Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

"ИЗУЧЕНИЕ БЕЛКОВ ГОЛОВКИ БАКТЕРИОФАГА Т2 L"""

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме ""ИЗУЧЕНИЕ БЕЛКОВ ГОЛОВКИ БАКТЕРИОФАГА Т2 L""""

■ / ;

• 'БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ " ". -_

; л /л V - ' - На нравах рукописи

V ;: : ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА ПРОНИНА :■ : г -

• - г" _ ^

' . 1'. .;

"ИЗУЧЕНИЕ БЕЛКОВ ГОЛОВКЙ БАКТЕРИОФАГА Т2 У . . ,;■Х;.": (Биохимия - ОЗ.СО.04)

(Диссертация написана на русском языке) •

V • А в т о р е ф е р а т.

диссертации на -соискание ученой степени > л кандидата биологических наук

ИЗДАТЕЛЬСТВО МОСКОВСКОГО УНИВЕРСИТЕТА - 1973

Работа выполнена-в Межфанулътетской лаборатории биоорга ничесхой химии МГУ.

Научный руководитель доктор.биологических науя • - .

".' Б.Ф. ГСоглаэов г '

Официальные оппоненты: '

Доктор биологических наук, профессор "Т.Н. Тихоненко -Кандидат биологических наук Г.А» Алимов ' .."

Лиссзртация направлена нр отзыв.э Институт Биофизик» ■ АН СССР ( Пущино не. Око ). .'■''/',

. Автореферат "разослан " ' ■ " ? - 1 ■ 1975 г.

'Защита дяссертаций-состоится " '3 "йеха^Л 1973 г. .на -заседании Ученого Совета, Биологического факультета МГУ. Г

Т-четные бактериофаги представляют собой - простую, состоящую из белков к:ЛИК, но весьма дифференцированную биологичес кую систему; Частица -Т-четного фага построенане, менее, чем из десяти морфологически различных структурных компонентов.. В ее состав входит около 30 различных белковых субъединиц.

На основе исследования условно-летальных мутаций для ^ Т-четных бактериофагов удалось составить довольно полную генетическую карту. Возможность установления корреляций между, данными электронномикроскопичьских,.,генетических и физико-химических исследований делает Т-четные бактериофаги удобным: объектом для изучения морфогенеза на молекулярном уровне.

Наша работа':посвящена изучению:структурных белков головок бактериофага Т2 Ь наиболее сложноорганизованного элемента фага. В формировании-головок Т-чегных фагов принимают участие не менее 18 генов, продукты которых выполняют как структурные так и регуляторные функции. . ;

Целью :нашей работы было выделение и,изучение физико-хи-м и ч ескихс в ойс т в ;Г ол о в оквыяснение■гетерогенности их струк-. турных белковав сравнении с бактериофагами Т4В и Т4Д. Специальная часть наших.исследований посвящена изучению самосборки основного белкового компоненте головки -'Продукта гена 23, в условиях V! ¡^о - ~

Диссертация состоит из введения.и трех глав. Во введении изложены задачи.исследования. В первой главе (обзор литературы) рассмотрены данные касающиеся морфогенеза бактериофагов Т-четного ряда. ; . ■ "■.,:<:

1-1734 . . "'■■;.' - 1

' « ... ... ~ ' ' С^Ыоз,

Во второй главе ¡представлены г материалы ииетоды, использованные в работе.: Третья," основная глава, .состоящая из не-' скольких разделов,; посвящена экспершентальныи-результатам: их обсуждению.

• Объекты и методы исследования

■ * - -J ** . ■ ■Lf ''-■ .

■ В работе использовали бактериофагиТ2 Ь , Т4Д, Ti+B,-

+5 -мутант:Т4Д"ПО гену 19 аибертмутант.Т^Д öwA/54 по ^

гену 31, амбер-мутант Т^В НА-'Ш по гену 31 и штаммы бакте--рий t.ccti Ь , coti & Г, t CR >

: Для препаративного выделения вирусов,,струкгурных-элемен тов бактериофага и.белков головки использовали методы*диффе-/: -ренциального центрифугирования, центрифугирования в градиенте плотности сахарозы, гель-филмрации и ионообменной хроматогра фИИ. .-..;■■ .. .. .' ■■

Образцы контрастировали с помощью водных. 2% растворов: нейтрализованной фосфорновольфрамовой кислоты и уранилацетата И'напыляли палладием. Препараты просиатривали и фотографировав ли при ускоряющем напряжении 50-75jC»a и электрошомикроскошг ческих увеличениях 35000-50000 х. . ■'. -V

. Использование в нашей работе метода оптической дифракции feeQfc-г , i%4) позволило уточнить .характер и период .. упаковки субъединиц в искусственно', полученных агрегатах.белка Головки фага Т2. Эта работа выполнена в институте кристаллографии АН СССР совместно с Г,И, Косоуровым."Оптическую/дифрак цию получали:на установке, где в качестве источника свегабыл

применен гелионовый лазер. Дифракционные:картины <|отогра- -: дировали в фокальной плоскости объектива. ■ - : .

Данные аналитического ультраценгри^гирования.применялись в качестве одного иг критериев гомогенности вирусов; их структурных элементов и'препаратов^ белковах субъединиц^ а такде для определения*, их констант седиментации; ' ч.

Разделение белков по электрофоретической подвижности - в полиакриламидном геле в шелочных условиях проводили согласно:" методу Срнштейна (Слл-а^А- , 1964) и Дэвиса ' , 1964).

: • Электрофорез в цолиакриламидноы.геле с применяли для разделения белков по молекулярноцу, весу (Ьч'» 1970). - Использовали 8, 10, 12% гели (рН 8,8) . содержащие 0,1% §Ъ£ . Электродный буфер также содержал, Препараты диссоци-

ировали обработкой и % меркаптоэганолом при нагрева-:

•нии на кипящей водяной бане в течение-1мин. Образцы фикси-, ровали 50? раствором ТХУ в течение 18 .часов-и окрашивали 0,25$ раствором кумасси голубого в 50/ УУУ. .

Для получения лизатов фага меченых по :10 мл культуры • Вв в модифицированной к9 среде'выращивали до кокцен- ; трации 2x10^ кл/мл при 37°С и затем инфицировали с мнонествен-ностью 5 и су п еринфиц про вал и с такой .же множественностью через '8 минут для задержки лизиса. 5^К С*4 -белкового гидролизата хлореллы (удельная активность 100 ък /мМ-0 добавляли через 13 минут после!первой * инфекции. Через ЬО минут после первого внесения фага добавляли 3 мл смеси казеинового твдролизата . .

, Швейцария), а еще через 5 минут осазддли на низких скоростях; Осадок был высушен, затем сусгтечдирован

в буфере,' и нанесен для электрофоретического разделения»

- : Выделение головок бактериофага 12 '.'.*'

^ ' - ' * '

■ Исследования последних лет показали, что белковый состав' головок гетерогелен. Причем некоторые белки присутствуют в ми-. • норных количествах* даже, возможно, в количестве.нескольких молекул, что значительно'усложняет (¿.идентификацию и выделе- ' ние. Серьезные трудности на этом дуги-представляет проблема выделения очищенных головок в препаративных количествах, необходимых для проведения анализа» •

Для фага Т4Д известны условно-летальные мутанты, произво-; дящие как' заполненные, так и пустые головки, лишенные хвостовых отростков(Е^аг'^оЫ , 1966). Для получения гойовок фага Т21 мы воспользовались диметилсульфоксидаыи'методом, -Впервые'Камыши с, Чапман и Де Лонг применили действие не-лолярябго. ароматического агента - диметилсульфоксвда (ДМСО) для диссоциации теней Т-четных бактериофагов на отдельные структурные элементы и изоляции капсяд. -

- Мы;использовали действие ДМСО на янтактные вирусные частицы. Выяснилось, что ъ результате обработки фага 6756 ДНСО '-.:, вирусные частицы диссоциируют на отдельные структурные элемен-< ты. Под электронным микроскопом можно наблюдать; отдельные хво- . стовые элементы фага, пустые капснда и'головки,содержащие ДНК. Статистическая обработка электронномикроскопических снимков показала,'что заполненных головок в препаратах присутствует . ; * около 20$, Некоторые головки оставались соединенными с сокра- . ценными чехлами.

.Заполненные головки мы изолировали с помощью центрифугирования в градиенте:концентрации сахарозы.-В результате 'центрифугирования в пробирке образовывались7две четкие.неперекры-; ванщиесй зоны;'В верхней.зоне содержались;элементы разрушенных-' хвостовых отростков и, частично, капсиды фага*.., ~

Нижняя ..зона содержала заполненные головки и небольшую . примесь пустых капсид и чехлов фага. Появление оболочек свя- . зано, повидимому,, с разрушением заполненных.головок,- Часть чехлов, остававшихся-связанными с головками после обработки ДМСО» также переходила в.тяжелую нижнюю фракцию. Следует заметить, ■/-" .что связь сокращенных чехлов с головками.довольно лабильна л ее диссоциации .способствуют повышению рй и ионной силы. При. -', выдерживании головок в 0,5 М ШСС при рН Эв" течение 3 суток' .количество связанных чехлов значительно уменьшается^ и при .■,,/.;... повторном цикле центрифугирования удается получить-чистый препарат головок. ' V .-" ' /

■' Получение капсид бактериоз га' Т2 .

Капсиды фага получали из препаратов головок,; используя' метод "осмотического шока" . При этом выяснит

лось, что головки,- обработанные ДГЛСО, приобретают устойчивость к. "осмотическому шоку". Устойчивость к шоку повышается при - увеличении времени обработки от 10 мин до 60. .Головки, полученные с помощью кратковременной обработки Д.МС0, удается частично шокировать 2М и практически полностью сахарозой. ■ При обработке фага ДМСО в течение.часа, головки:очень, трудно ■

2-1734 5

поддаются разрушению осмотическим шоком, а также замораживанием и оттаиванием.

На основании этих данных можно предполагать, что ДМСО денатурирует ДНК, и она теряет способность к выходу из головки» В пользу этого предположения свидетельствует также тот факт, что при обработке интактного фага 20> ДМСО на холоду в течение суток часть, головок не теряет ДНК, хотя хвостовой чехол и сокращается. Однако, нельзя исключить и возможности образования дополнительных связей типа белок-белок или белок-ДНК..

Некоторые свойства головок бактериофага Т2

'Головки, полученные с помощью ДМСО, мы изучили с помощью методов электронной микроскопии, сгтектрофгоиетри и и седиментация. - I

4 При электронномикроскопических наблюдениях нам не удалось выявить каких-либо отличий ДМСО-головок от головок интактного фага.

При напылении головок на микрофотографиях выявляются типичные сферы, отбрасывающие тени, подобно головкам интактного фага, в то время как оболочки головок имеют характерный мятый вид. •

На микрофотографиях препаратов» контрастированных ФВК,-оболочки значительно темнее ДМСО-головок и головок интактного фага, так как сильнее адсорбируют контрастирующее вещество.

Наличие ДНК в головках подтверждено такие методой спектро-фотомегрии. Спектры поглощения в ультрафиолетовой области головок и целого фага похожи, оба имеют резко выраженный макси-

6

мум при 260 мм. По сравнению с целым фагом у головок:наблюдав! ется увеличение отношения поглощения 260/2В0, чтообъясняетСя* повидиыому, сдвигом соотношения содержания белок/нуклеиновая,?,, кислота в головках в сторону последней. Головки обладают меньшим светорассеянием в области 320 мм, что свидетельствует об их меньших размерах.

Седиментационные свойства головок

Седиментационные свойства головок мы изучили на ультра-' центрифуге " еп с Уф-оптикой, при 260 им. Концентра-

ция препарата при таком центрифугировании не превываяа 0«! иг. Опыты проводили при нейтральных значениях рН. В этях условиях константа седиментации'ДМСО-головок близка к 1200 3* Т$кие же седиментационные свойства имеют и головки фага Т4Д

ЫсЪаи&з , 1968) , Интактный фаг Т2 в твххв усяожяях

- ^

имеет сходный коэффициент седиментации. Повидямому, удаление. хвостового отростка приводит-к.изменению гидродинамических свойств головок, что и компенсирует разницу в молекудяршш : весе.

Были измерены плавучие плотности головок» капсид и целого фага методом равновесного центрифугирования в градиенте плотности С«, (Я . Оказалось, что головки имеют плавучую плот- -ность 1,56, целый фаг-1,52, капсиды-1,29. Исходя из данных, , что плотность ДНК фага Т2 в равна 1,70 (£г/"с5ол/

мы определили, «то в головке содерхится 70$ белков фаговой частицы. Наши результаты согласуются с ранее

полученными данными « Ум пак/в &(.а€1958; &(-еопсг 1959). ' '"-' ■ .*■'/ ' . £

- Седиментационный анализ препарата головок, полученных : ДИСО-мётодом, еще раз подтвердил» что они действительно не. . теряют ДНК. • 7

. Головки, полученные ДЫСОмдетодои, не отличаются по устойчивости к дня-аэе и физико-химическим воздействиям от нормальных фаговых головок. Все это говорит о том, что обработка фага: ; Д11С0 является достаточно специфическим воздействием и не при- .-. . водит к утрате каких-либо белков головок» - .;

Сравнение структурных белков бактериофагов -_ ■ таг, Т4В. ты - ' „у •:

Для исследования гетерогенности белков мы воспользовались методом электрофореза в полиакриламидном геле . ' получившим большое распространение в последние годы. Данный' метод имеет большую разрешающую способность, позволяет опре-/ - делить молекулярные веса отдельных компонентов анализируемого . препарата, не-требует больших количеств белка и сложного оборудования. Ошибка метода не превышает ; : Мысравняли фореграммы целых фагов и тканей, выполненные- . на различных гелях с последующим окрашиванием, и фореграммы, полученные методом радиоавтографии препаратов фагов, содержащих с»- меченные аминокислоты. Анализ фореграмм показал, что > •в составе целых фагов Т2, ТАВ и т^Д присутствует не менее 28 белковых компонентов. Причем белковый состав фага Т2 отлича- ^ ется от белковых составов фагов Эти"отличия касаются как ; высокомолекулярных-компонентов (молекулярные веса более 100000)

так и низкомолекулярных. Компоненты с молекулярным весок более 100000 относятся в фибриллярным белкам. И, возможно,.не-~ которая разница в белковом составе фибрилл фагов Т2 и ТЧ и является причиной того, что эти вирусы по-разному адсорберу-., ются на бактериальной клетке.

Отличия в области аизкоыолекулярных компонентов касаются внутренних белков. 7 фага о сравнению с фагамж/пол-ностью отсутствует полоса, соответствующая внутреннему белку .молекулярного веса 20-23000, но обнаруживается компонент *<>--лекулярного веса 16000. Г фагов Т^ внутренний белок молекуяяр-. ного веса 16000 дальтон отсутствует. Эти наши данные сходятся:, сданными и других авторов. Наличие у фага Т4- внутреннего белка молекулярного веса 20000 отмечали Лэммли, а также Стоун Наммингс (, 1970; Сипт 'тдз ,1971). . ;; У:фага Т2 Стоун и Каммингс обнаружили внутренние белки молекулярных весов 16000 и-ЦООО. Из сравнения фореграмм фага и-, тенейТ2 Ь нам не удалось выявить других каких-либо внутренних компонентов головки.

Сравнение структурных белков головок и капсид бактериофага Т21 и капсид фага Т»Д

Исследования показали, что в состав головокТ2Ь входит/ не менее 7 компонентов с молекулярными весами 70000, 65000* .61000, .47000, 40000, 25000, 16000 дальтон. Те же компоненты за исключением белков с молекулярным весом 16000 и 70000 дальтон присутствуют и на фореграммах капсид Т2С . *

Один из этих компонентов, возможно, относится и к чехольному белку, так как, несмотря,на многократную очистку головок, небольшая*примесь чехлов в препаратах оставалась* Молекулярный вес субьединиц чехольного белка по нашим результатам состав-ляет"70000 дальтон. Капсиды Т2 нам удавалось получить в более очищенном виде. ^

Компонент 16000 дальтон относится к внутренним белкам, —Однако, при данной постановке опытов компоненты с молекулярным весом ниже 15000. дальтон не улавливаются. И такие белки движутся, практически, вместе со свидетелем *г бромфено-ловым синим, подвижность которого принимается за единицу. . V Препараты оболочек головок фагаТ2Ь мы сравнили с кап-сидами фага Т4Д, полученными из лизатов мутантов по гену 19, затрагивающему сборку хвостового стержня.'

.; В препаратах оболочек фага Т4Д выявляется не менее 9 компонентов. 5 из них соответствуют белкам фага(65000, .. 61000, 47000, 40000, 26000), а'четыре компонента имели молекулярные веса 52000, «ООО, ,52000 и 70000. Но необходимо отметить, что если капсиды Т2Ь мы получали ДМСО-методом, то капсиды были получены из мутантов по гену 19. Сравнение микрофотографий капсид, полученных двумя методами показывают, что при обработке ДМСО мы получаем собственно головку без коннекторных структур. У капсид Т4, полученных из мутантов, на микрофотографиях видны воротнички. Поэтому мы предполагаем,

У

что по меньшей мере, 3 компонента с молекулярный весом 52000, 43000 и 32000 дальтов принадлежат воротничкам и муфтам.

Белок с молекулярным весом 70000 дальтон; возможно, как

и. в случае головок фага 7*2 Ь относится к чехлам. . р

Молекулярный вес основного белкового компонента головки фагаТ2б , также как и фага Т4Д составляет 47000 дальтон. Зна-/ чение молекулярного веса этого белка определялось в нескольких препаратах: в препаратах целого фага, теней, головок, капсид, головок, диссоциированных щелочью, уксусной кислотой и фенолом

Исследование самосборки основного белка головки в условиях т \ZifrO

Важной частью нашей работы явилось дальнейшее изучение упорядоченной агрегации основного белка головки, начатое в предыдущих работах нашей лаборатории. Белок головки мы получади диссоциацией щелочью капсид, выделенных ДМСО-ыетодоц. Затем диссоциированные материал разделяли на биогеле Р-60 или ■ сефадексе <^-75. При этом основной компонент головки отделялся от примесей минорных компонентов и продуктов деградации*

Собрать фракции минорных компонентов нам не удалось, так как они выходили одним размытым пиком.

Однако, при таком методе выход препарата был небольшим. Это объяснилось тем, что при обработке фага ДМСО мы получали только около 20% заполненных головок. Часть головок терялась в процессе очистки. Затем некоторые потери препарата были при получе""" и очистке капсид из головок. Поэтому после диссоциации капсид и фильтрации на биогеле нам удавалось получить лишь I очень небольшое количество белка. И тогда мы воспользовались другим методом, щелочным, ранее разработанным в нашей лабора-

торшт(Поглазов и др., 1967). Метод основав на постепенном . защелачивании фаговой суспензии* При,: этой ^сначала мы получали тени фагов, затем дальнейшим^подщелачивакием диссоциировали■ фаговые головки. Отделяли центрифугированием хвостовые элементы. Основной компонент отделялся, как и в первом случае, фильтрацией на биогеле Р-60.

; Белок головки, выделенный обоими методами, растворяли в 1 буферных растворах прирН выше 10. Причем белок, полученный: диссоциацией капсид, легче поддавался растворению. Белок, вы-: деленный щелочным методом, удавалось растворить полностью лишь в глициновом буфере рН 10,3. ...

Гомогенность белка головки мы проверяли методами электрофореза в полиакриламидном геле с 5Я£ и с мочевиной, а также:, методом аналитического ультрацентрифугирования. "■:-.-■... При .электрофорезе в полиакриламидном геле с мочевиной препаратов головочного белка,':предварительно очищенных от примесей минорных компонентов с помощью гель-фильтрации, мы получали одну четкую полосу основного компонента головки. : ' ' При анализе белка головки.в ультрацентрифуге с УФ оптикой Мы;получили два-компонента с коэффициентами седиментации 6,3^ и 9,2 $ . Повидимому, компонент 6,3^ представляет собой небольшой стабильный агрегат белка:головки, а компонент 9,2 »3 ■ ' является более крупным агрегатом.

При анализе основного компонента головки в полиакриламидном геле с в'Лв мы получали один компонент с молекулярным ве-: сом.47000 дальтон. . " , ' С-

- Исследование агрегационных свойств основного белкд

головки .

Как уже говорилось, основной компонент головки удается : растворить только*в буферных растворах с рН выше 10. Возвращение раствора к условия» нейтральной среды приводит к сильной агрегации белка. Элентрокномикроскопические исследования-показывают, что агрегированный материал представляет собой скопление большого количества пленок-о правильной упаковкой субъединиц, причем наряду с монослойными кристаллами с■гекса-' тональной упаковкой субьединиц, которые детально исследовались в работе Поглазова и др. (Поглазов, Месянжииов, Косоуров, 1971) встречаются пленки с муаровой сеткой в виде шестиугольников \ диаметром около 500 £.. Как известно, муаровый рисунок возникает при наложении одинаковых слоев друг на друга с небольшим поворотом. Для анализа электронных микрофотографий мы исполь-зовали-метод оптической дифракции. На дифракционных картинах,, полученных от пленок с муаровой сеткой, обнаруживаются двенад-; цать ярких рефлексов, расположенных попарно, что легко инте- -рпретируется как наложение дифракционных картии от двух слоев, повернутых относительно друг друга на 7-8° (по нашим измере- ■ ниян). Правильность нашего предположения подтвердилась' в мо-" -.дельных опытах при наложении двух схем гексагональных упаковок, нанесенных непрозрачную фотографическую пленку, с поворотом на 7-8°. Получающееся при этом суммарное изображение имеет' муаровую сетку, аналогичную сетке белковых кристаллов. На дифракционной картине, полученной от суммарных моделей, присут-

ствуют те же двенадцать рефлексов,+ расположенных попарно. - ;

Муаровая сетка кристаллов~головочного белка очень напоминает муаровый рисунок,; образующийся при спадении стенок полиголовок. Структура ;полиголовок детально, изучалась многими -исследователями. Выяснилось, что стенки полиголовки представ--ляют.собой пленку со,структурой, аналогичной структуре наших многослойных кристаллов. При спадении,трубки слои в противо- . положцых стенках оказываются-также повернутыми друг к другу;' на 7-8°. '..■;;'■ ■ Л' /-

, В связи с этим возникает вопрос: являются ли наши агрегат ты"плоскими пленками или они представляют собой спавшиеся трубки? То обстоятельство, что пленки.имеют значительную ширину," заставляет думать,' что это не трубки; Кроме трго эти :две структуры трудно сравнивать, так как * они построены ае из _оди- ; каковых белковых субъединиц,* Как, известно, в состав полиголо- , ■вок входит нерасщепленный головочный белок молекулярного .веса 56000 дальтон ( Ьйеп^тС/ ■ - , , 1970). Наши кристаллы построены из белковых субъединиц, полученных при диссоциации -нормальных капсид, т.е. из расщепленного белка молекулярного веса 47000. Но, тем не менее, наличие двуслойности и некоторого сдвига" слоев.по* отношению друг к другу, как и у полиголовок "свидетельствует, повидимому, о проявлении тенденции у двух отдельных пленок ориентироваться при"сближении определенным :-образом. * -

Наблюдать образование упорядоченных кристаллов нам удавалось преимущественно только при'агрегации белка, полученно-;

го .диссоциацией. ДМСО-капсид.г При нейтрализации-растворов белка, полученного щелочным методом мы часто наблюдалиобраэова-■ кие лишь беспорядочных агрегатов. " ^ ;

В работе Поглазова .и др. также отмечалось, что в'ряде; и случаев, при агрегации белка головки, полученного щелочными V методом, им но удавалось наблюдать образования кристаллических структур. .Анализ препарата белка, неспособного к самосбор-ке^, в-ультрацентрифуге показал, что вместо компонента 5,8 обнаруживается компонент 3;5 .

. : Нам удавалось-иногда"наблюдать распад агрегата 6,3 £ да-, же/до - компонента с коэффициентом седиментации около . , . ' При определении молекулярного веса головочного белка,: ;неспособного давать упорядоченных кристаллов, методой алектро-.'фореза в геле с ¿2)$ вместо одно!Г полосы, соответствующейУмо-. лекулярному весу 47000 дальтон, мы обнаружили 3 соответствую-: щие^молекулярным весам 15000 - 173-Л).-То есть в условиях воз-.; действия 'щелочи происходит дальнейшая диссоциация белка голо-;вок:;до; низкомолекулярных фрагментов, что является причиной • .'потери белком способности, к самосборке. При кратковременной^ ■обработке капсид 0,1 М МоСС подобную деградацию белка не наблюдали..

":".. V в ы в о д ы ■ .

■ I. С помощью электрофореза в полиакриламиднлм геле с проведено сравнительное изучение бактериофагов T2L Л Т4Д и Т4В. Показано, что в состав вирусных частиц входит не менее 28 различных структурных субъединиц с молекулярным:ве--сом от Т5000 до 130000 дальтон.:Выявлены отличия по структурным белкам фагов T2Ln.T4I>. - ;

2. Изучено действие диметилсульфоксида; на частицы бактериофага T2L и разработан метод выделения головок фага, . содержащих ДНК и определены их седиментационнке характеристики

3. "Показано,, что в:состав головок фага.T2L входит не ) менее jp белковых компонентов, а в состав капсид - 5 субъеди-.. ниц; В составе капсид бактериофага Т4Д обнаружено не менее 7

структурных белков. Белки фага Т4 с^молекулярным весом:!.. - ; ,52000, 43000 и 32000, повидимоиу, входят в состав коннекторов« структур, обеспечивающих взаимодействие головки с хвое-, том.фага. "

4* С помощью методов электронной микроскопии и оптической-длффракции установлено^ что самосборка-главного белка головки; фага T2L 01 vitl'O часто приводит к образованию двуслойных ■ кристаллических.пленок, сходных по структурной организации с ■полиголовками. "

По материалам диссертации опубликованы1следующие-работы:

Л ■Месяцжиноз-З.В., Никольская Т.Н., Богомолова Т.Д. Изучение структурных белков бактериофага. Т2. Тезисы П Бсесо- , юзного Биохииивеского съазДа,' Ташкент, I&9 г, " ■, - ■ 2. ¡¿есянжкнов 3.В.,' Богомолова Т.А,, Поглазов Б.Ф._- ' . Еыделение и'изучение-свойств голоеок бактериофага Т2£/ . . Биохимия, 1971, 1.36, № 6, 1195-119?. v ' - v

■ З. Яоглазов-Б.^^, ,^еся;шиов B,j3., ICacoyjjOE Г.И.-,. Кого-'-.' полова Т.А. О самосборке белка головки бактериофага Т2* Молекулярная Пиология, Д971, т.5, '¿6, ■:

- - 4. 'Зесянжинов В.В,, Пронвиз Т.А1,, Волкова Т.П., ilorae-;...-'.зов Б.<Р; Белки бактериофага I2L. Тезисы докладов '1У г родного ЕиойЕлзичсско го конгресса, Т-ом ¿, стр. ГЛс. .

ПОЛИ. К ПЕЧАТИ 17/У-73 Г. ФОРМАТ в0х&0/18 - ФИЗ.ПЛ, 1,0. ЗАКАЗ 1734. Т1РАЖ 200. ЭКЗ.