Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение в опухолях баланса биоэффекторных сфинголипидов, модулирующих клеточный рост

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изменение в опухолях баланса биоэффекторных сфинголипидов, модулирующих клеточный рост"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

ОРДЕНАТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ИНСТИТУТ БИООРГАНИЧЕСКОЙ ХИМИИ им. АКАДЕМИКОВ М.М. ШЕМЯКИНА и КХА ОВЧИННИКОВА

На правахрукописи

Канлыба Анна Григорьевна

ИЗМЕНЕНИЕ В ОПУХОЛЯХ БАЛАНСА БИОЭФФЕКТОРНЫХ СФИНГОЛИПИДОВ, МОДУЛИРУЮЩИХ КЛЕТОЧНЫЙ РОСТ

Специальность: 03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

Москва 2004

Работа выполнена в лаборатории химии липидов Ордена Трудового Красного Знамени Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и ЮА. Овчинникова Российской Академии Наук

Научный руководитель

доктор химических наук, профессор

Э.В. Дятловицкая

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор доктор химических наук

Е.Н. Звонкова

В.В. Безуглов

Ведущая организация: Институт экспериментальной кардиологии Российского кардиологического научно-производственного комплекса Министерства здравоохранения РФ

Специализированного Ученого Совета Д 002.019.01 при Институте биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и ЮА Овчинникова РАН по адресу: 117997, ГСП-7, Москва, В-437, ул. Миклухо-Маклая, 16/10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и ЮА. Овчинникова РАН.

Автореферат разослан » 2004 г.

Защита диссертации состоится « '/У » 3./7ДелЯ 2004г. ъ-/Р_ часов на заседании

Ученый секретарь Специализированного совета доктор химических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы большое внимание исследователей уделяется биоэффекторной роли сфинголипидов: сфингозина, церамида и продуктов их метаболизма- сфингозин-1 -фосфата, сфингозин-1-фосфохолина, гликосфинголипидов и др.

Установлено, что эти соединения участвуют в процессах пролиферации, дифференцировки и апоптоза клеток в качестве вторичных мессенджеров и внеклеточных модуляторов. Сфингозин и церамиды ингибируют пролиферацию и стимулируют апоптоз клеток, в то время как продукты их метаболизма, напротив, оказывают пролиферативное и антиапоптотическое действие. В отличие от церамидов, дигидроцерамиды, не содержащие транс-двойную связь в положении 4 цепи сфингоида, в большинстве случаев являются биологически неактивными и не влияют на указанные процессы. Поскольку сфинголипидные биоэффекторы связаны единым биосинтетическим циклом, было высказано предположение о существовании динамического равновесия между ними, "сфинголипидного реостата", переключающего клетку из пролиферативного состояния в апоптотическое и наоборот.

Известно, что при малигнизации происходит искажение биосинтеза и катаболизма сфинголипидов, в результате чего изменяется их состав и содержание. Можно предположить, что в опухолевых клетках, характеризующихся отклонениями в пролиферации, дифференцировке и выживаемости по сравнению с гомологичными нормальными, нарушен баланс сфинголипидных биоэффекторов, модулирующих клеточный рост. Для выяснения роли сфинголипидов при злокачественном росте важно выявить различия в их содержании и составе между опухолями и нормальными тканями. Однако эти данные весьма ограничены. Анализ одновременного изменения различных эффекторных сфинголипидов до настоящего времени не проводился.

Цель и задачи работы. Целью настоящей работы являлось изучение изменений биоэффекторных сфинголипидов, модулирующих клеточный рост, в опухолях различного гистогенеза. Дня достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи: 1. выяснить, как изменяется структура сфингоидных оснований в сфингомиелинах и церамидах опухолей различного гистогенеза; 2. установить, присуще ли увеличение содержания сфинганияа в сфинголипидах только опухолевому росту или быстрой пролиферации любых нормальных клеток; 3. изучить влияние органа трансплантации на количество сфинганина в сфинголипидах перевиваемых опухолей, поскольку выяснение этого вопроса может способствовать пониманию различий в свойствах клеток опухоли и се метастазов; 4. определить, изменяется ли в опухолях активность дигидроцерамиддесатуразы, фермента, участвующего во введении двойной связи в дигидроцерамид с образованием биологически активного церамида; 5. провеет I ^ШаЛМ АЦАШйфЩЬШЛф изменения

эффекторных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток (сфингомиелинов, церамидов, глюкозил- и лактозилцерамидов, а также ганглиозидов), в опухоли по сравнению с гомологичной нормальной тканью.

Научная новизна. В настоящей работе изучены сфингоиды, входящие в состав сфинголипидов перевиваемых опухолей животных. Установлено, что в отличие от нормальных клеток в сфинголипидах опухолей содержится значительное количество сфинганина, в результате чего появляется биологически инертный дигидроцерамид, не оказывающий угнетающего действия на рост клеток опухоли и не стимулирующий апоптоз. Показано, что сфинголипиды быстропролиферирующей регенерирующей печени мышей содержат крайне малое количество сфинганина, т.е. наличие этого сфингоида не является признаком быстрой пролиферации как таковой.

Впервые получены данные об активности дигидроцерамидцесатуразы, вводящей двойную связь в положение 4 цепи сфингоида, в опухолях, а также о различиях количественного и качественного состава сфинголипидов в одной и той же опухоли, растущей в разных органах.

При проведенном впервые анализе одновременного изменения сфинголипидных эффекторов в опухоли по сравнению с гомологичной нормальной тканью выяснено, что в опухоли баланс биоактивных сфинголипидов сдвигается в сторону модуляторов, стимулирующих рост и выживаемость клеток.

Практическая ценность работы. Изучение свойств одной и той же опухоли, растущей в различных органах, имеет как теоретическое, так и практическое значение. Перевивка и рост опухоли в органе, из которого она произошла, может служить прообразом первичной опухоли, в то время как ее развитие в другом органе может являться моделью метастаза. Полученные в работе данные свидетельствуют о зависимости содержания и состава сфинголипидов опухолей от клеточного окружения, что указывает на возможность различий в сфинголипидном составе метастазов и образующих их клеточных клонов.

Данные о нарушении баланса эффекторных сфинголипидов, влияющих на клеточный рост, и об изменении активности ферментов их метаболизма в опухолях по сравнению с гомологичными нормальными тканями в дальнейшем могут быть использованы для разработки пути терапии новообразований посредством модулирования метаболизма сфинголипидов в опухолевой клетке.

Апробация работы. Результаты диссертации были представлены на XIV зимней международной молодежной научной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии" (Москва, 2002 г.), VI чтениях, посвященных памяти академика Ю.А. Овчинникова (Москва-Пущино, 2002 г.), Ш Съезде Биохимического общества (С.-Петербургг2002 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ и тезисы трех докладов.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 257 наименований. Диссертация изложена на 112 страницах, содержит 10 таблиц и б рисунков.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Сфинганин в сфинголипидах опухолей

1.1. Сфинганин в сфинголипидах опухолей и регенерирующей печени мышей

Для выяснения роли сфинголипидов при злокачественном росте, а также решения вопроса о том, какие изменения в сфинголипидах новообразований являются опухолеспецифичными, важно - выявить различия в их содержании и составе между опухолями различного гистогенеза и гомологичными нормальными тканями. Также представляет интерес выяснить, присуще ли значительное количество сфинганина ((28, 3Я)-2-амино-4-октадекан-1,3-диола) в сфинголипидах только опухолевому росту или быстрой пролиферации любых нормальных клеток.

Изучение содержания сфингомиелинов и церамидов в исследуемых опухолях не выявило закономерных отклонений: величина молярного отношения сфингомиелинщерамиды для опухолей колебалась в интервале 1,3-6,5, а для нормальных тканей (печень мышей, почки крыс) - 2,4 - 4,2. Однако структура этих сфинголипидов в опухолях претерпевает изменения (табл. 1).

Как видно из табл. 1, главным сфингоидным основанием сфинголипидов нормальной ткани (печень и почки) является сфингенин (сфингозин, (28, ЗЯ, 4Е)-2-амино-4-октадецен-1,3-диол), содержащий 18 углеродных атомов в цепи. При этом в сфингомиелине печени его содержание выше, чем в церамиде. Характерной особенностью изученных опухолей является присутствие в их сфингомиелинах и церамидах значительного количества сфинганина. Поскольку в нефроме РА, карциноме толстого кишечника и почках помимо сфингозина и сфинганина было обнаружено некоторое количество фитосфингозина и сфингоидов с другой длиной цепи, в табл. 1 представлено молярное отношение сфингенинхфинганин.

Данные, приведенные в табл. 1, указывают, что в сфингомиелинах гепатомы-22 мышей и нефромы РА крыс, а также церамидах гепатомы-22, увеличивается содержание сфинганина по сравнению с соответствующими нормальными тканями. Это вызывает сдвиг молярного отношения сфингенинхфинганин в сторону последнего, причем в церамидах гепатомы-22 данное изменение выражено более резко. Для остальных изученных опухолей провести сравнение с гомологичными нормальными тканями не представлялось возможным.

Однако полученные результаты также указывают на значительное содержание сфинганина в сфингомиелинах карциномы легкого Льюис, сфингомиелянах и церамидах меланомы В16 и карциномы толстого кишечника мышей. В церамидах меланомы В16, как и гепатомы-22, содержание сфинганина выше, чем в сфингомиелинах, тогда как для сфинголипидов карциномы толстого кишечника наблюдается обратная картина. Более того, количество сфинганина в сфингомиелине последней опухоли несколько превышает уровень сфингенина. Ранее значительное количество сфинганина (более 10%) было найдено в сфингомиелинах карциносаркомы Уокера, гепатомы-27 и саркомы Иенсена крыс.

Таблица 1.

Содержание сфингомиелинов, церамндов и их сфингоидных оснований в нормальной н регенерирующей печени и перевиваемых опухолях мышей, почках и нефроме РА крыс

Ткань Сфингомиелин, нмоль/мг белка Церамиды, нмоль/мг белка Молярное отношение сфингенин:сфинганин

сфингомиелин церамиды

Печень (норма) (9) 9,3±0,3 2,2±0,02 24:1 19:1

Печень (регенерат) (15) — — 24:1 19:1

Гепагома-22 (15) 24,8±0,5» 8,5+0,3* 3:1 1,7:1

Меланома В16 (15) 40,3±0,3 6,2±0,9 7:1 2,6:1

Карцинома легкого Льюис (18) 30Д±1,2 7,8±1,1 10:1 —

Карцинома толстого кишечника (15) 26,3±0,9 11,0±1,1 0,9:1 4,3:1

Почки крыс (9) 39,5±0,3 16,3±1,1 65:1 —

Нефрома РА (9) 30,0±0,5* 23,5±1Д* 5:1 —

Примечание. Здесь и далее в таблицах в скобках указано количество животных. *р<0,001

Обнаруженные изменения указывают на нарушение биосинтеза сфинголипидов в опухолях. Известно, что одной из стадий биосинтеза является ацилирование сфинганина с последующим введением двойной связи в положение 4 цепи сфингоида под действием дигидроцерамиддесатуразы. Отклонения в функционировании этого фермента могут приводить к уменьшению содержания церамидов и сфингомиелинов и накоплению дигидроцерамидов и сфингомиелинов, содержащих сфинганин.

Можно было предположить, что увеличенный уровень сфинганина присущ любым быстропролиферирующим тканям, вследствие чего он должен присутствовать и в сфинголипидах регенерирующей печени мышей в период активного митоза (через 30 часов после гепатэктомии). Однако данные газожидкостной хроматографии сфинтоидных

оснований сфинголипидов регенерирующей печени мышей свидетельствуют о том, что содержание сфинганина практически не отличается от такового нормальной печени (табл. 1). Следовательно, при быстрой пролиферация гепатоцитов в период активного митоза работа ферментных систем, участвующих в биосинтезе сфингоидных оснований, не меняется по сравнению с нормой.

Таким образом, результаты настоящего исследования показывают, что присутствие значительного количества сфинганина - насыщенного аналога сфингозина - характерно только для сфинголипидов опухолей, но не для таковых в нормальных быстропролиферирующих тканях (в период активного митоза). Однако нельзя исключить возможность повышения уровня сфинганина в сфипголипидах при других патологиях. Выяснение этого вопроса также представляет большой интерес.

1.2. Изменение отношения сфингенин:сфинганнн в сфияголипвдах перевиваемых опухолей в зависимости от органа трансплантации

Как было показано выше, в сфингомиелинах и церамидах некоторых перевиваемых опухолей (1.1.) присутствуют значительные количества сфинганина. Поскольку биологическая активность сфинголипидов зависит от структуры сфингоида, важно выяснить, какое влияние оказывает орган трансплантации на отношение сфингенинхфинганин в сфинголипидах опухолей разного гистогенеза в различном микроокружении. В настоящей работе изучено отношение сфингении сфинганин в общем пуле сфингомиелина и церамяда гепатомы-27, саркомы М 1 и холангиоцеллюларной карциномы PC 1, перевитых подкожно и внутрипеченочно.

Таблица 2.

Отношение сфингенин:сфннганин в сфинголипидах подкожно- и внутрипеченочноперевитых опухолей крыс

Ткань Молярное отношение сфянгешшхфинганин

подкожная перевивка внутрипеченочная перевивка

Гепатома-27 (9) 10:1 7:1

СаркомаМ 1 (12) 7:1 10:1

Холаягиоцеллюларная карцинома РС 1 (15) 8:1 11:1

Печень крыс (4) содержит только сфингенин

Данные газожидкостной хроматографии сфингоидных оснований сфинголипидов изучаемых опухолей показали, что относительное содержание сфинганина в них довольно

велико — отношение сфингенинхфинганин колеблется в интервале 7:1 - 11:1 (табл. 2), в то время как в сфинголипидах нормальной печени крыс сфинганин практически не обнаружен.

Как видно из приведенных в табл. 2 данных, в гепатоме-27, саркоме М1 и холангиоцеллюларной карциноме PC 1 уровень сфинганина в сфингомиелинах и церамидах зависит от органа трансплантации. При этом обращает на себя внимание тот факт, что в указанных сфинголипидах гепатомы-27 отношение сфингенинхфинганин меньше во внутрипеченочном варианте опухоли, чем в подкожноперевитой гепатоме. В то же время в сфингомиелинах и церамидах саркомы М 1 и карциномы PC 1 это отношение выше в случае внутрипеченочных вариантов по сравнению с подкожноперевитыми.

Клетки гепатомы-27, индуцированной ранее азокрасителем, при перевивке в печень попадают в "материнское" окружение, в то время как подкожноперевитая опухоль находится в "чужеродном" окружении. Для клеток саркомы М 1 (получена подкожным введением крысам бенз[а]пирена), напротив, "чужеродным" окружением служит печень, а подкожная перевивка является перевивкой в орган происхождения. Что касается карциномы PC 1, индуцированной 2-ацетиламинофлуореном и происходящей из клеток желчных протоков печени, то хотя при внутрипеченочной перевивке она попадает в орган происхождения, но находится в окружении гепатоцитов - клеток иного типа, чем те, которые послужили источником опухоли PC 1. Таким образом, можно сделать вывод, что внутрипеченочная перевивка создает "родственное" окружение только для клеток гепатомы-27, но не для таковых саркомы М 1 и карциномы PC 1.

При сопоставлении полученных данных об отношении сфингенинхфинганин в сфингомиелинах и церамидах всех указанных вариантов опухолей, можно видеть, что при "родственном" окружении относительное содержание сфинганина в сфинголипидах гепатомы-27 и саркомы М 1 выше, чем при "чужеродном" (табл. 2). Клетки обоих вариантов карциномы PC 1 по отношению сфингоидов более близки к клеткам саркомы М 1, чем гепатомы-27 крыс. Таким образом, изучение отношения сфингенинхфинганин, отражающее биосинтез сфингоидов в опухолях, в сфингомиелинах и церамидах опухолевых клеток различного гистогенеза, перевитых подкожно и внутрипеченочно, показало, что уровень сфинганина в этих сфинголипидах зависит как от типа клеток, так и от их клеточного микроокружения, следовательно, различия, наблюдаемые в первичных опухолях и их метастазах, могут объясняться не только отличием в образующих их клеточных клонах, но и разным клеточным окружением

1.3. Дигидроцерамиддесатуразная активность в опухолях

В последние годы установлено, что некоторые сфинголипиды, содержащие сфинганин, особенно дигидроцерамиды, обладают значительно более низким

биорегуляторным эффектом по сравнению со сфинголипидами, содержащими сфингенин. Согласно современным данным о биосинтезе сфинголипидов, сфинганин является предшественником сфингенина, причем двойная связь вводится в ^ацилсфинганин (дигидроцерамид) с помощью недавно открытой дигидроцерамиддесатуразы.

Поскольку, как уже указывалось выше, в сфинголипидах злокачественных опухолей обнаружено повышенное содержание сфинганина (1.1. и 1.2.)> представляло интерес изучить активность дигидроцерамиддесатуразы в опухолях.

Как видно из табл. 3, величина активности дигидроцерамиддесатуразы в гепатоме-22 мышей уменьшается по сравнению с таковой в печени. Эти данные коррелируют с увеличением содержания сфинганина в сфинголипидах гепатомы-22 (1.1.).

Однако при сравнении величин активпости дигидроцерамиддесатуразы в печени и двух вариантах гепатомы-27 крыс отмечается их возрастание в опухоли по сравнению с таковой в норме. Следует отметить, что во внутрипеченочноперевитой гепатоме-27 величина, активности дигидроцерамиддесатуразы выше, чем в подкожноперевитой. Значительные различия в активности фермента обнаружены и в двух вариантах саркомы М I крыс. Но в этом случае значение активности выше в подкожноперевитой опухоли. При этом обращает на себя внимание тот факт, что во внутрипеченочной гепатоме-27 содержание сфинганина в сфинголипидах также возрастает по сравнению с подкожным вариантом опухоли, а для саркомы М 1 наблюдается обратная зависимость (табл. 2 и 3). Эти результаты позволяют сделать вывод, что активность дигидроцерамиддесатуразы зависит от микроокружения опухоли и выше при "родственном" окружении.

Таблица 3.

Активность дигидроцерамиддесатуразы

Ткань Активность (пмоль/мин на 1 мг белка)

Печень мышей 0,47±0,03

Гепатома-22 мышей 0,40+0,03»

Печень крыс 0,15±0,01

Подкожноперевитая гепатома-27 крыс 0,36*0,02»*

Внутрипеченочноперевитая гепатома-27 крыс 0,69+0,02**

Подкожноперевитая саркома М 1 крыс 0,48±0,03

Внутрипеченочноперевитая саркома М 1 крыс 0,33+0,02**

Подкожноперевитая опухоль РС 1 крыс 0,00

Внутрипеченочноперевитая опухоль РС 1 крыс 0,00

*р<0,05; **р<0,001

Что касается карциномы РС 1, то в ней активность дигидроцерамиддесатуразы, вероятно, крайне мала, и в условиях нашего эксперимента ее определить не удалось, ни в присутствии МАБРИ, ни в присутствии МАБИ, которые являются кофакторами данного фермента. Существенные различия в дигидроцерамиддесатуразной активности в разных тканях крысы уже отмечались ранее, причем в некоторых органах (сердце, тимус, поджелудочная железа) она была незначительной. Возможно, отсутствие активности фермента в опухоли РС 1 объясняется ее низким значением или отсутствием в исходной нормальной ткани.

Заметно более высокие значения активности дигидроцерамиддесатуразы в обоих вариантах гепатомы-27 по сравнению с таковой в печени крыс (хотя в опухоли содержание сфииганина выше, чем в норме) могут быть обусловлены несколькими причинами: изменением экспрессии, изменением состава десатуразного комплекса, изменением предшествующих активностей и т.д.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что активность дигидроцерамиддесатуразы - фермента, способствующего введению двойной связи в положение 4 цепи сфингоидов, - в опухолях (например, в гепатомах) изменяется по сравнению с гомологичной нормальной тканью (печенью), но эти изменения зависят от типа опухоли. Микроокружение (орган трансплантации) также оказывает влияние на дигидроцерамиддесатуразную активность.

2. Влияние органа трансплантации на содержание сфннгомиелинов и ганглиозидов в опухолях

Как уже отмечалось выше, микроокружение играет важную роль в регуляции функций клетки. Нами было показано, что орган трансплантации оказывает значительное влияние на структуру сфингоидных оснований сфингомиелинов и церамидов и на дигидроцерамиддесатуразную активность опухолей различного гистогенеза (1.2. и 13.). Не менее важным представляется выяснение зависимости содержания сфингомиелина, ганглиозидов, а также ганглиозидного состава опухолей от их клеточного микроокружения, так как данные сфинголипиды участвуют в регуляции пролиферации и апоптоза клеток. 2.1. Влияние микроокружения на содержание сфингомиелина

При сравнительном исследовании содержания сфингомиелинов в печени и гепатоме-27 крыс, перевитой подкожно или внутрипеченочно, были обнаружены определенные отличия. В обоих вариантах гепатомы значительно увеличено как относительное, так и абсолютное (нмоль/мг белка) количество сфингомиелина по сравнению с гомологичной нормальной тканью. Полученные данные согласуются с литературными, поскольку в ходе многочисленных исследований было показано, что уровень сфингомиелина существенно изменяется в опухолях по сравнению с нормальными тканями: при

малигнизации клеток, как правило, содержание сфингомиелина возрастает.

8

Следует отметить, что в подкожнорастущей гепатоме-27 абсолютное содержание этого сфинголипида выше, чем во внутрилеченочной, тогда как относительные количества практически равны (табл. 4). Для опухолей иного гистогенеза получены аналогичные результаты: относительное содержание сфингомиелина в каждой опухоли при разной локализации отличается лишь незначительно, тогда как абсолютное содержание в случае саркомы М1 и карциномы PC 1 выше в подкожноперевитых вариантах опухолей по сравнению с внутрипеченочноперевитыми.

Таблица 4.

Относительное и абсолютное содержание сфингомиелина в печени и перевиваемых опухолях крыс

Ткань Сфингомиелин, % от общего фосфолипид-ного фосфора Сфингомиелин, нмоль/мг белка

Печень крыс 4,5±0,06 15,1±0,2

Подкожноперевитая гепатома-27 крыс 10,6±0,5* 31,9±1,5»

Внутрипеченочноперевитая гепатома-27 крыс 10,8±0,1* 21,5 ±0,2*

Подкожноперевитая саркома М 1 крыс 11,9±0Д 30,9±0,5

Внутрипеченочноперевитая саркомаМ 1 крыс 10,6±0,2** 23,3±0,5*

Подкожноперевитая опухоль РС 1 крыс 13,0±0,5 25,9±1,0

Внутрипеченочноперевитая опухоль РС 1 крыс 11,6±0,6» 18,7±1,0*

*р<0,001; **рХ),1

Таким образом, во всех трех опухолях влияние микроокружения на содержание сфингомиелина имеет однонаправленный характер.

2.2. Влияние микроокружения на содержание и состав ганглиозидов

Исследование ганглиозидов гепатомы-27 крыс и гомологичной нормальной ткани

также выявило различия как между печенью и опухолью, так и между двумя вариантами

гепатомы. Как видно из табл. 5, общее содержание ганглиозидов (липидносвязанных

сиаловых кислот) в обоих вариантах гепатомы-27 резко возрастает по сравнению с печенью.

При этом количество ганглиозидов во внутрипеченочном варианте опухоли в два раза

превышает таковое печени и ~ в два раза ниже, чем в подкожноперевитой гепатоме.

При тонкослойной хроматографии ганглиозидов в качестве основных компонентов в

печени были идентифицированы а также небольшие

количества ганглиозида ОМг- В подкожном варианте гепатомы-27 был найден ганглиозид,

подобный по хроматографической подвижности GD3, присущему многим типам опухолей, а

9

также ганглиозид GM2, не содержащийся во внутрипеченочном варианте. В то же время во внутрипеченочноперевитой гепатоме-27 (по сравнению с печенью) резко уменьшается количество ганглиозидов а в подкожноперевитой опухоли они полностью

исчезают, также как и С01а. Уменьшение количества сложных ганглиозидов, как было ранее установлено, является типичным для трансформированных клеток и особенно ярко выражено в высокометастазирующих формах опухолей.

Таблица 5.

Содержание и состав ганглиозидов печени и гепатомы-27 крыс, перевитой подкожно и внутрипеченочно

Ткань Печень крыс Гепатома-27

подкожная внутрипеченочная

содержание ганглиозидов, нмоль Sia на 1мг белка 0,39±0,02 l,5±0,02a 0,8±0,01a

Состав ганглиозидов, %

GM3 38,7±2,5 48,2±2,6a 24,2±0,2b

gm2 4,9±0,2 2,6±0Да 0,0

GMI 9,4±0,7 49,2±2,7a 36,3±0,lc

GD„ 21,7±1,8 0,0 29,9±0,5d

GDib 16,8±U 0,0 5,4±0,la

GTib 8,5±0,6 0,0 4,210,1a

ар<0,001; bp<0,01; срХ),1; dp<0,05

Хотя при тонкослойной хроматографии ганглиозидов подкожной гепатомы-27 был обнаружен сиалогликосфинголипид, подобный по хроматографической подвижности ганглиозиду GD3, после ферментолиза суммарной смеси ганглиозидов нейраминидазой из Vibrio cholerae, расщепляющей все ганглиозиды, кроме GM1 и GM2, это соединение осталось неизменным. Поскольку в продуктах ферментолиза были идентифицированы две сиаловые кислоты - N-ацетил- (NeuAc) и N-гликолилнейраминовая (NeuGc), можно было сделать вывод, что рассматриваемый сиалогликосфинголипид является ганглиозидом GM|, содержащим NeuGc и обладающим сходным хроматографическим поведением.

Данные табл. 6 указывают, что в подкожноперевитых саркоме Ml и холангиоцеллюларной карциноме PC 1, в отличие от гепатомы-27, содержание ганглиозидов несколько ниже, чем во внутрипеченочных, причем эти различия выражены не так резко, как в случае двух вариантов гепатомы-27. Аналогичная тенденция в отличиях между подкожно-

и внутрипеченочноперевитыми вариантами указанных опухолей наблюдалась при изучении состава сфингоидных оснований (1.2.): изменения уровня сфинганина в саркоме М 1 и карциноме PC 1 при подкожной и внутрипеченочной перевивке имели однонаправленный характер, но не совпадали с характером изменений в составе сфингоидов сфинголипидов гепатомы-27.

Таблица 6.

Содержание в состав ганглиозидов саркомы М1 и холангиоцеллюларной карциномы PC 1 крыс, перевитых подкожно и внутрипеченочно

Ткань Саркома М 1 Карцинома РС 1

подкожная внутрипе-ченочная подкожная внутрипе-ченочная

содержание ганглиозидов, нмоль Б1а на 1мг белка 1,4±0,03 1,6±0,01а 1,6±0,01 г.ою.ог'1

Состав ганглиозидов, %

лактон бМз 0,0 13,4±0,8 0,0 13,0±0,3

0М3 77,4+0,6 68,1+1,4а 73,1 ±0,6 62,3±0,3а

0М2 0,0 0,0 1,2±0,1 2,9±0,4Ь

ем, * 6,1±0,3 7,5±0,9° 3,9±0,1 здш"

вОз 1и±0,4 6,0±0,8а 13,4±0,б идол"

ОР,. 5,2±0,2 5,0±0,4С 3,5+0,1 4,7±0,3Ь

вЭц, 0,0 0,0 4,9±0,8 23+0,1"

"р<0,001; Ър<0,01; °р>0,1; др<0,05

Что касается ганглиозидного состава опухолей Ml и PC 1, то как в подкожно-, так и во внутрипеченочноперевитых вариантах обеих опухолей основным ганглиозидом является GM3. В обоих случаях карциномы PC 1 были идентифицированы небольшие количества ганглиозидов ОМг И ООц,, отсутствующие в саркоме М 1. Особо следует отметить довольно высокое содержание крайне редко встречающегося лактона ганглиозида GM3 во внутрипеченочных вариантах карциномы PC 1 и саркомы М 1. До настоящего времени он был обнаружен в незначительных количествах в клетках меланомы В16 мыши и в спонтанных опухолях желудка и молочной железы человека.

Анализ сиаловых кислот, входящих в структуру ганглиозидов изучаемых опухолей, показал, что как подкожно-, так и внутрипеченочноперевитая опухоль PC 1 содержит только

№еиАс, в то время как в ганглиозидах саркомы М 1 в обоих случаях помимо NeuAc присутствует и №еиОс.

Полученные данные показывают, что по составу и содержанию ганглиозидов и абсолютному содержанию сфингомиелинов гепатома-27, растущая внутри печени (модель первичной опухоли), занимает промежуточное положение между нормальной печенью крыс и подкожноперевитой гепатомой (модель метастаза). Результаты свидетельствуют о нарушении в обеих опухолях биосинтеза ганглиозидов (ингибируется синтез сложных компонентов ганглио-серии), что является следствием опухолевого процесса. Это изменение зависит от окружения опухоли: в случае подкожноперевитой гепатомы отклонение от нормы проявляется в большей степени, что приводит к "упрощению" ганглиозидного состава и полному отсутствию таких ганглиозидов, как

Таким образом, в случае гепатомы-27 в "материнском" органе происходит некое подобие функциональной нормализации опухоли, выраженное в изменении содержания ганглиозидов и сфингомиелина и состава ганглиозидов, а "чужеродное" клеточное окружение оказывает более сильное влияние на биосинтез этих сфинголипидов

Как было указано выше, опухоль РС 1 является холангиоцеллюларным раком, развившимся из клеток желчных протоков, и при перевивке попадает в орган происхождения, но находится в окружении клеток иного типа - гепатоцитов. Перевивка саркомы М 1 подкожно, в свою очередь, является моделью роста в "материнском" органе, тогда как внутрипеченочная - в отдаленном. В случае этих опухолей влияние локализации на содержание сфингомиелина и ганглиозидов и состав ганглиозидов имеет однонаправленный характер. При этом содержание ганглиозидов саркомы М 1 выше в случае "чужеродного" микроокружения, как наблюдается и для гепатомы-27. Клетки обоих вариантов холангиоцеллюларной карциномы по содержанию и структуре ганглиозидов, как и в случае состава сфингоидов, более близки к клеткам саркомы М 1, чем к клеткам гепатомы-27 крыс. Интересным результатом исследования ганглиозидного состава является идентификация во внутрипеченочных вариантах опухоли РС 1 и саркомы М 1 крыс лактона ганглиозида ОМ3, который встречается крайне редко.

3. Изменение содержания биологически активных сфинголипидов,

модулирующих рост и выживаемость клеток» в гепатоие-27 крыс и в гепатоме-22 мышей по сравнению с гомологичной печенью

Многочисленными исследованиями установлено, что церамиды ингибируют

пролиферацию и стимулируют дифференцировку и апоптоз клеток, в то время как продукты

их метаболизма - глюкозил- и лактозилцерамиды, напротив, стимулируют пролиферацию и

ингибируют апоптоз; было также показано, что сфингомиелин может способствовать росту

опухоли, метастазированию и ангиогенезу. Опухолевые клетки характеризуются

нарушениями в пролиферации, дифференцировке и выживаемости по сравнению с

гомологичными нормальными, что, вероятно, должно сопровождаться изменениями в равновесии биологически активных сфинголипидов. Очевидно, что суммарный эффект сфинголипидных биоэффекторов зависит от их баланса в клетке. Однако анализ одновременного изменения разных эффекторных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток, не проводился.

Представляло интерес выяснить, каковы различия в содержании сфингомиелина, церамида, глюкозил- и лактозилцерамидов, а также ганглиозидов, участвующих в пролиферации и апоптозе клеток, в опухолях различного гистогенеза по сравнению с гомологичными нормальными тканями.

Таблица 7.

Содержание сфингомиелина, церамида и нейтральных гликосфинголипидов в печепи и гепатоме-27 крыс

Сфинголипиды, нмоль/мг белка Печень крыс Гепатома-27

Сфингомиелин 15,1±0,2 31,9+1,5*

Церамид 4,2±0,2 10,9+0,5*

Глюкозилцерамид 0,45±0,02 0,98±0,10*

Галактозилцерамид 0,12±0,04 0,27+0,04**

Лактозилцерамид 0,13±0,04 0Д5±0,02*

♦р<0,001; **р<0,01

Таблица 8.

Содержание ганглиозидов в печени и гепатоме-27 крыс

Ганглиозиды, нмоль/мг белка Печень крыс Гепатома-27

Общие липиднос вязанные 81а 0,39±0,02 1,5±0,02*

вМз 0,15±0,01 0,70±0,04*

бМг 0,02±0,001 0,04±0,004*

йМ1 0,04±0,003 0,72±0,04*

со,. 0,04±0,004 0,00

001Ь 0,03±0,003 0,00

йТ.ь 0,01±0,001 0,00

•р<0,001

Как видно из табл. 7, 8 и рис. 1, в гепатоме-27 крыс по сравнению с нормальной печенью возрастает содержание всех исследуемых сфинголипидов. При этом увеличивается абсолютное содержание сфинголипидов, как стимулирующих (сфингомиелин, глюкозил-, галактозил- и лактозшщерамиды, ганглиозиды), так и ингибирующих (церамиды) рост опухоли. Эти результаты могут быть обусловлены увеличением активности дигидроцерамидсинтазы (дигидроцерамид является промежуточным продуктом в биосинтезе всех сфинголипидов) в опухолях по сравнению с нормальными тканями.

Рис. 1. Отношение содержания сфингомиелинов, церамидов и нейтральных гликосфинголипидов в гепатоме-27 и в печени крыс

Содержание сфингомиелина, церамида и глюкозилцерамида, а также уровень минорных гликолипидов (галактозил- и лактозилцерамидов) повышается ~ в два раза (рис. 1). Значительное увеличение содержания отмечено и для ганглиозидов. Как видно из табл. 8, суммарное количество липидносвязанных сиаловых кислот увеличивается в 3,8 раза, а содержание ганглиозидов ОМ3 и ОМ1 в гепатоме превышает таковое в печени в 4,5 и 18 раз соответственно. В то же время в гепатоме отсутствуют ганглиозиды 60,,, со1Ь и ат,ь.

При исследовании гепатомы-22 и печени мышей также были обнаружены существенные изменения в качественном и количественном составе сфинголипидов клеток опухоли по сравнению с гомологичной нормальной тканью.

Как и в случае гепатомы-27, в гепатоме-22 увеличивается содержание сфингомиелина, церамида и нейтральных гликосфинголипидов - глюкозил-, галактозил- и лактозилцерамидов (табл. 9).

Из данных табл. 9 также видно, что качественный состав нейтральных гликосфинголипидов гепатомы-22 претерпевает изменения по сравнению с таковым нормальной печени. При тонкослойной хроматографии гликолипидов гепатомы-22 был обнаружен гликосфинголипид, по хроматографической подвижности подобный диглюкозилцерамиду, отсутствующий - в гомологичной нормальной ткани. Усложнение состава нейтральных гликолипидов ранее отмечалось и для асцитной гепатомы 22а.

Таблица 9.

Содержание сфингомиелина, церамида и нейтральных гликосфинголипидов в печени и гепатоме-22 мышей

Что касается суммарного количества ганглиозидов, то, в отличие от гепатомы-27 крыс, в гепатоме-22 оно фактически не изменяется по сравнению с таковым печени мышей (табл. 10). Однако, сравнение содержания индивидуальных ганглиозидов в гепатоме-22 и в гомологичной печени мышей выявило существенные различия.

Как видно из данных табл. 10, в печени мышей основным ганглиозидным компонентом является GM2. В гепатоме-22 содержание этого ганглиозда уменьшается более чем в 2 раза. Аналогичная тенденция наблюдалась и в случае аспитной гепатомы 22а. Напротив, количество ганглиозида GM1 в гепатоме-22 превышает таковое печени — в 2 раза. В то же время, уровень ганглиозида GM3 в опухоли по сравнению с нормальной тканью практически не изменяется, а содержание ганглиозида в гепатоме-22 несколько

уменьшается. Следует отметить, что среди ганглиозидов гепатомы-22 мышей присутствует сиалогликосфинголипид, по хроматографическому поведению подобный ганглиозиду GD3. При обработке исследуемых ганглиозидов нейраминидазой из Vibrio cholerae рассматриваемый сиалосодержащий гликосфинголипид подвергался десиалированию, что указывает на концевое положение остатка сиаловой кислоты. В продуктах ферментолиза был обнаружен лактозищерамид, образующийся при действии нейраминидазы на ганглиозиды GD3 и GM3. Следовательно, можно сделать вывод, что в гепатоме-22 содержится ганглиозид GD3, обнаруженный ранее во многих типах опухолей.

Исследование состава сиаловых кислот показало, что в гепатоме-22 и нормальной печени присутствуют как

Таблица 10.

Содержание ганглиозидов в печени и гепатоме-22 мышей

Ганглиозиды, нмоль/мг белка Печень Гепатома-22

Общие липиднос вязанные Sia 1,9±0,08 1,9+0,06*

gm3 0,16±0,01 0,17Ю,01**

gm2 1,1+0,01 0,4610,02***

GMi 0,3610,01 0,7710,02***

gd3 0,00 0,1710,01

gd„ 0,1410,001 0,10±0,006***

*р>0,1; **р>0,05; ***р<0,001

Таким образом, изучение сфинголипидов гепатомы-22 мышей показало, что в данной опухоли, как и в гепатоме-27 крыс, увеличивается содержание сфингомиелина, глюкозил-, галактозил- и лактозилцерамидов, оказывающих стимулирующее действие на рост клеток, и церамидов, подавляющих клеточный рост. Уровень ганглиозидов существенно не изменяется, но их качественный и количественный состав претерпевает изменения по сравнению с гомологичной нормальной тканью.

Как уже обсуждалось выше, в литературе имеются многочисленные данные об увеличении уровня сфингомиелина в опухолях по сравнению с нормой, причем было установлено, что повышение его содержания коррелирует со степенью малигнизации и метастазирующей активности. Что касается церамида, то отклонение его количества от нормы, видимо, зависит от типа опухоли: наряду с повышением содержания церамида в опухолевых клетках по сравнению с гомологичными нормальными (табл. 1, 7, 9), ранее отмечалось и уменьшение его количества, особенно в высокозлокачественных опухолях. Следует подчеркнуть, что в пуле опухолевых церамидов присутствует значительное количество биологически неактивного дигидроцерамида (1.2.), что приводит к понижению общей антипролиферативной активности. Рост уровня гликосфинголипидов в опухоли по сравнению с гомологичной нормальной тканью согласуется с данными о том, что они могут выступать в роли митогенов.

Полученные данные показывают, что поскольку содержание изученных биоактивных сфинголипидов в гепатоме-27 крыс и гепатоме-22 мышей значительно выше, чем в гомологичной нормальной печени, в опухоли, видимо, повышена способность к ангиогенезу (сфингомиелин), увеличена клеточная пролиферация (глюкозил- и лактозилцерамиды), повышена противоапоптотическая активность (глюкозил- и лактозилцерамиды, ганглиозиды ОМ1, ОМ2 и ОМ3). Хотя наряду с увеличением количества эффекторных соединений, стимулирующих клеточный рост и ингибирующих апоптоз, повышается и содержание церамида, напротив, угнетающего пролиферацию и способствующего апоптозу, их баланс, видимо, сдвигается в сторону роста опухоли.

Заключение

Полученные результаты дают возможность ответить на поставленные в данной работе вопросы. Во-первых, исследование показало, что в опухолях различного гистогенеза изменяется структура сфингоидных оснований сфинголипидов: содержание сфинганина в них увеличивается и отношение сфингенинхфингании сдвигается в сторону последнего. Результатом этого нарушения является повышение количества биологически инертных дигидроцерамидов, не оказывющих угнетающего действия на рост опухолей. Во-вторых, установлено, что присутствие значительного количества сфинганина характерно только для сфинголипидов опухолей, но не для таковых в нормальных быстропролиферирующих тканях. Кроме того, показано, что содержание сфинганина в сфинголипидах перевиваемых опухолей зависит от органа трансплантации, причем в "родственном" микроокружении относительное содержание сфинганина выше, чем в "чужеродном".

Также установлено, что в опухолях изменяется активность дигидроцерамиддесатуразы (фермента, участвующего во введении двойной связи в положение 4 цепи сфингоидов), причем это изменение также зависит от органа трансплантации. Обнаружено, что локализация опухоли оказывает влияние также на содержание ганглиозидов, сфингомиелинов и ганглиозидный состав опухолей различного гистогенеза.

Анализ одновременного изменения эффекторных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток (сфингомиелина, церамида, глюкозил- и лактозилцерамидов, а также ганглиозидов), опухоли по сравнению с гомологичной нормальной тканью, показал, что эти нарушения, видимо, могут быть одним из факторов, способствующих развитию опухолевого процесса.

выводы

1. Изучено отношение сфингенин:сфинганин в сфинголипидах перевиваемых опухолей животных различного гистогенеза (подкожноперевитых нефромы РА крыс, меланомы В 16, карциномы легкого Льюис, карциномы толстого кишечника, гепатомы-22 мышей, а также гепатомы-27, саркомы М1 и холангиоцеллюларной карциномы РС 1 крыс, перевитых подкожно и внутрипеченочно). Показано, что в опухолях различного гистогенеза увеличивается содержание сфинганина и отношение сфингенинхфинганин сдвигается в сторону последнего.

2. Выяснено, что присутствие значительного количества сфинганина характерно только для сфинголипидов опухолей, но не нормальной быстропролиферирующей ткани (регенерирующая печень мышей).

3. Показано, что в опухолях изменяется активность дигидроцерамиддесатуразы, вводящей двойную связь в положение 4 цепи сфингоида, причем это изменение зависит от типа опухоли.

4. Установлено, что содержание сфингомиелина и ганглиозидов, количество сфинганина, величина активности дигидроцерамиддесатуразы, а также ганглиозидный состав зависят от органа трансплантации опухоли, т.е. ее микроокружения.

5. Показано, что одновременное изменение содержания эффекторных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток, в опухоли (гепатома-27 крыс и гепатома-22 мышей) по сравнению с гомологичной нормальной тканью, видимо, приводит к сдвигу их баланса в сторону роста опухоли.

Основные результаты работы изложены в следующих публикациях:

1. А.Г. Кандыба, О.Г. Сомова, А.М. Козлов, Е.С. Зубова, Л.Б. Дудник, А.В. Алесенко, В.И. Швец, Э.В. Дятловицкая. Сфинголипиды перевиваемой нефромы РА крыс. // Биохимия, 2000, т. 65, с. 825-828

2. Э.В. Дятловицкая, А.Г. Кандыба, А.М. Козлов,. О.Г. Сомова. Сфинганин в сфингомиелинах опухолей и регенерирующей печени мышей. // Биохимия, 2001, т. 66, с. 624-627

3. ВЛ. Кобляков, О.Г. Сомова, В.Ф. Кондаленко, Н.М. Осташкина, А.Г. Кандыба, Т.К. Дубовая, Э.В. Дятловицкая. Различия в составе липидов и пролиферативной активности гепатомы-27 крыс в зависимости от органа трансплантации. // Биохимия,

2001, т. 66, с. 745-750

4. А.Г. Кандыба, В.А. Кобляков, АМ. Козлов, И.Ю. Нагаев, В.П. Шевченко, Э.В.Дятловицкая. Дигидроцерамиддесатуразная активность в опухолях.// Биохимия,

2002,т.67,с.717-720

5. ВА. Кобляков, О.Г. Сомова, А.Г. Кандыба, В.Ф. Кондаленко, Н.М. Клим, Э.В. Дятловицкая. Сравнительное исследование состава липидов и пролиферативной активности холангиоцеллюларного рака РС1 и саркомы М1 крыс в зависимости от органа трансплантации. // Биохимия, 2002, т. 67, с. 1524-1528

6. А.Г. Кандыба, В.А. Кобляков, Э.В. Дятловицкая. Изменение отношения сфингенин/сфннганин в сфинголипндах перевиваемых опухолей крыс в зависимости от органа трансплантации. // Биоорганическая химия, 2003, т. 29, с. 222-224

7. А.Г. Кандыба, О.Г. Сомова, Э.В. Дятловицкая. Сфинганин в сфинголипидах опухолей. // Тезисы докладов и стендовых сообщений XIV зимней международной молодежной научной школы "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии", Москва, 2002, с. 68

8. А.Г. Кандыба, ВА. Кобляков, Э.В. Дятловицкая. Состав фосфолипидов и ганглиозидов опухолей в зависимости от органа трансплантации. // Тезисы научных докладов Ш Съезда Биохимического общества, С.-Петербург, 2002, с. 343

9. Э.В. Дятловицкая, А.Г. Кандыба. Сфинголипиды и клеточный рост. // Тезисы докладов VI чтений, посвященных памяти академика ЮА Овчинникова, Москва-Пущино, 2002, с. 12

Принято к исполнению 11/02/2004 Исполнено 12/02/2004

Заказ № 41 Тираж: 100 экз.

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095)318-40-68 www.autoreferat.ru

ۥ 47 53

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Кандыба, Анна Григорьевна

Принятые сокращения

Введение

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Структура сфинголипидов

2. Биосинтез и катаболизм сфинголипидов

3. Сфингомиелиновый цикл

4. Сфинголипидные биоэффекторы, не являющиеся супрессорами пролиферации и выживаемости клеток

4.1. Дигидроцерамиды

4.2. Сфингозин-1-фосфат

4.3. Церамид-1-фосфат

4.4. Сфингозин-1-фосфохолин

4.5. Нейтральные гликосфинголипиды

4.6. Ганглиозиды 36 Заключение 40 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Сфинганин в сфинголипидах опухолей

2. Влияние органа трансплантации на содержание сфингомиелинов и ганглиозидов в опухолях

3. Изменение содержания биологически активных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток, в гепатоме-27 крыс и в гепатоме-22 мышей по сравнению с гомологичной печенью

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение в опухолях баланса биоэффекторных сфинголипидов, модулирующих клеточный рост"

В последние два десятилетия большое внимание исследователей привлекают сфинголипиды, которые являются обязательными компонентами всех эукариотов. Эти соединения, представляющие собой один из наиболее разнообразных по строению и биологической активности классов липидов, были открыты в конце XIX столетия и получили название за свои загадочные свойства (от греческого слова "sphinx").

Долгое время сфинголипиды рассматривали лишь как структурные компоненты клеточных мембран. Однако в 1986 году было обнаружено, что свободный сфингозин ингибирует протеинкиназу С [1] и влияет на рост клеток [2]. Это открытие вызвало повышенный интерес к сфинголипидам как биоактивным молекулам и позволило предположить, что они могут участвовать в регуляции клеточных процессов. В 1989 году было открыто существование ранее неизвестного пути сигнальной трансдукции -"сфингомиелинового цикла" [3] и показано, что церамиды являются вторичными мессенджерами, участвующими в проведении сигналов различных внешних агентов внутрь клетки. В настоящее время опубликовано несколько тысяч работ, посвященных участию сфинголипидов в пролиферации, дифференцировке, апоптозе клеток и ряде других биологических процессов (см., например, обзоры [4-8]).

Особое внимание уделялось биоэффекторной роли церамидов и было установлено, что эти сфинголипиды являются супрессорами клеточного роста: ингибируют пролиферацию, способствуют дифференцировке клеток и стимулируют апоптоз [5, 7, 8]. В отличие от церамидов, дигидроцерамиды, в которых отсутствует транс-двойная связь в положении 4 цепи сфингоида, в большинстве случаев являются биологически неактивными и не влияют на указанные выше процессы (см. обзоры [9

В последние годы было обнаружено, что метаболиты церамида и сфингозина, также являющегося вторичным мессенджером (см. обзор [12] и цитируемую там литературу), могут проявлять биоэффекторные свойства. Эти эффекторы (сфингозин-1 -фосфат, сфингозин-1-фосфохолин, глюкозил- и лактозилцерамид, некоторые ганглиозиды) в отличие от сфингозина и церамида, напротив, стимулируют пролиферацию и ингибируют апоптоз, способствуя росту и выживаемости клеток [6,1316]. Поскольку сфинголипидные биоэффекторы, модулирующие клеточный рост, связаны единым биосинтетическим циклом, было сделано предположение о существовании динамического равновесия между ними, своего рода "сфинголипидного реостата", переключающего клетку из пролиферативного состояния в апоптотическое и наоборот [14,17-20].

Опухолевые клетки, как известно, характеризуются нарушениями в пролиферации, дифференцировке и выживаемости по сравнению с гомологичными нормальными. Обнаружено также, что при малигнизации происходит искажение биосинтеза и катаболизма сфинголипидов, в результате чего изменяется их состав и содержание [21-25]. Следовательно, можно предположить, что в опухолях происходят изменения в балансе сфинголипидных эффекторов, ингибирующих гибель клеток (церамид, сфингозин) и способствующих их выживаемости (сфингозин-1-фосфат, сфингозин-1 -фосфохолин, гликолипиды).

Ранее было установлено, что в злокачественных опухолях - спонтанной карциноме яичника человека [26,27] и меланоме человека [28] - изменяется содержание и строение церамидов (опухолевых супрессоров) по сравнению с гомологичными нормальными тканями и появляется значительное количество дигидроцерамидов, в структуру которых входит сфинганин (дигидросфингозин), не оказывающих ингибирующего эффекта на рост опухоли.

Поэтому представляло интерес:

1) выяснить, как изменяется структура сфингоидных оснований в сфингомиелинах и церамидах опухолей различного гистогенеза;

2) установить, присуще ли увеличение содержания сфинганина в сфинголипидах только опухолевому росту или быстрой пролиферации любых нормальных клеток;

3) изучить влияние органа трансплантации на количество сфинганина в сфинголипидах перевиваемых опухолей, поскольку выяснение этого вопроса может способствовать пониманию различий в свойствах клеток опухоли и ее метастазов;

4) определить, изменяется ли в опухолях активность дигидроцерамиддесатуразы, фермента, участвующего во введении двойной связи в дигидроцерамид с образованием биологически активного церамида;

5) провести анализ одновременного изменения эффекторных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток (сфингомиелинов, церамидов, глюкозил- и лактозилцерамидов, а также ганглиозидов), в опухоли по сравнению с гомологичной нормальной тканью.

С этой целью в настоящей работе изучены сфингоидные основания, входящие в состав сфинголипидов перевиваемых опухолей животных различного гистогенеза (нефромы РА крыс, меланомы В 16, карциномы Льюис легкого, карциномы толстого кишечника, гепатомы-22 мышей), а также регенерирующей печени мышей. Проведено сравнительное исследование сфингоидных оснований сфингомиелинов и церамидов гепатомы-27, саркомы М 1 и холангиоцеллюларной карциномы PC 1 крыс, перевитых подкожно и внутрипеченочно. Исследована активность дигидроцерамиддесатуразы этих опухолей и подкожноперевитой гепатомы-22 мышей. Осуществлен анализ одновременного изменения эффекторных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток (сфингомиелинов, церамидов, глюкозил- и лактозилцерамидов, ганглиозидов), в подкожноперевитых гепатоме-27 крыс и гепатоме-22 мышей по сравнению с гомологичной нормальной печенью.

В ходе проделанной работы установлено, что в сфинголипидах опухолей различного гистогенеза повышено содержание сфинганина, в результате чего увеличивается количество дигидроцерамидов, не оказывающих угнетающего действия на рост опухоли. При этом активность дигидроцерамид десатуразы изменяется неспецифически и зависит от типа опухоли и ее микроокружения, то есть от органа трансплантации. Было показано также, что в опухоли (по сравнению с нормальной тканью) изменяется баланс биоактивных сфинголипидов, и равновесие сдвигается в сторону эффекторов, стимулирующих рост клеток и их выживаемость. Таким образом, результаты настоящей работы свидетельствуют о том, что сфинголипидные биоэффекторы, по-видимому, оказывают существенное влияние на опухолевый процесс.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Кандыба, Анна Григорьевна

Выводы

1. Изучено отношение сфингенин:сфинганин в сфинголипидах перевиваемых опухолей животных различного гистогенеза (подкожноперевитых нефромы РА крыс, меланомы В 16, карциномы легкого Льюис, карциномы толстого кишечника, гепатомы-22 мышей, а также гепатомы-27, саркомы М 1 и холангиоцеллюларной карциномы PC 1 крыс, перевитых подкожно и внутрипеченочно). Показано, что в опухолях различного гистогенеза увеличивается содержание сфинганина и отношение сфингенин:сфинганин сдвигается в сторону последнего.

2. Выяснено, что присутствие значительного количества сфинганина характерно только для сфинголипидов опухолей, но не нормальной быстропролиферирующей ткани (регенерирующая печень мышей).

3. Показано, что в опухолях изменяется активность дигидроцерамиддесатуразы, вводящей двойную связь в положение 4 цепи сфингоида, причем это изменение зависит от типа опухоли.

4. Установлено, что содержание сфингомиелина и ганглиозидов, количество сфинганина, величина активности дигидроцерамиддесатуразы, а также ганглиозидный состав зависят от органа трансплантации опухоли, т.е. ее микроокружения.

5. Показано, что одновременное изменение содержания эффекторных сфинголипидов, модулирующих рост и выживаемость клеток, в опухоли (гепатома-27 крыс и гепатома-22 мышей) по сравнению с гомологичной нормальной тканью, видимо, приводит к сдвигу их баланса в сторону роста опухоли.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Кандыба, Анна Григорьевна, Москва

1. Hannun Y.A., Loomis C.R., Merrill A.H., Jr., Bell R.M. Sphingosine inhibition of protein kinase С activity and of phorbol dibutirate binding in vitro and in human platelets.

2. J. Biol. Chem., 1986, v. 261, p. 12604-12609

3. Okazaki J., Bell R.M., Hannun Y.A. Sphingomyelin turnover induced by vitamin D3 in HL-60 cells. Role in cell differentiation. J. Biol. Chem., 1989, v. 264, p. 19076-19080

4. Ballou L.R. Sphingolipids and cell function. Immunology Today, 1992, v. 13, p. 339-341

5. Hannun Y.A., Obeid L.M., Dbaibo Y.S. Ceramide. A novel second messenger and lipid mediator. Handbook Lipid Res., 1996, v. 8, p. 177-204

6. Huwiler A., Kolter Т., Pfeilschifter J., Sandhoff K. Physiology and pathophysiology of sphingolipid metabolism and signaling. Biochim. Biophys. Acta, 2000, v. 1485, p. 63-99

7. Ohanian J., Ohanian V. Sphingolipids in mammalian cell signalling. Cell. Mol. Life. Sci., 2001, v. 58, p. 2053-2068

8. Hannun Y.A., Obeid L.M. The Ceramide centric universe of lipid-mediated cell regulation: stress encounters of the lipid kind. - J. Biol. Chem., 2002, v. 277, p. 2584725850

9. Дятловицкая Э.В. Зависимость биоэффекторных свойств сфинголипидов от строения их гидрофобного фрагмента. Биохимия, 1998, т. 63, с. 67-74

10. Дятловицкая Э.В. Связь биологических функций с их химической структурой. -Биоорганическая химия, 2000, т. 26, с. 12-18

11. Дятловицкая Э.В. Биоэффекторные свойства сфинголипидов в отсутствие 4-транс-двойной связи в углеводородной цепи сфингоида. Биоорганическая химия, 2002, т. 28, с. 5-10

12. Алесенко А.В. Функциональная роль сфингозина в индукции пролиферации и гибели клеток. Биохимия, 1998, т. 63, с. 75-82

13. Spiegel S., Merrill А.Н., Jr. Sphingolipid metabolism and cell growth regulation. -FASEB J., 1996, v. 10, p. 1388-1397

14. Шпигель С., Кувилье О., Эдзаль Д., Кохама Т., Мензелеев Р., Оливера А., Томас Д., Ту Д., ван Бруклин Д., Ванг Ф. Роль сфингозин-1-фосфата в росте, дифференцировке и смерти клеток. Биохимия, 1998, т. 63 с. 83-88

15. Spiegel S., Milstien S. Sphingosine-1-phosphate: signaling inside and out. FEBS Lett., 2000, v. 476, p. 55-57

16. Payne S.G., Milstien S., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate: dual messenger functions. -FEBS Lett., 2002, v. 531, p. 54-57

17. Spiegel S., Cuvillier O., Edsall L.C., Kohama T„ Menzeleev R., Olah Z., Olivera A., Pirianov G., Thomas D.M., Tu Z., Van Brocklyn J.R., Wang F. Sphingosine-1-phosphate in cell growth and cell death. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1998, v. 845, p. 11-18

18. Pyne S., Pyne N.J. Sphingosine-1-phosphate signalling in mammalian cells. Biochem. J., 2000, v. 349, p. 385-402

19. Prieschl E.E., Baumruker T. Sphingolipids: second messengers, mediators and raft constituents in signaling. Immunology Today, 2000, v. 21, p. 555-560

20. Spiegel S., Milstien S. Sphingosine-1-phosphate: an enigmatic signalling lipid. Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2003, v. 4, p. 397-407

21. Hakomori S. Glycosphingolipids in cellular interaction, differentiation and oncogenesis. — Annu. Rev. Biochem., 1981, v. 50, p. 733-764

22. Hakomori S. Bifunctional role of glycosphingolipids. J. Biol. Chem., 1990, v. 265, p. 18713-18716

23. Dyatlovitskaya E.V., Bergelson L.D. Glycosphingolipids and antitumor immunity. -Biochim. Biophys. Acta, 1987, v. 907, p. 125-143

24. Дятловицкая Э.В. Сфинголипиды и злокачественный рост. Биохимия, 1995, т. 60, с. 843-851

25. Дятловицкая Э.В. Сфинголипиды и рак. Биоорганическая химия, 1998, т. 24, с. 723-730

26. Дятловицкая Э.В., Андреасян Г.О., Малых Я.Н., Рылова С.Н., Сомова О.Г. Шедцинг ганглиозидов и изменение биосинтеза церамидов в опухолях яичника человека. — Биохимия, 1997, т. 62, с. 651-656

27. Рылова С.Н., Сомова О.Г., Дятловицкая Э.В. Сравнительное исследование состава сфингоидных оснований и жирных кислот в церамидах и сфингомиелинах злокачественных опухолей и нормальной ткани яичника человека. Биохимия, 1998, т. 63, с. 1238-1242

28. Bodennec J., Famy С„ Brichon G., Zwingelstein G., Portoukalian J. Purification of free sphingoid bases by solid-phase extraction on weak cation exchanger cartridges. Anal. Biochem., 2000, v. 279, p. 245-248

29. Karlsson K.-A. On the chemistry and occurrence of sphingolipid long-chain bases. -Lipids, 1970, v. 5, p. 6-43

30. Kolesnick R. Sphingomyelin and derivatives in cellular signal. Prog. Lipid Res., 1991, v. 30, p. 1-38

31. Merrill A.H., Jr., Jones D.D. An update of the enzymology and regulation of sphingomyelin metabolism. Biochim. Biophys. Acta, 1990, v. 1044, p. 1-12

32. Merrill A.H., Jr. De novo Sphingolipid biosynthesis: a necessary, but dangerous pathway. -J. Biol. Chem., 2002, v. 277, p. 25843-25846

33. Merrill A.H., Jr., Sweeley C.C. Sphingolipids: metabolism and cell signalling. In Biochemistry of Lipids, Lipoproteins and Membranes (Vance D.E., Vance J.E., eds.) -Elsevier, Amsterdam, 1996, p. 309-339

34. Merrill A.H., Jr., Wang E. Biosynthesis of long-chain (sphingoid) bases from serine by LM cells. J. Biol. Chem., 1986, v. 261, p. 3764-3769

35. Ong D.E., Brady R.N. In vivo studies on the introduction of the 4-double bond of the sphingenine moiety of rat brain ceramides. J. Biol. Chem., 1973, v. 248, p. 3884-3888

36. Wang E., Norred W.P., Bacon C.W., Riley R.T., Merrill A.H., Jr. Inhibition of sphingolipid biosynthesis by fumonisins. Implications for diseases associated with Fusarium moniliforme. J. Biol. Chem., 1991, v. 266, p. 14486-14490

37. Geeraert L., Mannaerts G.P., Van Veldhoven P.P. Conversion of dihydroceramide into ceramide: involvement of a desaturase. Biochem. J., 1997, v. 327, p. 125-132

38. Mikami Т., Kashiwagi M., Tsuchihashi K., Akino Т., Gasa S. Substrate specificity and some other enzymatic properties of dihydroceramide desaturase (ceramide synthase) in fetal rat skin. J. Biochem., 1998, v. 123, p. 906-911

39. Causeret C., Geeraert L., van der Hoeven G., Mannaerts G.P., van Veldhoven P.P. Further characterization of rat dihydroceramide desaturase: tissue distribution, subcellular localization, and substrate specificity. Lipids, 2000, v. 35, p. 1117-1125

40. Linn S.C., Kim H.S., Keane E.M., Andras L.M., Wang E., Merrill A.H., Jr. Regulation of de novo sphingolipid biosynthesis and the toxic consequences of its disruption. Biochem. Soc. Trans., 2001, v. 29, p. 831-835

41. Voelker D.R., Kennedy E.P. Cellular and enzymic synthesis of sphingomyelin. — Biochemistry, 1982, v. 21, p. 2753-2759

42. Jeckel D., Karrenbauer A., Birk R., Schmidt R.R., Wieland F. Sphingomyelin is synthesized in the cis Golgi. FEBS Lett., 1990, v. 261, p. 155-157

43. Miro Obradors M.J., Sillence D., Howitt S., Allan D. The subcellular sites of sphingomyelin synthesis in BHK cells. Biochim. Biophys. Acta, 1997, v. 1359, p. 1-12

44. Kolter Т., Proia R.L., Sandhoff K. Combinatorial ganglioside biosynthesis. J. Biol. Chem., 2002, v. 277, p. 25859-25862

45. Hannun Y.A., Luberto C., Argraves K.M. Enzymes of sphingolipid metabolism: from modular to integrative signaling. Biochemistry, 2001, v. 40, p. 4893-4903

46. Okazaki Т., Bielawska A., Bell R.M., Hannun Y.A. Role of ceramide as a lipid mediator of la,25-dihydroxyvitamin D3-induced HL-60 cell differentiation. J. Biol. Chem., 1990,v. 265, p. 15823-15831

47. Kolesnick R., Golde D.W. The sphingomyelin pathway in tumor necrosis factor and interleukin-1 signaling. Cell, 1994, v. 77, p. 325-328

48. Jayadev S., Liu В., Bielawska A.E., Lee J.Y., Nazaire F., Pushkareva M.Y., Obeid L.M., Hannun Y.A. Role for ceramide in cycle arrest. J. Biol. Chem., 1995, v. 270,p. 2047-2052

49. Dbaibo G.S., Pushkareva M.Y., Jayadev S., Schwarz J.K., Horowitz J.M., Obeid L.M., Hannun Y.A. Retinoblastoma gene product as a downstream target for a ceramide-dependent pathway of growth arrest. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, v. 92,p. 1347-1351

50. Lee J.Y., Hannun Y.A., Obeid L.M. Ceramide inactivates cellular protein kinase Ca. -J. Biol. Chem., 1996, v. 271, p. 13169-13174

51. Wolff R.A., Dobrowsky R.T., Bielawska A.E., Obeid L.M., Hannun Y.A. Role of ceramide-activated protein phosphatase in ceramide-mediated signal transduction. -J. Biol. Chem., 1994, v. 269, p. 19605-19609

52. Dobrowsky R.T., Kamibayashi C., Mumby M.C., Hannun Y.A. Ceramide activates heterotrimeric protein phosphatase 2A. J. Biol. Chem., 1993, v. 268, p. 15523-15530

53. Venable M.E., Bielawska A.E., Obeid L.M. Ceramide inhibits phospholipase D in a cell-free system. J. Biol. Chem., 1996, v. 271, p. 24800-24805

54. Ruvolo P.P., Deng X., Ito Т., Carr B.K., May W.S. Ceramide induces Bcl2 dephosphorylation via a mechanism involving mitohondrial PP2A. J. Biol. Chem., 1999, v. 274, p. 20296-20300

55. Bielawska A.E., Crane H.M., Liotta D., Obeid L.M., Hannun Y.A. Selectivity of ceramide-mediated biology. Lack of activity of ery^o-dihydroceramide. J. Biol. Chem., 1993,v. 268, p. 26226-26232

56. Karasavvas N., Erukulla R.K., Bittman R., Lokshin R., Zakeri Z. Stereospecific induction of apoptosis in U937 cells by N-octanoyl-sphingosine stereomers and N-octyl-sphingosin.

57. The ceramide amide group is not required for apoptosis. Eur. J. Biochem., 1996, v. 136, p. 729-737

58. Hartfield P.J., Mayne G.C., Murray A.W. Ceramide induces apoptosis in PC12 cells. -FEBS Lett., 1997, v. 401, p. 148-152

59. Obeid L.M., Linardic C.M., Karolak L.A., Hannun Y.A. Programmed cell death induced by ceramide. Science, 1993, v. 259, p. 1769-1771

60. Kaipia A., Chun S.-Y., Eisenhauer K., Hsueh A.J.W. Tumor necrosis factor-a and its second messenger, ceramide, stimulate apoptosis in cultured ovarian follicles. -Endocrinology, 1996, v. 137, p. 4864-4870

61. Brugg В., Michel P.P., Agid Y., Ruberg M. Ceramide induces apoptosis in cultured mesencephalic neurons. J. Neurochem., 1996, v. 66, p. 733-739

62. Venable M.E., Lee J.Y., Smyth M.J., Bielawska A.E., Obeid L.M. Role of ceramide in cell senescence. J. Biol. Chem., 1995, v. 270, p. 30701-30708

63. Riboni L., Prinetti A., Bassi R., Caminiti A., Tettamanti G. A mediator role of ceramide in the regulation of neuroblastoma Neuro2a cell differentiation. J. Biol. Chem., 1995,v. 270, p. 26868-26875

64. Lee J. Y., Bielawska A.E., Obeid L.M. Regulation of cyclin-dependent kinase 2 activity by ceramide. Exp. Cell. Res., 2000, v. 261, p. 303-311

65. Bourbon N.A., Sandirasegarane L., Kester M. Ceramide-induced inhibition of Akt is mediated through protein kinase Czeta: implications for growth arrest. J. Biol. Chem., 2002, v. 277, p. 3286-3292

66. Kowluru A., Metz S.A. Ceramide-activated protein phosphatase-2A activity in insulin-secreting cells. FEBS Lett., 1997, v. 418, p. 179-182

67. Geley S., Hartmann B.L., Kofler R. Ceramides induce a form of apoptosis in human acute lymphoblastic leukemia cells that is inhibited by Bcl-2, but not by CrmA. FEBS Lett., 1997, v. 400, p. 15-18

68. Jarvis W.D., Kolesnick R.W., Fornari F.A., Traylor R.S., Gewirtz D.A., Grant S. Induction of apoptotic DNA damage and cell death by activation of the sphingomyelin pathway. -Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, v. 91, p. 73-77

69. Schwarz A., Futerman A.H. Distinct roles for ceramide and glucosylceramide at different stages of neuronal growth. J. Neurosci., 1997, v. 17, p. 2929-2938

70. Irie F., Hirabayashi Y. Application of exogenous ceramide to cultured rat spinal motoneurones promotes survival or death by regulation of apoptosis depending on its concentrations. J. Neurosci. Res., 1998, v. 54, p. 475-485

71. Herget Т., Esdar C., Oehrlein S.A., Heinrich M., Schutze S., Maelicke A., van Echten-Deckert G. Production of ceramides causes apoptosis during early neural differentiation in vitro. J. Biol. Chem., 2000, v. 275, p. 30344-30354

72. Major C.D., Gao Z.Y., Wolf B. A. Activation of the sphingomyelinase/ceramide signal transduction pathway in insulin-secreting beta-cells: role in cytokine-induced beta-cell death. Diabetes, 1999, v. 48, p. 1372-1380

73. Huang C., Ma W., Ding M., Bowden G.T., Dong Z. Direct evidence for an important role of sphingomyelinase in ultraviolet-induced activation of c-Jun N-terminal kinase. J. Biol. Chem., 1997, v. 272, p. 27753-27757

74. Ghafourifar P., Klein S.D., Schucht O., Schenk U., Pruschy M., Rocha S., Richter C. Ceramide induces cytochrome с release from isolated mitochondria. Importance of mitochondrial redox state. J. Biol. Chem., 1999, v. 274, p. 6080-6084

75. Richter C., Ghafourifar P. Ceramide induces cytochrome с release from isolated mitochondria. Biochem. Soc. Symp., 1999, v. 66, p. 27-31

76. Gomez-Munoz A., Kong J., Salh В., Steinbrecher U.P. Sphingosine-1-phosphate inhibits acid sphingomyelinase and blocks apoptosis in macrophages. FEBS Lett., 2003, v. 539, p. 56-60

77. Yamamoto M., Hioki Т., Ishii Т., Nakajima-Iijima S., Uchino S. DAP kinase activity is critical for C(2)-ceramide-induced apoptosis in PC 12 cells. Eur. J. Biochem., 2002, v. 269, p. 139-147

78. Foghi A., Ravandi A., Teerds K.J., Van Der Donk H., Kuksis A., Dorrington J. Fas-induced apoptosis in rat thecai/interstitial cells signals through sphingomyelin-ceramide pathway. Endocrinology, 1998, v. 139, p. 2041-2047

79. Vento R., Giuliano M., Lauricella M., Carabill M., Di Liberto D., Tesoriere G. Induction of programmed cell death in human retinoblastoma Y79 cells by C2-ceramide. Mol. Cell Biochem., 1998, v. 185, p. 7-15

80. Taniwaki Т., Yamada Т., Asahara H., Ohyagi Y., Kira J. Ceramide induced apoptosis to immature cerebellar granule cells in culture. Neurochem Res., 1999, v. 24, p. 685-690

81. Tavarini S., Colombaioni L., Garcia-Gil M. Sphingomyelinase metabolites control survival and apoptotic death in SH-SY5Y neuroblastoma cells. Neurosci. Lett., 2000, v. 285,p. 185-188

82. Gewies A., Rokhlin O.W., Cohen M.B. Ceramide induces cell death in the human prostatic carcinoma cell lines PC3 and DU145 but does not seem to be involved in Fas-mediated apoptosis. Lab. Invest., 2000, v. 80, p. 671-676

83. Shimada Т., Hiraishi H., Terano A. Hepatocyte growth factor protects gastric epithelial cells against ceramide-induced apoptosis through induction of cyclooxygenase-2. Life Sci., 2000, v. 68, p. 539-546

84. Sugiki H., Hozumi Y., Maeshima H., Katagata Y., Mitsuhashi Y., Kondo S. C2-ceramide induces apoptosis in a human squamous cell carcinoma cell line. Br. J. Dermatol., 2000, v. 143, p. 1154-1163

85. Barak A., Morse L.S., Goldkorn T. Ceramide: a potential mediator of apoptosis in human retinal pigment epithelial cells. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2001, v. 42, p. 247-254

86. Dyntar D., Eppenberger-Eberhardt M., Maedler K., Pruschy M., Eppenberger H.M., Spinas G.A., Donath M.Y. Glucose and palmitic acid induce degeneration of myofibrils and modulate apoptosis in rat adult cardiomyocytes. Diabetes, 2001, v. 50, p. 2105-2113

87. Spiegel S., Olivera A., Carlson R.O. The role of sphingosine in cell growth regulation and transmembrane signaling. Adv. Lipid Res., 1993, v. 25, p. 105-129

88. Hla Т., Lee M.-J., Ancellin N., Liu C.H., Thangada S., Thompson B.D., Kluk M. Sphingosine-1-phosphate: extracellular mediator or intracellular second messenger? -Biochem. Pharmacol., 1999, v. 58, p. 201-207

89. Spiegel S., Milstien S. Sphingosine 1-phosphate, a key cell signalling molecule. J. Biol. Chem., 2002, v. 277, p. 25851-25854

90. Ghosh T.K, Bian J., Gill D.L. Intracellular calcium release mediated by sphingosine derivatives generated in cells. Science, 1990, v. 248, p. 1653-1656

91. Ghosh TK, Bian J, Gill DL. Sphingosine 1-phosphate generated in the endoplasmic reticulum membrane activates release of stored calcium. J. Biol. Chem., 1994, v. 269, p. 22628-22635

92. Zhang H., Desai N.N., Olivera A., Seki Т., Brooker G., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate, a novel lipid, involved in cellular proliferation. J. Cell. Biol., 1991, v. 114, p. 155-167

93. Olivera A., Spiegel S. Sphingosine-1-phosphate as second messenger in cell proliferation induced by PDGF and FCS mitogens. Nature, 1993, v. 365, p. 557-560

94. Miyake Y., Kozutsumi Y., Nakamura S., Fujita Т., Kawasaki T. Serine palmitoyltransferase is the primary target of a sphingosine-like immunosuppressant, ISP-1/myriocin. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1995, v. 211, p. 396-403

95. Dallalio G., North M., Worden B.D., Means R.T., Jr. Inhibition of human erythroid colony formation by ceramide. Exp. Hematol., 1999, v. 27, p. 1133-1138

96. An S., Zheng Y., Bleu T. Sphingosine 1-phosphate-induced cell proliferation, survival, and related signaling events mediated by G protein-coupled receptors Edg3 and Edg5.

97. J. Biol. Chem., 2000, v. 275 p. 288-296

98. Hanafusa N., Yatomi Y., Yamada K., Hori Y., Nangaku M., Okuda Т., Fujita Т., Kurokawa K., Fukagawa M. Sphingosine 1-phosphate stimulates rat mesangial cell proliferation from outside the cells. Nephrol. Dial. Transplant., 2002, v. 17, p. 580-586

99. Carpio L.C., Stephan E., Kamer A., Dziak R. Sphingolipids stimulate cell growth via MAP kinase activation in osteoblastic cells. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids, 1999, v. 61, p. 267-273

100. Lampasso J.D., Kamer A., Margarone J., Dziak R. Sphingosine-1-phosphate effects on PKC isoform expression in human osteoblastic cells. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids, 2001, v. 65, p. 139-146

101. Lampasso J.D., Marzec N., Margarone J., 3rd, Dziak R. Role of protein kinase С alpha in primary human osteoblast proliferation. J. Bone Miner. Res., 2002, v. 17, p. 1968-1976

102. Dziak R., Yang B.M., Leung B.W., Li S., Marzec N., Margarone J., Bobek L. Effects of sphingosine-1-phosphate and lysophosphatidic acid on human osteoblastic cells. -Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids, 2003, v. 68, p. 239-249

103. Pyne S., Pyne N.J. The differential regulation of cyclic AMP by sphingomyelin-derived lipids and the modulation of sphingolipid-stimulated extracellular signal regulated kinase-2 in airway smooth muscle. Biochem. J., 1996, v. 315, p. 917-923

104. Pebay A., Toutant M., Premont J., Calvo C.F., Venance L., Cordier J., Glowinski J., Tence M. Sphingosine-1-phosphate induces proliferation of astrocytes: regulation by intracellular signalling cascades. Eur. J. Neurosci., 2001, v. 13, p. 2067-2076

105. Muraki K., Itoh Т., Imaizumi Y. Effects of sphingosine-1-phosphate, a lipid mediator, in cardiovascular tissues. Nippon Yakurigaku Zasshi, 2002, v. 120, p. 101P-103P

106. Katsuma S., Hada Y., Ueda Т., Shiojima S., Hirasawa A., Tanoue A., Takagaki K., Ohgi Т., Yano J., Tsujimoto G. Signalling mechanisms in sphingosine 1-phosphate-promoted mesangial cell proliferation. Genes Cells, 2002, v. 7, p. 1217-1230

107. Xu C.B., Zhang Y., Stenman E., Edvinsson L. D-erythro-N,N-dimethylsphingosine inhibits bFGF-induced proliferation of cerebral, aortic and coronary smooth muscle cells. -Atherosclerosis, 2002, v. 164, p. 237-243

108. Kohama Т., Olivera A., Edsall L., Nagiec M.M., Dickson R., Spiegel S. Molecular cloning and functional characterization of murine sphingosine kinase. J. Biol. Chem., 1998,v. 273, p. 23722-23728

109. Olivera A., Kohama Т., Edsall L., Nava V., Cuvillier O., Poulton S., Spiegel S. Sphingosine kinase expression increases intracellular sphingosine-1-phosphate and promotes cell growth and survival. J. Cell. Biol., 1999, v. 147, p. 545-558

110. Xia P., Gamble J.R., Wang L., Pitson S.M., Moretti P.A., Wattenberg B.W.,

111. D'Andrea R.J., Vadas M.A. An oncogenic role of sphingosine kinase. Curr. Biol., 2000, v. 10, p. 1527-1530

112. Spiegel S., Milstien S. Sphingoid bases and phospholipase D activation. Chem. Phys. Lipids, 1996, v. 80, p. 27-36

113. Goetzl E.J., Kong Y., Mei B. Lysophosphatidic acid and sphingosine 1-phosphate protection of T cells from apoptosis in association with suppression of Bax. J. Immunol., 1999, v. 162, p. 2049-2056

114. Morita Y., Perez G.I., Paris F., Miranda S.R., Ehleiter D., Haimovitz-Friedman A.,

115. Fuks Z., Xie Z., Reed J.C., Schuchman E.H., Kolesnick R.N., Tilly J.L. Oocyte apoptosis is suppressed by disruption of the acid sphingomyelinase gene or by sphingosine-1-phosphate therapy. Nat. Med., 2000, v. 6, p. 1109-1114

116. Hamada K., Nakamura H., Oda Т., Hirano Т., Shimizu N., Utiyama H. Involvement of Mac-1-mediated adherence and sphingosine 1-phosphate in survival ofphorbol ester-treated U937 cells. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1998, v. 244, p. 745-750

117. Karliner J.S., Honbo N., Summers K., Gray M.O., Goetzl E.J. The lysophospholipids sphingosine-1-phosphate and lysophosphatidic acid enhance survival during hypoxia in neonatal rat cardiac myocytes. Mol. Cell. Cardiol., 2001, v. 33, p. 1713-1717

118. Perez G.I., Knudson C.M., Leykin L., Korsmeyer S.J., Tilly J.L. Apoptosis-associated signaling pathways are required for chemotherapy-mediated female germ cell destruction. Nat. Med., 1997, v. 3, p. 1228-1232

119. Cuvillier O., Pirianov G., Kleuser В., Vanek P.G., Coso O.A., Gutkind S., Spiegel S. Suppression of ceramide-mediated programmed cell death by sphingosine-1-phosphate. -Nature, 1996, v. 381, p. 800-803

120. Cuvillier O., Levade T. Sphingosine 1-phosphate antagonizes apoptosis of human leukemia cells by inhibiting release of cytochrome с and Smac/DIABLO from mitochondria. Blood, 2001, v. 98, p. 2828-2836

121. Kwon Y.G., Min J.K., Kim K.M., Lee D.J., Billiar T.R., Kim Y.M. Sphingosine 1-phosphate protects human umbilical vein endothelial cells from serum-deprived apoptosis by nitric oxide production. Biol. Chem., 2001, v. 276, p. 10627-10633

122. Davaille J., Li L., Mallat A., Lotersztajn S. Sphingosine 1-phosphate triggers both apoptotic and survival signals for human hepatic myofibroblasts. J. Biol. Chem., 2002, v. 277, p. 37323-37330

123. Kleuser В., Cuvillier O., Spiegel S. la,25-dihydroxyvitamin D3 inhibits programmed cell death in HL-60 cells by activation of sphingosine kinase. Cancer. Res., 1998, v. 58,p. 1817-1824

124. Edsall L.C., Pirianov G.G., Spiegel S. Involvement of sphingosine 1-phosphate in nerve growth factor-mediated neuronal survival and differentiation. Neurosci., 1997, v. 17, p. 6952-6960

125. Edsall L.C., Cuvillier O., Twitty S., Spiegel S., Milstien S. Sphingosine kinase expression regulates apoptosis and caspase activation in PC 12 cells. Neurochem., 2001, v. 76,p. 1573-1584

126. Olivera A., Kohama Т., Tu Z., Milstien S, Spiegel S. Purification and characterization of rat kidney sphingosine kinase. J. Biol. Chem., 1998, v. 273, p. 12576-12583

127. Nava V.E., Hobson J.P., Murthy S., Milstien S., Spiegel S. Sphingosine kinase type 1 promotes estrogen-dependent tumorigenesis of breast cancer MCF-7 cells. — Exp. Cell. Res., 2002, v. 281, p. 115-127

128. Castillo S.S., Teegarden D. Ceramide conversion to sphingosine-1-phosphate is essential for survival in C3H10T1/2 cells. J. Nutr., 2001, v. 131, p. 2826-2830

129. Strelow A., Bernardo K., Adam-Klages S., Linke Т., Sandhoff К., Kronke M., Adam D. Overexpression of acid ceramidase protects from tumor necrosis factor-induced cell death. J. Exp. Med., 2000, v. 192, p. 601-612

130. Nava V.E., Cuvillier O., Edsall L.C., Kimura K., Milstien S., Gelmann E.P., Spiegel S. Sphingosine enhances apoptosis of radiation-resistant prostate cancer cells. Cancer. Res., 2000, v. 60, p. 4468-4474

131. Gomez-Munoz A., Duffy P.A., Martin A., O'Brien L., Byun H.S., Bittman R.,

132. Brindley D.N. Short-chain ceramide-1-phosphates are novel stimulators of DNA synthesis and cell division: antagonism by cell-permeable ceramides. Mol. Pharmacol., 1995, v. 47, p. 833-839

133. Gomez-Munoz A., Frago L.M., Alvarez L., Varela-Nieto I. Stimulation of DNA synthesis by natural ceramide 1-phosphate. Biochem. J., 1997, v. 325, p. 435-440

134. Frago L.M., Leon Y., de la Rosa E.J., Gomez-Munoz A., Varela-Nieto I. Nerve growth factor and ceramides modulate cell death in the early developing inner ear. J. Cell. Sci., 1998, v. Ill,p. 549-556

135. Desai N.N., Spiegel S. Sphingosylphosphorylcholine is a remarkably potent mitogen for a variety of cell lines. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1991, v. 181, p. 361-366

136. Desai N.N., Carlson R.O., Mattie M.E., Olivera A., Buckley N.E., Seki Т., Brooker G., Spiegel S. Signaling pathways for sphingosylphosphorylcholine-mediated mitogenesis in Swiss 3T3 fibroblasts. J. Cell. Biol., 1993, v. 121, p. 1385-1395

137. Zhu K., Baudhuin L.M., Hong G., Williams F.S., Cristina K.L., Kabarowski J.H.,

138. Witte O.N., Xu Y. Sphingosylphosphorylcholine and lysophosphatidylcholine are ligands for the G protein-coupled receptor GPR4. J. Biol. Chem., 2001, v. 276, p. 41325-41335

139. Seufferlein Т., Rozengurt E. Sphingosylphosphorylcholine activation of mitogen-activated protein kinase in Swiss 3T3 cells requires protein kinase С and a pertussis toxin-sensitive G protein. J. Biol. Chem., 1995, v. 270, p. 24334-24342

140. Chin T.Y., Chueh S.H. Sphingosylphosphorylcholine stimulates mitogen-activated protein kinase via a Ca2+-dependent pathway. Am. J. Physiol., 1998, v. 275, p. C1255-C1263

141. Tokura Y., Wakita H., Seo N., Furukawa F., Nishimura K., Takigawa M. Modulation of T-lymphocyte proliferation by exogenous natural ceramides and sphingosylphosphorylcholine. J. Investig. Dermatol. Symp. Proc., 1999, v. 4, p. 184-189

142. Sun L., Xu L., Henry F.A., Spiegel S., Nielsen T.B. A new wound healing agent -sphingosylphosphorylcholine. J. Invest. Dermatol., 1996, v. 106, p. 232-237

143. Chatteijee S. Lactosylceramide stimulates aortic smooth muscle cell proliferation. -Biochem. Biophys. Res. Commun., 1991, v. 181, p. 554-561

144. Chatteijee S.B., Dey S., Shi W.Y., Thomas K., Hutchins G.M. Accumulation of glycosphingolipids in human atherosclerotic plaque and unaffected aorta tissues. -Glycobiology, 1997, v. 7, p. 57-65

145. Chatteijee S., Shi W.Y., Wilson P., Mazumdar A. Role of lactosylceramide and MAP kinase in the proliferation of proximal tubular cells in human polycystic kidney disease. -J. Lipid. Res., 1996, v. 37, p. 1334-1344

146. Chatteijee S., Ghosh N. Oxidized low density lipoprotein stimulates aortic smooth muscle cell proliferation. Glycobiology, 1996, v. 6, p. 303-311

147. Chatteijee S. Oxidized low density lipoproteins and lactosylceramide both stimulate the expression of proliferating cell nuclear antigen and the proliferation of aortic smooth muscle cells. Indian J. Biochem. Biophys., 1997, v. 34, p. 56-60

148. Inokuchi J, Mason I., Radin N.S. Antitumor activity via inhibition of glycosphingolipid biosynthesis. Cancer Lett., 1987, v. 38, p. 23-30

149. Radin N.S. Rationales for cancer chemotherapy with PDMP, a specific inhibitor of glucosylceramide synthase. Mol. Chem. Neuropathol., 1994, v. 21, p. 111-127

150. Marsh N.L., Elias P.M., Holleran W.M. Glucosylceramides stimulate murine epidermal hyperproliferation. J. Clin. Invest, 1995, v. 95, p. 2903-2909

151. Marchell N.L., Uchida Y., Brown B.E., Elias P.M., Holleran W.M. Glucosylceramides stimulate mitogenesis in aged murine epidermis. J. Invest. Dermatol., 1998, v. 110, p. 383-387

152. Rani C.S., Abe A., Chang Y., Rosenzweig N. Saltiel A.R., Radin N.S., Shayman J.A. Cell cycle arrest induced by an inhibitor of glucosylceramide synthase. Correlation with cyclin-dependent kinases. J. Biol. Chem., 1995, v. 270, p. 2859-2867

153. Kyogashima M., Inoue M., Seto A., Inokuchi J. Glucosylceramide synthetase inhibitor, D-threo-1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-l-propanol exhibits a novel decarcinogenic activity against Shope carcinoma cells. Cancer Lett., 1996, v. 101,p. 25-30

154. Takami Y., Abe A., Matsuda Т., Shayman J. A., Radin N.S. Walter R.J. Effect of an inhibitor of glucosylceramide synthesis on cultured human keratinocytes. J. Dermatol., 1998, v. 25, p. 73-77

155. Uchida Y., Murata S., Schmuth M., Behne M.J., Lee J.D., Ichikawa S., Elias P.M., Hirabayashi Y., Holleran W.M. Glucosylceramide synthesis and synthase expression protect against ceramide-induced stress. J. Lipid Res., 2002, v. 43, p. 1293-1302

156. Di Sano F., Di Bartolomeo S., Fazi В., Fiorentini C., Matarrese P., Spinedi A., Piacentini M. Antisense to glucosylceramide synthase in human neuroepithelioma affects cell growth but not apoptosis. Cell Death Differ., 2002, v. 9, p. 693-695

157. Liu Y.Y., Han T.Y., Giuliano A.E., Ichikawa S., Hirabayashi Y., Cabot M.C. Glycosylation of ceramide potentiates cellular resistance to tumor necrosis factor-alpha-induced apoptosis. Exp. Cell. Res., 1999, v. 252, p. 464-470

158. Hakomori S. The glycosynapse. Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2002, v. 99, p. 225-232

159. Hakomori S. Structure, organization, and function of glycosphingolipids in membrane. -Curr. Opin. Hematol., 2003, v. 10, p. 16-24

160. Hakomori S. Cell growth control and antigenic expression through membrane glycosphingolipids. In Glycoconjugate Research, v. 2 (Gregory J.D., Jeanloz R.W., eds.) -Acad. Press N.-Y. London, 1979, p. 965-983

161. Spiegel S., Fishman P.H, Gangliosides as bimodal regulators of cell growth. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, v. 84, p. 141-145

162. Vaheri A., Rucoslahti E., Nordling S. Neuraminidase stimulates division and sugar uptake in density-inhibited cell cultures. Nat. New. Biol., 1972, v. 238, p. 211-212

163. Dippold W.G., Knuth A., Meyer zum Buschenfelde K.H. Inhibition of human melanoma cell growth in vitro by monoclonal anti-GD3-ganglioside antibody. Cancer. Res., 1984, v. 44, p. 806-810

164. Usuki S., Lyu S.C., Sweeley C.C. Sialidase activities of cultured human fibroblasts and the metabolism of GM3 ganglioside. J. Biol. Chem., 1988, v. 263, p. 6847-6853

165. Nagai Y. Functional roles of gangliosides in bio-signaling. Behav. Brain. Res., 1995, v. 66, p. 99-104

166. Tsuji S., Arita M., Nagai Y. GQlb, a bioactive ganglioside that exhibits novel nerve growth factor (NGF)-like activities in the two neuroblastoma cell lines. J. Biochem. (Tokyo), 1983, v. 94, p. 303-306

167. Nakajima J., Tsuji S., Nagai Y. Bioactive gangliosides: analysis of functional structures of the tetrasialoganglioside GQlb which promotes neurite outgrowth. Biochim. Biophys. Acta., 1986, v. 876, p. 65-71

168. Hanai N., Dohi Т., Nores G.A., Hakomori S. A novel ganglioside, de-N-acetyl-GM3 (II3NeuNH2LacCer), acting as a strong promoter for epidermal growth factor receptor kinase and as a stimulator for cell growth. J. Biol. Chem., 1988, v. 263, p. 6296-6301

169. Li R., Manela J., Kong Y., Ladisch S. Cellular gangliosides promote growth factor-induced proliferation of fibroblasts. J. Biol. Chem., 2000, v. 275, p. 34213-34223

170. Van Brooklyn J.R., Vandenheede J.R., Fertel R., Yates A.J., Rampersaud A.A. Ganglioside GMI activates the mitogen-activated protein kinase Erk2 and p70 S6 kinase in U-1242 MG human glioma cells. J. Neurochem., 1997, v. 69, p. 116-125

171. Gouni-Berthold I., Seul С., Ко Y., Hescheler J., Sachinidis A. Gangliosides GMI and GM2 induce vascular smooth muscle cell proliferation via extracellular signal-regulated kinase 1/2 pathway. Hypertension, 2001, v. 38, p. 1030-1037

172. Katoh-Semba R., Facci L., Skaper S.D., Varan S. Gangliosides stimulate astroglial cell proliferation in the absence of serum. J. Cell. Physiol., 1986, v. 126, p. 147-153

173. Watanabe Y., Taniguchi M., Fukamachi N., Kobayashi B. Effect of gangliosides on murine megakaryocytopoiesis in a liquid culture system. Cell Struct. Funct., 1988, v. 13, p. 293-300

174. Bhunia A.K., Schwarzmann G., Chatterjee S. GD3 recruits reactive oxygen species to induce cell proliferation and apoptosis in human aortic smooth muscle cells. J. Biol. Chem., 2002, v. 277, p. 16396-16402

175. Zeng G., Gao L., Yu R.K. Reduced cell migration, tumor growth and experimental metastasis of rat F-l 1 cells whose expression of GD3-synthase is suppressed. Int. J. Cancer, 2000, v. 88, p. 53-57

176. Ferrari G., Batistatou A., Greene L.A. Gangliosides rescue neuronal cells from death after trophic factor deprivation J. Neurosci., 1993, v. 13, p. 1879-1887

177. Ferrari G., Anderson B.L., Stephens R.M., Kaplan D.R., Greene LA. Prevention of apoptotic neuronal death by GMI ganglioside. Involvement of Trk neurotrophin receptors. J. Biol. Chem., 1995, v. 270, p. 3074-3080

178. Ferrari G., Greene L.A. Prevention of neuronal apoptotic death by neurotrophic agents and ganglioside GM1: insights and speculations regarding a common mechanism. Perspect. Dev. Neurobiol., 1996, v. 3, p. 93-100

179. Mutoh Т., Tokuda A., Miyadai Т., Hamaguchi M., Fujiki N. Ganglioside GM1 binds to the Trk protein and regulates receptor function. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1995, v. 92,p. 5087-5091

180. Ferrari G., Greene L.A. Promotion of neuronal survival by GM1 ganglioside. Phenomenology and mechanism of action. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1998, v. 845, p.263-273

181. Choi J.S., Kim J.A., Joo C.K. Activation of МАРК and CREB by GM1 induces survival of RGCs in the retina with axotomized nerve. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2003, v. 44,p. 1747-1752

182. Ryu B.R., Choi D.W., Hartley D.M., Costa E., Jou I., Gwag B.J. Attenuation of cortical neuronal apoptosis by gangliosides. J. Pharmacol. Exp. Ther., 1999, v. 290, p. 811-816

183. Cavallini L., Venerando R., Miotto G., Alexandre A. Ganglioside GM1 protection from apoptosis of rat heart fibroblasts. Arch. Biochem. Biophys., 1999, v. 370, p. 156-162

184. Koike Т., Fehsel K., Zielasek J., Kolb H., Burkart V. Gangliosides protect from TNF alpha-induced apoptosis. Immunol. Lett., 1993, v. 35, p. 207-212

185. Rippo M.R., Malisan F., Ravagnan L., Tomassini В., Condo I., Costantini P., Susin S.A., Rufini A., Todaro M., Kroemer G., Testi R. GD3 ganglioside as an intracellular mediator of apoptosis. Eur. Cytokine Netw., 2000, v. 11, p. 487-488

186. Рылова C.H., Козлов A.M., Когтев JI.C., Гаенко Г.П., Дятловицкая Э.В. Антипролиферативная активность церамидов нормальной и опухолевой тканей яичника человека. Биохимия, 1997, т. 62, с. 1228-1232

187. Дятловицкая Э.В., Леменовская А.Ф., Грешных К.П., Ушаков А.Н., Бергельсон Л.Д. Липиды опухолей. Сфингомиелины опухолей и гомологичных нормальных тканей. Биохимия, 1973, т. 38, с. 943-948

188. Sultatos L.G., Vesell E.S. Enhanced drug-metabolizing capacity within liver adjacent to human and rat liver tumors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, v. 77, p. 600-603

189. Kobliakov V., Kulikova L., Kolyada A., Chemeris G., Turusov V. Regulation of CYP1A induction in hepatoma 27 depending on the site of transplantation. Xenobiotica, 1993, v. 23, p. 703-708

190. Dyatlovitskaya E.V., Novikov A.M., Gorkova N.P., Bergelson L.D. Gangliosides of hepatica 27, normal and regenerating rat liver. Eur. J. Biochem., 1976, v. 63, p. 357-364

191. Ruggieri S., Mugnai G., Mannini A., Calorini L., Fallani A., Barletta E., Mannori G., Cecconi O. Lipid characteristics in metastatic cells. Clin. Exp. Metastasis, 1999, v. 17, p. 271-276

192. Текиева E.A., Дятловицкая Э.В. Лактоны ганглиозидов в опухолях желудка и молочной железы человека. Биохимия, 1993, т. 58, с. 1641-1644

193. Kim C.W., Lee Н.М., Lee Т.Н., Kang С., Kleinman Н.К., Gho Y.S. Extracellular membrane vesicles from tumor cells promote angiogenesis via sphingomyelin. Cancer Res., 2002, v. 62, p. 6312-6317

194. Koyanagi S., Kuga M., Soeda S., Hosoda Y., Yokomatsu Т., Takechi H., Akiyama Т., Shibuya S., Shimeno H. Elevation of de novo ceramide synthesis in tumor masses and the role of microsomal dihydroceramide synthase. Int. J. Cancer, 2003, v. 105, p. 1-6

195. Narayan P., Dahiya R. Alterations in sphingomyelin and fatty acids in human benign prostatic hyperplasia and prostatic cancer. Biomed. Biochim. Acta, 1991, v. 50,p. 1099-1108

196. Андреасян Г.О., Малых Я.Н., Дятловицкая Э.В. Церамиды и ганглиозиды доброкачественных и злокачественных опухолей яичника человека. Вопр. Мед. Химии, 1996, т. 42, с. 248-253

197. Riboni L., Campanella R., Bassi R., Villani R., Gaini S.M., Martinelli-Boneschi F., Viani P., Tettamanti G. Ceramide levels are inversely associated with malignant progression of human glial tumors. Glia, 2002, v. 39, p. 105-113

198. Saha S., Mohanty K.C. Correlation of gangliosides GM2 and GM3 with metastatic potential to lungs of mouse В16 melanoma. J. Exp. Clin. Cancer Res., 2003, v. 22, p. 125-134

199. Ogretmen В., Hannun Y.A. Updates on functions of ceramide in chemotherapy-induced cell death and in multidrug resistance. Drug Resist. Updat., 2001, v. 4, p. 368-377

200. Hakomori S., Handa K. Glycosphingolipid-dependent cross-talk between glycosynapses interfacing tumor cells with their host cells: essential basis to define tumor malignancy. -FEBS Lett., 2002, v. 531, p. 88-92

201. Шапошникова Г.И., Проказова Н.В., Волгин Ю.В., Бергельсон Л.Д. Нейтральные гликосфинголипиды печени и асцитной гепатомы 22а мышей. Биохимия, 1983, т. 48, с. 601-605

202. Кейтс М. Техника липидологии. М., Мир, 1975, 356 с.

203. Wagner Н., Horhammer L., Wolf P. Diinnschicht Chromatographic von Phospholipiden und Glicolipiden. Biochem Z., 1961, v. 334, p. 175-184

204. Svennerholm L. Sialic acids and derivatives: estimation by ion-exchange methods. -Methods in Enzymol., 1963, v. 6, p. 459-462

205. Досон P., Эллиот Д., Джонс К. Справочник биохимика. М., Мир, 1991, с. 280

206. Van Gent С.Н., Roseleur О.J., Van der Bijl P. Detection of cerebrosides on thin-layer chromatograms with an anthrone spray reagent. J. Chromatog., 1973, v. 85, p. 174-176

207. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin T.M. A universal reagent for phospholipid analysis. J. Chromatog., 1975, v. 114, p. 129-141

208. Folch J., Lees M., Sloane-Stanley J.H. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. J. Biol. Chem., 1957, v. 226, p. 497-509

209. Kawounura N., Taketoni J. A new procedure for the isolation of brain gangliosides and determination of their long-chain base compositions. J. Biochem., 1977, v. 81,p. 1217-1225

210. Saito T. Hakomori S.-I. Quantitative isolation of total glycosphingolipids from animal cells. J. Lipid Res., 1971, v. 12, p. 257-259

211. Дятловицкая Э.В., Андреасян Г.О., Малых Я.Н. Церамиды и ганглиозиды яичников человека при старении. Биохимия, 1995, т. 6, с. 1302-1306

212. Леменовская А.Ф., Коен Я.М., Перевощикова К. А., Збарский И.Б., Дятловицкая Э.В., Бергельсон Л.Д. Фосфолипидный состав ядерных мембран. Биохимия, 1976, т. 41, с. 1000-1003

213. Fiske C.H., Subbarow Y. The calorimetric determination of phosphorus. J.Biol. Chem., 1925, v. 66, p.375-400

214. Suzuki K.A. Simple and accurate micromethod for quantitative determination of ganglioside patterns. Life Sci., 1964, v. 3. p. 1227-1231

215. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J.Biol.Chem., 1951, v. 193, p. 265-27