Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение регуляции синтеза фосфатаз у дрожжей Saccharomyces cerevisiae

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Самбук, Елена Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

Г л а в а I. МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПУТЕЙ У ДРОЖЖЕЙ (Обзор литературы)

§1. Введение.

1.1. Организация кластеров у дрожжей.

1.2. Генетический подход к изучению метаболизма у дрожжей

§2. Регуляция утилизации галактозы.

2.1. Генетический контроль утилизации галактозы

2.2. Механизмы регуляции утилизации галактозы

2.3. Влияние катаболитной репрессии на утилизацию галактозы.

§3. Регуляция метаболизма инвертазы.

§4. Регуляция метаболизма аргинина

§5. Постановка задачи.

Г л а в а П. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

§1. Основные обозначения

§2. Основные штаммы и условия их культивирования

2.1. Штаммы.

2.2. Условия культивирования штаммов.

§3. Методы.

3.1. Определение активности кислых фосфатаз

3.2. Определение концентрации фосфата в культуральной среде.

3.3. Качественное определение активности щелочной фосфатазы.

3.4. Получение мутантов с изменённой активностью кислой фосфатазы

3.5. Метод гибридизации.

3.6. Получение ревертантов.

3.7. Тетрадный анализ.

3.8. Анализ случайной выборки аскоспор.

3.9. Получение митотических рекомбинантов

3.10. Статистическая обработка материалов.

Г л а в а Ш. ВЫЯСНЕНИЕ ФУНКЦИЙ ГЕНОВ, КОНТРОЛИРУЮЩИХ СИНТЕЗ РЕПРЕССИБЕЛЬНЫХ КИСЛЫХ ФОСФАТАЗ

§1. Изучение генетического контроля синтеза кислой фосфатазы 3 (кфЗ).

1.1. Идентификация генов, мутации в которых приводят к снижению активности кфЗ.

1.2. Выяснение функций гена АСР5.

1.3. Выяснение функций гена ACPI.

§2. Изучение ревертирования мутаций регуляторных генов

2.1. Ревертирование мутаций гена АСР

2.2. Ревертирование мутаций генов АСР80, ACP8I, АСР82,

АСР83, АСР84, АСР4.

§3. Идентификация генов, контролирующих транспорт фосфата у дрожжей.

§4. Картирование АСР-генов.

§5. Взаимодействие мутаций в гене АСР5 с мутациями конститутивного синтеза в генах АСР4 и АСР

Г л а в а 1У. ШЯБЛЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ ОБЩИХ В РЕГУЛЯЦИИ КИСЛЫХ И РЕПРЕССИБЕЛЪНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗ

§1. Введение.

§2. Выяснение влияния мутаций в АСР-генах на активность репрессибельной щелочной фосфатазы

§3. Выяснение природы мутаций, одновременно блокирующих активность кф1 и кф2 .III

3.1. Разработка метода картирования мутаций в гене PHOI III

3.2. Изучение рекомбинации мутаций, одновременно приводящих к снижению активности кф1 и кф2 .II

§4. Изучение взаимодействия генов AGP5 и PH0I.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение регуляции синтеза фосфатаз у дрожжей Saccharomyces cerevisiae"

Проблема регуляции активности генов в процессе жизнедеятельности клетки является одной из основных в современной биологии. Ее решение позволит понять механизмы таких общебиологических явлений как морфогенез, дифференцировка при нормальном росте и опухолеобразовании, адаптация клетки к изменениям окружающей среды.

До недавнего времени наиболее интенсивно изучали регуляцию экспрессии генов у прокариотических организмов и бактериальных вирусов. Показано, что регуляция экспрессии генов у этих организмов^ основном,осуществляется на уровне транскрипции, а характерной чертой организации регуляторных систем является опе-рон, причём эффект регуляции достигается путём изменения скорости транскрипции оперонов за счёт взаимодействия ЕНК-полимеразы с участками инициации и терминации транскрипции. Посттранскрипционные процессы в регуляции у прокариот имеют второстепенное значение.

Механизмы регуляции экспрессии генов у эукариот исследованы в значительно меньшей степени, что связано со сложностью их генетической и клеточной организации и, как следствие, недостаточностью модельных объектов, удобных для решения этой проблемы. В последние годы на первый план среди подобных объектов, особенно в США и европейских странах выдвинулись дрожжи - Saccharomyces cerevisiae , одноклеточные эукариотические микроорганизмы, имеющие короткий жизненный цикл, хорошо изученные с генетической стороны, и позволяющие применять к ним весь арсенал методов молекулярной биологии и генной инженерии.

Одним из наиболее эффективных подходов к исследованию молекулярных механизмов регуляции является разработка генетических моделей, заключающаяся в выявлении регуляторных и структурных генов, контролирующих тот или иной путь биосинтеза,в выяснении их взаимодействий и последовательности функционирования.

Особенно удобна для изучения регуляции экспрессии генов кислая фосфатаза дрожжей, - один из основных энзимов метаболизма фосфора в клетке. Тот факт, что кислая фосфатаза экскрети-руется в культуральную среду облегчает выделение фермента и позволяет работать с признаком "наличие" или "отсутствие активности кислой фосфатазы" как с обычным генетическим маркером.

Следует отметить, что изучение регуляции кислой фосфатазы имеет не только теоретическое, но и практическое значение. Б настоящее время ферменты приобретают все большее значение в качестве природных катализаторов в биотехнологических процессах. Однако производство достаточного количества таких препаратов до сих пор не налажено и их приходится закупать за рубежом. По данным Главного управления микробиологической промышленности при Совете Министров СССР кислые фосфатазы причисляются к реактивам первой необходимости. Поэтому актуальной задачей является и получение штаммов сверхпродуцентов для их использования в промышленном производстве кислой фосфатазы.

У дрожжей Петергофских генетических линий кислая фосфатаза (кф) представлена тремя изозимами - конститутивной (кф1) и регулируемыми неорганическим фосфатом (кф2 и кфЗ). Ранее был продемонстрирован ряд генов, влияющих на активность и регуляцию синтеза кф2.

В настоящей работе показано, что регуляция экспрессии кф2 и кфЗ осуществляется общим механизмом. Идентифицирован и картирован новый ген, мутации в котором влияют на активность обоих изозимов.

При изучении ревертирования мутаций в различных АСР-генах установлено, что продуктами по крайней мере 4-х генов являются белки.

Выяснено, что один из исследованных генов (AGP80) контролирует активный транспорт фосфата в клетку и разработана методика селективного отбора мутантов по этому гену.

Идентифицированы общие элементы в регуляции активности кислых и щелочной фосфатаз. Это позволяет предполагать, что изучаемые гены могут играть важную роль в метаболизме фосфора в клетке.

На основании полученных результатов предложена модель регуляции экспрессии структурных генов для кислых фосфатаз.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Самбук, Елена Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Установлен полигенный контроль регуляции синтеза кфЗ. Показано,что мутации,блокирующие синтез кфЗ,возникают в генах АСР1,АСР2,а также в гене АСР5,идентифицированном впервые.

2. Показано,что ген АСР5 сцеплен с геном аср83 и локализован в правом плече У1 хромосомы дрожжей на расстоянии 4,9 стрейна от гена METI0.

3. Доказано,что продуктами генов АСР1,АСР2,АСР5,АСР80 и ACP8I являются белки.

4. Установлено,что функцией гена АСР80 является активный транспорт неорганического фосфата в клетку.Разработана оригинальная методика селективного отбора мутантов по этому гену.

5. Предложена методика,позволяющая определять положение мутаций в кластере ACP3-PH0I по отношению к центромере.С помощью этой методики определено взаимное расположение б мутаций в гене PH0I.

6 .Показан специфический эффект мутаций в гене PH0I на проявление мутаций в гене АСР5,свидетельствующий о возможности посттрансляционного взаимодействия кислых фосфатаз.

7. Обнаружено,что регуляция синтеза репрессибельных кислых и щелочной фосфатаз находится под общим генетическим контролем, в котором принимают участие гены АСР2-аср84,АСР4,АСР5-аср83, ACP8I и АСР82.

8. На основании собственных и литературных данных разработана модель регуляции синтеза фосфатаз у дрожжей.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Неспецифические фосфатазы (ортофо сфат-моно эфирфосфогидрола-зы) микроорганизмов давно привлекают внимание исследователей и в качестве модели для изучения механизмов регуляции экспрессии генов, и как один из ключевых ферментов метаболизма фосфата. Интерес к кислым фосфатазам дрожжей, проявляемый многими лабораториями мира, объясняется несколькими причинами: I) Кислые фосфатазы относятся к экзоферментам, способным гидролизовать широки^ спектр фосфомоноэфиров (schmidt et al 1963). Это обстоятельство позволяет, используя простую методику, тестировать актива ность кф непосредственно на колониях дрожжевых клеток и, таким образом, легко выявлять мутантов с изменённой активностью кф, то есть работать с признаком "активность кф", как с обычным генетическим маркером. У многих лабораторных штаммов эти ферменты экскретируются в процессе выращивания клеток в культуральную среду (Падкина и др., 1974), что существенно облегчает процедуру их выделения (Краснопевцева и др., 1979).

2) Среди изозимов кф обнаружены такие, синтез которых осуществляется только при низких концентрациях ортофосфата в культуральной среде, а при высоких концентрациях полностью подавляется. Таким образом, используя простой эффектор - неорганический фосфат, можно легко переводить клетки из условий репрессии в условия дерепрессии простым переносом на бесфосфатную среду и наоборот.

3,); В последние годы к этим ферментам появился интерес и в прикладном аспекте, так как выяснилось, что промотор одного из структурных генов кф (FH05) очень активен: в условиях дерепрессии количество кф, кодируемой этим геном, может составлять более 1% растворимых белков клетки ( Halvorson et al. ,unpubl Mey-hack, Hinnen , 1983), a 5»конец кодирующей части содержит последовательность для 17-20 аминокислот, необходимых для экскреции фермента ( Meyhack et al 1983; Thill , 1981).

Функция кислых фосфатаз заключается в снабжении клеток неорганическим фосфатом: гидролизуя эфирную связь у фосфомоноэфи-ров, они отщепляют неорганический фосфат, который транспортируется в клетку с помощью фосфатпермеазы и там превращается в полифосфаты - главный компонент фосфорных запасов клетки (СоскЪигп e"fc al ., 1975; Boer , Steyn -Parve, 1970). С другой стороны, так как сахара в фосфорилированном состоянии не способны проникать через плазматическую мембрану, отщепление от них фосфатной группировки с помощью кф делает их доступными для клетки (Rothstein, Meier , 1949).

Вопрос о количестве изозимов кф обсуждается в литературе давно (Кожин, Тер-Аванесян, 1979). В настоящее время установлено, что количественный и качественный состав изозимов кф является штаммоспецифическим признаком. У ряда детально изученных штаммов обнаружено две кф ( кф2 и кфЗ), синтез которых репрессируется при добавлении в культуральную среду неорганического фосфата в концентрации 1-3 мМ, и одна, - так называемая конститутивная (кф1), синтез которой не репрессируется фосфатом (Кожин и др., 1979). У некоторых штаммов имеется еще одна, третья репрессируемая кф (Bostian et al ., 1980). Существуют штаммы, у которых отсутствует конститутивная кф и синтез всех кислых фосфатаз репрессируется фосфатом ( Смирнов и др., 1978).

Следовательно, наличие конститутивной кф также является штаммо специфическим признаком. Следует отметить, что возможность существования "конститутивной" кф давно вызывала сомнении (Oshi-ma et al 1973; Самсонова и др., 1975). Так у Петергофских линий дрожжей этот фермент практически не синтезируется на минеральной синтетической среде с фосфатом, тогда как некоторые штаммы (не все) из коллекции Yeast stock center (USA) в этих же условиях синтезируют кф (Смирнов и др., 1978). Недавно было показано, что синтез этого фермента индуцируется неорганическим фосфатом (bemire et al ., 1983). Что касается количественного соотношения разных изозимов кф, то имеющиеся литературные и собственные данные позволяют считать и этот признак штаммоспецифическим. Так, по данным Бостиана и др., (Bostian et al ., 1983) у большинства штаммов саке-линий в условиях репрессии образуется незначительное количество кф1; в условиях дерепрессии количество репрессируемых кф в 30 раз превышает количество кф1 и составляет более 1% от всех растворимых белков клетки (Bostian et al ., 1983) причём-80$ из них представлены кф2. У Петергофских генетических линий удельная активность кф1, экскретируемой в культуральную среду в условиях репрессии, лишь в 3-4 раза выше, чем в условиях дерепрессии (Падкина и др., 1974; Атанасов,1980).

Изучение физико-химических свойств изозимов кф, экскрети-руемых штаммами Петергофских генетических линий, показало, что эти ферменты различаются по термо- и рН- стабильности, K^, Ki , оптимуму рН действия (кроме кф2 и кфЗ), электрофоретической подвижности и аминокислотному составу, что свидетельствует о различиях в первичной структуре этих белков (Падкина и др., 1974; Краснопевцева и др., 1979; Кожин и др., 1979; Атанасов, 1980; Падкина, 1978). С другой стороны, анализ пептидов репрессируемой кф, проведённый Бостианом и др., показал высокую степень их гомологии ( Bostian et al •» Т980). Все кислые фосфатазы являются гликопротеидами (Bostian et al .,1983; Краснопевцева и др., 1979; Атанасов, 1980), что свойственно экзоферментам ( Lampen , 1968). Определение молекулярной массы белковой части кислых фосфатаз в экспериментах in vitro показало, что белок в 57 ки-ло/цальтон (р57) соответствует кф1, 60 кд (р60) - кф2 и 56 кд (р56) - кфЗ ( Bostian et al, 1980). Белок в 58 кд (кф4) встречается не у всех штаммов ( Bostian et al ., 1983).

Генетическое изучение биосинтеза кф проводится независимо в двух лабораториях и у штаммов разного происхождения: в Ленинградском университете с использованием Петергофских генетических линий (ПГЛ) и в Осакском университете у дрожжей саке-линий (СЛ).

Использование штаммов разного происхождения в экспериментах подобного рода уже позволило обнаружить значительные отличия в строении и составе фосфатаз, о которых уже говорилось. Однако наибольший интерес представляет на наш взгляд сравнительный анализ данных, полученных в разных лабораториях, по генетическому контролю синтеза этих ферментов. В таблице 38 суммированы данные по генетическому контролю структуры и регуляции синтеза кислых и репрессируемой щелочной фосфатаз, полученные в лаборатории др. Ошимы.

В связи с тем, что обозначения генов, идентифицированных в этой лаборатории, менялись, в табл. 38 приведены обе номенклатуры. Из таблицы 38 следует, что структуру "конститутивной" кислой фосфатазы (кф1) кодирует ген РНОЗ, а структуру основного изозима репрессибельных кф - кф2, кодирует ген РН05. Структурный ген для кфЗ пока генетически маркировать не удалось. Пока ничего не известно о структурном гене для кф4.

Выявлено 8 генов, мутации в которых тем или иным образом нарушают регуляцию синтеза кф неорганическим фосфатом (табл.38). Следует отметить, что в этих экспериментах исследовалась только кф2 и, поэтому, в таблице отсутствуют сведения о влиянии мутаций в этих генах на кфЗ и кф4, которые в этих штаммах присутствуют. Генетико-биохимический анализ показал, что мутации в генах РН02, РН04 и PH08I рецессивны и приводят к блоку дерепрес-сии кф2 (то есть, к отсутствию активности кф2 в условиях дереп-рессии), кроме того мутации в генах РН04 и PH08I оказывают аналогичный эффект и на репрессибельную щелочную фосфатазу (щф). Мутации в генах РН080, РН082, РН083, РН084 и РН085 приводят к конститутивному синтезу и кф2 и щф, причём в генах РН082 и РНО 83 возникают доминантные или полудоминантные мутации (Oshima » 1981).

Недавно было показано в экспериментах по генетическому картированию, что ген РН082 по сути не является самостоятельным геном, а скорее представляет собой некую контролирующую область гена РН04, так как картируется внутри него (тоЬ-Е et al., 1981). По всей видимости, РН083 также является регуляторным сайтом, . контролирующим экспрессию гена РН05, так как возникающие в РН083 мутации конститутивного синтеза кф2 цис-доминантны по отношению к нормальной аллели гена РН05 и локализуются в' участке, примыкающем к 5'-области гена РН05 (Oshima , 1981; Toh-E et al ., 1983). Предполагаемые функции других генов указаны в таблице 38.

Результаты генетического изучения аналогичной модели у Петергофских генетических линий к началу данной работы суммированы в таблице 2. Эксперименты, проведенные нами, позволили уточнить и расширить представление о генетическом контроле синтеза фосфатаз у ПГЛ.

Так, установлено, что продуктами генов ACPI, АСР2, АСР5,

Структурные и регуляторные гены в системе синтеза кислых фосфатаз саке-линий дрожжей

Ген Локализация Фенотип мутанта Предполагаемая функция гена или его продукта

I 2 3 4

PHOI (РНОА) отсутствие или снижение активности кф и щф позитивный фактор, необходимый для экспрессии РН05 и РН08 (Oshi та» 1981)

РН02 (РНОВ) 4л отсутствие дерепрес-сии репрессибельных кф, неспособность к транспорту неорганического фосфата специфический фактор, необходимый для экспрессии РН05 и РН084 (loh-B et al., 1974)

РНОЗ (РНОС) 2пр. отсутствие конститутивной кф (кф1) структурный геи кф1 (Oshima ,1981)

РН04 (PH0D | бпр. отсутствие дерепрес-сии репр. кф и щф; неспособность к транспорту неорганического фосфата активатор (позитивный фактор) транскрипции РН05, РНОВ и РН084 (Oshima ,1981; Toh-E 1980)

РН05 (РНОЕ) 2пр. (тесно сцеплен с РНОЗ) отсутствие репресси-бельной кф (кф2) структурный геи кф2 ( Bostian et al. , I98( . Oshima, 1981)

РН06 (PHO F - отсутствие кф1 позитивный фактор, необходимый для экспрессии РНОЗ ( Oshima, 1981)

РН07 (PHO G — то же то же

РН08 (РНОН) 4пр. отсутствие репрес-сибельной щф структурный ген щф ( Oshima, 1981) «

I 2 3 4

PH080S(PH0P) 15 пр. конститутивный синтез репрессибельных кеб и щф и пермеазы фосфата негативный фактор репрессор функции РН04 (Oshima , 1931)

PH08I (PHOs) - неспособность к де-репрессш репрессибельных кф и щф медиатор (Oshima 1981) pho826(pho 0) 2 пр. (сцеплен с РН05) конститутивный синтез репрессибельных кф и щф область позитивногс фактора, узнающего сайт взаимодействия негативного с&актора (Oshima , 1981) pho83^ (pho P) 6 пр. (часть гена РН04) конститутивная экспрессия РН05 регуляторный сайт примыкающий к РН05 (Oshima , 1981)

EH084 (PHOT) конститутивный синтез репрессибельных кф и щф; неспособность к транспорту неорганического фосфата компонент системы транспорта неорганического йоейата (Oshima ; IS8I)

PH085 (PHOu ) 16л. конститутивный синтез репрессибельных кф И Щф позитивный фактор репрессор функции FH04 (0shima, 1981) а - в скобках указаны прежние обозначения б - мутацщ в данном локусе, как правило, доминантны или полудоминантны по отношению к аллели дикого типа зе - сцеплен с центромерой.

АСР80 и ACP8I являются белки (ГлаваШ). Доказано, что функцией гена АСР80 является активный траспорт неорганического фосфата клетку. Наиболее вероятно, что этот ген кодирует пермеазу фосфата. Обнаружен полигенный контроль синтеза кфЗ; показано, что в этом процессе принимают участие гены ACPI, AGP2, а также идентифицированный нами ген - АСР5. Сцепление этого гена с аср83 и эпистатирование мутаций в генах АСР4, АСР82 и аср83 мутациями в гене АСР5, а также отсутствие синтеза репрессибельных кф и щф у мутантов по АСР5 позволяет предположить, что продукт гена АСР5 играет роль позитивного регулятора, то есть он необходим для экспрессииструктурных генов кф и щф.

Поскольку провести функциональный тест на аллелизм между РНО-генами саке-линий и АСР-генами Петергофских генетических линий не представлялось возможным, в табл. 39 проведено сопоставление генов на основе фенотипического проявления мутаций в них и их предполагаемых функций.

Таким образом, все мутации, влияющие на активность репрессибельных кф и щф можно разделить на две группы по их проявлению: мутации, блокирующие активность кф и щф и мутации, приводящие к конститутивному синтезу этих ферментов. Попарное сочетание этих мутаций в гаплоидных штаммах позволило выявить иерархические отношения между ними. На основании этого были предложены модели каскадной регуляции синтеза кф для ИГЛ (Кожин, Тер-Аванесян,1979) и саке-линий дрожжей (oshima , 1981).

В последствии модель каскадной регуляции синтеза фосфатаз у саке-линий дрожжей была пересмотрена. В работе То-е с соавторами было показано, что при рН 3,0 активность кф в условиях де-репрессии отсутствует, тогда как увеличение рН до 4,0 восстанавливало активность кф. При этом мутации в регуляторных генах

РН02 и PH08I снимали эффект низких рН. На основании этих результатов, а также принимая во внимание данные по картированию гена РН04, авторы предположили, что экспрессия структурных генов кф осуществляется комплексом факторов позитивного и негативного контроля (рис.18) (Toh-E e-fc al., 1979).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Самбук, Елена Викторовна, Ленинград

1. Атанасов Б.К. Генетико-биохимическое изучение регулируемых

2. КИСЛЫХ фосфатаз у дрожей Saccharomyces cerevisiae. Автореферат дис. на соиск. ученой степени канд. биол. наук., Л., 1980.

3. Бухович Е.Л., Белозерский А.Н. Некоторые данные по образованию полифосфатов в дрожжевых клетках. Биохимия, т. 23, с.254-259,1958.

4. Газарян К.Г., Тарантул В.З. Геном эукариот. йзд-во МГУ,272е.,1983.

5. Глотов Н.Б., Животовский Л.А., Хованов Н.В., Хромов-Борисов Н.Н. Биометрия. Изд-во ЛГУ, 262с, 1982.

6. Захаров И.А., Кожин С.А., Кожина Т.Н., Фёдорова И.В. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л., "Наука", с.3-112,1976.

7. Инге-Вечтомов С.Г. Новые генетические линии дрожжей Saccharomyces cerevisiae . Вестник ЛГУ, Т.21, C.II7-I25, 1963.

8. Инге-Вечтомов С.Г. Исследование прямых мутаций и реверсийпо признаку потребности в аденине. Автореферат дис. на соиск. учёной степени канд. биол. наук, Л., 1965.

9. Инге-Вечтомов С.Г. Идентификация некоторых групп сцепленияу Петергофских генетических линий дрожжей. Генетика, т.УП, Ю, C.II3-I24, 1971.

10. Краснопевцева Н.Г., Падкина М.В., Атанасов Б.К., Смирнов

11. П. Кожин С.А., Самсонова М.Г. Генетико-биохимическое изучение КИСЛЫХ фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae 1У. Генетический контроль активности кислой фосфатазы П. Генетика, т.П, с.104-112, 1975.

12. Кожин С.А., Тер-Аванесян М.Д. Сравнительная генетика неспецифических фосфомоноэстераз у микроорганизмов. Исследования по генетике, вып. 8, с.89-108, 1979.

13. Кулаев И.С. Биохимия высокомолекулярных полифосфатов. Йздво МГУ, 247, е., 1975.

14. Ленинджер А. Биохимия. "Мир", М„ с.958, 1974.

15. Падкина М.В., Краснопевцева Н.Г., Петрашень М.Г., Кожин

16. С.А., Смирнов М.Н. Генетико-биохимическое изучение КИСЛЫХ фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae J. Характеристика кислых фосфатаз разных штаммов. Генетика, т.Х, Ж, о.100-110, 1974.

17. Падкина М.В. Изучение функции генов, контролирующих активность КИСЛОЙ фосфатазы I у дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Автореферат дис. на соиск. учёной степени канд. биол. наук, Л., 1978.

18. Самбук Е.В., Тер-Аванесян М.Д. Восстановление активностикислой фосфатазы I и фосфорибозиламиноимидазолкарбокси-лазы в результате супрессии охр-мутаций в генах PH0I и ADE2 У дрожжей Saccharomyces cerevisiae . Генетика, Т.ХУ1, J®, с.833-839, 1980.

19. Самбук Е.В., Маарич М.А., Шарыпова Л.А., Кожин С.А. Новыемаркеры Петергофских генетических линий дрожжей. Вестник ЛГУ, №3, с.90-95, 1984.

20. Самсонова М.Г. Изучение генетического контроля синтезакислых фосфатаз у дрожжей Saccharomyces cerevisiae . Автореферат на соиск. учёной степени канд. биол. наук, Л., 1979.

21. Самсонова М.Г., Кожин С.А. Идентификация гена-операторав синтезе кислых фосфатаз дрожжей-сахаромицетов. В кн.: Тезисы докладов Ш съезда ВОГиС им. Н.И.Вавилова, Л., "Наука", с. 405, 1977.

22. Самсонова М.Г., Смирнов М.Н., Кожин С.А. Генетико-биохимическое изучение кислых фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae • Получение и анализ доминантных мутаций конститутивного синтеза кислой фосфатазы 2. Генетика, Т.ХУ1, №,с.212-222, 1980.

23. Самсонова М.Г., Падкина М.В., Краснопевцева Н.Г., Кожин С.А.,

24. Смирнов М.Н. Генетико-биохимическое изучение кислых фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae У. Генетический контроль регуляции синтеза кислой фосфатазы 2. Генетика т.П, с. I04-II5, 1975.

25. Самсонова М.Г., Уразманова Н.А., Краснопевцева Н.Г.,

26. Кожин С.А., Смирнов М.Н. Выяснение природы мутаций, блокирующих синтез двух кислых фосфатаз у дрожжей. В кн.'"Молекулярные механизмы генетических процессов", М., "Наука", с.171, 1983.

27. Симаров Б.В., Шабунов Б.Е., Царькова С.А., Миронова Л.Н.,

28. Тихомирова В.Л., Михайлова Н.П., Новикова Н.И. Доминантная нонсенс-супрессия у дрожжей. В кн.:"Тезисы Шсъезда ВОГиС им. Н.И.Вавилова", Л., "Наука", с.419,1977.

29. Смирнов М.Н., Краснопевдева Н.Г., Дадкина М.В., Шабунов Б.Е.,

30. Кожин С.А. Сравнительный генетико-биохимический анализ регуляции синтеза кислых фосфатаз у дрожжей разного происхождения. Труды Х1У Международного генетического конгресса. Секционные заседания, 41, секция I-I2, М./'Наука", с.56,1978.

31. Стент Г., Кэлиндар Р. Молекулярная генетика. Изд-во "Мир",1. М., с.556,1981.

32. Тер-Аванесян М.Д., Инге-Вечтомов С.Г., Петрашень М.Г. Генетико-биохимическое изучение кислых фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae . П. Изучение мутаций, влияющих на активность кислой фосфатазы I. Генетика, т.10, М2, c.I0I-I09, 1974.

33. Шабунов Б.Е., Самбук Е.В., Мухленов А.Г., Самсонова М.Г.,

34. Кожин С.А. Анализ плейотропного действия генов, контролирующих синтез репрессибельных кислых фосфатаз дрожжей. Тезисы докл.1У съезда ВОГиС им. Н.И.Вавилова, Л.,"Наука", с. 265 , 1982.

35. Abrams В.В*, Hackel К., Mizunaga Т., bampen J.O. Relationshipof large and small invertases in Saecharomyces:mutant selectively deficient in small invertase. J.Bacteriol.,vol.135,p.809-817,1978.

36. Arst H.F., Mac Donald D.W. A gene cluster in Aspergillusnidulans with an internally located cis-acting regulatory region. Fature, vol.254, p.26-31, 1975.

37. Arst S.W., Broach J.R. Hlstidine regulation in Salmonellatyphimurium: an activator-attenuator model of gene regulation. Proc.Nat.Acad. Sci.,U.S.,vol.72,p.3453-3457,1975.

38. Bassel J,, Mortimer R. Genetic order of the galactose structural genes in Saccharomyces cerevisiae. J.Bacterid., vol. Io8,p.179-183, 1971.

39. Bechet J., Grenson M., Wiame J.M. Mutations affecting therepressibility of arginine biosynthetic enzymes in Saccharomyces cerevisiae. Eur. J.Biochem.,vol.12,p.31-39,1970.

40. Beier D.R., Young E.T. Characterization of regulatory regionupstream of the ADH locus of Saccharomyces cerevisiae. Nature,vol.300,p.724-728, 1982.

41. Berge ten A.M.A. Genes for the fermentation of maltose and -methylglucoside in Saccharomyees cerevisiae. Molec.Gen. Genet.,vol.115,P.80-88, 1972.

42. Bertrand K., Korn L., Lee F., Piatt Т., Squirres C.L., Janofsky C. New futures of the regulation of the tryptophan s operon. Science,vol.189,9.22-26, 1975.

43. Bevan P., Douglas H.C. Genetic control of phosphoglucomutasevariants in Saccharomyces cerevisiae. J.Bacteriol.,vol. 98,p.532-535, 1969.

44. Boer P., Stein-Parve E.P. Further studies on mechanism ofaction of an acid phosphatase from baker*s yeast. Information from experiments on transphosphorylation. Biochim. Biophys. Acta,vol.206,p.281-288,1970.

45. Borst-Pauwels G.W.F.H., Jager S. Inhibition of phosphate andarsenate uptake in yeast by monoiodacetate, fluoride, 2-4-dinitrophenol and acetate. Biochim., Biophys.Acta,vol. 172,p.399-406,1969.

46. Broach J.E. Galactose regulation in Saccharomyces cerevisiae. The enzymes encoded by the GAL 7,10,1 cluster are co-ordinately controlled and separately translated. J.Mol.Biol. vol.131,p.41-53,1979.

47. Burkholder P.R. Vitamin deficiencies in yeasts. American J.of Botany, vol.30,p.206-211,1943.

48. Burkl G., Castroph H., Schweizer E. Mapping of a complex genelocus coding for part of the Saccharomyces cerevisiae fatty acid synthetase multienzyme complex. Molec. gen. Genet. vol.119, p.315-322, 1972.

49. Cancedo С., Salas М.Ь., Giner A., Sols A. Eeciprocal effectsof carbon sources on the levels of ancAMP-sensitive fructose-I,6-diphosphatase and phosphofructokinase in yeast. Biochim. Biophys. Res. Com., vol.20,p.15-20, 1965.

50. Carlson M., Botstein D. Two differentially regulated mRNAswith different 5* ends encode secreted and intracellular forms of yeast invertase. Cell, vol.28,p.145-154, 1982.у

51. CmLson M., Botstein D. Organization of the SUC gene familyin Saccharomyces. Molec. Cell. Biol.,vol.3, p.351-359,1983.

52. Case M.E., Giles N.H. Evidence for nonsense mutations in thearom gene cluster of Neurospora crassa. Genetics, vol.60, p.49-58,1968.

53. Case М.Е», Giles N.H. Gene order in the qa gene cluster of

54. Neurospora crassa. Molec. gen.Genet.,vol.147,p.83-89,1976.

55. Chattoo B.B., Sherman P., Azubalis D.A., Fjellstedt T.A.,Mehnert D., Ogur M. Selection oflys2 mutants of the yeast Saccharomyces cerevisiae by the utilization ofet-amino-adipate. Genetics,vol.93,p.51-65,1979.

56. Chow Т., Goldenthal M.J., Cohen J.D., Hegde M., Marmur J.1.entification and physical characterization of yeast maltase structural genes. Molec. gen. Genet.,vol.191,p. 366-371, 1983.

57. Ciriacy M., Breitenbach J. Physiological effects of sevendifferent blocks in glycolysis of Saccharomyces cerevisiae. J. Bacterid., vol.I39,p.I52-l60,I979.

58. Cirillo V.P. Galactose transport in Saccharomyces cerevisiae.

59. Nonmetabolized sugars as substrates and inducers of the galactose transport system. J.Bacteriol.,vol.95,p. 1727-1731, 1968.

60. Cockburn M., Earnshow P.,Eddy A.A. The stoicheiometry of theabsorption of protons with phosphate and L-glutamate byyeasts of the genus Saccharomyces. Biochem. J.,vol.146,p. 705-712, 1975.

61. Costello W.P., Bevan E.A. Complementation between ade ,5,7alleles in yeast. Genetics,vol.50,p.1219-1230,1964.

62. Cox G-.B., Rosenberg H., Downie J.A., Silver S. Genetic analysis of mutants affected in the Pst inorganic phosphate transport system. J.Bacteriol., vol*I48,p.I-9, 1981.

63. Cunin R., Kelker N., Boyen A., Yang H.b., Zubay G., Glansdorff N., Maas W.K. Repression in vitro of arginine genes transcription in E. coli. Biochem. Biophys.Res. Comm., vol.69,P.377-382,1976.

64. Davis I.W., Hardie I.D. Selective killing of vegetative cellsin sporulated yeast cultures by exposure diethyl ether. Molec. gen. Genet.,vol.131,p.281-289, 1974.

65. Davis R.H. Genetics of arginine biosynthesis in Neurosporacrassa. Genetics, vol.93,p.557-675,1979.

66. Deken R.H. De,Pathway of arginine biosynthesis in yeast.

67. Biochim. Biophys. Res. Comm., vol.8,p.462-466, 1962.

68. Delforge J,, Messenguy P., Wiame J.-M. The regulation ofarginine biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae. The specificity of arg R~mutations and the general control of amino acid biosynthesis. Eur. J. Biochem. vol.57,p. 231-239, 1975.

69. Demerec M. Clustering of functionally related genes in Salmonella typhimurium. Proc. Nat. Аса. Sci. U.S., vol.51. p.1057-1060, 1964.

70. Denis-Duphil M., Kaplan J.G. Fine structure of the ura2locus in Saccharomyces cerevisiae. II. Meiotic and mitotic mapping studies. Molec.gen. Genet.,vol.145,p.259-271, 1976.

71. Deschamps J., Dubois E., Wiame J.-M. L-ornithine transaminasesynthesis in Saccharomyces cerevisiae: Regulation by inducer exclusion. Molec. gen. Genet.,vol.174,p.225-232,1979.

72. Deschamps J., Wiame J.-M. Mating-type effect on cis-mutationsleading to constitutivity of ornithine trans aminase in diploid cells of Saccharomyces cerevisiae. Genetics,vol. 92, p.749-758, 1979.

73. Douglas H.C., Hawthorne D.C. Enzymatic expression and geneticlinkage of genes controlling galactose utilization in Saccharomyces. Genetics, vol.49,p.837-844, 1964.

74. Douglas H.C., Hawthorne D.C. Regulation of genes controllingsynthesis of the galactose pathway enzymes in yeast. Genetics, vol. 54,p.9H-9I6, 1966.

75. Douglas H.C., Hawthorne D.O. Uninducible mutants in the galilocus of Saccharomyces cerevisiae. J. Bacteriol.,vol.109, p. II39-II43, 1972.

76. Dubois E., Hiernaux D., Grenson M., Wiame J.-M. Specific induction of catabolism and its relation to repression of biosynthesis in arginine metabolism of Saccharomyces cerevisiae. J. Mol.Biol., vol.I22,p.383-406, 1978.

77. Ehrenberg M. Der Phosphorstoffwechsel von Saccharomyces cerevisiae in Abhangigheit von intra- und extracellularer Bhosphatkonzentration. Arch. Microbiol., vol.40,p.126-152, 1961.

78. Eibl H., Lands W.E.M. A new, sensitive determination of phosphate. Analyt. Biochem., vol.30,p.51-57, 1969.

79. Emeis C.-C., GutzH.Eine einfache Technik zur Massenisolationvon Hefesporen. Z. Naturforsch.,vol.138, s.647-650,1958.

80. Entian K.-D., Mecke D. Genetic evidence for a role of hexokinase isozyme PII in carbon catabolite repression in Saccharomyces cerevisiae. J. Biol. Chem., vol.257,p.870874, 1982.

81. Ernst J.F., Stewart J.W. , Sherman F. Formation of compositeiso-cytochromes с by recombination between non-allelic of yeast. J.Mol.Biol., vol.161, p.373-394, 1982.

82. Fangman W.L., Zakian V.A. Genome structure and replication.1.."The Molecular Biology of the yeast Saccharomyces. Life cycles and inheritance". Ed.by Y.N.Strathern, ЕЛ/. Jones, Y.B. Broach, Cold Spring Harb. Lab., I98I,p.27-58.

83. Fink G.R., Styles C.A. Gene conversion of deletions in the

84. HIS4 region of yeast. Genetics, vol.77,p.231-244,1974.

85. Fuente de la G., Sols A. Transport of sugars in yeasts.II.

86. Mechanisms of utilization of disaccharides and related glucosides. Biochim. Biophys. Acta, vol.56,p.49-62, 1962.

87. Gaertner F.H. Unique catalytic properties of enzyme clusters.

88. Trends Int. Bioch.Soc., vol.3,p.63-65, 1978.

89. Gascon S., Lampen J.O. Purification of the internal invertaseyeast. J. Biol. Chem.,vol.243,p.1567-1572,. 1968.

90. Gascon S., Neumann N.P., Lampen J.O. Comparative study ofthe properties of the purified internal and external in-vertases from yeast. J. Biol. Chem., vol.243,p.1573-1577, 1968.

91. Gascon S., Ottolenghi P. Influence of glucose concentration ofthe medium on the invertase content of a strain of Saccharomyces bearing the SUC2 gene. C.R.bab. Carlsberg. vol.39, p.15-24, 1972.

92. Goodman J., Eothstein A. The active transport of phosphateinto yeast cell. J. Gen. Physiol., vol.40,p.915-923, 1957.

93. Greer H., Pink J.E. Isolation of regulatory mutants in Saccharomyces cerevisiae. In "Methods in Cell Biology",p.247-272, eds. Б.М. Prescott, 1978, Acad. Press NY.

94. Guarente b., Eogers Y.R., Gifford P. A GALIO-CYCI hybrid yeastpromoter identifies the GAL4 regulatory region as an upstream site. Proc. Nath. Acad. Sci. USA,vol.79,p.74I0-7414, 1982.

95. Hackei E.A. Genetic control ofinvertase formation in Saccharomyces cerevisiae. I. Isolation and characterization of mutant affecting sucrose utilization. Molec. Gen. Genet., vol. I4o,p. 361-370, 1975.

96. Haivorson H.O., Bostian K.A., Jarger J.G. Enzyme expressionduring growth and cell division in Saccharomyces cerevisiae s a study of galactose and phosphorus metabolism.1. Preprint.

97. Hancock R.E.W., Poolee K., Benz R. Outer membrane protein

98. P of Pseudomonas aeruginosa: Regulation by phosphate deficiency and formation of small anion-specific channels in!lipid bilayer membranes. J.Bacteriol.,vol.150,p.730-738,1982.

99. Hashimoto H., Kikuchi Y., Hogi Y., Fukasawa T. Regulationof expression of the galactose gene cluster in Saccharomyces cerevisiae. Isolation and characterization of the regulatory gene GAL4. Mol. Gen. Genet, vol. 191,p.31-38,1983.

100. Hereford L.M., Fahrner K., Woolford I. IR., Roshash M.,

101. Kaback D.B. Isolation of yeast histone genes 2A and 2B. Cell,vol. I8.p.I26I-I279, 1979.

102. Hopper J.E., Broach I.R., Rowe L.B. Regulation of the gaclactose pathway in Saccharomyces cerevisiae, Indution of uridil transferase mRNA and dependency on GAL4 gene function. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, vol.75, p.2878-2882, 1978.

103. Ingolia T.D., Slater M.R., Craig E.A. Saccharomyces cerevisiae contains a complex family related to the major heat shock-inducible gene of Drosophila. Mol. Cell. Biol. vol. 2,p. 1388-1398, 1982.

104. Jackson J.A., Pink G.R. Gene convertion between duplicatedgenetic elements in yeast. Nat-are, vol. 292,p.306-311,1981.

105. Jacob P., Monod J. Genetic regulatory mechanisms in the synthesis of proteins. J. Mol. Biol., vol.3,p»3I8-356,I96I.

106. Jauniaux J.C., Urrestarazu L.A., Wiame J.M. Arginine metabolism in Saccharomyces cerevisiae: Subcellular localization of the enzymes. J. Bacteriol.,vol.133,p.I096-II07,1978.

107. Jeanjean R., Bedu., Affia A. el. F., J. Rocca-Serra.Inorganic phosphate uptake by protoplasts and whole cells ofyeast Candida tropicalis: Absence of high affinity transport system in protoplasts. Biochimie, vol.64,p.75-78, 1982.

108. Johnston R.H., Beverley S.M., Schimke R.I. Rapid spontaneousdihydrofolate reductase gene amplification shown by fluorescence-activated cell sorting. Proc. Nat. Acad. Sci.USA,vol.80,p. 3711-3715» 1983.

109. Johnston H.M., Davis R.W. Genetic analysis of yeast GAL generegulation. Genetics, vol.104,p.38-52, 1983.

110. Johnston a.A., Hopper J,E. Isolation of the yeast regulatory gene GAL4 and analysis of its dosage effects on the galactose/melibioseiregulon. Proc. Nat. Acad. Sci. USA., vol. 79, p. 6971-6975, 1982.

111. Johnston I.E., Mortimer E.K. Use of snail digestive juice inisolation of yeast spore tetrads. J. Bacteriol.,vol.78, p. 292-296, 1959.

112. Jones E.W., Pink G.R. Regulation of amino acid and nucleotide biosynthesis in yeast. In "Molecular Biology of the yeast Saccharomyces: Metabolism and Gene expression",p. 181-299, 1982.

113. Zew O.M.,pouglas H.C. Genetic co-regulation of galactose andmelibiose utilization in Saccharomyces. J. Bacterid.,vol. 125, p.33-41, 1976.

114. Klar A.I.S., Halvorson H.O. Studies on the positive regulatory gene, GAL4, in regulation of galactose catabolicenzymes in Saccharomyces cerevisiae, Molec. Gen. Genet» vol. 135, p.203-212, 1974.

115. Klar A.I.S., Halvorson H.O. Effect of GAL4 gene dosage onthe level of galactose catabolic enzymes in Saccharomyces cerevisiae. J. Bacterid., vol. 125,p.379-381, 1976.

116. Kozak M. How do eucaryotic ribosomes select initiation regions in messenger RNA? Cell, vol. 15,p.II09-II23, 1978.

117. Krasnopevtzeva N., Padkina M., Urazmanova N., Myasnikov A.,

118. Kozhin S., Smirnov M. Isozyme composition and regulation of the synthesis of acid phosphatase in yeast. Thes. of "Conference on "Metabolic and genetic regulation in yeast", p. 26, 1983, Jena, GDR.

119. Kramer R.A., Anderson N. Isolation of yeast genes with mRNAlevels controlled by phosphate concentration. Proc. Nat. Acad. Sci.,USA, vol. 77,p.6541-6545, 1980.

120. Krenzer K., Pratt C., Torriani A. Genetic analysis of regulatory mutants of alcaline phosphatase of E. coli. Genetics, vol.81,p. 459-468, 1975.

121. Kiihn L., Castorph H., Schweizer E. Gene linkage and geneenzyme relations in the fatty-acid-synthetase system of

122. Saccharomyces cerevisiae. Eur. J. Biochem., vol. 24,p. 492-497, 1972.

123. Lee P., Yanofsky C. Transcription termination at the trp operon attenuators of Escherichia coli and Salmonella typhi-murium: KNA secondary structureand regulation termination. Proc. Nat. Acad. Sci. USA,vol.74,p.4365-4369, 1977.

124. Lemire J.M., Thill G.R., Rogers D.T., Kramer Q., Bostian K.A.

125. Regulation and organization of two tandemly duplicated yeast acid phosphatase genes. In: Molec. Biol, of Yeast

126. Cold Sprig Harb. Meet., 229, 1983.

127. Lemoine Y., Dubois E., Wiame J.-M. The regulation of ureaamidolyase of Saccharomyces cerevisiae • Molec. Gen. Genet, vol.166,p.251-258, 1978.

128. Liras P., Gascon S. Biosynthesis and secretion of yeast invertase. Effect of cycloheximide and 2-deoxy-D-glucose. Eur. J. Biochem., vol23,p. 160-165, 1971.

129. Lynen P. Structure and function of fatty acid synthetase. In

130. Cell compartmentation and metabolic channeling",p.125-134, VEB Gustav Fischer Verlag-Iena GDR, eds. L.Nover, P.1641.nen, К. Mothes, 1980.

131. Magasanik Б. Catabolite repression. Cold Spring Harb. Symp.quant. Biol., vol.26, p.249-262, 1961.

132. Matsumoto K., Toh-E A., Oshima Y. Genetic control of galactokinase synthesis in Saccharomyces cerevisiae. Evidence for costitutive expression of the positive regulatory gene GAL4. J. Bacteriol., vol. 134,p.446-513, 1978.

133. Matsumoto K., Uno I., Toh-E A., Ishikawa T., Oshima Y. Cyclic

134. AMP may not be involved in catabolite repression in Saccharomyces cerevisiae: Evidence from mutants capable of utilizing it as adenine source. J.Bacteriol., vol. 150,p.277-285, 1982.

135. Matsumoto E., Yoshimatsu A., Oshima Y.Kecessive mutationsconferring resistance to carbon catabolite repression of galactokinase synthesis in Saccharomyces cerevisiae. J. Bacteriol., vol.153,p. I405-I4I4, 1983.

136. Messenguy P., Delforge J. Role of transfer ribonucleic acidsin the regulation of several biosyntheses in Saccharomyces cerevisiae. Eur. J. Biochem., vol.67, p.335-339,1976.

137. Messenguy P., Dubois E. Participation of transcriptional andpost-transcriptional regulatory mechanisms on the control of arginine metabolism in yeast. Molec. Gen. Genet., vol. 189, p. 148-156, 1983.

138. Meyhack B., Bajwa W., Rudolph H., Hinnen A. Two yeast acidphosphatase structural genes the result of a tandem duplication and show different degrees of homology in their promoter and coding sequences. The EMBO J., vol. I,p.675-680, 1982.

139. Meyhack B., Hinnen A. High levels of expression of foreigngenes under the control of the yeast PH05 promoter. In: Molec. Biol, of Yeast, Cold Spring Harb.Meet., p. 156, 1983.

140. Microbial genetics bulletin. Yeast genetics. Suppl. vol.31,1969.

141. Middelhoven W.I. The pathway of arginine breakdown in Saccharomyces cerevisiae. Bioch. Biophys. Acta, vol. 93,p.650-654, 1964.

142. Mormoneo S., Sentandreu R. Regulation of invertase synthesisby glucose in Saccharomyces cerevisiae. J Bacteriol.,vol.152, p.14-18, 1982.

143. Mortimer R.K., Schield D. Genetic map of Saccharomyces cerevisiae. Microbiol. Rev. vol.44, p.519-671, 1980.

144. Nogi I., Matsumoto K,, Toh-E,A., Oshima Y. Interaction ofsuper-repressible and dominant constitutive mutations for the synthesis of galactose pathway enzymes in Saccharomyces cerevisiae. Molec. Gen. Genet., vol.152,p.137-144, 1977.

145. Penninckx M. Interaction between arginase and L-ornithinecarbamoyltransferase in Saccharomyces cerevisiae. The regulatory sites of arginase. Eur. J.Biochem.,vol.58, P. 533-538, 1975.

146. Petersen U.S., Mc Laughlin C.S. Monocistronic messenger ENAin yeast. J.Mol. Biol., vol.81,p. 33-45, 1973.

147. Pilz I., Herbst M., Kratky 0., Oesterhelt D., Lynen F.

148. Eontgenkleinwinkel-Untersuchungen an der Fettsauresynthe-tase aus Hefe. Eur. J. Biochem., vol. 13, p.55-64, 1969.

149. Plischke M.E., von Borstel B.C., Mortimer B.K., W.E.Cohn.

150. Genetic markers and associated gene products in S. cerevisiae. p. 771-773. In Handbook of Biochemistry, vol.11. Ed. by G.P. Fasman, Chemical Eubber Co Press, Cleveland, Ohio, 1976.

151. Poiakis E.S., W.Bartley, Meek G.A. Changes in the activities of respiratory enzymes during the aerobic growth of yeast on different carbon sources. Biochem. J.,vol.97,p. 298-302, 1965.

152. Poiakis E.S., Bartley W. Changes in the enzyme activitiesof Saccharomyces cerevisiae during aerobic growth on different carbon sources. Biochem.J. vol.97,p.284-297, 1965.

153. PouwelsP.H., Pannekoek H. A transcriptional barrier in theregulatory region of the tryptophan operon of E. coli: its role in the regulation of repressor-independent ENA synthesis, ffiol. Gen. Genet., vol. 149,p.255-265, 1976.

154. Eebeille F., BlignyE., Douce E. Eegulation of Pi uptake by

155. Acer pseudoplatanus cells. Arch, of Biochem. and Biophys., vol. 219,p. 371-378, 1982.

156. Boeder G. Unequal crossing-over between yeast transposableelements. Molec. Gen.Genet., vol.I90,p.II7-I2I, 1983.

157. Roomans G.M., Borst-Pauwels G.W.F.H. Cotransport of phosphate and sodium by yeast. Biochim. Biophys. Acta,vol.467, p.65-71, 1977.

158. Rose J.Z. , Squires C.b., Janofsky C., Yang H.L., Zubay G.

159. Regulation of in vitro transcription of the tryptophan operon by purified RNA polymerase in the presence of partially purified repressor and tryptophan. Nature New Biology, vol. 245,p.133-137, 1973.

160. Rotshtein A., Meir R. Relationship of the cell surface to• ametabolism. IY. The role of cell surface phosphatase of yeast. J. Cell. Сотр. Physiol., vol.34,p.97-106, 1949.

161. Schmidt G., Bartsch G., Laumont M.C., Herman T.,Liss M.

162. Acid phosphatase of baker yeasts an enzyme of the external cell surface. Biochemistry, vol.2,p.I26-I3I, 1963.

163. Schtirch A., Miozzari J, Htttter R. Regulation of tryptophanbiosynthesis in Saccharomyces cerevisiae. Mode of action of 5-methyl-tryptophan sensitive mutants. J. Bacteriol., vol. 117, p. 1131-1X40,1974.

164. Schurr A., Yagil E. Regulation and characterization of acidand alcaline phosphatase in yeast. J. Gen. Microbiol.,vol. 65,p.291-298, 1971.

165. Schweizer E., Kneip В., Castorph H., Holzer U. Pantetheine- free mutants of the yeast fatty acid synthetase complex. Eur. J. Biochem., vol.39, p.353-362, 1973.

166. Tryptophanyl tRNA and tryptophanyl tRNA synthetase are not required for in vitro repression of the tryphophan operon. Nature New Biology vol.245,PЛ31-133, 1973.

167. St John T.P., Davis R.W. The organization and transcriptionof the galactose gene cluster of Saccharomyces. J. Mol. Biol., vol.152,p.285-315, 1981.

168. Stephens I.C., Arst S.W., Ames B.N. Guanosine-5'-diphosphate3'diphosphate (ppGpp):positive effector for histidine operQn transcription and general signal for aminoacid deficiency. Proc. Nat. Acad. Sci. USA,vol.72,p.4389-4393, 1975.

169. Struhl K. Promoter elements, regulatory elements, and chromatin structure of the yeast HIS3 gene. Cold Sprig Harb. Symp. Quant. Biol., vol.47,pt2, Cold Spring Harb. New York, p. 901-910, 1983.

170. Tauro P., Holzner., Castorph H., Hill P., Schweizer E. Genetic analysis of noncomplementing fatty acid synthetase mutants in Saccharomyces cerevisiae. Molec. Gen.Genet., vol. 129,p. I3I-I48, 1974.

171. Thill G., Kramer R.A. Mapping of the 5'-termini of yeastrepressible acid phosphatase iriRNA and sequence analysis of the 5'-flanking region. Cold Spring Harbor Symp. Meet., I98I,p.62

172. Thill G.P., Kramer R.A., Turner K.I., Bostian K.A. Comparative analysis of the 5'-end regions of two repressibleacid phosphatase genes in Saccharomyces cerevisiae. Preprint.

173. Thorner J. An essential role for cyclic AMP in growth control: The case for yeast. Cell, vol. 30,p.5-6, 1982.

174. Thuriaux P., Ramos P., Pierard A., M.Grenson, Wiame J.-M.

175. Regulation of the carbamoyl phosphate synthetase belonging to the arginine biosynthetic pathway of Saccharomyces cerevisiae. J. Mol. Biol., vol. 67, p.277-287, 1972.

176. Tiissen I.P.P., Blekes H.W., van Stevenink J. Localizationof polyphosphates at the outside of the yeast cell plasma membrane. Biochim. Biophys. Acta, vol.649,p.529-532, 1981.

177. Toh-E ,A., Oshima Y. Characterization of a dominant constitutive mutations PH00, for the repressible acid phosphatase synthesis in Saccharomyces cerevisiae. J. Bacteriol.,vol. 120, p.608-617, 1974.

178. Toh-E A., Kakimoto S., Oshima Y. Two new genes controllingthe constitutive acid phosphatase synthesis in Saccharomyces cerevisiae. Molec. Gen. Genet., vol. I4I,p. 81-83, 1975.

179. Toh-E A., Makamura H., Oshima Y. A gene controlling thesynthesis of non-specific alcaline phosphatase in Saccharomyces cerevisiae. Biochim. Biophys. Acta,vol.428,p.182-192, 1976.

180. Toh-E A., Inouye S., Oshima Y. Structure and function ofthe PH082-pho4 locus controlling the synthesis of repressible acid phosphatase of Saccharomyces cerevisiae. J.

181. Bacterid., vol.145, p.221-231,1981.

182. Toh-E A., Kaneko Y., Akimari J., Oshima Y. Ail insertionmutation associated with constitutive expression of re-pressible acid phosphatase in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Gen. Genet., vol. 191, p. 339-346, 1983.

183. Travers A. Protein contacts for promoter location in eucaryotes. Nature, vol. 303, p.755-758,1983.

184. Trimble R.B., Maley F. Subunit structure of external invertase from Saccharomyces cerevisiae. J. Biol. Chem.,vol. 252,p.4409-4412,1977.

185. Tsuyumi S., Adams B.G. Population analysis of the deinductionkinetics of galactose long-term adaptation mutants of yeast. Proc. Nat. Acad. Sci.USA, vol.70,p.919-923, 1973.

186. Ueda I., Oshima Y. A constitutive mutation, phoT, of the repressible acid phosphatase synthesis with inability to transport inorganic phosphate in Saccharomyces cerevisiae. Molec. Gen. Genet., vol.136,p.255-259, 1975.

187. Weimerg R. Polyphosphate levels in nongrowing cells of

188. Saccharomyces mellis as determined by magnesium ion and the phenomenon of "ubercompensation". J.Bacteriol., vol.1.I,p.II22-II30, 1975.

189. Welch I.W., Pogel S., Cathala G., Karin M. Industrial yeastdisplay tandem gene iteration at the CUPI region. Mol.v Cell. Biol., vol. 3, p.1353-1361, 1983.

190. Whithey P.A., Magasanik B. The induction of arginase in

191. Saccharomyces cerevisiae. J.Biol. Chem., vol.6197-6202, 1973.

192. Wiame I.M. The regulation of arginine metabolism in Saccharomyces cerevisiae. Exslusion mechanisms. Curr. Top. Cell. Rep. vol.4,P.1-38, 1971.

193. Wieland P., Renner L., Verfiirth C., bynen P. Distributionof yeast fatty acid synthetase subunits: Three-dimensional model of the enzyme. Eur. Biochem., vol.94,p.189-197, 1979.

194. Willsky G.R., Bennett R.L., Malamy M.H. Inorganic phosphatetransport in E.coli: Involvement of two genes which play role in alcaline phosphatase regulation. J. Bacteriol., vol.113»P.529-539, 1973.

195. Winge 0., Lautsen 0. Artificial species hybridization in yeast

196. Comp.Rend Lab.Carlsberg., Ser.Physiol., vol.22,p.235245, 1938.

197. Winkler M.E., Roth D.I., Hartman P.E. Promoter and attenuator-related metabolic regulation of Salmonella thyphimurium histidine operon. J Bacteriol., vol.133,p.830-843,1978.

198. Wipf B. Regulation of activity and synthesis of N-acetylglutamate synthase from Saccharomyces cerevisiae. J.Bacteriol. , vol.140,p.874-880, 1979.

199. Автор глубоко признателен своим научным руководителям С.А.Кожину и С.Г.Инге-Вечтомову за постоянную помощь и поддержку при проведении данного исследования.

200. Автор благодарен В.В.Аленину, Н.А.Уразмановой, Л.А.Шарыповой за постоянную помощь, оказанную при выполнении биохимических экспериментов, а также М.Г.Самсоновой и Д.А.Горденину за плодотворное обсуждение результатов работы.

201. Постоянную помощь и поддержку при проведении данного исследования автору оказывали сотрудники кафедры генетики и селекции ЛГУ. Всем им автор выражает глубокую признательность.