Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменчивость сателлитной ДНК II и IV у крупного рогатого скота, других представителей подсемейства Bovinae и их гибридов

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Изменчивость сателлитной ДНК II и IV у крупного рогатого скота, других представителей подсемейства Bovinae и их гибридов"

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И РАЗВЕДЕНИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

На правах рукописи

г

УДК 636.2:547.903.2

С

ПАВЛОВА Вера Алексеевна

ИЗМЕНЧИВОСТЬ САТЕЛЛИТНОЙ ДНК, II И IV

У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ДРУГИХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ПОДСЕМЕЙСТВА ВОУ^АЕ И ИХ ГИБРИДОВ

Специальность: 03.00.15 — Генетика

А В Т О Р Г. Ф Е Р А Г

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ-ПУШКИН

1994

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор А. Ф. Смирнов, кандидат биологических наук М. К. Слепцов.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Н. В. Томилин (ЦИН РАН), кандидат биологических ¡мук В. Г. Башш (ВНИИГРЖ).

Ведущая организация: Санкт-Петербургский Государственны;"! Университет, кафедра генетики.

Защита состоится 1994 года в час. на

заседании Специализированного, совета Д.020.07.01. по защите докторских диссертаций при Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных по адресу:

189620, Санкт-Петербург—Пушкин, Московское шоссе, 55 а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан

1994 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Ж. Г. Логинов

f. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность теш : Проблема "избыточной" ДНК у эукариотов (С value paradox; была и остается одной из ключевых проблем современной генетики (Conrad, Pagel.1986). В этой связи особой' интерес вызывают разнообразные семейства повторяющихся блоков нуклеотидов по причине вездесущести в геноме и, в большинство случаев, невозможности прямого участия в реализации основных молекулярно-генетических процессов. Экстремальный случай таких повторов представляют так называемые многократно-повторя -ккцпеся фракции хромосомной ДНК, состоящие в основном из тандем-но организованных последовательностей нуклеотидов, локализованных в генетически инертных гетерохроматиновых участках хромосом (Vogt, 1992; Zuckerkan.ll, 1992). Одам из важных направлений исследований по этой проблеме является анализ эволюционной изменчивости фракций хромосомной ДНК, включающий особенности первичной структуры, специфику внутрихромосомной локализаций и • другие структурно-функциональные характеристики. Такие работы приобрели в последние годы особое значенйе в связи с филогенетическими построениями на основе так называемых "молекулярных часов" и возможностями картирования генома высших тавотных и растений (ВолькенштеШг, !989; Темушкик, 1989; Захаров, !992; Захаров и др, 1993; Lewln, 1990; Goodman, 1990; Prokop, 1990; Georges, 1990). Последнее направление, включающзо описание разнообразных типов полиморфизма ДНК (минисателлиты, микросателлиты, полшорфизм длин рестриктных фрагментов - ПДРФ и т.д.), имеет особое значение при работе с культурными видами растений и животных, в генетике человека. R частности, оно является основой для так называемой "Market assistent selection", которая при использовании полиморфных ДНК - маркеров обещает упрощение и ускорение традиционных приемов работы с количественными признаками, каковыми являются практически все биологически вэжнно и хозяйственно-полезные характеристики (Beekmn et.al., 1933; Geldermnn, 1990, 1992; Dentine, 1992). Не исключено, что накопление фактического материала о межвидовых различиях в молекулярной и хршосдако.4 oprafmssiuu гон'глпоекпго аппарата помо-кет решить и одну йуьх'1й"нт;и:ьиу» .•¡pu.lji'vy - гоцотичрску^ "'■'.адду репродуктивной изоляции при уадалешюй тлрвдтции

(Стекленев и др., 1992; Halman, 1989; Orr, 1992).

Представители нескольких видов Bovlnae (быковых), определение животноводческим термином - крупный рогатый скот (КРС), являются особенно перспективным объектом для 'изучения полиморфизма ДНК. Это связано прездэ всего с хозяйственной значимостью этого объекта и, как следствие,- с существенным генетическим разнообразием материала, наличием большого числа контрастных линий и пород, межвидовых гибридов (Завертяев и др., 1984; Моисеева и др.,1992; Захаров, 1993; Hlchmann,1991). Проблема генетического картирования и маркирования генома этого вида является чрезвычайно актуальной. Однако, число исследований такого рода далеко недостаточно. 'Крайне мало и работ, в которых исследовалась бы многократноповторящаяся фракция хромосомной ДНК Bovlnae. Большая их часть связана с молекулярными характеристиками и не касается индивидуального, межпородного и межвидового полиморфизма, специфики хромосомной организации (Matsumoto, 1982; Skowronskl et al., 1984; Pluclennlczak,1985).

Таким образом, данные об особенностях изменчивости многократ-ноповторявдейся фракции у Bos taurus Ь. отрывочны. Практически отсутствует фактический материал о характере распределения при межвидовой гибридизации таких тандемных блоков нуклаотидов. Все это и определило выбор теш нашей работы.

Цель» настоящей работы является оценка молекулярно-гецети-ческими методами изменчивости многократноповторящейся фрвкции ДНК Боз taurus L., родственных видов и гибридов.

В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:

1. С помощь» рестриктного анализа геномной ДНК разных индивидуумов и пород Bos taurus L. оценить полиморфизм сателлит-ных ДНК. .

2. Выявить существование межпородных различий в содержании сателлнтных ДНК (сателлита II), проводя эксперименты по слот-дот гибридизации (якутский скот, холмогорский.скот).

3. Оценить степень межвидового полиморфизма (КРС, як, бизон, Сантенг) многократноповторящейся фракции ДНК генома (са-теллитных ДНК II, IV) при использовании рестриктного анализа

"и блот-гибридкзации с соответствующий клонированными последовательностями сателлитных ДНК (II, IV).

4. Исследовать характер передачи видоспецифичных блоков

сателлитной ДНК (сателлитная ДНК IV) при межвидовой гибридизации (як * КРС, бизон * КРС, бантенг * КРС).

Научная новизна :

- в работе впервые охарактеризован индивидуальный и межпородный полиморфизм организации сателлитных ДНК у Без taurus L. с использованием клонированной последовательности сателлитной ДНК IV Воз tauras L., выявлены межпородные различил в долевом содержании в геноме сателлита II;

- впервые исследованы закономерности передачи фракций сателлитной ДНК при межвидовой гибридизации у быковых. Обращается внимание на возможность качественного (гибриды як * якутский скот) и количественного (гибриды бизон * КРС) отклонения от "ленделевского" наследования таких фракций у гибридов.

Практическая ценность работы : В работе получены данные, позволяющие использовать многократноповторяпциеся фракции ДНК для видовой идентификации, контроля происхождения и анализа результатов межвидовой гибридизации у крупного рогатого скота.

Апробация работы: Основные результаты диссертации были представлены на VII Всесоюзной конференции по структуре и функции хромосом (Пуицшо, 1991), международной. конференции по эмбриогенетшее и молекулярной генетике (Варшава,1992), Всесоюзном съезде генетиков и селекционеров (Минск, 1992), конференции по породообразовзнию (Киев, 1993). Материалы исследовании многократно доложены и обсуждены на отчетах лаборатории Молекулярной организации генома в 1990-1993 г.г., на аспирантских сессиях ВНИИГРЖ (1990-1992 Г.Г.).

Публикации результатов исследований: По томе исследований опубликовано шесть статей.

Объем и структура .диссертации: диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методы, результаты исследований и их обсувденио, выводы и список литературы. Работа изложена на 1оЪ страницах машинописного текста, включая четыре таблицы и 12 рисунков, списка литературы, содержащего 142 публикации отечественных и зарубежных авторов.

- б -

2. МАТЕРИМ И МЕТОДЫ.

Б работе была использована геномная ДНК животных разных пород крупного рогатого скота (якутский скот, холмогорская, черно-пестрая, красная степная, серая украинская), лков, гибридов як * якутский скот, бизонов, бантенгов, гибридов бантенг * КРС, бизон * КРС различной степени кровности. Пробы ткани или крови животных, из которых выделяли геномную ДНК, были получены из Якутского НШбиологии СО РАН, . ВНШГРЖ, Укр.НИИживотновод-ства, Аскании-Нова. Исследованы образцы ДНК из 128 животных.

ДНК выделяли равновесным центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия (Ма/шатис и др., 1984), расщепляли рестриктазами: EcoRI, EcoRV, Xhol, Kpnl, Ps ti, Hpal, АтаП, SalGI, Hlndlll (ШО"Фермент'\ Вильнюс). Фрагменты ДНК разделяли электрофорезом в G.8S агарозном геле (Pharmacia) и переносили на нейлоновые фильтры "Hybond™" слабым вакуумом с использованием щелочного буфера для переноса (0,25 М NaOH, 1,5 М NaCl). Блот-гибридизацию проводили в изотопном варианте (Мэниатис и др., 1984). В качестве зондов для гибридизации были использованы: клонированный в Hlndlll сайте плазмиды pBR322 фрагмент сателлита IV быка (плавучая плотность р = 1.709 г/смэ) размером 3800 п.н. и лигированная в BamHI сайте плазмиды puR222 последовательность сателлита II (р = 1.723 г/смэ) длиной 680 п.н.., полученные от доктора А.Плученничака (Польша). Мечение зондов проводили методом случайных праймеров с использованием набора фирмы "Биопол" (Мазин и др., 1990).

После процедуры блот-гибридизации, включающей этап пред-гибридизации, гибридизации и отмывок, фильтр экспонировали с рентгеновской пленкой "Hyperíllm МР".

Для проведения дот-блот анализа при оценке содержания сателлита II в геномах разных пород КРС нами был использован не-изотопний вариант гибридизации ДНК-ДНК. Зонд метили фотобио-тином с применением стандартного набора реактивов для неизотопного мочения фирмы "Serva" (Германия).

Нанесешм ДНК на нейлоновые фильтры "Hybond ™" осуществляли с помощью специальной системы фирмы "Hoeíer Scientific lnatruffient".

Ьнявлс-нио сайтов гибридизации проводили в растворе, содер-

жащем конъюгат стрептовидина со щелочной фосфатазой в концентрации 2 мкг/мл; Тестируемые пробы геномной ДНК сравнивали по интенсивности окрашивания с положительным контролем, в качестве которого выступала плазмида рий222, содержащая фрагмент сателг лита II быка.

Рассчет содержания сателлита II в геномной ДНК животных проводили по формуле :

где : а - размер целевой последовательности

а.

а - размер диплоидного генома

х - ш • —— , ш - количество наносимой пробы

х - количество ДНК, которое потенциально способно к гибридизации в нанесенной пробе ДНК.

Принимали также во внимание, что размер гаплоидного генома крупного рогатого скота - 7.3« Ю® п.н. (Наша, Н1^1пз> 1987; Т1егзсИеЬ.а!., 1989).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Качественная и количественная изменчивость сателлитных ДНК у ВЛаигиэ Ь.

Для обнаружения индивидуального и межпородного полиморфизма, а также полового диморфизма в организации многократноповторяю-щейся фракции генома хромосомная ДНК от 105 животных, принадлежащих к розным породам КРС (черно-пестрой, красной степной, якутской, холмогорской, серой украинской), обрабатывалась рест-риктазами. На электрофореграмме рестрщировзнной геномной ДНК наблюдали полосы - протяженные фрагменты сатедяятной ДНК, без соответствующих сайтов рестрикции. Поскольку исчезновение (или появление) сайта рестрикции должно отражаться в картине электрофореза или блот-гибридизации, то такой экспериментальный подход позволяет судить о стабильности сателлитных ДНК в отношении подобного механизма эволюции. В результате исследований нам ни

разу не был выявлен случай исчезновения (появления) новой полосы при электрофорезе что, указывает на отсутствие ПДМ в отношении сателлитных ДНК. То есть существует как-бы видоспецифич-шй рисунок рестрикции геномной ДНК КРС, определенный энзимом "(рис.1).

X-HlndIII EcoRI Patl SalGI Hpal Hindlll EcoRV Avail

23.7 -9.5 -6.7 - -

4.3 - _ _— - -

2.3 -2.0 = 0.6 - II III -

..... 11 '

Рис.1. Схема распределения фрагментов много-кратнопоеторяющейся фракции геномной ДНК КРС после рестрикции.

Не обнаружен нами и половой диморфизм при расщеплении • геномной ДНК быков и коров, что косвенно указыет на-отсутствие протяженных блоков сателлитных ДНК в Y-хромосоме Boa taurus L. Наличие таких пучков проявилось бы .в существовании дополнительного Диска на электрофореграммах рестрикции геномной ДНК быков.

С помощью блот-дот гибридизации нами была произведена оценка количественного содержания в геноме животных якутской и холмогорской пород крупного рогатого скота нуклеотидных блоков, гомологичных сателлитной ДНК II. При этом в качестве .зонда использовали фотобиотинилированный 680 п.н. фрагмент сателлитной ДНК II (плавучая плотность 1.723 г/сма).

Параллельно проводилась Слот-гибридизация изотопным методом. Отталкиваясь от размера гаплоидного генома крупного рогатого скота, составляющего в среднем 7,30+0,07 пг. (Tlersch et.al.,1989), нам удалось оценить содержание целевой последовательности в геномной ДНК согласно величине интенсивности гибридизации.

По нашим данным межпородные различия довольно существенны:

животные якутской и холмогорской пород достоверно различаются но содержанию сэтвллитной ДНК II (табл.1).

Таблица 1.

Доля последовательностей, гомологичных сателлитной ДНК II, • в геномах представителей якутской и холмогорской пород КРС на основе результатов дот - блот гибридизации с фотобиотинилированным 600 п.и. фрагментов сателлита II,

Порода Количество исследованных животных Доля в геноме (%) Достоверность различий

холмогорская 6 0.ДНО.03 р<0.01

якутская 11 0.80+0.04

На рис.2 представлена количественная картина таких 'различий, непосредственно наблюдаемая после процедура гибридизации.

А Б

Рис.2. Картина блот-дот гибридизации геномной ДНК ВЛаигиз Ь. якутской и холмогорской пород. Ячейки А - содержат соответсвенно • 3 и 1 мкг ДНК животных якутской породы, ячейки Б - 3 и 1 мкг ДНК животных холмогорской порода КРС.

В литературе описывается обширная внутривидовая изменчивость по содержанию ДНК, зачастую связанная с ее повторяющимися фракциями для представителей самых разнообразных систематичес-

ких груш от растений (Чернышев, 1985) до грызунов (Lohe et al, 1984). Есть сообщение о том, что и породы KFC (кианская, бестужевская, симментальская и др.) могут довольно существенно различаться по количественному содержанию в геноме различных семейств повторов (Кутдаеов и др., 1985). Наши эксперименты подтвердили наличие существенных 'межпородных различий в содержании сателлитной ДНК у животных разных пород КРС и представили соответствующие количественные характеристики для са-сателлитной ДНК II.

Таким образом нам удалось обнаружить количественную вариабельность (индивидуальную и межпородную) сателлитных фракций ДНК в геноме представителей разных пород Воз taurus L. Для этих блоков нуклеотидов была отмечена существенная стабильность в отношении точковых мутаций, делеций, тестируемых с помощью ВДРФ.

3.2. Межвидовые различия в организации сателлитных ДНК II и IV в пределах подсемейства Bovlnae.

Нами исследовалась судьба сателлитной ДНК II и IV у представителей двух родов Bos (КРС,бантенг,як) и Bison (бизон) подсемейства Bovlnae и у двух подвидов В.taurus - В.taurua (холмогорская, черно-пестрая, красная степная, серая украинская) и B.taurua turanomongollca (якутский скот). Некоторые межвидовые различия обнаруживаются уже после рестрикции геномной ДНК. Так, сателлитные ДНК КРС и яка показывают существенно различную организацию (рис.ЗА).

Эксперименты по блот-гибридазации EcoRI рестриктов проб геномных ДНК этих видов животных с клонированными фрагментами сателлитных ДНК II и IV продемонстрировали разную степень- эволюционной стабильности соответствующих нуклеотидных блоков. Так, согласно нашим данным у всех этих животных присутствуют последовательности, гомологичные сателлитной ДНК II. Рисунок гибридизации практически идентичен имеется ода сайт гибридизации размером аоо п.к.

Клонированный фрагмент сателлитной ДНК IV дает более сложный рисунок блот-шбридизации с геномными ДНК всех исследованных видов. Для представителей разных пород Воз taurus L. (кроме якутской) наблюдается три сайта гибридизации, примерно соответ-

якутской) наблюдается три сайта гибридизации, примерно соответствующих размерам фрагментов в 1700,- 2100, 3800 п.н.(рис.ЗБ;4). То есть, два из них практически совпадают с двумя фрагментами (1600 и 2138 п.н.), наблюдаемыми после простой рестрикции геномной ДНК крупного рогатого скота рестриктазой ЕсоМ (рис.3).

А)

Размер КРС,бизон як Ь) Размер КРС бизон бантенг як

п.н. бантенг п.н.

831 - 4800 _

910 970 - 1— 4000 3800 — —~ -

1400 1600 - - 2500 2200 —

2100 - - 2100 — — — -

2400 2730 - 1700 — — .....—1------ —-

Рис.3. Схемы электрофореграмм ЕсоК1 рестриктов геномной ДНК КРС, бизона, бантенга. яка (А) и результатов блот-гибридизации ЕсоМ рестриктов геномной ДНК этих видов с клонированным фрагментом сателлита IV Воз 1аигия (Б).

Отметим, что у 7 из 27. исследованных нами животных якутской породы КРС обнаружился дополнительный сайт гибридизации в 2500 п.н., далее выявленный только у яков (рис.3). Это единственный случай индивидуального и межпородного полиморфизма, отмеченный нами у Воз гаигиэ Ь.

Животные других исследованных родов и видов также обнаруживают отличную и опять строго видоспецифичную картину гибридизации с клонированной последовательностью сателлита IV быка.

Так, у яка Воз шигиз, помимо наблюдаемых у крупного рогатого скота полос размером 1700, 2100 и 3800 п. н., прослеживаются и дб;з дополнительных диска - 2500 п.н. и 4800 п.н., что указывает на существенную эволюционную перестройку геномной оргпта-тлких блоков многократных повторов у этого вида (рис.ЗБ). Эволюционная перестройка блоков нуклеотияов сателлитной ДНК IV

сальных для быковых трех полос, наблюдаются два дополнительных сайта гибридизаций в 4000 п.н. и 2200 п.н.. А у бантенга - дополнительная полоса в 2200 п.н. (рис.ЗБ).

Таким образом, сателлит IV в отличие от сателлита II• более быстро эволюционирует у Воу1пае. Различие в его организации, связанное с каким-то изменением структуры основного блока, отмечается уже на уровне подвида (якутский скот). Выявляются и четкие межвидовые различия в его организации.

Следовательно, в ряде случаев исследование сателлитной ДНК позволяет четко контролировать происхождение животных и производить видовую, идентификацию.

3.3. Межвидовая гибридизация и судьба сателлитной ДНК IV.

В нашей работе исследовалась изменчивость сателлитной ДНК IV при межвидовой гибридизации, поскольку именно повторы, являющиеся в большинстве случаев наиболее лабильной частью генома, подвергаются мейотическому драйву и связаны с гетерохроматизацией.

Рисунок блот-гибридизации сателлитной ДНК IV имел четкие межвидовые .различия у бизона, бантенга, яка и КРС. Поэтому можно предположить, что при скрещивании - согласно законам Менделя - -гибриды ?1 должны получать половину хромосомного набора отца и матери, и для них должен быть характерным "смешанный" ' рисунок блот-гибридизации. Они должны иметь все полосы (сайты гибридизации), представленные в родительских геномах. У гибридов последующих генераций должно меняться в соответсвии с изменением кровности количественное 'содержание родительских форм сатёллитных ДНК. В целом, перечисленные выше закономерности наблюдались. Вместе с тем, нами .отмечен ряд принципиальных отклонений от этих правил. Так, у гибридов ЗМ як * якутский скот (исследовано три гибрида) всегда наблюдался интенсивный диск в 2500 п.н. (сходен по этому показателю с яком), хотя у 20 из 27 исследованных нами чистокровных животных якутской породы, он отсутствовал. Наиболее интересно то, что у всех гибридов не выявлялась полоса в 4800 п.н., облигатно присутствующая у всех исследованных нами яков (рис.4).

Г"

48Ю П.H. —

3300 JT.H. — - gsj

2500 п.н. —La - • » « 2100 п.н, —^

1700 II.H. -[y, oks»

а) б) в) г)

Рис.8. Картина блот-гибридизащга геномной ДНК гибридов як * як.скот (а-в), яка (д) и КРС (г,е,ж) с клонированным фрагментом еатвл-лит ной ДНК IV Воз гаигиз Ь. Стрелкой отмечен отсутствующий у Р1 гибридов Диск в 4800 п. н.

У межвидовых гисрвдоь бциин ». сарый украинский скот (исследовано 5 животных) и бантенг * красный стопной скот (исследовано 2 животных) разной степени кровности наш МТстпительно наблюдалась суперпозиция родительских типов

олтоллятнсй ЛНК IV (узе.5; 6). Однако, чэдга не отмечена строгая

коjdоIлoiïîï: 1 л зггййсикооть между ;!Нте:п!;те^:'Г№ с.идссг;ец:фгт-вого докя и кровпостмк ДНК жиьотшх меньшая кровност -и,с-с, дмллп более иншкшышй ыАридоатшйшй енпт.

Г* j

, ... СО :

I

щт '

mèèSŒ»

Д) е) ж)

3800 п.н.•

2200 П.Н. 2100 п.н.-

1700 П.Н.■

V -4

. Г ' '

I ,

а) б) в)

Рис.5. Результат блот-гибридизации геномной ДНК Сантенга, гибрида бантенг * красный степной скот, крупного рогатого скота с клонированным фрагментом ДНК IV Воз 1аигчэ Ь.: а) бантенг, б) 1/2 бантенг * 1/2 кр. ст. в) красный степной скот.

Размер п.н. Бантенг ■ ч/кр. Гибрид бант.* КРС. КРС ч/кр. Гибрид биз.* КРС. Бизон . ч/кр.

4000 3800 - --

2200 '2100 - -■ - — . -

1700

Рис.6. Схема результатов блот-гибридизации бантенга, бизона, КРС и гибридов бантенг * КРС, бизон * КРС с клонирован-• ннм фрагменом сателлита IV ВДаигиз.

Таким образом, можно говорить о каких-то нарушениях свобод- • ного независимого перераспределения родительских фракций сателлитных ДНК при межвидовой гибридизации. Очевидно,' наблюдается "взаимодействие" некоторых многократноповторяющихся фракций, по крайней мере, в ограниченных частях генома. В литературе имеется указание на возможность такого взаимного локального влияния родительских геномов. То есть гибридный геном,-вероятно, не является простой суммой родительских геномов (Тихомирова и др., 1988; Алиев и др., 1989; Волков и др., 1989; Свиташев и др., 1992; Hill et. al., 1991).

Следовательно, исследование повторяющихся последовательностей - материала, активно участвующего в эволюционном преобразовании генома, - может служить своеобразным "маркером" изменений при породо- и видообразовании, межвидовой .гибридизации и гетерозисе. Относительная простота работы с такими последовательностями позволяет проводить соответствующие эксперименты и может послужить началом более комплексных молекулярно-биологических исследований этих важных генетических процессов.

вывода,

I. Рестриктный анализ геномной ДНК Воз taurua L. с использованием ферментов EooRI, EcoRV, -Xhol, SalOI, Kpnl, Pstl, Hpal, Avail, Hlndlll обнаружил стабильный видоопецифнческий рисунок, отражающий организацию многократноповторящейся фракции. Для этой фрзкщга ДНК характерно отсутствие существенного индивидуального и межпородного полиморфизма длин рестриктных фрагментов (ПДРФ).

2. Предполагается существование 'межпородных различий в содержании разных Фракций многократноповторящейся ДНК у Boa taurus 1. Такие различия оыли обнаружены с помощью неизотопной слот-дот гибридизации о клонлроьашшм зондом сателлитной ДНК IT для холмогорского и якутского скота (0.4!<0.03"« И 0.8.0.04? ни геном соответственно).

3.Р|>'?трлкпга& анализ шгошой ДНК КРС, яка, бизона, бан-тннч» (с ф'.'рм'.нтом ii'^Ki) щу'.ч- к-:.пгтрировал наличие существенного межвидового по.!;>'.мч;.;1;:-мо орртшя.'.щш с.тнми.-.г.пяс ДНК у Никоторых йз tnm I идол (як, Ki;0i а ьо-'мпжшють И'Члс.и»».:»-

у некоторых из этих видов (як, КРС) и возможность использования ДЦК& по таким" блокам для контроля происховдения.

4. ' Блот-гибридизация геномной ДНК яка, бантенга, бизона с клонированной последовательностью сателлита II быка подтвердила эволюционную консервативность этого блока нуклеотидов. Наличие видовой специфики в организации многократных повторов было обнаружено для сателлита IV в сходных экспериментах.

5. При изучении закономерностей передачи родительских блоков сателлита IV в межвидовой гибридизации як * якутский скот обнаружен случай неменделевского наследования - отсутствие одного из фрагментов (4800 п.н.) родительской ДНК яка у гибридов.

6. У межвидовых гибридов бантенг » КРС, бизон * КРС разных генераций отмечена закономерная передача фракций сателлитной ДНК IV родительских геномов в соответствии с законом Менделя. Обращается внимание на отклонение от ожидаемого количественного соотношения родительских компонентов этой фракции хромосомы у животных разной степени кровности.

-i7 -

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО та® ДИССЕРТАЦИИ

1. С.А.Финашин, В.А.Павлова, ¡O.A.Логинова, О.Г.Чиряева, М.К.Слепцов, А.Ф.Смирнов "Анализ оателлитных последовательностей у КРС и яка". Бюллетень ВНИИРГЖ,'вып. 1(2, 1939, стр.3-6.

2. Ю.А.Логинова, О.В.Рассказова, С.А.Финавгин, В.А.Павлова, А.Ф.Смирнов "Хромоспецифичность распределения сателлита II (1.723 г/смэ) у КРС".Бюллетень БНИМРГЖ, вып. 124, 1991, стр.7-9.

3. С.А.Финашин, В.А.Павлова, М.К.Слепцов, Ю.А.Логинова,'

H.И.Босак, А.М.Ефимов, Ю.Н.Захарова, И.В.Чурюша, А.Ф.Смирнов "Особенности хромосомного распределения и изменчивости многократноповторяющейся фракции ДНК в геноме Воз taurus,!.". Цитология и генетика,вып.6,

1992, стр.21-28. '

4. Б.А.Павлова "Изменчивость многократноповторяющейся, Фракции геномной ДНК у крупного рогатого скота nptf межвидовом скрещивании". Бюллетень ВНИИРГЖ, вып. 137,

1993, стр.46-47.

5. Павлова В.А., Треус В.И., Ясинецкая И.И., Стекленев Е.П., Слепцов М.К., Смирнов А.Ф. "Особенности эволюционной изменчивости оателлитных ДНК и гетерохроматиновых районов у быковых".. Сб. Молекулярно-генети-ческие маркеры животных. Киев, "Аграрные науки",

1994, с.тр.117.

6. Sffllrnov A.F.,. Bosak N.P., Eílmov A.M., Loglnova J.A., Deresheva S.E., Chyriaeva O.G.,. Treus i.V., Saaragrtov M.G., Pavlova V.A., Kozakov V.K., Churklm

I.V., Zakarova .i.V. "Genetic mapping aid marking of animal genomes". Anlm.Scl.Papers a.Rep., Vol.ii, 1993, p.99-102.