Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение экспрессии генов, участвующих в системном контроле деления клеток и дифференцировки у высших растений, на модели спонтанного опухолеобразования у инбредных линий редиса (Raphanus sativus var. Radicula Pers.)
ВАК РФ 03.00.15, Генетика
Автореферат диссертации по теме "Изучение экспрессии генов, участвующих в системном контроле деления клеток и дифференцировки у высших растений, на модели спонтанного опухолеобразования у инбредных линий редиса (Raphanus sativus var. Radicula Pers.)"
САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
На правах рукописи ООЗОЪ Í J40
ДОДУЕВА Ирина Евгеньевна
ИЗУЧЕНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В СИСТЕМНОМ КОНТРОЛЕ ДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК И ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ У ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ, НА МОДЕЛИ СПОНТАННОГО ОПУХОЛЕОБРАЗОВАНИЯ У ИНБРЕДНЫХ ЛИНИЙ РЕДИСА (Raphanus sativus var. Radícula Pcrs.)
03.00.15 - генетика
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2007
003057343
Работа выполнена на кафедре генетики и селекции Санкт-Петербургского Государственного университета и в лаборатории Генной и клеточной инженерии растений биологического НИИ СПбГУ.
Научный руководитель:
доктор биологических наук, профессор Лутова Людмила Алексеевна
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор Шишова Мария Федоровна
доктор биологических наук, профессор Ежова Татьяна Анатольевна
Ведущее учреждение:
Всероссийский Научно-Исследовательский Институт Растениеводства им. Н.И. Вавилова
Защита состоится у¿(ССср 2007 г. в / ^ часов на заседании
Диссертационного совета Д.212.232.12 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Санкт-Петербургском Государственном университете по адресу: 199034 Санкт-Петербург, Университетская наб. 7/9, СПбГУ, биолого-почвенный факультет, кафедра генетики и селекции, аудитория 1.
С диссертацией можно ознакомиться в центральной библиотеке Санкт-Петербургского Государственного университета
Автореферат разослан "/>У' ¿и^С&С/?2007 г.
Ученый секретарь Диссертационного совета
Кандидат биологических наук Л.А. Мамон
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Изучение системного контроля деления и дифференцировки клеток является одной из актуальных задач современной биологии развития. Большая часть механизмов контроля клеточного цикла высоко консервативна у всех эукариот. В то же время, растения имеют свои уникальные механизмы контроля, связанные с особенностями их морфогенеза. У высших растений выявлены три основных уровня регуляции деления и дифференцировки клеток (Veit, 2006; Scofield and Murray, 2006; Dodueva et al., 2007). На первом уровне действуют механизмы, непосредственно участвующие в регуляции клеточного цикла. Контроль клеточного цикла у растений главным образом связан с регуляцией активности комплексов циклинов и циклин-зависимых киназ (CDК), которые играют важную роль на всех его этапах (Ramirez-Parra et al., 2005). Второй уровень контроля связан с поддержанием и обеспечением нормальной функции меристем - образовательных тканей, включающих в себя пул недифференцированных, быстро делящихся стволовых клеток. К основным регуляторам развития меристем относятся гомеодомен-содержащие транскрипционные факторы семейства KNOX (Scofield and Murray, 2006). Важную роль на третьем уровне контроля деления клеток растений играют фитогормоны, в частности цитокинины и ауксины, для которых показано прямое или опосредованное участие в регуляции клеточного цикла и развития меристем. Изменения нормальной функции генов, действующих на любом из этапов системного контроля, нарушает баланс деления и дифференцировки клеток, что может приводить к различным нарушениям морфогенеза.
Одной из возможных моделей для изучения системного контроля деления и дифференцировки клеток является опухолеобразование. Опухолеобразование представляет собой результат выхода отдельных клеток или клеточных популяций из-под системного контроля, что приводит к их неконтролируемой пролиферации. У растений подробно изучен ряд примеров спонтанного опухолеобразования, зависящего от генотипа растений (Ahuja, 1998; Frank et al., 2002; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2003; Нарбут, 1967) и индуцированного опухолеобразования, вызванного взаимодействием с патогенами (Jameson, 2000). Одной из общих характеристик растительных опухолей разного происхождения является изменение баланса цитокининов и ауксинов как основной механизм индукции опухолеобразования (Jameson, 2000; Frank et al., 2000; Lee et al., 2003; Harrar et al., 2003; Matveeva et al., 2004). Кроме того, в опухолях разного происхождения обнаружено повышение уровней экспрессии ряда генов, участвующих в контроле клеточного цикла (гены циклинов и CDK) и регуляции развития меристем (гены KNOX), а также гормон-регулируемых генов, продукты которых действуют в передаче сигнала цитокининов и ауксинов (гены семейств ARR и Aux/IAA) (Bird and Koltai, 2000; Wang et al., 2001; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2004; Stieger et al., 2004; Osipova et al., 2006). За последние годы при изучении спонтанных и индуцированных опухолей у разных видов растений растений было получено множество новых данных о генах, участвующих в контроле деления и дифференцировки клеток (Wang et al., 2001; Harrar et al.,
2003; Lee et al., 2003; Moriuchi et al., 2004; Slieger et al,, 2004; Da Cosía et al., 2006; Smyezynski el al., 2006). Таким образом, привлечение новых моделей для изучения механизмов опухолевого роста у растений открывает возможность для изучения механизмов системного контроля деления и дифференцнровки растительных клеток.
Данная диссертационная работа посвящена изучению спонтанного опухолеобразования у инбредных линии редиса (Raphamts sativiis var. Radícula Pas.). Работа была выполнена на уникальной генетической коллекции вы со ко инбредных линий редиса, созданной сотрудниками лаборатории генетики растений БиНИИ СПбГУ. Генетическая коллекция редиса поддерживается более 40 лет и является источником мутантов с различными нарушениями морфогенеза, а также ценных для селекции форм (Нарбут, 1966; Lutova et al,, 1997: Матвеева и др., 2000; Бузовкина и др., 2000; Карпинская и др., 2005; Osipova et al,, 2006). Десять из тридцати линий генетической коллекции редиса формируют опухоли на корнеплоде з период цветения с частотой 50% и более (Нарбут и др., 1995); у одной линий отмечен другой тип опухолевого роста израстание завязи - связанный с развитием эктопических меристем из тканей стенки завязи (Мельников, 1998). К достоинствам инбредных линий редиса как модели дчя изучения опухолеобразования у высших растений относятся диплоидность, высокий уровень гомозиготностн и генетическая однородность материала, полученные в результате длительного инбридинга, а также близкое родство Raphamts sativus с модельным объектом генетики Arabiéopsis íhaliana, что облегчает идентификацию генов, участвующих в контроле деления клеток у редиса, по гомологии с соответствующими генами арабидопсиса.
Рис. 1. Опухоли на корнеплодах инбредных линий редиса.
Цели, и задачи работы- 1 (елями данной работы были: 1). Сравнительное изучение морфогенстических реакций растений-регеперантов
опухолеобразуютих и безопухолевых линий редиса на цитокинины разного типа строения и 2). Сравнительное изучение экспрессии гена RsCycDS, участвующего в контроле клеточного цикла, гена RsKNATl, участвующего в контроле развитий меристем, и гена RsARR, участвующего в регуляции ответа на цитокинины, у опухелеобразу¡oíних и безопухолевых линий редиса. В работе были поставлены следующие задачи:
1. Анализ морфогенетических реакций на цитокинины разного типа строения у опухолеобразующих и безопухолевых инбредных линий редиса.
2. Поиск в геноме редиса генов CycD3, KNAT1 и ARR по гомологии с соответствующими генами арабидопсиса.
3. Изучение экспрессии генов RsCycD3, RsKNATl и RsARR у опухолеобразующих и безопухолевых линий редиса на разных стадиях развития in vivo.
4. Изучение экспрессии генов RsCycD3, RsKNATl и RsARR у опухолеобразующих и безопухолевых линий редиса при ответе на цитокинины in vitro.
Научная новизна работы. В ходе выполнения данной работы впервые были получены данные о различиях инбредных линий редиса по реакции на цитокинины разного типа строения, в том числе - о влиянии разных цитокининов на опухолеобразование. В геноме редиса идентифицированы гены RsCycD3, RsKNATl и RsARR по гомологии с генами CycD3, KNAT1 и ARR5 Arabidopsis ihaliana. Впервые проведено сравнение уровней экспрессии генов RsCycD3, RsKNATl и RsARR в тканях опухолеобразующих и безопухолевых линий редиса на разных стадиях развития in vivo и при ответе на цитокинины разного типа строения in vitro. Выявлены различия в экспрессии этих генов у линий редиса, различающихся по способности к опухолеобразованию. Получены данные, свидетельствующие о связи экспресс™ генов RsCycD3, RsKNATl и RsARR с особенностями морфогенеза растений и позволяющие предположить участие этих генов в контроле опухолеобразования у инбредных линий редиса.
Практическая ценность. Результаты, полученные при выполнении данной работы, могут быть использованы в учебных курсах «Генетика развития растений», «Генная инженерия и биотехнология» и других курсов, входящих в учебный план кафедры генетики и селекции СПбГУ, а также биологических факультетов других вузов страны.
Апробация работы. По результатам работы были сделаны сообщения на следующих конференциях: 7й международный конгресс по молекулярной биологии растении ISPMB, Барселона, Испания, 23-28 июня 2003 г.*, Зй съезд генетиков и селекционеров России «Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития», Москва, 6-12 июня 2004 г.; международная конференция «Сохранение генетических ресурсов», Санкт-Петербург, 19-22 октября 2004 г.; 1я международная школа-конференция для молодых ученых «Биотехнология и эмбриология», Санкт-Петербург, 4-9 декабря 2005 г.; 10я Пущинская школа-конференция для молодых ученых, Пущино, 17-21 апереля 2006 г.; 15й конгресс FESPB 17-21 июля 2006 г., Лион, Франция; а также на семинарах лаборатории генной и клеточной инженерии растений БиНИИ СПбГУ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа включает в себя введение, обзор литературы, описание материала и методов исследования, полученные результаты и их обсуждение, выводы, список литературы (313 источников). Работа изложена на 175 страницах и содержит 30 рисунков и 8 таблиц.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Растительный материал. Материалом для работы послужили высокоинбредные (35-40 поколений инбридинга) линии из Петергофской генетической коллекции редиса (Нарбут, 1966). В работе были использованы три пары родственных линий:
• Сорт Вировский Белый - линии 6 и 13
• Сорт Сакса - линии 30 и 19
• Сорт Ледяная сосулька - линии 34 и 32
Линии 13, 19 и 32 с высокой частотой (52-100%) формируют опухоли на корнеплоде. Линия 34 относится к линиям с низкой частотой образования опухолей на корнеплоде (0,5-15%). Линия 6 также с низкой частотой формирует опухоли на корнеплоде (10-18%), в то же время, это единственная линия редиса, для которой характерно развитие израстаний завязи (95-100%). Линия 30 является безопухолевой (частота опухолеобразования 0%). Ранее инбредные линии редиса были охарактеризованы по ряду морфологических признаков in vivo, а также особенностям регенерации и реакции на гормоны in vitro. (Нарбут, 1966; Бузовкина и др., 1991, 1993; Lutova et al., 1997; Матвеева и др., 2000; Matveeva et al., 2004; Ильина и др., 2006). В частности, у молодых растений редиса, регенерированных из апексов на средах с цитокининами, бьшо описано формирование корнеплодоподобных структур (КС) - разрастаний базальной части гипокотиля, морфологически и анатомически сходных с корнеплодами интактных растений. На КС опухолеобразующих линий отмечено формирование вторичных опухолей, способных к гормон-независимому росту (Бузовкина и др., 1993; Lutova et al., 1997; Ильина и др., 2006).
Для изучения уровней экспрессии генов RsKNATl и RsCYCD3 in vivo и in vitro был использован следующий растительный материал:
In vivo был проанализирован следующий растительный материал от каждой линии на трех стадиях развития:
• I стадия - стадия розетки - 1) ткани корнеплода 2) молодые листья
• II стадия - формирование стрелки - 1) ткани корнеплода 2) молодые побеги
• III стадия - начало цветения - 1) ткани корнеплода 2) молодые побеги Согласно ранее полученным данным (Matveeva et al., 2004), на стадии II происходит повышение уровня цитокининов в тканях растений редиса и индукция опухолеобразования. На стадии III у растений опухолевых линий 13, 19 и 32 мы наблюдали опухоли на корнеплодах.
In vitro был проанализирован следующий материал от каждой линии:
• Целые растения после 7 и 30 дней инкубации на безгормональной среде MS0
• Целые растения после 7 дней инкубации на среде с тидиазуроном
• Растения после 30 дней инкубации на среде с тидиазуроном (1 мг/л) -1)побеги, 2)КС, 3)вторичных опухоли, которые образуются на КС всех линий, кроме 30, неспособной к цитокинин-индуцированному опухолеобразованию.
• Растения после 30 дней инкубации на среде с бензиламинопурином (2 мг/л) -
1)побеги 2)КС 3)вторичные опухоли (у всех линий, кроме 30)
• Растения после 30 дней инкубации на среде с кинетином (2 мг/л) - 1)побеги
2)КС
Метод асептической культуры изолированных органов растений in vitro. Мы проводили регенерацию растений инбредных линий редиса из изолированных апексов на средах с цитокининами разного тина строения -тидиазуроном (ТДЗ) (1 мг/л), бензиламинопурином (БАП) (2 мг/л) и кинетином (2 мг/л) с последующим анализом особенностей морфогенеза растений-регенерантов. Концентрация каждого из цитокининов была минимальной, но достаточной для проявления физиологического эффекта и выявления различий между линиями (Бузовкина и др., 1993; Ильина и др., 2006). В качестве контроля использовали растения-регенеранты на безгормональной среде (MS0). На 30-й день культивации проводили учет растений-регенерантов по диаметру КС, относительной площади вторичных опухолей (в баллах), количеству побегов и придаточных корней. Для вторичных опухолей был проведен тест на гормон-независимый рост путем культивации изолированных опухолей на среде MS0 в течение трех пассажей по 30 дней. В качестве критерия гормон-независимого роста принимали визуально различимое увеличение опухоли в размерах.
Статистическая обработка данных включала в себя подсчет средних показателей морфогенетических реакций на цитокинины и ошибки среднего (Ивантер и Коросов, 1992).
Клонирование ПЦР-продуктов редиса с ираймерами к генам СусРЗ, KNA Т1
и ARR5. ДНК была выделена из молодых асептических растений редиса и
арабидопсиса с использованием СТАБ-метода (Rogers and Bendich, 1985). Для
амплификации генов были использованы праймеры к консервативным участкам
генов CycD3, KNAT1 nARR5 арабидопсиса:
CYCD3 1: GGA СТС AGC TGTСТС GATGATGTT
CYCD3 2: АСА TAC TTTGTC ТСС ТСС АСС TGC
KNAT ]: TACCAG CAT GAC ААС AGC АСС ACT
KNA Т 2: TGA ATG GGC СТТ GTT A GC ТСС ТСА
ARR5 1 ■ TTG CGT ССС GAG ATG ТТА GA
ARR5 2■ АТС CAG ТСА ТСС CAG GCA ТА
Результаты ПЦР анализировали с помощью электрофореза в агарозном геле. Амплифицированные фрагменты были выделены из агарозного геля на основе легкоплавкой агарозы. ПЦР-фрагменты были клонированы в векторе pTZ57R/T (Fermentas). В работе были использованы химически компетентные бактерии
штамма Е. coli DH5a. Плазмидную Д11К бактерий выделяли из ночных культур индивидуальных клонов по стандартной методике (Дрейпер и др., 1991),
Изу ченне :жс>щесспи remuc RsCycD3, RsKSATl n RsARR A>1 ал и з
экспрессии генов ñsCycD^ RsKNATl и R.svl/iR проводили методом полимеразной цепной реакции, сопряженной с транскрипцией (ОТ-ПЦР). Тотальную РНК выделяли ил растений инбредных линий редиса на разных стадиях развития in vivo и in vitro с помощью гуанй$|ин-тиоцианата (Тютерев, Евстигнеева, 2001). Для очистки проб РНК от примесей геномной ДНК была проведена обработка ДНКазоЙ- Перед постановкой обратной транскрипции концентрацию РНК в пробах измеряли с помощью спектрофотометра при длине волны 260 нм. Чистота проб оценивалась по соотношению оптических плотностей каждой пробы РНК при длинах волны 260 и 280 нм. >[¡va проведения обратной транскрипции бршш одинаковое количество РПК каждой пробы - 5 мкг. Амплификацию кДНК проводили с использованием вышеперечисленных наборов специфических праймеров к ¡ енам RsCycDB, RsKNATl и RsARR. В качестве контроля исгюльзоваШи 11ЦР кДНК с пру йм ерам и к гену убиквитина: Ш1: Л ГС- СЛСАТ(ОТ) СП GTC AAG АС иЫ2: АСС АСС CCG (G/A)A QACGGA G
Для удобства сравнения уровней экспрессии изучаемых генов у инбредных линий редиса Мы исцолъзов&нЙ баллы г/ю оценку интенсивности свечения продуктов ОТ-ПЦР в агарозном геле (табл. i),
Продукт ОТ-ПЦР ИГ ;:sf¡gf ■'1i¡P ■ i ЩР
Балл 0 ¡ 2 3 4
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение особенностей регенерации ппбредяых линий редиса па средах с цитоуишшами.
При культивации на срсде М50 мы не наблюдали интенсивного побегообразования, образования КС и опухолей у растений-регенерантов, а также различий по морфогенетичес&им признакам между растениями-регенерантами разных линий. Культивация на средах с ТДЗ, БАП и кинетином вызывала в соответствии е типом цитокиниш разные морфогенетичеекие реакции у растений-регенерантов редиса: образование КС и вторичных опухолей на КС, интенсивное побегообразование и корнеобразование (рис. 2).
Формирование КС при культ ивации на всех вариантах сред с цитокининами было отмечено у растений-ре генерантов опухолеобразующих линий; безопухолевая линии 30 была неспособна к образованию КС. Среди использованных в работе цитокининов ТДЗ наиболее сильно стимулировал формирование КС, кинетин - наиболее слабо (рис. 3). Линии редиса различались между собой гю диаметру КС (рие. 3): формирование КС большого размера мы наблюдали у растепий-регепераитон опухолеобразующих линий 32, б и 34,
которые формируют крупные корнеплоды in vivo. Формирование вторичных опухолей при культивации растений на средах с цитокйнинами было отмечено у всех опухо.чсобразующих линий. Опухоли максимального размера развивались на средах с ТДЗ и БАП у оиухолеобразующих линий 32, 6 и 34 {рис. 2, 3). Вторичные опухоли характеризовались го р мо н-незав исм ы м ростом, который
Рис. 2. Морфогенетичсскис реакции расте ний-регенеранто в редиса па цитокинины: А - отсутствие видимой морфогенешческой реакции (линия 30, БАП), В - образование КС (линия 34, БАП), В интенсивное побегообразование (линия 6, БАП), Г ко р необразованна (линия 30, к и истин)- Д формирование КС и вторичных опухолей (линия 32, ГДЗ).
Линия 32
Линия 30
Рис. 3. Сравнение морфо генетических реакции растепий-регснерантов опухвцеобразующей линий 32 и без опухолевой линии 30 на разные цитокинины: А - безгормональная среда ¡VISO, Í5 ТДЗ I мг/л, В - БАП 2 мг/л, Г кинетин 2 мг/л.
При культивации на средах с цитокининаии у растений-poiеиерантов всех линий происходило подавление апикального доминирования, что проявлялось в образовании двух и более побегов. В наибольшей степени признак «интенсивное побегообразование» проявлялся на средах с ТДЗ и Г>АП у линий 6 и 32, для которых характерно интенсивное побегообразование in vivo. Корнеобразоващге у
растений всех линий отмечено только на MSO и среде с кннетином, при этом на среде с кинетином к-орнеобразование могло сочетаться с формированием КС и вторичных опухолей.
Различия между инбреднымв линиями редиса по среднему диаметру КС, площади вторичных опухолей, а также интенсивности побега- и корнеобразования представлены на рис. 4. Наиболее значимым результатом является связь особенностей регенерации Щ vitro с опуХСшеобразованием in vivo: а данной работе все ónyхолеобразу Ющие линии формировали КС и вторичный опухоли, тогда как беЗопухолёвая линия 30 была неспособна к Образованию КС и опухолей. А Б
3.5 -, 2.5
Рис. 4. Размеры КС (А), процент площади КС, занятый опухолью (Н), количество побегов (В) и количество придаточных корней (Г) у растений-регенератов инбредных линий редиса при культивации на средах с цитокипипами и без гормональной среде МЯО,
Исходя из полученных в работе результатов, линии редиса можно расположить в
виде следующих рядов в порядке возрастания степени проявления
анализируемых признаков па среде с ТДЗ, на которой отмечено максимальное их
проявле;1ие. Исключение составляет признак «корнеобразование», проявление
которого было отмечено на среде с кинетином.
Образование КС: 30 49 13 - 6 -34 - 32
Образование вторичных опухолей: 30-13-19 - 6 34-32
Интенсивное побегообразований 30- 34— 19— 13 - 32— 6
Кор необразование: 19 32 34 30— 13 -6
Клонирование н секвенидоваиие ИЩ'-ф|>а< смен гов. полученных «щи амшж^шгации геномной ЛИК псднся с г^аймевамим к- i снам CYCD3, А II I и ARR5
При ПЦР ма матрице геномной ДНК редиса с прайме рам и к генам СусОЗ, KNAU и ARR5 Arabídopsis thalkma во всех случаях были получены Продукты ожидаемо! о размера (рис. 5). Амплифицированные фрагменты были Клонированы в векторе pTZ57R/T (i1 го niega).
СусОЗ KNAT1 ARR5
; liltólili - i w.tilH^.v.-r"
■TS ж:®; " ! Щ "Sí Я ? Щ % Ш , ■ Ä 1 Ü Щ Ж & Ш
Д- " I И' # Jí - ' Ш Ш -.Щ^ К
A.t. 6 13 19 30 32 34 A.t. 6 13 19 30 32 5Г Ar в 13 10 30 32 3J
Рис. 5. Результаты ПЦР геномной ДНК инбредных линий редиса с прайме рами к генам CycD3, К.WAT/ и ARR5 Arahidopsis thalicina. АД. - ПЦР-фрагменты арабидопсиса, 6-34 - Ш [^-фрагменты инбредных линий редиса.
При анализе последовательностей ПЦР-фрагментов CYCD3. KNA 77 и A RR 5 редиса был обнаружен высокий процент сходства (более 80%) между 111J фрагментами редиса и соответствующими участками генов CYCD3, KNAT1 и ARR5 арабидопсиса. В дальнейшем гены редиса, гомологичные генам CYCD3, KNAT1 и ARR5 арабидопсиса, мы будем обозначать как RsCYCDS. RsKNATl и RsARR (CYCD3, KNAT! й ARRS Raphanns sativus).
Изучение экспрессии tenon RsCYCDS, RsKiSA77 и RsARR у инбредных линий редиса
Для изучения экспрессии генов RsCYCDS, RsKNATl и RsARR мы использовали метол полуколичественной ОТ-ПЦР. В качестве контроля использовали ОТ-ПЦР с праймерами к гену убиквитна. Мы обнаружили различия между инбредными линиями редиса но экспрессии генов RsCYCD3, RsKNATl и RsARR sä разных стадиях развития in vivo, п гакже при реакции па цитокянины in vitro (табл. 2-7). 'Экспрессии l ena RsCYCDS
In vivo наиболее высокий уровень экспрессии RsCycDS мы наблюдали на стадиях ¡I и Ш в побегах линий 6 и 32 с интенсивным побегообразованием, а также в КС линий 13, 19 и 32, для которых характерна наиболее высокая частота опухолеобразовпния на корнеплоде среди анализируемых линий (табл. 2). In vitro уровень экспрессии Rs СусОЗ у опухолеобразующих линий повышался при наличии цитокининов в среде. Самый высокий уровень экспрессии RsCycDÍ в побегах был отмечен у побегообразующих линий 6 и 32 на средах с ТДЗ и БАП, самый низкий - в побегах линии 30, для которой характерно формирование одного побега на всех вариантах сред. В КС и вторичных опухолях уровень экспрессии RxCvcDS достигал максимума у линий 32 и 34, которые формировали
СусОЗ
шшщ......
I
KNAU
AP.R5
шж
щш
тт^життШШШШШШШШШт
Wjk {Щ? Ш?,
■ Щ ....
-
A.t. 6 13 19 30 32 34 At. б" 13 19 30 32 34 A.t. 6 ¡ 3 1 9 30 32 34
КС и опухоли большого размера. Таким образом, высокий уровень экспрессии ЯхСус&З имел место 15 тканях растений редиса, для которых характерна активная пролиферация клеток: в побегах побегаобразующих линий, КС и корнеплодах опухолеобра%'ющих линий.
Табл. 2 Экспрессия гена RsCycD3 у инбредных линий редиса на разных стадиях развития in vivo.
Стадии Органы Ливии
развития 6 lf 19 30 32 34
фраг- бал фраг- бап фраг- Fian фраг- бал фраг- &ап фраг- бал
мент п мент л мент Л мент л мент л мент л
Стадия побеги ¡¡II 2 W& 2 0 0 0 0
розетки корнеплод Ж 2 ШШ 2 :Ш 2 0 ¡ШШ- 0 1
Образование побеги 1ё 2 ШШ 2 :«1 2 ■ 1 2 2
итрелки корнеплод Л 3 3 2 0 Ш 4 JL38¡U 1
Цветение побели Él 3 1 ■ШШ: 1 1 Я 2 Шк 1
корнеплод j§¡¡ 1 ш 4 3 0 3 '-ШШ* 0
Табл. 3. Экспрессия гена RsCycDS у рас те н и ¡¡-регенератов инбредных линий редиса in vitra
Условия Линия
культивации 6 13 19 30 32 34
фрег- Sai фраг- Бая фраг- бал фр»Г- бал фраг- Sin фраг- ti ал
ыент л мент л мент л мент л мент л мент л
MS0 ш 0 1 0 "Ш 0 ■ §¡¡ 0 т I .«¡¡ti 0.5
7 дней ТДЗ ш 2 ¿Я ш 2 т 4 18 1 т. 3 ШЩ 2
30 дней побеги 2 1 1 2 v у--:-. 2 0 5 |Ц 3 1
ТДЗ КС .Ж о Ж ¿Л Яр 2 ., Щщ? 0 ш. 3 s i§¡§¡í 2
опухоль -Ж 2 Щ' Sis"™ ■■ 1 1 - - ■ Ш" 3 3
30 дней побеги Ш 2 Íésf 2 1 0.5 Шй 2 2
БАИ КС ■ ijjnüii; 2 ■■■ щ 2 ■ 3 .ISE 0 ||В 3 :WM' 3
опухоль :Jif¡ 1 1 ш :::. 1 щш 0.5 - - н 3 тт\ 3
30 дней побеги 1 ШИН 1 ш 0.5 0.5 3 1
кинетин КС 1 ■ ' И 0 1 0.5 ^ 14111 0 3 ':Ш 2
'Экспрессия гена RsKN/УП
¡n vivo мы наблюдали низкий уровень экспрессии RsKNATl в корнеплодах и листьях всех линий на станин I и повышение его экспрессии на стадиях [I и ¡I!. В пробах из тканей корнеплода на стадиях II и III визуально детектируемые П1 [Р-продукгы мы наблюдали только у линий 6, 13, 19, 32 - то есть у линий, для которых характерен опухолевый рост. Родственные линии 19 я 30, контрастно различающиеся по о пухол »образованию, демонстрировали наибольшие различия по уровням экспрессии RsKNATl в тканях корнеплода: самый высокий уровень экспрессии RsKNATl в корнеплодах мы наблюдали у линии 19 на
стадии ill; В корнеплодах безопухолевой линий 30 на этой стадии визуально детектируемых IK IP-продуктов не выявлено (табл. 4).
Табл. 4. Экспрессия гена RsKNA TI у инбредных линий редиса на разных стадиях развития in vivo.
Стадии Органы Линий
развития 6 13 19 30 32 34
фраг- бал фраг- бал фр4Г- | 6ш фраг бал фрат- бал фраг- бап
мент л мент л мент ; -л кент л forerír л мент ■д
Стадия листья mm 3 Ийй 2 i i ■■; 0.5 Ж 1 ШШ- 0.5 ТРрШчй 0.5
розетки пор НС-ПЛОД 0 0 ЩЩ 0 ян 0 0 G
Образование побеги щшш. 3 з iiip 4 т 4 ш л ш 1
стрелки корнеплод 05 1 ЩрЩ 0 5 ■ 0 0 0
Цветение побеги ш 3 3 ШШш А А 4 . ш., 3
корнеплод ш 2 2 ||Щ з 0 5 ш 2 ш §111 0
Табл. 5. Экспрессия гена Rs KNAT1 у растений-рсчснерантов инбредных линий редиса in vitro
Условия культивации Линия
б 13 ^ 15 зс 32 34
фрагмент баи л фрагмент ода л Фрагмент бал л фрагмент бал л фрагмент Ё4П JI фрагмент Бап л
MS0 ЁШШ 0.5 0 5 ■ - 5 : 0 ЁЙЙй ^-líif'í 0 05 0
7 дней ТДЗ ■ ■■ 2 till 1 1 1 "ill Ir::.. 1
30 дней ТДЗ побеги т 4 ш : tío: orí; 3 Ж 3 ш 2 4 'йбцн«" 4
КС ^íi--::/ :: 0.5 t|l§|| 2 1 ив 0.5 ¡■Ж 4 2
онуколь 0 ШМ 0 0.5 - гтш «Яш? 2 ЧШШ. 1
30 дней БАЛ побеги 4 -1ÉÍ1P 2 Ш; 2 1 4 Ир! 2
КС .: i :. л 5 0 5 0.5 0 2 ж 2
опухоль 0.5 0 0.5 - - 0 тШя 0
30 дней кинетин побеги ш 2 ■ .; в 0.5 ЯВИ 2 Щ 05 ......... 3 tlB 1
КС 05 0.5 ill! 1 1 ЙЩ 0 Шт 0 .. ... 0.5
Ш vitro выявлены различия между линиями редиса по экспрессии RsKNATl как на безгормональной среде, так и па средах с цитокининами. Самый высокий уровень экспрессии этого гена в побегах растений-регенерантов на среде MS0 и цитокинип-содержащих средах отмечем у пОбёшобразующйх линий 6 и 32, самый низкий - у линии 30, которая характеризуется слабым проявлением морфогенетических реакций на цитокипины, В то же время, в КС наиболее высокий уровень экспрессии RsKNATl выявлен у опухолеобразующих линий сорта Вировский Белый 32 и 34, формирующих КС и Вторичные опухоли большого размера. У линии 30, не образующей КС, не выявлено визуально детектируемых ПЦР-продуктов в пробах из базальной части гипошгиля (табл.
5).
Таким образом, как и г> случае гена RsCycD3, высокий уровень экспрессии гена RsKNATÍ in vitra имел место в тканях с повышенной меристематической активностью КС и вторичных опухолях у растений-регенерантов опухолеобразующих линий, в побегах у линий с интенсивным побегообразованием.
Изучение экспрессии mía RsARR
[п vivo продукты ОТ-ПЦР низкой интенсивности б ¡.тли отмечены только у опухолеобразующей линии 19 на стадиях II и If] и отсутствовали у остальных линий на всех стадиях развития.
При изучении экспрессии гена RsARR у растений-регенератов редиса in vitro мы наблюдали различия между линиями по уровням экспрессии этого гена на среде M SO и штокинин-содержащих средах. У растений-регенерантов на среде MS0, визуально детектируемые II I [Р-продукты были отмечены только для линии 19 и отсутствовали у всех остальных линий.
Табл.6. Экспрессия гена RsARR у растений-регенератов инбрелных линий редиса in vitro.
Условия Линия
культивации 6 13 19 30 32 34
фрагмент бал л фраг. мет Ran л фрагмент бал л фрагмент бал л фрагмент бал л фрагмент Бал л
MSÜ |!'!!Н: 0.5 К 05 5 ; 0 i || 0 05 шш • ШШ; 0
7 дней ТДЗ ■ J»«*" 2 1 ЙааЁ i 1 2 à 1
30 дней побеги iïjHH;: 4 ■|§|: 3 3 : ¡f 2 4 щ 4
ТДЗ КС 0.5 ■■: ■ 2 1 li ir 0.5 ** 4 яК 2
опухоль 0 0 0.5 - 2 1
30 дней побеги 4 2 шщ 2 шш 1 4 г» 2
ъАП КС 0.5 ШР 05 05 "tiSar-: 0 illl! 2 m 2
опухоль 0.5 0 ЯШ 0.5 ¡till 0 0
30 дней побеги 2 i ' 05 ■ш 2 0.5 Ш ШШ 3 1
кинетин КС 0.5 fiPc 0.5 , щш 1 0 ЙШК 0 0.5
При культивации на средах с цитокининами уровень экспрессии RsARR у всех анализируемых линий повышался. В тканях листьев и побегов самый высокий уровень экспрессии RsARR мы наблюдали у п о бе roo бр азу ю щей линии 6, самый низкий - у линии 30, которая характеризуется слабым побегообразованием. В КС и вторичных опухолях наиболее высокий уровень экспрессии RsARR отмечен у опухолеобразующих линий 6, 32 и 34, формирующих КС и вторичные опухоли большого размера, а также линии i 9, которая по нашим данным характеризуется 100% опухолеобразованием in vivo и повышенной чувствительностью к цитокининам in vitro (Бузовкина, 1993; Вузовки на и др., 1993: Нарбут и др., 1995). У линии 30, не образующей КС, отмечен самый низкий уровень экспрессии RsARR в базальной части гйпокотиля (табл. 6).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
И гак, мы обнаружили, что наиболее высокий уровень экспрессии генов RsCycD3, RsKNATI и RsARR у инбредных линий редиса in vitro и in vivo наблюдается в тканях с повышенным уровнем меристематической активности: побегах линий с интенсивным побегооразованием, а также корнеплодах и КС опухолеобразующих линий. Полученные данные позволяют предположить участие генов RsCycD3, RsKNATI и RsARR в контроле меристематической активности клеток редиса. По литературным данным повышение уровней экспрессии генов циклинов, KNOX генов и генов семейства ARR А-типа отмечено при опухолеобразовании у мутантов арабидопсиса, межвидовых гибридов и трансгенных растений табака (Wang et al., 2001; Frank et al., 2000, 2002; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2003). Таким образом, мы можем предположить сходные механизмы опухолеобразования для инбредных линий редиса.
Повышение уровней экспрессии генов разных групп при опухолеобразовании свидетельствует о сложной регуляции этого процесса, с вовлечением нескольких уровней системного контроля деления и дифференцировки клеток. В нашей работе мы обнаружили сходную динамику экспрессии генов RsCycD3, RsKNATI и RsARR при образовании опухолей у растений редиса как in vivo, так и in vitro. Эти данные позволяют предположить взаимодействие этих генов в контроле опухолеобразования у инбредных линий редиса. В литературе имеются данные о взаимодействии метаболизма и передачи сигнала цитокининов, транскрипционных факторов KNOX и циклинов класса D. Описано повышение уровней экспрессии генов KNOX и генов циклинов класса D в ответ на обработку цитокининами (Rupp et al., 1999; Riou-Khamlichi et al., 1999), сходные данные мы получили в этой работе при изучении экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATI у растений-регенерантов редиса in vitro. Таким образом, в соответствии с данными о значительном повышении содержания цитокининов в корнеплодах опухолеобразующих линий на стадии цветения (Matveeva et al., 2004), мы предполагаем, что повышенный уровень цитокининов стимулирует экспрессию генов RsCycD3 и RsKNATI. Усиление их экспрессии может вызывать активную пролиферацию клеток древесинной паренхимы, которые дают начало опухолям (Ильина и др., 2006). По литературным данным, с повышенным уровнем экспрессии CycD3 связана активная пролиферация растительных клеток, приводящая к каллусообразованию in vitro и развитию гиперплазий in vivo (Dewitte et al., 2003; Boucheron et al., 2005); экспрессия KNAT1 и его ортологов также приводит к усиленной пролиферации клеток и формированию эктопических меристем (Pautot et al., 2001; Frugis et al., 2001; Chiapetta et al., 2005). Следствием повышенного содержания цитокининов в тканях опухолеобразующих линий, по-видимому, является усиление экспрессии генов первичного ответа на цитокинины (Guo et al., 2006), что мы наблюдали в данной работе на примере экспресс™ гена RsARR.
С другой стороны, известно, что повышение экспрессии KNOX генов, в частности, KNAT1, активирует транскрипцию генов биосинтеза цитокинина
AtIPT5 и AtIPT7, а также передачу цитокининового сигнала, о чем свидетельствует повышенный уровень экспрессии гена первичного ответа на цитокинин ARR5 (Jasinski et al., 2005, Yanai et al., 2005). В норме экспрессия гена KNAT1 и его гомологов наблюдается в апикальной меристеме побега (Lincoln et al., 1994; Reiser et al., 2000), более низкий уровень экспрессии этого гена отмечен также в нижележащих тканях стебля (Lincoln et al., 1994) и в корне (Truernit et al., 2006). Экспрессия KNAT и его ортологов повышается при опухолеобразовании у мутантов арабидопсиса и трансгенных растений табака (Frank et al., 2002; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2003). Мы наблюдали экспрессию гена RsKNATl в побегах всех линий, в то же время, в корнеплодах редиса визуально детектируемая экспрессия RsKNATl выявлена только у линий, с высокой частотой опухолеобрпазования. Можно предположить, что одной из причин повышения концентрации цитокининов в корнеплодах опухолеобразующих линий при переходе к цветению (Matveeva et al., 2004) является высокий уровень экспрессии RsKNATl в корнеплодах. С усилением экспрессии RsKNATl может быть связан также повышенный уровень цитокининового ответа у опухолеобразующих линий, маркером которого является обнаруженный нами высокий уровень экспрессии RsARR. Таким образом, можно предположить наличие двух возможных схем конгроля опухолеобразования у инбредных линий редиса:
1). повышение содержания цитокининов в корнеплодах при переходе к цветению повышение уровней экспрессии RsCycD3 и RsKNATl, а также генов первичного ответа на цитокинины (в частности, RsARR) пролиферация клеток древесинной паренхимы опухолеобразование.
2). высокий уровень экспрессии RsKNATl в корнеплодах усиление биосинтеза и передачи сигнала цитокининов, следствием чего является повышение уровня экспрессии RsARR повышение уровня экспрессии RsCycD3 пролиферация клеток древесинной паренхимы опухолеобразование.
Выводы
1. Выявлены различия между инбредными линиями редиса по степени проявления морофгенетических реакций на цитокинины in vitro — формированию КС, вторичных опухолей, побего- и корнеобразованию. Растения-регенеранты опухолеобразующих линий редиса на средах с цитокининами формируют КС и вторичные опухоли, способные к гормон-независимому росту, тогда как безопухолевая линия не способна к формированию КС и опухолей.
2 Обнаружены различия синтетических цитокининов разного типа строения (ТДЗ, БАП, кинетин) по способности индуцировать морфогенетические реакции у растений-регенерантов инбредных линий редиса. Показано, что наибольшую активность в индукции КС и вторичных опухолей у растений-регнерантов редиса имеет ТДЗ.
3.В геноме редиса выявлены гены RsCycD3 (семейство циклинов класса D), RsKNATl (семейство KNOX) и RsARR (семейство ARR A-типа) по гомологии с генами арабидопсиса. Степень гомологии ПЦР-продуктов редиса с соответствующими участками генов CycD3-l, KNAT1 и ARR5 арабидопсиса составляет более 80%.
4. Выявлены различия по уровням экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATl между опухолеобразующими и безопухолевыми редиса у растений in vivo и in vitro: показан высокий уровень экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATl в корнеплодах опухолеобразующих линий, в побегах линий с интенсивным побегообразованием in vivo, а также в КС, вторичных опухолях, и побегах тех же линий in vitro. У растений-регенерантов безопухолевой линии выявлен низкий уровень экспрессии RsCycD3 и RsKNATl in vivo и in vitro во всех частях растений.
5.Обнаружено повышение уровней экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATl у растений-регенерантов редиса in vitro при наличии цитокининов в среде.
6 Показан высокий уровень экспрессии гена RsARR у растений-регенерантов in vitro на средах с цитокининами в побегах, КС и вторичных опухолях опухолеобразующих линий. У растений-регенерантов контрольной безопухолевой линии на средах с цитокининами выявлен низкий уровень экспрессии RsARR.
Список публикаций по теме диссертации Матвеева Т.В., Додуева И.Е., Вуд Д., Бузовкина И.С., Лутова Л.А., Нестер Ю. Изучение роли фитогормонов в процессе опухолеобразования у редиса. Генетика, 2000. т.36 с. 203-208.
Vlatveeva T.V., Frolova N.V., Smets R., Dodueva I.E., Buzovkina I.S., Van Dnckelen H., Lutova L.A. Hormonal control of tumor formation in radish. Journal Df Plant Growth Regulation. 2004. v. 23. p. 37-43.
Цодуева И.Е., Фролова H.B., Власенко M.A., Монахова В.А., Лутова Л.А. Трансформация инбредных линий редиса (Raphanus sativus L.) генами Т-ДНК нробактерий: изменение опухолевого фенотипа и реакции на фитогормоны у грансгенных растений. Вестник биотехнологии и физико-химической жологии. 2005. №2. с. 20-25.
Ильина Е.Л., Додуева И.Е., Иванова Н.М., Лутова Л.А. Изучение реакции на дитокинины in vitro у инбредных линий редиса (Raphanus sativus) с диетически детерминированным опухолеобразованием. Физиология эастений. 2006. № 4. с. 575-584.
Dodueva I.E., Frolova N.V., Lutova L.A. Plant tumorigenesis: different ways for ¡hifting systemic control of plant cell division and differentiation. Transgenic Plant lournal. 2007. v. 1. p. 3-24.
3uzovkina I.S., Dodueva I.E., Tikhodeev O.N., Lutova L.A. Cytokinin response nutants affecting in vitro differentiation processes in radish (Raphanus sativus). \bstracts of 10 FESP Congress. 1996. p. 498.
Цодуева И.Е., Бузовкина И.С. Взаимосвязь между морфогенезом in vivo и in /itro у инбредных линий и гибридов редиса. Тезисы YI Молодежной сонференции ботаников в Санкт-Петербурге, Ботанический Институт им. Комарова РАН, май 1997. с.22.
Додуева И.Е., Бузовкина И.С. Анализ наследования признака (чувствительность к ауксину in vitro» у опухолевых и безопухолевых форм )едиса. Тезисы 2 съезда ВОГИС С.-Петербург, 2000.
эузовкина И.С., Додуева И.Е., Лутова Л.А. Способ получения форм овощных
сорнеплодных культур. Патент на изобретение. №2177685. 2002.
1>ролова Н. В., Матвеева Т. В., Бузовкина И. С., Додуева И. Е. и Лутова Л. А.
Ъэдходы к изучению гормональной регуляции опухолеобразования у редиса
laphanus sativus L. Тезисы VIII Международной конференции «Биология
слеток растений in vitro и биотехнология». 9-13 сентября 2003, Саратов.
lole of cytokinins in some morphogenetic process in radish (Raphanus sativus L.)
Lutova, T. Matveeva, I. Buzovkina, R. Smets, N. Frolova, I. Dodueva, O. Culaeva, H. Van Omckelen. Abstracts of 7 th International Congress of Plant Molecular Biology, ISPMB 2003, Barcelona, June 23-28, 2003. Фролова H.B., Додуева И.Е., Власенко M.A. Физиологические особенности растений редиса, трансгенных по гену фермента биосинтеза цитокинина гзопентенилтрансферазы (ipt). Тезисы Третьего съезда генетиков и ;елекционеров России «Генетика в XXI веке: современное состояние и : герспективы развития», Москва, 6-12 июня 2004 г.
13. Додуева И.Е., Фролова Н.В., Власенко М.А., Монахова В.А., Лутова Л.А. Трансформация инбредных линий редиса (Raphanus sativus L.) генами Т-ДНК агробактерий как моделирование горизонтального переноса генов от агробактерий к растениям. Тезисы Третьего съезда Общества биотехнологов России имени Ю.А. Овчинникова. 2005. С. 107.
14. Ilyina E.L., Dodueva I.E. Regeneration of tumorous radish inbred lines explants on the mediums with cytokinins. Abstracts of I International School for Young Scientists "Embryology and biotechnology". 2005. p. 40.
5. Osipova M.A., Frolova N.V., Dodueva I.E., Ilyina E.L., Vlasenko M.A., Monakhova V.A., Dolgikh E.A., Lutova L.A. Genetic tumors of radish inbred lines: studying genes involved in the control of tumor formation in higher plants. Abstracts of XV FESP Congress. 2006. p. 69.
6. Ильина Е.Л., Додуева И.Е. Единство морфогенеза in vitro и in vivo. Тезисы 10й Пущинской школы-конференции для молодых ученых «Биология - наука XXI века». 2006. с. 273.
7. Власенко М.А., Фролова Н.В., Монахова В.А., Ганзен А.В., Додуева И.Е. Использование трансгенных растений генетической коллекции редиса в качестве модели для изучения опухолеобразования у растений. Тезисы международной конференции, посвященной 40-летию института общей генетики имени Н.И. Вавилова РАН. 2006. с. 34.
8. Ильина Е.Л., Немцовская З.А., Додуева И.Е. Изучение экспрессии генов первичного ответа на цигокинины и ауксины у мутантов редиса (Raphanus sativus L.) с генетически детерминированным опухолеобразованием. Тезисы международной конференции, посвященной 40-летию института общей генетики имени Н.И. Вавилова РАН. 2006. с. 44.
Подписано в печать 2 0 Off.
Формат бумаги 60 х 84 1/16. Бумага офсетная Печать ризографическая. Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз. Заказ 3952.
Отпечатано в отделе оперативной полиграфии НИИХ СПбГУ. 198504, Санкт-Петербург, Старый Петергоф, Университетский пр.26
~(3-
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Додуева, Ирина Евгеньевна
Глава 1. ВВЕДЕНИЕ.
Глава 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1. Генетический контроль клеточного цикла у растений.
Циклин-зависимые протеинкиназы (CDK). сока.:.
CDKB.
Другие группы CDK растений.
Циклины.
Циклины класса D.
Циклины класса А.
Циклины класса В.
Другие классы циклинов.
Регуляция активности комплексов С/Ж-циклин киназой WEE1. и фосфатазой CDC
Регуляция активности комплексов CDK-циклин белками САК и 1С К.
Белок RB.
Транскрипционные факторы E2F.
Вышележащие пути регуляции клеточного цикла у растений.
Регуляция экспрессии генов клеточного цикла А/уб-семейством. транскрипционных факторов
Участие МЛР-киназного каскада в регуляции клеточного цикла у растений.
Фитогормональная регуляция клеточного цикла.
2.2. Регуляция развития меристем.
Гены KNOX класса 1.
Гены KNOX класса II.
Взаимодействие транскрипционных факторов KNOX с другими белками.
Регуляция экспрессии генов KNOX различными семействами. транскрипционных факторов
Фитогормональная регуляция экспрессии генов KNOX.
Взаимодействие генов£ГМи WUS.
Подсемейство генов JVOX: ген WUS.
Мишени транскрипционного фактора WUS.
Регуляция экспрессии гена WUS.
Подсемейство генов WOX: гены WOX2, WOX5, WOX8 и WOX9.
Подсемейство генов BELL.
Подсемейство генов HD-ZIP.
Фитогормональная регуляция развития меристем.
2.3. Опухоли высших растений как модель в генетике развития.
2.3.1. Опухоли растений, индуцированные бактериями.
Опухоли растений, индуцированные представителями рода Agrobacterium.
Онкогены Agrobacterium tumefaciens.
Онкогены Agrobacterium rhizogenes.
Опухоли, индуцированные галлообразующими бактериями.
2.3.2. Опухоли растений, вызванные вирусами, простейшими, грибами,. нематодами и насекомыми
Опухоли растений, индуцированные вирусами.
Опухоли растений, индуцированные простейшими.
Опухоли растений, индуцированные грибами.
Опухоли растений, индуцированные нематодами.
Опухоли растений, индуцированные насекомыми.
2.3.3. Генетические опухоли растений.
Спонтанное опухолеобразование у межвидовых гибридов.
Спонтанное опухолеобразование у трансгенных растений Nicoliana. с супрессией гена CHRK
Опухолеобразующие мутанты Arabidopsis thaliana.
Спонтанное опухолеобразование у инбредных линий.
Общие механизмы индукции опухолеобразования у растений.
Глава 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.
3.1. Материал.
3.2. Методы.
3.2.1. Полевые методы.
3.2.2. Метод асептической культуры изолированных органов растений in vitro.
3.2.3. Молекулярно-генетические методы исследования.
Выделение тотальной растительной ДНК.:.
Фракционирование ДНК методом электрофореза в агарозном геле.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Выделение ПЦР-фрагментов из агарозного геля.
Клонирование ПЦР-фрагментов.
Трансформация бактерий.
Выделение плазмидной ДНК бактерий.
Выделение тотальной РНК растений.
ДНКазная обработка РНК.
Электорофорез РНК в агарозном геле.
ОТ-ПЦР.
Глава 4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Изучение особенностей регенерации на средах с цитокининами. у инбредных линий редиса
4.2. Клонирование и секвенирование ПЦР-фрагментов, полученных. при амплификации геномной ДНК редиса с праймерами к генам
CycDS, KNAT1 и ARR
4.3. Изучение экспрессии генов RsCYCD3, RsKNATl и RsARR. у инбредных линий редиса
4.3.1. Изучение экспрессии гена RsCYCD3.
Экспрессия гена RsCycD3 у растений редиса in vivo.
Экспрессия гена RsCycD3 у растений-регенерантов редиса in vitro.
4.3.2. Изучение экспрессии гена RsKNATl.
Экспрессия гена RsKNA TI у растений редиса in vivo
Экспрессия гена RsKNATl у растений-регенерантов редиса in vilro.
4.3.1. Изучение экспрессии гена RsARR.
4.4. Обсуждение.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение экспрессии генов, участвующих в системном контроле деления клеток и дифференцировки у высших растений, на модели спонтанного опухолеобразования у инбредных линий редиса (Raphanus sativus var. Radicula Pers.)"
Изучение системного контроля деления и дифференцировки клеток эукариот являетсяодной из наиболее актуальных задач современной биологии развития. Большая частьмеханизмов контроля клеточного цикла высоко консервативна и организована примерноодинаково у всех эукариот. В то же время, растения имеют свои уникальные механизмыконтроля деления клеток. У высших растений выявлены три основных уровня контроляделения и дифференцировки клеток (Veit, 2006; Scofield and Murray, 2006; Dodueva et aL,2007). Ha первом уровне действуют гены, непосредственно участвующие в контролеклеточного цикла. Второй уровепь регуляции деления клеток и дифференцировкивысших растений связан с работой генов, обеспечивающих поддержание и нормальнуюфункцию меристем - образовательных тканей, включающих в себя пул быстро делящихсястволовых клеток, которые являются источпиком дифференцированных тканей растения.Третий уровень системного контроля связан с контролем активности регуляторовклеточного цикла и развития меристем, а также с контролем экспрессии их генов.Основную роль на этом этапе контроля играют фитогормоны, в частности цитокинины иауксины, для которых показано прямое или опосредованное участие в регуляцииклеточного цикла и развития меристем. Изменения нормальной функции генов,действующих на любом из этанов системного контроля, нарушает баланс деления идифференцировки клеток, что может приводить к различным аномалиям морфогенеза.Одной из возможных моделей для изучения системного контроля деления идифференцировки клеток является опухолеобразование. Онухолеобразованиепредставляет собой результат выхода отдельных клеток или клеточных популяций из-подсистемного контроля, что приводит к их неконтролируемой пролиферации. У растенийописан ряд примеров спонтанного опухолеобразования, зависящего от генотипа растений(Ahuja, 1998; Frank et al., 2002; Harrar et al, 2003; Lee et al., 2003) и индуцированногоопухолеобразования, вызванного взаимодействием с патогенами (Jameson, 2000). Однойиз общих характеристик растительных опухолей разного происхождения являетсяизменение баланса цитокининов и ауксинов как основной механизм индукцииопухолеобразования (Jameson, 2000; Lee et al., 2003; Frank et al., 2000; Harrar et al., 2003;Matveeva et al., 2004), a также изменение уровней экспрессии генов, участвующих вконтроле клеточного цикла и регуляции развития меристем при переходе к опухолевомуросту (Bird and Koltai, 2000; Wang et al., 2001; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2004; Stieger etal., 2004; Osipova et al., 2006). 3a последпие годы при изучении спонтанных ииндуцированных опухолей у разных видов растений было получено множество новыхданных о генах, участвующих в контроле деления и дифференцировки клеток (Wang et al..2001; Frank et al., 2002; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2003; Moriuchi et al., 2004; Stieger et al.2004; Da Costa et al., 2006; Smyczynski et al., 2006). Таким образом, подробноеисследование уже имеющихся и привлечение новых моделей для изучения опухолевогороста у растений открывает возможность для выявления ключевых механизмовсистемного контроля деления и дифференцировки растительных клеток.Темой данной работы является изучение механизмов спонтанного опухолеобразования уинбредных линий редиса {Raphanus sativus var. Radicula Pers.). Уникальная генетическаяколлекция редиса поддерживается в лаборатории генетики растений БиНИИ СПбГУ более40 лет и является источником мутантов с различными нарушениями морфогенеза, а такжеценных для селекции форм (Нарбут, 1966; Лутова и др., 1994; Lutova et al., 1997; Матвееваи др., 2000; Бузовкина и др., 2000; Карпинская и др., 2005; Osipova et al., 2006). Десять изтридцати линий генетической коллекции редиса формируют опухоли на корнеплоде впериод цветения с частотой 50% и более (Нарбут и др., 1995); у одной линии отмечендругой тип опухолевого роста - израстание завязи, связанный с развитием эктопическихмеристем из тканей стенки завязи (Мельников, 1998). К достоинствам данной модели дляизучения опухолеобразования у высших растений относятся динлоидность, высокийуровень гомозиготности и генетическая однородность материала, полученные врезультате длительного инбридинга, а также близкое родство Raphanus sativus смодельным обьектом генетики Arabidopsis thaliana, которое облегчает идентификациюгенов, участвующих в контроле опухолеобразования у инбредных линий редиса, погомологии с соответствующими генами арабидопсиса.Целью работы являются изучение связи экспрессии гена CycD3, участвующего вконтроле клеточного цикла, гена KNATI, участвующего в контроле развития меристем, атакже гена первичного ответа на цитокинины ARR5 с онухолеобразоваиием у инбредныхлиний редиса in vivo и морфогенетическими реакциями на цитокинины in vitro.В задачи работы входило:1. Анализ морфогенетических реакций на цитокинины разного тина строения уопухолеобразующих и безопухолевых инбредных линий редиса.2. Поиск в геноме редиса генов CycD3, KNAT1 и ARR5 по гомологии ссоответствующими генами арабидопсиса.3. Изучение экспрессии генов RsCycD3, RsKNATl и RsARR у опухолеобразующих ибезопухолевых линий редиса на разных стадиях развития in vivo.4. Изучение экспрессии генов RsCycD3, RsKNATl и RsARR у опухолеобразующих ибезопухолевых линий редиса при ответе на цитокинины in vitro.
Заключение Диссертация по теме "Генетика", Додуева, Ирина Евгеньевна
выводы
1. Выявлены различия между инбредными линиями редиса по степени проявления морофгенетических реакций на цитокинины in vitro - формированию КС, вторичных опухолей, побего- и корнеобразованию. Растения-регенеранты опухолеобразующих линий редиса на средах с цитокининами формируют КС и вторичные опухоли, способные к гормон-независимому росту, тогда как безопухолевая линия не способна к формированию КС и опухолей.
2. Обнаружены различия синтетических цитокининов разного типа строения (ТДЗ, БАП, кинетин) по способности индуцировать морфогенетические реакции у растений-регенерантов инбредных линий редиса. Показано, что наибольшую активность в индукции КС и вторичных опухолей у растений-регнерантов редиса имеет ТДЗ.
3. В геноме редиса выявлены гены RsCycD3 (семейство циклинов класса D), RsKNATl (семейство KNOX) и RsARR (семейство ARR A-типа) по гомологии с генами арабидопсиса. Степень гомологии ПЦР-продуктов редиса с соответствующими участками генов CycD3-l, KNAT1 и ARR5 арабидопсиса составляет более 80%.
4. Выявлены различия по уровням экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATl между опухолеобразующими и безопухолевыми редиса у растений in vivo и in vitro: показан высокий уровень экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATl в корнеплодах опухолеобразующих линий, в побегах линий с интенсивным побегообразованием in vivo, а также в КС, вторичных опухолях, и побегах тех же линий in vitro. У растений-регенерантов безопухолевой линии выявлен низкий уровень экспрессии RsCycD3 и RsKNATl in vivo и in vitro во всех частях растений.
5. Обнаружено повышение уровней экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATl у растений-регенерантов редиса in vitro при наличии цитокининов в среде.
6. Показан высокий уровень экспрессии гена RsARR у растений-регенерантов in vitro на средах с цитокининами в побегах, КС и вторичных опухолях опухолеобразующих линий. У растений-регенерантов контрольной безопухолевой линии на средах с цитокининами выявлен низкий уровень экспрессии RsARR.
Благодарности
Автор выражает сердечную благодарность:
• научному руководителю профессору Дутовой Людмиле Алексеевне за огромную помощь, ценные советы и доброту,
• Бузовкиной Ирине Сергеевне за обучение методам культуры in vitro, обсуждение результатов и помощь в оформлении диссертации,
• Матвеевой Татьяне Валерьевне, Антоновой Ольге Юрьевне, Богомазу Денису Игоревичу, Андреевой Елене Алескандровне, Андронову Евгению Евгеньевичу, Пинаеву Алескандру Георгиевичу за обучение молекулярно-генетическим методам, помощь и поддержку
• Ильиной Елене Леонидовне за помощь в выращивании растений
• Фроловой Надежде Владимировне за неоценимую моральную поддержку
• Мамон Людмиле Андреевне, Мацкевич Ольге Альбертовне и Верховцевой Лии Михайловне за помощь в сборе документов
• Всем сотрудникам лаборатории генной и клеточной инженерии растений, в особенности: Трифоновой Ирине Михайловне, Тиходееву Олегу Николаевичу, Осиповой Марии Александровне, и студентам Монаховой Веронике Алексеевне, Власенко Марии Александровне, Ганзену Андрею Владимировичу, Немировской Зое Алескандровне - за обсуждение результатов, отзывчивость и доброту.
ГЛАВА 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Как было показано в исследованиях последних лет, контроль деления клеток и дифференцировки у высших растений представляет собой сложный процесс, который находится под контролем многоуровневой регуляторной сети, включающей большое количество компонентов (Veit, 2006; Scofield and Murray, 2006; Dodueva et al., 2007). Опухолеобразование представляет собой результат нарушения на одном из этапов регуляции, которое приводит к «сбоям» в системном контроле деления клеток и дифференцировки. При этом имеет место изменение работы разных компонентов системы. Для всех изученных на сегодняшний день моделей опухолевого роста у растений было продемонстрировано изменение уровней экспрессии целого ряда генов, участвующих в системном контроле деления клеток и дифференцировки: генов циклинов и циклин-зависимых киназ; гомеобокс-содержащих генов, играющих ключевую роль в формировании меристем; генов, продукты которых участвуют в метаболизме и передаче сигнала фитогормонов (Fujita et al., 1994; Intrieri and Buiatti, 2001; Wang et al., 2001; Frank et al., 2002; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2003; Chalupowicz et al., 2006; Gelvin, 2006). Таким образом, опухолеобразование y растений представляет собой процесс, при котором нарушается работа целого ряда регуляторных компонентов. Этот факт затрудняет выявление генов, изменение функции которых является первопричиной опухолеобразования. В настоящее время точная причина опухолеобразования не выявлена для изучающихся в течение многих лет спонтанных опухолей у межвидовых гибридов табака (Ahuja, 1998) и ряда опухолевых линий арабидопсиса (Frank et al., 2000,2002). Для опухолеобразующихpas мутантов арабидопсиса и CHRK1-трансгенных растений табака выявлены гены, изменения в работе которых приводят к опухолеоборазованию, но точная роль этих генов в системном контроле деления клеток и дифференцировки не ясна (Lee et al., 2003; Da Costa et al., 2006; Smyczynski et al., 2006). Также до сих пор неизвестны точные функции большинства онкогенов Т-ДНК агробактерий (Gelvin, 2006) и генов, принимающих участие в патогенезе других опухоль-индуцирующих паразитических организмов (de Meutter et al., 2003; Chalupowicz et al., 2006). Несмотря на это, изучение разных примеров спонтанного и индуцированного опухолеобразования у высших растений позволило выявить новые гены, а также получить неожиданные данные об участии целого ряда уже известных генов в системном контроле деления и дифференцировки растительных клеток (Wang et al., 2001; Frank et al., 2002; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2003; Moriuchi et al., 2004; Stieger et al., 2004; Da Costa et al., 2006; Smyczynski et al., 2006). Таким образом, изучение уже имеющихся и привлечение новых моделей опухолевого роста у растений позволит существенно расширить информацию о механизмах системного контроля.
В нашей работе была использована одна из перспективных моделей спонтанного опухолеобразования высших растений - генетические опухоли у инбредных линий редиса. Данная работа является продолжением многолетних исследований сотрудников лаборатории генной и клеточной инженерии растений, направленных на изучение механизмов опухолевого роста у растений. Сотрудниками нашей лаборатории были получены многочисленные данные, позволившие связать опухолеобразование у инбредных линий редиса с уровнем эндогенных фитогормонов и чувствительностью к ним (Бузовкина и др., 1993а, 19936; Лутова и др., 1994; Lutova et al., 1997; Матвеева и др., 2000; Matveeva et al., 2004; Фролова и др., 2004; Ильина и др., 2006). Эти результаты соотносятся с имеющимися в литературе данными о роли фитогормонов в спонтанном и индуцированном опухолеобразовании у разных видов растений (Ahuja, 1998; Jameson, 2000; Frank et al., 2000), а также связи опухолеобразования с повышенным уровнем клеточных делений (Vittorioso et al., 1998; Frank et al., 2000,2002; Dewitte et al., 2003).
В этой работе мы расширили полученные сотрудниками нашей лаборатории данные о морфогенетической реакции растений-регенерантов редиса на цитокинины in vitro (Бузовкина и др., 1993а, 19936; Lutova et al., 1997; Матвеева и др., 2000; Matveeva et al., 2004). Полученные нами результаты свидетельствуют о повышенном уровне морфогенетических реакций изученных опухолевых линий редиса по сравнению с безопухолевой линией. Ранее было показано, что экспланты опухолеобразующих линий редиса характеризуются способностью к активной пролиферации клеток и формированию каллуса на безгормональной среде (Лутова и др., 1994; Lutova et al., 1997). Добавление в культуральную среду цитокининов активно способствует этому процессу, тогда как у эксплантов безопухолевых линий не отмечено каллусообразования на безгормональной среде (Лутова и др., 1994; Lutova et al., 1997). Эти данные свидетельствуют об измененном метаболизме и/или передаче сигнала цитокининов у опухолеобразующих линий редиса. Действительно, в тканях опухолеобразующих линий редиса на стадии цветения было выявлено повышенное содержание цитокининов (Matveeva et al., 2004). Подтверждением определяющей роли цитокининов в опухолеобразовании у инбредных линий редиса также являются данные по трансформации безопухолевой линии 30 агробактериальным штаммом, несущим ген ipt A.lumefaciens под конститутивным промотором 35SCaMV (Фролова и др., 2004). Трансгенные растения имели повышенный уровень свободного зеатина в тканях, формировали опухоли на корнеплоде, а также характеризовались повышенным каллусообразованием у семядольных эксплантов, формированием КС и вторичных опухолей у растений-регенерантов на средах с цитокининами (Фролова и др., 2004; Фролова, 2006).
С помощью полуколичественного метода ОТ-ПЦР мы провели изучение экспрессии трех генов, действующих на трех уровнях системного контроля деления клеток высших растений (Dodueva et al., 2007), на разных стадиях развития опухолей редиса in vivo и in vitro. По гомологии с генами арабидопсиса, в геноме редиса были выявлены следующие гены: RsCycD3, относящийся к семейству циклинов класса D, которые играют ключевую роль в контроле перехода G1-S цикла; RsKNATl, относящийся к семейству гомеобокс-содержащих генов KNOX, которые играют важную роль в поддержании и развитии меристем; RsARR, относящихся к семейству генов первичного цитокининового ответа ARR А-типа, которые принимают участие в передаче сигнала цитокининов. Нам удалось установить взаимосвязь экспрессии всех трех генов с особенностми морфогенеза растений инбредных линий редиса, в частности - связь их экспрессии с опухолеобразованием. Сходство динамики экспрессии этих генов у линий редиса позволяет предположить их взаимодействие в контроле опухолеобразования. Действительно, в литературе последних лет имеются многочисленные данные о взаимосвязи регуляции клеточного цикла, регуляции меристем и вышележащем фитогормональном контроле работы этих систем (Jasinski et al., 2005; Yanai et al., 2005; Gegas and Doonan, 2006). Наши результаты хорошо соотносятся с данными по экспрессии генов этих семейств, полученными на межвидовых гибридах табака (Wang et al., 2001), опухолевых мутантах арабидопсиса (Frank et al., 2002; Harrar et al., 2003) и CHRK1 -траисштых растениях табака (Lee et al., 2004). Таким образом, опухолеобразование у разных видов растений может иметь сходные механизмы. Дальнейшее изучение спонтанных опухолей высших растений, в том числе - опухолей у инбредных линий редиса, позволит выявить ключевые механизмы системного контроля деления клеток и дифференцировки высших растений.
Повышение уровней экспрессии генов разных групп при опухолеобразовании свидетельствует о сложной регуляции этого процесса, с вовлечением нескольких уровней системного контроля деления и дифференцировки клеток. В нашей работе мы обнаружили сходную динамику экспрессии генов RsCycD3, RsKNATl и RsARR при образовании опухолей у растений редиса in vivo и in vitro. Эти данные позволяют предположить взаимодействие этих генов в контроле опухолеобразования у инбредных линий редиса. В литературе имеются данные о взаимодействии метаболизма и передачи сигнала цитокининов, транскрипционных факторов KNOX и циклинов класса D. Описано повышение уровней экспрессии KNOX генов и генов циклинов класса D в ответ на обработку цитокининами (Rupp et al., 1999; Riou-Khamlichi et al., 1999), сходные данные мы получили в этой работе при изучении экспрессии генов RsCycD3 и RsKNATl у растений-регенерантов редиса in vitro. Таким образом, в соответствии с данными о значительном повышении содержания цитокининов в корнеплодах опухолеобразующих линий на стадии цветения (Matveeva et al., 2004), повышенный уровень цитокининов стимулирует экспрессию генов RsCycD3 и RsKNAT 1, что приводит к активной пролиферации клеток древесинной паренхимы, которые дают начало опухолям (Ильина и др., 2006). По литературным данным, с повышенным уровнем экспрессии CycD3 связана активная пролиферация клеток растений, приводящая к каллусообразованию in vitro и развитию гиперплазий in vivo (Dewitte et al., 2003; Boucheron et al., 2005); экспрессия KNAT1 и его ортологов также приводит к пролиферации клеток и формированию эктопических меристем (Pautot et al., 2001; Frugis et al., 2001; Chiapetta et al., 2005). Следствием повышенного содержания цитокининов в тканях опухолеобразующих линий является также повышение уровней экспрессии генов первичного ответа на цитокинины (Guo et al., 2006), что мы наблюдали в данной работе на примере экспрессии гена RsARR.
С другой стороны, известно, что повышение экспрессии KNOX генов, в частности, KNAT1, активирует транскрипцию генов биосинтеза цитокинина AtIPT5 и AtIPT7, а также передачу цитокининового сигнала о чем свидетельствует повышенный уровень экспрессии гена первичного ответа на цитокинин ARR5 (Jasinski et al., 2005; Yanai et al., 2005). В норме экспрессия гена KNAT1 и его гомологов наблюдается в апикальной меристеме побега (Lincoln et al., 1994; Reiser et al., 2000), более низкий уровень экспрессии этого гена отмечен также в нижележащих тканях стебля (Lincoln et al., 1994) и в корне (Truernit et al., 2006). Экспрессия этого гена повышается при опухолеобразовании (Frank et al., 2002; Harrar et al., 2003; Lee et al., 2003). Мы наблюдали экспрессию гена RsKNAT 1 в побегах всех линий, в то же время, корнеплодах редиса визуально детектируемый уровень экспрессии RsKNAT 1 выявлен только у линий, с высокой частотой образующих опухоли, на стадии перехода к цветению. Можно предположить, что одной из причин повышения концентрации цитокининов в корнеплодах опухолеобразующих линий при переходе к цветению (Matveeva et al., 2004) является высокий уровень экспрессии RsKNATl в корнеплодах. С усилением экспрессии RsKNATl может быть связан также повышенный уровень цитокининового ответа у опухолеобразующих линий, маркером которого является обнаруженный нами высокий уровень экспрессии RsARR.
Таким образом, можно предположить наличие двух возможных схем контроля опухолеобразования у инбредных линий редиса:
1). повышение содержания цитокининов в корнеплодах при переходе к цветению повышение уровней экспрессии RsCycD3 и RsKNATl, а также генов первичного ответа на цитокинины (в частности, ЯзАЯЯ ) пролиферация клеток древесинной паренхимы -> опухолеобразование.
2). высокий уровень экспрессии КвКЫАТ1 в корнеплодах усиление биосинтеза и передачи сигнала цитокининов -> повышение уровня экспрессии КзСусйЗ пролиферация клеток древесинной паренхимы -> опухолеобразование.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Додуева, Ирина Евгеньевна, Санкт-Петербург
1. Бузовкина И.С., Лутова Л.А. Генетические, биохимические и физиологические аспекты опухолеобразования у инбредных линий редиса. Вестник ЛГУ. 1991. т.2. с.102-107.
2. Бузовкина И.С., Кнешке И., Лутова Л.А. Генетический анализ признака «чувствительность к цитокинину» у редиса in vitro. Генетика. 1993. т. 29. с. 9951001.
3. Бузовкина И.С., Кнешке И., Лутова Л.А. Моделирование опухолеобразования in vitro у линий и гибридов редиса. Генетика. 1993. т. 29. с. 1002-1008.
4. Бузовкина И.С., Додуева И.Е., Лутова Л.А. Способ получения форм овощных корнеплодных культур/ Патент на изобретение №2177685. 2002.
5. Бузовкина И.С., Карпинская Л.А. Генетический контроль признака «изгибы стебля» у редиса Raphanus sativus L. Генетика. 2005. т. 41. с.1251-1258.
6. Георгиев Г.П. Некоторые достижения в ходе выполнения программы «Молекулярная и клеточная биология» за 2003 год. Генетика. 2005. т. 41. с. 705715.
7. Додуева И.Е., Бузовкина И.С. Взаимосвязь между морфогенезом in vivo и in vitro у инбредных линий и гибридов редиса. Тезисы YI Молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге, Ботанический Институт им. Комарова РАН, май 1997. с.22
8. Додуева И.Е., Бузовкина И.С. Анализ наследования признака «чувствительность к ауксину in vitro» у опухолевых и безопухолевых форм редиса. Тезисы Второго съезда ВОГИС. 2000. с. 325.
9. Дрейпер Дж., Скотт Р. Армитидж Ф. Генная инженерия растений. М.: Мир, 1991. 408 с.
10. П.Ивантер Э.В., Коросов A.B. Основы биометрии. Петрозаводск: Издательство ПГУ. 1992. 163 с.
11. Ильина Е.Л., Додуева И.Е., Иванова Н.М., Лутова Л.А. Изучение реакции на цитокинины in vitro у инбредных линий редиса (Raphanus sativus) с генетическидетерминированным опухолеобразованием. Физиология растений. 2006. № 4. с. 575-584.
12. Ильина E.JI., Додуева И.Е. Единство морфогенеза in vitro и in vivo. Тезисы 10й Пущинской школы-конференции для молодых ученых «Биология наука XXI века». 2006. с. 273.
13. Лутова Л.А., Бондаренко Л.В., Бузовкина И.С., Левашина Е.А., Тиходеев О.Н., Ходжайова Л.Т., Шарова Н.В., Шишкова С.О. Влияние генотипа растений на регенерационные процессы. Генетика. 1994. т.30. N 8. с.1065-1074.
14. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М., "Мир", 1984.
15. Матвеева Т.В., Додуева И.Е., Вуд Д., Бузовкина И.С., Лутова Л.А., Нестер Ю. Изучение роли фитогормонов в процессе опухолеобразования у редиса. Генетика, 2000. т.36 с. 203-208.
16. Мельников Г.А. Характеристика линий и гибридов редиса (Raphanus sativus L.) по признаку «израстание завязи». Выпускная квалификационная работа магистра. Санкт-Петербург, 1998.
17. НарбутС.И. Генетическая коллекция инбредных линий редиса. Генетика. 1966. т. 5. с. 89-100.
18. Нарбут С.И. Генетическая опухоль, полученная при инбридинге у редиса. Вестник ленинградского университета. 1967. т. 15. с. 144-149.
19. Нарбут С.И., Войлоков A.B., Рахман М.И., Максименко O.E. Биометрический анализ частоты спонтанного опухолеобразования у инбредных линий редиса. Генетика. 1995. т. 31. №9. с. 1268-1271.
20. Тютерев С.Л., Евстигнеева Т.А. Биохимические методы исследования индуцированной болезнеустойчивости растений. Санкт-Петербург: издательство ВИЗР РАН. 2001.68 с.
21. Фролова Н.В., Матвеева Т.В., Лутова Л.А. Использование метода агробактериальной трансформации in vivo для получения фенокопий опухолеобразования у безопухолевой линии редиса (Raphanus sativus L). Биотехнология. 2004. т. 4. с. 3-7
22. Фролова Н.В. Создание модели для изучения опухолеобразования у редиса Raphanus sativus L. с использованием трансгенных растений по гену IPT. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Санкт-Петербург. 2006.
23. Ahuja M.R., Cameron D.R. The effect of X-irradiation on seedlings tumor production in Nicotiana species and hybrids. Annals of Botany. 1963. v. 3, p. 55-56
24. Ahuja M.R. Genetic control of phytohormones in tumor and non-tumor genotypes in Nicotiana. Indian Journal of Experimental Biology 1971, v. 9, p. 60-68
25. Ahuja M.R. Genetic tumors in Nicotiana and other plants. Quarterly Review of Biology. 1998. v. 73. p. 439-459
26. Aida M., Ishida T., Fukaki H., Fujisawa H., Tasaka M. Gen es involved in organ separation in Arabidopsis: an analysis of the cup-shaped cotyledon mutant. Plant Cell. 1997. v. 9. p. 841-57
27. Aida M., Tasaka M. Morphogenesis and patterning at the organ boundaries in the higher plant shoot apex. Plant Molecular Biology. 2006, v. 60. p. 915-928.
28. Akasaka Y., Daimon H., Mii M. Improved plant regeneration from cultured leaf segments in peanut (Arachis hypogaea L.) by limited exposure to thidiazuron. Plant Science. 2000. v. 28. p. 169-175.
29. Akiyoshi D.E., Regier D.A., Jen G., Gordon M.P. Cloning and nucleotide sequence of the tzs gene from Agrobacterium tumefaciens strain T37. Nucleic Acids Research. 1985. v. 25. p. 2773-2788.
30. Ames I.H. The influence of cytokinin on genetic tumor formation. Journal of Botany. 1985. v. 50. p. 2235-2238.
31. Ames I.H., Mistretta P.W. Auxin: its role in genetic tumor induction. Plant Physiology. 1975. v. 56. p. 744-746.
32. Aoki S., Syono K. Synergistic function of rolB, rolC, ORF13 and ORF14 of 7Z-DNA of Agrobacterium rhizogenes in hairy root induction in Nicotiana tabacum. Plant and Cell Physiology. 1999. v. 40. p. 252-256
33. Aoki S. Resurrection of an ancestral gene: functional and evolutional analyses of the Ngrol genes transferred from Agrobacterium to Nicotiana. Journal of Plant Research. 2004. v. 117. p. 329-337.
34. Araki S., Ito M., Soyano T., Nishihama R., Machida Y. Mitotic cyclins stimulate the activity of c-Myb-\ike factors for transactivation of G2/M phase-specific genes in tobacco. Journal of Biological Chemistry. 2004. v. 30. p. 32979-32988.
35. Armstrong W.P. To be or not to be a gall. Pacific Horticulture. 1995. v. 56. p. 39-45.
36. Azmi A., Dewitte W., Van Onckelen H., Chriqui D. In situ localization of endogenous cytokinins during shooty tumor development in Eucalyptus globulus Labill. Planta. 2001. v. 213. p. 29-36.
37. Barry G.F., Rogers S.G., Fraley R.T. Identification of a cloned cytokinin biosinthesis gene. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1984. v. 81. p. 47764780.
38. Becker A., Bey M., Burglin T., Saedler H., Theissen G. Ancestry and diversity of BEL1- like homeobox genes revealed by hymnosperm (Gnetum gnemon) homologs. Development, Genetics and Evolution. 2002. v. 212. p. 452-457.
39. Bellec Y., Harrar Y., Butaeye C., Darnet C., Bellini C., Faure J.-D. Pasticcino 2 is a protein tyrosine phosphatase-like involved in cell proliferation and differentiation in Arabidopsis. Plant Journal. 2002. v. 32. p. 713-722.
40. Bene F., Wittbrodt J. Cell cycle control by homeobox genes in development and disease. Seminars in Cell and Developmental Biology, v. 16. p. 449-460.
41. Benkova E., Michniewicz M., Sauer M., Teichmann T., Seifertova D., Jurgens G., Frimi J. Local, efflux-dependent auxin gradients as a common module for plant organ formation. Cell. 2003. v. 115. p. 591-602.
42. Bertolla F., Simonet P. Horizontal gene transfer in the environment: natural transformation as a putative process for gene transfers between transgenic plants and microorganisms. Research in Microbiology. 1999. v. 150. p. 375-384
43. Bettini P., Michelotti S., Bindi D., Giannini R., Capuana M., Buiatti M. Pleiotropic effect of the insertion of the Agrobacterium rhizogenes rolD gene in tomato (Lycopersicon esculentum Mill.). Theoretical and Applied Genetics. 2003. v. 107. p. 831-836
44. Bhatt A., Etchells J., Canales C., Lagodinenko A., Dickinson H. VAMAANA a BEL 1-like homeodomain protein, interacts with KNOX proteins BP and STM and regulates inflorescence stem growth in Arabidopsis. Gene. 2003. v. 328. p. 103-111.
45. Bird M.D., Loveys B.R. The involvement of cytokinins in a host-parasite relationship between tomato (Lycopersicon esculentum) and nematode (Meloidogyne javanica). Parasitology. 1980. v. 80. p. 497-505.
46. Bird M.D., Koltai H. Plant parasitic nematodes: habitats, hormones and horizontally-acquired genes. Journal of Plant Growth Regulation. 2000. v. 19. p. 183-194
47. Bogani P., Lio P., Intrieri M.C., Buiatti M. A physiological and molecular analysis of the genus Nicotiana. Molecular Phylogenetics and Evolution. 1997. v. 7. p. 62-70
48. Brevet J., Tempe J. Homology mapping of T-DNA regions on three Agrobacterium rhizogenes Ri plasmids by electron microscope heteroduplex studies. Plasmid. 1988. v. 19. p. 75-83
49. Broer I., Droge-Laser W., Barker R.F., Neumann K., Klipp W., Puhler A. Identification of the Agrobacterium tumefaciens C58 T-DNA genes e and/and their impact on crown gall tumour formation. Plant Molecular Biology. 1995. v. 27. p. 41-57
50. Burglin T. Analysis of TALE superclass homeobox genes (.MEINOX, PBS, KNOX, Iroquois, TGIF) reveals a novel domain conserved between plant and animals. Nucleic acid researches. 1997. v. 25. p. 4173-4180.
51. Byrne M.E., Barley R., Curtis M., Arroyo J.M., Dunham M., Hudson A., Martinssen R.A. Assymetric leaves 1 mediates leaf patterning and stem cell function in Arabidopsis. Nature. 2000. v. 408. p. 967-971
52. Byrne M., Groover A., Fontana J., Martienssen R. Phyllotactioc pattern and stem cell fate are determined by the Arabidopsis homeobox gene BELLRINGER. Development. 2003. v. 130. p. 3941-3950.
53. Campell B.R., Town C.D. Physiology of hormone autonomous tissue lines derived form radiation-induced tumors of Arabidopsis thaliana. Plant Physiology. 1991. v. 97. p. 1166-1173
54. Capone I., Spano L., Cardarelli M., Bellincampi D., Petit A., Costantino P. Induction and growth properties of carrot roots with different complements of Agrobacterium rhizogenes T-DNA. Plant Molecular Biology. 1989. v. 13. p. 43-52
55. Castellano M.M., del Pozo J.C., Ramirez-Parra E., Brown S., Gutierrez C. Expression and stability of Arabidopsis CDC6 are associated with endoreplication. Plant Cell. 2001. v. 13. p. 2671-2686.
56. Catterou M., Dubois F., Smets R., Vaniet S., Kichey T., Van Onckelen H., Sangwan-Norreel B.S., Sangwan R.S. hoc\ an Arabidopsis mutant overproducing cytokinins and expressing high in vitro organogenic capacity. Plant Journal. 2002. v. 30. p. 273-287.
57. Chang H., Jones M.L., Banowetz G.M., Clark D.G. Overproduction of cytokinins in petunia flowers transformed with P(SAG12)-IPT delays corolla senescence and decreases sensitivity to ethylene. Plant Physiology. 2003.V. 132. p. 2174-2183.
58. Chapulowicz L., Barash I., Schwartz M., Aloni R., Manulis S. Comparative anatomy of gall development on Gypsophila paniculata induced by bacteria with different mechanisms of pathogenicity. Planta. 2006. v. 224. p. 429-437
59. Chaubet-Gigot N. Plant A-type cyclins. Plant Molecular Biology. 2000. v. 43. p. 659675.
60. Chen H., Baneijee A.K., Hannapel D.J. The tandem complex of BEL and KNOX partners is required for transcriptional repression of ga20oxl. Plant Journal. 2004. v. 38. p. 276-284.
61. Chilton M.-D., Drummond M.H., Merlo D.J., Sciaky D., Montoya A.L., Gordon M.P., Nester E.W. Stable incorporation of plasmid DNA into higher plant cells: the molecular basis of crown gall tumorigenesis. Cell. 1977. v. 11. p. 263-271
62. Chuck C., Lincoln C., Hake S. KNAT1 induces lobed leaves with ectopic meristems when overexpressed in Arabidopsis. Plant Cell. 1996. v. 8. p. 1277-1289.
63. Chung S.K., Parrish R.W. Studies on the promoter of the Arabidopsis thaliana cdc2a gene. FEBS Letters. 1995. v. 362. p. 215-219
64. Chung K.R., Zheng D.D. Biosynthesis of indole-3-acetic acid by the gall-inducing fungus Ustillago esculenta. Journal of Biological Sciences. 2004. v. 4. p. 744-750
65. Clark E., Vigodsky-Haas H., Gafni Y. Characteristics in tissue culture of hyperplasias induced by Erwinia herbicola pathovar gypsophilae. Physiological and Molecular Plant Pathology. 1989. v. 35. p. 383-390
66. Clark E., Manulis S., Ophir Y., Barash I., Gafni Y. Cloning and characterization of iaaMand iaaH from Erwinia herbicola pathovar gypsophilae. Phytopathology. 1993. v. 83. p.234-240
67. Cockcroft C.E., den Boer B.G., Healy J.M., Murray J.A. Cyclin D control of growth rate in plants. Nature. 2000. v. 405. p. 575-579.
68. Corbesier L., Coupland G. The quest for florigen: a review of recent progress. Journal of Experimental Botany. 2006. v. 57. p. 3395-3403.
69. Crespi M., Messens E., Caplan A.B., Van Montagu M., Desomer J. Fasciation induction by the phytopathogen Rhodococcus fascians depends upon a linear plasmid encoding a cytokinin synthase gene. EMBO Journal. 1992. v. 11. p. 795-804
70. D'Agostino I., Kieber J.J. Molecular mechanisms of cytokinin action. Current Opinion in Plant Biology. 1999. v. 2. p. 359-364
71. Da Costa M., Bach L., Landrieu I., Bellec Y., Catrice O., Brown S., De Veylder L., Lippens G., Inze D., Faure J.D.Arabidopsis PASTICCIN02 is an antiphosphatase involved in regulation of cyclin-dependent kinase A. Plant Cell. 2006. v. 18. p. 14261437
72. David C., Chilton M.D., Tempe J. Conservation of T-DNA in plants regenerated from hairy root cultures. Biotechnology. 1984. v. 2. p. 73-76
73. Dean G., Casson S., Lindsey K. KNAT6 gene of Arabidopsis is expressed in roots and is required for correct lateral root formation. Plant Molecular Biology. 2004. v. 54. p. 71-84.
74. De Meutter J., Tytgat T., Witters E., Gheysen G., Van Onckelen H., Gheysen G. Identification of cytokinin produced by the plant parasitic nematodes Heterodera schachtii and Meloidogyne 'incognita. Molecular Plant Pathology. 2003. v. 4. p. 271277.
75. De Torok D., White P.R. Cytoklogical instability in tumors of Picea glauca. Science. 1960. v. 131. p. 730-732.
76. Dekhuijzen H.M., Overeem J.C. The role of cytokinin in the clubroot formation. Physiologycal plant pathology. 1971. v. 1. p. 18-20.
77. De O Manes C.L., Van Montagu M., Prinsen E., Goethals K., Holsters M. De novo cortical cell division triggered by the phytopathogen Rhodococcus fascians in tobacco. Molecular Plant-Microbe Interactions. 2001. v. 14. p.189-195.
78. Dessaux Y., Petit A., Tempe J., Demarez M., Legrain C., Wiame J.M. Arginine catabolism in Agrobacterium strains: role of the 77 plasmid. Journal of Bacteriology. 1986. v. 166. p. 44-50.
79. Devos S., Vissenberg K., Verbelen J., Prinsen E. Infection of Chinese cabbage by Plasmodiophora brassica leads to a stimulation of plant growth: impact on cell wall metabolism and hormone balance. New Phytologist. 2005. v. 166. p. 241-250
80. Dewitte W., Riou-Khamlichi C., Scofield S., Healy J.M., Jaqmard A., Kilby N.J., Murray J.A. Altered cell cycle distribution, hyperplasia and inhibited differentiation in Arabidopsis caused by the D-type cyclin CycD3. Plant Cell. 2003. v. 15. p. 79-92
81. Diao X., Freeling M., Lish D. Horizontal transfer of a plant transposon. PLoS Biology. 2006. v. 4. p. 1-21
82. Dodueva I.E., Frolova N.V., Lutova L.A. Plant tumorigenesis: different ways for shifting systemic control of plant cell division and differentiation. Transgenic Plant Journal. 2007. v. 1. p. 3-24.
83. Eason J.R., Morris R.O., Jameson P.E. The relationship between virulence and cytokinin production by Rhodococcus fascians. Plant Pathology. 1996. v. 45. p. 323331.
84. Ebel C., Mariconti L., Gruissem W. Plant retinoblastoma homologues control nuclear proliferation in the female gametophyte. Nature. 2004. v. 429. p. 776-780.
85. Emsweller S.L., Asen S., Uhring J. Tumor formation in interspecific hybrids of Lilium. Science. 1962. v. 136. p. 266-267.
86. Escobar M.A., Dandekar A.M. Agrobacterium tumefaciens as an agent of disease. Trends in Plant Science. 2003. v. 8. p. 380-386
87. Estruch J.J., Chriqui D., Grossmann K., Schell J., Spena A. The plant oncogene rolC is responsible for the release of cytokinins from glucoside conjugates. The EMBO Journal. 1991. v. 10. p. 2889-2895.
88. Estruch J.J., Schell J., Spena A. The protein encoded by the rolB plant oncogene hydrolyses indole glucosides. The EMBO Journal. 1991. v. 10. p. 3125-3128.
89. Falasca G., Zaghi D., Possenti M., Altamura M. Adventitious root formation in Arabidopsis thaliana thin cell layers. Plant Cell Reports. 2004. v. 23. p. 17-25.
90. Feng X.H., Dube S.K., Bottino P.J., Kung S.D. Restoration of shooty morphology of a nontumorous mutant of Nicotiana glauca x N. langsdorffii by cytokinin and the isopentenyltransferase gene. Plant Molecular Biology. 1990. v. 15. p. 407-420.
91. Feng X., Kung S. Identification of differentially expressed members of tobacco homeobox family by differentiated PCR. Biochemical and Biophysiscal Research Communication. 1994. v. 198. p. 1012-1019.
92. Filippini F., Loschiavo F., Terzi M., Constantino P., Trovato M. The plant oncogene rolB alters binding of auxin to plant cell membranes. Plant and Cell Physiology. 1994. v. 35. p. 767-771.
93. Frank M., Guiv'Arch A., Krupkova E., Lorenz-Meyer I., Chriqui D., Schmulling T. TUMOROUS SHOOT DEVELOPMENT (TSD) genes are required for co-ordinated plant shoot development. The Plant Journal. 2002. v. 29. p. 73-85.
94. Frundt C., Meyer A.D., Ichikawa T., Meins F.J. A tobacco homologue of the Ri-plasmid orflS gene causes cell proliferation in carrot root discs. Molecular and General Genetics. 1998. v. 259. p. 559-568.
95. Fujita T., Kouchi H., Ichikawa T., Syono K. Cloning of cDNA for genes that are preferentially expressed during the development of tobacco genetic tumors. The Plant Journal. 1994. v. 5. p. 645-654.
96. Furner I.J., Huffman G.A., Amasino R.M., Garfinkel D.J., Gordon M.P., Nester E.W. An Agrobacterium transformation in the evolution of the genus Nicotiana. Nature. 1986. v. 319. p. 422-427.
97. Gallois J.-L., Nora F.R., Mizukami Y., Sablowski R. WUSHEL induces shooot stem cell activity and developmental plasticity in the root meristem. Genes and Development. 2004. v. 18. p. 375-380.
98. Garfinkel D.J., Simpson R.B., Ream L.W., White F.F., Gordon M.P., Nester E.W. Genetic analysis of crown gall: fine structure map of the T-DNA by site-directed mutagenesis. Cell. 1981. v. 27. p.143-153.
99. Gaudin V., Jouanin L. Expression of Agrobacterium rhizogenes auxin biosynthesis genes in transgenic tobacco plants. Plant Molecular Biology. 1995. v. 28. p. 123-36.
100. Gegas V.C., Doonan J.H. Expression of cell cycle genes in shoot apical meristems. Plant Molecular Biology. 2006. v. 60. p. 947-961.
101. Gelvin S.B. Agrobacterium virulence gene induction. Methods in Molecular Biology. 2006. v. 343. p. 77-84.
102. Giulini A., Wang J., Jackson D. Control of phyllotaxi by the cytokinin-inducible response regulator homology ABPHYL1. Nature. 2004. v. 430. p. 1031-1034.
103. Glass N.L., Kosuge S. Role of indoleacetic acid-lysine synthetase in regulation of indoleacetic acid pool size and virulence of Pseudomonas syringae subsp. savastanoi. Journal of Bacteriology. 1988. v. 170. p. 2367-2373.
104. Glickmann E., Gardan L., Jacquet S., Hussain S., Elasri M., Petit A., Dessaux Y. Auxin production is a common feature of most pathovars of Pseudomonas syringae. Molecular Plant-Microbe Interaction. 1998. v. 11. p. 156-162.
105. Goverse A., de Almeida E.J., Verhees J., van der Krol S., Helder J., Gheysen G. Cell cycle activation by plant parasitic nematodes. Plant Molecular Biology. 2000. v. 43. p. 747-761.
106. Grafi G., Burnett R.J., Helentjaris T„ Larkins B.A., DeCaprio J.A., Sellers W.R., Kaelin W.G.Jr. A maize cDNA encoding a member of the retinoblastoma protein family: involvement in endoreduplication. Proc Natl Acad Sci. USA. 1996. v. 20. p. 8962-8967.
107. Green K.A., Prigge M.J., Katzman R.B., Clark S.E. CORONA, a member of the class III homeodomain leucine zipper gene family in Arabidopsis, regulates stem cell specification and organogenesis. Plant Cell. 2005. v. 17. p. 691-704.
108. Gutierrez C. DNA replication and cell cycle in plants: learning from geminiviruses. The EMBO Journal. 2000. v. 19. p. 792-799.
109. Haecker A., Gross-Hardt R., Geiges B., Sarkar A., Breuninger H., Herrmann M., Laux T. Expression dynamics of WOX genes mark cell fate decisions during early embryonic patterning in Arabidopsis thaliana. Development. 2004. v. 131. p. 657-668.
110. Hamant O., Nogue F., Belles-Boix E., Jublot D., Grandjean O., Traas J., Pautot V. The KNAT2 homeodomain protein interacts with ethylene and cytokinin signaling. Plant Physiology. 2002. v. 130. p. 657-665.
111. Hamill J.D. Alteration in auxin and cytokinin metabolism of higher plants due to expression of specific genes from pathogenic bacteria: a review. Australian Journal of Plant Physiology. 1993. v. 20. p. 405-423.
112. Hansen G., Vaubert D., Heron J.N., Clerot D., Tempe J., Brevet J. Phenotipic effects of overexpression of Agrobacterium rhizogenes T-DNA ORF13 in transgenic tobacco plants are mediated by diffisible factor(s). Plant Journal. 1999. v. 4. p. 581-585.
113. Harrar Y., Bellec Y., Bellini C., Faure J. Hormonal control of cell proliferation requires PASTICCINO genes. Plant Physiology. 2003. v. 132. p. 1217-1227.
114. Hasler J., Wuest J., Gaspar T., Crevecoeur M. Long term in vitro-cultured plant cells show typical neoplastic features at the cytological level. Biology of Cell. 2003. v. 95. p.357-364.
115. Hay A., Kaur H., Phillips A., Hedden P., Hake S., Tsiantis M. The gibberellin pathway mediates KNOTTEDl-type homeobox function in plants with different body plans. Current Biology. 2002. v. 17. p. 1557-1565.
116. Heifer A., Clement B., Michler P., Otten L. The Agrobacterium oncogene AB-6b causes a graft-transmissible enation syndrome in tobacco. Plant Molecular Biology. 2003. v. 52. p. 483-493.
117. Helliwell C.A., Chin-Atkins A.N., Wilson I.W., Chappie R., Dennis E.S., Chaudhury A. The Arabidopsis AMPI gene encodes a putative glutamate carboxypeptidase. Plant Cell. 2001. v. 13. p. 2115-2125.
118. Hemerly A.S., Ferreira P., de Almeida Engler J., Van Montagu M., Engler C., Inz£ D. cdc2a expression in Arabidopsis is linked with competence for cell division. Plant Cell. 1993. v. 5. p. 1711-1723.
119. Hewelt A., Prinsen E., Thomas M., Van Onckelen H., Meins F. Ectopic expression of maize knotted! results in cytokinin-autotrophic growth of cultured tobacco tissues. Planta. 2000. v. 210. p. 884-889.
120. Hibara K., Takada S., Tasaka M. CUC1 gene activates the expression of SAM-related genes to induce adventitious shoot formation. Plant Journal. 2003. v. 36. p. 687696.
121. Higuchi M., Pischke M.S., Mahonen A.P., Myiawaki K., Hashimoto S., Seki M., Kobayashi M., Shinozaki K., Kato T., Tabata S., In planta functions of the Arabidopsis cytokinin receptor family. Proc Natl Acad Sci. USA. 2004. v. 101. p. 8821-8826.
122. Hobe M., Muller R., Grunewald M., Braud U., Simon R. Loss of CLE40, a protein functionally equivalent to the stem cell restricting signal CLV3, enhances root waving in Arabidopsis. Development Genes and Evolution. 2003. v. 231. p. 371-381.
123. Hu Y., Bao F., Li J. Promotive effect of brassinosteroids on cell division involves a distinct CycD3-induction pathway in Arabidopsis. Plant Journal. 2000. v. 24. p. 693701.
124. Huffman G.A., White F.F., Gordon M.P., Nester E.W. Hairy-root inducing plasmid: physical map and homology to tumor-inducing plasmid. Journal of Bacteriology. 1984. v. 157. p. 269-276.
125. Hwang I., Sheen J. Two-component circuitry in Arabidopsis signal transduction. Nature. 2001. v. 413. p. 383-389.
126. Ichikawa T., Ozeki Y., Syono K. Evidence for the expression of the rol genes of Nicotiana glauca in genetic tumors of N. glauca * N. langsdorffii. Molecular and General Genetics. 1990. v. 220. p. 177-180.
127. Ilyina E.L., Dodueva I.E. Regeneration of tumorous radish inbred lines explants on the mediums with cytokinins. Abstracts of I International School for Young Scientists "Embryology and biotechnology". 2005. p. 40.
128. Intrieri M.C., Buiatti M. The horizontal transfer of Agrobacterium rhizogenes genes and the evolution of the genus Nicotiana. Molecular Phylogenetics and Evolution. 2001. v. 20. p. 100-110.
129. Ishihama A., Barbier P. Molecular anatomy of viral RNA-directed RNA polymerases. Archives of Virology. 1994 . v. 134. p. 235-258.
130. Jackson D., Veit B., Hake S. Expression of maize KNOTTED1 related homeobox genes in the shoot apical meristem predicts patterns of morphogenesis in the vegetative shoot. Development. 1994. v. 120. p. 405-413.
131. Jameson P. Cytokinin and auxin in plant-pathogen interaction an overview. Journal of Plant Growth Regualtion. 2000. v. 32. p. 369-380.
132. Janssen B.J., Lund L., Sinha N. Overexpression of a homeobox gene, LeT6, reveals indeterminate features in the tomato compound leaf. Plant Physiology. 1998. v. 117. p. 771-786.
133. Jasinski S., Piazza P., Craft J., Hay A., Woolley L., Rieu I., Phillips A., Hedden P., Tsiantis M. KNOX action in Arabidopsis is mediated by coordinate regulation of cytokinin and gibberellin activities. Current Biology. 2005. v. 15. p. 1560-1565.
134. Jiang K., Feldman L.J. Regulation of root apical meristem development. Annual Review of Cell and Developmental Biology. 2005. v. 21. p. 485-506.
135. Joshi M.G. Occurrence of genetic tumors in Triticum interspecies hybrids. Theoretical and Applied Genetics. 1972. v. 42. p. 227-228.
136. Jung J., Yun Y., Park C. Characterisation of an Arabidopsis gene that mediates cytokinin signaling in shoot apical meristem development. Molecules and Cell. 2004. v. 19. p. 342-349.
137. Kakimoto T. CKI1, a histidine kinase homolog implicated in cytokinin signal transduction. Science. 1996. v. 274. p. 982-985.
138. Kemper E., Waffenschmidt S., Weiler E.W., Raush T., Schroeder J. T-DNA-encoded auxin formation in crown gall cells. Planta. 1885. v. 163. p. 257-262.
139. Kim Y.S., Lee J.H., Yoon G.M., Cho H.S., Park S.W., Suh M.C., Choi D., Ha H.J., Liu J.R., Pai H.S. CHRK1, a chitinase-related receptor-like kinase in tobacco. Plant Physiology. 2000. v. 123. p. 905-915.
140. Kim M., Cho H.S., Kim do M., Lee J.H., Pai H.S. CHRK1, a chitinase-related receptor-like kinase, interacts with NtPUB4, an armadillo repeat protein, in tobacco. Biochimica et Biophysica Acta. 2003. v. 23. p. 50-59.
141. Kitakura S., Fujita T., Ueno Y., Terakura S., Wabiko H., Machida Y. The protein encoded by oncogene 6b from Agrobacterium tumefaciens interacts with a nuclear protein of tobacco. Plant Cell. 2002. v. 14. p. 451-463.
142. Krysan P.J., Jester P.J., Gottwald J.R., Sussman M.R. An Arabidopsis mitogen-activated protein kinase kinase kinase gene family encodes essential positive regulators of cytokinesis. Plant Cell. 2002. v. 14. p. 1109-1120.
143. Kudo H., Uyeda I., Shikata E. Viruses in the phytoreovirus genus of the Reoviridae family have the same conserved terminal sequences. Journal of General Virology. 1991. v. 72. p. 2857-2866.
144. Kumaran M.K., Bowman J.L., Sundaresan V. YABBY polarity genes mediate the repression of KNOX homeobox genes in Arabidopsis. Plant Cell. 2002. v. 14. p. 27612770.
145. Lang S.P., Struckmeyer B.E., Tibbits T.W. Morphology and anatomy of untumescence development on tomato plants. Journal of the American Society for Horticular Science. 1983. v. 108. p. 266-271.
146. Laux T., Mayer K., Berger J., Jürgens G. The WUSHEL gene is required for shoot and floral meristem identity in Arabidopsis. Development. 1996. v. 122. p. 87-96.
147. Lee J.H., Kim D.-M., Lim Y.P., Pai H.-S. The shooty callus induced by suppression of tobacco CHRK1 receptor-like kinase is a phenocopy of the tobacco genetic tumor. Plant Cell Reports. 2004. v. 23. p. 397-403.
148. Leibfried A., To J.P., Busch W., Stehling S., Kehle A., Demar M., Kieber J.J., Lohmann J.U. WUSCHEL controls meristem function by direct regulation of cytokinin-inducible response regulators. Nature. 2005. v, 438. p. 1172-1175.
149. Lemcke K., Prinsen E., van Onckelen H., Schmulling T. The ORF8 gene product of Agrobacterium rhizogenes TL-DNA has tryptophan 2-monooxygenase activity. Molecular Plant Microbe Interaction. 2000. v. 13. p. 787-790.
150. Lemcke K., Schmulling T. Gain of function assays identify non-rol genes from Agrobacterium rhizogenes TL-DNA that alter plant morphogenesis or hormone sensitivity. Plant Journal. 1998. v. 15. p. 423-433.
151. Lenhard M., Bohnert A., Jürgens G., Laux T. Termination of stem cell maintenance in Arabidopsis floral meristem by interaction between WUSCHELL and AGAMOUS. Cell. 2001. v. 105. p. 805-814. .
152. Lenhard M., Jürgens G., Laux T. The WUSCHEL and SHOOTMERISTEMLESS genes fulfil complementary roles in Arabidopsis shoot meristem regulation. Development 2002. v. 129. p. 3195-3206.
153. Lenhard M., Laux T. Stem cell homeostasis in the Arabidopsis shoot meristem is regulated by intercellular movement of CLAVATA3 and its sequestration by CLA VA TA 1 .Development. 2003. v. 130. p.3163-3173.
154. Lin P.S., Ross J.G. Ovular ttumors in a trisomic sorgum plant. Journal of Heredity. 1969. v. 60. p. 183-185.
155. Lin W.C., Shuai B., Springer P.S. The Arabidopsis LATERAL ORGAN BOUNDARIES-domam gene ASYMMETRIC LEAVES2 functions in the repression of KNOX gene expression and in adaxial-abaxial patterning. Plant Cell. 2003. v. 15. p. 2241-2252.
156. Liscum E., Reed J.W. Genetics of Aux/IAA and ARF action in plant growth and development. Plant Molecular Biology. 2004. v. 49. p. 387-400.
157. Lichter A., Barash I., Valinsky L., Manulis S The genes involved in cytokinin biosynthesis in Erwinia herbicola pv. gypsophilae: characterization and role in gall formation. Journal of Bacteriology. 1995. v. 177. p. 4457-4465.
158. Liu S.T., Gruenert D., Knight C.A. Bound form indole-3-acetic acid synthesis in tumorous and nontumorous species of Nicotiana. Plant Physiology. 1978. v. 61. p. 5053.
159. Long J.A., Moan E.I., Medford J.J., Barton M.K. A member of the KNOTTED class of homeodomain proteins encoded by the SHOOTMERISTEMLESS gene of Arabidopsis. Nature. 1996. v. 379. p. 66-69.
160. Long J.A., Barton M.K. The development of apical embryonic pattern in Arabidopsis. Development. 1998. v. 125. p. 3027-3035.
161. Lutova L.A., Buzovkina I.S., Smirnova O.A., Tikhodeev O.N., Shishkova S.O., Trifonova I.M. Genetic control of in vitro differentiation processes in radish. In vitro Cellular and Developmental Biology 1997. v. 33. p. 269-274.
162. MacDermott J., Meilan R., Thornburg R. Plant-insect interactions: the hackberry nipple gall. The World Wide Web Journal of Biology. 1996, v. 1
163. MacDonald E.M.S., Powell G.K., Regier D.A., Glass L.N., Roberto F., Kosuge T., Morris R.O. Secretion of zeatin, ribosylzeatin and ribosyl-l"-methylzeatin by Pseudomonas savastanoi. Plant Physiology. 1986. v. 82. p. 742-747.
164. Magyar Z., De Veylder L., Atanassova A., Bako L., Inze D., Bogre L. The role of the Arabidopsis E2FB transcription factor in regulating auxin-dependent cell division. The Plant Cell. 2005. v.17. p. 2527-2541.
165. Mapes C.C., Davies P.J. Cytokinins in the ball gall of Solidago altissima and in the gall forming larvae of Eurosta solidaginis. New Phytologist. 2001. v. 151. p. 203.
166. Matveeva T.V., Frolova N.V., Smets R., Dodueva I.E., Buzovkina I.S., Van Onckelen H., Lutova L.A. Hormonal control of tumor formation in radish. Journal of Plant Growth Regulation. 2004. v. 23. p. 37-43.
167. Mayer K.F., Schoof H., Haeker A., Lenhard M., Jurgens M., Laux T. Role of WUSCHEL in the regulation of stem cell fate in Arabidopsis shoot meristem. Cell. 1998. v. 95. p. 805-815.
168. Medford J., Horgan R., El-Sawi Z., Klee H.J. Alterations of endogenous cytokinins in transgenic plants using a chimeric isopentenyltransferase gene. Plant Cell. 1989. v. l.p. 403-413.
169. Meins F.J., Foster R. A cytokinin mutant derived from cultured tobacco cells. Developmental Genetics. 1986. v. 7. p. 159-165.
170. Meins F.J., Tomas M. Meiotic transmission of epigenetic changes in the celldivision factor requirement of plant cells. Development. 2003. v. 130. p. 6201-6208.
171. Meyer A.D., Ichikawa T., Meins F.J. Horizontal gene transfer: regulated expression of a tobacco homolog of the Agrobacterium rhizogenes rolC gene. Molecular and General Genetics. 1995. v. 249. p. 265-273.
172. Meyer A.D., Aebi R., Meins F. Tobacco plants carrying a tms locus of 77-plasmid origin and the Hl-1 allele are tumor prone. Differentiation. 1997. v. 61. p. 213-221.
173. Mironov V., De Veylder L., Van Montagu M., Inze D. Cyclin-dependent kinases and cell division in plants the nexus. Plant Cell. 1999. v.l 1. p. 509-521.
174. Morris R. Genetic specifying auxin and cytokinin biosynthesis in phytopathogens. Annual Review of Plant Physiology. 1986. v. 37. p. 509-538.
175. Naf U. Studies in tumor formation in Nicotiana hybrids. The classification of parents into two etiologically significant groups. Growth. 1958. v. 22. p. 167-180.
176. Nagata N., Kosono S., Sekine M., Shinmyo A., Syono K. Different expression patterns of the promoters of the NgrolB and NgrolC genes during the development of tobacco genetic tumors. Plant and Cell Physiology. 1996. v. 37. p. 489-498.*'
177. Nagasaki H., Matsuoka M., Sato Y. Members of TALE and WUS subfamilies of homeodomain proteins with potentially important functions in development form dimers within each subfamily in rice. Genes and Genetic Systems 2005. v. 80. p. 261267.
178. Nakagami H., Sekine M., Murakami H., Shinmyo A. Tobacco retinoblastoma-related protein phosphorylated by a distinct cyclin-dependent kinase complex with CdcHcyclin D in vitro. Plant Journal. 1999. v. 18. p. 243-252.
179. Nakagami H., Kawamura K., Sugisaka K., Sekine M., Shinmyo A. Phosphorylation of retinoblastoma-related protein by the cyclin D/cyclin-dependent kinase complex is activated at the Gl/S-phase transition in tobacco. Plant Cell. 2002. v. 14. p. 1847-1857.
180. Nandi S.K., Palni L.M., Parker C.W. Dynamics of endogenous cytokinins during the growth cycle of a hormone-autotrophic genetic tumor line of tobacco. Plant Physiology. 1990. v. 94. p. 1084-1089.
181. Nebenfuhr A., Lomax T.L. Multiplex titration RT-PCR: rapid determination of gene expression patterns for a large number of genes. Plant Molecular Biology Reports. 1998. v. 16. p. 323-339.
182. Neel B.G., Tonks N.K. Protein tyrosine phosphatases in signal transduction. Current Opinion in Cell Biology. 1997. v. 9. p. 193-204.
183. Nilsson 0., Moritz T., Sundberg B., Sandberg G., Olsson O. Expression of the Agrobacterium rhizogenes rolC gene in a decidious forest tree alters growth and development and leads to atem fasciation. Planr Physiology. 1996. v. 112. p. 493-503.
184. Nishimura A., Tamaoki M., Sato Y., Matsuoka M. The expression of tobacco knotted 1-type class I homeobox genes corresponds to the regions predicted by the cytohistological zonation model. Plant Journal. 1999. v. 18. p. 337-347.
185. Nuttall V.W., Lyall L.H. Inheritance of neoplastic pods in the pea. Journal of Heredity. 1964. v. 55. p. 184-186.
186. Oka A. New insight into cytokinins. Journal of Plant Researches. 2003. v. 116. p. 217-220.
187. Otsuga D., DeGuzman B., Prigge M.J., Drews G.N., Clark S.E. REVOLUTA regulates meristem initiation at lateral positions. Plant Journal. 2001. v. 25. p. 223-236.
188. Otten L., Heifer A. Biological activity of the ro/5-like 5' end of the A4-orf8 gene from the Agrobacterium rhizogenes TL-DNA. Molecular Plant-Microbe Interactions. 2001. v. 14. p. 405-411.
189. Ozgan B., Topcuoglu S.F. GA3, ABA and cytokinin production by Lentinus tigrimis and Laetiporus sulphureus fungi cultured in the medium of olive oil mill waste. Turkish Journal of Biology. 2001. v. 25. p. 453-462.
190. Pautot V., Dockx J., Hamant 0., Kronenberger J., Grandjean 0., Jublot D., Traas J. KNAT2: evidence for a link between knotted-like genes and carpel development. Plant Cell. 2001. v. 13. p. 1719-1734.
191. Pelczar P., Kalck V., Gomez D., Hohn B. Agrobacterium proteins VirD2 and VirE2 mediate precise integration of synthetic T-DNA complexes in mammalian cells. EMBO reports. 2004. v. 5. p. 632-637.
192. Perley J.E., Stowe B.B. On the ability of Taphrina deformans to produce indoleacetic acid from tryptophan by way of tryptamine. Plant Physiology. 1966. v. 41. p. 234-237.
193. Phillips L.L., Merrit J.F. Interspecific incompatibility in Gossipium. Stem hystogenesis of G. hirsustum x G. gossipioides. American Journal of Botany. 1972. v. 59. p. 203-208.
194. Piispanen R., Aronen T., Chen X., Saranpaa P., Haggman H. Silver birch (Betula pendula) plants with aux and rol genes show consistent changes in morphology, xylem structure and chemistry. Tree Physiology. 2003. v. 23. p. 721-733.
195. Qu G., Heo S., Yoon B.-S., Wang M.H. The effects of exogenous hormones on genetic tumor formation in Nicotiana hybrids. EXCLI Journal. 2006. v. 5. p. 33-41.
196. Ramirez-Parra E., Frundt C., Gutierrez C. A genome-wide identification of E2F-regulated genes in Arabidopsis. The Plant Journal. 2003. v. 33. p. 801-811.
197. Ramirez-Parra E., Desvoyes B., Gutierrez C. Balance between cell division and differentiation during plant development. International Journal of Developmental Biology. 2005. v. 49. p. 467-477.
198. Rashotte A.M., Carson S.D.B., To J.P.C., Kieber J.J. Expression profiles of cytokinin action in Arabidopsis. Plant Physiology. 2003. v. 132. p. 1998-2011.
199. Rathjen J.P., Moffett P. Early signal transduction events in specific plant disease resistance. Current Opinion in Plant Biology. 2003. v. 6. p. 300-306.
200. Reinhardt D., Mandel T., Kuhlemeier C. Auxin regulates the initiation and radial position of plant lateral organs. Plant Cell. 2000. v. 12. p. 507-518.
201. Reiser L., Sanchez-Baracaldo P., Hake S. Knots in the family tree: evolutional relationship and functions of KNOX homeobox genes. Plant Molecular Biology. 2000. v. 42. p. 151-166.
202. Rezmer C., Schlichting R., Wachter R., Ullrich C.I. Identification and localization of transformed cells in Agrobacterium tumefaciens-'mduced plant tumors. Planta. 1999. v. 209. p. 399-405.
203. Rietsma J., Satina S., Blackeslee A.F. On the nature of embryo inhibitor in ovular tumors of Datura. Proceedings of National Academy of Science USA. 1954. v. 40. p. 424-431.
204. Rigden D.J., Carneiro M. A structural model for the rolA protein and its interaction with DNA. Proteins. 1999. v. 37. p. 697-708.
205. Riou-Khamlichi C., Huntley R., Jackmard A., Murray J.A.H. Cytokinin activation of Arabidopsis cell division through a D-type cyclin. Science. 1999. v. 283. p. 15411544.
206. Riou-Khamlichi C., Menges M., Healy J.M., Murray J.A. sugar control of the plant cell cycle: differential regulation of Arabidopsis D-type cyclin gene' expression. Molecular and Cell Biology. 2000. v. 20. p. 4513-4521.
207. Rogers S.O., Bendich A.J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues. Plant Molecular Biology. 1985. v. 5. p. 69-76.
208. Romano C.P., Cooper M.L., Klee H.J. Uncoupling auxin and ethylene effects in transgenic tobacco and Arabidopsis plants. Plant Cell. 1993. v. 5. p. 181-189.'
209. Sakamoto T., Kamiya N., Ueguchi-Tanaka M., Iwahori S., Matsuoka M. KNOX homeodomain protein directly suppresses the expression of a gibberellin biosynthetic gene in the tobacco shoot apical meristem Genes and Development. 2001. v. 1. p. 581590.
210. Sato Y, Sentoku N, Miura Y, Hirichika H., Kitano H., Matsuoka M. Loss-of-function mutations in the rice homeobox gene OSH15 affects the architecture of internodes resulting in dwarf plants. EMBO Journal. 1999. v. 18. p. 992-1002.
211. Scanlon M.J. The polar auxin transport inhibitor n-l-naphthylphtalamic acid disrupts leaf initiation, KNOX protein regulation and formation of leaf margins in maize. Plant Physiology. 2003. v. 133. p. 597-605.
212. Scofield S., Murray J.A.H. KNOX genes function in the stem cell niches. Plant Molecular Biology. 2006. v. 60. p. 929-946.
213. Scheidt H.A., Vogel A., Eckhoff A., Koenig B.W., Huster D. Solid-state NMR characterization of the putative membrane anchor of TWDl from Arabidopsis thaliana. European Biophysics Journal. 2006. v. 11. p. 34-45.
214. Schmulling T., Schell J., Spena A. Single genes from Agrobacterium rhizogenes influence plant development. The EMBO Journal. 1988. v. 7. p. 2621-2629.
215. Schneeberger R.G., Becrafit P.W., Hake S., Freeling M. Ectopic expression of the knox homeobox gene rough sheathl alters cell fate in the maize leaf. Genes and Development. 1995. v. 9. p. 2292-2304.
216. Schoof H., Lenhard M., Haecker A., Mayer K.F., Jiirgens G., Laux T. The stem cell population of Arabidopsis shoot meristems is maintained by a regulatory loop between the CLAVATA and WUSCHEL genes. Cell. 2000. v. 100. p. 635-644.
217. Sekine M., Ito M., Uemukai K., Maeda Y., Nakagami H., Shinmyo A. Isolation and characterization of the E2F-like gene in plants. FEBS Letters. 1999. v. 22. p. 117122.
218. Shimotohno A., Umeda-Hara C., Bisova K., Uchimiya H., Umeda M. The plant-specific kinase CDKF;1 is involved in activating phosphorylation of cyclin-dependent kinase-activating kinases in Arabidopsis. Plant Cell. 2004. v. 16. p. 2954-2966.
219. Sieberer T., Hauser M.T., Seifert G.J., Lusching G. PROPORZ1, a putative Arabidopsis transcriptional adaptor protein, mediates auxin and cytokinin signals in the control of cell proliferation. Current Biology. 2003. v. 13. p. 837-842.
220. Silverstone S.E., Gilchrist D.G., Bostock R.M., Kosuge T. The 73-kb pIAA plasmid increases competitive fitness of Pseudoimonas syringae subspecies savastanoi in oleander. Canadian Journal of Microbiology. 1993. v. 39. p. 659-664.
221. Skoog F., Miller C.O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro. Symposia of the Society for Experimental Biology. 1957. v. 54. p. 118-130.
222. Slightom J.L., Durant-Tardif M., Jouanin L., Tepfer D. Nucleotide sequence analysis of the TL-DNA of Agrobacterium rhizogenes agropine-type plasmid. Journal of Biological Chemistry. 1986. v. 261. p. 108-121.
223. Smith H.H. The inheritance of genetic tumors in Nicotiana hybrids. Journal of Heredity. 1988. v. 79. p. 277-283.
224. Smith H., Hake S. The interaction of two homeobox genes, BREVIPEDICELL US and PENNYWISE, regulates internodes patterning in the Arabidopsis inflorescence. Plant Cell. 2003. v. 15. p. 1717-1727.
225. Sola J.V., Almonacid G.V. Tumor-causing plant bacteria may infect animals. Medical Hypotheses. 2006. v. 20. p. 1038-1039.
226. Sorrell D.A., Marchbank A., McMahon K., Dickinson J.R., Rogers H.J., Francis D. A WEE1 homologue from Arabidopsis thaliana. Planta 2002. v. 215. p. 518-522.
227. Souer E., van Houwelingen A., Kloos D., Mol J., Koes R. The no apical meristem gene of Petunia is required for pattern formation in embryos and flowers and is expressed at meristem and primordia boundaries. Cell. 1996. v. 85. p. 159-70.
228. Stieger P.A., Meyer A.D., Kathmann P., Frundt C., Niederhauser I., Barone M., Kuhlemeier C. The orflS T-DNA gene of Agrobacterium rhizogenes confers meristematic competence to differentiated cells. Plant Physiology. 2004. v. 135. p. 1798-1808.
229. Stone S.L., Arnoldo M., Goring D.R. A breakdown of Brassica self-incompatibility in ARC1 antisense transgenic plants. Science. 1999. v. 286. p. 17291731.
230. Streissle G., Maramorosch K. Reovirus and wound-tumor virus: serological cross reactivity. Science. 1963. v. 140. p. 996-997.
231. Sun J., Niu Q.W., Tarkowski P., Zhang B., Tarkowska D., Sandberg G., Chua N.H., Zuo J. The Arabidopsis AtIPT8/PGA gene encodes an isopentenyltransferase that involved in de novo cytokinin biosynthesis. Plant Physiology. 2003. v. 131. p. 167-176.
232. Suzuki K., Yamashita I., Tanaka N. Tobacco plants were transformed by Agrobacterium rhizogenes infection during their evolution. Plant Journal. 2002. v. 32. p. 775-787.
233. Takada S., Tasaka M. Embryonic shoot apical meristem formation in higher plants. Journal of Plant Reserches. 2002. v. 115. p. 411-417.
234. Takei T., Sakakibara H., Sugiyama T. Identification of genes encoding adenylate isopentenyltransferase, a cytokinin byosynthesis enzyme, in Arabidopsis thaliana. Journal of Biological Chemistry. 2001. v. 276. p. 26405-26410.
235. Takenaka Y., Yoneda Y. Hereditary tumor in Japanese morning glory (Pharbitis nil). Japanese Journal of Genetics. 1965. v. 40. p. 141-145.
236. Tamaoki M., Kusaba S., Kano-Murakami Y., Matsuoka M. Ectopic expression of a tobacco homeobox gene NTH15 dramatically alters leaf morphology and hormone levels in transgenic tobacco. Plant and Cell Physiology. 1997. v. 38. p. 917-927.
237. Tavares S., InacioJ., FonsecaA., OliveiraC. Direct detection of Taphrina deformans on peach trees using molecular methods. European Journal of Plant Pathology. 2004. v. 110. p. 973-982 .
238. Temmerman W., Rietsma T., Simon-Mateo C., Van Montagu M., Mironov V., Inze D., Goenthals K., Holsters M. The fas locus of the phytopathogen Rhodococcus fascians affects mithosis of tobacco BY-2 cells. FEBS Letters. 2001. v. 492. p. 127132.
239. Tepfer D. Transformation of several species of higher plants by Agrobacterium rhizogenes: sexual transmission of the transferred genotype and phenotype. Cell. 1984. v. 37. p. 959-967.
240. Timmermans M., Hudson A., Beckraft P., Nelson T. ROUGH SHEATH 2: a Myb protein that repress knox homeobox genes in maize lateral organ primordia. Science. 1999. v. 284. p. 151-153.
241. To J., Haberer G., Ferreira F., Dereur J., Mason M., Schaller G. Alonso J., Ecker J., Kieber J. Type-A Arabidopsis Respopnse Regulators are partially redundant negative regulators of cytokinin signaling. Plant Cell. 2004. v. 16. p. 658-671.
242. Truernit E., Siemering K.R., Hodge S., Grbic V., Haseloff J. A map of KNAT gene expression in the Arabidopsis root. Plant Molecular Biology. 2006. v. 60. p. 1-20.
243. Tsiantis M., Schneeberger R., Golz J.F., Feeling M., Langdale J.A. The maize roung sheath2 gene and leaf development programs in monocot and dicot plants. Science. 1999. v. 284. p. 154-156.
244. Udagawa M., Aoki S., Syono K. Expression analysis of the NgORFIS promoter during the development of tobacco genetic tumors. Plant Cell Physiology. 2004. v. 45. p. 1023-1031.
245. Ullrich C.I., Aloni R. Vascularization is a general requirement for growth of plant and animal tumours. Journal of Experimental Botany. 2000. v. 51. p. 1951-1960.
246. Umber M., Clement B., Otten L. The T-DNA oncogene A4-orf8 from Agrobacterium rhizogenes A4 induces abnormal growth in tobacco. Molecular Plant-Microbe Interactions. 2005. v. 18. p. 205-211.
247. Vandepoele K., Vlieghe K., Florquin K., Hennig L., Beemster G.T., Gruissem W., Van de Peer Y., Inze D., De Veylder L. Genome-wide identification of potential plant E2F target genes. Plant Physiology. 2005. v. 139. p. 316-328.
248. Veit B. Determination of cell fate in apical meristems. Current Opinion in Plant Biology. 2004. v. 7. p. 57-64.
249. Veit B. Stem cell signaling networks in plants. Plant Molecular Biology. 2006. v. 60. p. 793-810.
250. Vollbrecht E., Reiser L., Hake S. Shoot meristem size is dependent on inbred background and presence of the maize homeobox gene, knottedl. Development. 2000. v. 127. p. 3161-3172.
251. Vreecke D., Burssens S., Simon-Mateo C., Inze D., Van Montagu M., Goethals K., Jaziri M. The Rhodococcus fascians-plant interaction: morphological traits and biotechnological applications. Planta. 2000. v. 210. p. 241-251.
252. Waites R., Selvadurai H., Oliver I., Hudson A. The PHSANTASTICA gene encodes a Myb transcription factor involved in growth and dorsoventrality of lateral organs in Antirrhinum. Cell. 1998. v. 93. p. 779-789.
253. Wang M.H., Doonan J.H., Sastry G.R.K. Cloning and characterization of the unusual cyclin gene from an amphidiploid of Nicotiana glauca Nicotiana langsdorfii hybrid. Biochimica et Biophysica Acta. 1999. v. 1489. p. 399-404.
254. Wang M.H., Rhee H.I., Sastry G.R.K. Genetic modification in the cyclin gene from a Nicotiana interspecific hybrid: role of GTcyc gene in tumorization process. Plant Physiology. 2001. v. 158. p. 109-114.
255. Wang G, Kong H, Sun Y, Zhang W, Altman N, Depamphilis CW, Ma H (2004) Genome-wide analysis of the cyclin family in Arabidopsis and comparative phylogenetic analysis of plant cyclin-like proteins. Plant Physiology 135,1084-1099
256. Weingartner M, Binarova P, Drykova D, Schweighofer A, David. JP, HeberleBors E, Doonan J, Bogre L (2001) Dynamic recruitment of Cdc2 to specific microtubule structures during mitosis. Plant Cell 13,1929-1943
257. White FF, Ghidossi G, Gordon MP, Nester EW (1982) Tumor induction by Agrobacterium rhizogenes involves the transfer of plasmid DNA to the plant genome. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 79, 3193-3197
258. White FF, Taylor BH, Huffman GA, Gordon MP, Nester EW (1985) Molecular and genetic analysis of the transferred DNA region of the root inducing plasmid of Agrobacterium rhizogenes. Journal of Bacteriology 164, 33-44
259. Wu X, Dabi T, Weigel D (2005) Requirement of homeobox gene ST1MPHWOX9 for Arabidopsis meristem growth and maintenance. Current Biology 15,436-440
260. Yamaguchi M, Kato H, Yoshida S, Yamamura S, Uchimiya H, Umeda M (2003) Control of in vitro organogenesis by cyclin-dependent kinases activities in plants. Proceedings of the National Academy of Sciences USA 100, 8019-8023
261. Yanai O, Shani E, Dolezal K, Tarkowski P, Sablowski R, Sandberg G, Samach A, Ori N (2005) Arabidopsis KNOXI proteins activate cytokinin biosynthesis. Current Biology 15,1566-1571
262. Yu Y, Steinmetz A, Meyer D, Brown S, Shen WH (2003) The tobacco ¿-type cyclin, Nicta;CYCA3;2, at the nexus of cell division and differentiation. Plant Cell 15, 2763-2777
263. Zhu S., Gao F., Cao X., Chen M., Ye G., Wei C., Li Y. The rice dwarf virus P2 protein interacts with ent-kaurene oxidases in vivo, leading to reduced biosynthesis of gibberellins and rice dwarf symptoms. Plant Physiology. 2005. v. 139. p. 1935-1945.
264. Zuo J., Niu Q., Frugis G., Chua N. The WUSCHEL gene promotes vegetative-to-embryonic transition in Arabidopsis. Plant Journal. 2002. v. 30. p. 349-359.
-
Додуева, Ирина Евгеньевна
-
кандидата биологических наук
-
Санкт-Петербург, 2007
-
ВАК 03.00.15
- Создание модели для изучения опухолеобразования у редиса Raphanus sativus L. с использованием трансгенных растений по гену IPT
- Изучение молекулярно-генетических аспектов опухолеобразования у редиса Raphanus sativus
- Генетический контроль признаков тотипотентности и их роль в онтогенетической адаптации высших растений
- Выделение и изучение гормональных мутантов редиса Raphanus Sativus L.
- Исходный материал в селекции редиса и редьки для условий лесостепи Среднего Поволжья
