Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эколого-генетический анализ диссоциативной изменчивости у Bacillus Thuringiensis

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Секерина, Ольга Александровна

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эколого-биологические особенности Bacillus thuringiensis

1.1.1 Систематическое положение В. thuringiensis

1.1.2 История описания вида В. thuringiensis и его разнообразия

1.1.3 Внутривидовая классификация В. thuringiensis

1.1.4 Распространение В. thuringiensis.

1.1.5 Характеристика клеточных и культуральных признаков В. thuringiensis.

1.1.6 Особенности жизненного цикла.

1.1.7 Токсины В. thuringiensis ■.

1.1.8 Взаимоотношения паразит-хозяин.

1.2 Изменчивость у В. thuringiensis.

1.2.1 Мутационная изменчивость.

1.2.2 Рекомбинационная изменчивость.

1.2.3 Диссоциативная изменчивость.

2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Исходные штаммы и условия культивирования.

2.1.1 Исходные штаммы.

2.1.2 Условия культивирования.

2.2 Флуктуационный тест Луриа-Дельбрюка.

2.3 Определение параметров роста периодической культуры и динамики возникновения морфологических вариантов

2.4 Определение выживаемости клеток в краткосрочных экспериментах

2.4.1 Выживаемость клеток при 40°С

2.4.2 Исследование влияния химических инсектицидов

2.4.3 Обработка клеток УФ-лучам и.

2.5 Анализ диагностических признаков R-форм

2.6 Исследование капсулы.

2.7 Подвижность и хемотаксис.

2.7.1 Приготовление вставок

2.8 Метод получения спонтанных мутантов, устойчивых к антибиотикам

2.9 Совместное культивирование штаммов.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Исследование природы диссоциации у В. thuringiensis с помощью флуктуационного теста и анализа роста периодических культур.

3.1.1 Особенности встречаемости R-вариантов в тесте Луриа-Дельбрюка у штаммов 49 и

3.1.2 Особенности появления R-форм в периодических культурах при оптимальных условиях культивирования

3.1.3 Частота возникновения R-форм в оптимальных условиях

3.2 Влияние факторов среды на рост и динамику возникновения R-вариантов.

3.2.1 Характер размножения и встречаемости R-вариантов в условиях культивирования при повышенном значении рН среды.

3.2.2 Характер размножения и встречаемости R-вариантов в условиях культивирования при повышенной температуре

3.2.3 Действие УФ-лучей на возникновение R-вариантов

3.3 Скорость роста R-вариантов при оптимальной (28°С) и повышенной (40°С) температурах культивирования

3.4 Сравнительный анализ устойчивости к повышенной температуре клеток исходных S и R-вариантов.

3.5 Выживаемость R-форм под воздействием УФ-лучей.

3.6 Влияние химических инсектицидов на выживаемость и изменчивость S и R-вариантов

3.7 Сравнительный анализ R и S-форм по диагностически значимым признакам

3.7.1 Физиолого-биохимические свойства S и R-вариантов

3.7.2 Отношение S и R-вариантов к антибиотикам пеницил-линового ряда.

3.7.3 Споро-кристаллообразование у R-вариантов, возникших спонтанно и под действием факторов среды

3.8 Анализ свойств, предшествующих споруляции.

3.8.1 Исследование подвижности и хемотаксических реакций S и R-вариантов.

3.8.2 Исследование способности к обмену генетической информацией между S и R-вариантами.

3.9 Исследование обратного R—перехода.

4 ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-генетический анализ диссоциативной изменчивости у Bacillus Thuringiensis"

Актуальность работы. Одним из источников естественной изменчивости энтомопатогенного вида Bacillus thuringiensis (ВТ) является так называемая S-R диссоциация. В результате такой изменчивости в исходно кло-новых спорообразующих культурах бацилл возникают с частотой, существенно превышающей частоты спонтанных мутаций, аспорогенные или олигоспорогенные морфологические варианты. Значимость этого процесса у Bacillus thuringiensis заключается в том, что у диссоциантов скоординированно со спорообразованием нарушается процесс формирования кристаллов (5-эндотоксина, являющегося основным фактором вирулентности для насекомых-хозяев данного вида бацилл [116, 138].

Исследования последних лет с использованием разнообразных микроорганизмов, у которых наблюдается сходная изменчивость, предполагают, что возникновение подобной вариабельности имеет адаптивное значение и приводит к появлению форм, наиболее приспособленных к условиям окружающей среды [34, 76]. Для вида ВТ этот вопрос остается практически не разработанным. В основном, внимание исследователей уделяется кри-сталлообразующим формам, используемым в производстве энтомопатогенных биопрепаратов. Аспорогенным, акристаллическим вариантам, а также конкретно процессу диссоциации у ВТ посвящены немногочисленные работы, в которых описано явление расщепления в лабораторных культурах и исследованы некоторые свойства единичных диссоциантов в сравнении с исходными формами. Сведения, касающиеся причин, механизмов и биологического значения диссоциативной изменчивости вида ВТ в литературе не найдены. Однако данные вопросы в последнее время вновь приобретают особую актуальность в связи с обнаружением существования аспо-рогенных вариантов ВТ в природных биоценозах [66, 177], возможности развития устойчивости у насекомых-вредителей к действию штаммов ВТ [190] и признанием ВТ как единого геновида с Bacillus antracis [141].

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение природы процесса диссоциативного расщепления клоновых культур ВТ и его эколого-генетической роли.

В рамках поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Исследовать природу и закономерности процесса расщепления с помощью флуктуационного теста и анализа роста периодических культур у двух штаммов ВТ, принадлежащих к разным подвидам, в оптимальных условиях культивирования.

2. Оценить влияние условий среды (температура, рН, УФ-лучи) и генотипа штаммов на процесс расщепления клоновых культур.

3. Определить значимость диссоциативного процесса, путем сравнительного анализа морфологических вариантов по двум комплексам признаков, одни из которых используются в диагностическом разграничении подвидов ВТ, а другие - обеспечивают большую адаптивность клеток микроорганизмов к меняющимся условиям среды.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. S-R диссоциация у Bacillus thuringiensis является проявлением мутагенеза стационарной фазы, существование которого показано для ряда микроорганизмов, в частности, Bacillus subtilis.

2. Процесс контролируется генотипом штамма и является реакцией на стрессовые условия среды: увеличение плотности популяции, накопление в среде продуктов обмена, изменение рН среды, повышение температуры культивирования, действие УФ-лучей.

3. Диссоциация у ВТ увеличивает адаптивные возможности изогенных культур, генерируя разнообразные субклоны, отличающиеся от исходного типа главным образом по признакам, которые дают возможность клеткам в культуре адаптироваться к условиям существования: подвижности хемотаксису, компетентности и споруляции.

4. Наличие S и R морфологических вариантов в популяциях увеличивает эффективность обмена генетической информацией и формирования стабильных рекомбинантов между штаммами разных подвидов ВТ.

Научная новизна работы.

Впервые исследован характер и частота диссоциативного перехода у двух штаммов, принадлежащих к разным подвидам ВТ с помощью флук-туационного теста Луриа-Дельбрюка. Показано, что частота данного процесса определяется генотипом штамма. Диссоциативные R-варианты отсутствуют в культурах при оптимальных условиях, а возникают в результате генетических событий в стационарной фазе роста в ответ на изменения условий среды.

Экспериментально установлено, что факторы среды (температура, рН среды, УФ-лучи) увеличивают частоту возникновения разнообразных дис-социантов, у которых в основном изменены признаки, не являющиеся значимыми диагностически, но имеющими важную роль в обеспечении выживаемости клеток в стрессовых условиях.

Впервые исследованы хемотаксические реакции на штаммах двух подвидов ВТ. Обнаружены качественные изменения в хемоответах клеток при S->R переходе.

Показана значимость наличия альтернативных форм диссоциантов (S и R)) в увеличении эффективности рекомбинации у ВТ.

Практическая значимость. Установленный нами факт увеличения частоты диссоциативных форм с нарушенным споро-кристаллообразованием при повышении температуры, изменении рН среды необходимо учитывать в процессе производства биологических инсектицидов на основе ВТ.

Обнаруженные закономерности диссоциативного процесса важны для понимания взаимоотношений вида ВТ и насекомых-хозяев в экологической системе "паразит-хозяин-внешняя среда" и позволят более эффективно использовать бактерийные препараты для защиты растений.

В практике защиты растений необходимо учитывать, что совместное использование биологических инсектицидов на основе ВТ с химическими инсектицидами "Децис", "Кинмикс", "Арриво" и "Карбофос" может привести к снижению энтомоцидного эффекта бакпрепаратов из-за токсичного действия химикатов на клетки бацилл, которое было выявлено нами.

Результаты по эффективности обмена генетическими маркерами между спорообразующими и аспорогенными формами могут иметь значение для дальнейших исследований горизонтального переноса генетической информации у бацилл, а коллекция вариантов с нарушенным споро- и кристаллообразованием, полученная от двух штаммов, принадлежащих к разным подвидам ВТ, может быть использована для изучения молекулярных механизмов их возникновения, генетического контроля процесса спорообразования и мутагенеза стационарной фазы.

Апробация работы. Результаты работы были представлены:

- на региональной конференции: "Биология-наука XXI века" (Пущино, 2002).

- на Всероссийских конференциях: "Экология Байкала и Прибайкалья" (Иркутск, 1999, 2000, 2001); "Оценка современного состояния микробиологических исследований в Восточно-Сибирском регионе" (Иркутск, 2002).

- на международных конференциях: "Студент и научно-технический прогресс" (Новосибирск, 1996); "Проблемы экологии. Чтения памяти профессора М.М. Кожова" (Иркутск, 2000); "Почва как связующее звено функционирования природных и антропогенно-преобразованных экосистем" (Иркутск, 2001); "Экология Южной Сибири" (Красноярск, 2001).

Основные положения диссертации представлены в статьях и тезисах. По материалам диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из Введения, обзора литературы, экспериментальной части, Обсуждения и выводов. Результаты работы проиллюстрированы 19 таблицами и 19 рисунками, имеется Приложение. Список литературы состоит из 214 наименований (в том числе 107 на иностранных языках).

Заключение Диссертация по теме "Экология", Секерина, Ольга Александровна

ВЫВОДЫ

1. Процесс расщепления на морфологические варианты в клоновых культурах двух штаммов Б Г является результатом мутагенеза "стационарной фазы" как реакции клеток на стрессовые условия среды: плотность популяции, повышение температуры, изменения рН, влияние УФ-лучей.

2. Уровень диссоциативной изменчивости зависит от генотипа штамма и условий среды. Частота возникновения диссоциативных форм в оптимальных условиях у штамма 2002 subsp. thuringiensis составляет 0,87,1 х Ю-3 на клетку на генерацию, а для штамма 49 subsp. dendrolimus -1,2-3,4х10~4. Факторы среды увеличивают долю диссоциантов в культурах обоих штаммов в стационарной фазе роста.

3. При возникновении морфологических вариантов не происходит изменения диагностически значимых признаков за исключением образования спор и кристаллов <5-эндотоксина. У всех диссоциантов однозначно нарушен в разной степени процесс споро- и кристаллообразования.

4. Морфологические варианты отличаются между собой и от исходной формы по признакам, имеющим адаптивное значение. У них может быть изменена устойчивость к физическим и химическим факторам внешней среды, метаболическая активность и реакция ответа на хемоэффекторы.

5. Процесс диссоциации способствует обмену генетической информацией и образованию стабильных рекомбинантов между морфологическими вариантами, принадлежащими к разным подвидам ВТ.

6. Диссоцианты, с нарушенным споро- и кристаллообразованием, различаются по способности к реверсии в исходную форму. Они либо теряют полностью способность к возврату, либо ревертируют с частотой, характерной для прямого перехода. При обратном переходе варианты могут полностью восстанавливать свойства дикого типа, включая споро- и кристаллообразование.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Секерина, Ольга Александровна, Иркутск

1. Абросимова Л.И., Лескова А.Я., Бабаева П.В., Шевцов В.В. // Микробиология. 1985. Т. 54. т. С. 770-773.

2. Азизбекян P.P., Белых Р.А., Нетыкса Е.М. и др. Сравнительная характеристика штаммов Bacillus thuringiensis, образующих R и S форы колоний // Генетический контроль мутационного процесса у микроорганизмов. Тез. Докл. Вильнюс. 1976. С.21.

3. Азизбекян P.P. Энтомопатогенные бактерии Bacillus thuringiensis и их фаги: генетическая и физиологическая характеристики: Автореф. Дис. .д-ра биол. наук, М., 1980.

4. Азизбекян P.P. Микробные инсектициды: достижения и перспективы // Генетика промышленных микроорганизмов и биотехнология. М.: Наука. 1990. С. 172-187.

5. Азизбекян P.P., Белых Р.А. Нестабильность некоторых ауксотрофных маркеров у Bacillus thuringiensis // Генетика. 1981. Т.17. №11. С. 627631.

6. Азизбекян P.P., Нетыкса Е.М. Особенности развития фагов в спорооб-разующих и аспорогенных штаммах Bacillus thuringiensis // Генетика. 1978. Т. 14. В.4. С. 666-672.

7. Азизбекян К.Р., Кузин А.И., Добржанская Е.О. // Биотехнология. 1996. №6. С.9-13.

8. Андросов Г.К., Анросова Л.Н., Соболева Л.А. Экология энтомопато-генных микроорганизмов таежной зоны Европейского Северо-Востока // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск. 1981. С. 139-152.

9. Ануфриев Л.Ф. К вопросу о диссоциации в культуре Bacillus thuringiensis var. dendrolimus Tal. в жидких и твердых питательных средах // Биология микроорганизмов и их использование в народномхозяйстве. Иркутск, 1979. С. 118-121.

10. Ануфриев Л.Ф. Сохранение свойств спорообразующих бактерий // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1981. С.41-44.

11. Ануфриев Л.Ф. Состав и свойства колоний бацилл группы Thuringiensis var.Dendrolimus // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск. 1981. С.32-41.

12. Ануфриев Л.Ф., Жданов И.Н., Шахметова Т.А. Изучение бацилл группы Thuringiensis при культивировании на твердой питательной среде // Использование микроорганизмов и сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1980. С.25-30.

13. Африкян Э. К., Чил-Акопян Л.А. Новая разновидность спорообразующих бактерий-продуцентов энтомоцидных токсинов /ДАН Арм.ССР. 1968. Т.47. В.4. С.227-230.

14. Ахмедов P.M. Результаты применения препарата дипел против колорадского жука в Азербайджане // Энтомапотогенные бактерии и грибы в защите растений. Иркутск, 1985. С. 63-71.

15. Барайщук Г.В. К вопросу о вирулентности диссоциативных вариантов группы thuringiensis // Биология микроорганизмов и их использование в народном хозяйстве. Иркутск, 1979. С. 105-109.

16. Барайщук Г.В. К характеристике диссоциативного процесса в штаммах бацилл группы Thuringiensis // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1981. С. 26-34.

17. Барайщук Г.В. Естественная изменчивость энтомопатогенных бактерий Bacillus thuringiensis продуцентов энтомоцидных токсинов // Микроорганизмы в защите растений. Иркутск, 1983. С. 42-57.

18. Батурина Л.И. О резистентности насекомых // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1978. С. 67-79.

19. Бациллы. Генетика и биотехнология: Пер. с англ. /Под ред. К. Харву-да. М.: Мир. 1992. 531с., ил.

20. Белых Р.А., Сирнова Г.А., Степанова Т.В., Азизбекян P.P. Антибио-тикочувствительность штаммов Bacillus thuringiensis subsp.galleriae // Микробиология. 1977. T.51. №3. C.490-496.

21. Блохина Т.П., Сахарова З.В., Игнатенко Ю.Н., Работнова И.Л., рау-тенштейн Я.И. Изменчивость Bacillus thuringiensis при разных условиях выращивания // Микробиология. Т 53. В.З. 1984. С.427-431.

22. Блохина Т.П., Кострикина Н.А., Сахарова З.В., Бирюзова В.И. Сравнительное электронно-микросткопическое исследование клеток Bacillus thuringiensis, выращенных в хемостате // Микробиология.

23. Т.61. В 4. 1992. С. 672-677.

24. Богданова T.JL, Смирнова Т.А., Миненкова И.Б., Азизбекян P.P. Генетические свойства безжгутикового мутанта Bacillus thuringiensis // Молекул, генет. микробиол. и вирусол. 1991. С.29-31.

25. Браун В. Генетика бактерий. М., 1968.

26. Бурцева Л.И. Биологические особенности бактерий Bacillusthuringiensis 1970 г. Диссертацияканд. биол. наук. Новосибирск.115 с.

27. Бурцева Л.И. Селекция промышленных штаммов кристаллообразцю-щих бактерий для производства энтомопатогенных пропаратов // Biotecnology&Bio Е. №5. 1991 С. 4-5.

28. Вейзер Я. Микробиологические методы борьбы с вредными насекомыми (Болезни насекомых) М. Колос. 1972. 640 с.

29. Бельков В.В. Новые представления о молекулярных механизмах эволюции: стресс повышает генетическое разнообразие // Молекулярная биология. 2002. т. В. 36. С. 209-216.

30. Вячина О.Ф., Завезенова Т.В. Энтомопатогенные бактерии, циркулирующие в биоценозах камчатки // Материалы Российской научно-практической конференции (11-13 марта 2002г.) Иркутск,. 2002. С.13-18.

31. Головлев Е. Л. Метаболические механизмы экологической тактики микроорганизмов // Биоконверсия 88. Теоретические основы микробной конверсии. Тез. докл. Рига, 1988. С. 39.

32. Головлев Е.Л. Метастабильность фенотипа у бактерий // Микробиология, 1998. Т. 67. т. С. 149-155.

33. Головлев Е.Л. О старых проблемах новой систематики бактерий // Микробиология. 1998. Т. 67. №2. С. 281-286.

34. Григорьева Т.М., Азизбекян P.P. Изучение одновременной реверсиипо генам try, dra и drm у Bacillus thuringiensis // Генетика. 1983. Т. XIX т. С. 406-415.

35. Гриценко И.Н., Соколова М.Я., Черепанова Н.Е., Юдина Е.В. Частота выделения из природы Bacillus thuringiensis var. galleriae В кн: Генетика и Селекция микроорганизмов. Новосибирск, 1975. 25. С. 106-109.

36. Громов Б.В. Строение бактерий: учебное пособие.- J1: Изд-во ЛГУ, 1985. 192 с.

37. Гукасян А.В., Машанов А.И., Гукасян В.М. Изменчивость спороносных форм бактерий В кн.: Биология и культивирование микроорганизмов. Красноярск. 1969. С.83-87.

38. Дедондер Р., Лекадет М., Рапопорт Г. и др. Контроль выражения генов в процессе спорообразования у Bacillus thuringiensis // Молекулярные основы генетических процессов. Москва, Наука. 1981. С. 338-349.

39. Добжанская Е.О., Чирков С.Н., Блохина Т.П. Характеристика нового штамма Bacillus thuringiensis, продуцента эндотоксина против жесткокрылых // Микробиология. 2002. Т. 69. №6. С. 796-800.

40. Дорошенко Е.В., Лойко Н.Г., Ильинская О.Н., Колпаков А.И., Горнова И.Б., Климанова Е.В., Эль-Регистан Г.И. Характеристика диссоциантов Bacillus cereus // Микробиология. 2001. Т. 70. №6. С. 811-819.

41. Дорошенко Е.В., Лойко Н.Г., Ильинская О.Н. и др. Характеристика диссоциантов Bacillus cereus // Микробиология. 2002. Т.70. №6. С.811-819.

42. Жданов И.Н. Об инфекционном процессе у сибирского шелкопряда // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1980. С.77-82.

43. Ждан-Пушкина С.М. Основы роста культур микроорганизмов. Учеб. пособие / Под ред. В.П. Гончаровой. JL: Изд-во Лен. унт-та; 1983. 188 с.

44. Иванов Г.М. //Никроорганизмы в защите растений. 1981. Новосибирск. С.53-72.

45. Ивинскене В.Л. /^нтомопатогенные бактерии и их роль в защите растений. 1987. Новосибирск. С.57-75.

46. Искакова Н.П. Новый вариант бактерий типа Bacillus cereus Frankland патогенный для насекомых // Доклады Всесоюзной академии с-х наук им. Ленина. 1953. В.З. С. 26-27.

47. Калмыкова Г.В., Бурцева Л.И. // Регуляция численности беспозвоночных и фитопатогенов. Новосибирск, 1997. С. 52-59.

48. Каменек Л.К. // Микроорганизмы в защите растений. Новосибирск, 1981. С. 72-77.

49. Кандыбин Н.В. Бактериальные средства борьбы с грызунами и вредными насекомыми.- М.: Агропромиздат, 1989. 175с.

50. Карабекян B.C., Чахмакчьян А.Г., Оганесян М.Г. Трансмессивные генетические факторы у Bacillus thuringiensis. Сообщ.1. о причинах некоторых биологических свойств у данных штаммов Bacillus thuringiensis subsp.galleriae // Генетика. 1982. №7. С.1062-1066.

51. Кашкова Г.Г. Культуральная характеристика S и R диссоциантов штаммов бацилл группы Thuringiensis // Микроорганизмы в защите растений от вредных насекомых. Иркутск, 1978. С. 13-17.

52. Кашкова Г.Г. Морфологические изменения в культуре Bacillus thuringiensis var. dendrolimus Tal, выращенной на поверхности МПА // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1979. 42-47.

53. Коротлев А.И., Бабичев С.А. Медицинская иммунология и вирусология // Учебник. СПб: "Специальная литература", 1998. 592 с.

54. Красильников А.П., Романовская Т.Р. Микробиологический словарьсправочник /Минск. "Арсар", 1999. 400с.

55. Краткий определитель бактерий Берги / ред. Дж. Хонлт.-М.:Мир, 1980. 495с.

56. Кулагин B.C., Лебедева Н.П., Ворожцова Т.М., Вишникина М.П., Ба-райщук Г.В., Котелевская В.А. Штамм бактерий Bacillus thuringiensis var. dendrolimus продуцент дендробациллина // Авт. св. СССР, кл. AOIN 63/00 Заявл. 26.09.84.

57. Кулагин B.C., Лебедева Н.П. О некоторых особенностях культур биотипа dendrolimus, выделенных и почвы // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1981. С.66-74.

58. Кулагин B.C., Лебедева Н.П., Гиль Т.А. Биологические свойства Bacillus thuringiensis var. Dendrolimus после пребывания на различных растениях // Биология микроорганизмов и их использование в народном хозяйстве . Иркутск, 1980. С.70-74.

59. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований /М.: Медицина. 1978. 319 с.

60. Лескова А.Я., Рыбина Л.М. Патогенез насекомых, вызываемый кри-сталлогенными бактериями как фактор депресии их численности // Микроорганизмы в защите растений. Иркутск, 1983. С.22-31.

61. Лескова А.Я., Рыбина Л.М., Строева И.А. Идентификация культур Bacillus thuringiensis и оценка их патогенных свойств / методические указания. Л. 1984. 21 с.

62. Лескова А.Я., Рыбина Л.М. // Энтомопатоген. бактерии и их роль в защите растений. Новосибирск, 1987. С.31-42.

63. Лысенко Е.В., Демина Н.С. Механизмы защиты микроорганизмов от действия ультрафиолетовых лучей //Изв. АН СССР. Сер. биол. 1981. №6. С. 845-853.

64. Лыоин Б. Гены / М.: Мир. 1987. 544с

65. Машанов А.И. Морфолого-физиологические изменения энтомопато-генных бактерий под влиянием облучения // Биология и культивирование микроорганизмов. Красноярск, 1969. С. 95-103.

66. Милько Е.С., Егоров Н.С., Королева Г.И. Генетические основы диссоциативных переходов Rhodococcus rubropertinctus // Вестн. МГУ. Сер16. Биология. 1989. С.40-44.

67. Милько Е.С., Егоров Н.С. Гетерогенность популяций бактерий и процесс диссоциации. М., Изд-во МГУ. 1991. 144с.

68. Нетыкса Е.М., Смирнова Т.А. и др. Бактериоционо-подобный фактор Bacillus thuringiensis // Микробиология. 1979. Т.48.С. 716-722.

69. Олескин А.В., Ботвинко И.В., Цавкелова Е.А. Колониальная организация и межклеточная коммуникация у микроорганизмов. // Http://1. cellimm.bio.msu.ru/edocs/oleskin-3.html. 1999.

70. Осадчая А.И., Подгорский B.C., Прокопченко С.Ф., Михновская Н.В., и др. Рост и развитие продуцента бактокулицида в зависимости от рН среды // Микробиол. Журнал. 1999. Т.52. №1. С.24-27.

71. Плохинский Н.А. Биометрия М. 1970.

72. Погосбекова М.Р., Азизбекян P.P. Трансдукция у Bacillus thuringiensis // Генетика. 1981. T.17. №4. C.609-613.

73. Половенко Г.П. Влияние метафоса на выживаемость в почве кристал-лообразующих бактерий группы Bacillus thuringiensis / Интегриров. защита растений от вредителей. Новосибирск, 1987. С. 149-155.

74. Полтнев В.И., Рябкова Р.А. Явление диссоциации некоторых споровых энтомопатогенных бактерий. В кн.: Материалы планово-методического совещания по защите зоны Урала и Сибири. Новосибирск, 1961. С.164-165.

75. Промышленная микробиология: Учеб. пособие для вузов по спец. "Микробиология" и "Биотехнология" / Под ред. Н.С. Егорова. М.: Высш. шк. 1989. С. 602-607.

76. Рокитский П.Ф. Биологическая статистика / Из. 3-е, исп. Минск, 1973. 320 с.

77. Ромашева Л.Ф., Балыкин А.В., Видомский Э.В. Крылова В.Н. Микробиологические методы борьбы с аргасовыми клещами // Фрунзе: Илим, 1976. 98 с.

78. Рыбакова Г.М. О некоторых результатах изучения бактериологического метода борьбы с сибирским шелкопрядом / / Биология и культивирование микроорганизмов. Красноярск, 1969. С. 214-220.

79. Смирнов Г.В. Роль плазмид и мигрирующих генетических элементов в эволюции бактерий // Успехи микробиол. 1984. Т. 19. С. 35-74.

80. Смирнова Т.А., Миненкова И.Б., Нетыкса Е.М., Азизбекян P.P. Электронно-микроскопическое изучение клеток у вариантов Bacillus thuringiensis var. galleriae, образующих колонии с измененной морфологией // Микробиология. 1977. Т.46. В.6. С.1050-1056.

81. Смирнова Т.А., Богданова Т.Л., Галтперин М.Ю., Григорьева Т.М., Азизбекян P.P. Гомологичная и гетерологичная трансцепция Сгу+плазмид у Bacillus thuringiensis // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1987. №10. С.23-27.

82. Смирнова Т.А., Поглазова М.Н., Николаенко М.Н., Азизбекян P.P. Адгезивные свойства Bacillus thuringiensis // Биотехнология. 2000. №3. С.16-26.

83. Талалаев Е.В. Септицемия гусениц сибирского шелкопряда // Микробиология. 1956. Т.26. В.1. С.99-102.

84. Талалаев Е.В. К изучению диссоциации в культурах энтомопатоген-ных бацилл группы thuringiensis В кн. Всесоюзная научная конференция. Микробиологические методы защиты растений (Кишинев, 4-7 октября 1976): Тез. Докл.- Кишинев, 1976. С.83-85.

85. Талалаев Е.В., Гутман О.И. О жизнеспособности спор Bacillus thuringiensis var. Dendrolimus Talalaev при продолжительном хранении // Использование микроорганизмов для борьбы с вредными насекомыми в сельском и лесном хозяйстве. Иркутск, 1981. С. 3-8.

86. Талалаева Г.Б. Природные источники кристаллообразующих энтомо-патогенных бактерий //В кн. VI съезда Всесоюзного микробиологического общества. Микроорганизмы и продуктивность сельского хозяйства (25-29 марта 1980 г): Тез. Докл. Рига, 1980. С.78.

87. Теленга Н.А., Сикура А.И., Сметник А.И. // Защита растений, Киев, 1967. В.4. С. 3-23.

88. Тиманов В.Д., Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Биологические и генетические характеристики бактерий рода Shigilla. М., 1980.

89. Троицкая С.Н., Мусаева Т.И. Чувствительность к антибиотикам культур энтомопатогенных кристаллообразующих бактерий // Узб. Биол.ж. 1986. Ш С.42 -49.

90. Чемерилова В.И., Завезенова Т.В., Передереева Е.Б., Янголь Н.Г. Фенотипический и мутационный анализ антибиотикоустойчивости у Bacillus thuringiensis // Энтомопатогенные микроорганизмы и их использование в народном хозяйстве. Иркутск, 1992. С.30-38.

91. Шамшина Т.Н., Константинова Г.Е., Кузнецова Н.И., Азизбекян P.P. Внеклеточный фактор Bacillus thuringiensis, подавляющий спорообразование // Биотехнология. 1994. №5. С. 11-13.

92. Шапиро Д. А. Бактерии как многоклеточные организмы //В мире науки. 1988. №6. С. 46-54.

93. Шлегель Г. Общая микробиология. М.: Мир. 1971. С. 181-182.

94. Штерншис М.В. Повышение эффективности микробиологической борьбы с вредными насекомыми. Новосибирск, 1995. 195с.

95. Adams I.C., Hartman P.A., Longevity of Bacillus thuringiensis Berliner in the rumen // J. Invert. Patol.,1965. V. N2. P. 245-247.

96. Aptosoglou S.G., Sivropoulou S.G., Koliais S.J. // Microbiologica. 1997. V. 20. P. 69-76.

97. Arkwright I.A., Yoyle A.N. The relation of the "smoth" and "rough" forms of intestinod bacteria to the "O" and "H" forms of Well and Felix //J. Exp. Path. 1924-1925. V.5.

98. Baldus J. M., Green B. D., Youngman P., Moran C. P. Phosphorylation of Bacillus subtilis transcription factor Spo OA stimulates transcription from the spo IIIG promotor by enhancing bindind to weak OA boxes // J. Bacterid. 1994. 177. P. 296-306.

99. Barjac H.De., Bonnefoi A. Essey de classification biochimique et serologique de 24 souches de Bacillus du type B. thuringiensis // Entomophaga. 1962. T.7. №1. P. 5-31.

100. Barjac H. De, Frachon E. Classification of Bacillus thuringiensis strain // Entomophaga. 1990. V.35. №2. P. 233-240.

101. Beegle, C.C., Yamamoto T. History of Bacillus thuringiensis Berliner research and development. Can Entomol. 1992. 124 pp. 587-616.

102. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmotteraupe. Z. ges. Getredew., 1911. 3. P.63.

103. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmotteraupe (Ephestia kuehniella Zell.) und ihren Erreger, Bacillus thuringiensis. Sp. Z. angew. Ent., 1915. 2. P. 29.

104. Bonnefoi A., Barjac H.De. Classification des souches du groupe Вас. Thuringiensis par la determination de lantigene flagellaire // Entomophaga. 1963. V.8. P.223.

105. Carlton, B.C., Gonzalez J.M. Plasmids and delta-endotoxin productionin different subspecies of Bacillus thuringiensis // Molecular biology of microbial, differentiation. American Society for Microbiology. Washington. D.C. P. 246-252.

106. Crickmore N., Zeigler D.R., Feitelson J., Schnepf E., Van Rye J., Lereclus

107. D., Baum J., Dean D.H. Revision of the Nomenclature for the Bacillus thuringiensis Pesticidal Crystal Proteins // Microbiol and Molec. Biology Reviews. 1998. V.62. P. 807-813.

108. Denholf P.S., Jansons M., Peferoen M., Degheele D., Van Rie J. // Appl. Environ. Microbiol. 1993. V. 59. P. 1828-1837.

109. De Lucca A.J. // Can. J. Microbiol. 1984. V. 30. P. 1100-1104.

110. Demerec M. Induced mutations and possible mechanisms of the transmission of heredity in Escherichia coli // Proc.nat.Acad. Sci. USA. 1946.32. №. P. 36-46.

111. Dubos F. One century of bacterial polymorphism // Role Cult. Collect. Era Mol. Biol. Washington, 1976. P. 35-42.

112. Dulmage H.D., Aizawa K. // Microbiol, and Viral Pesticides (ed. Kurstak

113. E.D.) New-York. 1982. P. 209-239.

114. Dunny G., Leonard B.A. Cell-Cell communication in gram-positive bacteria //Ann.Rev. Microbiol. 1997. 51. P. 527-564.

115. Faloci M.M., Aarcas J.A.,and Yantorno O.M. Influence of various ions in sporulation and the formation of 5-endotoxin in Bacillus thuringiensis // Rev. Argent Microbiol., J. 1986. 18 (2) h. P. 53-62.

116. Fast P.G., Morrison // J. Invert. Pathol. 1972. V. 20. P. 208-211.

117. Feitelson, J.S., Payne j., Kim L. Bacillus thuringiensis insects and beyond // Bio/Technology. 1992. 10. P. 271-275.

118. Feng Q., Becktel W.S. // Biochemistry, 1994. V 33. P. 8521-8526.

119. Ferre J., Escriche В., Bel G., Van Rie J. // FEBS Microbiol. Letters. 1995s. V. 132. P. 1-7.

120. Foster P.L. Mechanisms of stationary phase mutation: a decade of adaptive mutation //Annu. Rev. Genet. 1999.V. 33. №1. P. 57-88.

121. Galitski Т., Roth Y.R. A search for a general phenomenon of adaptive mutability // Genetics. 1996. V. 143. Ж P. 645-659.

122. Gonzalez J.M., Jr. Dulma G.E., Carlton B.C. Correlation between specific plasmids and 5-endotoxin production in Bacillus thuringiensis. // Plasmid, 1981. 5. P.351-365.

123. Gonzalez J.M., Carlton B.C. A large transmission plasmid is required for crystal toxin production in Bacillus thuringiensis variety israelensis // Plasmid. 1984. 11. C. 28-38.

124. Gould F., Martinez-Ramirez A., Anderson A., Ferre J., Silva F.J., Moar W.J. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. V. 89. P. 7986-7988.

125. Hanney C.L. The dissociation of Bacillus thuringiensis // Journal of Microbiology. Vol. 13. 1967. P. 1566-1568.

126. Heimpel A.M., Angus T.A., The taxonomy of insect pathogens related to Bacillus cereus (Frankland and Frankland) // Can. J. Microbiol. 1958. 4. P. 531-541.

127. Heimpel A.M. A taxonomic key proposed for the species of the crystalliferous bacteria //J. Invert. Patol., 1967. v. 9. №3. P.364-375.

128. Hofmann С., Vanderbruggen H., Hofte H., van Rie J., Jansens S., van Mellaert H. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. V. 85. P. 7844-7848.

129. Hofmann C., Luthy P., Hufter R., Pliska V. // Eur. J. Biochem. 1988. V. 173. P. 85-91.

130. Hofte H., Whiteley H.R. Insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringiensis // Microbiol.Rev. 1989. 53. P. 242-255.

131. Iizuka Т., Yamamoto T. // J. Fac. Agr. Hokaido Univ. 1984. V.62. P. 98-114.

132. Jarrett, P., Stephenson M. Plasmid transfer between strains of Bacillus thuringiensis infecting Galleria mellonella and Spodoptera littoralis // Appl. Environ. Microbiol. 1990. 56. P.1608-1614.

133. JEBC catalog. Unite des Bacteries Entomopathogenes. Institut Pasteur. 1994.

134. Johnson D.E., Niezgodski D.M., Twaddle G.M. Parasporal crystals produced by oligosorogenous mutants of Bacillus thuringiensis (Spo-Cry+) // Can J. Microbiol. April 1. 1980. 26 (4). P. 486-491. Abstract.,

135. Johnson S.E. // J. Invert. Pathol. 1981. V. 38. P. 94-101.

136. Joing K-B., Cote J.C. A phylogenetic analysis of Bacillus thuringiensis serovars by RFLP based ribotyping // Journal of Applied Microbiology. 2001. V. 91. P.279-289.

137. Joung K-B., Lemaire S.P., Cote J.-C. Genetic diversity of Bacillus thuringiensis serovars revealed by RFLP using ravdom DNA probes // Journal Basic Microbiol. 2001. 41. P. 85-95.

138. Kalmikova G.V., Burtseva L.I. // Eur. J. Plant Pathology. XIII Int. Plant Protectien Congress. The Hague. The Netherlands. 1995. N 584.

139. Krieg A., Thuricin a bacteriocin produced by Bacillus thuringiensis //J. Invert. Pathol., 1970. vol. 13, №2. P. 291.

140. Landen R., Heierson A., Boman H.G. A phage for generalized transduction in Bacillus thuringiensis and mapping of four genes for antibiotic resistance 11 J. gen. Microbiol. 1981. 123. P.49-59.

141. Le Binh Trah, V. Vachon, J-L Schwartz And R. Laprade. Differential effects of pH on the Pore-Forming properties of Bacillus thuringiensis Insecticidal Crystal Toxins // Appl. and Environmental Microbiology. Oct. 2001. P. 4488-4494.

142. Lecadet M.M., Dedonder R. //Bull.Soc.Chim., 1966. V.48. P.631-660.

143. Lecadet M.M., Blondel M.O., Riber J. Generalized transduction in Bacillus thuringiensis var. Berliner 1715, using bacteriophage CP54Ber //J. gen. Microbiol. 1980. 121 P.209-212.

144. Leonard C., Chen Y. and Mahillon J. Diversity and differential distribution of IS231, IS232 and IS240 among Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis // Microbiology. 1997. 143. P. 2537-2547.

145. Lereclus D., Menou G., Lecadet M.M. Isolation of a DNA sequence to several plasmid from the Streptococcus faecalis plasmid pAMbl // Ibid. 1983. V. 191. P.307-313.

146. Lereclus D., Menou G., Lecadet M.M Isolation of DNA sequence related to several plasmids from the Streptococcus faecalis plasmid pAMbl // Ibid. 1983.V.191. P.307-313.

147. Lereclus S.D. Genotique et biologie moleculare de Bacillus thuringiensis // Unite de Biochime microbienne, Institut Pasteur. 1988. 86. P. 337-371.

148. Lereclus, D., H. Agaisse, M. Gominet, and J. Chaufaux. Overproduction of encapsulated insecticidal crystal proteins in a Bacillus thuringiensis spOAmutant. Bio/Technology. 1995. 13. P. 67-71.

149. Lovgren, A., Zhang M.-Y., Engstrom A., Dalhammar G., Landen R. Molecular characterization of immune inhibitor A, a secreted virulence protease from Bacillus thuringiensis. // Mol. Microbiol. 1990. 4. P. 21372146.

150. Luria, S. E., and M.Delbrcjck, Mutations of bacteria from virus sensitivity to virus resistance // Genetics. 1943. 2. 8. P. 491-511.

151. Lynch M., Baumann P. // J. Invertebr. Pathol. 1985. V. 46. P. 47-57.

152. Lysenko 0. // Acta, entomol. bohemosl. 1983. V. 80. P. 473-478.

153. Mc. Gaughey W.H. // Science. 1985. V. 229. P. 193-195.

154. Mahan M.J., Heitrhoff D.M., Sinsheimer R. L., Low D.A. Assesment of bacterial pathogenesis by analysis of gene expression in the host // Ann. Rev. Genet. 2002 34. P. 139-164.

155. Mastrandrea V., Candeli A., Bartolomeo Ade, and Ctnci G. Cellular lysis and dissociative phace of the genus Bacillus // Boll 1st Sieroter Milan, November 20, 1975; 54 (5) : pp. 367-377.

156. Meenakshi K., Sayaraman K. On the formation of crystal proteins during sporulation in Bacillus thuringiensis var. thuringiensis // Microbiol. January 16. 1979. 120 (1). P. 9-14.

157. Newcombe H.B. Delayed phenotypic expression of spontaneous mutations in Escherichia coli // Genetics. 1948. 33.P.447.

158. Norris J. R., The classification of Bacillus thuringiensis //J. appl. Bacteriol. 1964. V. 27. P.41.

159. Ohba M., Aizawa // Syst. Appl. Microbiol. 1986. V. 17. P. 12-20.

160. Ohba M., Aratake G. // J. Applied Bacteriol. 1994. V. 76. P. 203-209.

161. Oppert В., Kramer K.J., Beeman R.W., Jonson D., Mc Gaughey W.H. // J.Biol.Chem. 1997. V. 272. P. 23473-13476.

162. Ordal G.W., Parrer H.M., and Kirdy J.R. Componentation and characterization of chemotaxis mutants of Bacillus subtilis //J. Bacteriol. 1985. 164. P. 802-810.

163. Perlak E.J., Mendelsohn C.L., and Thorne C.B. Converting for sporulation and crystal formation in Bacillus thuringiensis //J. Bacteriol., November 1. 1979. 14012. P. 699-706.

164. Poncet S., Dervyn E., Klier A., Rapoport G. Spo OA represses transcription of the cry toxin genes in Bacillus thuringiensis // Microbiology 1997. 143. P. 2743-2751.

165. Rowinski S. S-R dissociation in Shigella flexneri population. The genetic mechanism of development of routh forms // Arch. Immunol. Ther. Exd. 1967. V. 15. P. 640-651.

166. Rubikas, J., D. Androsiuniene, G. Chestukina, T. Smirnova, O. Kapitonova, and V. Stepanov. 1987. Crystal protein formed by Bacillus subtilis cells. J.Bacteriol. 169. P. 5258-5262.

167. Puszatai M, Fast P., Gringorten L. Kaplan H., Lessard Т., Garey P.R. The mechanism of sunlight-mediated inactivation of Bacillus thuringiensis crystal //J. Biochem., 1991 Jan. 1. 273. P. 273-279.

168. Sachidanandham R., Jayaraman, Kunthala Formation of spontaneousasporogenec varians of Bacillus thuringiensis subsp. galleriae in continious cultures // Applied Microbiology and Bionechnology. 1993. V. 40. №4. P. 504-507.

169. Sampson M.N., Gooday G.W. Involvement of chitinases of Bacillus thuringiensis during pathogenesis in insects // Microbiology. 1998. 144. P.2189-2194.

170. Schnepf E., Cricmorre N., Van Rie J., Lereclus D., Baum J., Feitelson J., Zeigler D.R., Dean D.H. // Microbiol.mol.Biol.Rev., 1998. V.62. P.775-806.

171. Sharif F.A., Alatddinoglu N. G. A rapid and simple method for of the crystal of Bacillus thuringiensis //J. Indastrial Microbiology. 3. 1988. P. 227-229.

172. Smirnoff W.A., Heimpel A.M. A strain of Bacillus thuringiensis Berliner isolated from the larch sawfly Pristiphora erichsonii. //J. Invert. Patol. 1961. v 3, P. 347-351.

173. Smith R.A., Couche G.A. // Appl. Envir. Microbiol., 1991. V. 57. P. 311315.

174. Stabb, E. V., L. M. Jacobson, and J. Handelsman. 1994. Zwittermycin A-producing strains of Bacillus cereus from diverse soils // Appl. Environ. Microbiol. 60. P. 4404-4412.

175. Starzak M., Bajpai A structured model for vegetative growth and sporulation in Bacillus thuringiensis // Appl. Biochem. Biotechnol. November 1. 1990. 28-29. P. 699-718.

176. Summers W.C. From culture as Organism to Organism as Cell: Historical Origins of Bacterial Genetics // Journal of the History of Biology. 1991. V. 24. №. P. 171-190.

177. Sung H.-M., Yasbin R.E. Adaptive, or stationary-phase, mutagenesis, a component of bacterial differentiation in Bacillus subtilis // J.Bacteriol. 2002. V. 184. mo. P. 5641-5653.

178. Tabashnik B.E. Evolution of Resistance to Bacillus thuringiensis // Annu. Rev. Entomol. 1994. V. 39. P. 47-79.

179. Tabashnik B.E., Liu Y.B., Malvar Т., Heckel D.G., Masson L., Ballester V., Granero F., Mensua J. L., Ferre J. // Proc. Natl.Acad.Sci,USA, 1997. V.94. P. 12780-12785.

180. Torn C.B. Transduction in Bacillus thuringiensis // Appl. Environ. Microbiol. 1978. v.38. P. 1109-1115.

181. Toumanoff C., Vago C. L'agent pathogene de la flacherea des vers a soil endemique dans la region des Cevennes; Bacillus cereus var. alesti var.nov. // Paris: C.R. Acad. Sci. 1951. 233. P. 1504.

182. Tran L.B., Vachon V., Schwartz J., Laprade R. Differential effects of pH on the Pore-Forming Properties of Bacillus thuringiensis insecticidal crystal Toxin //Appl and Environ. Microbiology. 2001. P.4488-4494.

183. Tso W., Adler J. Negative chemotaxis in Escherichia coli //J. Bacteriol. 118. P. 560-576.

184. Tojo A., Aizawa K. // Appl. Envir. Microbiol., 1983. V. 45. P.576-580.

185. Ueda K., Ohba M., Aizawa K. // System. Appl.Microbiol., 1991. V. 14. P.291-294.

186. Van Rie J., Mc Gaughey W.H., Johnson D.E., BarnettB.D., Van Mellaert H. // Science. 1990. V. 247. P. 72-74.

187. Vankova I. // Folia Biol. (Prague). 1957. V. 3. P.175-182.

188. Vilas-Bfas L.A., G.F. Vilas-Bfas, H.O. Saridakis, M.V. Lemos, D. Lereclus and O.M. Orantes. Survival and conjugation of Bacillus thuringiensis in a soil microcosm // FEMS Microbiol. Ecol. March 1, 2000; 31(3): 255-259. Abstract.

189. Wirth M.C., Georghivu G.P. // J. Economic. Entomol. 1997. V. 90. P. 1471-1477.

190. Yihu Dong., Andi R. Gusti., Qiong Zgang, Jin-Ling Xu, and Lian-Huizhang Indentification of Quorum-Queching N-Acyl Homocerin Lactonases from Bacillus Species // Appl. Envir. Microbiol., April. 2002. P.1754-1759.

191. Yoon K-H, Kim Y-D, Shim J-C Mutants of Bacillus thuringiensis var.israelensis // Korean J. entomol. 1989. 19 (3). P.237-245.

192. Zhang MY., Lovgren A., Landen R. Adhesion and cytotoxity of Bacillus thuringiensis to cultured Spodoptera and Drosophila cells //J. Invertebr Patol. 1995. Jul. 66 (1). P.46-51. Abstract.