Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические и функциональные изменения лимфоцитов в процессе краткосрочной адаптации

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические и функциональные изменения лимфоцитов в процессе краткосрочной адаптации"

На правах рукописи

КУЗЬМИЧЕВА ЛИДИЯ ВАСИЛЬЕВНА

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЛИМФОЦИТОВ В ПРОЦЕССЕ КРАТКОСРОЧНОЙ АДАПТАЦИИ

03 00 25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Саранск -2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» в лаборатории электронной микроскопии кафедры гистологии и на кафедре биохимии

Научный консультант:

доктор биологических наук профессор

Киселева Руфина Евгеньевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор

Ямщиков Николай Васильевич

доктор медицинских наук профессор

Чучкова Наталья Николаевна

доктор биологических наук профессор

Любовцева Любовь Алексеевна

Ведущая организация: Московская медицинская академия

имени И. М. Сеченова

Защита диссертации состоится 2005 года в 10 часов на

заседании диссертационного совета Д 212.117.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» (430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева» (430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

Автореферат разослан и марта 2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. Адаптация к условиям среды является характерным и важнейшим свойством живых систем любых уровней организации, на всех этапах филогенеза. В процессе эволюции, путем отбора, клетки приобрели способность в неблагоприятных условиях переводить свой метаболизм на аварийный режим, при котором происходит сужение их метаболической и функциональной активности, но обеспечивается поддержание и сохранение жизни (Насонов Д. Н., 1959; Александров В. Я., 1985; Рыскулова С. Т., 1986; Браун А. Д., Моженок Т. П., 1987; Craig Е. А. 1985; Wei Y. Н. et al., 1998; Melov S., 2000; Cadenas E.. et al., 2000).

Исследование неспецифического адаптационного синдрома клеточной системы, его причин, симптомов, молекулярных механизмов относится к фундаментальным проблемам биологии клетки. Интерес к этим вопросам вызван многими причинами, прежде всего самой практикой. Это механизм реакций живых систем на действие экстремальных по интенсивности и характеру раздражителей (Суханова Г. А., Серебров В. Ю., 2000; Давтян Т. К., Аванесян Л. А., 2001). Велико значение этой проблемы для биологии, медицины, ветеринарии. Для постановки правильного диагноза, контроля за эффективностью лечения, профилактики болезней людей и животных необходимо проведение исследований на клеточном и молекулярном уровнях.

Исследование адаптационного синдрома клеточной системы привлекает внимание и с теоретической точки зрения. Адаптационный синдром - это реакция клетки на действие альтерирующих факторов (экзо- и эндотоксинов). При адаптационном синдроме нарушение свойств клетки проявляется в разнообразных изменениях морфологического, физиологического, физико-химического и биохимического характера. Для многих современных работ по адаптационному синдрому клеточной системы характерно выявление особенностей действия различных факторов, специфики реагирования различных клеточных типов (Тиунов Л. А., 1986; Соловьян В. Т., 1990). Для исследования адаптационного синдрома очень важно наряду с изучением его специфических черт исследовать общие (неспецифические) признаки реакции.

Интерес к проблемам адаптационного синдрома обусловлен открытием и введением в практику в последние годы большого числа новых физических, химических и биологических альтерирующих агентов, способных оказывать неблагоприятное действие на клетки. При коррекции эндотоксикоза необходим анализ действия на клетку указанных агентов, что важно для установления доз, с которыми можно безопасно работать.

Первоначально понятие стресса (общего адаптационного синдрома, по Селье) рассматривалось как комплекс физиологических или патологических реакций мобилизации на уровне целого организма, обеспечивающих поддержание его гомеостаза в меняющихся условиях окружающей среды, оно вполне применимо и к единичным клеткам (Селье Г., 1972; Александров

В. Я., 1985; Браун А. Д., Моженок Т. П., 1987; Барабой В. А., 1991; Киселева Р. Е., 1994; Мельникова H.A. 1994; Кузьмичева Л. В., 1995). При этом реакция клеток на действие раздражителей, к которым относятся и эндотоксины мембранотропного действия, является неспецифической. В начальный период действия неблагоприятных факторов изменения метаболизма в основном сходны с физиологическим возбуждением (Браун

A. Д., Моженок Т. П., 1987). При усилении неблагоприятного фактора изменения обмена направлены в наиболее выгодную для данных условий сторону: часть метаболических реакций блокируется, и одновременно включается ряд процессов, не функционирующих или слабо функционирующих в норме (например, аэробный гликолиз, синтез белков стресса). Еще одним характерным ответом клетки на стрессовые воздействия является накопление в просвете цитоплазматического ретикулума «незаконченных» белков, т. е. белков без соответствующей нативной трехмерной конформации (Kautman R. J., 1997), при этом одновременно активируется интерферон-зависимая Ser/Thr-протеинкиназа, что приводит к апоптозу. Такое развитие событий характерно для вирусной инфекции. Аккумуляция незавершенных белков в цитоплазматическом ретикулуме приводит к индукции транскрипции ряда генов, кодирующих шапероны белков цитоплазматической сети.

Перекрытие клеточных адаптационных ответов, возможно, объясняется активацией в клетках под действием стресса универсального плейотропного посредника (сигнала тревоги), способного воспринимать индуцирующие сигналы и запускать каскад ответных реакций (Соловьян В. Т., 1990). По мнению В. А. Барабой (1991, 1992), таким универсальным сигналом служит смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в направлении активации ПОЛ в биологических мембранах (Киселева Р. Е., Кузьмичева Л.

B, 1995 - 2002; Halliwel В. et al., 1992; Behl С, Skutella et al., 1997; Blumberg J.B.,HaIpnerA.D., 1999).

Интенсивные исследования апоптоза как механизма программированной клеточной гибели (Ellis R. Е. et al., 1991; Новиков В. С, 1996; Ярилин А. А., 1996, 1998; Хансон К. П., 1997) рассматривают вопрос о соотношении некроза и апоптоза в ответе клетки на разнообразные внешние неблагоприятные воздействия, включая токсические эффекты ксенобиотиков. Основные отличия некроза и апоптоза хорошо известны и широко обсуждаются в литературе (Лушников Е. Ф., Загребин В. М., 1987; Ярилин А. А., 1996; Новожилова с соавт., 1996; Скулачев В. П., 1996; Уманский С. Р. 1996; Lockshin R. А., Zakeri Z., 1991; Arends M. J., Wyllie A. H., 1991; Fesus L., 1993; Harris С. С, 1996; Hardwick J. V., 1997; Golstein P., 1997).

Интенсивность повреждающего стимула является решающим аргументом в развитии токсического ответа клетки по линии некроза или апоптоза, что находит многочисленные экспериментальные подтверждения (Скулачев В. П., 2001; Berger N. А., 1985; Buttke Т. M., Dypbukt J. M., 1994).

Для активизации процессов адаптации к различным альтерирующим

факторам и снижения уровня эндотоксикоза в организме в последнее время интенсивно ведутся исследования в области фотобиологии живой клетки и разработке методов активной хирургической детоксикации, среди которых ведущее место занимает обменный плазмаферез (Рыжко В. В. с соавт., 1995; Пиксин И. Н. с соавт., 1996; Саматолкин А. К., 1996; Ишина Т. И. с соавт., 2001). Одним из направлений в области лазеротерапии стало изучение влияния лазерного излучения с длиной волны 632,8 нм на иммунокомпетентные клетки, в частности на лимфоциты периферической крови человека (Федосеева Г. Е. с соавт. 1987; Свиридова С. П. с соавт., 1989; Маянский Д. Н., 1991; Козлов В. И. с соавт., 1992, 1993; Пиксин И. Н. с соавт., 1994; Киселева P.E., Кузьмичева Л.В., 1992 - 2004). В нашей работе рассматривается спектр различных доз, действующих на лимфоциты и их эффекты в пострадиационный период, с целью выявления механизмов адаптации и оптимальной дозы как лечебного фактора.

Цель исследования - изучить основные морфофункциональные особенности краткосрочной адаптации лимфоцитов под влиянием экзо- и эндогенной интоксикации, вызванной бронхолегочной патологией.

Задачи исследования:

1. Выявить общебиологические закономерности реализации стресс-реакции на клеточном уровне.

2. Дать морфофункциональную оценку процессам краткосрочной адаптации и выявить роль стрессорных факторов (эндотоксинов мембранотропного действия) на уровне популяций и субпопуляций клеточного звена иммунитета.

3. Исследовать роль биогенных аминов в срыве процессов адаптации. Раскрыть роль апоптоза и некроза как результата срыва процессов адаптации.

4. Дать общую морфофункциональную оценку повышению адаптационных возможностей лимфоцитов под влиянием НЭГНЛ и плазмафереза.

Научная новизна исследования. Предложена схема развития стресс-реакции на клеточном уровне на основе комплексного подхода в оценке краткосрочной адаптации лимфоцитов, базирующаяся на общебиологических закономерностях перестройки клеточных мембран, связанных с увеличением их текучести и проницаемости, энергизованности митохондрий, изменением в гетерогенности клеточного хроматина.

Впервые дана морфофункциональная оценка начала стрессорной реакции, сопровождающейся в первую фазу процессами активации мембранного аппарата лимфоцитов, изменением пула фосфолипидов и отношением НЖК/ННЖК, энергизованностью митохондрий, повышением уровня эухроматина в ядрах. Затем наступает спад биоресурсов клетки, и если она способна адаптироваться (вторая фаза), то происходит развитие компенсаторно-приспособительных реакций, приводящих к восстановлению нормальных процессов; если нет, то клетка переходит в третью фазу, завершающуюся апоптозом или некрозом, в зависимости от силы альтерирующего фактора.

Показана роль стрессорных факторов (эндогенных токсинов, образующихся в период обострения бронхолегочных заболеваний) в первую фазу - активации. Результаты биохимических и гистохимических исследований свидетельствуют, что при действии на клетки раздражителей после некоторого периода подъема метаболической активности, продолжительность которой зависит от типа Т-лимфоцитов (Тх, Тс, Тк) или B-клеток, наступает вторая фаза - адаптации, или третья - фаза истощения, характеризующаяся развитием апоптоза и некроза. Показана роль антиоксидантного стресса в этом процессе. Избыток АФК инициирует цепную реакцию ПОЛ, ведущую к повреждению клеточных мембран, уменьшению их текучести, повышению проницаемости, снижению энергизованности митохондрий.

Изучена корреляционная зависимость между биогенными аминами и отдельными фазами краткосрочной адаптации, апоптозом и некрозом, в зависимости от тяжести заболевания (бронхит, пневмония, бронхиальная астма).

Дана морфофункциональная оценка общебиологических закономерностей повышения адаптационных возможностей, развивающихся в лимфоцитах после воздействия НЭГНЛ или плазмафереза. Выявлены механизмы влияния на стрессовую реакцию в плане ее ослабления за счет активации лимфоцитов НЭГНЛ и удаления эндотоксинов в результате использования плазмафереза. Использование различных доз НЭГНЛ отчетливо документируют морфологическую картину активации, выражающуюся повышением аффинитета популяций и субпопуляций лимфоцитов; увеличением микровыростов на плазматической мембране; повышением люминесценции ДСМ, возгорании «желто-зеленой» люминесценции мембран лимфоцитов и плазматической мембраны; увеличением флуоресценции акридинового оранжевого, свидетельствующей об интенсификации биосинтетических процессов в лимфоцитах.

Практическая новизна исследования. Результаты исследований позволили систематизировать, углубить и расширить сведения о морфологических, ультраструктурных, гистохимических,

иммунофлуоресцентных и биохимических характеристиках лимфоцитов. Установлены популяционные и субпопуляционные морфофункциональные особенности лимфоцитов. Выявлены функциональные и морфологические особенности этапов краткосрочной адаптации, связанные с изменениями, происходящими на уровне плазматической мембраны, ее текучести и проницаемости, опосредованной через изменение фосфолипидного, жирно-кислотного и холестеринового обмена, коррелирующего с показателями изменения аффинитета, спектров флуоресценции пирена; на уровне митохондрий - документированных электронно-микроскопическими картинами, изменением флуоресценции ДСМ и активности СДГ; на уровне ядра - изменение степени гетерогенности хроматина, интенсивности флуоресценции, свидетельствующее об усилении биосинтетических процессов; биогенных аминов.

Теоретическая значимость исследования. Результаты диссертационного исследования расширяют представления о краткосрочной адаптации лимфоцитов. Выявленные изменения первой фазы - активации, второй - адаптации и третьей фазы - истощения, которые вносят новое понимание в причины перехода из одной фазы в другую при развитии стресс-реакций. На основе этого обсуждаются возможности оказания влияния на стрессовую реакцию в смысле ее ослабления за счет повышения активности лимфоцитов под влиянием НЭГНЛ и плазмафереза в фазу их адаптации к стрессорным факторам.

Для практической медицины и фотобиологии могут быть важны полученные результаты о том, как эндотоксины влияют на лимфоциты, как осуществляется реализация действия биогенных аминов в процессах срыва адаптации и усиления апоптоза и некроза. Все это целесообразно учитывать в практической медицине при одновременном использовании препаратов, влияющих на медиаторный обмен и свободнорадикальное окисление липидов.

Полученные в диссертации данные используются в учебном процессе и отражены в двух монографиях.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Выявлены закономерности молекулярной и структурной организации иммунокомпетентных клеток. Определена степень аффинитета отдельных популяций и субпопуляций лимфоцитов на основе фосфолипидного состава их мембран и рецепторных детерминант, расположенных на плазматической мембране. В ядре выявлена степень гетерогенности хроматина.

2. Установлены закономерности активации лимфоцитов, происходящие в результате воздействия различных доз НЭГНЛ, реализующиеся через мембранный аппарат повышением аффинитета; энергизованность митохондрий и ядерных структур, связанной с возгоранием желтой люминесценции; перераспределение фосфолипидов и жирных кислот мембран в сторону увеличения их текучести; диспергирование хроматина и повышение биосинтетических процессов, свидетельствующих об интенсификации синтеза в клетках, зависящих от дозы облучения.

3. В модельных опытах (использованы лимфоциты крови больных БЛЗ: хроническим бронхитом, острой пневмонией, обострение ИАБА и АБА) выявлено влияние действия как экзогенных, так и эндогенных токсинов мембранотропного действия, характеризующихся накоплением Р-белков, МСМ, ЦИК, ПОЛ, повышением ИТ, характеризующимся снижением детоксикационных способностей альбумина. Показана роль эндотоксинов, приобретающих самостоятельное значение в развитии деструктивных процессов, сопровождающихся снижением аффинитета лимфоцитов, изменением текучести мембран (индекс отношения Х/ФЛ сдвинут в сторону повышения содержания холестерина), снижением энергизованности митохондрий и биосинтетических процессов. Выяснено, что до 20 % лимфоцитов погибает под влиянием эндо- и экзогенных токсинов.

4. Установлены некоторые особенности влияния биогенных аминов в процессе срыва краткосрочной адаптации. При хроническом бронхите и пневмонии ведущую роль в этом процессе играют адреналин и норадреналин, при бронхиальной астме - гистамин и серотонин.

5. Установлена роль апоптоза и некроза в срыве краткосрочной адаптации.

6. Выявлено, что на активацию процессов адаптации к воздействию НЭГНЛ или обменному плазмаферезу исключительное влияние имеет правильное дозирование фактора, к которому адаптируются клетки, так как адаптация имеет свою «цену», связанную с чрезмерной активацией синтеза нуклеиновых кислот и белков, составляющих основу адаптации, но вместе с тем означает и значительную трату структурных ресурсов клеток.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены и обсуждены на Всероссийской конференции «Гигиена, ветсанитария и экология животноводства» (Чебоксары, 1994); 6-м Симпозиуме по биохимии липидов (Санкт-Петербург, 1994); Первой Всероссийской научно-технической конференции с международным участием (Саранск, 1994); Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы комбустиологии, реаниматологии и экстремальной медицины» (Саранск, 1996); Научно-практической конференции «Региональные проблемы экологической генетики и пути их решения» (Саранск, 1996); 3-м конгрессе Международной' ассоциации' морфологов (Тверь, 1996); Международной конференции «Новые направления лазерной медицины» (Москва, 1996); Второй Всероссийской научно-технической конференции

«Светоизлучающие системы. Эффективность и применение» (Саранск, 1997); 4-м Съезде Российских морфологов с международным участием (Москва,

1999); Международном конгрессе «Лазер и здоровье» (Москва, 1999); Всероссийской научной конференции «Экологические проблемы и пути их решения в зоне среднего'Поволжья» (Саранск, 1999); 4-м Международном конгрессе по иммунореабилитации и реабилитации в медицине (Израиль,

2000); 5-м конгрессе Международной ассоциации морфологов (Москва, 2000); 3-й Международной научно-практической конференции «Экология и жизнь» (Пенза, 2000); 6-й конференции молодых ученых «Технические и естественные науки. Медицина» (Саранск, 2001); Европейском конгрессе по астме (Москва, 2001); Всероссийской научно-практической конференции «Лабораторное дело: организация и методы исследований» (Пенза, 2001); Международной конференции «Лазерные и информационные технологии в медицине XXI века» (Санкт-Петербург, 2001); Международной научно-практической конференции «Окружающая природная среда и медицинская экология» (Пенза, 2001); Международной конференции «Экология и здоровье в XXI веке» (Ульяновск, 2001); 7-м Международном конгрессе по иммунореабилитации «Аллергия, иммунология и глобальная сеть: взгляд в новое тысячелетие» (Нью-Йорк, США, 2001); 8-м Международном конгрессе по иммунореабилитации «Аллергия, иммунология и глобальная сеть» (Канны, Франция, 2002); 6-м Конгрессе Международной ассоциации

морфологов (2002); 3-м съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002); 1-ой Всероссийской конференции по иммунотерапии (Сочи, 2003); 4-м Всемирном конгрессе по астме, 9-м Международном конгрессе по клинической патологии (Бангкок, Тайланд, 2004).

Публикации по теме диссертации. По материалам диссертации опубликовано 57 научных работ, 2 монографии - «Биохимические аспекты эндотоксикоза» (Саранск: Б. и., 2002) и «Адаптационные возможности иммунокомпетентных клеток» (Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2004), получено 1 удостоверение на рационализаторское предложение по методике исследования (№ 792 «Способ определения регуляторных белков плазмы (сыворотки) крови»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 278 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, главы собственных исследований с подглавами, главы по их обсуждению, заключения, выводов и библиографического списка. Работа иллюстрирована 42 таблицами и 102 рисунками, которые включают микрофотографии, электронные микрофотографии, графики, схемы. Библиографический список содержит 363 источника, из них 250 работ отечественных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Материал исследования. Объектом исследования служила кровь доноров, предоставленная Республиканской станцией переливания крови, и больных бронхолегочными заболеваниями (БЛЗ) пульмонологического отделения и лаборатории гравитационной хирургии Городской клинической больницы № 4 г. Саранска. Кровь у больных отбиралась стерильно натощак из локтевой вены: 1) в фазу обострения; 2) в фазу ремиссии (при выписке); 3) до и после проведения трех сеансов плазмафереза.

Всего обследовано проб крови от 430 доноров в возрасте 18-40 лет и больных бронхолегочными заболеваниями (табл. 1).

Лимфоциты выделяли (A. Boyum, 1968) из гепаринизированной (20 ВД/мл) крови центрифугированием на градиенте полиглкжин - урографина (Р =1,113). Клетки подсчитывали в камере Горяева и доводили до концентрации 2 х 106 кл/мл. Жизнеспособность клеток составляла не менее 98%.

Выделение митохондриальной фракции лимфоцитов проводили методом дифференциального центрифугирования на центрифуге ЦЛР-1 с ротором РУ 6 х 10 (Прохорова М. И., 1982).

Облучение in vitro суспензий лимфоцитов проводили низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером ЛГ-78 (клиническая модификация - аппарат «Узор») мощностью 0,02 Вт, дающим монохроматический когерентный красный свет с длиной волны 632,8 нм.

Дозы облучения 1,2 Дж/см2, 6 Дж/см2, 18 Дж/см2, 24 Дж/см2. Период последействия лазерного облучения суспензий лимфоцитов составил 30, 60, 120 и 180 мин.

Таблица 1

Группа Количество Стадия Стадия

обследуемых обследуемых обострения ремиссии

Доноры 430 . ■

Больные хроническим 80 40 40

обструктивным бронхитом

Больные острой пневмонией 60 30 30

Больные бронхиальной астмой:

инфекционно-аллергической 30 15 15

атопической 40 20 20

смешанного генеза 20 10 10

Исследование крови больных 65

после сеансов плазмафереза

Плазмаферез проводили в отделении гравитационной хирургии Городской клинической больницы № 4 г. Саранска по методике, предложенной В. М. Городецким (1992).

Методы исследования. При помощи световой микроскопии определяли жизнеспособность лимфоцитов с трипановым синим; нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) выявляли по Браше (окрашивали метиловым зеленым и пиронином), по Берталанффи и Биксу (с применением акридинового оранжевого), активность кислой неспецифической эстеразы выявляли по Берстону (с применением фосфата нафтола AS-B1). Анализ гистохимических реакций проводили на микроденситометре «М-100», результаты выражали в относительных единицах плотности.

Для электронно-микроскопических исследований материал фиксировали в 3% глутаровом альдегиде на 0,1 М фосфатном буфере в течение 12 часов. После дофиксации в 1% осьмиевой кислоте и обезвоживания в спиртах и ацетоне проводили заливку в эпон-аралдит по общепринятым методикам. Ультратонкие срезы получали на ультрамикротоме «Ultracut» и контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом. Полученный материал просматривали в электронный микроскоп ЭМ-125.

С помощью иммунологических методов определяли: содержание: Ig E методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА); циркулирующие иммунные комплексы (с 3,5% раствором полиэтиленгликоля) - методом Вельбри, Миллеорг (1980); Р-белки -луночным методом по реакции агглютинации с анти-Р-сывороткой (Кульберг, 1989) в нашей модификации (удостоверение на рацпредложение № 792, выданное МГУ им. Н. П. Огарева от 17.04.95).

Иммунофлуоресцентным методом определяли популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов с моноклональными антителами, меченными ФИТЦ (Институт иммунологии АМН РФ).

При помощи флуоресцентных методов исследования устанавливали: трансмембранный потенциал по степени флуоресценции 4-(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиний n-толуолсульфонат (ДСМ); митохондриальную активность лимфоцитов при помощи потенциалчувствительного зонда-катиона ДСМ (Морозова Г. И. с соавт., 1997); микровязкость плазматических мембран по коэффициенту эксимеризации гидрофобного зонда пирена (Добрецов Г. Е. с соавт., 1989); содержание серотонина и гистамина в одной пробе по Прошиной Л. Я. (1981).

Количественно флуоресценцию красителей регистрировали на автоматическом спектрофлуориметре «Signe-4», анализ спектров и обработка результатов осуществлялись с помощью ЭВМ, сблокированной с прибором.

Хемилюминесцентным методом определяли свободнорадикальное окисления липидов и антиоксидантную активность (Владимиров Ю. А., Шерстнев М. Г., 1989).

При помощи биохимических методов осуществляли: экстракцию общих липидов (Folch et al., 1957); количественное определение холестерина с реактивом Либермана - Бурхарда (Либерман, 1885, Бурхардт, 1890); тонкослойную хроматографию фосфолипидов (Кейтс М., 1975, Хиггинс Дж. М., 1990); определение активности сукцинатдегидрогеназы (КФ 1.3.99.1) митохондрий (Пастушенков В. Л., Митин Ю. А., 1993); определение содержания белка в митохондриях (Эванз У. Г., 1990) с амидовым черным; определение молекул средней массы (Гибриэлян Н. И., Липатова В. И., 1984); определение эффективной и общей концентрации альбумина (Миллер Ю. А., Добрецов Г. Е., 1992); определение кислой (АС?), щелочной фосфатазы (ALP), лактатдегидрогеназы (LDH) по набору фирмы «BOEHRINGER MANNHEIM» (Германия).

Результаты исследований обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (t) Вычисляли среднее арифметическое выборочной совокупности (M), ошибку среднего арифметического (m), среднее квадратичное отклонение (а). Достоверность различия устанавливали в каждой серии по отношению к исходному значению (Р). Данные обрабатывали в программе STAT-2 на базе процессора Intel Pentium 133. Коэффициент корреляции Пирсона находили при помощи профессионального пакета для обработки и анализа статистической информации «Statistica 6,0»

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Морфология и молекулярная организация лимфоцитов

Электронно-микроскопические и цитохимические исследования лимфоцитов, выделенных из крови доноров, показали, что большая часть их имела небольшие размеры, округлую форму тела с изрезанными или ровными краями. Ядро занимает значительную часть клетки и отличается высокой степенью конденсации ядерного хроматина, причем гетерохроматин располагается обычно по периферии ядра, около нуклеолеммы. В цитоплазме определяется небольшое число органелл: мелкие митохондрии, немногочисленные узкие канальцы эндоплазматической сети, короткие цистерны и маленькие пузырьки пластинчатого комплекса Гольджи. Цитоплазматический матрикс имеет мелкогранулярную структуру и отличается высокой электронной плотностью.

Выявлено две группы лимфоцитов: с интенсивной пиронинофилией и слабой реакцией, с интенсивной зеленой и красной флуоресценцией. Эти данные можно, по-видимому, интерпретировать с помощью работ (Bottomley et al., 1975), проведенных с использованием радиоактивных изотопов -уридина и тимидина, с помощью которых были выделены В- и Т-лимфоциты. B-лимфоциты метятся интенсивнее, чем Т-лимфоциты. Данные, полученные А. В. Труфакиным (1989) при определении относительной плотности в лимфоцитах, также свидетельствуют о том, что плотность ДНК в B-лимфоцитах более высокая, чем в Т-лимфоцитах.

По морфоцитохимическим признакам лимфоидные клетки, исследованные нами, делятся на малые, средние и большие (лимфобласты). Эти результаты согласуются с данными, полученными ранее Ю. А. Уманским, В. Г. Пинчук (1982), Н. А. Юриной (1983).

Ультраструктура клеточной поверхности лимфоцитов в норме может быть гладкой или ворсинчатой. Некоторые авторы (Kunze К. D., 1983) пытались использовать этот морфологический признак в качестве дифференцировки клеток на Т- и B-лимфоциты. Вероятно, он отражает функциональное состояние клеток.

Описанные выше критерии морфологической дифференциации Т- и B-лимфоцитов, несомненно, содержат ценные сведения об особенностях строения этих клеток. Как считают некоторые исследователи, этих данных недостаточно для достоверной идентификации Т- и B-лимфоцитов. Поэтому в связи с особой ролью иммунорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов в иммунном ответе пристальное внимание исследователей в последнее время сосредоточено на характере, функциональных особенностях и физико-химических свойствах их поверхностных маркеров. Результаты этих работ обобщены в ряде обзоров отечественных и зарубежных исследователей (Чередеев А. Н., 1976; Брондз Б. Д., 1987; Адо А. Д., 1993).

Цитофлуориметрическая оценка суммарной флуоресценции клеток,

меченных моноклональными антителами, конъюгированными с ФИТЦ, показала, что флуоресценция в популяциях Т- и В-лимфоцитов, а также в субпопуляциях Т-лимфоцитов (хелперов, киллеров/супрессоров) неодинаковая. Так, флуоресценция В-лимфоцитов интенсивнее, чем в Т-лимфоцитах на24,2%(Р < 0,001).

Интенсивность флуоресценции субпопуляций Т-лимфоцитов также неодинакова: у Т-хелперов она равна 1,25 у. е., Т-киллеров - 1,33 у. е., Т-супресооров - 1,18 у. е. (Р < 0,001). Неодинаковое свечение лимфоцитов, мы полагаем, вызвано такими факторами, как площадь поверхности клеток, различная структурная жесткость и величина отрицательного заряда мембран. Подобные результаты были получены (Григорович Н. А., Алекса Т. Ф., 1984) при изучении особенностей взаимодействия Т- и В-лимфоцитов с мембранными зондами: 1-анилинонафталин-8-сульфонатом (АНС) и 4-(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиний п-толуолсульфонат (ДСМ). '

В чистой взвеси лимфоцитов доноров нами было обнаружено 2,5 % мертвых клеток, определяемых с трипановым синим, живые клетки составили 97,5 %. Средняя интенсивность флуоресценции клеток, способных адоптировать (СБ 95+), составила 0,142 + 0,004у. е.(Р < 0,001)

В лимфоцитах крови доноров отмечалась ярко-желтая флуоресценция зонда-катиона ДСМ в энергизованных митохондриях, часто образующих упорядочные структуры. При этом флуоресценция ядра отсутствовала, что свидетельствует о сохранении барьерных функций ядерной мембраны (Добрецов Г. Е. с соавт., 1989; Морозова Т. И. с соавт., 1997). Активность СДГ митохондрий лимфоцитов доноров составила 57,00 ± 3,50 нмоль/мин на 1 мг белка (Р < 0,05).

Качественный состав фосфолипидов мембран лимфоцитов у здоровых лиц характеризовался наличием следующих фракций: фосфатидилэтаноламин (ФЭА) - 0,261 ± 0,002 у. е.; фосфатидилхолин (ФХ) -0,289 ± 0,004 у. е.; сфингомиелин (СМ) - 0,112 ± 0,004 у. е.; лизофосфатидилхолин (ЛФХ) - 0,076 ± 0,004 у. е.; фосфатидилинозитол (ФИ) - 0,113 ± 0,005 у. е.; фосфатидилсерин (ФС) - 0,147 ± 0,004 у. е.

Нами был исследован жирно-кислотный состав мембран лимфоцитов у практически здоровых людей. Среди исследованных жирных кислот было выявлено три ненасыщенных: олеиновая (С 18:1) - 0,25 мкг/мл, линолевая (С 18:2) - 0,15 мкг/мл, линоленовая (С 18:3) - 0,2 мкг/мл, и пять насыщенных: лауриновая (С 12:0) - 0,75 мкг/мл, миристиновая (С 14:0) -0,55 мкг/мл, пальмитиновая (С 16:0) - 0,7 мкг/мл, стеариновая (С 18:0) -1,0 мкг/мл, бегеновая (С 22:0) - 1,1 мкг/мл.

Микровязкость липидной фазы мембран, определяемая по коэффициенту эксимеризации пирена у Т- и В-лимфоцитов, - одинаковая -1,03 ± 0,02 у. е. Трансмембранный потенциал изучаемых лимфоцитов составил 197,25 мВт, что согласуется с литературными данными (Баглаев Т. М, 1983).

Интенсивность СРО мембран лимфоцитов, определяемая

хемилюминесцентным методом, составила 2,08 ±0,12 имп./с, АОА равна 4,91± 0,36 ед./мл. Уровень СРО мембран митохондрий лимфоцитов составил 1,439 ± 0,067 имп./с, АОА - 6,781 ± 0,235 ед./мл.

Активность кислой, щелочной фосфатаз и лактатдегидрогеназы в лимфоцитах доноров составляет 1,68 ± 0,23 у. е., 230,4 ± 3,0 у. е. и 382,6 ± 28,88 у. е.

В лимфоцитах отмечено низкое содержание аминов: гистамина - 0,09 ± 0,007 мкмоль/л, серотонина - 0,05 ± 0,005 мкмоль/л. По данным литературы циркулирующие в крови медиаторы связываются высокоафинно с рецепторами на поверхности иммунокомпетентных клеток, и лишь незначительная их часть поглощается последними (Елисеева, 1998; Котова с соавт., 1992 -1997).

Таким образом, изучение электронно-микроскопического строения, цитохимии нуклеиновых кислот лимфоцитов позволяют идентифицировать Т- и B-клетки. Кроме того, субпопуляции лимфоцитов отличаются по ряду морфологических признаков и флуоресценции маркеров клеточной поверхности. Использование современных методов анализа, таких, как флуоресцентно-цитохимические, в сочетании с электронно-микроскопическими дает более полную характеристику лимфоцитов.

Адаптационные перестройки лимфоцитов при бронхолегочных заболеваниях

Реакция иммунной системы на действия неблагоприятных факторов как эндогенной, так и экзогенной природы, как правило, многообразна. Этот процесс развивается во времени. Начальные его стадии изучены еще довольно слабо. От состояния клеточного иммунитета во многом зависит выраженность защитных реакций организма. Эндогенная интоксикация, сопровождающая заболевания и осложнения, связана с повышенным распадом биомолекул, клеток и тканей, усилением процесса катаболизма в них, накоплением эндотоксинов мембранодеструктивного действия, что обеспечивает общность биохимических проявлений эндотоксикоза, приводящего к стресс-реакциям, лежащим в основе развития патологического процесса. Это позволяет говорить о наличии неспецифического синдрома эндогенной интоксикации, который является важным фактором патогенеза и часто предопределяет прогноз заболевания (Киселева Р. Е., Альба Н. В. с соавт., 1999).

Современная концепция функционирования клетки основывается на ведущей роли мембранных структур. При различных инфекционных воздушно-капельных и аутоиммунных заболеваниях непосредственной причиной деструкции клеточных мембран являются продукты эндотоксикоза, лежащие в основе стресс-реакции. Стресс, по представлению Г. Селье, - процесс трехфазный. Первая - фаза тревоги, вторая -сопротивления, третья - фаза истощения.

Впервые мы разработали схему развития стресс-реакции на клеточном уровне при БЛЗ под влиянием различных альтерирующих факторов, в которой выделили три фазы.

В первую фазу (активации) происходит накопление продуктов эндотоксикоза Р-белков, МСМ, ПОЛ, ЦИК, которые воздействуют на лимфоциты как стрессоры в острую фазу бронхолегочных заболеваний (рис. 1) Сущность стресс-ответа состоит в том, чтобы увеличить функциональную активность лимфоцитов, необходимую для их выживания после воздействия микроорганизмов Это достигается повышением биосинтетических процессов, сопровождающихся избытком питательных веществ (главным образом, глюкозы и жирных кислот) и стимуляцией производства большого количества энергии (Тодоров И. Н , 2003).

Рис.1. Динамика показателей эндотоксикоза больных бронхоле-гочными заболеваниями в стадии обострения

Под влиянием эндотоксикоза происходит снижение аффинитета лимфоцитов, морфологически проявляющееся уменьшением интенсивности свечения клеток иммунной системы. Так, у больных хроническим бронхитом интенсивность свечения лимфоцитов снизилась: СБЗ - на 63,8 %, СБ20 -на 68,6, СБ26 - на 63,0, СБ25 - на 72,2 % (Р < 0,01). У больных острой пневмонией также наблюдается снижение интенсивности свечения лимфоцитов- СБЗ - на 71,8 %, СБ20 - на 71,2, СБ26 - на 68,0, СБ25 - на 78,5 % (Р < 0,01) по отношению с контрольной группе.

Результаты исследований показали, что при БЛЗ в лимфоцитарном пуле происходит усиление процессов СРО, что дестабилизирует как плазматические, так и митохондриальные мембраны - уровень СРО возрастает, антиоксидантная защита снижается (Р < 0,001). Дисбаланс в системе ПОЛ - антиоксидант усуглубляется с ростом выраженности функциональных нарушений аппарата дыхания (рис. 2,3).

При БЛЗ происходят изменения фосфолипидного состава мембран лимфоцитов. Так, в 1-ю фазу при развитии патологического процесса

наблюдаются повышения ФЭА с 17,0 до 27,0 % (Р < 0,01). Объясняется это тем, что в ФЭА содержится большое количество ненасыщенных жирных кислот, в первую очередь подвергающихся процессам перекисного окисления липидов, характерного для всех форм БЛЗ.

Трудноокисляемые фракции ФЛ (ФХ и СМ) значительно уменьшаются при остром бронхите. Данную динамику можно расценивать как адаптационно-компенсаторную, направленную на сохранение уровня легкоокисляемых липидов.

Рис. 2. Изменение показателей Рис. 3. Изменение показателей свободнорадикального окисления липидов при антиоксидантной активности при бронхолегочных заболеваниях в стадии бронхолегочных заболеваниях в стадии обострения__обострения_

У больных острой пневмонией и бронхиальной астмой в остром периоде значительно повышается содержание легкоокисляемых полиненасыщенных фосфолипидов, к которым относятся фосфатидилсерин и фосфатидилэтаноламин, накопление которых изменяет физико-химический статус мембраны. При хроническом бронхите на фоне увеличения ФЭА снижается содержание ФС на 21,1 % (Р < 0,01).

ФТИ, являясь вторичным посредником, принимает участие в процессах клеточного управления. Полиненасыщенность жирно-кислотных радикалов и быстрота метаболических превращений фосфаинозитидов лежат в основе регуляции ими микровязкости, фазового состояния биомембран, липид-липидных, липид-белковых и белок-белковых взаимодействий (Трофимов В. А. с соавт., 2000). Это наиболее характерно для хронического бронхита, при котором ФТИ увеличивается на 77,8 % (Р < 0,01). Отмечается повышение фракций лизофосфатидилхолина на фоне уменьшения фосфатидилхолина.

В период обострения при хроническом бронхите снижался уровень холестерина на 14,2 % (Р < 0,01) по сравнению с контролем, при острой пневмонии он не изменялся. При обострении бронхиальной астмы концентрация холестерина уменьшалась на 21,0 % (Р < 0,01) по сравнению с контролем. Значительное снижение холестерина можно интерпретировать повышением текучести мембран лимфоцитов при обострении бронхиальной

астмы, что отражается на развитии иммунного ответа лимфоцитов. Доказано, что при соотношении холестерин/фосфолипиды меньше 1 возможно разделение фаз в липидном бислое и образование кластеров фосфолипидхолестерина (Владимиров Ю. А., 1989).

Энергизация лимфоцитов крови больных БЛЗ в 1-ю фазу стресс-реакции характеризуется возгоранием «красной» флуоресценции в ядре, связанной с ДСМ, и размытой «желто-зеленой» флуоресценцией митохондрий в цитоплазме. Это говорит о снижении трансмембранных потенциалов митохондриальных мембран и нарушении барьерных свойств ядерной мембраны.

На ультраструктурном уровне особый интерес представляет повышенная чувствительность к действию патологических факторов митохондрий. Реакция митохондрий - один из отличительных признаков изменений клеток не только при воспалительных процессах, но и при различных формах их повреждения, так как эти органеллы играют важную роль в окислительном и энергетическом обмене клетки: большинство ферментов окислительного обмена локализовано в кристах митохондрий и в матриксе. Наблюдавшиеся нами нарушения были полиморфными. Так, в одних митохондриях отмечалось их набухание, в других - гомогенизация матрикса, в третьих - вакуолизированность и заполнение мелкогранулярным содержимым или миелиноподобными структурами. Отмечалось также набухание митохондрий с разрушением крист и внутренних мембран (рис. 4), в результате чего органелла превращалась в вакуоль, по величине крупнее первичных вакуолей. Остатки крист или внутренней мембраны давали возможность уточнить их митохондриальное происхождение.

Рис. 4. Фрагмент лимфоцита: видно набухание митохондрий с разрушением крист и внутренних мембран (ув.25000)

Изменение ультраструктуры митохондрий имеет ступенчатый характер, о чем говорят как морфологические данные, так и биохимические показатели активности окислительных ферментов. Интересным является то, что набухшие, лишенные крист митохондрии сохраняют активность (до 50 %) окислительных ферментов, в частности СДГ. Активность СДГ митохондрий больных БЛЗ падает с 36,5 до 40,2 % (Р < 0,01), что свидетельствуют о снижении в клетке аэробного и усиление анаэробного окисления. Последнее

является, по-видимому, адаптивной реакцией периферических лимфоцитов к общей кислородной недостаточности, развивающейся в процессе развития бронхолегочных заболеваний. На определенной стадии набухание митохондрий и даже их частичное разрушение могут быть связаны с временным повышением метаболической активности. Поэтому выявляемое набухание может служить показателем, с одной стороны, компенсаторных реакций в лимфоцитах при развитии воспалительных процессов, а с другой -этапа деструкции митохондрий и полного угнетения их функций.

Распад крист и набухание митохондрий при пневмонии сочетаются с повышением осмиофилии цитоплазмы лимфоцитов. Наряду с частично лишенными крист митохондриями отмечались многочисленные мелкие вакуоли, скопление лизосом и другие отклонения.

Все сказанное свидетельствует о том, что антиоксидантная система защиты митохондрий не справляется с огромным количеством накопившихся липоперекисей, стимулирующих деструктивные процессы на мембранах митохондрий и как следствие падение межмембранных потенциалов, разобщение окислительного фосфорилирования.

Мембранодесинсибилизирующее действие СРО не позволяет развиваться компенсаторно-адаптационным механизмам защиты мембран, что ведет к изменению их микровязкости, срыву адаптации, для которого характерны деструктивные изменения клеток, создавая условия для элиминации клетки.

Полученные данные свидетельствуют о том, что на внутриклеточном уровне у части лимфоцитов при развитии БЛЗ в первую очередь происходят изменения в строении митохондриальных мембран, которые и определяют степень «поломки» энергозависимых метаболических процессов лимфоцитов. Одновременно наблюдаются изменения в строении и редукции гранулярной эндоплазматической сети, которые ведут не только к дезинтеграции синтеза белков, но и к нарушению единой внутриклеточной транспортной системы.

Восстановление лимфоцитов после обострения бронхолегочных заболеваний

В связи с тем, что все вышеперечисленные эндотоксины накапливаются в организме больного в первую фазу (острую) бронхолегочных заболеваний, клетки отвечают повышением устойчивости к неблагоприятным факторам среды, т. е. адаптацией. Следует рассматривать неспецифический ответ клетки на повреждающее воздействие как адаптивную, т. е. защитную, реакцию. Нам представляется более подходящим заимствованное у Г. Селье словосочетание «неспецифический адаптационный синдром клеточной системы».

На основе биохимических, гистохимических, электронно-микроскопических, физико-химических исследований показано действие альтерирующих факторов при БЛЗ, приводящих к изменению мембранного аппарата иммунокомпетентных клеток, дефициту богатых энергией

фосфорных соединений, увеличению потенциала фосфорилирования. Этот первичный сдвиг, возможно, становится сигналом, который за счет молекулярных механизмов активирует генетический аппарат клеток, т. е. вызывает активацию синтеза нуклеиновых кислот и белков. Активация не является глобальной, а протекает по линии первоочередного увеличения биогенеза митохондрий. В результате мощность системы последних увеличивается, выработка АТФ на единицу массы митохондрий возрастает и, соответственно, дефицит АТФ устраняется. Таким образом, структурно обеспеченное увеличение мощности митохондрий становится основой устойчивой адаптации.

Для второй фазы (адаптации) характерны адаптивные процессы, направленные в первую очередь на сохранение целостности клеточных мембран. При длительном течении заболевания пролонгированный свободнорадикальный стресс истощает механизмы обезвреживания продуктов переокисления и извращает репарацию фосфолипидного бислоя мембран.

На этом этапе у больных хроническим бронхитом уровень СРО мембран лимфоцитов снижался на 51,0 % (Р < 0,01), острой пневмонией - на 42,0 (Р < 0,01) и бронхиальной астмой смешанного генеза - на 48,0 % (Р 2 0,01) по сравнению с обострением. АОА лимфоцитов увеличилась у больных хроническим бронхитом в 2 раза (Р < 0,01), острой пневмоний - на 45,0 % (Р < 0,01), бронхиальной астмой - на 19,0 % (Р < 0,01) по сравнению с периодом обострения.

У больных БЛЗ отмечено некоторое снижение показателей СРО и увеличение АОА митохондрий лимфоцитов. Уровень СРО митохондрий больных хроническим бронхитом снизился по отношению к обострению на 24,2 % (Р < 0,01). Активность антиоксидантной системы митохондрий увеличилась в стадии ремиссии на 20,9 % (Р < 0,01). У пациентов с острой пневмонией уровень СРО снижался на 13,5 % (Р < 0,01), активность антиоксидантной системы повышалась на 19,5 % (Р 0,01) по отношению к стадии обострения и по-прежнему не достигали контрольного уровня.

У больных хроническим бронхитом наблюдались изменения содержания фосфолипидов мембран клеток. Снижались, соответственно, уровни ФЭА и ФТИна 21,4% и 42,8 %(Р < 0,01). Возрастало содержание ФХ- на 14,8 %, СМ - на 43,0, ЛФХ - на 40,0, ФС на 17,0 % (Р < 0,01).

При острой пневмонии происходят количественные изменения фракций фосфолипидов: снижаются ФТИ на 12,7 %, ФС - на 7,7 % (Р < 0,01). Содержание ФХ, ФЭА, СМ и ЛФХ, соответственно, повышается на 8,0 %, 17,0,50,0 и 27,3% (Р <0,01).

У больных бронхиальной астмой в этот период содержание ФС снижалось на 13,0 %, ЛФХ - на 12,0 % (Р 0,01), не достигая контрольных значений. Повышалось содержание фракций фосфолипидов: ФХ - на 10,7 %, СМ - 12,0, ФТИ - 11,8 % (Р 0,01) по сравнению с периодом обострения.

Уровень холестерина при хроническом бронхите не изменялся, а при острой пневмонии он увеличивался на 14,0 % (Р < 0,01). При бронхиальной астме он повышался на 18,0 % (Р < 0,01).

Накопление полиненасыщенных легкоокисляемых фосфолипидов (ФЭА и ФТИ) ингибирует действие кислорода (свободнорадикальное окисление) и представляет собой важный механизм защиты мембранных структур от инактивации, вызываемой свободными радикалами.

Содержание ФЭА остается выше контрольных значений при всех формах БЛЗ. Накопление ФЭА, по-видимому, можно рассматривать в качестве приспособительно-компенсаторной реакции, направленной на поддержание структурной целостности и функциональной активности биомембран. Его присутствие способно повлиять на жидкостное состояние липидных бислоев и оптимизировать структурно-функциональное состояние биомембран при дефиците других форм липидов.

Таким образом, изменения пулов фосфолипидов в процессе развития бронхолегочных заболеваний, связанные со стресс-реакцией, полностью отражают основные биологические закономерности, ведут себя по разному в разные периоды стресс-реакции и зависят от этиологии заболевания.

Сукцинатдегидрогеназная активность митохондрий лимфоцитов увеличилась у больных хроническим бронхитом незначительно и составила в среднем 38,55 ± 3,49 нмоль/мин на 1 мг белка (Р < 0,01), у больных острой пневмонией - на 30 % (Р < 0,01) по отношению к стадии обострения. Энергетический выход анаэробного синтеза сукцината способен затормозить падение соотношения в клетке АТФ/АДФ и величины трансмембранного электрохимического потенциала ионов водорода. Все это в значительной степени отражается на репаративных процессах клетки в сторону их увеличения. Клетка постепенно восстанавливает свой энергетический баланс и общий гомеостаз (Маевский Е. И. с соавт., 2000; Саакян И. Р., Саакян А. Г., 1999).

При продолжительном воздействии продуктов эндотоксикоза на лимфоциты у части клеток наряду с компенсаторной реакцией формируются явления дистрофического характера.

В процессе адаптации на различные альтерирующие факторы повышается аффинитет лимфоцитов. У больных хроническим бронхитом отмечено повышение интенсивности свечения лимфоцитов: CD3 - в 2,0 раза; CD20 - в 2,5; CD26 - в 2,2; CD25 - в 2,6 раза (Р < 0,01) по отношению к стадии обострения. При острой пневмонии увеличивается интенсивность свечения клеток: CD3 - в 2,9 раза; CD20 - в 2,8; CD26 - в 2,7; CD25 - в 3,6 раза (Р < 0,01). При атопической бронхиальной астме интенсивность свечения лимфоцитов также увеличивается: CD20 - на 10,0 %; CD3 - на 12,0; CD8 - на 19,0 % (Р < 0,01). Интенсивность свечения CD4 и CD4/CD8 снижается на 14 и 30 % (Р 0,01). При инфекционно-аллергической бронхиальной астме интенсивность свечения CD20 осталась на прежнем уровне (Р < 0,01) по отношению к стадии обострения. Свечение клеток CD3,

CD4 и CD8 увеличилось на 26 %, 5,7 и 28,5 % соответственно, а интенсивность CD4/CD8 снизилась на 16,4 % (Р < 0,01).

Лимфоциты крови больных БЛЗ во вторую фазу характеризуются увеличением «желтой» флуоресценции митохондрий, при этом еще наблюдается «желто-оранжевая» флуоресценция цитоплазмы и «бледно-розовая» флуоресценция ядерной мембраны. Это говорит о начале репаративных процессов, происходящих в лимфоцитах крови больных после проведенного курса лечения

Интенсивность флуоресценции ДСМ в митохондриях лимфоцитов больных острой пневмонией возрастала на 37,8 %, у больных БА - на 29,3 % по сравнению со стадией обострения. Также изменилось процентное соотношение интенсивности флуоресценции зонда ДСМ в различных пулах клеток (рис. 5).

Стадия обострения (острая пневмония)

Базовая терапия (острая пневмония) Базовая терапия (бр астма)

Рис.5. Интенсивность флуоресценции зонда ДСМ лимфоцитов

После базовой терапии количество низкоэнергизованных клеток у больных острой пневмонией уменьшилось в 2,3 раза, у пациентов бронхиальной астмой - в 3,0 раза (пул от 0 до 60 у. е.). Пул от 20 до 40 у. е. больных ХБ уменьшился в 1,5 раза, БА - в 3,0 раза. Это свидетельствует о том, что применяемая терапия оказывала противовоспалительное, мембраностабилизирующее действие.

По сравнению с первой фазой у больных БЛЗ количество высокоэнергизованных клеток увеличивалось, т. е. клеток с высокой митохондриальной активностью. Следовательно, процессы, нарушенные в

первую фазу, восстанавливались: уменьшались процессы СРО, возобновлялась исходная концентрация Са2+ в клетке, повышался трансмембранный потенциал. Следствием этого служит замедление в лимфоцитах процесса апоптоза, на что указывает снижение количества способных к апоптозу (СБ95+) и низкоэнергизированных клеток.

Структурные и ультраструктурные изменения клеточных органоидов в ответ на действие альтерирующих факторов соответствуют характеру и степени определенных функциональных и биохимических клеточных изменений. Если эти изменения не привели к грубым поломкам ультраструктур, то во 2-й фазе - адаптации, на фоне снижения общей концентрации биогенных аминов происходит частичное постепенное восстановление физиологического аппарата клетки (Машанский В. Ф., Рабинович И.М., 1987).

Срыв процессов адаптации.

Роль биогенных аминов в срыве процессов адаптации

В формировании третьей фазы (истощения) существенную роль играют биогенные амины. Как показали наши исследования, их участие в регуляции трофических процессов, протекающих в лимфоцитах, испытывающих действие чрезвычайных, а для ослабленной иммунной системы «обычных» раздражителей приводит к срыву в них адаптационных процессов.

При определении уровня эндогенного гистамина в лимфоцитах было установлено его повышение в период обострения АБА в 3,5 раза (Р < 0,01) и ИАБА - в 3,7 раза (Р < 0,01) по сравнению с контрольной группой. Наблюдается прямая корреляционная зависимость между поглощением гистамина лимфоцитами и его концентрацией в крови (АБА - г= 0,85, Р < 0,01; ИАБА - г= 0,82, Р < 0,01) и плазме (АБА - г= 0,94, Р < 0,01; ИАБА

- г= 0,76, Р < 0,01), что подтверждается данными литературы (Котова С. А. с соавт., 1995, 1997; Киселева Р. Е., Альба Н. В. с соавт., 1997; Кузьмичева Л.

B. с соавт., 2002).

Отмеченное явление можно объяснить десинтезацией рецепторов, развивающееся под действием высоких концентраций эндогенного гистамина при обострении заболевания. В механизме действия гистамина на иммунокомпетентные клетки главная роль отводится циклическим нуклеотидам. В физиологических условиях гистамин, взаимодействуя с Н2-рецепторами клеток, приводит к активации связанной с мембраной аденилатциклазы, которая катализирует превращение АТФ в цАМФ (цАМФ

- внутриклеточный посредник действия многих гормонов). Увеличение поглощения гистамина клетками у больных БА является одной из причин высокой активности фосфодиэстеразы цАМФ при данной патологии (Котова

C. А. с соавт., 1992), это приводит к снижению ответа клетки на воздействие медиаторов через Н2-рецепторы, т. е. к снижению процессов гликолиза, липолиза и иммуносупрессии, снижению энергизованности митохондрий и развитию апоптоза.

Концентрация серотонина увеличивалась при АБА на 40,0 % (Р < 0,01), при ИАБА - на 30,0 % (Р < 0,05). Индекс гистамин/серотонин (Г/С) при АБА и ИАБА составил 4,5 и 5,2 соответственно. По значительному сдвигу в соотношении индекса Г/С в лимфоцитах в пользу гистамина можно судить о том, что эффекты, вызванные этим медиатором на клетку, будут преобладающими. Влияние серотонина на иммунокомпетентные клетки опосредовано повышением уровня цАМФ ^-рецепторов) и обмена Са2+ (82-рецепторов). Низкие концентрации серотонина или его воздействие в течение короткого времени активируют рецепторы, сопряженные с фосфатидилинозитольным путем передачи сигнала и кальциевым обменом, которые опосредуют активирующие эффекты серотонина. Действуя на рецепторы, сопряженные с аденилатциклазной системой, при продолжительном воздействии амина и высокой его концентрации вызывают эффекты противоположного направления (Токманов А. А., Кыхова М. П., Кошкина О. В., 1991).

Снижение концентрации гистамина в лимфоцитах во 2-ю фазу -адаптации - наблюдалось при АБА и при ИАБА соответственно на 66,0 % (Р £0,001) и 65,0% (Р <0,001) относительно первой фазы.

Биогенные амины при БЛЗ участвуют в поддержании прогрессирующей гипоксии, выражающейся в увеличении внутриклеточного кальция, активации мембранных фосфолипаз, повышении ионной проницаемости мембран, снижении уровня АТФ в клетках и деструкции митохондрий.

Как показали наши исследования, в третьей фазе содержание ЛФХ продолжало увеличиваться при хроническом бронхите и острой пневмонии, что свидетельствует о продолжающихся деструктивных изменениях в мембранах клеток. Это объясняется тем, что в период обострения происходит значительное накопление продуктов эндотоксикоза, способствующее дальнейшему развитию и хронизации данных заболеваний. Особенно четко это просматривается при острой пневмонии, где ЛФХ увеличивался в 1,6 раза (Р < 0,01) на фоне снижения ФТИ по отношению к контрольной группе. При БА в силу ее повышенной хронизации и частоты повторяющихся приступов лимфоидные клетки приобрели устойчивые механизмы адаптации, к которым относятся мембранно-стабилизирующие эффекты.

Для третьей фазы характерно мембранодеструктивное действие СРО, которое не позволяет развиваться компенсаторно-адаптивным механизмам защиты мембран. Антиоксидантная система защиты митохондрий не справляется с большим количеством накопившихся липоперекисей, стимулирующих деструктивные процессы на мембранах митохондрий и, как следствие, падение межмембранных потенциалов и разобщение окислительного фосфорилирования.

Общебиологические закономерности, наблюдаемые в митохондриях, проявляющиеся при развитии бронхолегочных заболеваний, в дальнейшем прогрессируют и вызывают нарушение в них процесса биологического окисления. Это приводит к изменению клеточного дыхания, снижению

интенсивности энергетического обмена, а в конечном счете к дефициту АТФ и гипоксии, нарушениям в других органеллах клетки. В итоге наступает истощение. Истощение энергоресурсов в клетке играет решающую роль. Проведенные морфогистохимические и биохимические исследования указывают, что при действии на клетки раздражителей после некоторого периода резкого подъема метаболической активности, зависящего от типа Т-лимфоцитов (Тх, Тх/с, Тк) или B-лимфоцитов, наступает фаза нормализации, или фаза истощения, закачивающаяся апоптозом или некрозом.

«Красная» флуоресценция ДСМ, электростатически связанного с полимерными молекулами ДНК и РНК в ядрах клеток, очень слабая в энергизованных клетках, где барьерные свойства ядерной мембраны препятствуют концентрированию катионов ДСМ в кариоплазме. В деэнергизованных и мертвых клетках «красная» флуоресценция связанного ДСМ в ядре возрастает.

У больных БЛЗ под влиянием накопившихся эндотоксинов снижается жизнеспособность лимфоцитов вследствие изменения структурно-функциональной организации митохондрий, обусловливающей энергообеспечение клеток. Это сопровождается разрушением крист и наружной митохондриальной мембраны.

Роль апоптоза и некроза в процессах срыва адаптации лимфоцитов

Как показали наши исследования, характерными признаками апоптоза служат конденсация кариоплазмы, уплотнение и сохранение целостности плазматической мембраны и внутриклеточных органелл, агрегация, а затем расщепление хроматина (ДНК). Можно отметить, что у некоторых, по-видимому, необратимо измененных клеток в ядрах определялись участки значительного просветления, соответствующие фокусам распада. Как правило, такие клетки имели и значительные изменения ультраструктуры цитоплазмы, выражающиеся расширением канальцев эндоплазматической сети и перинуклеарного пространства. В периферических отделах клеток нередко определялись маленькие, «пустые» везикулы или вакуолеподобные структуры, которые, возможно, являлись глубокими инвагинациями плазматической мембраны. Пластинчатый комплекс Гольджи нередко выглядел гипертрофированным за счет многочисленных везикул. Подобные изменения характерны для начальных стадий апоптоза.

У больных бронхолегочными заболеваниями в первой фазе снижается интенсивность свечения способных к апоптозу клеток (CD95+) и увеличивается процент мертвых клеток. При хроническом бронхите интенсивность свечения СБ95+-клеток снижается на 58,5 %, количество мертвых лимфоцитов составляет 14,0 % (Р 0,001). При острой пневмонии интенсивность свечения клеток CD95+ уменьшается на 63,0 %, количество мертвых клеток увеличивается до 17,0 % (Р < 0,001).

Во второй фазе у больных хроническим бронхитом увеличивается интенсивность свечения лимфоцитов (СБ95+) на 47,0 %, процент мертвых клеток уменьшается до 8,1 % (Р < 0,001). При острой пневмонии интенсивность свечения лимфоцитов (СБ95+) возрастает в 2,4 раза, мертвые клетки составляют 7,3 % (Р < 0,001) по сравнению со стадией обострения.

При увеличении апоптоза лимфоцитов возрастает число клеток с признаками деструкции в ядре и цитоплазме без явлений синтеза и секреции веществ. Деструкция ядер сопровождалась падением флуоресценции акридинового оранжевого, причем в одних клетках она была минимальная, а в других - вокруг желтых ядер наблюдалась интенсивная розовая окраска.

У всех больных с БЛЗ увеличился пул низкоэнергизованных клеток (от 0 до 60 у. е.). Так, у больных хроническим бронхитом и острой пневмонией он увеличился в 2,6 раза, у страдающих бронхиальной астмой - в 2,2 раза. Пул высокоэнергизованных клеток (от 120 у. е. и выше) снизился у больных хроническим бронхитом - в 2,0 раза, острой пневмонией - в 3,0 раза, бронхиальной астмой - в 1,5 раза.

При продолжительном течении болезни наряду с компенсаторной реакцией в ткани формируются явления дистрофического характера, связанные с прогрессированием гипоксии и нарастанием дефицита энергии, за которыми происходят необратимые изменения, деструкция и гибель клетки - некроз.

Клетки, которые не подвергались апоптозу при бронхолегочных заболеваниях, на ультраструктурном уровне имели как адаптационно-компенсаторные, так и дегенеративные признаки.

Как показали наши исследования, активность кислой фосфатазы лимфоцитов больных хроническим бронхитом увеличилась на 25,0 % (Р 0,05), острой пневмонией - на 41,0 % (Р 0,05), бронхиальной астмой -на 20,0 % (Р 0,05) по отношению к контрольной группе. Повышенная активность кислой фосфатазы, видимо, связана с активацией лизосомальных ферментов. Она направлена на разрушение бактерий и имеет, очевидно, компенсаторный характер из-за подавления аэробных механизмов бактерицидности.

Значительно повышалось число маленьких везикул, содержащих электронно-плотный материал, причем такие пузырьки чаще располагались группами, обычно в крупных «выступающих» частях цитоплазмы. Иногда в цитоплазме определялись небольшие участки с резко просветленным цитоплазматическим матриксом, напоминающие области лизиса и распада ультраструктур. Нередко в таких местах на фоне просветленного цитоплазматического матрикса находились осмиофильные гранулы, по размерам сравнимые с гранулами гликогена.

Деструкция крист митохондрий коррелирует со снижением в них свечения ДСМ, свидетельствующее о процессах деэнергизации. При разных бронхолегочных заболеваниях в зависимости от тяжести течения патологического процесса на препаратах можно наблюдать различную по степени выраженности «желтую» или «красную» флуоресценцию ДСМ.

Все перечисленные изменения структурной организации и функциональной активности лимфоцитов могут быть рассмотрены как результат непосредственного влияния биогенных аминов (гистамина, серотонина) и структурно-функциональной взаимообусловленности иммунной системы.

Пути повышения адаптационных возможностей лимфоцитов.

Активация лимфоцитов низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером

До настоящего времени нет четких представлений о наблюдаемых при эндотоксикозе морфофункциональных изменениях в иммунной системе. Изложенное послужило основанием для проведения гистологических исследований лимфоцитов в норме и при воздействии НЭГНЛ. Проведенные опыты показали, что клеточный иммунитет активно реагирует на применение этих методов.

Интересным направлением в данной области является изучение влияния лазерного излучения с длиной волны 632 нм на иммунокомпетентные клетки, в частности на лимфоциты периферической крови человека (Зубкова С. М., 1989; Ламк К. М., 1990; Борисова А. М., 1992; Козлов В. И. с соавт., 1992 - 1993; Киселева, Кузьмичева, 1982 - 1995).

Для расшифровки механизма влияния лазерного излучения на иммунную систему организма необходимо знать режим работы лазера и особенно его дозу как лечебного фактора, а также учитывать состояние активации лимфоцитов в пострадиационный период.

Лимфоциты до облучения в основном находятся в состоянии покоя, характеризующегося низким уровнем метаболической активности, т. е. минимально допустимой для поддержания жизненных функций клетки скоростью синтеза белка и РНК (Кару Т. И., 1989; Смольянинова Н. К. с соавт., 1990).

Облучение in vitro дозой 1,2 Дж/см2 увеличивало интенсивность флуоресценции лимфоцитов, меченных ФИТЦ: B-лимфоцитов на 9,0 % (Р< 0,001), Т-лимфоцитов - на 15,0 (Р < 0,001), Т-хелперов - наИ,9(Р< 0,001), Т-киллеров - на 14,0 (Р < 0,001), Т-супрессоров - на 12,1 % (Р < 0,001) по отношению к контролю. В пострадиационный период наблюдалось дальнейшее усиление флуоресценции. Этот процесс носил, волнообразный характер: через час после облучения отмечался первый пик подъема флуоресценции. У Т-лимфоцитов он достигал 18,0 %, ТУхелперов - 19,0, Т-киллеров - 16,0 % (Р < 0,001). Меньше всех в этот период флуоресцировали В-лимфоциты - +8,0 % (Р < 0,001). Ко второму часу интенсивность флуоресценции снижалась во всех популяциях и субпопуляциях, кроме Т-супрессоров, у которых она возрастала на 19,0 % от уровня облучения (Р £ 0,001). Через три часа после облучения наблюдался второй пик повышения интенсивности флуоресценции лимфоцитов. У Т-супрессоров онадостигала максимума—+21,0 % (Р < 0,001).

По цитохимическим данным нуклеиновых кислот в облученных лимфоцитах выявлена определенная закономерность. Реакция лимфоцитов, флуорохромированньж акридиновым оранжевым, показала увеличение количества ядер, люминесцирующих желтым светом до 17,8 % (Р < 0,01) и уменьшение с зеленым светом до 77,4 % (Р < 0,01). Количество ядер, люминесцирующих оранжевым светом, составило 4,46 % (Р < 0,01).

Кроме усиления флуоресценции лимфоцитов изменился коэффициент эксимеризации пирена, что свидетельствует о структурно-функциональном состоянии мембран. Суммарный трансмембранный потенциал, измеренный при помощи зонда ДСМ, увеличился на 18 %, это говорит об активации обменных процессов в лимфоцитах. Титр Р-белков в плазме крови понизился, в связи со снижением процесса элиминации рецепторов с поверхности лимфоцитов.

Содержание общих липидов мембран лимфоцитов почти остается стабильным и не приводит к изменению доли холестерина в мембране. Содержание общей фракции фосфолипидов повышается на 15,1 % (Р < 0,05). Уровень ненасыщенных жирных кислот фосфолипидов мембран лимфоцитов поднялся на 29,2 % по отношению к контрольной группе.

Происходило снижение отношения холестерин/фосфолипиды и коэффициента насыщенных жирных кислот к ненасыщенным на 11,4 % и 21,2 % соответственно по отношению к контрольной группе, т. е. мембраны становились более текучие, обеспечивая тем самым усиление в них обменных процессов и проницаемость.

Облучение клеток НЭГНЛ дозой 6,0 Дж/см2 сопровождалось более значительным усилением флуоресценции В- и Т-лимфоцитов, а также субпопуляций Т-лимфоцитов. Наибольшая интенсивность флуоресценции отмечена у Т-лимфоцитов - на 37 % выше (Р < 0,001), чем в контроле. В субпопуляциях Т-лимфоцитов и популяции В-клеток она колебалась от +29 % у Т-супрессоров и до +21 % - у В-лимфоцитов (Р < 0,001).

В популяции В-лимфоцитов изменения флуоресценции носили градуальный характер, т. е. в период последействия в мембранах развивались процессы, связанные с повышением аффинитета. Максимум свечения отмечен к третьему часу после облучения: +22,0 % (Р < 0,001). В субпопуляции Т-хелперов активность флуоресценции сначала возросла на +27,0 %, а через полчаса понизилась на 11,0 % (Р < 0,001). Через час она вновь повысилась на 6,0 % и продолжала расти до третьего часа. Интенсивность флуоресценции субпопуляции Т-киллеров носила волнообразный характер и имела два пика: через час после облучения и в период с двух до трех часов после него. Динамика флуоресценции Т-супрессоров была иной: через полчаса она снизилась и постепенно стала повышаться к третьему часу.

Сразу после облучения 28,17 % ядер лимфоцитов стало люминесцировать желтым светом (Р 0,01), что свидетельствует об увеличении биосинтетических процессов в ядре.

При электронно-микроскопических исследованиях после облучения клеток, выделенных из периферической крови человека, дозами 1,2 Дж/см2 и 6 Дж/см2 ядрышко лимфоцитов представляет собой плотное образование, на экваториальном срезе напоминающее кольцо. Центральная округлая его область, называемая фибриллярным центром, имеет сниженную электронную плотность и содержит рыхлоупакованные фибриллы разной толщины. Остальная часть ядрышка в виде двух морфологически различных РНП-содержащих структур окружает фибриллярный центр. Это хорошо выраженный фибриллярный и редуцированный гранулярный компоненты. Подобные ядрышки характеризуются низким уровнем транскрипции и постоянно встречаются в зрелых лимфоцитах. В облученных гелий-неоновым лазером лимфоцитах выявлена тенденция к следующим изменениям, которые могут быть интерпретированы как функциональная активация внеядрышковой транскрипции: 1) уменьшается относительная площадь хроматина, расположенного в нуклеоплазме, и увеличивается суммарная относительная площадь зон деконденсации, что в совокупности указывает на некоторое увеличение доли транскрипционно-активного хроматина; 2) увеличиваются число глыбок нуклеоплазматического хроматина и изрезанность их поверхности, что может способствовать активации синтеза гетерогенной РНК. Все эти процессы в дальнейшем, соответственно, приводят к увеличению синтеза белка в клетках.

Цитоплазма многих клеток представлена относительно гомогенным мелкогранулярным материалом. Типичным можно считать скопление митохондрий по 4 - 6 органелл. Некоторые митохондрии находились в глубоких инвагинациях ядерной оболочки, тесно прилегали к ее наружной мембране. Это свидетельствует об усилении биосинтетических процессов в данных участках.

В целом можно констатировать, что стимулирующий эффект НЭГНЛ при облучении дозой 6 Дж/см2 проявляется гораздо отчетливее за счет изменения микровязкости мембран, оцениваемой по коэффициенту эксимеризации пирена. Снижение последнего на 29,6 % означает, что текучесть мембраны возросла, а это создало более благоприятные условия для процесса экспрессии мембраносвязанных рецепторов и повышения аффинитета.

Содержание общих липидов, холестерина и фосфолипидов в мембране лимфоцитов почти не изменяется. Уровень насыщенных жирных кислот в фосфолипидах снизился на 19,3 % (Р < 0,05), а ненасыщенных жирных кислот увеличивается на 13,0 % по отношению к контролю. Коэффициент насыщенных к ненасыщенным жирным кислотам в составе фосфолипидов снизился на 27,9 % по отношению к контрольной группе, что также влияет на изменение текучести мембран.

Стимуляция лимфоцитов НЭГНЛ дозой 18,0 Дж/см2 вызывала рост флуоресценции лимфоцитов, меченных ФИТЦ. В Т-лимфоцитах она была самой высокой - 2,18 ± 0,11 у. е. (Р < 0,01), а в популяции В-лимфоцитов и Т-субпопуляциях колебалась от 1,62 ± 0,15 до 1,86 ± 0,15 у. е. (Р < 0,01). В

пострадиационный период интенсивность флуоресценции у всех клеток снизилась через 30 мин и постепенно повышалась к трем часам.

Аффинность, определяемая ФИТЦ, свидетельствует о максимальном уровне активации клеток после облучения НЭНГЛ дозой 18,0 Дж/см2. После воздействия лазером происходило изменение микровязкости: коэффициент эксимеризации уменьшался на 32,5 % по отношению к контролю. Это благоприятствовало реакциям связывания клеточных детерминант или рецепторов с моноклональными антителами. Трансмембранный потенциал после облучения вырос на 9 %.

Таким образом, использование дозы 18,0 Дж/см НЭГНЛ привело к повышению биосинтетических процессов в клетках и усилению экспрессии мембраносвязанных рецепторов, о чем свидетельствует интенсификация процессов аффинитета во всех популяциях и субпопуляциях лимфоцитов.

Содержание общих липидов и холестерина мембран лимфоцитов снижалось на 4,0 % (Р < 0,05) и 8,5 % (Р < 0,01) соответственно. Уровень фосфолипидов в мембране почти не изменился по отношению к контрольной группе (Р < 0,05). Количество насыщенных и ненасыщенных жирных кислот снизилось на 8,3 % и 3,0 % по отношению к контрольной группе. Произошло снижение отношения холестерин/фосфолипиды на 7,0 % и коэффициента насыщенных жирных кислот к ненасыщенным на 5,0 % по отношению к контрольной группе.

Облучение НЭГНЛ дозой 24,0 Дж/см2 вызвало снижение флуоресценции ФИТЦ, конъюгированного с моноклональными антителами: у В-лимфоцитов - на 19 %, Т-лимфоцитов - на 17, Т-хелперов - на 7, Т-киллеров - на 19 % (Р 5 0,001) по отношению к дозе 18,0 Дж/см2, но оставалось выше контрольного значения. В пострадиационный период в отдельных популяциях и субпопуляциях наблюдалась неодинаковая динамика роста флуоресценции. Ее пик у Т-лимфоцитов, Т-киллеров приходил в первый час после облучения, у Т-супрессоров - на второй, у В-лимфоцитов и Т-хелперов - на третий.

На гистохимических препаратах интенсивность флуоресценции акридинового оранжевого резко возрастала после облучения. Количество ядер, флуоресцирующих желтым светом, увеличилось в 3,3 раза (Р < 0,01).

Интенсивность флуоресценции эксимерной формы пирена по отношению к мономерной меньше, чем в контрольных пробах, вследствие увеличения вязкости мембран лимфоцитов по сравнению с дозой 18 Дж/см2 на 40,3 %. Трансмембранный потенциал вырос на 10,0 % по сравнению с контролем..

Уровень общих липидов, холестерина мембран лимфоцитов снижался на 7,0 % и 8,7 % соответственно (Р < 0,01). Содержание фосфолипидов в мембране возрастает на 6,5 % по отношению к контрольной группе (Р 0,05). Исследование жирных кислот фосфолипидов лимфоцитов показало, что содержание насыщенных и ненасыщенных жирных кислот в их составе увеличивалось на 9,8 % и 24,2 %.

Снижались отношение холестерин/фосфолипиды и коэффициент насыщенных к ненасыщенным жирным кислотам на 27,7 % и 11,5 % по отношению к контрольной группе.

Таким образом, в клетках сразу после облучения развиваются процессы активации, связанные с неспецифическими формами передачи влияния НЭГНЛ на рецепторы мембран, которые приводят к изменению мембранного потенциала, изменению плотности распределения рецепторов в мембране, взаимодействию рецепторов мембран с белками, вмонтированными в нее (например О-белком), ускорению транспорта К, Са, углеводов, нуклеозидов, аминокислот, активации АТФ-аз, усилению синтеза фосфатидилинозитола, увеличению текучести мембран. Как показали наши исследования, уже через два-три часа активируются основные метаболические процессы, синтез РНК и белков. Клетки увеличиваются в размерах. Ядра клеток преобретают неправильную форму за счет выступов и инвагинаций ядерной оболочки. Визуально увеличивается объем цитоплазмы, причем в некоторых лимфоцитах обнаруживается много митохондрий и маленьких везикул. Более четко, за счет расширения и низкой электронной плотности содержимого, контурировались цисцерны эндоплазматической сети. У части лимфоцитов (20 %) обнаружена деградация хроматина, определяющаяся участками значительного просветления хроматина. Каналы эндоплазматической сети сильно гиперплазированы, большинство митохондрий - набухшие, с деструктивными изменениями крист. В цитоплазме отмечено большое количество вакуолей. Следует отметить, что среди лимфоцитов с разной степенью изменений в цитоплазме и ультраструктуре встречались и неизмененные клетки. В пострадиационный период реакция различных субпопуляций лимфоцитов носила неоднозначный, в зависимости от рассматриваемых доз (преимущественно двухволновой) временной характер.

Таким образом, основной точкой приложения действия НЭГНЛ в лимфоцитах является поверхностная мембрана клеток с ее рецепторами и ядра с ядрышком, которые активизировались при лазерном воздействии. Проведенные исследования позволяют заключить, что низкоэнергетическое гелий-неоновое облучение оказывает выраженное действие на лимфоциты, причем характер этого воздействия зависит от дозы облучения. Среди возможных путей реализации эффекта лазерного облучения лежат механизмы воздействия на биологические мембраны клеток, приводящие, в частности, к экспрессии поверхностных мембранных рецепторов, изменению биосинтетических процессов и повышению уровня окислительно-восстановительных процессов. Обнаруженные признаки активации лимфоцитов, несомненно, являются составной частью комплексного многофакторного процесса общего иммунного ответа организма на действие лазерного излучения.

Повышение адаптационных возможностей лимфоцитов под влиянием плазмафереза

Плазмаферез в настоящее время занял прочное место в лечении бронхолегочных заболеваний, протекающих особенно тяжело. Это связано с его высокой эффективностью при данных заболеваниях, отсутствием серьезных осложнений, относительной доступностью. Этот метод лечения может осуществляться как стационарно, так и амбулаторно (Гуревич К. Я., 1991; Рыжко В. В., Городецкий В.М., 1995; Воробьев П. А. с соавт., 1996; ПиксинИ. Н., 1996).

Исследования ультраструктуры лимфоцитов выявили некоторые изменения уже после 1-го сеанса плазмафереза. В ядрах отмечались зоны эухроматина и гетерохроматина, причем конденсация хроматина происходила в виде мелкогранулярных структур, занимающих практически всю площадь ядра. Протяженные участки оболочки ядра имели расширенное перинуклеарное пространство. Установлены расширение канальцев эндоплазматической сети и комплекса Гольджи, наличие везикул в периферических отделах последнего. На поверхности лимфоцитов образовывались цитоплазматические выросты.

При электронно-микроскопическом исследовании лимфоцитов больных после 2-го сеанса плазмафереза выявлены следующие изменения. Микрорельеф клеточной поверхности характеризуется многочисленными, ярко выраженными выростами цитоплазматической мембраны. Ядро четко контурировано, содержит значительные участки перинуклеарно расположенного высококонденсированного хроматина, в центральной части имеются участки эухроматина с отдельными вкраплениями глыбок конденсированного хроматина. Цитоплазматический матрикс лимфоцитов представлен относительно гомогенным мелкогранулярным материалом.

Ультраструктура лимфоцитов после 3-го сеанса плазмафереза говорит о повышенной функциональной активности. Клетки имеют крупное ядро, в центре которого выделяется значительное содержание эухроматина, гетерохроматин располагается перинуклеарно. Это может быть интерпретировано как функциональная активация процессов транскрипции -синтеза гетерогенной РНК, что в дальнейшем приводит к повышению синтеза белка в клетке.

В цитоплазме встречались отдельные крупные митохондрии. В некоторых из них обращало на себя внимание наличие многочисленных крист. Клеточная поверхность характеризовалась относительно ровным контуром с единичными выростами. По данным В. А. Симоненковой (1998), гиперпластические процессы в ультраструктурах лимфоцитов находили свое отражение в соответствующих изменениях ядра и цитоплазмы: увеличении концентрации РНК, содержания ферментов и реактивных групп -сукцинатдегидрогеназы, НАД- и НАДФ-диафораз, щелочной и кислой фосфатаз.

После проведения первого сеанса плазмафереза у больных хроническим бронхитом возрастала флуоресценция клеток: СБЗ - на 31,5 %, СБ 20 - на 39,0, СБ 26 - на 28,0, СБ 25 - на 86,0 % (Р :< 0,01) по отношению к стадии обострения. У больных острой пневмонией флуоресценция клеток также возрастала; СБЗ - на 33,0 %, СБ 20 - на 49,0, СБ 26 - на 33,0, СБ 25 - на 85,0 % (Р < 0,01) по отношению к стадии обострения. После проведения второго сеанса тенденция к увеличению активности клеток сохранялась. После 3-го сеанса плазмафереза у больных хроническим бронхитом активность СБ3 увеличивалась в 2,2 раза, СБ 20 - в 2,7, СБ 26 - в 2,3, СБ 25 -в2,75раза(Р < 0,01) по сравнению со стадией обострения, но не достигала контрольного уровня. У больных пневмонией активность СБЗ и СБ20 повышалась в 3 раза, СБ 26 - в 2,8, СБ 25 - в 3,7 раза (Р < 0,001).

Полученные нами данные свидетельствуют об эффективности проведенного метода в лечении бронхолегочных заболеваний. Это вызвано тем, что из организма удаляется часть эндотоксинов, в результате происходит восстановление активности клеток иммунной системы.

Несмотря на широкое применение плазмафереза в клинической практике, механизм его терапевтического действия во многом остается непонятным. Большинство исследователей связывают его действие с элиминацией патологических веществ из крови (медиаторов воспаления, бронхоконстриции, циркулирующих иммунных комплексов). Наряду с чисто элиминационным эффектом плазмаферез может оказывать влияние на функцию Т-лимфоцитов, которая, по многим данным, у больных с бронхолегочными заболеваниями угнетена и является одним из звеньев патогенеза заболевания.

При обсуждении механизмов терапевтического действия плазмафереза при бронхолегочных заболеваниях необходимо учитывать его влияние на гемостаз, улучшение в связи с этим микроциркуляции в легочной ткани. Особый интерес представляет анализ изменений СБ95+-лимфоцитов, поскольку СБ95* служит рецептором, стимуляция которого запускает апоптоз. Поэтому увеличение интенсивности свечения клеток, несущих маркер СБ95+, под влиянием плазмафереза можно рассматривать как механизм, способствующий включению клеток в апоптоз.

После проведенных сеансов плазмафереза больным БЛЗ наиболее стойкое снижение показателей эндотоксикоза (СРО, АОА, МСМ, ЦИК, ИТ по альбумину) наблюдалось во всех группах обследуемых уже после второго сеанса плазмафереза.

После третьего сеанса ПФ нами зарегистрировано снижение СРО в плазме больных хроническим бронхитом на 25,0 % (Р < 0,001), острой пневмонией - на 28,0 (Р 0,001), бронхиальной астмой - на 32,0 % (Р 0,001) по сравнению с обострением. АОА плазмы после проведения трех сеансов ПФ повышалась у больных хроническим бронхитом на 27,0 % (Р< 0,001), острой пневмонией - на 19,5 (Р < 0,001), бронхиальной астмой -на27,0%(Р'«0,001).

Отсутствие стабильного детоксикационного эффекта ПФ связано, во-первых, с постоянным наличием воспалительного очага в легких, во-вторых, с тем, что при плазмаферезе происходит лишь механическое удаление плазмы, богатой токсичными продуктами, клетки же крови возвращаются больному практически в неизменном виде. Поэтому активность их антиоксидантных систем, видимо, остается низкой, а замещение донорской плазмы незначительно увеличивает активность АО-ферментов. Необходимо учесть и удаление при плазмаферезе эндогенных плазменных антиоксидантов из-за отсутствия селективности данного метода. На это указывает и высокий уровень СРО.

При проведении всего курса детоксикационной терапии содержание МСМ в плазме снижалось у больных хроническим бронхитом на 44,5 % (Р 5: 0,001), больных острой пневмонией - 37,0 (Р < 0,001), бронхиальной астмой - на 40,0 % (Р < 0,001) по сравнению с исходным уровнем обострения. Уровень ЦИК снизился на 18,0 % (Р < 0,001) в плазме крови больных хроническим бронхитом; острой пневмонией и бронхиальной астмой - на 21,0 %(Р < 0,001).

Синдром эндогенной интоксикации, неизменно сопровождающий воспалительные заболевания бронхолегочного аппарата, протекает с повышением индекса токсичности по альбумину, снижением его концентрации в крови. После проведения 3-го сеанса плазмафереза ИТ снижался у больных хроническим бронхитом на 32,0 % (Р < 0,01), острой пневмонией - на 34,5 (Р < 0,01), бронхиальной астмой-на 37,0 % (Р < 0,01) по сравнению с обострением на фоне повышения ОКА и ЭКА в крови.

Хотя показатели эндотоксикоза у всех групп больных не доходили до значений контрольного уровня, все же данные результаты являются более положительными по сравнению с группой больных, прошедших только базовую терапию.

Уровень СРО лимфоцитов больных БЛЗ (острый абсцесс, плевропневмония) после 1-го сеанса плазмафереза составил 5,95 ± 0,76 имп/с (Р < 0,01), что на 14,5 % ниже, чем в стадии обострения. СРО постепенно снижалось к 3-му сеансу плазмафереза от 14,5 - до 32,0 % (Р < 0,01), АОА повышалась лосле 3-го сеанса плазмафереза на77,0%(Р < 0,05).

В стадии обострения в митохондриях лимфоцитов также наблюдался высокий уровень СРО и сниженная АОА. После проведения 1-го сеанса у больных хроническим бронхитом уровень СРО снизился по сравнению со стадией обострения на 33,8 % (Р < 0,01), острой пневмонией - на 19,4 % (Р < 0,01). АОА митохондрий лимфоцитов возросла после 1-го сеанса на 64,0 % (Р < 0,01) у больных хроническим бронхитом и на 54,0 % (Р < 0,01) у больных острой пневмонией. Активность СДГ митохондрий больных хроническим бронхитом увеличилась незначительно, больных острой пневмонией - на 15,0 % (Р: 0,05) по отношению к стадии обострения.

После 2-го сеанса плазмафереза СРО митохондрий лимфоцитов больных хроническим бронхитом снизился по отношению к обострению на 55,3 % (Р < 0,01), острой пневмонией - на 52,0 % (Р < 0,01). АОА возрастала на

75,0 % (Р < 0,01) у больных хроническим бронхитом и на 53,5 % (Р < 0,01) у пациентов с острой пневмонией по сравнению со стадией обострения. Активность СДГ митохондрий выросла на 17,2 % (Р < 0,05) у больных хроническим бронхитом и на 38,0 % (Р < 0,05) у больных острой пневмонией по сравнению со стадией обострения.

После окончательного курса ПФ зарегистрировано снижение уровня процессов СРО в митохондриях лимфоцитов больных бронхитом на 65,0 % (Р < 0,01), острой пневмонией - на 60,0 % (Р < 0,01), при этом АОА увеличивалась при хроническом бронхите в 2,2 раза (Р < 0,01), при острой пневмонии - в 2 раза(Р < 0,01). Активность СДГ митохондрий повышалась у больных хроническим бронхитом и острой пневмонией на 23,2 % (Р 0,05) и 46,0 % (Р < 0,05) соответственно по сравнению со стадией обострения, но все же не достигала контрольных значений.

Проведение сеансов ПФ приводило к статистически значимым изменениям указанной оценки уровня процессов СРО и АОА митохондрий лимфоцитов больных БЛЗ, чем после стационарного базисного лечения.

Как показали наши исследования, изучение динамики элиминации продуктов эндотоксикоза в процессе плазмафереза подтверждают данные об их высокой патологической активности. Применение плазмафереза в комплексе с детоксикационной терапией позволяет быстро снизить токсичность крови путем активного удаления из внутренних сред организма широкого спектра токсических метаболитов и, в частности, наиболее биологически активных из них - МСМ сыворотки крови.

Таким образом, включение плазмафереза в комплексную программу лечения больных БЛЗ приводит к купированию явлений эндотоксикоза и нормализации показателей гомеостаза. Наиболее выраженный детоксикационный эффект плазмафереза наблюдался не на следующий день после перфузии, а после 2-3 сеансов. Вероятно, это происходило за счет улучшения функционирования естественных детоксицирующих систем организма больного, и прежде всего его печени, что влечет за собой повышение адаптационных процессов в иммунной системе.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены особенности молекулярной и структурной организации мембранного аппарата плазматической мембраны, энергизованности митохондрий и биосинтетические возможности ядерного аппарата в норме иммунокомпетентных клеток. Цитохимические и электронно-

микроскопические исследования хроматина лимфоцитов позволяют идентифицировать Т- и В-клетки путем рассмотрения их функциональных особенностей и физико-химических свойств. Кроме того, субпопуляции лимфоцитов отличаются по ряду морфологических признаков и флуоресценции маркеров клеточной поверхности. На основании сравнительного ультраструктурного, иммуно- и гистохимического

исследования выявлены общие закономерности и особенности формирования в лимфоцитах процессов активации.

2. Общебиологические закономерности реализации стресс-реакции на клеточном уровне базируются на механизмах краткосрочной адаптации. Начало стрессорной реакции сопровождается морфофункциональными изменениями в мембранном аппарате лимфоцитов, направленными в первую фазу, и характеризуется изменением пула фосфолипидов, отношением НЖК/ННЖК, энергизованностью митохондрий, повышением уровня эухроматина в ядрах. Затем наступает спад биоресурсов клетки, и если она способна адаптироваться при этих условиях, то переходит в фазу компенсаторно-приспособительных реакций, сопровождающихся восстановлением нормальных процессов. Если нет, то клетка переходит в третью фазу, завершающуюся апоптозом или некрозом, в зависимости от силы альтерирующего фактора.

3. Действие на лимфоциты эндотоксинов зависит от глубины выраженности течения бронхолегочных заболеваний. Наибольшие изменения, касющиеся Р-белков, МСМ, ЦИК, ПОЛ и ИТ, наблюдаются в острую фазу пневмонии, затем при бронхиальной астме, как атопической, так и инфекционно-аллергической природы, в меньшей степени - при остром бронхите.

4. В стадию адаптации установлена динамика компенсаторно-деструктивных процессов, характерных для адаптационной перестройки лимфоцитов, развивающейся под влиянием экзо- и эндотоксинов. К компенсаторным проявлениям относятся: усиление аффинитета Тх и В-лимфоцитов, формирование на плазматической мембране многочисленных выростов и складок, увеличение цитоплазматических инвагинаций в области ядра и расположение в них митохондрий, изменение фосфолипидного и жирно-кислотного состава мембран, приводящих к изменению их текучести. В ядрах наблюдаются картины, свидетельствующие об усилении биосинтетических процессов, влекущих нарастание белков и активность ферментов, изменение целостности кариолеммы, расширение перинуклеарного пространства. Деструктивные изменения характеризуются снижением аффинитета лимфоцитов, набуханием и вакуолизацией матрикса митохондрий, которые сопровождаются снижением их энергизованности и имеют обратимый характер.

5. Срыв краткосрочной адаптации, в которой принимают участие биогенные амины, приводит к ускорению и усилению процессов трансформации Т- и В-лимфоцитов, а также их субпопуляций, характеризуется гиперплазией иммунных структур, декомпенсацией со стороны митохондрий и реактивными изменениями, характерными для апоптоза и некроза.

6. Ослабление стрессовой реакции, изменение длительности ее фаз происходят в период адаптации клетки к влиянию гелий-неонового лазера (эффект дозозависимый) или обменного плазмафереза. Эти методы коррекции морфофункциональных состояний лимфоцитов могут быть использованы в терапии тяжелых бронхолегочных заболеваний. Облучение НЭГНЛ в дозе 1,2 и 6,0 Дж/см2 приводит к фотостимуляции, выражающейся в увеличении на плазматической мембране лимфоцитов количества выростов, что создает благоприятные условия для экспрессии мембранных рецепторов и повышения аффинитета. Увеличивается количество высокоэнергизованных митохондрий. В ядрах возрастает доля эухроматина. Каналы эндоплазматического ретикулума сильно расширены. Все это свидетельствует об усилении биосинтетических процессов в клетках. Наиболее глубокие деструктивные изменения в клетках отмечены при дозе 24,0 Дж/см2. В фотомодифицированных лимфоцитах обнаружена деградация хроматина, определяющая участками значительного просветления хроматина. Каналы эндоплазматической сети сильно гиперплазированы, большинство митохондрий - набухшие, с деструктивными изменениями крист. В цитоплазме отмечено большое количество вакуолей.

7. Включение плазмафереза в комплексную программу лечения больных бронхолегочными заболеваниями приводит к купированию явлений эндотоксикоза и нормализации показателей гомеостаза. Его применение в комплексе с детоксикационной терапией позволяет быстро снизить токсичность крови путем удаления широкого спектра токсических метаболитов - Р-белков, МСМ, СРО, ЦИК. Наиболее выраженный детоксикационный эффект плазмафереза наблюдается не на следующий день после перфузии, а после 2-3 сеансов.

В работе использованы следующие сокращения:

АБА - атопическая бронхиальная астма АОА - антиоксидантная активность АФК - активные формы кислорода БА - бронхиальная астма БАВ - биологически активные вещества БЛЗ - бронхолегочные заболевания

ИАБА - инфекционно-аллергическая бронхиальная астма

ИТ - индекс токсичности

ЛФХ - лизофосфатидилхолин

МСМ - молекулы средней массы

НЖК - насыщенные жирные кислоты

ННЖК - ненасыщенные жирные кислоты

НЭГНЛ - низкоэнергетический гелий-неоновый лазер

ОКА - общая концентрация альбумина

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПФ - плазмаферез

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

СМ - сфингомиелин

СРО - свободнорадикальное окисление

ФЛ - фосфолипид

ФС - фосфатидилсерин

ФТИ - фосфатидилинозит

ФХ - фосфатидилхолин

ФЭА - фосфатидилэтаноламин

ЭКА - эффективная концентрация альбумина

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кузьмичева Л. В. Влияние излучения гелий-неонового лазера на иммунокомпетентные клетки // Всероссийская конференция «Гигиена, ветсанитария и экология животноводства». - Чебоксары, 1994. - С. 15 (В соавт.).

2. Кузьмичева Л. В. Влияние ультрафиолетового и лазерного света на формирование неспецифического адаптационного синдрома // Светоизлучающие системы. Эффективность и применение: 1-я Всерос. науч.-техн. конф. с междунар. участием. - Саранск, 1994. - С. 69 - 70 (В соавт.).

3. Кузьмичева Л. В. Изменение интенсивности флуоресценции субпопуляций лимфоцитов после воздействия низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером // Светоизлучающие системы. Эффективность и применение: 1-я Всерос. науч.-техн. конференция с междунар. участием. -Саранск, 1994. - С. 72 - 73 (В соавт.).

4. Кузьмичева Л. В. Влияние излучения низкоинтенсивного гелий-неонового лазера на Фи-цикл и фотомодификацию функциональной активности клеток крови // 6-й симпозиум по биохимии липидов. - М., 1995. - С. 106 (В соавт.).

5. Кузьмичева Л. В. Исследование аффинности антител после облучения лимфоцитов низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером /А XXIV Огаревские чтения: Науч. конф. - Саранск, 1995. - Ч. 2. - С. 24 (В соавт.).

6. Кузьмичева Л. В. Цитохимическое исследование лимфоцитов периферической крови в норме и при облучении низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером и ультрафиолетовым светом : автореф. ... дис. канд. биол. наук. - Саранск, 1995. - 21 с.

7. Кузьмичева Л. В. Активация лимфоцитов низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером // Актуальные вопросы комбустиологии, реаниматологии и экстремальной медицины: Республиканская науч.-практ. конф. - Саранск, 1996.-С. 264-265 (В соавт.).

8. Кузьмичева Л. В. Воздействие факторов окружающей среды на иммунную систему человека // Региональные проблемы экологической генетики и пути их решения: науч.-практ. конф. - Саранск, 1996. - С. 17 (В соавт.).

9. Кузьмичева Л. В. Использование низкоэнергетического гелий-неонового лазера для селективного облучения форменных элементов крови // Морфология. - 1996. - Т. 109, № 2. - С. 59 (В соавт.).

10. Кузьмичева Л. В. Изменение морфофункционального состояния форменных элементов крови под воздействием гелий-неонового лазера // Новые направления лазерной медицины: Междунар. конф. - М, 1996. - С. 72 (В соавт.).

11. Кузьмичева Л. В. Стимуляция ГНЛ гуморального иммунитета у больных бронхолегочными заболеваниями // Светоизлучающие системы. Эффективность и применение: сб. науч. тр. 2-й Всерос. науч.-техн. конф. -Саранск, 1997. - С.-94 (В соавт.).

12. Кузьмичева Л. В. Иммунологические эффекты действия низкоинтенсивного лазера на биологические объекты // Светоизлучающие системы. Эффективность и применение: сб. науч. тр. 2-й Всерос. науч.-техн. конф. - Саранск, 1997. - С. 95 (В соавт.).

13. Кузьмичева Л. В. Альбумин сыворотки крови при загрязнении окружающей среды и инфекционных заболеваниях // Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. - М., 1998. Кн. 2. - С. 382 - 385 (В соавт.).

14. Кузьмичева Л. В. Изменение показателей иммунитета человека под влиянием промышленных выбросов // Водные и наземные экосистемы и охрана природы левобережного Присурья: сб. науч. тр. - Саранск, 1998. - С. 109-112 (В соавт.).

15. Кузьмичева Л. В. Влияние элементов группы «металлических» ядов на токсичность плазмы крови человека // Водные и наземные экосистемы и охрана природы левобережного Присурья: сб. науч. тр. - Саранск, 1998. -С. 113-117 (В соавт.).

16. Кузьмичева Л. В. Гистохимическое и электронно-микроскопическое исследование клеток белой крови при облучении ГНЛ // Российские Морфологические ведомости: материалы 4-го съезда рос. морфологов с междунар. участием. - М., 1999. - № 1 - 2. - С. 81 (В соавт.).

17. Кузьмичева Л. В. Влияние низкоэнергетического гелий-неонового лазера на процессы активации лимфоцитов. - Саранск, 1999. - С. (В соавт.).

18. Кузьмичева Л. В. Формирование неспецифического адаптационного синдрома в клетках крови при облучении лазером // Лазер и здоровье: Междунар. конгресс. - М., 1999. - С. 449 - 450 (В соавт.).

19. Кузьмичева Л. В. Биогенные амины и состояние клеточного иммунитета у практически здоровых людей г. Саранска // Экологические проблемы и пути их решения в зоне среднего Поволжья: материалы Всерос. науч. конф. - Саранск, 1999. - С. 149 - 151 (В соавт.).

20. Кузьмичева Л. В. Влияние факторов окружающей среды на некоторые детоксикационные системы крови детей и взрослых

// Экологические проблемы и пути их решения в зоне среднего Поволжья: материалы Всерос. науч. конф. - Саранск, 1999. - С. 153 - 154 (В соавт.).

21. Кузьмичева Л. В. Влияние факторов окружающей среды на состояние здоровья детей и подростков // Экологические проблемы и пути их решения в зоне среднего Поволжья: материалы Всерос. науч. конф. -Саранск, 1999. - С. 154 - 155 (В соавт.).

22. Кузьмичева Л. В. Влияние промышленных ядов на биохимические показатели сыворотки крови // Экологические проблемы и пути их решения в зоне среднего Поволжья: материалы Всерос. науч. конф. - Саранск, 1999. -С. 158-159 (В соавт.).

23. Кузьмичева Л. В. Влияние низкоэнергетического гелий-неонового лазера на нуклеиновые кислоты лимфоцитов // XXVIII Огаревские чтения: Клинико-экспериментальные аспекты современной медицины: материалы науч. конф. - Саранск, 1999. - Ч. 2. - С. 139 - 140 (В соавт.).

24. Кузьмичева Л. В. Изменение иммунной системы человека при интоксикации и роль лазеротерапии в реабилитации // Материалы 4-го Междунар. конгресса по иммунореабилитации и реабилитации в медицине. -Израиль, 2000. - С. 124 (В соавт.).

25. Кузьмичева Л. В. Корригирующее влияние гелий-неонового лазера на дистрофически измененные лимфоциты // Морфология, 2000. - № 3. - С. 65 (В соавт.).

26. Кузьмичева Л. В. Влияние свинца на показатели эндотоксикоза в плазме крови водителей // Экология и жизнь: сб. материалов 3-й Междунар. науч.-практ. конф. - Пенза, 2000. - 4.1. - С. 56 - 58 (В соавт.).

27. Кузьмичева Л. В. Оценка состояния здоровья детей и подростков, проживающих в условиях техногенной нагрузки // Экология и жизнь: сб. материалов 3-й Междунар. науч.-практ. конф. - Пенза, 2000. - Ч. 1. — С. 58 — 60 (В соавт.).

28. Кузьмичева Л. В. Использование зонда-катиона ДСМ в оценке энергизированности митохондрий лимфоцитов и нейтрофилов // Современные аспекты теоретической и клинической медицины: проблемы, диагностика, лечение и реабилитация: сб. науч. трудов. - Саранск, 2000. -Вып. 1.-С. 101 (В соавт.).

29. Кузьмичева Л. В. Влияние эфферентной терапии на показатели эндотоксикоза у больных бронхолегочными заболеваниями // Современные аспекты теоретической и клинической медицины: проблемы, диагностика, лечение и реабилитация: сб. науч. трудов. - Саранск, 2000. - Вып.1. - С. 157-158 (В соавт.).

30. Кузьмичева Л. В. Роль митохондрий в апоптозе (обзор) // Технические и естественные науки. Медицина: материалы 6-й конф. молодых ученых: - Саранск, 2001. - Ч. 2. - С. 124 - 126 (В соавт.).

31. Кузьмичева Л. В. Влияние эндотоксинов на иммунный статус больных бронхиальной астмой // Астма. - 2001. - Т. 2, № 1. - С. 65 (В соавт,).

32. Кузьмичева Л. В. Мембранотропные эндотоксины в оценке патологических процессов // Лабораторное дело: организация и методы исследований: сб. материалов Всерос. науч.-практ. конф. - Пенза, 2001. - С. 5 - 7 (В соавт.).

33. Кузьмичева Л. В. Влияние НИГНЛ на липидный состав мембран лимфоцитов // Лазерные и информационные технологии в медицине XXI века: материалы Междунар. конф. и науч.-практ. конф. Северо-Зап. региона РФ. - СПб., 2001. - С. 542 - 543 (В соавт.).

34. Кузьмичева Л. В. Влияние гепаринкриопреципитатфереза и эритросорбции на показатели эндотоксикоза при гнойно-септических заболеваниях // Окружающая природная среда л медицинская экология: сб. материалов Междунар. науч.-практ. конф. - Пенза, 2001. - С. 34 - 35 (В соавт.).

35. Кузьмичева Л. В. Роль свободнорадикального окисления мембранных липидов лимфоцитов в развитии процессов адаптации // XXX Огаревские чтения: материалы науч. конф. - Саранск, 2001. - Вып.2. - С. 44 - 46 (В соавт.).

36. Кузьмичева Л. В. Влияние мембранотропных эндотоксинов на аффинитет Т-хелперов // XXX Огаревские чтения: материалы науч. конф. -Саранск, 2001. - Вып. 2. - С. 55 - 58 (В соавт.).

37. Кузьмичева Л. В. Технология получения альбумина с повышенными детоксикационными свойствами из крови сельскохозяйственных животных // Роль науки и инноваций в развитии хозяйственного комплекса Республика Мордовия: материалы Респ. науч.-практ. конф. - Саранск, 2001. — С. 310 — 312 (В соавт.).

38. Кузьмичева Л. В. Изменение клеточного и гуморального иммунитета у больных атопической бронхиальной астмой // Экология и здоровье в XXI веке: Междунар. конф. - Ульяновск, 2001. - С. 73 (В соавт.).

39. Кузьмичева Л. В Мембранотропное действие гелий-неонового лазера при бронхолегочных заболеваниях // Аллергия, иммунология и глобальная сеть: взгляд в новое тысячелетие: материалы 7-го Междунар. конгресса по иммунореабилитации // International journal of immunorehabilitation. - M., 2001. - Т. 3, № 1. - С. 32 (В соавт.).

40. Кузьмичева Л. В. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная активность митохондрий лимфоцитов при бронхолегочных заболеваниях // Естественно-научные исследования: теория, материалы, практика: сб. науч. тр. - Саранск, 2002. - С. 86 - 88 (В соавт.).

41. Кузьмичева Л. В. Адаптация лимфоцитов на клеточном и субклеточном уровнях // Морфология. - 2002. - Т. 121, № 2 - 3. - С. 85 (В соавт.).

42. Кузьмичева Л. В. Биохимическая характеристика альбумина крови убойных животных // Новые подходы в естественных исследованиях: экология, биология, сельскохозяйственные науки: сб. науч. тр. - Саранск, 2002. - Вып. 2. - С. 37 - 41 (В соавт.).

43. Кузьмичева Л. В. Роль низкоинтенсивного гелий-неонового лазера в краткосрочной адаптации лимфоцитов // Науч. докл. 3-го съезда биохимического об-ва. - СПб., 2002. - С.80 (В соавт.).

44. Кузьмичева Л. В. Биогенные амины в патогенезе бронхолегочных заболеваний // Науч. докл. 3-го съезда биохимического об-ва. - СПб., 2002. -С. 425 (В соавт.).

45. Кузьмичева Л. В. Влияние свободных радикалов на мембранный аппарат иммунокомпетентных клеток при атопической бронхиальной астме // Аллергия, иммунология и глобальная сеть: материалы 8-го Междунар. конгресса по иммунореабилитации. - Канны, Франция, 2002. - Т. 4, № 1. - С. 60 (В соавт.).

46. Кузьмичева Л. В. Биохимические аспекты эндотоксикоза. - Саранск, 2 0 02.- 103 с. (В соавт.).

47. Кузьмичева Л. В. Плазмаферез и иммунодиагностика при бронхолегочных заболеваниях // 1-я Всерос. конференция по иммунотерапии. -М.,2003. -Т. 5, №2.- С. 214 (В соавт.).

48. Кузьмичева Л. В. Влияние плазмафереза на синтез легких и тяжелых цепей иммуноглобулинов при бронхиальной астме // 1-я Всерос. конференция по иммунотерапии. - М, 2003. - Т. 5, № 2. - С. 220 (В соавт.).

49. Кузьмичева Л. В. Влияние гелий-неонового лазера на иммунокомпетентные клетки при бронхиальной астме // International journal on immunorehabilitation. Вып. «Физиология и патология иммунной системы». -М.,2004.-С. 153 (В соавт.).

50. Кузьмичева Л. В. Исследование интенсивности перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности в крови крупного рогатого скота // Биология - наука XXI века: материалы 8-й Пущинской школы-конф. молодых ученых. - Пущино, 2004. - С. 103 (В соавт.).

51. Кузьмичева Л. В. Апоптоз лимфоцитов в развитии бронхолегочных заболеваний // Морфологические ведомости. - 2004. - № 3 - 4. - С. 104-105 (В соавт.).

52. Кузьмичева Л. В. Влияние плазмафереза на энергетический обмен лимфоцитов при острой пневмонии // Морфологические ведомости. - 2004. № 3 - 4. - С. 30 - 33 (В соавт.).

53. Кузьмичева Л. В. Роль симпато-адреналовой системы в процессах адаптации лимфоцитов // Морфология. - 2004. - Т. 126, № 4. - С. 58 (В соавт.).

54. Кузьмичева Л. В. Изменение активности ферментов в лимфоцитах при острой пневмонии // Морфология. - 2004. - Т. 126, № 4. - С. 66 (В соавт.).

55.Кузьмичева Л. В. Адаптационные возможности иммунокомпетентных клеток. - Саранск, 2004. - 180 с. (В соавт.).

56. Кузьмичева Л. В. Электромагнитные волны и регуляторные механизмы биомембран, ответственные за адаптационно-трофические реакции клеток // Отчет по заказ-наряду № 53/4-92. 60 с. (В соавт.).

57. Кузьмичева Л. В. Использование хемилюминесценции для биотестирования экологического состояния окружающей среды // Отчет по х/д 44/93. 70 с. (В соавт.).

58. Кузьмичева Л. В. Технология получения альбумина с повышенными детоксикационными свойствами из крови крупного рогатого скота // Отчет по г/б НИР № 53/38-01 (этапы 1-5). 126 с. (В соавт.).

59. Кузьмичева Л. В. Способ определения регуляторных белков плазмы (сыворотки) крови. Рацпредложение № 792, принятое МГУ им. Н.П. Огарева от 14.02.95 (В соавт.).

Подписано в печать 24.03.05. Объем 2,5 п. л. Тираж 100 экз, Заказ М» 614.

Типография Издательства Мордовского университета 430000, г. Саранск, ул. Советская, 24

/1119

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Кузьмичева, Лидия Васильевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ И МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЛИМФОЦИТОВ (Обзор литературы).

1.1. Особенности морфологии и дифференцировки лимфоцитов.

1.2. Молекулярная организация лимфоцитов.

2. РОЛЬ МЕМБРАННОГО АППАРАТА ЛИМФОЦИТОВ

В ПРОЦЕССЕ АДАПТАЦИИ.

2. 1. Рецепторы лимфоцитов.

2. 2. Активация мембран лимфоцитов.

2. 3. Краткосрочная адаптация лимфоцитов.

3. РОЛЬ АПОПТОЗА И НЕКРОЗА В АДАПТАЦИОННОМ ПРОЦЕССЕ.

3.1. Морфология апоптоза.

3. 2. Некроз и деструкция.

4. УНИВЕРСАЛЬНОСТЬ МЕХАНИЗМОВ СТРЕССА НА КЛЕТОЧНОМ УРОВНЕ И АДАПТИВНЫХ ОТВЕТОВ КЛЕТОК.

5. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

5.1. Объект исследований.

5.2. Методы исследований.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

6. МОРФОЛОГИЯ И МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЛИМФОЦИТОВ.

7. АДАПТАЦИОННЫЕ ПЕРЕСТРОЙКИ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ.

8. ВОССТАНОВЛЕНИЕ ЛИМФОЦИТОВ

ПОСЛЕ ОБОСТРЕНИЯ БРОНХОЛЕГОЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ.

9. СРЫВ ПРОЦЕССОВ АДАПТАЦИИ.

9. 1. Роль биогенных аминов в срыве процессов адаптации.

9. 2. Роль апоптоза и некроза в процессах срыва адаптации лимфоцитов.

10. ПУТИ ПОВЫШЕНИЯ АДАПТАЦИОННЫХ

ВОЗМОЖНОСТЕЙ ЛИМФОЦИТОВ.

10.1. Активация лимфоцитов низкоэнергетическим гелий-неоновым лазером.

10.2. Повышение адаптационных возможностей лимфоцитов под влиянием плазмафереза.

11. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологические и функциональные изменения лимфоцитов в процессе краткосрочной адаптации"

Актуальность исследований. Адаптация к условиям среды является характерным и важнейшим свойством живых систем любых уровней организации, на всех этапах филогенеза. В процессе эволюции, путем отбора, клетки приобрели способность в неблагоприятных условиях переводить свой метаболизм на аварийный режим, при котором происходит сужение их метаболической и функциональной активности, но обеспечивается поддержание и сохранение жизни (Насонов Д. Н., 1959; Александров В. Я., 1985; Рыскулова С. Т., 1986; Браун А. Д., Моженок Т. П., 1987; Craig Е. А. 1985; Wei Y. Н. et al., 1998; Melov S., 2000; Cadenas E. et al., 2000).

Исследование неспецифического адаптационного синдрома клеточной системы, его причин, симптомов, молекулярных механизмов относится к фундаментальным проблемам биологии клетки. Интерес к этим вопросам вызван многими причинами, прежде всего самой практикой. Это механизм реакций живых систем на действие экстремальных по интенсивности и характеру раздражителей (Суханова Г. А., Серебров В. Ю., 2000; Давтян Т. К., Аванесян Л. А., 2001). Велико значение этой проблемы для биологии, медицины, ветеринарии. Для постановки правильного диагноза, контроля за эффективностью лечения, профилактики болезней людей и животных необходимо проведение исследований на клеточном и молекулярном уровнях.

Исследование адаптационного синдрома клеточной системы привлекает внимание и с теоретической точки зрения. Адаптационный синдром - это реакция клетки на действие альтерирующих факторов (экзо- и эндотоксинов). При адаптационном синдроме нарушение свойств клетки проявляется в разнообразных изменениях морфологического, физиологического, физико-химического и биохимического характера. Для многих современных работ по адаптационному синдрому клеточной системы характерно выявление особенностей действия различных факторов, специфики реагирования различных клеточных типов (Тиунов JI. А., 1986; Соловьян В. Т., 1990). Для исследования адаптационного синдрома очень важно наряду с изучением его специфических черт исследовать общие (неспецифические) признаки реакции.

Интерес к проблемам адаптационного синдрома обусловлен открытием и введением в практику в последние годы большого числа новых физических, химических и биологических альтерирующих агентов, способных оказывать неблагоприятное действие на клетки. При коррекции эндотоксикоза необходим анализ действия на клетку указанных агентов, что важно для установления доз, с которыми можно безопасно работать.

Первоначально понятие стресса (общего адаптационного синдрома, по Селье) рассматривалось как комплекс физиологических или патологических реакций мобилизации на уровне целого организма, обеспечивающих поддержание его гомеостаза в меняющихся условиях окружающей среды, оно вполне применимо и к единичным клеткам (Селье Г., 1972; Александров В. Я., 1985; Браун А. Д., Моженок Т. П., 1987; Барабой В. А., 1991; Киселева Р. Е., 1994; Мельникова Н.А. 1994; Кузьмичева JI. В., 1995). При этом реакция клеток на действие раздражителей, к которым относятся и эндотоксины мембранотропного действия, является неспецифической. В начальный период действия неблагоприятных факторов изменения метаболизма в основном сходны с физиологическим возбуждением (Браун А. Д., Моженок Т. П., 1987). При усилении неблагоприятного фактора изменения обмена направлены в наиболее выгодную для данных условий сторону: часть метаболических реакций блокируется, и одновременно включается ряд процессов, не функционирующих или слабо функционирующих в норме (например, аэробный гликолиз, синтез белков стресса). Еще одним характерным ответом клетки на стрессовые воздействия является накопление в просвете цитоплазматического ретикулума «незаконченных» белков, т. е. белков без соответствующей нативной трехмерной конформации (Kautman R. J., 1997), при этом одновременно активируется интерферон-зависимая Ser/Thr-протеинкиназа, что приводит к апоптозу. Такое развитие событий характерно для вирусной инфекции. Аккумуляция незавершенных белков в цитоплазматическом ретикулуме приводит к индукции транскрипции ряда генов, кодирующих шапероны белков цитоплазматической сети.

Перекрытие клеточных адаптационных ответов, возможно, объясняется активацией в клетках под действием стресса универсального плейотропного посредника (сигнала тревоги), способного воспринимать индуцирующие сигналы и запускать каскад ответных реакций (Соловьян В. Т., 1990). По мнению В. А. Барабой (1991, 1992), таким универсальным сигналом служит смещение прооксидантно-антиоксидантного равновесия в направлении активации ПОЛ в биологических мембранах (Киселева Р. Е., Кузьмичева JI. В., 1995 - 2002; Halliwel В. et al., 1992; Behl С., Skutella et al., 1997; Blumberg J. В., Halpner A. D., 1999).

Интенсивные исследования апоптоза как механизма программированной клеточной гибели (Ellis R. Е. et al., 1991; Новиков В. С., 1996; Ярилин А. А., 1996, 1998; Хансон К. П., 1997) рассматривают вопрос о соотношении некроза и апоптоза в ответе клетки на разнообразные внешние неблагоприятные воздействия, включая токсические эффекты ксенобиотиков. Основные отличия некроза и апоптоза хорошо известны и широко обсуждаются в литературе (Лушников Е. Ф., Загребин В. М., 1987; Ярилин А. А., 1996; Новожилова с соавт., 1996; Скулачев В. П., 1996; Уманский С. Р. 1996; Lockshin R. A., Zakeri Z., 1991; Arends М. J., Wyllie А. Н., 1991; Fesus L., 1993; Harris С. С., 1996; Hardwick J. V., 1997; Golstein P., 1997).

Интенсивность повреждающего стимула является решающим аргументом в развитии токсического ответа клетки по линии некроза или апоптоза, что находит многочисленные экспериментальные подтверждения (Скулачев В. П., 2001; Berger N. А., 1985; Buttke Т. М., Dypbukt J. М., 1994).

Для активизации процессов адаптации к различным альтерирующим факторам и снижения уровня эндотоксикоза в организме в последнее время интенсивно ведутся исследования в области фотобиологии живой клетки и разработке методов активной хирургической детоксикации, среди которых ведущее место занимает обменный плазмаферез (Рыжко В. В. с соавт., 1995; Пиксин И. Н. с соавт., 1996; Саматолкин А. К., 1996; Ишина Т. И. с соавт., 2001). Одним из направлений в области лазеротерапии стало изучение влияния лазерного излучения с длиной волны 632,8 нм на иммунокомпетентные клетки, в частности на лимфоциты периферической крови человека (Федосеева Г. Е. с соавт. 1987; Свиридова С. П. с соавт., 1989; Маянский Д. Н., 1991; Козлов В. И. с соавт., 1992, 1993; Киселева Р.Е., Кузьмичева Л.В., 1992 - 2004). В нашей работе рассматривается спектр различных доз, действующих на лимфоциты и их эффекты в пострадиационный период, с целью выявления механизмов адаптации и оптимальной дозы как лечебного фактора.

Цель исследования — изучить основные морфофункциональные особенности краткосрочной адаптации лимфоцитов под влиянием экзо- и эндогенной интоксикации, вызванной бронхолегочной патологией.

Задачи исследования:

1. Выявить общебиологические закономерности реализации стресс-реакции на клеточном уровне.

2. Дать морфофункциональную оценку процессам краткосрочной адаптации и выявить роль стрессорных факторов (эндотоксинов мембранотропного действия) на уровне популяций и субпопуляций клеточного звена иммунитета.

3. Исследовать роль биогенных аминов в срыве процессов адаптации. Раскрыть роль апоптоза и некроза как результата срыва процессов адаптации.

4. Дать общую морфофункциональную оценку повышению адаптационных возможностей лимфоцитов под влиянием НЭГНЛ и плазмафереза.

Научная новизна исследования. Предложена схема развития стресс-реакции на клеточном уровне на основе комплексного подхода в оценке краткосрочной адаптации лимфоцитов, базирующаяся на общебиологических закономерностях перестройки клеточных мембран, связанных с увеличением их текучести и проницаемости, энергизованности митохондрий, изменением в гетерогенности клеточного хроматина.

Впервые дана морфофункциональная оценка начала стрессорной реакции, сопровождающейся в первую фазу процессами активации мембранного аппарата лимфоцитов, изменением пула фосфолипидов и отношением НЖК/ННЖК, энергизованностью митохондрий, повышением уровня эухроматина в ядрах. Затем наступает спад биоресурсов клетки, и если она способна адаптироваться (вторая фаза), то происходит развитие компенсаторно-приспособительных реакций, приводящих к восстановлению нормальных процессов; если нет, то клетка переходит в третью фазу, завершающуюся апоптозом или некрозом, в зависимости от силы альтерирующего фактора.

Показана роль стрессорных факторов (эндогенных токсинов, образующихся в период обострения бронхолегочных заболеваний) в первую фазу — активации. Результаты биохимических и гистохимических исследований свидетельствуют, что при действии на клетки раздражителей после некоторого периода подъема метаболической активности, продолжительность которой зависит от типа Т-лимфоцитов (Тх, Тс, Тк) или В-клеток, наступает вторая фаза — адаптации, или третья — фаза истощения, характеризующаяся развитием апоптоза и некроза. Показана роль антиоксидантного стресса в этом процессе. Избыток АФК инициирует цепную реакцию ПОЛ, ведущую к повреждению клеточных мембран, уменьшению их текучести, повышению проницаемости, снижению энергизованности митохондрий.

Изучена корреляционная зависимость между биогенными аминами и отдельными фазами краткосрочной адаптации, апоптозом и некрозом, в зависимости от тяжести заболевания (бронхит, пневмония, бронхиальная астма).

Дана морфофункциональная оценка общебиологических закономерностей повышения адаптационных возможностей, развивающихся в лимфоцитах после воздействия НЭГНЛ или плазмафереза. Выявлены механизмы влияния на стрессовую реакцию в плане ее ослабления за счет активации лимфоцитов НЭГНЛ и удаления эндотоксинов в результате использования плазмафереза. Использование различных доз НЭГНЛ отчетливо документируют морфологическую картину активации, выражающуюся повышением аффинитета популяций и субпопуляций лимфоцитов; увеличением микровыростов на плазматической мембране; повышением люминесценции ДСМ, возгорании «желто-зеленой» люминесценции мембран лимфоцитов и плазматической мембраны; увеличением флуоресценции акридинового оранжевого, свидетельствующей об интенсификации биосинтетических процессов в лимфоцитах.

Практическая новизна исследования. Результаты исследований позволили систематизировать, углубить и расширить сведения о морфологических, ультраструктурных, гистохимических, иммунофлуоресцентных и биохимических характеристиках лимфоцитов. Установлены популяционные и субпопуляционные морфофункциональные особенности лимфоцитов. Выявлены функциональные и морфологические особенности этапов краткосрочной адаптации, связанные с изменениями, происходящими на уровне плазматической мембраны, ее текучести и проницаемости, опосредованной через изменение фосфолипидного, жирно-кислотного и холестеринового обмена, коррелирующего с показателями изменения аффинитета, спектров флуоресценции пирена; на уровне митохондрий - документированных электронно-микроскопическими картинами, изменением флуоресценции ДСМ и активности СДГ; на уровне ядра - изменение степени гетерогенности хроматина, интенсивности флуоресценции, свидетельствующее об усилении биосинтетических процессов; биогенных аминов.

Теоретическая значимость исследования. Результаты диссертационного исследования расширяют представления о краткосрочной адаптации лимфоцитов. Выявленные изменения первой фазы - активации, второй - адаптации и третьей фазы - истощения, которые вносят новое понимание в причины перехода из одной фазы в другую при развитии стресс-реакций. На основе этого обсуждаются возможности оказания влияния на стрессовую реакцию в смысле ее ослабления за счет повышения активности лимфоцитов под влиянием НЭГНЛ и плазмафереза в фазу их адаптации к стрессорным факторам.

Для практической медицины и фотобиологии могут быть важны полученные результаты о том, как эндотоксины влияют на лимфоциты, как осуществляется реализация действия биогенных аминов в процессах срыва адаптации и усиления апоптоза и некроза. Все это целесообразно учитывать в практической медицине при одновременном использовании препаратов, влияющих на медиаторный обмен и свободнорадикальное окисление липидов.

Полученные в диссертации данные используются в учебном процессе и отражены в двух монографиях.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Выявлены закономерности молекулярной и структурной организации иммунокомпетентных клеток. Определена степень аффинитета отдельных популяций и субпопуляций лимфоцитов на основе фосфолипидного состава их мембран и рецепторных детерминант, расположенных на плазматической мембране. В ядре выявлена степень гетерогенности хроматина.

2. Установлены закономерности активации лимфоцитов, происходящие в результате воздействия различных доз НЭГНЛ, реализующиеся через мембранный аппарат повышением аффинитета; энергизованность митохондрий и ядерных структур, связанной с возгоранием желтой люминесценции; перераспределение фосфолипидов и жирных кислот мембран в сторону увеличения их текучести; диспергирование хроматина и повышение биосинтетических процессов, свидетельствующих об интенсификации синтеза в клетках, зависящих от дозы облучения.

3. В модельных опытах (использованы лимфоциты крови больных БЛЗ: хроническим бронхитом, острой пневмонией, обострение ИАБА и АБА) выявлено влияние действия как экзогенных, так и эндогенных токсинов мембранотропного действия, характеризующихся накоплением Р-белков, МСМ, ЦИК, ПОЛ, повышением ИТ, характеризующимся снижением детоксикационных способностей альбумина. Показана роль эндотоксинов, приобретающих самостоятельное значение в развитии деструктивных процессов, сопровождающихся снижением аффинитета лимфоцитов, изменением текучести мембран (индекс отношения Х/ФЛ сдвинут в сторону повышения содержания холестерина), снижением энергизованности митохондрий и биосинтетических процессов. Выяснено, что до 20 % лимфоцитов погибает под влиянием эндо- и экзогенных токсинов.

4. Установлены некоторые особенности влияния биогенных аминов в процессе срыва краткосрочной адаптации. При хроническом бронхите и пневмонии ведущую роль в этом процессе играют адреналин и норадреналин, при бронхиальной астме - гистамин и серотонин.

5. Установлена роль апоптоза и некроза в срыве краткосрочной адаптации.

6. Выявлено, что на активацию процессов адаптации к воздействию НЭГНЛ или обменному плазмаферезу исключительное влияние имеет правильное дозирование фактора, к которому адаптируются клетки, так как адаптация имеет свою «цену», связанную с чрезмерной активацией синтеза нуклеиновых кислот и белков, составляющих основу адаптации, но вместе с тем означает и значительную трату структурных ресурсов клеток.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Кузьмичева, Лидия Васильевна

4. Результаты работы открывают дальнейшую перспективу для проведения научных исследований в цитологии, биологии клетки, иммунологии по изучению адаптационных возможностей лимфоцитов.

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

АБА - атопическая бронхиальная астма АГ - антиген

АНС- 1-анилинонафталин-8-сульфонат

АОА - антиоксидантная активность

АФК - активные формы кислорода

БА - бронхиальная астма

БАВ — биологически активные вещества

БЛЗ - бронхолегочные заболевания

BCR — рецептор В-лимфоцитов для антигена

Г / С - гистамин / серотонин

ДСМ - 4-(и-диметиламиностирил)-1 -метилпиридиний п -толуолсульфоната ИАБА - инфекционно-аллергическая бронхиальная астма ИТ - индекс токсичности ЛФХ - лизофосфатидилхолин МАТ - моноклональные антитела МСМ - молекулы средней массы НЖК - насыщенные жирные кислоты ННЖК - ненасыщенные жирные кислоты НЭГНЛ - низкоэнергетический гелий-неоновый лазер ОКА - общая концентрация альбумина ПОЛ - перекисное окисление липидов ПФ - плазмаферез СДГ - сукцинатдегидрогеназа СМ - сфингомиелин СРО - свободнорадикальное окисление TCR - рецептор Т-лимфоцитов для антигена Тх — хелперные Т-лимфоциты

Тц - цитотоксические Т-лимфоциты

ФИТЦ - флуоресцеинизотиоцианат

ФЛ - фосфолипид

ФС — фосфатидилсерин

ФТИ — фосфатидилинозит

ФХ - фосфатидилхолин

ФЭА - фосфатидилэтаноламин

ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы

ЭКА - эффективная концентрация альбумина

ЭПР - эндоплазматический ретикулум

Я - ядро

Ig - иммуноглобулин

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Кузьмичева, Лидия Васильевна, Саранск

1. Адо А. Д. О некоторых свойствах и взаимодействии рецепторов мембран лимфоцитов // Иммунология. 1993. - № 6. - С. 12 - 17.

2. Абросимов В. Н. Воспаление и гиперреактивность дыхательных путей при бронхиальной астме / В. Н. Абросимов, Г. В. Порядин // Тер. архив. -1995.-№ 11.-С. 60-62.

3. Айрапетянц М. Г. Роль свободнорадикального окисления липидов в механизме адаптации / М. Г. Айрапетянц, Н. В. Гуляева // Вестн. АМН СССР. 1988. № 11. - С. 49 - 55.

4. Александров В. Я. Реактивность клетки и белки. Л.: Наука, 1985. — 317с.

5. Алехин Е. К. Иммунотропная активность Нрантигистаминных препаратов / Е. К. Алехин, И. Л. Красимова // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1998. - № 2. - С. 79 - 84.

6. Аматуни В. Г. Тучно-клеточный механизм патогенеза бронхиальной астмы и перекисное окисление мембранных липидов / В.Г. Аматуни, А. К. Егоян, М.З Нариманов // Тер. архив. 1989. - № 3 - С. 34 - 36.

7. Аматуни В. Г. Определение соотношений между оксидантной и антиоксидантной системами в характеристике течения бронхиальной астмы / В. Г. Аматуни, М. Д. Сафарян // Терапевтический архив. 1991. - № 8. - С. 63 - 66.

8. Антонова Т. В. Оценка течения инфекционного процесса по состоянию мембран лимфоцитов переферической крови / Т. В. Антонова, С. Л. Николаенко, Д. А. Лиознов // Клиничнская лабораторная диагностика. -1999.-№7.-С. 23-24.

9. Аскарова Э. А. Генерация супероксидных радикалов и текучесть мембранных липидов Acholeplasma laidlawii при старении культуры клеток / Э. А. Аскарова, А. Б. Капитанов, В. К. Кольтовер и др. // Биофизика. 1987. -Т. 32.-С. 95-99.

10. Афонина Г. Б. Роль свободнорадикального окисления мембранных липидов лимфоцитов в развитии иммунологической недостаточности и ее коррекция а- токоферолом / Г. Б. Афонина, В. Г. Бордонос // Иммунология. 1990, №5.-С. 33 -35.

11. Баглаев Т. М. Мембраны лимфоцитов при различных состояниях иммунной системы, исследование флуоресцентными зондами : автореф. . дис. канд. биол. наук. Минск, 1983. - 21 с.

12. Баглаев Т. М. Определение площади поверхности и вязкости мембран Т и В - лимфоцитов с помощью флуоресцентных зондов / Т. М. Баглаев, Р. И. Атауханов // Биофизика. - 1998. - №12. - С. 1063 - 1065.

13. Барабой В. А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов // Успехи соврем, биол. 1991. - Т. III, вып. 6. - С. 923 - 931.

14. Барабой В. А. Перекисное окисление и стресс / В. А. Барабой, И. И. Брехман, В. Г. Голотин и др. СПб.: Наука, 1992. - 160 с.

15. Барсуков А. А. Моноклональные антитела к CD/TCR-комплексу Т-клеток: механизмы иммуносупрессии, опыт клинического использования /А. А. Барсуков, П. К. Иванов, А. Ю. Барышников // Успехи современной биологии. 2000. - Т. 120, № 4. - С. 406 - 414.

16. Белоконева О. С. Роль ядерных мембранных липидов в регуляции функционирования рецепторов нейромедиаторов // Биохимия. 1993. — Т. 58, Вып. 11.- С. 1685 - 1708.

17. Белушкина Н. Н. Молекулярные основы патологии апоптоза / Н. Н. Белушкина, С. Е. Северин // Архив патологии. 2001. - № 1. - С.

18. Бережная Н. М. Разнообразие вариантов гиперреактивности В-лимфоцитой при атопических аллергических заболеваниях / Н. М. Бережная, JI. П. Бобкова, В. А. Бойко // Иммунология. 1997. - № 2. - С. 52 - 55.

19. B.И. Дедухова, Е.Н. Мохова // Биохимия. 2000. - Т .65, вып. 4. - С. 562 -569.

20. Болдырев А. А. Является ли Na+, К+-АТФаза мишенью окислительного стресса? / А. А. Болдырев, Е. Р. Булыгина // Бюл. экспер. биол. медицины. -1996. -№3.- С. 275-278.

21. Борисова А. М. Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на иммунную систему / А. М. Борисова A.M., Н. В. Хорошилова Н.В., Г. И. Булгакова // Тер. архив. 1992. - Т.4, вып. 5. - С. 111-116.

22. Борисова А. М. Иммунитет у больных хроническими неспецифическими заболеваниями легких // Клиническая медицина. 1997. -№ 1.-С. 15-21.

23. Ботвиньева В.В. Иммунная система при острых, затяжных и хронических инфекционно-воспалительных заболеваниях органов дыхания // Тер. архив. 1995. - № 1. - С. 21 - 25.

24. Браун А. Д. Неспецифический адаптационный синдром клеточной системы / А. Д. Браун, Т. П. Моженок. Л.: Наука, 1987. - 231 с.

25. Брондз Б. Д. Иммунологическое распознавание и реакции клеточного иммунитета IN VITRO // Успехи современной биологии. 1972. - Т. 73, вып. 1.-С. 42-58.

26. Брондз Б. Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании. М.: Наука, 1987. - 471 с.

27. Брондз Б. Д. Генетические условия функций субклассов Т-лимфоцитов и их рецепторов // Успехи современной биологии. -1991.-Т. 111, вып. 6.1. C. 858-871.

28. Булычев А. Г. Изменение активности лизосомальных ферментов альвеолярных макрофагов и нейтрофилов при некоторых заболеванияхлегких / А. Г. Булычев, А. В. Журавлев // Терапевтический архив 1984. -№ 8. - С.62 - 64.

29. Бякин С. П. Антиоксидантный эффект фотомодификации крови и ее компонентов в лечении острых деструктивных заболеваний легких: автореф. Дис. . канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 1993. - 33 с.

30. Ванин А. Ф. Идентификация методом ЭПР комплексов двухвалентного железа с цистеином биологических системах // Биохимия. 1967. - Т. 32, № 2. - С. 277 - 282.

31. Виноградова Т. JI. Взаимосвязь между уровнем циркулирующих иммунных комплексов и функциональным состоянием фагоцитирующей системы / Т. Л. Виноградова, М. А. Капелько, Ю. Е. Вельтищев // Иммунология. 1986. - № 5. - С. 63 - 65.

32. Вишнякова А. А. Роль различных микроорганизмов и инфекционных процессов в возникновении и течении бронхиальной астмы // Тер. архив. -1990.-№ 11.-С. 60-62.

33. Владимиров Ю. А. Биологические мембраны и патология клетки. М.: Общество "Знание" РСФСР, 1979. - 47 с.

34. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы в живых системах / Ю. А. Владимиров, О. А. Азизова, А. Н. Деев и др. //Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М.: ВИНИТИ, 1991. - Т. 29. - 252 с.

35. Владимиров Ю. А. Перекисное окисление липидов в биомембранах / Ю. А. Владимиров, А. И. Арчаков. М.: Наука, 1972. - 259 с.

36. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестн. РАМН.- 1998.- №7.-С. 43-51.

37. Владимиров Ю. А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал. 2000. - Т. 6. - № 12. - С. 13-19.

38. Владимиров Ю. А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю. А. Владимире, Г. Е. Добрецов. М.: Наука, 1980.-320 с.

39. Владимиров Ю. А. Свободнорадикальные процессы в живых системах / Ю. А. Владимиров, М. П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. 1989 . - 126 с.

40. Владимиров Ю. А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю. А. Владимиров, М. П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. -М.: ВИНИТИ, 1989.-Т. 24.

41. Владимиров Ю. А. Оценка антиокислительной и антирадикальной активности веществ и биологических объектов / Ю. А. Владимиров, М. П. Шерстнев, Т. К. Азимбаев // Биофизика. 1992. - Т. 37. - С. 1041 -1047.

42. Владыко А. С. Диагностическое значение уровня молекул средней массы в крови при оценке тяжести эндотоксикоза /А. С. Владыко, Н. А. Беляков, А. И. Шугаев // Вестник хирургии . 1990. - № 8. - С. 126 - 129.

43. Воробьев П. А. Сравнительная оценка лечебного действия различных методик прерывистого плазмафереза при бронхолегочных заболеваниях / П. А. Воробьев, А. Н. Бритов, А. К. Саматолкин // Тер. архив. 1996. - № 7.-С. 65-68.

44. Воскресенский О. Н. Антиоксидантная система, онтогенез и старение /О. Н. Воскресенский, И. А. Жутаев, В. Н. Бобырев и др. //Вопр. мед. химии. 1982.-Т. 28, вып. 1.-С. 14-17.

45. Гаврилов В. Б. Оценка интоксикации организма по нарушению баланса между накоплением и связыванием токсинов в плазме крови / В. Б. Гаврилов, М. М. Бидула, Д. А. Фурманчук // Клиническая лабораторная диагностика. -1999.-№2.-С. 13 17.

46. Галиновский В. Е. Ингибиторы энергетики митохондрий предотвращают межнуклеосомную фрагментацию ДНК в тимоцитах /

47. B. Е. Галиновский, В. Г. Гогвадзе // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 12.1. C.1616- 1620.

48. Галактионов В. Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. - С. 109 -111.

49. Ганстон Ф.Д. Химия и биохимия липидов. М.: Мир, 1989. - 300 с.

50. Гогвадзе В.Г. Участие фосфолипазы А2 в индуцируемом продуктами перекисного окисления липидов разобщении митохондрий печени крыс / В. Г. Гогвадзе, Н. Н. Бруетовецкий, А. А. Жукова // Биохимия. 1990. - Т. 55, вып. 12.-С. 2195-2199.

51. Гольдштейн Н. Б. Функциональная активность хроматина и л амина В печени крыс // Вопросы мед. химии. 1997. - Т. 35, № 4. - С. 119 - 124.

52. Горошинская И. А. Изменение микровязкости мембран лимфоцитов и эритроцитов крови у онкологических больных / И. А. Горошинская, Л. Ю. Голотина, Е. И. Горло, Т. А. Ровда, Ю. Н. Бордюшков // Вопр. мед. химии. -1999. № 2. - Т. 45. - С. 53 - 57.

53. Горышина Е. Н., Чага О.Ю. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии / Под ред. А.А.Заварзина. Л., 1990. -320 с.

54. Григорович Н. А. Использование цитофлуоресцентных методов для идентификации лимфоцитов и макрофагов, оценка их функционального состояния / Н. А. Григорович, Т. Ф. Алекса // Иммунология. 1984. - № 1. -С. 10-15.

55. Грин Н. Биология: В 3-х т. / Н. Грин, У. Стаут, Д. Тейлор Т.1: Пер. с англ./ Под ред. Р. Сопера. 2-е изд., стереотипное. - М.: Мир, 1990. - 367 с.

56. Губский Ю. И. Принципы функционирования ядерного генома / Ю. И Губский, А. Л. Левицкий, Р. Г. Примак // Jlmi. 1994.- N 4. - С. 15 -19.

57. Гуляева Н. В. Стадия ингибирования перекисного окисления липилов при стрессе / Н. В. Гуляева, Н. Л. Лузина, И. П. Левшина и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1988. - Т. 106 , № 12. - С. 660 - 663.

58. Гуревич К. Я. Интенсивный плазмаферез: осложнения и профилактика // Клиническая медицина. 1991. - № 3. - С. 49 - 52.

59. Гущин И.С. Немедленная гиперчувствительность //Пат. физиология. -1993.-№2.-С. 59-64.

60. Давтян Т. К. О взаимоотношении иммунного и адаптивного ответов / Т.

61. К. Давтян, JI. А. Аванесян // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121, № 3. - С. 275-286.

62. Дедов В.Н. Индукция неселективной проницаемости внутренней мембраны в деэнергизированных митохондриях / В. Н. Дедов, О. В. Демин, В. Я. Черняк // Биохимия. 1999. - Т. 64, №7. - С. 965 - 973.

63. Добрецов Г. Е. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. -М.: «Ириус», 1994. 226 с.

64. Добрецов Г. Е. Измерение трансмембранных электрохимических потенциалов на митохондриальной и плазматической мембранах лимфоцита / Г. Е. Добрецов, В. В. Косников. Новосибирск: Наука, 1987. - С. 195 - 204.

65. Добрецов Г. Е. Свободная энергия аккумуляции флуоресцентного зонда-катиона внутри митохондрий в лимфоците / Г. Е. Добрецов, Г. И. Морозова, Г. М. Баренбойм // Биофизика. 1985. - Т.ХХХ, вып. 5. — С. 833 -836.

66. Добрецов Г. Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука, 1989. - 277 с.

67. Добрецов Г. Е. Измерение градиента концентрации флуоресцентного зонда-катиона ДСМ на плазматической и митохондриальной мембранах лимфоцита // Биологические мембраны. 1986. - Т. 3, № 3. - С. 266 — 273.

68. Дроженников В. А. Активность эластазы и кислой фосфатазы в бронхоальвеолярном смыве при хроническом бронхите / В. А. Дроженников, И. И. Дыханов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1990.- №2.-С. 130-131.

69. Дубинина Е. Е.Окислительная модификация белков / Е. Е. Дубинина, Н. В. Шугалей // Успехи соврем, биологии. 1993. - Т. 113 . вып. 1. - С. 71 — 81.

70. Дуданова О. П. Роль иммунных комплексов при хронических заболеваниях печени и почек / О. П. Дуданова, О. И. Яхонтова // Терапевтический архив. 1992. - № 2. — С. 10 - 15.

71. Дятловицкая Э. В. Зависимость биоэффекторных свойств сфинголипидов от строения их гидрофобного фрагмента // Биохимия. — 1998. -Т 63, вып. 1.-С. 67-74.

72. Дятловицкая Э. В. Сфинголипиды и злокачественный рост // Биохимия.- 1995. Т. 60, вып. 6. - С. 843 - 849.

73. Евдотиенко Ю. В. Автоколебания трансмембранных потоков кальция в митохондриях и их возможное биологическое значение // Биологические мембраны. 2000. - Т. 17. - № 1. - С. 5 - 17.

74. Елисеева Л. С. Биологический эффект связывания серотонина с иммуноцитами // Иммунология. 1998. - № 5. - С. 42 - 46.

75. Еропкин М. Ю. Культуры клеток как модельная система исследования токсичности скрининга цитопротекторных препаратов / М. Ю. Еропкин, Е. М. Еропкина. СПб.: Морсар АВ, 2003. - 240 с.

76. Ерюхин Н.А. Эндотоксикоз как проблема клинической хирургии / Н. А. Ерюхин, О. С. Насонкин, Л. С. Лебедев // Вестник хирургии. 1993. -№ 3. -С. 1 -7.

77. Желудков М. М. Изучение уровня Р-белков в динамике инфекционного процесса при экспериментальном бруцеллезе / М. М. Желудков, Д. А. Манамедова, Н. Н. Кулашка, А. Я. Кульберг // Иммунология. 1995. — № 1.- С. 45 47.

78. Жихарев С. С. Изучение некоторых метаболических лимфоцитов при бронхиальной астме / С. С. Жихарев, А. А. Кожемякин, С. Н. Фомичёв // Терапевтический архив. 1986. - №4. - С. 17 - 22.

79. Зайцев В. Г. Строение ядерных структур. М.: Наука, 1989 - 200 с.

80. Зеленина Н. В. Действие непродолжительного умеренного нагревания организма здорового человека на периферические лимфоциты / Н. В. Зеленина, JI. И. Андреева, В. В. Горанчук // Цитология. 2000. - Т. 42, № 2. -С. 166-169.

81. Зенков Н. К. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты / Н. К. Зенков, В. 3. Панкин, Е. Б. Меньшикова. — М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. 343 с.

82. Зубкова С. М. Прямое и опосредованное действие лазерного излучения на кровь // Действие лазерного излучения на кровь. Киев. - 1989. — С. 183 — 185.

83. Зуга М. В. Тучные клетки и их значение в физиологии и патологии легких / М. В. Зуга, В. А. Невзорова, Б. И. Гельцер // Тер. архив. 1999. -№ З.-С. 77-78.

84. Игнатьева Г. А. Иммунная система и патология // Иммунология. — 1999. №4.-С. 26-33.

85. Извекова В. А. Липиды мембран и функции иммунокомпетентных клеток в норме и патологии // Успехи современной биологии. 1991. - Т. III, вып. 4. - С. 577 - 589.

86. Ильин Н. В. О нормальном содержании Т- и В-лимфоцитов в периферической крови здорового человека // Лаб. дело. 1990. - № 8. - С. 195- 198.

87. Ишина Т. И. Изучение клинической эффективности внутривенного лазерного облучения крови, плазмафереза и их сочетания у больных бронхиальной астмой / Т. И. Ишина, И. М. Кахновский, О. В. Макарова и др. // Тер. архив. 2001. - № 3. - С. 15 - 19.

88. Каган В. Е. Биологическое назначение гистамина // Лаб. дело. 1987. -№9.-С. 712-714.

89. Каган В. Е. Перекисное окисление липидов в митохондриальных мембранах, индуцируемые ферментативным дезаминированием биогенных аминов / В. Е. Каган, А. В. Смирнов, В. М. Савов и др. // Вопросы мед.химии. 1984. -№ l.-C. 112-118.

90. Кару Т. И. Механизм регуляции клеточного метаболизма низкоинтенсивным монохроматическим видимым светом // Лазеры и медицина: сб. тез. докладов. Часть 1. Междун. конф. Ташкент, 1989. С. 86 — 87.

91. Киселева Р. Е. Альбумин сыворотки крови при загрязнении окружающей среды и инфекционных заболеваниях / Р. Е. Киселева, Н. В. Альба, Л. В. Кузьмичева, Д. Л. Альба // Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. — М., 1998. Кн. 2. С. 382 - 385.

92. Киселёва Р. Е. Влияние низкоэнергетического гелий-неонового лазера на процессы активации лимфоцитов / Р. Е. Киселёва, Л. В. Кузьмичёва, Н. А.

93. Мельникова. Саранск, 1999.

94. Киселева Р. Е. Влияние эндотоксинов на иммунный статус больных бронхиальной астмой / Р. Е. Киселева, Л. В. Кузьмичева В. И. Штырова // Астма. 2001.- Т. 2, № 1. - С. 65.

95. Киселева Р. Е. Плазмаферез и иммунодиагностика при бронхолегочных заболеваниях / Р. Е. Киселева, Л. В. Кузьмичева, И. Н. Пиксин, О. С. Новожилова // 1-я Всероссийская конференция по иммунотерапии. -М., 2003. Т. 5, № 2. - С. 214.

96. Киселева Р. Е. Адаптационные возможности иммунокомпетентных клеток / Р. Е. Киселева, Л. В. Кузьмичева. Саранск, 2004. - 180 с.

97. Клебанов Г. И. Антиоксидазная активность сыворотки крови ГГ. И. Клебанов, Ю. О. Теселкин, И. В. Бабанкова и др. // Вестн. РАМН. 1999. — №2. С. 15-22.

98. Климов А. М. О способности липопротеидов высокой плотности удалять продукты перекисного окисления липидов из эритроцитарных мембран / А. М. Климов, А. А. Кузьмин // Биохимия. 2001. - Т. 106, вып. З.-С. 371 -373.

99. Когтева Г. С. Ненасыщенные жирные кислоты как эндогенные биорегуляторы / Г. С. Когтева, В. В. Безуглов // Биохимия. 1998. - № 1. -С. 5- 15.

100. Коен С. Механизмы иммунопатологии: Пер. с англ / С. Коен, П. Уорд, Р. Т. Мак-Класки. М.: Медицина, 1983. - С. 40 - 48.

101. Козлов В. А. Роль гистаминовых рецепторов в реализации (3-цепи гемоглобина, ингибирующей пролиферацию ранних гемопоэтических предшественников / В. А. Козлов, В. Ю. Матросова, И. А. Орловская // Иммунология. 1998. - № 2. - С. 34 - 36.

102. Козлов В. И., Буйлин В. А. Лазеротерапия. М., 1992. - 164 с.

103. Козлов В. И. Основы лазерной физио- и рефлексотерапии / В. И. Козлов, В. А. Буйлин, И. Г. Самойлов, И. И. Марков. Самара-Киев, 1993. -215 с.

104. Козлов Ю. П. Свободнорадикальное окисление липидов в биомембранах в норме и при патологии // Биоантиокислители. — М.: Наука, 1975.-Т. 52.-С. 5-15.

105. Константинова Н. А. Иммунные комплексы и повреждение тканей. -М: Медицина, 1996. 256 с.

106. Колосова Н. Г. Измерение трансмембранного электрического потенциала митохондрий с помощью флуоресцентного зонда ДСМ / Н. Г. Колосова, А. Р. Колпаков // Биофизика. 1991. - Т. 36, вып. 5. - С. 802 -804.

107. Коткина Т. И. Диагностическое значение исследования альбумина сыворотки крови / Т. И. Коткина, В. Н. Титов // Лаб. дело. 1991. - № 7. -С.6-11.

108. Котова С. А. Дифференцированная оценка взаимодействия гистамина с Т- и В-лимфоцитами периферической крови больных с атопическими заболеваниями / С. А. Котова, О. Б. Белова, Н. М. Бережная // Иммунология. 1995.-№ 1.-С. 53-55.

109. Котова С. А. Взаимодействие гистамина с лимфоцитами (связывание, поглощение, регуляция) больных атопическими заболеваниями под воздействием иммуномодуляторов / С. А. Котова, О. Б. Белова, Р. В. Пилецкий // Иммунология. 1997. - № 3. - С. 38 - 42.

110. Котова С. А. Внутриклеточная регуляция взаимодействия гистамина с рецепторами в норме и при атопии / С. А. Котова, Н. М. Бережная // Иммунология. 1992. - № 5. - С. 4 - 6.

111. Кременецкая А. М. Морфология лимфоцитов / А. М. Кременецкая, И. А. Воробьёв, Ю. В. Сидоров // Тер. архив. 1998. - №7. - С.37 - 39.

112. Крепе Е. М. Липиды клеточных мембран. Л.: Наука, 1981. - 341 с.

113. Кузина А. М. Липиды в надмолекулярном комплексе ДНК тимуса и печени крыс / А. М. Кузина, И. К. Коломейцева, С. Д. Стразина // ДАН СССР. -1985. Т.85. - С. 1189 -1191.

114. Кузьмичёва Л. В. Цитохимическое исследование лимфоцитов периферической крови в норме и при облучении низкоэнергетическим гелийнеоновым лазером и ультрафиолетовым светом: автореф. . дис. канд. биол. наук Саранск, 1995. - 21 с.

115. Кузьмичева Л. В. Корригирующее влияние гелий-неонового лазера на дистрофически измененные лимфоциты / Л. В. Кузьмичева, Р .Е. Киселева, О. Г. Клокова, В. И. Штырова // Морфология. 2000. - № 3. - С. 65.

116. Кузьмичева Л. В. Влияние свинца на показатели эндотоксикоза в плазме крови водителей / Л. В. Кузьмичева, Р. Е. Киселева // Экология и жизнь: сб. материалов 3-й Междунар. науч.-практ. конф. Пенза, 2000. — Ч. 1.-С. 56-58.

117. Кузьмичева Л. В. Адаптация лимфоцитов на клеточном и субклеточном уровнях / Л. В. Кузьмичева, Р. Е. Киселева // Морфология. — 2002.-Т. 121, №2-3. -С. 85.

118. Кузьмичева Л. В. Влияние плазмафереза на синтез легких и тяжелых цепей иммуноглобулинов / Л. В. Кузьмичева, Р. Е. Киселева // 1-я Всероссийская конференция по иммунотерапии. Москва, 2003. - Т. 5, № 2. - С. 220.

119. Кукин В. И. Влияние лазерного излучения не повреждающей интенсивности на систему иммунитета / В. И. Кукин, А. М. Сорокин, А. В. Иванов // Сов. медицина. 1985. - № 7. - С. 8 -15.

120. Куклина Е. М., Ширшев С. В. сАМФ-зависимая сигнальная трансдукция в контроле активации Т-лимфоцитов // Биохимия. 2000. — Т. 65, вып. 6.-С. 741 -752.

121. Кульберг А. Я. Регуляторные белки новая медико-биологическая проблема. Сборник научных трудов «Регуляторные Р-белки при инфекционных и других заболеваниях». - М.: АМН СССР, 1990. - С. 3 - 9.

122. Кульберг А. Я. R-белки основные итоги десятилетних исследований // Иммунология. - 1996. - № 2. - С. 65 - 66.

123. Лаптева Р. М. Влияние излучения гелий-неонового лазера на некоторые иммунологические особенности лимфоцитов / Р. М. Лаптева, С. А. Багишева, О. И. Макарова // Здравоохр. Казахстана. 1984. -№11.-С. 51 — 53.

124. Ломакин М. С. В-лимфоциты: киллерные функции // Иммунология. — 1990.-№3.-С. 4-7.

125. Лопаткин Н. А., Лопухин Ю. М. Эфферентные методы в медицине (теоретические и клинические аспекты экспериментальных методов лечения). М.: Медицина, 1989. - 352 с.

126. Лукьянова Н. Ю. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей // Вопр. онкологии. 2000. - Т. 46, № 2. - С. 121 -128.

127. Лурье Б. Л. Влияние плазмафереза на содержание петидов среднемолекулярной массы при тяжелых гнойно-септических осложнениях / Б. Л. Лурье, А. И. Лобаков // Лаб. дело 1990. - № 2. - С. 95 - 97.

128. Лушников Е. Ф. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития / Е. Ф. Лушников, В. М. Загребин // Архив патологии. -1987. Т. 49, вып. 2 . - С. 89 - 94.

129. Лушников У. Ф. Гибель клетки (апоптоз) / У. Ф. Лушников, А. Ю. Абросимов. М.: Медицина, 2001. - 192 с.

130. Лямперт И. М. Роль Fc-рецепторов лимфоцитов, макрофагов и других клеток млекопитающих при иммунных процессах // Успехи современной биологии. 1982. - Т. 94, вып.1(4). - С. 67 - 81.

131. Ляшенко В. А. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток / В. А. Ляшенко, В. А. Дроженников, И. М. Молотковская. М.: Медицина, 1988.-239 с.

132. Маевский Е.И. и др. Анаэробное образование сукцината и облегчение его окисления возможные механизмы адаптации клетки к кислородному голоданию // Российский биомедицинский журнал. - 2000. — № 12. — С. 53 — 59.

133. Малышев В. В. Взаимосвязь между воспалением и стресс реакцией / В. В. Малышев, Л. С. Васильева, В. В. Кузьменко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1993. - № 10. - С. 349 - 350.

134. Мамонтов А. С. Перспективы использования гелий-неонового лазера при послеоперационных гнойных осложнениях у онкологических больных / А. С. Мамонтов, В. И. Рыков, Н. Ю. Павлов // Сов. медицина. 1990. -№ 3. - С. 372-420.

135. Мартынова Е. А. Влияние сфинголипидов на активацию Т- лимфоцитов//Биохимия. 1998.-Т. 63, вып. 1.-С. 122- 132.

136. Марциновсий В. Ю. Взаимосвязь функциональных и иммунологических нарушений / В. Ю. Марциновсий, Ю. Н. Хроменков, Н. В. Хваталин // Тер. архив. 1998. - № 5. - С. 32 - 35.

137. Мацинская Н. М. Изучение активности кислой фосфатазы нейтрофилов у больных с различной патологией органов дыхания / Н. М.

138. Мацинская, Л. В. Лейченко, Ю. Э. Годес // Лабораторное дело. 1980. -№5 - С.264-267

139. Машанский В. Ф., Рабинович И. М. Ранние реакции клеточных органоидов. Л.: Наука. Ленингр. отд-ние, 1987. - 118 с.

140. Маянский Д. Н. Хроническое воспаление /АМН СССР. -М.: Медицина, 1991.-270 с.

141. Молина Л. П. Роль эндогенной интоксикации в нарушении иммунного статуса при неспецифическом хроническом воспалении: автореф. дис. канд. биол. наук. Саранск, 1998. - С. 18.

142. Насонов Д. Н. Местная реакция протоплазмы и распространяющееся возбуждение. М., 1959. - 434 с.

143. Насыров X. М. К прооксидантному действию медиаторов воспаления / X. М. Насыров, Р. М. Кондратенко // Пат. физиология и экспериментальная терапия. 1990. -№ 5. - С. 12 - 14.

144. Новиков В. С. Программированная клеточная гибель. СПб.: Наука, 1996. - 276 с.

145. Новожилова А. П. Механизмы клеточной смерти: проблемы и перспективы / А. П. Новожилова, Н. Н. Плужников, В. С. Новиков // Программированная клеточная гибель. СПб.: Наука, 1996. - С. 9 — 29.

146. Оболенский В. А. Уровень средних молекул в определении степениинтоксикации у больных с гнойными ранами // Вестник хирургии. 1993. -№ 3. - С. 34-38.

147. Оганян Р. Р. Исследование функциональной неоднородности R-белков по их способности ингибировать трипсин / Р. Р. Оганян, Jl. М. Бартова, Г. У. Марцинс // Иммунология. 1996.-№ 5. - С. 22 - 25.

148. Орлова Г. П. Об изменениях Т- и В-лимфоцитов у больгных бронхиальной астмой в различные фазы воспалительного процесса в легких // Тер. архив.-2001.-№3.-С. 14-16.

149. Осипов А. Н. Активные формы кислорода и их роль в организме / Н.А. Осипов, О. А. Азизова, Ю. А. Владимиров // Успехи биол. химии. — Т. 31.- С. 180-208.

150. Палеев Н. Г. О дефиниции и классификации бронхиальной астмы / Н. Г. Палеев, В. А. Ильченко // Тер. архив. 1990. - № 3. - С. 58 - 60.

151. Пальцев М. А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 1995. 224 с.

152. Пастушенков В. JI. Цитохимический метод оценки активности дегидрогеназ в лимфоцитах / В. JI. Пастушенков, Ю. А. Митин // Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - № 2. - С. 42 - 43.

153. Первушин Ю. В. Комплекс лабораторных показателей для оценки эндогенной интоксикации / Ю. В. Первушин, Т. П. Бондарь, JI. А. Марченко // Клинич. лабораторная диагностика. 1992. - № 2. - С. 13-16.

154. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия витамина Е / В. В. Чудинова, С. М. Алексеев, Е. И. Захарова, Р. П. Евстигнеева // Биоорганическая химия. 1994. - Т. 20, № 10. - С. 1029 — 1046.

155. Петров М. Б., Лебедев К. А. Иммунограмма в клинической практике. -М.: Наука, 1990.- С. 23-31.

156. Петров Р. В. Клеточные мембраны и иммунитет / Р. В. Петров, Р. И. Атауллаханов. М., 1991. - 225 с.

157. Петров Р. В. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / Р. В. Петров, Р. М. Хаитов, Б. В. Пинегин // Иммунология.1994, №6.-С. 6-9.

158. Пинаев Г. П. Зависимость липидного состава метафазных хромосом от способа их выделения / Г. П. Пинаев, Н. А Розник, Г. Н. Яхов // Цитология.- 1997.- Т. 19.-N1. С. 50 -56.

159. Погорелов В. М., Козинец Г. И. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе // Гемотол. и трансфузиология. —1995. Т. 40, № 5. - С. 17 - 25.

160. Погосян Г. А. Кинетика перекисного окисления липидов индуцированного ионами Fe2+ в суспензии митохондриальных и ядерных мембран / Г. А. Погосян, Е. С. Дремина, В. С. Шаров и др. // Биофизика. -1999. Т. 41, вып.2. - С. 342 - 344.

161. Поркис Б. Иммуноглобулины. М., 1981. - С. 463 - 483.

162. Порядин Г. В. Апоптоз лимфоцитов один из механизмов специфической иммунотерапии атопических заболеваний / Г. В. Порядин, Ж. М. Салмаси, А. И. Макарков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1998. - Т. 125, № 4. - С. 434 - 436.

163. Программированная клеточная гибель / Под ред. В. С. Новикова. -СПб.: Наука, 1996. С. 36 - 87.

164. Пузырев А. А. Адаптация организма к действию экологических факторов на клеточном и субклеточном уровнях / А. А. Пузырев, В. Ф. Иванова, В. Г. Маймулов // Морфология. 1997. - № 112. - Т. 4. - С. 23 - 28.

165. Ч 185. Путов В. Н. Респираторно-вирусные инфекции и иммуннаяреактивность у больных с различными формами бронхита / В. Н. Путов, Н. В. Яковлева // Тер. архив. 1995. - № 3. - С. 49 - 52.

166. Рабинович Н. JI. К методике раздельного определения общего, тромбоцитарного и свободного серотонина в плазме крови / Н. JI. Рабинович,

167. B. М. Макотченко, И. М. Козинец // Лаб. дело. 1985. - № 12. - С. 729 - 731.

168. Райхлин Н. Т. Функция полипептидов ядерного матрикса печени крыс при воспалении / Н. Т. Райхлин, Е. А. Смирнова, А. Г Перевощиков // Арх. патологии. 1996. - № 2. - С. 3 - 8.

169. Родионов С. В. Количественные аспекты активации Т-лимфоцитов /

170. C. В. Родионов, В. М. Земсков, М. В. Глушков и др. // Успехи современной биологии. 1996. - Т. 116, вып. 6. - С. 716 - 728.

171. Романенко А. А. Апоптоз и рак // Архив патологии. 1996. - № 3. -С. 18-22.

172. Рыжко В. В. Проблемы плазмазамещения при проведении лечебного плазмафереза / В. В. Рыжко, В. М. Городецкий // Тер. архив. 1995. - № 11. -С. 60-65.

173. Рыскулова С. Т. Радиационная биология плазматических мембран. -М., 1986.- 127 с.

174. Саакян И. Р. Двойная реципрокная регуляция системы окисления сукцината в митохондриях сердца и печени в условиях патологии / И. Р.Саакян, А. Г.Саакян // Вопросы медицинской химии. 1999. - Т. 44, вып. 2. - С. 56 - 64.

175. Саматолкин А. К. Результаты клинического применения плазмафереза у больных с бронхолегочными заболеваниями // Клинич. медицина 1996. - № 2. - С. 35.

176. Самохвалова Н. С. Воздействие лучей гелий-неонового лазера на селезенку интактных и облученных рентгеновскими лучами мышей // Докл. АН СССР. 1987. - Т. 292. - № 3. - С. 729 - 733.

177. Свиридова С. П. Изменение процессов перекисного окисления липидов при облучении донорской крови гелий-неоновыи лазером / С. П. Свиридова, М. Н. Шишкин // Действие низкоэнергетического лазерного облучения на кровь. Киев, 1989. - С. 44 — 45.

178. Святкина О. Б. Изменение липидных структур мембран лейкоцитов при атопической бронхиальной астме у детей / О. Святкина, JI. М. Тулуевская, Н. М. Полмогий // Педиатрия. 1983. - № 12. - С. 15 - 19.

179. Селье Г. На уровне целого организма. М.: Наука, 1972. - 121 с.

180. Серых M. M. Общая и экологическая иммунология / М. М. Серых, О. Н. Макурина, Г. Л. Рытов, С. А. Симак / Учебное пособие. Самара: СамГУ, 2000.- 174 с.

181. Сидорова Е. В. Антигенспецифичные рецепторы Т- и В-лимфоцитов и передача сигнала // Успехи современной биологии. 1995. - Т. 115, вып. 5. -С. 627-639.

182. Симоненкова В. А. Ультраструктура лимфоцитов периферической крови человека при действии экстремальных факторов // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1998. - № 1.- С. 19 - 22.

183. Скулачев В. П. Снижение внутриклеточной концентрации кислорода как особая функция дыхательной системы клетки // Биохимия. 1994. - Т. 59. -№ 12.-С. 1052-1056.

184. Скулачев В. П. В своем межмембранном пространстве митохондрия таит «белок самоубийства», который выйдя в цитозоль, вызывает апоптоз //Биохимия.-1996.-Т. 61, вып. 11.- С. 2060-2063.

185. Скулачев В. П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии, клетки и органы: роль активных форм кислорода // Соросовский образовательный журнал. 2001. - Т. 7, № 6. - С. 4 - 10.

186. Смольянинова Н. К. Активация синтеза РНК в лимфоцитах после облучения He-Ne лазером / Н. К. Смольянинова, Т. И. Кару, А. В. Зеленин // Радиобиология. 1990. - Т. 30. - № 3. - С. 424 - 426.

187. Смольянинова Н. К. Облучение He-Ne лазером усиливает бласттрансформацию, вызванную фитогемагглютинином / Н. К. Смольянинова, Т. И. Кару, А. В.Зеленин // Докл. АН СССР. 1990. - Т. 315. - № 5. - С. 1256- 1259.

188. Соловьян В. Т. Приспособление клеток к неблагоприятным факторам. Характеристика адаптивных ответов // Биополимеры и клетка. 1990. - Т. 6, №4.-С. 32-42.

189. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций: Руководство АМН СССР / Л. И. Аруин, А. Г. Бабаева, В.Б. Гельфанд и др.; Под ред. Д.С. Саркисова. М.: Медицина, 1987. - 448 с.

190. Стручков В. А. Структурные и функциональные аспекты ядерных липидов нормальных и опухолевых клеток // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 5. -С. 620-643.

191. Стручков В. А. ДНК-связанные липиды: состав и возможные функции / В. А Стручков, Н. Б. Стражевская, Н. Н. Комаров // Биохимия. -1993. -Т. 58, №8. С. 1154 - 1175.

192. Суханова Г. А., Серебров В. Ю. Биохимия клетки. Томск: Изд-во «Чародей», 2000. - 184 с.

193. Титов В. Н. Альбумин, транспорт ненасыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдром // Клинич. лаб. диагностика. 1999. - №4. -С.З- 11.

194. Тиунов JI. А. Биохимические механизмы токсичности /Общие механизмы токсического действия. М.: Медицина, 1986. - С. 114 - 204.

195. Ткачук В. А. Фосфоинозитидный обмен и осцилляция ионов Са2+ // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 1. - С. 47 - 56.

196. Трапезников И. Н. Действие излучения ГНЛ на лимфоциты человека / И. Н. Трапезников, В. И. Кукин, А. В. Иванов и др. // Вестн. АМН СССР. — 1984.-№5.-С. 40-43.

197. Трофимов В. А. Биохимические методы исследования липидов в клинике /В. А. Трофимов, Р. 3 Аширов, А. П. Власов. Саранск, 2000. - 80 с.

198. Трофимов В. А. Качественные и количественные изменения липидов при экспериментальном перитоните / В. А. Трофимов, А. П. Власов, М. М. Миннебаев // Казанский медицинский журнал. 1998. - № 5. - С. 382 -387.

199. Труфакин В. А. Иммунологические аспекты аутоиммунных процессов. Новосибирск: Наука, 1983. - 178 с.

200. Труфакин В. А., Робинсон М. В. Внутрь лимфоцита: итоги и перспективы исследований // Бюлл. Сибирского отделения АМН СССР. — 1989. № 3. - С. 12-17.

201. Уманский С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология. 1996. - Т. 30, вып. 3. - С. 487 - 502.

202. Уманский М. А. Синдром эндогенной интоксикации / М. А. Уманский, Л. Б. Пинчук, В. Г. Пинчук. Киев: Наук думка, 1979. - 201 с.

203. Уманский М. А., Пинчук В. Г. Лимфоциты и опухолевый рост. -Киев: Наук думка, 1982. 256 с.

204. Утешев Б. С. Механизмы активации В-лимфоцитов // Успехи современной биологии. — 1991. Т. 111, вып. 4. - С.591 - 601.

205. Федорова М. 3. Использование «мембранного резерва» лимфоцитами крови при деформации и в условиях гипотонии / М. 3. Федорова, В. Н. Левин // Биологические мембраны, 2001. - Т. 18. - № 4. -С. 306-311.

206. Федосеев Г. Б. Клеточные и субклеточные механизмы защиты и повреждения бронхов и легких / Г. Б. Федосеев, С. С. Жихарев, Т. Р. Лаврова. Л.: Наука, 1980. - 198 с.

207. Федосеев Г. Б. Характеристика обмена серотонина при различных формах неспецифических заболеваний легких / Г. Б. Федосеев, Н. В. Сыромятникова, Е. В. Лабода // Клиническая медицина. 1987. - № 12. -С. 80 - 85.

208. Федосеев Г. Б. Роль серотонина, гистамина и калекреин-кининовой системы в патогенезе приступов удушья при бронхиальной астме / Г. Б. Федосеев, С. С. Жихарев, В. А. Гончарова // Тер. архив. 1992. - №1. -С. 47-59.

209. Федосеева Г. Е. Изменение структуры хроматина лимфоцитов после облучения He-Ne лазером / Г. Е. Федосеева, Н. К. Смольянинова, Т. И. Кару // Радиобиология. 1987. - Т. 27. - № 5. - С. 605 - 609.

210. Фонталин Л. Н. Происхождение антигенраспознающей иммунной системы позвоночных. Молекулярно-биологические и иммунологические аспекты // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 33 - 42.

211. Фрейдлин И. С. Иммунная система и ее дефекты. СПб.: Полисан, 1998.-С. 14-24.

212. Хавинсон В. X Свободнорадикальное окисление и старение / В. X. Хавинсон, В. А. Баринов, А. В. Арутюнян, В. В. Малинин. СПб.: Наука, 2003.-327 с.

213. Хансон К. П. Программированная клеточная гибель (апоптоз): молекулярные механизмы и роль в ьиологии и медицине // Вопр. мед. Химии. 1997.-Т. 43.-С. 402

214. Хаитов Р. М. Миграция Т- и В-лимфоцитов. В кн.: Общие вопросыпатологии. Итоги науки и техники. ВИНИТИ. 1977. - С. 35 - 61.

215. Хаитов Р. М. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах / Р. М. Хаитов, Б. В. инегин // Иммунология. — 1996. -№ 6. -С. 4 -10.

216. Хайдаров Б. Т. Прогнозирование течения рассеянного склероза с помощью теста на R-белки / Б. Т. Хайдаров, И. А. Завалишин, JI. М. Бартова, А. Я. Кульберг // Иммунология. 1991. - № 1. - С. 71 - 73.

217. Халилов Э. М. Структурно-функциональный анализ мембран эритроцитов с различным содержанием холестерина / Э. М. Халилов, В. С. Ли, О. А. Азизова // Вопросы медицинской химии. 1982. - № 1. -С.81 -86.

218. Хочачка П., Сомеро Дж. Биохимическая адаптация. М.: Мир, 1988. - 508 с.

219. Хышиктуев Б. С. Методы определения продуктов перекисного окисления липидов в конденсате выдыхаемого воздуха и их клиническое значение / Б. С.Хышиктуев, Н. А. Хышиктуева, В. Н. Иванов // Вопр. мед. химии 1990. -№ 1. - С. 13 - 15.

220. Чаленко В. В. Эндогенная интоксикация в хирургии / В. В. Чаленко, Ф. X. Кутушев // Вестник хирургии. 1989. - № 4. - С. 3 - 8.

221. Чередеев А. Н. Количественная и функциональная оценка Т- и В-систем иммунитета. В кн.: Общие вопросы патологии. — М., 1976. — № 4. — С. 124-160.

222. Чередеев А. Н. Характеристика и функциональные свойства субпопуляций Т-лимфоцитов человека // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Иммунология. 1984. - Т. 13. - С. 108 - 133.

223. Чучалин А. Г. Состояние клеточных мембран лимфоцитов у больных бронхиальной астмой / А. Г. Чучалин, Ю. К. Новиков, А. Р. Татарский, Б. К. Шуркалин // Иммунология. 1992. - № 6. - С. 84 - 87.

224. Шабалин В. Н. Иммунологические и физико-химические эффекты действия лазера на биологические объекты / В. Н. Шабалин, Т. В. Иваненко,

225. Т. В. Скокова // Иммунология. 1990. - № 6. - С. 30 - 32.

226. Юрина Н. А., Елисеев В. Г. Кровь и лимфа. Кроветворение. В кн.: Гистология, под ред. Елисеева В.Г., Афанасьева Ю.И., Юриной Н.А. М., 1983.-592 с.

227. Ялкут С. И. Особенности действия эуфиллина и активность форм фосфодиэстеразы цАМФ в лимфоцитах больных бронхиальной астмой / С.И. Ялкут, С. А. Котова, О.Б . Белова // Фармакология и токсикология. -1989.-№ 5.-С. 81-83.

228. Ялкут С. И. Роль гипоксии в развитии бронхиальной астмы // Терапевтический архив. 1995. - Т. 67, № 8. - С. 71 - 74.

229. Ярилин А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. - № 6. - С. 10 - 23.

230. Ярилин А. А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме // Пат. физиология. 1998. - № 2. - С. 38 - 48.

231. Airo R., Astaldi G. Recenti fcquisioni sulla reativita del linfocito. Haematol. Latina. 1967. - N 10. - 209 p.

232. Aiway sunthesis of 20-hydroxyeicosatetraenoc and; Metabolism by cyhooxygenase to a broncho dilator / Jacobs Elizabeth R., Effros Richard M., Flack John R., Ready K. Malla, Campbell W.B., Zhu Daling // Amer. J. phisiol. -1999.- N2.-P. 280-288.

233. Alkover A. The Til glycoprotein is functionally linked to a calcium chanel in precursor and mature T-lineage cells / A. Alkover, M. J. Weiss, J. F. Daley // Proc. Nat. Acad. Sci. 1986. - V. 83. - P. 2614 - 2618.

234. Arends M. J. Apoptosis. Mechanism and role in patology / M. J. Arends, A. H. Willie // Int. rev. Exp. Pathol. 1991. - Vol. 32. - P. 223 - 254.

235. Barhes P.I. Inflammatory mediators in astma: an update /Р. I. Barhes, K. F. Chung, C. P. Page //Pharmacol. Rev. 1998. - P. 515 - 596.

236. Barrett A. Lysosomal ensimes // Pneumonal. pol. 1988. - Vol. 56. -P. 94 - 95.

237. Baur P. S. Reapprisal of lymphocyte classification by means of surfacemorphology / P. S. Baur, G. B. Thurman, A. L. Goldstein . J. Immunol. - 1975. -V. 115.-N 5.-P. 1375- 1380.

238. Behl C. Neuroprotection against oxidative stress by estrogens: structure-activity relationship /С. Behl, T. Skutella, F. Lezoualch et al. // Molec. Pharmacol. 1997.-V. 51.-P. 535-541.

239. Berger N. A. Poly (ADP-ribose) in the cellular response to DNA damage // Radiat. Res.- 1985.-V. 101, № 1.-P.4-15.

240. Berrige M. J. Activation immunocompetention shells / M. J. Berrige, R. F.Irvine //Nature. 1984. -V. 312.-№ 599.-P. 315.

241. Blumberg J. B. Antioxidant status and function: relationships to aging and exercise / J. B. Blumberg, A. D. Halpner //Antioxidant Status, Diet, Nutrition and Health /Ed. by A.M. Papas. London: CRC Press, 1999. P. 249 - 275.

242. Bouteiller P. Ultrastructure des lymphocytes d'aspect medullaire chez la souris: identification par marquage immunoenzymatique / P. Bouteiller, N. Vujanovie, H. T. Due. Ann. Immunol. (Inst. Pasteur). - 1974. - V. 125. - N 3. -P. 445-450.

243. Boesen A.M. Stereological analysis of the ultrastructure in isolated human T and non-T lymphoid cells. I. Description of method and dama on normal blood lymphocytes / A. M. Boesen, P. Hokland // Virchows Archiv B. 1982. - V. 39. -N3.-P. 273-284.

244. Borst P. DNA amplification and multidrug resistance //Nature. 1984. -V. 309,N5969.-P. 580.

245. Borther C. D. The role of DNA fragmentation in apopnosis / C. D. Borther, N. В. E. Adenburg, J. A. Cidlowski //Trends in Cell Biol. 1995. - Vol. 5. - P. 21 -26.

246. Bottomley H. К. H-3 uridine incorporationby small lymphocytes of tolerant rats: relationship to В and T lymphocytes /Н. K. Bottomloy, W. D. Perkins, M. Schwartz // J. Immunol. 1975. - V. 115. - N 3. - P. 648 - 652.

247. Bouteiller P. Ultrastructure des lymphocytes d'aspect medullaire chez la souris: identification par marquage immunoenzymatiqus / P. Bouteiller, N.

248. Vujanovie, H. Т. Due. Ann. Immunol. (Inst. Pasteur). - 1974. - V. 125. — N 3. -p. 445-450.

249. Brogaard B. An in vitro system for evaluation of oxidative stress and the effects of antioxidants / B. Brogaard, J. Clausen // ATLA. 1997. - V. 25, N 3. -P. 279-287.

250. Buja L.M. Apoptosis and necrosis: basis types and mechanisms of cell death / L. M. Buja, M. L. Eigenbrodt, E. N. Eigenbrodt // Arch. Path. Lab. Med. -1993.-Vol. 117.-P. 1208- 1214.

251. Burdon R. H. Superoxide and hydrogen peroxide in relation to mammalian cell proliferation // Free Radical. Biol. Med. 1995. - V. 18. - P. 775 - 794.

252. Burton V. Heat shock protection against cold stress of Drosophila melanogaster /V. Burton, H. K. Mitchell, P. Young, N. S. Petersen // Molec. Cell. Biol. 1988. - V. 8, N 8. - P. 3550 - 3552.

253. Buttke Т. M. Oxidative stress as mediator of apoptosis / Т. M. Buttke, P. A. Sandstrom // Immunol. Today. 1994. - Vol. 15. - P. 7 - 10.

254. Cadenas E. Mitochondrial free radical generation, oxidative stress, and aging / E. Cadenas., K. J. Davies // Free Radicals Biol. Med. 2000. - Vol. 29, N 3/4.- P. 222-230.

255. Camins A. Cell-surface expression of heat shock proteins in dog neutrophils after oxidative stress / A. Camins, C. Diez-Fernandez, P. Prieto // Toxicol. In Vitro. 1999. - V. 13, N. 3. - P. 437 - 443.

256. Cantrell D. A. Evidences for protein kinase С activation in T lymphocytes by stimulation of either the CD2 or CD3 antigens / D. A. Cantrell, B. Friedrich, M. Gullberg //Eur. J. Immunol.-1989.-V. 19.-P. 17-23.

257. Carson D. A. Apoptosis and disease / D. A.Carson, J. M. Ribeiro // Lancet. 1993.-Vol. 341.-P. 1251 - 1254.

258. Cohen J. J. Apoptosis I I Immunol. Today. 1993. - Vol. 14. - P. 126 -130.

259. Cohen J. J. Apoptosis and programmed cell death in immunity / J. J. Cohen, R. C. Ducke, V. A. Fadok, K. S/ Sellins // Ann. Rev. Immunol. 1992. -Vol. 10.-P. 267-293.

260. Cooper M. D. The functions of the thymus system and the bursa system in the chicken / M. D. Cooper, R. D. A. Peterson, M. A. South, R. A.Good // J. Exp. Med. 1987. - Vol. 123. - P. 75 - 82.

261. Craig E. A. The heat-shock response // CRC Crit. Rev. Biochem. 1985. -Vol. 18.-P. 239-280.

262. Davis L. S. T cell activation induced by anti-CD3 antibodies reguies prolonged stimulation of protein kinase С / L. S. Davis, P. E. Lipsky // Cell Immunol. 1989.-V. 118.-P. 208-211.

263. De Duve Ch., Wattiaux R. Functions of lisosomes. Ann. Rev. Physiol. -1966.-V. 28.-P. 435-502.

264. Dehling A. Bacterial infection in etyology of bronchial asthma // J. Immunol. 1999. - Vol. 137. - P. 2087 - 2092.

265. Dekhuyzen P. N. R. Oxidant activity in expired breath of patients with adult resperatory distress syndrome / P. N. R. Dekhuyzen, К. К. H. Aben, I. Dekker et. al. // Lancet. 1986. - № 1. - P. 11 - 14.

266. Dewey W. C. Radiation-induced apoptosis: relevance to radiotherapy / W. C. Dewey, С. C. Ling, R. Meyn //Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1995. -Vol. 33.-P. 781 -796.

267. Dive C. Induction of apoptosis new targets for cancer chemotherapy / C. Dive, C. A. Evans, A. D. Whetton // Semin. Cancer Biol. - 1994. - Vol. 3. - P. 417-427.

268. Durman D. M. Induction of mouse metallothionein 1 mRNA by bacterial endotoxin is independent of metal and glucocorticoid hormones / D. M. Durman, J. S. Hoffman, C. J. Qnaife, et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1984. - V. 81, N. 4.- P. 1053- 1056.

269. Dypbukt J. M. Different prooxidant levels stimulate drowth, trigger apoptosis or produce necrosis in insulin-secreting RINm5F cells. The role of intracellular polyamins // J. Biol. Chem. 1994. V. 269, №48. - P. 30553 - 30560.

270. Ellis R. E. Mechanism and functions of cell death / R. E. Ellis, J. Yuan, H. R. Horvitz // Ann. Rev. Cell. Biol. 1991. - V. 7. - P. 663 - 698.

271. Fesus L. Biochemical events in naturally occuring forms of cell death // FEBS Lett. 1993. - V. 328, № 1 - 2. - P. 1 - 5.

272. Foster J. F. Albumin: Structure, Function und Uses // Biochim biophys. Acta. 1993.-Vol. 665.-P.454-462.

273. Golstein P. Controlling cell death // Science. 1997. - Vol. 275. - P. 1081 - 1082.

274. Greves M. F. T and В lymphocytes. Origine, properties and role in immune response / M. F. Greves, J. J. Owen, M. C. Raff. In: Excepta Medica and American Elseiver Publishing Con. Inc., Amsterdam. - 1974. - 120 p.

275. Grossi С. E., Webb S. R., Zicca A. Morphological and histochemical analysis of two human T cell population bearing receptors for Ig M or Ig G. J. Exp. Med. - 1978. - V. 147. - P. 1405 - 1417.

276. Grossi С. E. Ultrastructural characteristics of human T cell clones with various cytolytic activities / С. E. Grossi, F. Zicca, A. Cadoni, M. Mingari, A. Moretta, L. Moretta // Europ. J. Immunol. 1983. - V. 13. -N 8. - P. 670 - 677.

277. Gutman G. Lymphoid tissue architecture: Experimental analesis of the origin and distribution of T and В cells / G. Gutman, I. Weissman // Immunology. 1982. - Vol. 23. - P. 465 - 475.

278. Gutteridge J. C. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damage // Clinical Chemistry. 1995. - Vol. 41, N 12. - P. 1819 - 1828.

279. Halliwell B. Free radicals in biology and medicine / B. Halliwell, J. M. C. Gutteridge ( ed. ). N. Y.: Oxford University Press, 1987. - 346 p.

280. Halliwell B. Free radicals, antioxidants and human disease: where are we now? / B. Halliwell, J. M. C. Gutteridge, С. E. Cross // J. Lab. Clin. Med. 1992. -V. 119, N. 6.-P. 598-620.

281. Hardwick J. M. Virus-induced apoptosis // Adv. Pharmacol. 1997. — Vol. 41.-P. 295-336.

282. Harris С. C. Structure and function of the p53 tumor supressor gene: clues for rational cfcer therapeutic strategies // J. natl. Cancer Inst. 1996. - Vol. 88. -P. 1442- 1454.

283. Harris H. The reactivation of the red cell nucleus // J. Cell. Sci. 1967. -N2.-P. 1364.

284. Heikkila J. J. Induction of heat shock protein messenger RNA in maize mesocotyls by water stress, abscisic acid and wounding / J. J. Heikkila, J. E. T. Papp, G. A. Schultz, J. D. Bewley // Plant Physiol. 1984. - V. 76, N. 1. - P. 270 - 274.

285. Herberman R. B. Mechanisms of cytotoxicity of natural killer ( NK ) cells / R. B. Herberman, C. W. Reynolds, J. Ortaldo // Ann. Rev. Immunol. 1986. -V. 4.-P. 651 -680.

286. Hobsis O. Hydrogen peroide in exhaled air is inoreased in stable etaphase patiens with asthma / O. Hobsis, H. C. Raatgeep, P. W. Hermans // Eur. Respir. -1997. -N 6. P. 519 - 521.

287. Hullman A. R. Oxidative epitelial damade produces hypersponsiveness of human peripheral airways / A. R. Hullman, H. R. Raatgeep et al. // Respir. Crit. Care Med. 1994. -№ 7. - P. 519 - 525.

288. Hug H. Fas-mediated apoptosis in tumor formation and defense // Biol. Chem. 1997. - Vol. 378. - P. 1405 - 1412.

289. Kanayama G. Ultrastructure of normal human T cell subpopulations. Parallel tubular arrays in Ту and clustered dense bodies in T lymphocytes / G. Kanayama, A. Hiraoka, T. Machii, T. Tamaki // Acta Haematol. 1983. - V. 70. - № 4. - P. 220 - 228.

290. Karin M. Metallothioneins: protein in search for function // Cell. 1985. -V. 41. — № 1.-P.9-10.

291. Kautman R. J. The cellular response to stress in the endoplasmic reticulum // Symp. on Mechanisms of Toxicity, Baltimore. Sept. 8 - 10, 1997.

292. Kerr J. F. R. Apoptosisiits nature and kinetic role Лп: Radiation Biology in Cancer Research,32nd Ann. Symp. Fundament. Cancer Res / J. F. R, Kerr, J. Searle. -New York: Raven Press, 1980. P. 367 - 384.

293. Klaus G. G. B. The role of germinal centers in the generation of immunological memory / G. G. B. Klaus, A. Kunki // Siba Faund. symp. 1982. -Vol. 84.- P. 265-280.

294. Lim S. Potential role of nonivasive markers of inflamations on clinical managment of astha / S. Lim, K. F. Chung // Eur. Respir. 1998. - N 8. - P. 1089- 1094.

295. Lin P., Wallach D., Tsai S. Scanning electron microscopy of human T — * cell and В cell rosettes // New Engl. J. Med. - 1972. - V. 136. - № 5. - P. 1008- 1030.

296. Lockshin R. A. Programmed cell death and apoptosis /Apoptosis: the Molecular Basis of Cell Death. Curr. Commun. in Cell. Molec. Biol./ R. A. Lockshin, Z. Zakeri // Ed. by L. D. Tomei, F. O. Cope. N. Y.: Cold Spring Harbor Lab., 1991.-P. 47.

297. Low M.G., Selteil A.R. Fc-receptors in regulation of phosfolipase Аг H Biochem. 1987. - V. 244. - № 1. - P. 120.

298. Majno G. Apoptosis, oncosis and necrosis: an overview of cell death / G. Majno, I. Joris // Amer. J. Path. 1995. - Vol. 146. - P. 3 - 15.

299. Y 321. Makes I. M. Antioxidant enzymes and their implications inpathophsiologic process //Frontiers in Biosei. 1999. - № 4. - S. 339 - 345.

300. Matter A. J. Mouse thymus independent and thymus derived lymphoid cells / A. J. Matter, B. Lisowska-Bernstein, J. E. Ryser. J. Exp. Med. - 1972. -V. 136.-N 5.-P. 1008-1030.

301. Matter A.J. The differentiation of cytotoxic T-lymphocytes in vitro. An ultrastructural study / A. J. Matter, E. Simpson // Cell Tiss. Res. 1976. - V. 166. -P. 475.

302. Melov S. Mitochondrial oxidative stress. Physiologic consequences and potential for a role in aging // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2000. - Vol. 908. - P. 219 -225.

303. Miller E. C. Some historical perspectives on the metabolism of xenobiotic chemicfls to reactive elecrtophiles / E. Miller, J. A. Miller // Bioactivation of Foreign Compounds. N. Y.: Acad. Press, 1985. P. 3 - 28.

304. Mookerjee В. K. IL-2 induced polyclonal proliferation of human peripheral blood lymphocytes: functional a phenotypic characteristics of proliferatind cells / В. K. Mookerjee, P. B. Cheu, J. I. Pauly // Immunology. -1989.-V. 66.-P. 176- 182.

305. Muller-Eberhald H. J. The membrane attack complex of complement // Ann. Rev. Immunol. 1986. - V. 4. - P. 503 - 528.

306. Mustelin T. GTF dependence of the transduction of mitogenic signals through the CD3 complex in T lymphocytes indicates the involvement of a G-protein // FEBS Lett. — 1987. -V. 213. — P. 199-203.

307. Nishimoto J. Apoptpsis in neurodegenerative disease / J. Nishimoto, T. Okatomoto, U. Gramorella, T. Iwatsubo // Adv. Pharmacol. 1997. - Vol. 41. -P. 337-369.

308. Oehling A. Bacterial infection in etiology of bronchial asthma // J. Allergy. 1993.-Vol. 91, N6.-P. 1179- 1188.

309. Pan H. Apoptosis and cancer mechanisms / H. Pan, C. Yin, N. V. Dyke // Cancer Surveys. 1997. - Vol. 29. - P. 305 - 327.

310. Pantaleo G. Transmembrane signaling via T-dependent pathway of human T cell activation. Evidence for the involvement of 1,2-diacylglycerol and inisitol phocphates / G. Pantaleo, D. Olive, A. Poggi // Eur. J. Immunol. 1987. - V. 17. -P. 55-60.

311. Pardon J. F. Lipids of politens and etaphase chromasom / J. F. Pardon, M. N. F. Wilkins // New Engl. J. Med. 1989. - Vol. 336. - P. 1276 - 1282.

312. Pasternak C. A. Transmembrane communication and disease // Indian J. Biochem. Biophys. 1990. - V. 27, N. 6. - P. 363 - 364.

313. Paul W. E. Fanctional specificity of thymus-dependent lymphocytes / W. E. Paul, B. Benacerraf // Science. 1987. - Vol. 185. - P. 1293 - 1297.

314. Pechan P. M. Heat shock proteins and cell proliferation // FEBC Lett. -1991.-V. 280, N l.-P. 1-4.

315. Rice-Evans C. A. Free radical damage and its control / C. A. Rice-Evans, R. H. Burdon // New Comprehensive Biochemistry. Amsterdam: Elsevier, 1994. -V. 28.-408 p.

316. Roberts P. B. Growth in cadmium-containing medium induced resistance to heat in E. coli // Int. J. Radiat. Biol. 1984. - V. 45, N 1. - P. 27 - 31.

317. Roitt I. H. The cellular basis of immunological response: A synthesis of some current views /1. H. Roitt, M. F. Geaves, G. Brostoff, J. H. L. Plfyfair // Lancet. 1974 - Vol. 2. - P. 367 - 371.

318. Rouse R.V. Mouse lyph node germinal centers contain a selected subset of T cells: The helper phenotype / R. V. Rouse, J. A. Ledbetter, I. L. Weissman // J. Immunol. 1983. - Vol. 128. - P. 2243 - 2250.

319. Rudulier D. L. Molecular biologi of osmoregulation / D. L. Rudulier, A. R. Stom, A. H. Dendokar et al. // Science. 1984. - V. 224, N 4653. - P. 1061 -1068.

320. Sciandra J. J. Induction of glucose-regulated proteins during anaerobic exposure and of heat-shock protein after reoxygenation / J. J. Sciandra, J. R.

321. Subjeck, С. S. Hughes // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1984. - V. 81, N 15. - P. 4843 - 4847.

322. Sheehy M. G., Yunis E. J., Agostini R. M., Quintieri F. В., Leung D. Y., Geha R. S., Yunis E. Y. Morhpology of human T lymphocytes clonts // Laboratory Investigation . 1983. V. 48. - № 5. - P. 549 - 550.

323. Shugar D. Perspectives in antisense Therapeutics // Pharmacol. Ther. -1997.-Vol. 76.-P. 151-160.

324. Smith J. W., Rumke H., Haile M. R. Lymphocytes with parallel tubular structures : morphology, function and induction. Brit. J. Haematol. - 1982. - V. 50. - № 4. - P. 696 - 687.

325. Superoxide, hydrogen peroxide and nitric oxide as signaling molecules: Their production and role in disease / Hancock J.T. // Brit. J. Biomed. Sci. 1997. - 54, № 1.-C.38.

326. Tompson С. B. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease // Science. 1995. - Vol. 267. - P. 1456 - 1462.

327. Waux D. L. The molecular biology of apoptosis / D. L. Waux, A. Strasser // Proc. Natl. Acad. Sci. 1996. - Vol. 93. - P. 2239 - 2244.

328. Wallach D. Placing death under control // Nature. 1997. - Vol. 388. - P. 123 - 126.

329. Webb D. R Bronchialnya astma / D. R. Webb, E. К., C. J. Healy // Bichem. Biophys. 1986. - V. 104-P. 16- 17.

330. Wei Y. H. Oxidative stress and mitochondrial DNA mutations in human aging // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. 1998. - Vol. 217, N 1. - P. 53 - 63.

331. Weissman I. L.Lymphoid tissue architecture. III. Germinal Centers, T cells and thymus dependent vs. thymus independent antigens / I. L. Weissman, G. A. Gutman, S. H. Freidberg, L. Jerabek // Adv. Exp. Med. Biol. 1986. - Vol. 66.1. P. 229 230.

332. Wekerle H. Thymic nurse cells. Lymphoepithelial complexes in murine thymuses: morphological and serological characterization / H. Wekerle, U.- P. Ketelsen, M. Ernst // J. Exp. Med. 1984. - Vol. 151. - P. 925 - 934.

333. Welch W. J. The mammalian stress response: cell physiology and biochemistry of stress proteins // Stress Proteins Biol, and Med. Cold Spring Harbor (N. Y.), 1990. - P. 223 - 278.

334. Wu B. J. The EIA 13S product of adenovirus 5 activates transcription of the cellular human HSP 70 gene /В. J. Wu, H. C. Hurst, G. C. Nicholas et al. // Molec. Cell. Biol. 1986.-V. 6, N 8.-P. 2994 -2999.

335. Wyllie A. H. Cell death: the significance of apoptosis / A. H. Wyllie, J. F. R. Kerr, A. R. Currie // Jnt. Rev. Cytol. 1980. - Vol. 68. - P. 251 - 306.

336. Wyllie A. H. Apoptosis and the regulation of cell numbers in normal and neoplastic tissues overview // Cancer Metastasis Rev. - 1992. - Vol. 11. — P. 95 - 103.

337. Wyllie A. H. Apoptosis: cell death in tissue regulation // J. Path. 1987. — Vol. 153.-P. 313-316.

338. Yamamoto S. Yorihiro. Mashima Ryuichi // Tanpahushisu Rakusan koso — Protein, Nuck. Acid and Enzyme. 1999. - 44, № 8. - C.1254 - 1255.

339. Yang S.Y. A common pathways for T lymphocyte activation involving both the CD3-Ti complex and CD2 determinants / S.Y. Yang, S. Chouaib, B. Dupont // J. Immunol. 1986. - V. 137. - P. 1097 - 1100.