Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменчивосьб сателлитной ДНК II и IV у крупного рогатого скота, других представителей подсемейства Bovinae и их гибридов

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Изменчивосьб сателлитной ДНК II и IV у крупного рогатого скота, других представителей подсемейства Bovinae и их гибридов"

г* — -"Л

4* \ ''

О

всероссийский научно-исследовательский институт

генетики и разведения сельскохозяйственных животных

На правах рукописи

УДК 636.2:047.903.2

ПАВЛОВА Вера Алексеевна

ИЗМЕНЧИВОСТЬ САТЕЛЛИТНОЙ ДНК, II И IV

У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ДРУГИХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ПОДСЕМЕЙСТВА ВОУ1МАЕ И ИХ ГИБРИДОВ

Специальность: 03.00.15 — Генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

санкт-петербург-пушкин 1994

• Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных.

Научные руководители: доктор биологических паук, профессор Л. Ф. Смирнов, кандидат биологических паук М. К. Слепцов.

Официальные оппоненты: доктор биологических паук, профессор Н. В. Томилин (ЦИН РАН), кандидат биологических паук В. Г. Бавнн (ВНИИГРЖ).

Ведущая организация: Санкт-Петербургский Государственный Университет, кафедра генетики.

заседании Специализированного, совета Д.020.07.01. по защите докторских диссертаций при Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных по адресу:

189620, Санкт-Петербург—Пушкин, Московское шоссе, 55 а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан » 1991 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доктор сельскохозяйственных наук,

Защита состоится

час. на

профессор

Ж. Г. Логинов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы : Проблема "избыточной" ДНК у эукариотов (С value paradox) была и остается одной из ключевых проблем современной генетики (Conrad, Pagel,1986). В этой связи особый' интерес вызывают разнообразные семейства повторяющихся блоков нуклеотидов по причине вездесущести в геноме и, в большинстве случаев, невозможности прямого участия в реализации основных молекулярно-генетических процессов. Экстремальный случай таких повторов представляют так называемые многократно-повторяющиеся фракции хромосомной ДНК, состоящие в основном из тандем-но организованных-последовательностей нуклеотидов, локализованных В генетически инертных гетерохроматиновых участках хромосом (Vogt, 1992; Zuckerkandl, 1992). Одним из ваших направлений исследований по этой проблеме является анализ эволюционной изменчивости фракций хромосомной ДНК, включающий особенности первичной структуры, специфику внутрихромосомной локализации и другие структурно-функциональные характеристики. Такие -работы приобрели в последние годы особое значение в связи с филогенетическими построениями на основе так называемых "молекулярных часов" и возможностями картирования генома высших животных и растений (Болькенштейн, 1989; Темушкин, 1989; Захаров, 1992; Захаров и др, 1993; Lewln, 1990; Goodman, 1990; Prokop, 1990; Georges, 1990). Последнее направление, включающее описание разнообразных типов полиморфизма ДНК (мшшеателлиты, микросателлиты, полиморфизм длин рестриктных фрагментов - ПДРФ и т.д.), имеет особое значение при работе с культурными видами растений и животных, в генетике человека. В частности, оно является основой для так называемой "Market assistent selection", которая при использовании полиморфных ДНК - маркеров обещает упрощение и ускорение традиционных приемов работы с количественными признаками, каковы?,® являются практически все биологически важные и хозяйственно-полезные характеристики (Beckman et.al., 1983; Geldermann, 1990, 1992; Dentlne, 1992). Не исключено, что накопление фактического материала о межвидовых различиях в молекулярной и хромосомной организации генетического аппарата поможет решить и еще одну фундаментальную проблему - генетическую пгмроду - репродуктивной изоляции при отдаленной гибридизации

(Стекленев и др., 1992; Halman, 1989; Orr, 1992).

Представители нескольких видов Bovlnae (быкових), определенные животноводческим термином - крушшй рогатый скот (КРС), являются осооашо перспективным объектом для изучения полиморфизма ДНК. Это связано презда всего с хозяйственной значимость! этого ооъекта и, как следствие,- с существенным генетические разнообразием материала, наличием большого числа контрастны; линий и пород, межвидовых гибридов (Завертяев и др., 1934; Моисеева и др.,1992; Захаров, 1993; Hlchmann,1991). Проблема генетического картирования и маркирования генома этого видг является чрезвычайно актуальной. Однако, число исследовашй такого рода далеко недостаточно. 'Крайне мало и работ, в которш исследовалась бы многократноповторящаяся фракция хромосомной ДКК Bovlnae. Большая их часть связана с молекулярная характеристиками и не касается индивидуального, межпородного i мешщсвого полиморфизма, специфики хромосомной организацш (Matsumoto, 1982; Skowronskl et al., 1984; PluclennlcEak,1985), Таким образом, данные об особенностях изменчивости многократ-ноповторящейся фракции у Bos taurus L. отрывочны. Практичесю отсутствует фактический материал о характере распределения npi мекввдовой гибридизации таких тандемных блоков нуклеотидов. Все это и определило выбор темы нашей работы.

Целью настоящей работы является оценка молекулярно-генети-ческими методами изменчивости многократкоповторящейся фракцш ДКК Воз taurus L., родственных видов и гибридов.

В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:

1. С помощью рестриктного анализа геномной ДНК разных индивидуумов и пород Bos taurus L. оценить полиморфизм сателлит-ных ДКК. •

2. Еыявить существование межпородных различий в содержанш сателл1ткых ДНК (сателлита II), проводя эксперименты m слот-дот гибридизации (якутский скот, холмогорский скот).

3. Оценить степень ме»звдового полиморфизма (КРС, як, бизон, бантенг) многократкоповторящейся фракции ДНК генома (са-те.тлитных ДНК II, IV) при использовании рестриктного анализ! и Слот-гибридизации с соответствующий клонированными последо вательксстями сатедлитных ДНК (II, IV).

4. Нсследсьать характер передачи видоспецифичных блоко;

сателлитной ДНК (сателлитная ДНК IV) при межвидовой гибридизл-ции (як * КРС, бизон * КРС, Оантенг * КРС).

Научная новизна :

- в работе впервые охарактеризован индивидуальный и межпородный полиморфизм организации сателлитных ДНК у Воз taurus L.' с использованием клонированной последовательности сателлитной ДНК IV Bos taurus L., выявлены межпородные различия в долевом содержании в геноме сателлита II;

- впервые исследованы закономерности передачи фракций сателлитной ДНК при межвидовой гибридизации у быковнх. Обращается внимание на возможность качественного (гибриды як * якутский скот) и количественного (гибриды бизон * КРС) отклонения от "мэнделевского" наследования таких фракций у габридов.

Практическая ценность работы : В работе получены данные, позволяющие использовать многократноповторящиеся фракции ДНК для видовой идентификащш, контроля происхождения и анализа результатов межвидовой гибридизации у крупного рогатого скота.

Апробация работы: Основные результаты диссертации были представлены на VII Всесоюзной конференции по структуре и функции хромосом (Пущино, 1991), международной конференции по эмбриогенэтике и молекулярной генетике (Варшава,1992), Всесоюзном съезде генетиков и селекционеров (Минск, 1992), конференции по породообразовашш (Киев, 1993). Материалы исследований многократно доложены и обсувдены на отчетах лаборатории Молекулярной организации генома в 1990-1993 г.г., на аспирантских сессиях ВНИМГРЖ (1990-1992 Г.Г.).

Публикации результатов исследований: По теме исследований опубликовано шесть статей.

Объем и структура .диссертации: диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материал и методы, результаты исследований и их обсуждениевыводи и список литературы. Работа изложена на 98 страницах машинописного текста, включая четыре таблицы и 12 рисунков, списка литературы, содержащего 142 публикации отечественных и зарубежных авторов.

- б -

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

Б работе Сила использована геномная ДНК животных разных пород крупного рогатого скота (якутский скот, холмогорская, черно-пестрая, красная степная, серая украинская), лков, гибридов як * якутский скот, бизонов, Оантенгов, гибридов бантенг * КРС, бизон » КРС различной степени кровности. Пробы ткани или крови животных, из которых выделяли геномную ДНК, были получены из Якутского НИИбиолопш СО РАН, . ВНЖГРЖ, Укр.НШшшотновод-ства, Аскании-Нова. Исследованы образцы ДНК из 128 животных.

ДНК выделяли равновесным центрифугированием в градиенте плотности хлористого цезия (Маниатис и др.,1984), расщепляли рестриктазами: EcoRI, EcoRV, Xhol, Kpnl, PatI, Hpal, Avail, SalGI, Hlndlll (НПО"Фермент", Вильнюс). Фрагменты ДНК разделяли электрофорезом в 0,8й агарозном геле (Pharmacia) и переносили на нейлоновые фильтры "Hybond™" слабым вакуумом с использованием щелочного буфера для 'переноса (0,25 M NaOH, 1,5 M NaCl). Блот-гибридизацию проводили в изотопном варианте (Маниатис и др., 1984). В качестве зондов для гибридизации били использованы: клонированный в Hlndlll сайте плазмиды pBR322 фрагмент сателлита IV быка (плавучая плотность р = 1.709 г/см3) размером 3800 п.н. и лигированная в BamHI сайте плазмиды puR222 последовательность сателлита II (р = 1.723 г/см3) длиной 68С п.н.., полученные от доктора А.Плучешшчака (Польша). Мечение зондов проводили методом случайных праймеров с использованием набора фирмы "Биопол" (Мазин и др., 1990).

После процедуры блот-гибридизации, включающей этап пред-гибридизащш, гибридизащш и отмывок, фильтр экспонировали с рентгеновской пленкой "Hyperillm MP".

Для проведения дот-блот анализа при оценке содержания сателлита II в геномах разных пород КРС нами был использован неизотопный вариант гибридизащш ДНК-ДНК. Зонд метили фотобио-тином с применением стандартного набора реактивов для неизотопного мочения фирмы "Serva" (Германия).

Нанесет« ДНК на нейлоновые фильтры "Hybond ™" осуществляли с помощью специальной системы фирмы "Hoeier Scientific Instrument".

Выявление сайтов гибридизации проводили в растворе, содер

жащем конъюгат стрептовидина со щелочной фосфатазой в концентрации 2 мкгЛиь Тестируемые пробы геномной ДНК сравнивали по интенсивности окрашивания с положительным контролем, в качестве которого выступала плазмида риИ222, содержащая фрагмент сателлита II быка.

Рассчет содержания сателлита II в геномной ДНК животных проводили по формуле :

где : « - размер целевой последовательности а - размер диплоидного генома

х-= и- —, . ш - количество наносимой пробы а

3 х - количество ДНК, которое потенциаль-

но способно к гибридизации в нанесенной пробе ДНК.

Принимали также во внимание, что размер гаплоидного генома крупного рогатого скота - 7.3*10' п.н. (Наша, Н1яв1пз, 1987; ИегзсЬ е1;.а1., 1989).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Качественная и количественная изменчивость сателлитных ДНК у ВЛаиггш Ь.

Для обнаружения индивидуального и межпородного полиморфизма, а также полового диморфизма в организации многократноповторяю-щейся фракции генома хромосомная ДНК от 105 животных, принадлежащих к разнил породам КРС (черно-пестрой, красной степной, якутской, холмогорской, серой украинской), обрабатывалась рест-риктазами. На злектрофореграмме рестрицировакной геномной ДНК наблюдали полосы - протяженные фрагменты сателлитной ДНК, без соответствующих сайтов рестрикции. Поскольку исчезновение (или появление) сайта рестрикции должно отражаться в картине электрофореза или блот-гибридизации, то такой экспериментальный подход позволяет судить о стабильности сателлитных ДНК в отношении подобного механизма эволюции. В результате исследований нами ira

разу не был выявлен случай исчезновения (появления) новой полосы при электрофорезе что, указывает на отсутствие ЦЦРФ в отношении сателлитных ДНК. То есть существует как-бы видоспецифич-ный рисунок рестрикции геномной ДНК КРС, определенный энзимом '(рис.1).

X-HlndIII EcoRI PstI SalGI Hpal Hlndlll EcoRV Avail

23.7 -

9.5 -

6.7 - - l

4.3 - - —— - -

2.3 - —_ — 1 " " 1 1

2.0 = - ■-

0.6 - ——— -

-

Рис.1. Схема распределения фрагментов много-кратноповторяюцвйся фракции геномной ДНК КРС после рестрикции.

Не обнаружен наш и половой диморфизм при расщеплении• геномной ДНК быков и коров, что косвенно указыет на отсутствие протяженных блоков сателлитных ДНК в У-хромосоме Воз 1аигив Ь. Наличие таких пучков проявилось бы .в существовании дополнительного диска на электрофореграммах рестрикции геномной ДНК быков.

С помощью блот-дот гибридизации нами была произведена оценка количественного содержания в геноме животных якутской и холмогорской пород крупного рогатого скота нуклеотидных блоков, гомологичных сателлитной ДНК II. При этом в качестве зонда использовали фотобиотинилированный 680 п.н. фрагмент сателлитной ДНК II (плавучая плотность 1.723 г/смэ).

Параллельно проводилась блот-гибридизация изотопным методом. Отталкиваясь от размера гаплоидного генома крупного рогатого скота, составляющего в среднем 7,30±0,07 пг. (Т1егэс1г еиа1., 1989), нам удалось оценить содержание целевой последовательности в геномной ДНК согласно величине интенсивности гибридизации.

По нашим данным межпородные различия довольно существенны:

животные якутской и холмогорской пород достоверно различаются по содержанию сателлитной ДНК II (табл.1).

Таблица 1.

Доля последовательностей, гомологичных сателлитной ДНК II, • в геномах представителей якутской и холмогорской пород КРС на основе результатов дот - блот гибридизации с' фотобиотитиированныл 680 п.н. фрагментом сателлита II.

Порода Количество исследованных животных Доля в геноме (!?) Достоверность различий

холмогорская 6 0.41+0.03 р<0.01

якутская 11 0.80+0.04

На рис.2 представлена количественная картина таких 'различий, непосредственно наблюдаемая после процедуры гибридизации.

А Б

Рис.2. Картина блот-дот гибридизации геномной ДНК ВДаигиз Ь. якутской и холмогорской пород. Ячейки А - содержат соотвэтсвенно 3 и 1 мкг ДНК животных якутской породы, ячейки Б - 3 и 1 мкг ДНК животных холмогорской породы КРС.

В литературе описывается обширная внутривидовая' изменчивость по. содержанию ДНК, зачастую связанная с ее повторяющимися фракциями для представителей самых разнообразных систематичес-

ких групп or растений (Чернышев, 1985) до грызунов (Lohe et al, 1984). Есть сообщение о том, что и породы КРС (кианская, бестужевская, симментальская и др.) могут довольно существенно различаться по количественному содержанию в геноме различных семейств повторов (Кутдасов и др., 1985). Наши эксперименты подтвердили наличие существенных межпородных различий в содержании сателлитной ДНК у животных разных пород КРС и представили соответствующие количественные характеристики для са-сателлитной ДНК II.

Таким образом нам удалось обнаружить количественную вариабельность (индивидуальную и межпородную) сателлитных фракций ДНК в геноме представителей разных пород Воз taurus L. Для этих блоков нуклеотидов была отмечена существенная стабильность в отношении точковых мутаций, делеций, тестируемых с помощью ПДРФ.

3.2. Межвидовые различия в организации сателлитных ДНК II и IV в пределах подсеиейства Bovlnae.

Нами исследовалась судьба сателлитной ДНК II и IV у представителей двух родов Воз (КРС,бантенг,як) и Bison (бизон) подсемейства Bovlnae и у двух подвидов В.taurus - В.taurus (холмогорская, черно-пестрая, красная степная, серая украинская) и В.taurus turanomongollca (якутский скот). Некоторые межвидовые различия обнаруживаются 'уже после рестрикции геномной ДНК. Так, сателлитные ДНК КРС и яка показывают существенно различную организацию (рис.ЗА).

Эксперименты по блот-гибридизации EcoRI рестриктов проб геномных ДНК этих видов животных с клонированными фрагментами сателлитных ДНК II и IV продемонстрировали разную степень-эво-люциошюй стабильности соответствующих нуклеотидных блоков. Так, согласно нашим данным у всех этих животных присутствуют последовательности, гомологичные сателлитной ДНК II. Рисунок гибридизации практически идентичен : имеется один сайт гибридизации размером 800 п.н.

, Клонированный фрагмент сателлитной ДНК IV дает более сложный' рисунок блот-гибридизации с геномными ДНК всех исследованных видов. Для представителей разных пород Bos taurus L. (кроме якутской) наблюдается три сайта гибридизации, примерно соответ-

якутской) наблюдается три сайта гибридизации, примерно соответствующих размерам фрагментов в 1700,-2100, 3800 п.н.(рис.ЗБ;4). То есть, два из них практически совпадают с двумя фрагментами (1600 и 2138 п.н.). наблюдаемыми после простой рестрикции геномной ДНК крупного рогатого скота рестриктазой ЕсоМ (рис.3).

Размер КРС,бизон як Ь) Размер КРС бизон бантенг як

п.н. бантенг п.н.

831 -' 4800 —

910 970 - 4000 3800 — — -

1400 1600 - - 2500 2200 —

2100 - - 2100 — — — —

2400 2700 ——'—■ 1700 — — » —

Рис.3. Схемы электрофорвграмм EcoRI рестриктов геномной ДНК КРС, бизона, бантенга, яка (А) и результатов блат-гибридизации EcoRI рестриктов геномной ДНК этих видов с клонированным фрагментом сателлита IV Воз taurua (Б).

Отметим, что у 7 из 27. исследованных нами животных якутской породы КРС обнаружился дополнительный сайт гибридизации в 2500 п.н., далее выявленный только у яков (рис.3). Это единственный случай индивидуального и межпородного полиморфизма, отмеченный нами у Boa taurus L.

Животные других исследованных родов и видов также обнаруживают отличную и опять строго видоспецифичную картину гибридизации с клонированной последовательностью сателлита IV быка.

Так, у яка Воз mutus, помимо наблюдаемых у крупного рогатого скота полос размером 1700, 2100 и 3300 п. н., прослекивзются и два дополнительных диска - 2500 п.н. и 4800 п.н., что указывает на существенную эволюционную перестройку геномной организации таких блоков многократных повторов у этого вида (рис.ЗБ). Эволюционная перестройка блоков нуклоотидов сптвллитной ДНК IV

О^и^-^М^ /^Рлщ и ¿лиггм.а.Тсщ, у ^

сальных для быковых трех полос, наблюдаются два дополнительных сайта гибридизаций в 4000 п.н. и 2200 п.н.. А у бантенга - дополнительная полоса в 2200 п.н. (рио.ЗБ).

Таким образом, сателлит IV в отличие от сателлита II' более быстро эволюционирует у Воу1пае. Различие в его организации, связанное с каким-то изменением структуры основного блока, отмечается уже на уровне подвида (якутский скот). Выявляются и четкие межвидовые различия в его организации.

Следовательно, в ряде случаев исследование сателлитной ДНК позволяет четко контролировать происхождение животных и производить видовую, идентификацию.

3.3. Межвидовая гибридизация и-судьба сателлитной ДНК IV.

В нашей работе исследовалась изменчивость сателлитной ДНК IV при межвидовой гибридизации, поскольку именно повторы, являющиеся в большинстве случаев наиболее лабильной частью генома, подвергаются мейотическому драйву и связаны с гетерохроматизацией.

Рисунок блот-гибридазации сателлитной ДНК IV имел четкие межвидовые различия у бизона, бантенга, яка и КРС. Поэтому можно предположить, что при скрещивании - согласно законам Менделя - гибриды Р1 должны получать половину хромосомного набора отца и матери, и для них должен быть характерным "смешанный" рисунок блот-гибридизацйи. Они должны иметь все полосы (сайты гибридизации), представленные в родительских геномах. У гибридов последующих генераций должно меняться в соответсвии с изменением кровности количественное 'содержание родительских форм сателлитных ДНК. В целом, перечисленные выше закономерности наблюдались. Вместе с тем, нами .отмечен ряд принципиальных отклонений от этих правил. Так, у гибридов Р1 як * якутский скот (исследовано три гибрида) всегда наблюдался интенсивный диск в 2500 п.н. (сходен по этому показателю с яком), хотя у 20 из 27 исследованных нами чистокровных животных якутской породы, он отсутствовал. Наиболее интересно то, что у всех гибридов не выявлялась полоса в 4800 п.н., облигатно присутствующая у всех исследованных нами яков (рис.4). ..

4800 П.Н.— 3800 П.Н. — " - -

2500 П.Н. — ¡и» . • » «• 2100 П.Н. — ^ саЭ ©2» CXI

1700 п.н. ека ©кЭСгЭ

а)- б) в) г)

Рис.8. Картина блот-гибридизации геномной ДНК гибридов як * як.скот (а-в), яка (д) и КРС (г,е,ж) с клонированным фрагментом сател-литной ДНК IV Boa taurua L. Стрелкой отмечен отсутствующий у F1 гибридов диск в 4800 п. н.

У межвидовых гибридов бизон * серый украинский скот (исследовано 5 животных) и бантенг * красный стопной скот (исследовано 2 животных) разной степени кровности наш действительно наблюдалась суперпозиция родительских типов сателлитной ДНК IV (рис.5; 6). Однако, нами не отмечена строгая количественная зависимость между интенсивностью видоспецифич-ного диска и кровностью. ДНК животных меньшой кровности часто давала более интенсивный гибридизационный сигнал.

Д) е) ж)

3800 П.Н.—. : V

2200 П.Н. 2100 п.н.:

1700 п.н.■

а)

б)

Г»®

5 • •

в)

Рис.5. Результат блот-гибридизации геномной ДНК бантенга, гибрида бантенг * красный степной скот, крупного рогатого скота с клонированным фрагментом ДНК IV Воз гаигиз Ь.: а) бантенг, б) 1/2 бантенг * 1/2 кр. ст. в) красный степной скот.

Размер п.н. Бантенг • ч/кр. Гибрид бант.* КРС. КРС ч/кр. Гибрид биз.* КРС. Бизон . ч/кр.

4000 3800 - - - - --

2200 "2100 - -' - —- -

1700 - - - - -

Рис.6. Схема результатов блот-гибридизации бантенга, бизона, КРС и гибридов бантенг * КРС, бизон * КРС с клонирован-: ным фрагменом сателлита IV вЛаигиз.

Тайш образом, можно говорить о каких-то нарушениях свобод- . ного независимого перераспределения родительских фракций еа-теллитных ДНК при межвидовой гибридизации. Очевидно,' наблюдается "взаимодействие" некоторых многократноповторяющихся фракций, по крайней мере, в ограниченных частях генома. В литературе имеется указание на возможность такого взаимного локального влияния родительских геномов. То есть гибридный геном,-вероятно, не является простой суммой родительских геномов (Тихомирова и др., 1988; Алиев и др., 1989; . Волков и др., 1989; Свиташев и др., 1992; Hill et. al., 1991).

Следовательно, исследование повторяющихся последовательностей - материала, активно участвующего в эволюционном преобразовании генома, - может служить своеобразным "маркером" изменений при породо- и видообразовании, межвидовой -гибридизации и гетерозисе. Относительная простота работы с такими последовательностями позволяет проводить соответствующие эксперименты и может послужить началом более комплексных Молекулярно-биологических исследований этих важных генетических процессов.

вывода.

1. Рестриктный анализ геномной ДНК Bos taurus L. с использованием ферментов EeoRI, EcoRV, -Xhol, SalGI, Kpnl, PstI, Hpal, Avail, Hlndlll обнаружил стабильный видоспецифнческий рисунок, отражающий организацию многократноповторяющейся фракции. Для этой фракщш ДНК характерно отсутствие существенного индивидуального и межпородного полиморфизма длин рестриктных фрагментов (ПДРФ).

2. Предполагается существование 'межпородных различий в содержании разных фракций многократноповторяющейся ДНК у Воз taurus L. Такие различия были обнаружены с помощью неизотопной слот-дот гибридизации с клонированным зондом сятеллитной ДНК II для холмогорского и якутского скота (0.41+0.03% и 0.8+0.04Ж на геном соответственно).

3.Рестриктный анализ геномной ДНК КРС, яка, бизона, бан-тенга (с ферментом F.eoRI) продемонстрировал наличие существенного межвидового полиморфизма в организации сатоллитных ДНК у некоторых из этих видов (як, КРС) и возможность использоьа-

у некоторых из этих видов (як, КРС) и возможность использования ДЦРФ по таким" блокам для контроля происхождения.

4. ' Блот-гибридизация геномной ДНК яка, бантенга, бизона с клонированной последовательностью сателлита II быка подтвердила эволюционную консервативность этого блока нуклеотидов. Наличие видовой специфики в организации многократных повторов было обнаружено для сателлита IV в сходных экспериментах.

5. При изучении закономерностей передачи родительских блоков сателлита IV в межвидовой гибридизации як * якутский скот . обнаружен случай немевделевского наследования - отсутствие одного из фрагментов (4800 п.н.) родительской ДНК яка у гибридов.

6. У межвидовых гибридов бантенг » КРС, бизон * КРС разных генераций отмечена закономерная передача фракций сателлитной ДНК IV родительских геномов в соответствии с законом Менделя. Обращается внимание на отклонение от ожидаемого количественного соотношения родительских компонентов этой фракции хромосомы у животных разной степени кровности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ по та® ДИССЕРТАЦИИ-

1. С.А.Финашин, В.А.Павлова, Ю.А.Логинова, р.Г.Чяряева, М.К.Слепцов, А.Ф.Смирнов "Анализ сателлитных последовательностей у КРС и яка". Бюллетень ВНШРГЖ, 'вып. 112, 1989, стр.3-6.

2. Ю.А.Логинова, О.В.Рассказова, С.А.Финашн, В.А.Павлова, А.Ф.Смирнов "Хромоспецифичность распределения сателлита II (1.Т23 г/смэ) у КРС".Бюллетень БНШРГЖ, вып.124, 1991, стр.7-9.

3. С.А.Финашн, В.А.Павлова, М.К.Слепцов, ¡O.A.Логинова,

H.И.Босак, A.M.Ефимов, Ю.Н.Захарова, М.В.Чуркина, А.Ф.Смирнов "Особенности хромосомного-распределения и изменчивости многократноповторяющейся фракции ДНК в геноме Воэ taurus L.". Цитология и генетика,вып.б,

1992, стр.21-28.

4. В.А.Павлова "Изменчивость многократноповторяющайся, фракции геномной ДНК у крупного рогатого скота при межвидовом скреиивашш". Бюллетень ВНИМРГЯ, вып. 137,

1993, стр.46-47.

5. Павлова В.А., Треус В.И., Ясинецкая Н.И., .Стекленев Е.П., Слепцов М.К., Смирнов А.Ф. "Особенности эволюционной изменчивости сателлитных ДНК и гетерохроматиновых районов у быковых".- Сб. Молекулярно-генети-ческие маркеры животных. Киев, "Аграрные науки",

1994, стр.117.

6. Smlrnov А.F., Bosak N.P., Eilmov A.M., Loglnova J.A., Deresheva S.E., Chyrlaeva O.G., Тгеиз V.V., Smaragdov M.G., Pavlova V.A., Kozakov V.K., Churklna

I.V., Zakarova J.V. "Genetic mapping and marking oi animal genomes". Anlm.Scl.Päpers a.Rep., Vol.11, 1993, p.99-102.