Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменения в клеточном составе молозива в молозивный период у коров, собак и кошек

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Изменения в клеточном составе молозива в молозивный период у коров, собак и кошек"

& На правах рукописи

Соколенко Сергей Сергеевич.

Изменения в клеточном составе молозива в молозивный период у коров, собак и кошек

Специальность 03.00.13 — физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2004

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Научный руководитель: доктор биологических щук, профессор Скопичев Валерий Григорьевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Максимов Владимир Ильич кандидат биологических наук, доцент Полякова Елена Павловна

Ведущая организация - Академия сельского хозяйства и природных ресурсов Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого.

Защита

оятся

2004 г.

в

чждо а

заседании диссертационного совета Д 220.042.04 в ФГОУ ВПО Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина по адресу: 109472 г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО Московской государственной Днадемии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

В.Д. Фомина

Ю1В 9

/////

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность. Начало систематическому изучению свойств молока и молочных продуктов было положено Ав. А. Калантаром.

Молозиво достаточно длительное время привлекало внимание исследователей всего мира. Иследованию подвергались не только составные компоненты молозива но и его вляние на организм новорожденного. Наибольшее количество работ посвящено , конечно крупному рогатому скоту. Это достаточно легко объяснить тем что, коровье молоко является одним из основных продуктов питания человека и соответственно является залогом его безопасности и здоровья.

По мере совершенствования методов исследования все новью исследователи обращались к этой теме.Условно, весь проведённый ранее объем работы можно разделить на следующие категории: работы посвященные химическому (жирнокислотный состав молока и молозива, содержание белков, аминокислотный состав) составу молозива, работы посвященные поиску и изучению в молозиве различных биологически активных веществ, обладающих гормональными или другими регуляторными функциям, работы посвященные клеточному составу составу молозива. Большое внимание уделялось молоку и молозиву как объектам диагностики различных болезней. Доступность этого секрета и связь его состава с составом крови животного, его физиологическим состоянием делает его удобным материалом для диагностических исследований. В настоящее время ученые всего мира уделяют значительное внимание молозиву и молоку как фактору передачи при некоторых вирусных болезнях.

Бурное развитие иммунологии повлекло за собой повторный

всплеск интереса к молозиву, уже как фактору передачи иммунитета от матери к потомству. Уровень развития науки позволил выявить и исследовать различные гуморальные факторы молозива участвующие в передаче иммунитета. В первую очередь вниманию подверглись иммуноглобулины и факторы неспецифического иммунитета. Было выявлено что для многих животных молозиво является единственным источником антител для новорожденных, на этих исследованиях начала базироваться теория об передаче и формировании иммунитета у детёныша с помощью и под контролем иммунной системы матери. При

этом передача клеток иммунной системы (нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, тканевых макрофагов) осуществляется посредством молозива: В настоящее время известно что непосредственно перед лактацией имеет место снижение уровня белка в кров количества некоторых классов лейкоцитов, ряд авторов отмечает что, . снижение общего белка крови, лейкоцитов и нейтрофилов в молозивный период обусловлено поступлением их в молочную железу и использованием на синтез белков молозива. Число соматических клеток в молозиве возрастает в 10 раз. Снижение общего белка сыворотки крови при молозивном периоде связано с поступлением его в молочную железу. В сыворотке молока в этот период общее содержанием белка увеличивается в 2 раза, возрастает количество иммуноглобулинов' и протеозопептонной фракции белка. Повышение количества лейкоцитов крови с одновременной нейтропенией обусловлено поступлением их в молочную железу, в цитограммах секрета которой число нейтрофилов достигает 60%. Возрастание моноцитов крови при молозивном периоде вызывает увеличение макрофагов в секрете молочной железы. Увеличение количества иммуноглобулинов сыворотки молока в молозивный период, при запуске и при мастите коррелирует с появлением в цитограммах молока плазматических клеток, что указывает на синтез иммуноглобулинов в молочной железе. (Аленичкина Т.Е.; Севастьянова В.М., 1997). При этом в молозиве преобладают нейтрофилы, лимфоциты, моноцитоподобные клетки (убероциты) и отторгнувшиеся клетки молочной железы (Пивовар Л.М.,1987). При этом среди всех фракций фракция лейкоцитов была доминирующей, согласно опубликованньш данным (Хрусталева Г.Й., 1983), при исследовании различных фракций молока: цистернальной, альвеолярной, остаточной установили, что доминирующим видом клеток во всех фракциях секрета 1 и 5 дня лактации являются клетки белой крови, из которых около половины приходится на лимфоциты. Определенная часть этих клеток, - по-видимому, представляет элементы иммунной системы в молочной железе.

Таким образом в природе имеется довольно интересное явление когда осуществляется передача иммунитета не только пассивно, с помощью иммунноглобулинов, но и закладывается фундамент для нормального функционирования иммунной системы в дальнейшем.

При проведении исследований авторами проводилось исследование либо одной стороны процесса либо другой и лишь сравнительно неолыпое количество авторов посвящало свои работы изучению перечисленных систем. Все работы выявленные путем литературного обзора проводились на достаточно крупных животных таких как крупный рогатый скот, свиньи, овцы.

Таким образом, изучив основные направления развития исследований в изучении роли клеточных компонентов молозива нами были пославлены следующие задачи:

1. Определить состав клеток молозива собак, кошек и сравнить их с наиболее изученным в этом вопросе животным - крупным рогатым скотом (коровой).

2. Проверить насколько сильны качественные и количественные отличия в клеточном составе молозива разных видов.

3. Определить основные закономерности изменения цитограммы молозива у исследуемых видов животных.

4. Выявить особенности биохимической активности клеток молозива исследуемых видов животных.

5. Выяснить принцип проникновения молозивных клеток сквозь кишечную стенку.

6. Оценить степень влияния иммунных клеток молозива на формирование иммунной системы детёныша.

Научная новизна. Впервые изучены в сравнительном аспекте морфологические изменения происходящие в ассоциированной со слизистой кишечника лимфоидной тканью под влиянием молозива. Впервые изучена в сравнительном аспекте ферментативная активность иммунокомпетентных клеток молозива собак и кошек. Впервые испытан метод прогнозирования гипогалактии коров с помощью цитологического анализа молозива первой порции лактации.

Теоретическая и практическая ценность. Выполненные исследования и полученные результаты указывают на то, что иммунокомпетентные клетки молозива оказывают влияние на формирование иммунной системы детёныша, путем воздействия на ассоциированную со слизистой кишечника лимфоидную ткань.

Доказана эффективность предлагаемого метода прогнозирования гипогалактии у коров. Материалы диссертации используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Клеточный состав молозива индивидуален для каждого вида животного и существенно различен между изучаемыми видами.

2. При прохождении лактационного цикла имеется общая тенденция к понижению количества выделяемых клеток, изменения затрагивают как состав клеток так и их численность.

3. Изменения в составе выделяемого молозива связаны с исчерпанием запаса клеток оставшихся после подготовки молочной железы к лактации и их заносом в молочную железу с током крови. Это проявляется в аналогичности профиля крови и молозива при окончании молозивного периода.

4. Биохимическая активность щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы и пероксидазы клеток молозива имеет различия в абсолютных значениях для каждого вида животного и общую тенденцию к снижению активности. Изменения в содержании гликогена различны от вида к виду, достоверного изменения содержания его в клетках в течении молозивного периода не выявлено.

5. Перемещение лимфоцитов молозива сквозь кишечную стенку происходит по межклеточным пространствам, однако область миграции ограничивается стенкой кишечника. Незначительная часть их проникает в региональные лимфатические узлы. Проникновение в центральные органы иммунной не происходит.

Апробация работы. Материалы доложены и обсуждены на § научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (С.-Петербург, 2001,2002,2003 гг.), • на 56-й, 57-й, 58-й научных конференциях молодых ученых и студентов (С.-Петербург, 2001,2002,2003 гг.),

• на X и XI Международных конгрессах врачей ветеринарной медицины (Москва, 2001,2002 гг.),

• конференции врачей ветеринарной медицины «Зоосфера», (С.-Петербург1, 2002), конференции «Акушерство и гинекология. Достижения и пути развития в XXI веке» (С.Петербург, 2002).

• Изданы в сборнике научных трудов СпбГУ в 2001 году.

Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, иллюстрирована 29 таблицами, 1 рисунком, 3 схемами, 2 диаграммами, 19 фотографиями и включает разделы: обзор литературы, собственные исследования обсуждение, выводы. Список использованной литературы включает 137 источников, в том числе 88 иностранной литературы.

Для выполнения исследований в данной работе использовались материалы и методы адекватные поставленным задачам. Объектами исследования являлись животные следующих видов корова домашняя (черно-пёстрая порода); кошка домашняя (разнопородная группа) и собака домашняя (разнопородная группа).

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследования.

Материалом для исследования служили: мазки молозива в первые 7 дней лактации и за день до родов; образцы молозива брались 1 раз в сутки перед кормлением котят (щенков), дойкой (у коров) в одно и то же время; гистологические препараты, приготовленные из стенки тонкого отдела кишечника (область Пейеровых бляшек, область вдали от Пейеровых бляшек), слизистой оболочки ротовой полости, глотки (область подчелюстных лимфатических узлов). Образцы для гистологического исследования отбирались от абортированных котят и щенков, выбракованных по породным признакам клинически здоровых щенков и котят в течении молозивного периода

Весь объем работы был спланирован и представлен в нескольких сериях экспериментов (опытах) исходя из поступления исследуемого материала.

Автор проводил исследования в соответствии с планом и программой научно-исследовательской работы кафедры1 физиологии животных СПбГАВМ. Работа выполнялась в течение 2000-2003 гг., на кафедре физиологии животных СПбГАВМ, в лаборатории электронной микроскопии Института сельскохозяйственной микробиологии РАСХН. Объектами исследования служили коровы черно-пестрой породы (16 голов) в возрасте 4-6 лет; собаки преимущественно средних пород (11 голов), разнопородная группа в возрасте 3-6 лет; кошки группа метисов (11 голов) в возрасте от 1,5 до 3 лет.

Схемы опытов:

Мать

молозиво

Г'— " N (

сама самка СбИЦ само*

детеныши

лейкоцитарная взвесь

шпечл

юигег

/ состав \ V юшгок у

Пояснения к схеме: задачей этого опыта являлось обнаружение в .лейкоцитарной взвеси лейкоцитов самок. Метод базируется на

обнаружении телец Барра - неактивной X хромосомы, выявляющейся в виде хроматиновой глыбки. Она присутствует только у самок. Поэтому, чтобы обнаружить лейкоциты матери в лейкоцитарной взвеси детёныша необходимо было исследовать материал от детёныша - самца. Использовались следующие методы:

Метод определения полового хроматина: Метод основан на исследовании структурного образования в ядрах клеток - X хроматина ( метод НИИСмМинЗдрав).

• Подсчет лейкоцитов в молозиве проводился методом Хилькевича.

• Выделение проводилось по методике «Выделение лимфоцитов в градиенте плотности» (Г. Фрик, 3. Прейснер) для малых объемов крови.

• Исследование свойств лейкоцитов содержащихся в молозиве и в крови детёнышей исследовались с помощью следующих методик:

• Определение фагоцитарной активности нейтрофилов (визуальный метод).

• Тест с нитрозолевым синим (НСТ-тест).

• Оценку состояния Т-системы иммунитета проводили с помощью реакции спонтанного розеткообразования (Е-ЮК).

• Оценку состояния В - системы иммунитета проводили с помощью реакции ЕАС - розеткообразования.

• Оценка клеточных биохимических показателей проводилась с использованием коммерческих наборов производства фирмы «Диахим». Определялись следующие ферменты: пероксидаза, щелочная и кислая фосфатаза, гликоген.

• Исследование гистологических срезов проводилось при помощи окраски по Романовскому - Гимза и пикроиндигокармином.

Схема опыта № 2,

Пояснения к схеме: В данном опыте участвовали как детёныши самцы так и самки. Проводился отбор крови для необходимых исследований. Лейкоцитарные взвеси из органов не приготовлялись. Основная цель: проверить соответсвие изменений функциональной активности лейкоцитов до и во время скармливания молозива.

Схема Опыта № 3.

Пояснения к схеме: В данном опыте, основной акцент делался на выяснение изменений происходящих в кишечной стенке у детёныша до и после выпойки молозива. В качестве контроля служили плоды, изъятые при проведении абортов. В качестве опыта - детёныши родившиеся нормальным путем и получавшие молозиво в первые дни своей жизни.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Полученные результаты показывают, что у всех исследуемых животных в молозиве имеется различное количество клеток. Обнаруженные особенности скорее всего являются видовыми и сохраняются в известных пределах для всех особей одного вида.

В рамках опыта проводилось определение цитограмм молозива исследуемых животных. Цитограммы молозива коров, собак н кошек приведены в таблицах 3.1.2, 3.1.3, 3.1.4. После изучения цитограммы молозива было проведено исследование проникающей способности лейкоцитов молозива. Для этого было проведено микроскопическое исследование лейкоцитарной взвеси приготовленной из органов детёнышей. При детальном исследовании были обнаружены искомые лейкоциты. Результаты представлены в таблице 3.1.5. Несомненно, что лейкоциты молозива имеют важное значение в создании местного и общего иммунитета у новорожденных животных. В литературе описан факт, что после приема молозива число лейкоцитов в крови новорожденных животных увеличивается преимущественно за счет лимфоцитов тимусного происхождения. Также указывается что особенно много в молозиве содержиться лимфоцитов (И.М. Карпуть, 1986). И их количество закономерно увеличивается к концу лактации. Действительно при исследовании молозива коров и свиней имеет место факт изменения клеточного профиля секрета.

Этот же процесс зафиксирован и у других животных. Однако, состав клеток не у всех животных меняется одинаково. Так в частности, у собак зафиксировано увеличение количества нейтрофилов в молозиве, при одновременном снижении количества

Таблица 3.1.2. Цитограмма молозива коров (черно-пестрая порода) _Р=0,01_

цитс »ГРАММА %

Ден ь Б э м п С Л М ЭПК

1 0 0,1±0,0 1 0 6,31±0,3 24±1,33 55,7±4,3 1,8±0,2 12Д±0, 2

2 0 ОД ±0,0 1 0 4,61±0,4 1 18,62±1, 5 70,3±6,6 1,5±0Д 5,7±0,3

3 0 0,1±0,0 1 0 4,42±0,4 18,33±1, 3 70,1±7,2 1,5±0Д 5,7±0,3

4 0 0Д±0,0 1 0 4,36±0,2 1 18,3±2Д 67,2±7Д 1,6±0,2 6,3±0Д

5 0 ОД ±0,0 1 0 4,33±0,3 1 18,26±1, 9 67,3±7,2 1,62±0, 2 7Д±0,2

б од±о;о 1 ОД ±0,0 2 0 4,31±0Д 5 18,23±2, 2 6бД±7Д 1,7±0,б 9,5±0,3

7 0Д±0,0 2 0,1±0,0 1 0 4,29±0Д 9 18Д7±2, 1 66,1±7,0 1,7±0,4 9,5±0Д

(ЭПК - эпителиальные клетки)

Таблица 3.1.3. Цитограмма молозива собак. Р=0,01

ЦИТОГРАММА %

Ден ь Б Э м ю п С Л М ЭПК

1 0 0 0 0 6,31±0,5 2 55,6±0,6 1 27Д±1, 9 3,2±0,3 10,3±1, 2

2 0 0 0 0 4,6Ш,3 8 56,2*0,5 9 26,9±1, 7 ЗД±0,2 4,2±1,0

3 0 0 0 А. 0 4,42±0,5 1 56,7±0,5 2 26,7±1, 7 2,9±0,4 4Д±0,9

4 0 0 0 0 4,36±0,5 1 57,4±0,5 3 26,4±1, 8 2,7±0,4 3,5±0,6

5 0 0 0 0 4,33±0,5 2 58Д±0,5 2 26,2±1, 9 2,3±0,7 3,4±0,5

б од 0 0 0 4,31±0,5 3 58,3±0,5 3 25,^7*2, 2 2Д±0,7 3,45±0, 45

4,29±0,5 58,9±0,5 24,7±1, 1,8±0,7 3,4±0,4 7 ОД [О |0 |0 11 |6 17 1 11

эпителиальных клеток и не значительном снижении количества лимфоцитов. Сходный процесс происходит и у кошек. Если на эти изменения смотреть с учетом лейкоцитарного профиля крови исследуемого животного (см. таблицу 3.1.6.), то создается впечатление, что цитограмма молозива стремится к выравниванию своего клеточного профиля относительно профиля белой крови. Скорее всего эти изменения связаны с тем, что на стадии подготоски к лактации происходит накопление лейокцитов в молочной железе. Это, на наш взгляд вполне естественно, так как в процессе подготовки к лактации участие иммунной системы весьма значительно. Так по результатам авторов ранее проводимык исследований (Чекиров, Скопичев, 1988), в первичном молочном секрете, полученном от овец за 5-12 сут до окота, содержалось значительно больше иммунологических факторов (Т-, В-лимфоцитов, Р<0,02; иммуноглобулинов; Р<0,01; лизоцима, Р<0,01; естественный антител, Р<0,01), чем в молозиве, взятом от животнык сразу после ягнения. Имеются сведения о важной роли клеточных и неклеточныгх элементов внутридольковой соединительной ткани в период дифференцировки и инволюции молочной железы у лабораторных животных. Авторы отмечали со ссышкой на ранее проводимые исследования (Хрущов и др. 1973), что подавление деятельности регионарного лимфатического узла (источника лимфоидных клеток) существенно нарушает морфологические процессы и подготавливает развитие структуры альвеолы. Таким образом данные этих авторов показали, что лимфоидные клетки молости альвеол наряду с образованием иммунологических факторов молозива» вероятно, участвуют и в формировании альвеолярного комплекса, и дифференцировке секреторных клеток молочной железы.

Включение в процесс дифференцировки индуцирующих влияний мезенхимы и аутоиммунных процессов дополняется специфическими изменениями в структуре секреторных клеток и их мембран, приуроченными к периоду становления лактационной функции. В процессе формирования альвеолярного комплекса в молочной железе накапливается значительное число иммунокомпетентных клеток, которые участвуют в деструкции внутриальвеолярного клеточного материала

объясняет лимфоцитарную инфильтрацию молочной железы в период, предшествующий началу лактации. Также указывалось, что

Вид Б э Нейтрофилы Л М

животно го М ю п с

КРС 0- 3,0 0 0 3-10 10- 40- 4-

1,5 10, 0 30 77 10

Собака 0,4 3,0 0 0 0-6 45- 10- 4-

- - 75 40 10

1,6 9,0

Кошка 0-1 2,8 8,0 0 0-1 3-9 4768 1250 0,5 -2

дегенерирующие клетки в силу изменения свой антигенной структуры становятся мишенью для различных лимфоидных клеток, интенсивно мигрирующих в полость альвеолы (Скопичев, 1993). Понижение содержания клеток в секрете и стабилизация численности их и состава связаны с дальнейшим заносом их из кровеносного русла в молочную железу и выделением с секретом.

§ 3.2. Биохимические и функциональные свойства лейкоцитов молозива.

Основываясь на ранее проводимых исследованиях было сделано предположение, что молозивные клетки могут по своим биохимическим и иммунным свойства заметно отличаться от своих собратьев в кровяном русле. Кроме того, обнаружение молозивных лимфоцитов за пределами кишечника детёныша предполагает их нахождение в активном состоянии и возможно, наличие какой либо специфической сенсибилизации. Так как, согласно литературным данным лимфоциты, взятые из кровеносного русла способностью проникать сквозь кишечную стенку не обладают. Поэтому основными задачами в эксперименте номер два было изучение морфологии и биохимических свойств лейкоцитов молозива. Для этих целей были использованы разнообразные методы, описанные в соответствующем разделе.

активность 4 креста 2тфеста крест

день

1 28,831±0,009 71,550±0,050 1,459±0,039

2 27,612*0,011 70,582±0,029 2,603±0,037

3 26,665±0,028 72,543±0,070 3,543±0,060

4 25,533±0,027 74,109±0,116 5,487±0,043

5 23,114±0,101 77,467±0,061 7,762±0,067

6 21,886±0,042 80,195±0,082 10,593±0,023

7 19,376*0,067 82,395±0,045 11,400±0,081

Таблица 3.2.1. Активность пероксидазы лейкоцитов молозива собак.

Р=0,01

щф(%) шф (ио)

день

1 65,40±0,08 0,83±0,01

2 63,28±0,15 0,78±0,01

3 60,99±0,14 0,69±0,01

4 58,51±0,04 0,65±0,01

5 56,02±0,09 0,63±0,01

6 52,32±0,07 0,59+0,01

7 50,33±0,13 0,58±0,01

Таблица 3.2.2. Акшвность и индекс 01фашивания щелочной фосфатазы лейкоцитов молозива собак Р=0,01

Гликоген (Л) Гликоген (Н)

день

1 25,31±0,02 95,91±0,05

2 23,68±0,05 95,86±0,03

3 23,18±0,07 95,29±0,02

4 23,14±0,05 94,28±0,12

5 23,91±0,04 94,37±0,03

6 23,86±0,03 95,92±0,02

7 25,95±0,04 96,49±0,02

Таблица 3.2.3.Содержание гликогена в лейкоцитах молозива собак.

Р=0,01

активность 4 креста 2 креста крест

день

1 35,778±0,083 62,637±0,094 1,585±0,020

2 34,276±0,065 64,089±0,055 1,63510,019

3 33,061*0,065 65,380±0;Ш 1,559±0,025

4 31,657±0,074 66,784±0,081 1,559±0,018

5 28,585±0,152 69,832±0,156 1,583±0,018

6 27,219±0,065 71,149±0,073 1,632±0,015

7 36,366*0,193 62,016±0Д85 1,618±0,025

Таблица 3.2.4. Активность пероксидазы в молозиве кошек. Р=0,01

щф(%) щф(ио)

день

1 75,59±0Д4 0,890±0,012

2 72,78±0,18 0,835±0,012

3 72,80±0,17 0,727±0,009

4 67,34±0,06 0,715±0,014

5 64,45±0Д1 0,667±0,009

6 60Д8±0,1 0,636±0,011

7 57,85±0,15 0,633±0,009

Таблица 3.2.5. Активность и индекс окрашивания щелочной фосфатазы лейкоцитов молозива кошек. Р=0,01

Гликоген (Л) Гликоген (Н)

день

1 28ДЗ±0,08 95,47±0,5

2 26,49±0,05 96,37±0,28

3 25,82±0,1 94,71±0,53

4 25,96±0,04 93,38±0,48

5 26,59±0,04 94,07±0,29

6 26,57±0,08 96,38±0,21

7 28,70±0,08 96,84±0,40

Таблица 3.2.6.Содержание гликогена в лейкоцитах молозива кошек.

Р=0,01

Результаты гистохимического исследования лейкоцитов молозива представлены для молозива собак в таблицах 3.2.1,3.2.2,3.2.3., для кошек в таблицах 3.2.4, 3.2.5, 3.2.6 соответственно. Как видно из полученных результатов активность лейкоцитарных ферментов неодинакова и изменяется в процессе лактации. Также имеется достоверное отличие активности ферментов между видами животных. Активность ферментных систем у кошек оказывется, выше чем у собак, что возможно связано с особенностями протекания у них перекисных реакций и функционированием системы окисляющих и антиокисляющих ферментов. Некоторое снижение ферментативной активности клеток к концу молозивного периода, очевидно, связано с затуханием предлактационных иммунных процессов и созданием более стабильного состояния периода молокоотделения.

Размеры клеток обнаруженных в молозиве различаются в между видами животных. Усиленная вакуолизация связана с наличием большого количества жира и его поглощением клетками, с дальнейшим вымыванием в процессе фиксации мазков.

Оценка изменения клеточного иммунитета в молозивный период проводилась путем оценки следующих показателей: Общее количество лимфоцитов, количество Т-лимфоцитов, количество В-лимфоцитов, фагоцитарная активность нейтрофилов.

Возраст телят, дней к 01 о2

При рождении 3,3 ±0,04 3,28 ±0,06 3,21 ± 0,08

3 3,25±0,02 3,01±0,08 2,84 ±0,09

5 3,21±0,03 2,32±0,04 3,12±0,12

10 3,24±0,04 3,23±0,05 3,09±0,13

Таблица 3.2.7. Общее количество лимфоцитов в крови телят. Р=0,01

Возраст телят, дней к о1 о2

При рождении 0,71±0,03 0,69 ± 0,01 0,72 ±0,03

3 0,79 ±0,02 0,68 ± 0,03 0,73 ±0,03

5 0,88 ±0,03 0,34 ±0,03 0,37 ±0,05

10 0,8 ±0,03 0,75 ±0,01 0,62 ±0,04

Таблица З.2.8.. Общее количество Т-лимфоцитов в крови телят.

Р=0,01

Возраст телят, дней к о1 о2

При рождении 0,22 ±0,01 0,23 ±0,04 0,21 ±0,07

3 0,31 ±0,04 0,17 ±0,01 0,21 ±0,01

5 0,37 ±0,01 0,22 ±0,02 0,23 ±0,03

10 0,29 ±0,01 0,27 ±0,01 0,33 ±0,02

Таблица 3.2.9. Общее количество В - лимфоцитов в крови телят.

Р=0,01

Возраст телят, дней к о1 о2

При рождении 31,12±0,21 31,33 ±0,99 31,28 ±0,83

3 34,71 ±0,12 26,32 ±0,92 31,94 ±0,54

5 32,39 ±0,21 20,02 ±0,51 33,29 ±1,02

10 35,83±0,07 29,04±0,5 9 33,82 ±0,65

Таблица 3.2.10. Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов в крови телят. Р=0,01

Возраст щенят, дней к 01 о2

При рождении 2,97±0,07 2,98 ±0,08 2,98 ± 0,06

3 3,41±0,06 2,95 ±0,07 3,36 ±0,1

5 3,11±0,06 2,97±0,05 3,05±0,12

10 3,45±0,06 2,% ±0,07 3,35±0,1

Таблица 3.2.11. Общее количество лимфоцитов в крови щенят.

Р=0,01

Возраст щенят, дней к о1 о2

При рождении 0,61±0,03 0,б±0,04 0,61±0,03

3 0,67±0,02 0,59±0,0 3 0,64±0,05

5 0,63*0,01 0,52±0,0 2 0,58±0,03

10 0,71±0,02 0,63±0,0 3 0,68±0,04

Таблица 3.2.12. Общее количество

Р=0,01

-лимфоцитов в крови щенят.

Возраст щенят, дней к о1 о2

При рождении 0,22 ±0,04 0,21 ±0,04 0,23 ±0,05

3 0,34 ±0,06 0,25 ±0,02 0,28 ±0,03

5 0,38 ±0,03 0,27 ±0,03 0,31 ±0,04

10 0,32 ±0,05 0,27 ±0,04 0,33 ±0,04

Таблица 3.2.13. Общее количество В - лимфоцитов в крови щенят.

Р=0,01

Возраст щенят, дней к о1 о2

При ротвдении 35,13±0,24 35,09 ±1,05 35,14 ±0,84

3 32,67 ±0,13 29,41 ±0,94 34,84 ±0,57

5 31,35±0,23 17,54 ±0,53 30,34 ±1,97

10 33,97±0,09 31,04±0,6 5 33,68 ±0,71

Таблица 3.2.14. Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцит«» в крови щенят. Р=0,01

Возраст котят, дней К 01 о2

При рождении 3,26 ±0,05 3,02 ±0,08 2,95 ± 0,09

3 3,23±0,03 3,01 ±0,07 2,93 ±0,13

5 3,22±0,05 2,36 ±0,05 3,14±0,11

10 3,23±0,04 3,28 ±0,07 3,11±0,19

Таблица 3.2.15. Общее количество лимфоцитов в крови котят. Р=0,01

Возраст котят, дней к о1 о2

0,72±0,01 0,64 ±

При рождении 0,02 0,63 ±0,02

0,82 ±0,01 0,66 ± 0,75 ±0,06

3 0,02

5 0,90 ±0,02 0,37 ±0,03 0,40 ±0,04

10 0,83 ±0,01 0,79 ±0,02 0,66 ±0,05

Таблица 3.2.16. Общее количество Т-лимфоцитов в крови котят. Р=0,01

Возраст котят, дней к о1 о2

При рождении 0,20 ± 0,003 0,19 ±0,05 0,28 ±0,08

3 0,33 ±0,05 0,19 ±0,01 0,20 ±0,01

5 0,39 ± 0,005 0,20 ±0,01 0,22 ±0,02

10 0,31 ±0,007 0,28 ±0,01 0,30 ±0,02

Таблица 3.2.17. Общее количество В - лимфоцитов в крови котят.Р=0,01

Возраст котят, дней к 01 о2

При рождении 33,13±0,24 31,36 ±1,05 31,28 ±0,84

3 33,73 ±0,13 27,36 ±0,94 33,94 ±0,57

5 31,43 ±0,23 19,02 ±0,53 34,32 ±1,97

10 34,89±0,09 31, 04±0,65 33,68 ±0,71

Таблица 3.2.18. Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов в крови котят. Р=0,01

В молоке, полученном при нормальных условиях от здорового животного, содержится около 100 ферментов различного происхождения, из которых исследователями выделено и идентифицировано более 20 истинных, или нативных ферментов следующих классов — оксидоредуктаз, трансфераз, гидролаз, лиаз, изомераз и лигаз. Одни из них (лактозосинтаза, щелочная фосфатаза, ксантиноксидаза, лизоцим и др.) синтезируются непосредственно в секреторных клетках молочной железы, другие (каталаза, плазмин, липопротеидлигаза, рибонуклеаза, альдолаза и др.) поступают в молоко из крови животного.

Большая часть нативных ферментов молока всех млекопитающих являются нормальными компонентами секреторных клеток, которые участвуют в клеточном метаболизме и синтезе составных частей молока и затем переходят в молоко при повреждении клеток во время процесса секреции. Возможно, некоторые гидролитические ферменты (протеиназы, липазы и др.) специально секретируются клетками молочной железы для оказания помощи новорожденному в усвоении питательных веществ молозива и молока, так как последние обладают несовершенной пищеварительной системой. Кроме нативных ферментов в молоке и молозиве присутствуют многочисленные внеклеточные и внутриклеточные ферменты. Они вырабатываются содержащимися в молоке бактериями и лейкоцитами.

В этом случае использование методов оценки общей ферментативной активности представляется не эффективным. Поэтому особое значение следует придать гистохимическим методам, как позволяющим оценить именно исключительно клеточную активность. В ходе исследования были выявлены некоторые закономерности в изменении ферментатиной активности клеток. Так например, имеются различия между активностью ферментных систем различных видов.

Размеры клеток молозива скорее зависят от вида животного, хотя и могут варьировать в известных пределах в зависимости от состояния животного и срока лактации.

§ 3.3. Результаты гистологического исследования ассоциированной лимфоидной ткани.

Не отрицая комплексность и взаимодействие всех органов иммунной системы, тем не менее можно выделить роль каждого из них, так например селезенка реагирует на антигены, циркулирующие в крови, лимфатические узлы защищают организм от антигенов, которые проникают через кожу или слизистые оболочки.

Особую роль несет лимфоидная ткань связанная со слизистыми оболочками. В этой группе различают три группы тканей по анатомо-гистологическому признаку: связанную со слизистыми лимфоидную ткань кишечника, лимфоидную ткань мочеполовых путей, лимфоидную

ткань дыхательных путей. Основной эффекторный механизм местного иммунного ответа на уровне слизистой оболочки - это секреция и транспорт секреторных антител класса ^ A непосредственно на поверхность эпителия слизистой оболочки (Ройт А., Бростофф Дж. Мейл Д., 2000). Следует также учитывать, что большая часть лимфоидной ткани организма (более 50%) находиться именно в слизистых оболочках кишечника. Таким образом оказывается очень важным изучить представление лимфоидной ткани в кишечнике и по возможности, как можно глубже изучить взаимодействие между представителями лимфатической системы представленными в молозиве и лимфоидной ткани кишечника.

Исследованию подверглись животные получавшие полноценное молозиво от матери, получавшие неполноценное молозиво. Неполноценным молозивом в данном случае считалось молозиво с более низким содержанием клеточных компонентов. Группой контроля служили плоды искусственно абортированные накануне своего рождения. Проводилась оценка развития и представления лимфоидной ткани кишечника, изучение способа проникновения лимфоцитов молозива сквозь слизистые кишечника; изменение свойств ферментов лейкоцитов у животных получавших полноценное и не полноценное молозиво и не получавших его.

В ходе сравнения обращалось внимание на развитие структур связанной со слизистыми лимфоидной ткани. Оценка проводилась визуально. Оценивались следующие показатели: просвет лимфатических сосудов, дидметр лимфатических узлов, заселенность лимфатического узла, наличие лейкоцитарного инфильтрата, состав инфильтрата, наличие М-клеток. Гисгоструктуры в исследуемых образцах сравнивались по изменению размерных долей в гистопрепарате в соответствии с его толщиной.

Подсчет проводился в полях зрения, с использованием метода случайного отбора гистологических срезов и полей зрения (Автандилов Г.Г., 1990) по всей длиие гистопрепарата. В дальнейшим производилось определение удельного числа структурных элементов в одном поле зрения.

Таким образом, лимфоциты матери проникают сквозь кишечную стенку детёныша и распределяются ъ основном в подслизистом слое кишечника, и лишь незначт ильная их часть мигрирует далее по

лимфатической и кровеносной системе. Далее включается система мигрирующих Т - клеток н информация поступает в регионарные лимфоузлы и далее, переносится в центральные иммунные органы. В ходе исследования отмечено заселение лимфоузлов лимфоцитами.

Так как лимфоидная система слизистых оболочек несмотря на отношение по классификации к вторичным органам иммунной системы имеют достаточную автономию своих функций, к примеру она вполне в , состоянии поглощать, обрабатывать и транспортировать антигены в лимфатические узлы, для этих целей в ее составе имеются дендритные клетки (Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д., 2000). Имеется связь между представлением иммунокомпетентных клеток в молозиве и степенью развития связанной со слизистыми лимфоидной тканью. Наличие клеток в молозиве усиливает положительную динамику развития иммунной системы животных, однако, для мелких одомашненных хищников (собаки, кошки) связь между уровнем иммунокомпетентных клеток и лимфоцитов, в частности ниже, чем для крупных животных, хотя н является положительной. Механизм проникновения лимфоцитов молозива из просвета кишечника по видимому является общим для всех перечисленных животных, то есть по межклеточным пространствам.

Глава 4. Обсуждение полученных результатов.

Передача с помощью клеток молозива информации для иммунной системы от матери к детёнышу уместно рассматривать как пример физиологической адаптации видов в условиях постоянно изменяющихся условий окружающей среды. Достаточно сложно оценить антигенное давление которое испытывает организм детёныша с момента рождения до момента половой зрелости. Несомненно первые месяцы и недели жизни являются наиболее важными в развитии потомства. В этом важном процессе участвуют как молочная железа, с одной стороны, так и желудо1 тао-кишечный тракт с другой.

Лейкоциты молозива обладают достаточной подвижностью и способны проникать через межклеточные пространства. Имеются работы описывающие абсорбцию лейкоцитов стенкой кишечника (Tuboly S.; Bernath S.; davits R., 1988). Таким образом, возникают очертания роли иммунокомпетентных клеток в становлении иммунной системы организма детёныша. Как удалось выяснить лейкоциты молозива по

своим химическим характеристикам весьма неоднородны и меняют свою активность в течении молозивного периода. Любопытными являются видовые особенности гистохимической активности клеток молозива. Так как функции клетки напрямую зависят от активности её ферментов, можно говорить о клетках молозива как об весьма активных посредниках в системе мать - детёныш. В ходе исследований было установлено, что объем выделения клеток у сук и кошек ниже чем у коров, однако имеется общая склоность к их распределению по органам и тканям.

В проведённых ранее исследованиях авторы указывали на размещение клеток у крупного рогатого скота и свиней именно в подслизистом слое и собственной пластинке. Наши исследования выявили схожую картину и у собак и кошек. По видимому это связано с тем, что в собственной пластинке кишечника и между энтероцитами с базальной стороны имеется большое количество лимфоидных клеток, которые составляют эффекторную зону иммунной системы слизистых. В эффекгорной зоне синтезируется IgA и накапливаются Т-лимфоциты, обеспечивающие клеточный иммунитет. Привлекает внимание разница по ферментативной активности клеток молозива и общая тенденция к небольшому уровню выделения клеточных компонентов с секретом молочной железы у одомашненных хищников. По сравнению с молозивом крупного рогатого скота количество клеток в молозиве собак и кошек весьма мало. На наш взгляд это свидетельствует об отличии роли иммунных клеток молозива в передаче информации и участии в формировании центральных, и прежде всего, периферических им?Ауных органов молодого организма у собак и кошек. Проведённые гистологические исследования структурных компонентов связанной со слизистыми ЖКТ лимфоидной ткани показывает положительное воздействие контакта молозивных клеток с иммунными структурами кишечника.

Глава 5. Выводы.

1. В ходе работы было обнаружено, что клеточный состав молозива индивидуален для каждого вида животного и существенно различен между изучаемыми видами.

2. При прохождении лактационного цикла имеется общая тенденция к понижению количества выделяемых клеток, изменения затрагивают как состав клеток так и их численность.

3. Изменения в составе выделяемого молозива связаны с исчерпанием запаса клеток оставшихся после подготовки молочной железы к лактации и их заносом в молочную железу с током крови. Это проявляется в аналогичности профиля крови и молозива при . окончании молозивного периода.

4. Биохимическая активность щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы и пероксидазы клеток молозива имеет различия в абсолютных значениях для каждого вида животного и общую тенденцию к снижению активности. Изменения в содержании гликогена различны от вида к виду, достоверного изменения содержания его в клетках в течении молозивного периода не выявлено.

5. Перемещение лимфоцитов молозива сквозь кишечную стенку происходит по межклеточным пространствам, однако область миграции ограничивается стенкой кишечника. Незначительная часть их проникает в региональные лимфатические узлы. Проникновение в центральные органы иммунной системы зафиксировано не было.

Список работ опубликованных по теме диссертации.

1. Исследование спектра видоспецифичности иммуноглобулинов в клетках молозива при формировании иммунной системы детёныша //Вестник СПбТУ, сер.3 В.2 №26,2001

2. Механизмы клеточного и гуморального иммунитета в молозивный период //Сбор. науч. тр. «Акушерство и гинекология. Достижения и пути развития в XXI веке», СПбГПМА, Санкт - Петербург,2002

3. Исследование клеточного состава молозива у кошек //Матер. X Московского международного ветеринарного конгресса, Москва, 2002

4. Связь между применением контрацептивных препаратов, состоянием эпителия половых путей, клеточного профиля молозива и частотой уродств у котят //Матер. XI Московского международного ветеринарного конгресса, Москва, 2003

№20 36 3

РНБ Русский фонд

2005-4 20289

Подписано к печати 14.10.2004. Формат 60x84. Бумага печатная. Усл. п. л. 1,75 Тираж 100 экз. Изд. № 112 Цифровой полиграфический центр «Восстания, 1» 191025, Россия, Санкт - Петербург, ул. Восстания д. 1

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Соколенко, Сергей Сергеевич

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

§ 1.1. Молозиво: клеточные и гуморальные компоненты.

§ 1.2.Ассоциированая со слизистой оболочкой лимфоидная ткань (GALT): строение, особенности функционирования.

§ 1.3. Плацента, её роль во взаимодействии между матерью и плодом.

Глава 2. Материалы и методы исследования, использованные в работе.

§2.1. Методы индентификации клеток молозива в организме детёныша.

§ 2.3. Методы оценки динамики количества и состава молозива.

§ 2.4. Метод выделения лимфоцитов.

§ 2.5. Методы оценки функциональных свойств лейкоцитов.

§ 2.6. Методы оценки активности клеточных ферментов.

§ 2.7. Гистологическое исследование кишечника.

Глава 3. Полученные результаты.

§ 3.1. Изменения количественного и качественного состава молозива, распределение клеток молозива.

§ 3.2. Биохимические и функциональные свойства лейкоцитов молозива.

§ 3.3. Результаты гистологического исследования ассоциированной лимфоидной ткани.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменения в клеточном составе молозива в молозивный период у коров, собак и кошек"

Изучению структурных компонентов молозива и их функциям посвящено значительное число исследований, тем не менее, интерес к выяснению роли этой субстанции не ослабевает и сейчас, отражая важность роли молозива в жизнедеятельности молодого организма. Вместе с тем, по мере накопления экспериментальных данных и результатов исследований сложился некоторый дисбаланс в пользу работ посвященных гуморальным факторам содержащимся в молозиве против его клеточных компонентов по Подобное положение свидетельствует о том, что сложная организация молозивных механизмов еще недостаточно изучена. Особенно ярко это проявилось в исследовании физиологических механизмов передачи иммуноактивных компонентов от матери к детёнышу. И если интерес к иммуноглобулинам и факторам неспецифической защиты молозива сравнительно постоянен, то в появлении работ по исследованию молозивных клеток имеются пики и спады интереса исследователей.

Исследования последних лет, проведенные на различных животных в условиях целостного организма, изолированных органов и их фрагментов, а так же отдельные исследования клеток позволили наметить уровни, на которых, возможно, происходят взаимоотношения клеток как в молочной железе так и в связанной со слизистыми лимфоидной ткани.

Однако, проведенный обзор литературы показал, что чаще всего, исследования проводятся в пределах исследовательских циклов определённой лаборатории или исследовательского центра и касается, чаще всего, либо только молозива либо только лимфоидной ткани кишечника. В результате появилась причина для проведения комплексной работы по изучению взаимодействия клеток такой сложной среды как молозиво с такой не менее сложной системой тканей как кишечник с привлечением имеющихся гистохимических и морфологических методик. Таким образом выявился определённый круг интересов выраженный в следующих поставленных задачах:

1. Определить состав клеток молозива собак, кошек и сравнить их с наиболее изученным в этом вопросе животным - крупным рогатым скотом (коровой).

2. Проверить насколько сильны качественные и количественные отличия в клеточном составе молозива разных видов.

3. Определить основные закономерности изменения цитограммы молозива у исследуемых видов животных.

4. Выявить особенности биохимической активности клеток молозива исследуемых видов животных.

5. Выяснить принцип проникновения молозивных клеток сквозь кишечную стенку.

6. Оценить степень влияния иммунных клеток молозива на формирование иммунной системы детёныша.

Научная новизна. Впервые изучены в сравнительном аспекте морфологические изменения происходящие в ассоциированной со слизистой кишечника лимфоидной тканью под влиянием молозива. Впервые изучена в сравнительном аспекте ферментативная активность иммунокомпетентных клеток молозива собак и кошек.

Теоретическая и практическая ценность. Выполненные исследования и полученные результаты указывают на то, что иммунокомпетентные клетки молозива оказывают влияние на формирование иммунной системы детёныша, путем воздействия на ассоциированную со слизистой кишечника лимфоидную ткань. Установлены нормы гистохимической активности лейкоцитов молозива собак и кошек. Материалы диссертации используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий.

Апробация работы.Материалы доложены и обсуждены на

• научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (С.-Петербург, 2001,2002,2003 гг.),

• на 56-й, 57-й, 58-й научных конференциях молодых ученых и студентов (С.-Петербург, 2001,2002,2003 гг.),

• на X и XI Международных конгрессах врачей ветеринарной медицины (Москва, 200Г, 2002 гг. ),

• конференции врачей ветеринарной медицины «Зоосфера», (С.Петербург, 2002), конференции «Акушерство и гинекология. Достижения и пути развития в XXI веке» (С.-Петербург, 2002).

• Изданы в сборнике научных трудов СпбГУ в 2001 году.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Соколенко, Сергей Сергеевич, Санкт-Петербург

1. Аленичкина Г.Е.; Севастьянова В.М.; Белки,клетки крови и молока коров в разные периоды функционального состояния и при скрытых маститах; Вопр.физ.-хим.биологии в ветеринарии. -М., 1997, - С. 23-25

2. Альбертсон Пер-Оке. Разделение клеточных частиц и макромолекул, «Мир», Москва, 1974

3. Арбаев К.С; Морфология почек у ягнят при кетозе; Болезни ягнят и поросят. Целиноград, 1989, с. 37-42

4. Асынбаев М. М., Малков А. В., Исрафилов А. Г. и др. //Способ получения стабильного экстракта молозива с высоким уровнемсодержания биологически активных соединений / Актуальные вопросы прикладной биохимии и 1998. С. 138-141.

5. Бабин В.Н.; Семашко Т.М.; Матузко Н.С.; Карпуть И.М. //Иммунные дефициты и их профилактика у здоровых и больных диспепсией телят/ Профилактика нераз. болезней у коров. Таллин, 1988, с. 5-7

6. Валуйский П. П.; Пищеварение и обмен веществ у лактирующих коров в зависимости от полноценности питания // Физиол. журн. им. И. М. Сеченова. 1993. - Т. 79, N9.-0.66-71.

7. Васильев А.А.; Т-, В лимфоциты и мононуклеарные фагоциты в молозиве, молоке и крови коров в норме и после антигенной стимуляции; //Новосибирск; Б.и.., 1984, - 20 с.

8. Гайдуков С. Н. Активность ферментов лейкоцитов молозива родильниц в норме и при гипогалактии // Лаб. дело. 1990. - N 9. - С. 25-27.

9. Гайдуков С. Н., Киселева Т. А., Маградзе Р. Н.; Особенности течения родов, послеродового периода и становления лактации у юных первородящих // Тезисы докладов первой Всероссийской гинекологии", (29 июня 2 июля 1993 г.). - СПб., 1993. - С. 180-181.

10. Еремин В.П.; Элементы математической обработки биологического эксперимента.- Ленинград, 1975

11. Житихина Ю.В.; Влияние колострального молока на содержание Т- и В-лимфоцитов в крови телят раннего периода развития; Тр.Бурят.гос.с.-х.акад., 1999; Вып.39,ч.1, С. 48-49

12. Иванов В.Б., Активные красители в биологии, «Наука», Москва, 1982

13. Карпуть И.М. / Качество молозива и иммунный статус молодняка // Изв.Акад.аграр.наук Беларуси, 1995; N1,-0. 78-83

14. Карпуть И.М. /Гематологический атлас сельскохозяйтсвенных животных. // «Ураджай», Минск, 1986.

15. Карпуть И.М., Борознов С.Л. / Бактрил, витамин Е и натрия селенит в коррекции иммунного статуса телят // Изв.Акад.аграр.наук Респ.Беларусь, 1998; N3,-0. 70-71

16. Карпуть И.М.; Бабин В.Н.; Севрюк И.З. / Энтеробифидин и витамин В12 в профилактике иммунной недостаточности и диспепсии у телят // Сб. науч. тр. Ленингр. вет. ин-т, 1990; Т. 108, - с. 69-73

17. Карпуть И.М.; Пивовар Л.М. / Профилактика аутоиммунной патологии органов пищеварения у животных // Тезисы докладов межреспубликанской конференции, 1988, с. 48-50

18. Карпуть И.М.; Пивовар Л.М.; Ульянов А.Г.; Щеглов В.М. / Патоморфология и диагностика аутоиммунных нарушений органов пищеварения у животных // Мат. Конф. «Пробл. патоморфол. диагностики болезней в пром. животноводстве», 1987, с. 172-173

19. Карпуть И.М.; Севрюк И.З.; Бабин В.Н.; Семашко Т.М./ Иммунные дефициты и их профилактика у здоровых и больных диспепсией телят// Совершенствование мер борьбы с незаразными болезнями молодняка с.-х. животных. Омск, 1989, с. 85-87

20. Карпугь И.М.; Ульянов А.Г.; Бабин В.Н./ Влияние качества молозива на формирование иммунной реактивности и заболеваемость телят диспепсией // Сб. науч. тр. Ленингр. вет. ин-т, 1990; Т. 108, - с. 73-85

21. Карпуть И.М.; Ульянов А.Г.; Бабин В.Н.// Влияние качества молозива на формирование иммунной реактивности и заболеваемость телят диспепсией // Сб. науч. тр. Ленингр. вет. ин-т, 1990; Т. 108, - с. 73-85

22. Корчубекова Т.А.; Лактоферрин молочного секрета и сыворотки крови овец при становлении лактации/ Автореф. дис. . канд. биол. наук : 14.00.17// Кыргызская государственная медицинская академия, -Бишкек, 2000

23. Косых В.П.; Гежес Л.В.; Копылов Г.М. / Ультраструктура нейтрофилов костного мозга анемичных телят ; Диагностика, лечение и профилактика незараз.болезней с.-х.животных. -Омск, 1993(1994), С. 16-20

24. Летягина, Надежда Петровна /Значение молозивного теста в профилактике невынашивания беременности у женщин группы повышенного риска : Автореф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.01 // Челяб. гос. мед. ин-т. Омск, 1995. - 19 с.

25. Лойда 3., Госсрау Р., Шиблер Т., /Гистохимия ферментов. Лабораторные методы.// Издательство «Мир». Москва, 1982.

26. Мучаидзе Ю. А., Ломин Л. Ф., Хубаева И. В. и др / Иммунологические особенности молозива и молока матерей новорожденных с низкой массой тела. //Материалы шестого съезда детских врачей Грузии. -, 1987. Т. Т. 1, С.352-354.

27. Пивовар JI.M. / Клеточные компоненты колострума свиноматок // Современные пробл. иммунологии, ветеринарии и животноводства, 1987, с. 55-56

28. Пивовар Л.М. / Профилактика иммунного дефицита новорожденности у поросят-сосунов ;// Вопр. групповой профилактики заболеваний животных и птиц, 1987, с. 68-70

29. Пивовар Л.М.; Этиопатогенез диспепсии у новорожденных поросят, Актуальные вопр. иммунологии, ветеринарии и животноводства, 1985, с. 32-33

30. Пилипенко В. В., Слуквин И. И., Тутченко Л. И., Фильченков А. А. //Содержание эпидермального фактора роста в женском молозиве и молоке/Пед1атрия, акушерствоiгшеколопя. -1991.-N4.-C. 45-46.

31. Погорелова Т. Н., Друккер Н. А., Орлов В. И., Крукиер И. И. // Прогностическое значение определения активности нейраминидазы в секрете молочных желез при внутриутробной гибели плода / Клинич. лаб. диагностика. 1997. - N 8. - С. 23-24.

32. Садовская О. Б. Спонтанная ДНК-синтезирующая активность лимфоцитов грудного молозива в норме и при патологии // Бюл. Сиб. отд-ния АМН СССР. 1990. - N 3,4. -С. 40-43.

33. Семашко Т.М.; Бабин В.Н.; Карпуть И.М.; Ульянова А.Г.; / Качество молозива и устойчивость новорожденных телят к желудочно-кишечным заболеваниям; Профилактика нераз. болезней у коров.// Таллин, 1988, с. 67-68

34. Системная энзимотерапия.Основная информация и клинические исследования,//«Моби Дик», 1996

35. Скопичев В.Г. ",/Механизмы интеграции клеточных элементов в альвеолах молочной железы // автореф. дисс. док. биол.наук СПбГУ, СПб, 1993

36. Слуквш I. I., Пилипенко В. В., Фшьченков А. А., Чернишов В. П. /Вплив жшочого молозива та його фракщй на функцюнальну активность В-л1мфоцит1в // Физиол. журн. (Киев). 1993. - Т. 39, N 4. -С. 57-62.

37. Современные достижения физиологии и биохимии лактации. // «Наука», Ленинград, 1981

38. Состояние репродуктивной функции женщин в различные возрастные периоды, // СПб Педиатрич. Мед. Инст., СПб., 1992

39. Сухорукова Т.Ф.; Уракунова К.; Мурсакулова С.; Стимуляция образования иммунологических факторов молозива овец методом вакцинации вымени; //Тезисы докладов. Ч. 2, 1988, с. 78-79

40. Техвер Т. Р. //Гистологический атлас с-х животных, т 3. //1963

41. Трошин A.C., Браун А.Д., Бахтин Ю.Б., Жинкин Л.Н., Суханова K.M./ Цитология. /«Просвещение», Москва, 1970.

42. Хамидов Д. X., Мирхамидова П., Беканов X. М. и др / Влияние молозивного фактора на структуру и функциональную активность ядер печени крыс в отдаленные сроки после гамма-облучения // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1999. - Т. 127, N 2. - С. 198-20

43. Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д.,/ Гематологическая цитохимия// «Медицина», Москва, 1983.

44. Хрусталева Г.И. ; Соматические клетки в секрете молочной железы коров //Бюл. ВНИИ физиологии, биохимии и питания с.-х. животных, 1983; Т. 4, с. 52-55

45. Чекиров Т.Ч., Скопичев В.Г. Развитие альвеолярной структуры паренхимы молочной железы овец в различные периоды суягности.// Сельскохозяйственная биология, 1988, №2.

46. Чекиров Т.Ч., Чумаков В.П., Скопичев В.Г., Уракунова К., Сухорукова Т.Ф. Микро- и ультраструктура клеток молочной железы овец и коров в процессе маммогенеза и лактопоэза (атлас). //«Илим». Бишкек, 1991.

47. Шубич М.Г., Нагоев Б.С. /Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии. //«Медицина». Москва, 1980.

48. Щеглов В.М.; Иммунопатология поджелудочной железы при кетозе у коров; //Актуальные вопр. иммунологии, ветеринарии и животноводства, 1985, с. 45-46

49. Ярилин А.А. Основы иммунологии. //М., «Медицина», 1999.

50. Aldridge В.М.; McGuirk S.M.; Lunn D.P.; Effect of colostra! ingestion on immunoglobulin-positive cells in calves // Veter.Immimol.Immunopathol., 1998; Vol.62,N1,- P. 51-64

51. Andrew SM, Effect of composition of colostrum and transition milk from Holstein heifers on specificity rates of antibiotic residue tests. J Daily Sci 2001 Jan 84//100-6

52. BarbeauJ, Deslauriers N, Phenotypic and functional analysis of oral mucosal macrophages. Reg Immunol 1989 Sep-Oct 2//285-93

53. Berning LM, Paape MJ, Peters RR, Functional variation in endogenous and exogenous immunoglobulin binding to bovine neutrophils relative to parturition. Am J Vet Res 1993 Jul 54:1145-53

54. Burton JL, Erskine RJ, Immunity and mastitis. Some new ideas for an old disease. Vet Clin North Am Food Anim Pract 2003 Mar 19:1-45, v

55. Paape M, Mehrzad J, Zhao X, Detilleux J, Bürvenich C J Burton JL,Kehrli ME, Regulation of neutrophil adhesion molecules and shedding of Staphylococcus aureus in milk of Cortisol- and dexamethasone-treated cows. Am J Vet Res 1995 Aug 56:997-1006

56. Ceuppens JL, BarojaML, Van VaeckF, Anderson CL, Defect in the membrane expression of high affinity 72-kD Fc gamma receptors on phagocytic cells in four healthy subjects. J Clin Invest 1988 Aug 82:571-8

57. Chang X, Mallard BA, Mowat DN, Effects of chromium on health status, blood neutrophil phagocytosis and in vitro lymphocyte blastogenesis of dairy cows., Vet Immunol Immunopathol 1996 Jun 52:37-52

58. Daley MJ, Oldham ER, Williams TJ, Coyle PA, Quantitative and qualitative properties of host polymorphonuclear cells during experimentally induced Staphylococcus aureus mastitis in cows. Am J Vet Res 1991 Mar 52:474-9

59. Defense of the bovine mammary gland by polymorphonuclear neutrophil leukocytes. Mammary Gland Biol Neoplasia 2002 Apr 7:109-21

60. Detmers PA, Powell DE, Walz A, Clark-Lewis I, Baggiolini M, Cohn ZA Differential effects of neutrophil-activating peptide l/IL-8 and its homologues on leukocyte adhesion and phagocytosis. J Immunol 1991 Dec 147:4211-7

61. Dürr JW, Monardes HG, Turner JD, Correlations of neutrophil phagocytosis for proven bulls with traits of economic importance of their daughters. J Dairy Sei 1996 Jan 79:133-9

62. Forwell MA Peel MG, Froebel KS, Belch JJ, MacSween RN, Sandilands GP, Transfusion-induced, Fc gamma-receptor-blocking antibodies: spectrum of cellular reactivity. J Clin Lab Immunol 1986 Jun 20:63-7

63. Griebel P.J.; Schoonderwoerd M.; Babiuk L.A. ; Ontogeny of the immune response: Effect of protein energy malnutrition in neonatal calves; Canad. J. veter. Res, 1987; T. 51. N 4, p. 428-435

64. Grommers FJ, Van de Geer D, Van der Vliet H, Henricks PA, Nijkamp FP, Polymorphonuclear leucocyte function: relationship between induced migration into the bovine mammary gland and in vitro cell activity. Vet Immunol Immunopathol 1989 Nov 23:75-83

65. Guidry AJ, Paape MJ, Pearson RE Effects of estrus and exogenous estrogen on circulating neutrophils and milk somatic cell concentration, neutrophil phagocytosis, and occurrence of clinical mastitis in cows. Am J Vet Res 1975 Nov 36:1555-60

66. GuidryAJ, Paape MJ, Pearson RE, Effects of parturition and lactation on blood and milk cell concentrations, corticosteroids, and neutrophil phagocytosis in the cow. Am J Vet Res 1976 Oct 37:1195-200

67. Heinrichs AJ, Wells SJ, Losinger WC, A study of the use of milk replacers for dairy calves in the United States. J Dairy Sci 1995 Dec 78:2831-7

68. HiguchiH, NagahataH, Hiroki M, NodaH, Relationship between age-dependent changes of bovine neutrophil functions and their intracellular Ca2+ concentrations. J Vet Med Sci 1997 Apr 59:271-6

69. Hill AW, Heneghan DJ, Williams MR. The opsonic activity of bovine milk whey for the phagocytosis and killing by neutrophils of encapsulated and non-encapsulated Escherichia coli.,Vet Microbiol 1983 Jun 8:293-300

70. Holban R.; Nivelul factorilor celulari si humorali ai imunitatii la viteii nou-nascuti ontogeneza

71. Honorio-Fran9a AC, LaunayP, Carneiro-Sampaio MM, Monteiro RC, Colostral neutrophils express Fc alpha receptors (CD89) lacking gamma chain association and mediate noninflammatory properties of secretory IgA. J Leukoc Biol 2001 Feb 69:289-96

72. Howard CJ, Taylor G, Brownlie J, Surface receptors for immunoglobulin on bovine polymorphonuclear neutrophils and macrophages. Res Vet Sci 1980 Jul 29:128-30

73. Hu S, Concha C, Cooray R, Holmberg O, Ginseng-enhanced oxidative and phagocytic activities of polymorphonuclear lucocytes from bovine peripheral blood and stripping milk. Vet Res 1995 26:155-61

74. Jungi TW, Hafher S, Quantitative assessment of Fc receptor expression and function during in vitro differentiation of human monocytes to macrophages. Immunology 1986 May 58:131-7

75. Kehrli ME, Goff JP, Stevens MG, Boone TC, Effects of granulocyte colony-stimulating factor administration to periparturient cows on neutrophils and bacterial shedding. J Dairy Sci 1991 Aug 74:2448-58

76. Kehrli ME, Harp JA, Immunity in the mammary gland. Vet Clin North Am Food Anim Pract2001 Nov 17:495-516, vi

77. Kehrli ME, Shuster DE, Factors affecting milk somatic cells and their role in health of the bovine mammary gland., J Dairy Sci 1994 Feb 77:619-27

78. Kelleher SL, Lönnerdal B, Immunological activities associated with milk. AdvNutr Res 2001 10:39-65

79. Kelly AL, Tiernan D, O'Sullivan C, Joyce P, Correlation between bovine milk somatic cell count and polymorphonuclear leukocyte level for samples of bulk milk and milk from individual cows. J Dairy Sei 2000 Feb 83:300-4

80. Kluciiiski W, Niemialtowski M, Winnicka A, Degorski A, GonzalesGonzales M, The phagocytic activity of neutrophil granulocytes isolated from blood, mammary gland and uterus of cows. Pol Arch Weter 1990 30:89-99

81. Le Jan C.; A study by flow cytometry of lymphocytes in sow colostrum, Res.in veter.Sc., 1994; Vol.57,N 3, P. 300-304

82. Lee CS, Wooding FB, Kemp P., Identification, properties, and differential counts of cell populations using electron microscopy of dry cows secretions, colostrum and milk from normal cows. J Dairy Res 1980 Feb 47:39-50

83. Mehrzad J, Dosogne H, Meyer E, Bürvenich C, Local and systemic effects of endotoxin mastitis on the chemiluminescence of milk and blood neutrophils in dairy cows. Vet Res 2001 Mar-Apr 32:131-44

84. MehrzadJ, Dosogne H, Meyer E, HeynemanR, Bürvenich C, Respiratory burst activity of blood and milk neutrophils in dairy cows during different stages of lactation. J Dairy Res 2001 Aug 68:399-415

85. Menge C, Neufeld B, HirtW, SchmeerN, Bauerfeind R, BaljerG, Wieler LH, Compensation of preliminary blood phagocyte immaturity in the newborn calf. Vet Immunol Immunopathol 1998 Apr 62:309-21

86. Merendino N.;Prosperi S.; Franci 0.;Tuosto L.;Piccolella E.;Tomassi G.; Immunomodulatory activity of bovine colostrum on human peripheral blood monnuclear cells; J. Nutr. Immunol.; # 4; 1996; p. 5-21

87. Moussaoui F, Michelutti I, Le Roux Y, Laurent F, Mechanisms involved in milk endogenous proteolysis induced by a lipopolysaccharide experimental mastitis. J Dairy Sci 2002 Oct 85:2562-70

88. Naess A, Halstensen A, Solberg CO, Enhancement of leukocyte membrane receptor expression after mechanical agitation. Int Arch Allergy Appl Immunol 1986 81:235-7

89. Nickerson S.C.; Immunity and the bovine mammary gland. Pt 2. Specific defenses and cellular immune mechanisms; Agri-Pract, 1988; T. 9. N6,-p. 32-38

90. Nickerson SC, Immunological aspects of mammary involution. J Dairy Sci 1989 Jun 72:1665-78

91. Nickerson SC, PaapeMJ, Harmon RJ, ZivG, Mammary leukocyte response to drug therapy., J Dairy Sci 1986 Jun 69:1733-42

92. Niemialtowski M, Nonnecke BJ, Targowski SP, Phagocytic activity of milk leukocytes during chronic staphylococcal mastitis., J Dairy Sci 1988 Mar 71:780-7

93. O'Brien CN, Guidry AJ, Formulation of poly(DL-lactide-co-glycolide) microspheres and their ingestion by bovine leukocytes. J Dairy Sci 1996 Nov 79:1954-9

94. OsterlundhI, Hoist H, MagnussonU, Effect of mammary secretions on functions of polymorphonuclear leukocytes in pigs. Am J Vet Res 2001 Aug 62:1250-4

95. O'Sullivan CA, Joyce PJ, Sloan T, ShattockAG, Capture immunoassay for the diagnosis of bovine mastitis using a monoclonal antibody to polymorphonuclear granulocytes. J Dairy Res 1992 May 59:12333

96. PaapeMJ, WerginWP, GuidiyAJ, Pearson RE, Leukocytes—second line of defense against invading mastitis pathogens. J Dairy Sci 1979 Jan 62:135-53

97. Pakkanen R.; Determination of transforming growth factor-b2 (TGF-b2) in bovine colostrum samples; J. Immunoassay, # 1; 1998; p.23-37

98. PeressNS, PerilloE, Immunoglobulin G receptor-mediated phagocytosis by the pigmented epithelium of the ciliary processes. Invest Ophthalmol Vis Sci 1991 Jan 32:78-87

99. Perryman L.E.; Crisman M.V.; Immune deficiency syndromes; Current therapy in equine medicine, 1987; T. 2, p. 215-219

100. Rainard P. Effect of milk or colostrum on phagocytosis of glass- or plastic-adherent Streptococcus agalactiae by bovine granulocytes. Vet Immunol Immunopathol 1990 Oct 26:203-8

101. Riedel-Caspari G, Schmidt FW, The influence of colostral leukocytes on the immune system of the neonatal calf. III. Effects on phagocytosis. Dtsch Tierarztl Wochenschr 1991 Sep 98:330-4

102. RothJA, Frank DE, WeighnerP, WeighnerM, Enhancement of neutrophil function by ultrafiltered bovine whey. J Dairy Sci 2001 Apr 84:824-9

103. SaitoK, KatoC, Katsuragi H, Komatsuzaki A, IgA-mediated inhibition of human leucocyte function by interference with Fc gamma and C3b receptors. Immunology 1991 Sep 74:99-106

104. SandgrenCH, NordlingK, BjorkI, Isolation and phagocytic properties of neutrophils and other phagocytes from nonmastitic bovine milk. J Dairy Sci 1991 Sep 74:2965-75

105. Sandilands GP, ReidFM, Galbraith I, PeelMG, Lewis CJ, In vivo modulation of human lymphocyte Fc gamma-receptors in response to oral antigen (cows' milk) challenge., Int Arch Allergy Appl Immunol 1982 67:344-50

106. Senft B, Neudecker J, Defense mechanisms of the bovine mammary gland, Tierarztl Prax 1991 Aug 19:357-63

107. Shoshani E, Leitner G, Hanochi B, Saran A, Shpigel NY, Berman A, Mammary infection with Staphylococcus aureus in cows: progress from inoculation to chronic infection and its detection. J Dairy Res 2000 May 67:155-69

108. SitarskaE, Winnicka A KlucinskiW, Effect of organochlorine pesticides on the phagocytic activity of bovine milk cells. Zentralbl Veterinarmed A 1990 Jul 37:471-6

109. Sordillo LM, Afseth G, Davies G, Babiuk LA, Effects of recombinant granulocyte-macrophage colony-stimulating factor on bovine peripheral blood and mammary gland neutrophil function in vitro. Can J Vet Res 1992 Jan 56:16-21

110. Sordillo LM, Babiuk LA., Modulation of bovine mammary neutrophil function during the periparturient period following in vitro exposure to recombinant bovine interferon gamma. Vet Immunol Immunopathol 1991 Feb 27:393-402

111. SugisawaH, ItouT, SakaiT, Promoting effect of colostrum on the phagocytic activity of bovine polymorphonuclear leukocytes in vitro. Biol Neonate 2001 Feb 79:140-4

112. Targowski S.P.; Niemialtowski M; Cytotoxic and blocking effect of bovine colostrum; J. veter. Med. Ser. B, 1988; T. 35. N 2, p. 96-104

113. Targowski SP, Niemialtowski M., Appearance of Fc receptors on polymorphonuclear leukocytes after migration and their role in phagocytosis., Infect Immun 1986 Jun 52:798-802

114. Torre P.M.; Oliver S.P; Suppression of mitogenic response of peripheral blood mononuclear cells by bovine mammary secretions; J. Dairy Sc, 1989; T. 72. N 1, p. 219-227

115. Tuboly S.; Bernath S.; Glavits R.; Medveczky I.; Intestinal absorption of colostral lymphoid cells in newborn piglets; Veter. Immunol. Immunopathol, 1988; T. 20. N 1, p. 75-85

116. Valpotic I.; Gerencer M.; Basic I.; In vitro modulating effects of porcine immunoglobulin G on mitogens-induced lymphocyte response in precolostral, suckling and weaned piglets; Veter. Immunol. Immunopathol, 1989; T. 22. N 2, p. 113-122

117. Van OostveldtK, Vangroenweghe F, DosogneH, Bürvenich C, Apoptosis and necrosis of blood and milk polymorphonuclear leukocytes in early and midlactating healthy cows. Vet Res 2001 Nov-Dec 32:617-22

118. Verdi RJ, BarbanoDM, Properties of proteases from milk somatic cells and blood leukocytes. J Dairy Sei 1991 Jul 74:2077-81

119. Verma N.K.; Prasad S.K.; Sources of lymphocytoxic antibodies in Indian cattle; Indian J. anim. Sc, 1991; T. 61. N 5, p. 468-472

120. Willis HE, BrowderB, Feister AJ, Mohanakumar T, Ruddy S, Monoclonal antibody to human IgG Fc receptors. Cross-linking of receptors induces lysosomal enzyme release and superoxide generation by neutrophils. J Immunol 1988 Jan 140:234-9

121. Wittmann G.; Ohlinger V. ; Zellvermittelte Zytotoxizität und Lympozytenstimulierung bei Saugferkeln mit und ohne kolostrale Immunitatgegen Aujeszkyvirus; Zbl. Veter.-Med. Reihe B, 1984; T. 31. N 4, S. 303318

122. Worku M, Paape MJ, Filep R, Miller RH, Effect of in vitro and in vivo migration of bovine neutrophils on binding and expression of Fc receptors for IgG2 and IgM. Am J Vet Res 1994 Feb 55:221-6

123. Wright SD, Meyer BC, Phorbol esters cause sequential activation and deactivation of complement receptors on polymorphonuclear leukocytes. J Immunol 1986 Mar 136:1759-64

124. ZecconiA, BronzoV, PiccininiR, SpreaficoG, RuffoG, Phagocytic activity of bovine polymorphonuclear neutrophil leucocytes, J Dairy Res 1994 May 61:271-9