывном культивировании.- В кн.: Итоги науки и техники. Сер. микробиология, 1976, т.5,с.92-114.

53. Евлахова А.А., Швецова О.И. Отбор вирулентных форм микроорганизмов в исследованиях по микробиологическому методу борьбы с вредными насекомыми.- В сб.: Микробиологические методы борьбы с вредными насекомыми, М., 1963, с.24-34.

54. Залюбовская Н.П., Киселев Р.И. Консервирование микробов рода Meisseria методом глубокого замораживания.- МЭИ, 1977,1. J£ 8, с. 127-130.

55. Захарян Р.А., Агабалян А.С. О возможной роли плазмидных ДНК в процессе токсинообразования у Вас. thuringiensis .- В кн.: Ш Всесоюзн. симпоз . "Молекулярные механизмы генетических процессов". Тез. докл. М., 1976, с.87.

56. Зурабова Э.Р. Физиологические особенности энтомопатогенных споровых бактерий, применяемых для производства биопрепаратов.- В кн.: Исследования по биологическому методу борьбы с-вредителями сельского и лесного хозяйства. Новосибирск,1964, с.53-56.

57. Зурабова Э.Р. Кристаллообразующие бациллы как основа приготовления препаратов для борьбы с вредными насекомыми.- Авто-рефер. канд. дис . Иркутск, 1969.

58. Зурабова Э.Р., Козлова М.П. Метод флуоресцирующих антител для диагностики энтомопатогенных бацилл,- В кн.: Использование микроорганизмов в животноводстве для защиты растений. I.:ВНИИСХМ, 1968, с.135-139.

59. Зурабова Э.Р., Рыжкова А.С., Дубинина Т.П. Изучение разновидностей серотипа 10 вида Bacillus thuringiensis

60. Биол. журн. Армении, 1980, т.33, JG 4, с.374-378.

61. Иваницкая Л. П., Новикова Н.Д., Сингал Э.М., Бибикова М.В. 1У Международная конфнренция по коллекциям культур микроорганизмов.- Антибиотики, 1982, т.27, № 2 , с.151-154.

62. Иванов Г.М., Гукасян А.Б. Окраска кристаллов, спор и вегетативных клеток энтомопатогенных бактерий.- Микробиология, 1966, т.35, вып.1, с.179-180.

63. Ивенсконе В.Л., Флуер Ф.С., Василяускас И.Ф. Образование лецитиназы Bacillus thuringiensis Микробиология, 1975, т.44, вып.6, с.999-1004.

64. Имшенецкий А.А., Лысенко С.В., Сотников Г.Г., Абызов С.С. Влияние сверхнизких температур на АТФ микроорганизмов.-Микробиология, 1973, т.42, № 4, с.651-654.

65. Исакова Н.П. Новый вариант бактерий вас. cereus Prankiand, патогенный для насекомых.- Докл. ВАСХНИЛ, 1958, т.23,is 3to.2&-2r,

66. Исакова Н.П. Патогенез болезни насекомых, вызываемых Вас.cereus var. galleriae .- В кн.Микробиологические методы борьбы с вредными насекомыми. М.,1963, с.49-56.

67. Исакова Н.П., Строева И.А. Опытный отбор и сохранение штаммов Вас. cereus var. galleriae для производства энто^к-терина З.-Тр. ВИЗРД968, вып.31, с.371-379.- из

68. Калакуцкий Л.В., Агре Н.С. Развитие актиномицетов.- М.: Наука, 1977.- 285 с.

69. Кандыбин Н.В. Новые экзотоксиногенные штаммы Bacillus thuringiensis .- В кн.: Бактериальные средства и методы борьбы с насекомыми и грызунами. Л.,1972, с.20-23.

70. Кандыбин Н.В., Строева И.А. Использование микроорганизмов в защите растений от вредных насекомых и грызунов во Франции.- М.: ВНИИТЭИСХ, 1972.

71. Кандыбин Н.В. Микробиологические средства борьбы с насекомыми (состояния и перспективы).- Изв. АН СССР. Сер.биол., 1976, № 5, с.649-660.

72. Кеннел Д. Использование фильтров для разделения радиоактивных РНК, ДНК и белка.- В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. М.:Мир, 1970, с.138-145.

73. Козлова Е.И., Аркадьева З.А. Хранение микроорганизмов под. слоем вазелинового масла.- Вестн. Моск. ун-та, 1976, 2, с.58-61.

74. Коппел X., Мертинс Дж. Биологическое подавление вредных насекомых.- М.: Мир, 1980.- 429 с.

75. Кочкина З.М., Блохина Т.П., Раутенштейн Я.И. О полилизоге-нии культур Bacillus thuringiensis var. galleriae

76. Микробиология, 1977, т.46, № 4, с.730-736.

77. Крохина В.Н. Консервация культуры Вас. cereus лиофильным методом.- Прикл. биохим. и микробиол., 1974, т.10, Jfc 5, с.753-755.

78. Кузнецов В.Д. Хранение актиномицетов в лабораторных условиях.- В кн.: Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов. М.:Наука, 1967, с.136-150.

79. Кузнецова В.И., Новотельнов Н.В. О длительном хранении микроорганизмов .- Микробиология, 1967, т.36, 6, с.ПОО-- II04.

80. Кукси К.Э. Кристаллический белковый токсин Bacillus thuringiensis : биохимия и механизм действия.- В кн.: Микроорганизмы в борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.:Колос, 1976, с.198-218.

81. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований.- М.:Медицина, 1978.- 394 с.

82. Лескова А.Я. Характеристика штамма Bacillus thuringiensis из личинок восточного майского хруща.- В кн.: Бактериальные средства и методы борьбы с насекомыми и грызунами.1. Л., 1972, с.24-29.

83. Лозина-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии.- Л.:Наука, 1972.- 289 с.

84. Лобынцева Г.С., Щербак Г.М. Сравнительная оценка эффективности различных криофилактиков при низкотемпературном консервировании ядерных клеток крови.- Криобиология и крио-медицина, 1975, вып.1, с.131-133.

85. Лысенко 0. , Кучера М. Микроорганизмы как источники новых инсектицидных химикатов: токсины.- В кн.: Микроорганизмыв борьбе с вредными насекомыми и клещами. М.:Колос, 1976, с. 170-189.

86. Лях С.П. Адаптация микроорганизмов к низким температурам.-М.:Наука, 1976.- 160 с.

87. Мурас В.А., Бабич А.К., Давниченко JI.C. 0 сохранении некоторых фитопатогенных бактерий в воде.- Микробиол. яурн. АН УССР, 1976, т.38, Ш 2, с.229-231.

88. Надирова И.М., Данилова М.В. Хранение бактериальных культур под минеральным маслом.- В кн.: Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов., М.:Наука, 1967, с.91-118.

89. Надирова И.М., Земляков B.JI. Изучение степени стабильности характерных свойств бактерий, сохраняемых под минеральным маслом.- Микробиология, 1970, т.39, В 6, с.1106-1109.

90. Нетыкса Е.М., Смирнова Т.А., Миненкова И.Б., Азизбекян P.P. Бактериоцино-подобный фактор Bacillus thuringiensis #

91. Микробиология, 1979, т.48, Jte 4, с.716-722.

92. Никитин Е.Е., Звягин И.В. Замораживание и высушивание биологических препаратов.- М.: Колос, 1971.- 343 с.

93. Норрис Дж. Р. Белковый кристаллический токсин Bacillus thuringiensis : биосинтез и физическое строение.- М.:Колос, 1976, с.190-197.

94. Орловская Е.В. Вирусы насекомых и их применение в защите растений (Обзор).-М., 1970,- 42 с.

95. Орловский В.И., Тарасевич Н.Н., Волкова А.А. Изучение свойств высокоподвижных и стабильноспорулирующих вариантов Bacillus thuringiensis .- В кн.: Микробиологические средства защиты растений и бактериальные препараты. М.,1980, с. 18-22.

96. Осин H.C., Гавристова И.А., Петухов В.Г., Воронцова Т.В. Восстановление дыхания и потребления глюкозы бактериямипосле лиофилизадаи. Микробиология, 1980, т.49, £ 2,с.253-257.

97. Петухов В.Г., Осин Н.С. Сравнительное исследование скорости потребления глюкозы и кислорода бактериями в норме и при действии низких температур. Микробиология, 1979, т.48,1. I, с.17-22.

98. Полтев В.И., Рябкова Р.А. Явление диссоциации некоторых споровых энтомопатогенных бактерий. В кн.: Материалы планово-методического совещания по защите растений зоны Урала и Сибири. - Новосибирск, 1961, с.164-165.

99. Полтев В.И., Гриценко И.Н., Егорова А.И., Кальвиш Т.К., Туркевич JI.A., Ушакова Н.В. Микрофлора насекомых. Новосибирск, 1969.- 269 с.

100. Практикум по микробиологии. Под ред. Н.С.Егорова. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1976. - 307 с.

101. Пумпянская Л.В. Хранение микроорганизмов под минеральным маслом. Микробиология, 1964, т.33, # 6, с.1065-1070.

102. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию. Киев : Наукова думка, 1975.- 343 с.

103. Цушкарь Н.С., Белоус A.M., Иткин Ю.А., Вишневский В.И., Розанов Л.Ф. Низкотемпературная кристаллизация в биологических системах. Киев : Наукова думка, 1977.- 243 с.

104. Цушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус A.M., Калугин Ю.В. Крио-протекторы. Киев : Наукова думка, 1978.- 204 с.

105. Работнова И.JI. ,Позмогова И.Н. Хемостатное культивирование и ингибирование роста микроорганизмов,- М.:Наука,1979, с. 1-208.

106. Раутенштейн Я.И., Соловьева Н.Я. Об индуцировании ультрафиолетовыми лучами образования умеренного фага лизоген-НОЙ культурой Act.venesuelae .-Микробиология, 1963, Т.32, вып. 2, с. 252-259.

107. Раутенштейн Я.И.,Москаленко Л.Н.,Беспалова И.А. Дихонен-ко А.С. Ультраструктура бактериофага, специфического

108. ДЛЯ Вас.thuringiensis var. galleriae МШфОбИОлогия, 1976, т.45, вып. 4, с.690-694.

109. Романенко Б.И. Сохранение бактериальных спор в 96%-ном этиловом спирте.- Микробиология, 1982, т.51, вып.4, с.691-692.

110. Роуз Э. Химическая микробиология.- М.:Шр, I97I.-294 с.

111. Рубенчик Л.И. Поиск микроорганизмов в космосе.- 2-е изд.-Киев:Наукова думка, 1983.- П2с.

112. Рыбина Л.М., Лескова А.Я. Поиск и отбор штаммов вас.thuringiensis с высокой энтомоцидностью. В кн.: Тр. ВНИИ сельхоз. микробиолог., 1976, ДО 45, с.57-65.

113. НО. Рэ Л. Консервация жизни холодом.- М.:Медгиз, 1962.- 168с.

114. I. Сафонова Т.С., Микулинский 10.Е. Изучение действия низких температур и криофилактика на вышшаемость и метаболическую активность некоторых видов бактерий.- В кн.: Современные вопросы криобиологии.- Киев:Наукова думка, 1976, с.69-70.

115. СикураА.И., Зингерова Р.А., Симчук Г.В. Характеристика энтомопатогенных бактерий группы Bacilius thuringiensis , выделенных из виноградных листоверток.- В кн.: Биологические и химические методы защиты растений. Кишинев, 1977,с.29-35.

116. СшкураА.И., Ижевский С.С., Трофимова И.Л. Микробиологические средства борьбы с колорадским жуком. Сер."Защита растений". ВНИИ ТЭИсельхоз ВАСХНИЛ, М., 1979, с.52.

117. Смирнова Т.А., Миненкова И.Б., Нетыкса Е.М., Азизбекян P.P. Электронно-микроскопическое изучение клеток у вариантов Вас. thuringiensis var. galleriae , образующих колониис измененной морфологией.- Микробиология, 1977, т.46, вып.6, с.1050-1055.

118. Супрун Т.П. О хранении микроскопических грибов в стерильной почве.- Микробиология, 1965, т.34, Jfc 3, с.539-545.

119. Табак М.Я., Щелокова С.С. Влияние твинов на липазную.активность Oospora lactis Микробиология, 1979, т.48, JG 4, с.658-662.

120. Тарасевич Л.М. Вирусы насекомых.- М.:Наука, 1975.- 198 с.

121. Татаренко'Е.С., Игаекина Е.В., Манько В.Г. Влияние условий хранения на жизнеспособность грибов.- М1кробюл. журн. АН УРСР, 1976, т.38, J& 2, с.176-179.

122. Терешкова Г.М., Кеслер Т.Г. Хранение водородных бактерий в замороженном и высушенном состоянии.- В кн. Хемосинтез в непрерывной культуре. Новосибирск: Наука, 1978, с. 96-103.

123. Троицкая Е.Н. Сравнение методов хранения культур штаммов Бас. thuringiensis var. galleriae Прикл.биохим. и микробиол., 1979, т.15, В 3, с.402-408.

124. Тропин И.В., Ведерников Н.М., Крангауз Р.А., Маслов А.Д., Зубов П.А., Храмцов Н.Н., Андреева Г.И., Ляшенко Л.И. Справочник по защите леса от вредителей и болезней.- М.: Лесн. пром-сть, 1980.- 376 с.

125. Туранова Л.К. Б1олог1чн1 властивост1 кристаллоносних бак-тер!й п1сля тривалого зберагання.- Мздсробюл. журн. АН УРСР, 1977, т.39, № 6, с.645-746.

126. Усайте И.А., Яковлева М.Б. Изменение состава популяции в процессе хранения продуцента протеазы Thermoactinomyces vulgaris в лиофильно-высушенном состоянии.- Прикл. биохим. и микробиол., 1980, т.16, Jfc 6, с.925-929.

127. ФайбичМ.М., Егоров В.И., Писаревский Ю.С. О выживаемости микроорганизмов при замораживании.- Микробиология, 1962, т.5, вып.1, с.68-72.

128. Фатеева М.Б. Методы хранения коллекционных культур дрожжей.-В кн.: Методы хранения коллекционных культур микроорганизмов. М.: Наука, 1967, с.55-90.

129. Федоринчик Н.С., Строева И.А. Термостабильный экзотоксин энтомопатогенной бациллы группы Вас. thuringiensis.-Микробиол. пром-сть, 1970,5, с.37-41.

130. Хеймпелл A.M. Микробиологическая борьба с насекомыми.- В кн.: Стратегия борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняков в будущем. М.:Колос,1977, с.302-320.

131. Цапф К., Людвик И. Введение в электронную микроскопическую технику препарирования в микробиологии. Пер. с немец.-М.: Медицина, 1965.- 109 с.

132. Цуцаева А.А., Сафонова Т.С., Микулинский Ю.Е., Воробьева И.И., Иткин Ю.А. Влияние низких температур (-196°) и криопротекторов на некоторые виды бактерий.- Микробиология, 1978, т.4?, & 3, с.446-450.

133. Чемерис Н.А., Фихте Б.А. О результатах измерения модуля упругости у клеточных стенок микроорганизмов.- Микробиология, 1979, т.48, В I, с.99-101.

134. Честухина Г.Г., Залунин И.А., Костина Л.И., Котова Т.С., Катрухина С.П., Люблинская Л.А.,Степанов В.М. Протеиназы, связанные с кристаллами Бас.thuringiensis .- Биохимия, 1978, т.43, В 5, с.857-864.

135. Чигалейчик А.Г. Хитиназа Bacillus thuringiensis .- Микробиология, 1976, т.45, вып.6, с.966-972.

136. Швецова О.И. Биологические особенности некоторых споровых бактерий и опыт их практического использования. Материалы

137. Международной конференции по патологии насекомых и биологические методы борьбы с вредителями.- Прага, 1959, с.105-107.

138. Швецова О.И. Биологическое обоснование эффективности бактериального препарата энтобактерин 3 для борьбы с вредными насекомыми.- Журн. общ. биологии, 1962, т.23, № 5, с.381-390.

139. Швецова О.И., Зурабова Э.Р. Кристаллообразующие бациллы из пчелиной огневки.- Микробиология, 1969, т.38, вып.5, с. 903-908.

140. Шоломинская Т.В., Грошев А.Г., Мерцалов В.М. Влияние концентрации микробов во взвесях на их выживаемость при высушивании .-М., 1980,- 13 с. (Рукоп. депонир.во ВНИШИ МЗ СССР № 2954-80).

141. Шраго М.И. К токсикологии криозащитных веществ.- Фармакология и токсикол., 1971, № 5, с.590-591.

142. Шраго М.И., Гучок М.М., Калугин 10.В. Некоторые принципы направленного синтеза криопротекторов. В кн.; Актуальные проблемы криобиологии.-Киев: Наукова думка, 1981, с.157-200.

143. Шурда Г.Г. Влияние глубокого охлаждения на некоторые свойства молочнокислых бактерий.- Прикл. биохим. и микробиол., 1980, т.16, вып.1, с.17-23.

144. Эпштейн-Литвак Р.В. Питательные среды.- В кн.: Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования.- М. : Медицина, 1967, с.44-96.

145. Яловицын М.В. 0 некоторых токсинах бактериальных инсектицидных препаратов ВТСр BTCg и их губительном действии на насекомых.- В сб.: Физиология и биохимия микроорганизмов. Горький, 1974, вып.2.

146. Яловицын М.В. Энтомопатогенные микроорганизмы и применение их в борьбе с вредителями.- В кн.: Вопросы физиологии, биохимии и токсикологии энтомопатогенных бацилл.- Саранск: Мордовск. кн. изд-во, 1977.- 159 с.

147. Albrecht R.M., Orndorf G.R., Mac Kenzie A.P. Survival of cetrain microorganisms subjected to rapid and very rapid freezing on membrane filters.- Cryobiology, 1973, vol.10, N 3, p.233-239.

148. Alur M.D., Grecz N. Mechanism of injury of Escherichia coli by freezing and thawing.- Biochem. and biophys. res. commun., 1975, vol.62, N 2, p.308-312.

149. Anderson W.A., Andre J. The extraction of some cell component with pronase and pepsin from thin sections of tissue embedded in a Epon Araldite mixture.- J.microscopie, 1968, vol.7, N 3 , p.343-354.

150. Ang B.J., Nickerson K.W. Purification of the protein crystal from Bacillus thuringiensis by zonal gradient centrifu-gation.-Appl.environ, microbiol.,1978,vol.36, N 4,p.625-626.

151. Angus T.A. Association of toxicity with protein crystalline inclusion of Bacillus sotto Ishiwata.-Canad. J. microbiol., 1956, vol.2, N 2, p.122-131.

152. Angus T.A. General characteristics of cetrain insect pathogens related to Bacillus cereus.- Canad. J. microbiol., 1956, vol.2, N 2, p.111-121.

153. Ashwood-Smith M.J. On the genetic stability of bacteria to freezing and thawing.- Cryobiology, 1965, vol.2, N 1,p.39-43.

154. Ashwood-Smith M.J. Mechanism of dehydration injury in bacteria.- Int. J. refrig, 1980, vol.3, N 4, p.205-212.

155. Ashwood-Smith M.J., Grant E. Mutation induction in bacteria by freeze-drying.- Cryobiology, 1976, vol.13, N 2, p.206-213.

156. Ashwood-Smith M.J., Warby C. Studies on the molecular weight and cryoprotective properties of polyvinylpyrrolidone and dextran with bacteria and erythrocytes.- Cryobiology,1971, vol. 8, IT 5, p.453-464.

157. Ashwood-Smith M.J., Trevino J., Warby C. Effect of freezing on the molecular weight of bacterial ША.- Cryobiology,1972, vol. 9, N 2, p.141-143.

158. Bank H. Visualization of freezing damage.II. Structural alterations during warming.- Cryobiology, 1973, vol.10, N 2, p.157-170.

159. Bank H., Mazur P. Visulation of freezing damage.- J.cell, biol., 1973, vol. 57, N 3, p.729-742.

160. De Barjac H., Bonnefoi A. Mise au point sur la classification des Bacillus thuringiensis.- Entomophaga, 1973, T«18,1. N 1, p.5-17.

161. De Barjac H. Une nouvelle variete de Bacillus thuringiensis tres toxique pour les mousqitues: B. thuringiensis var. israelensis serotype 14.- In: C.R.Acad. Sci. Paris (ser.D), 1978, T.286, IT 10, p.797-800.

162. De Barjac H., Bonnefoi A. Essai de classification bioche-mique et serologique de 24 Souches de Bacillus du type thuringiensis.- Entomophaga, 19б2, т. 7, N 1, p.5—31•

163. De Barjac H., Bonnefoi A. Classification des souches de Bacillus thuringiensis.- In! C. R. Acad.Sci., Paris (Ser.D), 1967, T. 264, N , p.1811-1813.

164. De Barjac H., Bonnefoi A. A Classification of Strain of Bacillus thuringiensis Berliner with a key to theirdifferentiation.-J.Invertebr. pathol., 1968, vol.11, N 3 p.355-347.

165. De Barjac H., Dedonder R.M. Isolement d'um nucleotide identifiable a la "toxine thermostable" de Bacillus thuringiensis var. Berliner.- In.: C.R.Acad. Sci., Paris, (Ser.D.), 1965, T.260, IT 26, p.7050-7053.

166. Barrat R.W. General Discussion.- In.: Culture collections. Perspectives and problems. University of Toronto Press, Toronto, Ont., 1963, p.99.

167. Bateson J.В., Stainsby G. Analysis of the active principle in the biological insecticide Bacillus thuringiensis Berliner.- J. Pood, technol., 1970, vol.5, p.403-415.

168. Bechtel D.B., Bulla L.A. Electron Microscope study of sporulation and parasporal crystal formation in Bacillus thuringiensis.- J.Bacterid., 1976, vol.127, N 3, p.1472--1481.

169. Bensoussan M.G., Bianchi A. Cryoconcervation of a collection of marine bacteria in a liquid nitrogen container.-Biol, et ecol. mediter, 1979, vol.6, N 2, p.87-92.

170. Benz G. On the chemical nature of the heat stable exotoxin of Bacillus thuringiensis.- Experientia, 1966, vol.22, IT 2, p.81-82.

171. Berger L.R. Proposed basis for the storage of viable bacterial clones in distilled water.- In.: Proceeding of the first International conference on culture collection, University of Tokyo Press, 1970, p.265-267.

172. Black S.H., Gerhardt P. Permeability of bacterial spores.-J. Bacterid., 1962, vol.83, И 5 , p.960-967.

173. Bulla L.A., Kramer K.J., Bechtel D.B., Davidson L.I. Ento-mocidal proteinaceous crystal of Bacillus thuringiensis.-In: Microbiology 1976, Washington: D.C., 1976, p.534-539.

174. Bulla L.A., Jr Bechtel D.B., Kramer K.I., Shethna Г.Г. , Aronson A.I., Pitz James P.S. Ultrastructure, physiology, and biochemistry of Bacillus thuringiensis.- In: ORG crit rev. microbiol., 1980, vol.8, IT 2, p.147-204.

175. Bulla L.A., Jr., Yousten A.A. Bacterial insecticides.-In: Economic microbiology. N.Y: Academic Press, 1979, vol.4, p.91-144.

176. Bullen J.J. A new technique for recovering bacteria stored in liquid nitrogen.- J. gen. microbiol., 1975, vol.89, U 1, p.205-207.

177. Burgerjon A., Galichet P.P. The effectiveness the heat- stable toxin of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis Berliner on larvae of Musca domestica Linnaeus.- J. inver-tebr. pathol., 1965, vol. 7, И 2, p.263-264.

178. Calcott P.H. Freezing and thawing microbes.-In: Patternsof progress. Microbiology. Meadowfield Press Ltd., 1978.-68 p,

179. Calcott P.H., Mac Leod R.A. Survival of Escherichia coli from freeze thaw damage: a theoretical and practical study.-Canad. J. microbiol., 1974, vol. 20, N 5, p.671-681.

180. Calcott P.H., Mac Leod R.A., Survival of Esherichia coli from freeze-thaw damage: influence of nutritional statusand growth rate,- Canad. J. microbiol., 1974, vol.20, N 5, p. 683-689.

181. Calcott P.H., Mac Leod R.A. The survival of Escherichiacoli from freeze thaw damage: permeability barrier damage and viability.- Canad. J. microbiol., 1975» vol.21, N 11, p. 1724-1 732.

182. Calcott P.H., Mac Leod R.A. The survival of Escherichia coli from freeze thaw damage: the relative importance of wall and membrane damage.- Canad. J. microbiol., 1975» vol.21, N 12, p.1960-1968.

183. Calcott P.H., Lee S.K., Mac Leod R.A. The effect of cooling and warming rates on the survival a variety of bacteria.-Canad. J. microbiology, 1976, vol.22, N 1, p.106-109.

184. Calcott P.H., Postgate J.R. Protection of Aerobacter aero-genes by nonionic detergents from freezing and thawing damage.- Cryobiology, 1971, vol.7, N 4-6, p.238-242.

185. Couch T.L., Ross D.A. Production and utilization of Bacillus thuringiensis.- Bioiechnol. and bioeng., 1980, vol.22, H 7, p. 1297-1304.

186. Cowmann R.A., Speck M.L. Ultra low temperature storage of Lactic streptococci.- J. daily sci., 1965, vol.48, U 12, p.1531-1532.

187. Mc Crindle Cheryl M.E. The preservation of Clostridium chanvoei in liquid nitrogen.- J.S. air vet. assoc.,1979, vol.50, К 3, p.221-222.

188. Davies J.E. The role of peptides in preventing freeze-thawing injury.- In: The frozen cell. Ciba foundation symposium London: Churchill, 1970, p.213-233.

189. Deal P.H. Effect of freezing and thawing on a moderately+ 2+ halophilic bacterium as a function of Жа , К and Mgconcentration.- Cryobiology, 1974, vol.11, N 1, p.13-22. / v

190. Drasil V., Juraskova V. Changes in ША synthesis and repair of singlestrand breaks in cells after freezing.- Stud, biophys., 1977, vol.61, p.33-38.

191. Parkas J., Sebesta K., Horska K., Samek Z., Dolejs L.,v

192. Sorm P. The structure of exotoxin of Bacillus thuringiensis var. gelechiae.- Collect, czechoslov. chem. communs, 1969, vol. 34, N 3, p.1118-1120.

193. Past P.G., Angus Т.A. Effect of parasporal inclusions of Bacillus thuringiensis var. sotto Ishiwata on the permeability of the gut wall of Bombyx mori (Linnaens) larvae.

194. J.invertebr. pathol., 1965, vol.7, N 1, p.29-32.

195. Past P.G., Videnova E. The -endotoxin of Bacillus thuringiensis. V. On occurence of endotoxin fragments in hemolypmh. J.invertebr. pathol., 1974, vol.23, N3, p.230-234.

196. Paust R.M., Heimpel A.M. In vitro chemical reaction of the-endotoxin produced by Bacillus thuringiensis var. den-drolimus with other protein.-J.invertebr. pathol., 1968, vol.11, N 3, p.465-475.

197. Paust R.M., Estes Z.E. Silicon content of the parasporal crystal of several crystalliferous bacteria.-J.invertebr. pathol., 1966, vol.8, N 2, p.141-144.

198. Paust R.M., Hallam G.M., Travers R.S. Degradation of theparasporal crystal produced by Bacillus thuringiensis var.kurstaki.- J.invertebr. pathol., 1974, vol.24, N3,p.365-373.

199. Gerhardt Ph., Pankratz H.S., Scherrer R. Pine structureof the Bacillus thuringiensis spore.- Appl.environ, micro-biol., 1976, vol.32, N 3, p.438-440.

200. Gibson Т., Gordon R.E. Genus Bacillus Cohn. In.: Bergey's manual of determinative bacteriology, 8 th ed., The Williams and Wilkins Co., Baltimore, 1974, p.529-550.

201. Grecz П., Smith R.E., Hoffmann C.C. Corption of water by spores, heatkilling spores, and vegetative cells.- Canad. J.microbiol., 1970, vol.16, U 6, p.573-579.

202. Hackensellner H.A., Matthes G. Stand und Probleme der Kryokonservirung in der Medizin.- Das deutsche Gesundheits--Wesen, Berlin, 1980, 35, H.25, s.979-987.

203. Harstell S.E. Maintenance of cultures under paraffin oil.-Appl. microbiol.,1956, vol.4, И 6, p.350-355.203» Heckly R.J. Preservation of bacteria by lyophilization.-In: Adv. appl. microbiol., Acad. Press,lie., 1961, vol.3, p.1-76.

204. Heckly R.J. Preservation of microorganisms.- In: Adv. appl. microbiol., Acad. Press, Inc., 1978 , vol.24, p.1-53.

205. Heckly R.J., Dimick R.L. Correlation between free radi°al production and viability of lyophilized bacteria.- Appl. microbiol., 1968, vol.16, H 7, p.1081-1085.

206. Heimpel A.M. The specificity of the pathogen Bacillus thuringiensis var. thuringiensis Berliner for insects.-In: Proc. 12 Int. congr. entomol., London, 1964(1965), p.736.

207. Heimpel A.M. Microbiol controll of insects.- In: Wurld review of pest control Winter, 1965, vol.4, p.150-161.

208. Heimpel A.M. A cristall reviev of Bacillus thuringiensis var. thuringiensis Berliner and other crystalliferous bacteria.- In: Annu. rev. entomol^California, 1967, vol.12, p.287-322.

209. Heimpel A.M., Angus T.A. The site of action of crystalliferous bacteria in Lepidopteres larvae.- J. insect, pathol., 1959, vol.1, p.152-170.

210. Heimpel A.M., Angus T.A. Bacterial insecticides.- In: Bact. rev., Baltimore, 1960, vol.24, N 3, p.266-288.

211. Hwang S.W. Longevity of fungal cultures in liguid nitrogen refrigeration.- In: Proceeding of the first International conference on culture collections. University of Tokyo Press, Tokyo, 1970, p.251-253.

212. Jamasato K., Okuno D., Ohtomo Т., Unami E. Survival ofоbacteria frozen and stored at -53 С for 92 months.- Cryobi-ology, 1978, vol. 15, Я 6, p. 691-692.

213. Karstensen S., Marguis R.E., Gerhard P. Dielectric study of the physical state of electrolytes and water within Bacillus cereus spores.- J.Bacterid., 1971, vol.107, N 1, p.106-113.

214. Kellenbenger E., Ryter A., Sechatid J. Electron microscopic study of DTTA containing plasms.II. Vegetative and mature phage DNA pool of vegetative phages and the maturation of phage particles.- Virology, 1958, vol.3, N , p.478

215. Kempler G., Ray B. Nature of freezing damage on the li-popolysaccharide molecule of Escherichia coli В.- Cryobio-logy, 1978, vol.15, В 5, p.578-584.

216. Kim Т.Н., Kubica G.P. Preservation of mycobacteria -1' viability of suspensions stored at -70°C.- Appl. microbiol., 1973, vol.25, IT 6, p.956-960.

217. Krieg A. Uber die in vivo Titration (Bioassay, Biotest) von Insektenpathogenen, speziell von Bacillus thuringiensis.

218. Entomophaga, 1965, T. 10, N 1, p.3-20.

219. Krieg A. Uber die Anwendung und Ausbringung von Bacillus thuringiensis in der LandwirdschaftNachrichtenbl. Dejufcsch, Pflanzenschutzdienst, 1970, 22, N 7, s. 97-103.

220. Kushner D.J., Heimpel A,M. Lecithinase production by strains of Bacillus cereus Frf et Fr*, pathogenic for the larch sawfly, Pristiphora erichsonii (Htg.).- Canad. J.microbiol., 1957, vol.3, IT 4, p.547-551.

221. Lapage S.P., Shelton J.E., Mitchell T.G., Mac Kenzie A.R. Culture collections and the preservation of bacteria.-In.: Methods in microbiology. Academic Press, London, 1970, vol.3a, p.135-228.

222. Lapage S.P., Redway K.P. Preservation of microorganisms.-In.: Handb. microbiol., Cleveland, Ohio, 1973, vol.1, p.713-724.

223. Lecadet M.M., Dedonder R. Enzymatic hydrolysis of the crystals of Bacillus thuringiensis by proteases of Pieris brassicae.I. Preparation and fractionation of the lysates.-J. invertebr. pathol., 1967, vol., N 3, p.310-321.

224. Lee S.K., Calcott P.H., Mac Leod R.A. Relationship of cytochrome content to the sensitivity of bacteria to NaCl on freezing and thawing.- Canad.J.microbiol., 1977, vol.23,1. 4, p.413-419.

225. Levy L. The effect of freezing and storage at -60°C on the viability of Miycobacterium leprae.- Cryobiology, 1971, vol.8, IT 6, p.574-576.

226. Lindeburg G., Lode A. Release of ultraviolet-absorbing material from Escherichia coli at subzero temperatures.-Canad. J. microbiol, 1963, vol.9, IT 4, p.523-530.

227. Lovelock J.E. The mechanism of the action of glycerol against haemolysis by freezing and thawing.- Biochem, biophys. acta, 1953, vol.11, IT 1, p.28-36.

228. Luthy P. Zur bacteriologischen Schadling;sbekampfung: Die entomopathogenen Bacillus Arten Вас. thuringiensis und Вас. popiliae.- In.: Vierteljahrsschrift der Naturforschen-der Geselleschaft in Zurich, 1975, 120, N 2, s.81-163.

229. Luthy P. Insecticidal toxins of Bacillus thuringiensis.-PEMS Microbiol. lett., 1980, vol. 8, IT 1, p.1-7.

230. Mac Leod R.A., Calcott P.H. Cold shock and freezing damage to microbes.- In.: Survival of vegetative bacteria.26 • th sympos. soc. for gen. microbiol. Cambridge University Press: Cambridge, 1976, p.81-109.

231. Mac Leod R.A., Kuo S.C., Gelinas R.R. Metabolic injury to bacteria. II Metabolic injury induced by distilled wateror Cu++ in the plating diluent.- J.Bacterid., 1967, vol.93, N 3, p.961-969.

232. Major C.P., Mc Dougall J.D., Harrison A.P. Jr. The effect of the initial cell concentration upon survival of bacteria at -22°C.-J.bacterid. , 1955, vol.69, N 3, p.244-249.

233. Manche R.I. Long term storage of Thiobaccillus ferrooxi-dans.- J.apll. bacterid., 1975, vol.38, N 2, p.191-192.

234. Martin S.M. Conservation of microorganisms.- In.: Ann. rev. microbiol., 1964, vol.18, p. 1-16.

235. Mazur P. Einetics of water loss from cells at subzero temperatures and the likelihood of intracellular freezing.-J.gen.physiol., 1963, vol.47, N 2, p.347-369.

236. Mazur P. Physical and chemical basis of injury in single-celled microorganisms subjectet to freezing and thawing.-In.: Cryobiology, Academic Press, London, Nev-York, 1966, p.214-315.

237. Mazur P. Physical-chemical basis of injury from intracellular freezing in yeast.- In.: Cellular injury and resistence in freezing organisms, Proceeding of Inter.conf. on low temp, science. Hotkaido Univ.,Sapporo, 1967, p.171-189.

238. Mazur P. Cryobiology: The freezing of biological systems.-Science, 1970, vol.168, N 5135, p.939-949.

239. Mazur P., Smidt J.J. Interaction of cooling velocity, temperature, and warming velocity on the survival of frozen and thawed yeast-.- Cryobiology, 1968, vol.5, N 1, p.1-17.

240. Mazur P., Leibo S.P., Farrant J., Chu E., Hanna M.A., Smith L.H. Interactions of cooling rate, warming rate and protective additive on survival of frozen mammalion cells.-In: The frozen cell., Churchill. Ltd., London, 1970, p.69-88.

241. Mazur P., Leibo S.P., Chu E.H.Y. A two factor hypothesisof freezing injury. Evidence from Chinease hamster tissue-culture cells.- Experimental cell research, 1972, vol.71, N 2, p.345-355.

242. Mehrotra B.S., Tandon G.D., Maurya J.N., Chopra B.K.,

243. Prasad R. Preservation of industrial cultures by lyophi-lization.- In:Proceeding of the first International conference on culture collections. University of Tokyo Press, Tokyo, 1970, p.319-327.

244. Meryman H.T. The mechanics of freezing in living cellsand tissues.- Science, 1956, vol.124, Я 3, p.515-521.

245. Meryman H.T. Reviev of biological freezing.- In: Cryobiology. Academic Press, London, 1966, p.1-114.

246. Meryman H.T. The exceeding of a minimum tolerable cellvolume in hypertonic suspension as a cause of freezing injury.- In: The frozen cell. Churchill, Ltd, London, 1970, p.51r64.

247. Meryman H.T. Osmotic stress as a mechanism injury.

248. Cryobiology, 1971, vol.8, H 5, p.480-500.

249. Meryman H.T. Cryoprotective agents.- Cryobiology, 1971,vol.8, N 2, p.173-183.

250. Meyer E.D., Sinclair N.A., Nagy Б. Comparison of the survival and metabolic activity of psychrophilic and mesophilic yeastssubjected to freeze-thaw stress.- Appl. microbiol., 1975, vol.29, IT 6, p.739-744.

251. Michio Ohba, Keiko Ono, Keiko Aizawa, Setsuo Iwanami. Two new subspecies of Bacillus thuringiensis isolated in Japan: Bacillus thuringiensis subsp. kumamotoensis (serotype 18) and Bacillus thuringiensis subsp. tochigiensis (serotype 19).

252. J. invertebr. pathol., 1981, vol.38, IT 2, p.184-190.

253. Michio Ohba, Keiko Aizawa. A new subspecies of Bacillus thuringiensis isolated in Japan: Bacillus thuringiensis subsp. tohokuensis (serotype 17).- J. invertebr. pathol., 1981, vol. 38, IT 2, p.307-309.

254. Mitic S. Transformation of amino acid composition in bacterial cells of Lactobacillus bulgaricus during freeze-drying. Cryobiology, 1976, vol.13, N 2, p.214-217.

255. Maeda Y., Fujita Т., Suguira Y., Koga S. Physical properties of water in spores of Bacillus megaterium.- J. gen. appl. microbiol., 1968, vol.14, N 3 , p.217-226.

256. Monro R.E. Serological studies on the formation of protein parasporal inclusions in Bacillus thuringiensis.-J. biophys.biohem. cytol.,1961, vol.11, N 2, p.321-331.

257. Morichi Т., Irie R., Yano IT., Kembo H. Protective effect of glutamic acid and related compound on bacterial cells subjected to freeze-drying.- J. gen. appl. microbiol.,1963, vol. 9, N 2, p.149-161.

258. MorichL Т» Metabolic injury in frozen E.coli.-In: Freezing and drying of microorganisms,Tokyo: Univ. Tokyo Press, Baltimore, Manchester, 1969, p.53-68.

259. Murrel M.G., Scott W.J. The permeability of bacterial spores to water.- In: Abstr. YII Internet, congr. of microbiol. H.Y.: Acad. Press, 1958, p.26.

260. Nash T. Chemical constitution and physical properties of compounds able to protect living cells ageinst damage due to freezing and thawing.- Cryobiology, 1966, vol.3, N 2, p.179-213.

261. Uei Т., Araki Т., Matsusaka T. Freezing injury of aerated and non-aerated cultures of Escherichia coli.—In: Freezing and drying of microorganisms. University of Tokyo Press, Tokyo, 1969, p.3-15.

262. Hishiitsutsuji Uwo J., Wakisaka Y., Eda M. Sporelles mutants of Bacillus thuringiensis.- J. invertebr. pahtol.,1975, vol.25» N 3, p.355-361.

263. Norris J.R. The classification of Bacillus thuringiensis.-J. appl. bact., 1964,vol.27,p439-447.

264. Norris J.R., Burges H.D. The identification of Bacillus thuringiensis.- Entomopbaga, 1965, T. 10, U 1, p.41-47.

265. Postgate J.R., Hunter J.R. The survival of starved bacteria.-J. gen. microbiol., 1962, vol. 29, H 2, p.233-263.

266. Prentice M.J., Farrant J. Survival of Chlamydiae after cooling to -196°C.- J. clin. microbiol., 1977, vol.6, IT 1,p.4-9.

267. Raccach М., Juven В. Studies of the recovery of frosen Salmonella gallinarium: the roles of cooling rate, initial cell concentration and plating medium.- J. food technol., 1973, vol.8, N 2, p.211-216.

268. Raccach M., Rottem S., Razin S. Survival of frozen Mycoplasmas Appl. microbiol., 1975, vol.30, N 2, p.167-171.

269. Ray В., Speck M.L. Repair of injury induced by freezing Escherichia coli as influenced by recovery medium.- Appl., microbiol., 1972, vol.24, H 2, p.258-263.

270. Ray B., Speck M.L. Metabolic process during the repair of freeze injury in Escherichia coli.- Appl. microbiol.,1972, vol.24, К 4, p.585-59o.

271. Ray В., Speck M.L. Freeze-injury in bacteria.- In: C.R.C. critical reviews in clinical laboratory sciences, Cleveland, Ohio: CRC press, 1973, vol.4, p.161-213.

272. Ray В., Jannsen D.W., Busta F.F. Characterization of. the repair of injury induced by freezing Salmonella anatum.-Appl. microbiol., 1972, vol.23, If 4, p.803-809.

273. Ray В., Speck M.L., Dobrogosz W.J. Cell wall lipopolysaccha-ride damage in Escherichia coli due to freezing.- Cryobiology, 1976, vol.13, U 2, p.153-160.

274. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy.- J. cell, biol., 1963, vol.17, U 1, p.208-212.

275. Sawa D. Long-term preservation of bacteria in liquid nitrogen.- Microbios. lett., 1980, vol.14, И 55-56, p.113-115.

276. Scherrer P.S., Soraineerville H.J. Membrane fractions from the outlier layers of spores Bacillus thuringiensis with toxicity of lepidopterous larvae.- Eur. J. biochem., 1977, vol.72, U 3, p.479-490.

277. Schneider M.D., Shefner A.M. Extended low-temperature storage of a highly lethal Plasmodium berghei strain.- Amer.3". vet. res., 1970, vol.31, N" 1, p.173-179.v t

278. Sebesta K., Horska K., Vankova J.Idaibition of de novo RNAsynthesis by the insecticidal exotoxin of Bacillus thuringiensis var. gelechia.-Collect. Czechoslov. chem. commun.,1969, vol.34, N 6, p.1786-1791. f /

279. Sebesta K., Horska K. Mechanism of inhibition of ША-dependent

280. RITA polymerase by exotoxin of Bacillus thuringiensis.-Biochem.et biophys. acta, 1970, vol. 209, p.357-367. v /

281. Sebesta K., Horska K. The fate of exotoxin, from Bacillus thuringiensis in mice.- Collect, czechoslov. chem. commun., 1973, vol.38, H 8, p.2533-2537.

282. Serbanescu R., Dunareanu G. Ultrastructural changes inducedby freezing and thawing in Listeria monocytogenes (transmission and scanning electron microscopy).- Cryobiology, 1975, vol.12, H 6, p.567-568.

283. Shannon J.E., Gherna R.L., Jong Shung C. The role of liquid nitrogen refrigeration at the American Type Culture Collection.- In: Round table conf. cryog. preserv. cell. cult. Washington, D.C., 1975, p.1-8.

284. Short I.A., Walker P.D., Thomson R.O., Sommerville H.J. The fine structure of Bacillus finitimus and Bacillus thuringiensis spores with special reference to the location of crystal antigen.- J. gen. microbiol., 1974, vol.84, part 2, p.261-276.

285. Simone P.P., Jr., Daggett P.-M., Mc Grath M.C., Alexander M.T. The use of plastic ampoules for freeze preservation of microorganisms.- Cryobiology,1977, vol.14, N 4, p.500-502.

286. Slepecky R.A. Ecology of bacterial sporeformers.- In: Spores Y. Washington D.C. amer. soc. microbiol.,1972, p.297-313.

287. Smittle R.B., Gilliland S.E., Speck M.L. Death of Lactobacillus bulgaricus resulting from liquid nitrogen freezing.-Appl. Microbiol., 1972, vol.24, IT 4, p.551-554.

288. Smittle R.B., Gilliland S.E., Speck M.L., Walter W.M. Relationship of cellular fatty acid composition to survival of Lactobacillus bulgaricum in liquid nitrogen.- Appl. microbiol., 1974, vol.27, H 4 , p.738-743.

289. Smirnoff W.A. Effect of chitinase on the action of Bacillus thuringiensis.- Canad. entomologist, 1971, vol.1o3, N 12, p.1829-1831.

290. Sommerville H.J. Insect toxin in spores and protein crystals of Bacillus thuringiensis.- Trends biochem. sci., 1978, vol. 3, IT 5, p.108-110.

291. Soriano S. Sordelli's method for preservation of microbial cultures by desiccation in vacuum.- In: Proceedings of the first International conference on culture collections University of Tokyo Press, Tokyo,1970, p.269-271.

292. Sorrells K.M., Speck M.L., Warren J.A. Pathogenicity of Salmonella gallinarium after metabolic injury by freezing.-Appl. microbiol., 1970, vol.19, N 1, p.39-43.

293. Souzu H. Destruction of Escherichia coli membrane due to freezing.- Cryobiology, 1978, vol.15, H 6, p.690.

294. Speck M.L., Cowmann R.A. Preservation of Lactic streptococci at low temperatures.- In: Proceedinds of the first International conference on culture collection, University of Tokyo Press, Tokyo, 1970, p.241-250.

295. Stamp J. The preservation of bacteria by drying.- J. gen. microbiol., 1947, vol.1, N 1, p.13-18.

296. Stewart R.H., Wright D.N. Storage of meningococcal and streptococcal L forms.- Cryobiology, 1970, vol.6, IT 6, p.529-532.

297. Straka R.P., Stokes J.L. Metabolic injury to bacteria atlow temperatures.- J. bacterid., 1959, vol.78, N 2, p.181-185.

298. Strange R.E., Postgate J.R. Penetration of substances into cold shocked bacteria.-J.gen. microbiol., 1964, vol.36,1. U 3, p.393-403.

299. Swartz H.M. Effect of oxygen on freezing damage; II. Physical chemical tffect.- Cryobiology, 1971, vol.8, IT 3,p.255-265.

300. Takano M., Hguitragol M., Shibasaki I. Bacterial action of freezing with laurate.- Cryobiology, 1978, vol.15, N 6,p.692.

301. Tanno К. An explanation for the cell concentration.- Dependent survival of E.coli after freeze thawing.- Cryobiology, 1978, vol.15, П 6, p.691.

302. Toumanoff C. Discription de'queques souches entomophytes de Bacillus cereus Frank,and Frank, avec vemarques sur leur action et cell d'autres bacilles sur le jaune dfoeuf.-In: Ann. Inst. Pasteur, 1953,^.85, H 1, p.90-99.

303. Toumanoff C. Virulence experimentale d'une souche danale de Bacillus cereus Frankland and Frankland pour les chenilles de Galleriae mellorella L. et Pieris brassicae.- In: Ann. Inst. Pasteur Paris, 1956, T. 90, H 1, p.660-664.

304. Toumanoff C., Le Corroller Y. Contribution a 1*etude de Bacillus cereus Frank, et Frank., cristallophores et pathogenes pourles larves de Lepidopteres.- In: Ann. Inst. Pasteur.Paris, 1959, T. 96, N 6 , p.680-688.

305. Trollope D.R. The preservation of bacteria and fungi on anhydrous silica gel: an assessment of survival over four years.-J. appl. bacterid., 1975, vol.38, IT 2, p.115-120.

306. Trumpi B. Analytische Untersuchungen am <$ Endotoxin von Bacillus thuringiensis.- Zbl. Bacteriol., Parasitenk., Infek-tionskrank., Hyg., 1976, Abt.2, 131, IT 4, s.305-360.

307. Trumpi B., Ankwanda U., Luthy P. Der Abbau von kristallinem Endotoxin von Bacillus thuringiensis durch partiell gereini-gte Proteazen aus Darmsaft von Pieris brassicae.-Pathol. et microbiol., 1974, 41, IT 3-4, s. 171-173.

308. Webb S.J. Some effect of dehydration on the genetics of microorganisms.- In: Freezing and drying of microorganisms Univ. Tokyo Press. Tokyo, Baltimore, 19б9,р,153-167.

309. Wellmann A.M, Walden D.B. Long term cryogenic storage of Neurospora crassa spores.- Cryobiology, 1971, vol.8, H 6,p.566-569.

310. Wellmann A.M., Stewart G.G. Storage of brewing yeasts by liquid nitrogen refrigeration.- Appl. microbiol, 1973, vol. 26, N 4, p.577-583.

311. Young I.E., Pitz-James P.C. Chemical and morphological studies of bacterial spore formation. II. Spore and parasporal protein formation in Bacillus cereus var. alesti.-J. biophys. biochem. cytol., 1959, vol.6, N 3, p.483-498.