Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование яда вьетнамских скорпионов с целью нахождения новых биологически активных соединений для применения в биохимии и медицине

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, доктора химических наук, Хоанг Нгок Ань

Введение.

ГЛАВА.1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Выделение токсинов из яда скорпиона.

1.1.1. Выделение токсинов методом жидкостной хроматографии низкого давления.

1.1.2. Выделение токсинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

1.2. Структура и физико-химические свойства токсинов скорпионов

1.2.1. Первичная структура токсинов скорпионов.

1.2.2. Пространственная структура токсинов скорпионов.

1.2.3. Физико-химические свойства токсинов скорпионов.

1.2.3.1. Токсины, действующие на Ыа+ -каналы.

1.2.3.1.1. Натриевые каналы.

1.2.3.1.2. Классификация токсинов, действующих на -каналы.

1.2.3.1.3. Филогенетическая специфика токсинов.

1.2.3.1.4. Группы токсинов.

1.2.3.1.5. Функциональный анализ токсинов скорпиона, действующих на №+-каналы.

1.2.3.2. Токсины, действующие на Кт-каналы.

1.2.3.2.1. Классы токсин-чувствительных калиевых каналов.

1.2.3.2.2. Общие характеристики коротких токсинов скорпиона, действующих на К+ -каналы.

1.2.3.2.3. Токсины скорпиона, действующие на апамин-чувствительный К+ канал.

1.2.3.2.4. Токсины подсемейства карибдотоксина.

1.2.3.2.5. Токсины подсемейства ноциустоксина.

1.2.3.2.6. Токсины подсемейства калиотоксина.

1.2.3.2.7. Токсин TsKa.

1.2.3.2.8. Токсины скорпиона нового типа действия на К + - каналы.

1.2.4. Клонирование кДНК и генов, кодирующих токсины Na+- каналов.

1.2.5. Вывод.

1.3. Применение нейротоксинов скорпионов в качестве инсектицидов

1.3.1. Фармакологическая уникальность нейротоксинов скорпионов.

1.3.2. Совместное действие токсинов скорпиона с химическими инсектицидами.

1.3.3. Генетический полиморфизм нейротоксинов скорпиона.

1.3.4. Функциональная экспрессия нейротоксинов скорпиона.

1.3.5. Выявление биоактивной поверхности токсина скорпиона LqhaIT.

1.3.6. Токсины скорпиона как будущие потенциальные биопестициды.

ГЛАВA.IL МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

II. 1. Выращивание скорпионов в лаборатории.

11.2. Отделение яда скорпиона Buthus sp. от мукопротеинов.

11.3. Выделение физиологически активных соединений путем гель-фильрации на колонке с Сефадексом G-50.

11.4. Определение токсичности выделенных белков.

11.5. Определение гемагглютинируюшей активности выделенных фракции.

11.6. Определение потенциала действия.

11.7. Выделение и характеристика лектина.

11.8. Выделение токсинов и их характеристика.

II.9. Определение первичной структуры выделенных токсинов.

ILIO. Пространственное строение нейротоксина М9 Buthus eupeus в растворе.

ГЛАВА.Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

III.1. Выращивание вьетнамского скорпиона и получение яда скорпиона.

III. 1.1. Распространение скорпиона во Вьетнаме.

III. 1.1.1. Скорпионы Heterometrus sp. и Heterometrus cyaneus.

III. 1.1.2. Скорпион Buthus sp.

III. 1.2. Процесс размножения и развитие скорпиона Buthus sp.

III. 1.3. Пища для скорпиона.

III. 1.4. Получение яда скорпиона.

III. 1.5. Физико-химические свойства яда вьетнамских скорпионов.

III. 1.6. Перспективы использования яда скорпиона Buthus sp. в медицине87 III. 1.7. Выводы.

111.2. Выделение лектина из яда вьетнамского скорпиона Buthus sp. и его характеристики.

111.2.1. Выделение лектина из яда скорпиона Buthus sp.

111.2.2. Характеристика лектина яда Buthus sp.

111.2.3. Выводы.

111.3. Выделение токсинов из яда вьетнамского скорпиона Buthus sp. и исследование их действия на возбудимость миелинового нерва.

111.3.1. Выделение токсинов из яда скорпиона Buthus sp. методом жидкостной хроматографии.

111.3.2. Исследование действия токсинов Buthus sp. на возбудимость миелинового нерва.

111.3.3. Выводы.

111.4. Первичная структура двух токсинов выделенных из яда вьетнамского скорпиона Buthus sp.

111.4.1. Первичная структура токсина 10, выделенного из яда вьетнамского скорпиона Buthus sp.Ill

111.4.2. Первичная структура токсина 14 выделенного из яда вьетнамского скорпиона Buthus sp.

111.4.3. Выводы.

111.5. Пространственное строение нейротоксина М9 Buthus eupeus в растворе.

111.5.1. Конформационная гетерогенность молекулы М9.

111.5.2. Выделение и отнесение сигналов в спектрах 2D доминирующего при физиологических условиях конформера М9.

111.5.2.1. Выделение сигналов индивидуальных аминокислотных остатков

111.5.2.2. Отнесение сигналов индивидуальных аминокислотных остатков к положению в первичной структуре нейротоксина М9.

111.5.2.3. Выделение и отнесение сигналов от протонов аминокислотных остатков, имеющих протоны в у-положении.

111.5.3. Установление пространственного строения доминирующего при физиологических условиях конформера нейротоксина М9.

111.5.3.1. Экспериментальные данные, использованные для установления пространственного строения нейротоксина М9.

111.5.3.2. Вторичная и третичная структура доминирующего при физиологических условиях конформера нейротоксина М9 по данным спектроскопии ^-ЯМР.

111.5.3.3. Сравнение конформациий скорпионовых токсинов. Связь структуры с биологической активностью.

111.5.4. Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование яда вьетнамских скорпионов с целью нахождения новых биологически активных соединений для применения в биохимии и медицине"

Актуальность проблемы. Выявление природных токсинов с высоким специфическим действием на ионные каналы является одной из весьма интересных задач медицинской биотехнологии. В яде скорпионов присутствуют токсины белковой природы, имеющие ярко выраженную биологическую специфичность. По специфичности взаимодействия с ионными каналами, токсины скорпиона разделяют на четыре группы-действующие на К+, СГ или Са2+ каналы. Эти токсины могут применяться в качестве инсектицидов и противораковых препаратов. С использованием биотехнологии, эти токсины можно производить в большом количестве с помощью бактерий, например, бакуловирусов. В бакуловирус вводятся гены, которые кодируют токсины скорпиона, что, позволяет получить лекарственные препараты и более безопасные для человека инсектициды.

Вьетнамские скорпионы ранее не изучались, хотя и использовались в народной медицине в качестве терапевтических средств при эпилепсии. Поэтому тема настоящей работы: "Исследование яда вьетнамских скорпионов с целью нахождения новых биологически активных соединений для применения в биохимии и медицине" представляется вполне актуальной.

Цель работы. Разработка научно-методических и практических методов получения нового сырья для биотехнологии на основе яда скорпионов; создание научных основ его применения в медицине, биохимии и экологически безопасных инсектицидах.

В связи с вышесказанными, были сформулированы следующие задачи:

1) разработать технологию выращивания скорпионов с целью получения токсинов белковой природы.

2) идентифицировать и охарактеризовать физиологически активные биополимеры (токсины и лектины), выделенные из яда скорпиона.

3) определить первичную структуру низкомолекулярной фракции токсинов.

4) определить пространственную структуру высокомолекулярной фракции токсинов скорпиона.

5) провести физиологические исследования выделенных токсинов.

Научная новизна работы. Впервые установлено существование трех видов скорпиона: Не1еготе&ж Бр. в Северном, а Ви№ш Бр. и /jfeferc>meгlrш, суапеш в Южном Вьетнаме. Из яда скорпиона Вгйкш Бр впервые выделен лектин и ряд коротких токсинов, действующих на возбудимость миелинового нерва. Определена первичная структура двух токсинов. На основании знания первичной структуры установлена новизна выделенных токсинов. Впервые из данных ЯМР определено пространственное строение цепи и установлено взаимное расположение ряда боковых цепей в доминирующем при физиологических условиях конформере нейротоксина М9 скорпиона ВмИш еирет.

Практическая значимость работы. Полученные в работе результаты имеют большое значение, так как: 1) показано, что можно выращивать изученных скорпионов в лаборатории и получать их яд; 2) яд этих скорпионов может служить сырьем для получения новых биологически активных веществ; 3) токсины скорпионов можно использовать как лекарственные препараты; 4) их можно использовать для выяснения механизма взаимодействия нейротоксинов скорпиона с находящимся в нервной мембране рецептором этих токсинов; 5) нейротоксины скорпиона можно использовать для изучения пространственной организации рецептора.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Показано существование трех видов скорпиона во Вьетнаме.

Разработана технология выращивания скорпионов для получения постоянного выхода яда.

2. Методом жидкостной хроматографии (гель-фильтрация и катионный обмен) впервые выделен не токсичный лектин (гликопротеин) из яда скорпиона Вшкт Бр.

3. Методом гель-фильтрации и высокоэффективной жидкостной хроматографии впервые выделены 7 низкомолекулярных токсинов из яда скорпиона ВыНт Бр.

4. Впервые определена первичная структура двух низкомолекулярных токсинов (токсин 10 и токсин 14), выделенных из скорпиона Вшкт Бр. При этом определено, что токсин 14 образует новую группу низкомолекулярных токсинов.

5. Впервые методом 2Б- Н-ЯМР была определена пространственная структура токсина М9 скорпиона ВшЬт еиреш в растворе.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на: Всероссийском симпозиуме по химии и хроматографии (Москва, 1999); 25th Silver Jubilee FEBS Meeting (Конпенгаген, 1998); Всероссийском симпозиуме по молекулярной хроматографии (Москва, 1996); Всероссийском симпозиуме по молекулярной жидкостной хроматографии (Москва, 1996); 23th FEBS Meeting (Базель, 1995); 2nd Asia Pacific Congress on Animal, Plant and Microbial Toxins (Нью-Дели, 1990); 10th American Peptide Symposium (Вашингтон, 1987); 9th ISMAR Meeting on Magnetic resonance in Physics, Chemistry, Biology and Medicine (Рио-де-Жанейро, 1986); Vil-ом Всесоюзном симпозиуме по межмолекулярному взаимодействию и конформации молекул (Пушино, 1986).

Публикации. По материалам диссертации опубликована двадцать одна работа.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 227 страницах, содержит 14 таблиц и 44 рисунка, библиография включает 355 наименований.

Диссертация состоит из введения, трех глав, выводов и списка использованной литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Хоанг Нгок Ань

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Исследован природный энтомологический ресурс Вьетнама, в котором впервые выявлено три вида скорпионов - потенциальных доноров яда (Heterometrus sp., Buthus sp. и Heterometrus cyaneus).

2. Разработана технология выращивания скорпионов, позволяющая значительно повысить их выживаемость по сравнению с природными условиями и дающая возможность регулярно получать яд. Она предусматривает быстрое накопление биомассы при оптимальных условиях выращивания: режима кормления, относительной влажности воздуха и температуры (70-100 мг корма нужно на 10 г биомассы, влажность 60-80%, температура 25-35° С). Для условии искусственного выращивания насекомых разработан новый источник питания в виде живой биомассы (Blattella germanica, Locusta micratoria).

Предложен высокоэффективный простой и дешевый технологический способ получения яда путем воздействия на скорпиона электрошоком, позволяющий наиболее полно и безопасно извлекать яд скорпионов. При этом выход яда достигает 2,15 мг/особь у скорпиона Heterometrus cyaneus. Яд скорпиона Buthus sp. (0,2 мг/особь), в свою очередь, перспективен для выделения новых высокотоксичных и физиологически активных соединений.

3. Исследован состав яда скорпиона Buthus sp. Выявлено, что в нем присутствуют нетоксичные лектины и нейротоксины белковой природы. Получение высокоочищенных гликопротеинов и белков из яда скорпиона Buthus sp. основано на удалении мукоидов и мукопротеинов с использованием метода гель-фильтрации на сефадексе G-50, ионообменной хроматографии и высокоэффективной жидкостной обращеннофазной хроматографии. При этом достигнуты сокращение стадий технологического процесса выделения и очистки белков из природных ядов, а также увеличение выхода целевого продукта.

4. Показано, что Ca -зависимый лектин яда скорпиона Buthus sp. не токсичен и представляет собой углеводсодержащий гомодимер, состоящий из субъединиц с молекулярной массой 9,3 кДа, не проявляющий фосфолипазной или гиалуронидазной активности. Впервые определен аминокислотный состав лектина скорпиона (их относительное содержание указано в мол.%): Asp/Asn -7.35, Thr -3.89, Ser - 12.06, Glu/Gin - 10.03, Pro - 4.09, Gly -19.83, Ala -14.60, Val - 3.49, Ile - 2.16, Leu -581, Туг - 1.21, Phe -1.94, His -5.24, Lys -364, Orn - 462, Met - 0.06. Углеводная часть лектина составляет 20% (повесу) и включает главным образом, маннозу и глюкозу. Лектин включает два различных углевод связывающих участка, один из которых взаимодействует с Ь-фукозой, а другой с лактозой в присутствии катионов Са+2. В связывании лактозы принимает участие единственный остаток тирозина.

5. Впервые определена первичная структура двух новых низкомолекулярных белковых токсинов (Ы-концевая последовательность токсина 10: 01и-Тгр-Т11г-Суз-А1а-01у-Ьу8-01п-01и-01п-Суз-Аг£-Уа1 и полная первичная структура токсина 14: Уа1-8ег-11е-01у-11е-Ьу8-Су8-Азр-Рго-8ег-11е-А8р-Ьеи-Су8-01и-01у-01п-Су8-Arg-Ile-Arg-Tyr-Phe-Thr-Gly-Tyr-Cys-Ser-Gly-Asp-Thr-Cys-His-Cys-8ег) из яда скорпиона ВиЛиэ ер., которые были отнесены к двум новым группам токсинов. Показано, что токсин 14 может действовать на №+-каналы и чувствительные к апамину К+- каналы, а его фармакологическое действие эффективно как в отношении насекомых, так и отношении млекопитающих

6. Разработан модельный физиологический подход для характеристики выделенных новых токсинов скорпиона Вшкт зр. и с его помощью установлено, что короткие токсины (Мм: 3500-5000 Да) из яда скорпиона ВиЛш эр. блокируют потенциал действия миелинового нервного волокна, причем эффективность токсинов зависит от их молекулярных масс.

7. Методом 2В-1Н-ЯМР впервые определена пространственная структура длинного нейротоксина М9, выделенного из яда скорпиона ВиШш еиреш. Предложена модель укладки основной полипептидной цепи доминирующего при физиологических условиях конформера М9 и продемонстрировано наличие двух кластеров гидрофобных боковых цепей на противоположных сторонах этого конформера. В состав большего по размеру кластера входит значительное число боковых цепей, консервативных в первичной структуре длинных токсинов скорпионов (60-80 аминокислотных остатков). Сходство пространственной структуры токсинов М9 и у-З (из скорпиона Сегйгшхнёез Бси^ШгаШБ) с ограниченной гомологией первичной структуры свидетельствует в пользу того, что одной из причин различия их биологической активности, вероятно, является отсутствие положительно заряженной боковой цепи, например, остатка А^60, в эквивалентном по пространственной структуре положении в токсине у-З .

Библиография Диссертация по биологии, доктора химических наук, Хоанг Нгок Ань, Москва

1. Strong P.N. 1990. Pharmacol.Ther., v. 46, p. 137-162.

2. Garcia M.L., Gavez A., Garcia-Calvo M., King F., Vasquez J., Kaczorowski G.J. 1991. J. Bioenerg. Biomembr., v. 23, p. 615-645.

3. Martin-Eauclaire M.F., Couraud F. 1995. In: Handbook of Neurotoxicology (Chang L.W., Dyer R.S., ed.), p. 683-716 (New York: Marcel Dekker.).

4. Watt D.D., Simard J.M. 1984. J. Toxicol. Toxin Rev., v. 3, p. 181-221.

5. Miranda F., Kopeyan C., Rochat H., Rochat C., Lissitzky S. 1970. Eur. J. Biochem., v. 16, p. 514-523.

6. Martin M.F., Rochat H. 1984. Toxicon, v. 22, p. 279-291.

7. Martin M.F., Rochat H. 1986. Toxicon, v. 24, p. 1131-1139.

8. Toledo D.V., Neves A.G.A. 1976. Comp. Biochem. Physiol., v. 55B, p. 249-259.

9. Possani L.D.,Fletcher P.L.Jr., Alagon A.C., Julia J.Z. 1980. Toxicon, v. 18, p. 175-187.

10. Sampaio S.V., Laure C.J., Giglio J.R. 1983. Toxicon, v. 21, p. 265-277.

11. Ramirez A.N., Gurrola G.B., Martin B.M., Possani L.D. 1988. Toxicon, v.26, p. 773-783.

12. Borges A., Arantes E.C., Giglio J.R. 1990. Toxicon, v. 28, p. 1011 -1017.

13. Possani L.D. 1981. Carlsberg Res. Commun., v. 46, p. 195-205.

14. Arantes E.C., Prado W.A., Sampaio S.V., Giglio J.R. 1989. Toxicon, v.27, p. 907-914.

15. Martin M.F., Rochat H., Marchot P., Bougis P.E. 1987. Toxicon, v. 25, p. 569-573.

16. Zerrouk H., Bougis P.E., Ceard B., Benslimane A., Martin-Euclaire M.F. 1991. Toxicon, v. 29, p. 951-960.

17. Kharrat R., Mansuelle P., Sampieri F., Crest M., Oughideni R., Van Rietschoten J., Martin-Eauclaire M.F., Rochat H., El Ayeb M. 1997. FEES Letters, v. 406, p. 284-290.

18. Romi-Lebrun R., Lebrun B., Martin-Eauclaire M.F., Ishiguro M., Escoubas P., Wu F.Q., Hisada M., Pongs O., Nakajima T. 1997. Biochemistry, v. 36, p. 13473-13482.

19. Chuang R.S-I., Jaffe H., Cribbs L., Perez-Reyes E., Swartz K.J. 1998. Nature Neuroscience, v. 1, p. 668-674.

20. Catterall W.A. 1980. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., v. 20, p. 15-43.

21. Garcia M.L., Hanner M., Knaus H.G., Koch R., Schmalhofer W.,Slaughter R.S., Kczorowski G.J. 1997. Adv. Pharmacol., v. 39, p. 425-471.

22. Valdivia H.H., Kirby M.S., Lederer W.J, Coronado R. 1992. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 89, p. 12185-12189.

23. Gordon D., Savarin P., Gurevitz M., Zinn-Justin S. 1998. J. Toxicol. Toxin Rev., v. 17, p. 131-159.

24. Rochat H., Bernard P., Couraud F. 1979. In Advances in Cytopharmacology (Ceccarelli B., Clementi F. ed.), v. 3, p. 325-334 (Raven Press, New York).

25. Carbone E., Wanke E., Prestipino G., Possani L.D., Maelicke A. 1982. Nature, v. 296, p. 90-91.

26. Possani L.D., Martin B., Svendsen I. 1982. Carlsberg Res. Comm., v. 47, p. 285-289.

27. Miller C., Moczydlowski E., Latorre R., Phillips M. 1985. Nature, v. 313, p. 316-318.

28. Debin J.A., Maggio J.E., Strichartz G.R. 1993. Am. J. Physiol., v. 264 (Cell. Physiol. 33), p. C361-C369.

29. Valdivia H. Possani L.D. 1998. Trends Cardiovascular Med., v. 8, p. 111118.

30. Possani L.D. 1984. In Handbook of Natural Toxins (Tu A.T., éd.), v. 2, p. 513-550 (Marcel Dekker Inc., New York).

31. Fontecilla-Camps J.C., Alamassy R.J., Suddath F.L., Watt D.D., Bugg C.E. 1980. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 77, p. 6496-6500.

32. Lebreton F., Delepierre M., Ramirez A.N., Balderas C., Possani L.D. 1994. Biochemistry, v. 33, p. 11135-11149.

33. Oren D.A., Froy O., Amit E., Kleinberger-Doron N., Gurevitz M., ShaananB. 1998. Structure, v. 6, p. 1095-1103.

34. Lergos C., Martin-Eauclaire M.F. 1997. Comptes Rendues Soc. Biol., v. 191, p. 345-338.

35. Becerril B., Corona M., Garcia C., Bolivar F., Possani L.D. 1995. J. Toxicol. Toxin Rev., v. 14, p. 339-357.

36. Possani L.D., Becerril B., Delepierre M., Tytgat J. 1999. Eur. J. Biochem., v. 264, p. 287-300.

37. Dauplais M., Gilquin B., Possani L.D., Gurrola-Briones G., Roumestand C., Menez A. 1995. Biochemistry, v. 34,p. 16563-16573.

38. Possani L.D., Selisko B., Gurrola G. 1999. In Perspective in drug Discovery and Design (Darbon H., Sebatier J.M., ed.), v. 15/16, p. 15-40.

39. Olamendi-Portugal T., Gomez-Lagunas F., Gurrola G.B., Possani L.D. 1996. Biochem. J., v. 315, p. 977-981.

40. Lippens G., Najib J.,Wodak S.J., Tartar A. 1995. Biochemistry, v. 34,p. 1321.

41. Rochat H., Rochat C., Miranda F., Lissitzki S. 1970. Eur. J. Biochem., v. 17, p. 262-266.

42. Martin M.F., Rochat H. 1984. Toxicon, v. 22, p. 695-703.

43. Rochat H., Rochat C., Sampieri F., Miranda F., Lissitzky S. 1972. Eur. J. Biochem., v. 28, p. 381-388.

44. Kopeyan C., Martinez G., Rochat H. 1979. Eur. J. Biochem., v. 94, p. 609

45. Manusuelle P., Martin M.F., Rochat H., Granier C. 1992. Natural Toxins, v. l,p. 61-69.

46. Blanc E., Hassani U., Meunier S., Mansuelle P., Sampieri F., Rochat H., DarbonH. 1997. Eur. J. Biochem., v. 247, p. 1181-1126.

47. Darbon H., Zlotkin E., Kopeyan C., Van Rietschoten J., Rochat H. 1982. Int. J. Pept. Protein Res., v. 20, p. 320-330.

48. Loret E.P., Mansuelle P., Rochat H., Granier C. 1990. Biochemystry, v. 29, p. 1492-1501.

49. Bougis P.E., Rochat H., Smith L.A. 1989. J. Biol. Chem., v. 264, p. 19259-19265.

50. Loret E.P., Martin-Eauclaire M.F., Mansuelle P., Sampieri F., Granier C., Rochat H. 1991. Biochemistry, v. 30, p. 633-640.

51. Nakagawa Y., Lee Y.M., Lehmberg E., Herrmann R., Moskowitz H., Jones A.D., Hammock B.D. 1997. Eur. J. Biochem., v.246, p. 496-501.

52. Rosso J.P., Rochat H. 1985. Toxicon, v. 23, p. 113-125.

53. Cestele S., Kopeyan C., Oughideni R., Mansuelle P., Granier C., Rochat H. 1997. Eur. J. Biochem., v. 243, p. 93-99.

54. Grishin E.V. 1981. J. Quantum Chem., v. 19, p. 291-298.

55. Ovchinnikov Y.A. 1984. Pure Appl. Chem., v. 56, p. 1049-1068.

56. Zilberberg N., Zlotkin E., Gurevitz M. 1991. Toxicon, v. 29, p. 11551158.

57. Ji Y., Mansuelle P., Terakawa S. Kopeyan C., Yanaihara N., Hsu K., Rochat H. 1996. Toxicon, v. 34., 987-1001.

58. Ji J.H., Mansuelle P., Xu K., Granier C., Kopeyan C., Tarakawa S., Rochat H. 1989. Sei. China, v. B37, p. 42-49.

59. Luo M.J., Xiong Y.M., Wang D.C., Chi C.W. 1997. Toxicon, v. 35,p. 723731.

60. Liu J.N., Yang D., Lei K.J. 1988. Chin. Sei. Bull., v. 33, p.79-80.

61. Li H.M., Wang D.C., Zeng Z.H., Jin L., Hu R.Q. 1996. J. Mol. Biol., v. 261, p. 415-431.

62. Gong J., Kini R.M., Gwee M.C, Gopalakrishnakone P., Chung N.C. 1997. J. Biol. Chem., v. 272, p. 8320-8324.

63. Vargas O., Martin M.F., Rochat H. 1987. Eur. J. Biochem., v. 162, p. 589599.

64. Cestele S., Stankiewicz M., Mansuelle P., De Waard M., Dargent B., Gilles N., Pehate M., Rochat H., Martin-Eauclaire M.F., Gordon D. 1999. Eur. J. Neurosci., v. 11, p. 975-985.

65. Martin M.F., Vargas O., Rochat H. 1989. In Second Forum on Peptide (Aubry A., Marraud M., Vitoux B., ed.), v. 174, p. 483-486 (Colloque INSERM/John Libbey Eurotext Ltd,).

66. Gregoire J., Rochat H. 1983. Toxicon, v. 21, p. 151-162.

67. El Ayeb ML, Martin M.F., Delori P., Bechis G., Rochat H. 1983. Mol. Immunol., v. 20, p. 697-708.

68. Sampieri F., Habersetzer-Rochat C., Martin M.F., Kopeyan C., Rochat H. 1987. Int. J. Pept. Protein Res., v. 29, p. 231-237.

69. Borchani L., Stankiewicz M., Kopeyan C., Mansuell P., Kharrat R., Cestele S., Karoui H., Rochat H., Pelhate M., El Ayeb M. 1997. Toxicon, v. 35, p. 365-382.

70. Borchani L., Mansuelle P., Stankiewicz M., Grolleau F., Cestele S., Karoui H., Lapied B., Rochat H., Pelhte M., El Ayeb M. 1996. Eur. J. Biochem., v. 241, p. 525-532.

71. Dehesa-Davila M., Ramirez A.N., Zamudio F.Z., Gurrola-Briones G., Lievano A., Darszon A., Possani L.D. 1996. Comp. Biochem. Physiol., v. 113B, p. 331-339.

72. Ramirez A.N., Martin B.M., Gurrola G.B., Possani L.D. 1994. Toxicon, v.32, p. 479-490.

73. Martin B.M., Carbone E., Yatanni A., Brown A.M., Ramirez A.N., GuiTola G.B., Possani L.D. 1988. Toxicon, v. 26, p. 785-794.

74. Possani L.D., Martin B.M., Svendsen I., Rode G.S., Erickson B.W. 1985. Biochem. J., v. 229, p. 739-750.

75. Vazquez A., Tapia J.V., Eliason W.K., Martin B.M., Lebreton F., Delepierre M., Possani L.D., Becerril B. 1995. Toxicon, v. 33, p. 11611170.

76. Zamudio F., Saavedra R., Martin B.M., Gurrola-Briones G., Herion P., Possani L.D. 1992. Eur. J. Biochem, v. 204, p. 281-292.

77. Vazquez A., Becerril B., Martin B.M., Zamudio F., Biolivar F., Possani L.D. 1993. FEBS Lett, v. 320, p. 43-46.

78. Garcia C, Becerril B, Selisko B, Delepierre M, Possani L.D. 1997. Comp. Biochem. Physiol, v. 116B,p. 315-322.

79. Selisko B. Garcia C, Becerril B, Delepierre M, Possani L.D. 1996. Eur J. Biochem, v. 242, p. 235-242.

80. Babin D.R, Watt D.D., Goos S.M, Mlenjek R.V. 1974. Arch. Biochem. Biophys, v. 164, p. 694-706.

81. Watt D.D., Simmard J.M. 1984. J. Toxicol, v. 3, p. 181-221.

82. Pete M.J, Conton J.M, Murphy R.F. 1992. Int. J. Pept. Protein Res, v. 40, p. 582-586.

83. Martin-Eauclaire M.F, Garcia y Perez L.G, El Ayeb M, Kopeyan C, Bechis G, Jover E, Rochat H. 1987. J. Biol. Chem, v. 262, p. 4452-4459.

84. Sautiere P, Castele S, Kopeyan C, Martinage A, Drobecq H, Doljansky Y, Gordon D. 1998. Toxicon, v. 36, p. 1141-1154.

85. Zlotkin E, Eitan M, Dindokas V.P, Adams M.E, Moyer M, Burkhard W, Fowler E. 1991. Biochemistry, v. 30, p. 4814-4821.

86. Moskowitz H, Herrman R, Jones A.D., Hammock B.D. 1998. Eur. J.

87. Biochem., v. 254, p. 44-49.

88. Eitan ivL, Fowier E., Herrmann R., Duval A., Pelhate M., Zlotkin E. 1990. Biochemistry, v. 29, p. 5941-5947.

89. Kopeyan C., Mansuelle P., Martin-Eauclaire M.F., Rochat H., Miranda F. 1993. Natural Toxins, v. 1, p. 308-312.

90. Kopeyan C., Martinez G., Rochat H. 1985. FEBS Lett., v. 181, p. 211-217.

91. Kopeyan C., Martinez G., Rochat H. 1978. FEBS Lett., v. 89, p. 54-58.

92. Kopeyan C., Mansuelle P., Sampieri F., Brando T., Bahraoui E.M., Rochat H., Granier C. 1990. FEBS Lett., v. 26, p. 423-426.

93. Becerril B., Corona M., Coronas F.I.V., Zamudio F., Calderon-Aranda E.S., Fletcher P.I., Martin B.M., Possani L.D. 1996. Biochem. J., v. 313, p. 753-760.

94. Bechis G., Sampieri F., Yuan P.M., Brando T., Martin M.F., Diniz C.R., Rochat H. 1984. Biochem. Biophys. Res. Commun., v. 122, p. 1146-1153.

95. Possani L.D., Martin B.M., Fletcher M.D., Fletcher P.L. 1991. J.Biol. Chem., v. 266, p. 3178-3185.

96. Marangoni S., Ghiso J., Sampaio S.V., Arantes E.C., Giglio J.R., Oliveira B., Frangione B. 1990. J. Prot. Chem., v. 9, p. 595-601.

97. Martin-Eauclaire M.F., Ceard B., Ribeiro A.M., Diniz C.R., Rochat H., Bougis P.E. 1994. FEBS Lett., v. 342, p. 181-184.

98. Maragoni S., Toyama M.H., Arantes E.C., Giglio J.R., da Silva C.A., Carneiro E.M., Goncalves A.A., Oliveira B. 1995. Biochem. Biophys. Acta., v. 1243, p. 309-314.

99. Chavez-Olortegui C., Moreira Ferreira A.M., do Nascimento Cordeiro M., Maria W.S., Richardson M., Diniz C.R. 1996. In Envenomings and Their Treatments (Bon C., Goyffon M., ed.), p. 183-195 (Fondation Marcel Merieux, Lyon).

100. Becerril B., Vazquez A., Garcia G., Corona M., Bolivar F., Possani L.D.1993. Gene, v. 128, p. 165-171.luO. 100. Froy O., Sagiv Т., roreh M., Urbach D., Zilberberg N., Gurevitz M. 1999. J. Mol. Evol., v. 48, p. 187-196.

101. Jover E., Couraud F., Rochat H. 1980. Biochem. Biophys. Res. Comm., v. 95, p. 1607-1614.

102. Wheeler K.P., Watt D.D., Lazdunski M. 1983. Pflugers Archiv. (Eur. J. Physiol.), v. 397, p. 164-165.

103. Fontecilla-Camps J.C., Habersetzer-Rochat C., Rochat H. 1988. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, v. 85, p. 7443-7447.

104. Landon C., Sodano P., Cornet В., Bonmatin J.M., Kopeyan C., Rochat H., Volvelle F., Ptak M. 1997. Protein, v. 28, p. 360-374.

105. Пашков B.C., Хоанг H.A., Майоров B.H., Быстров В.Ф. 1986. Биоорган, химия, Т. 12, No 10, С. 1306-1316.

106. Darbon Н., Weber С, Braun W. 1991. Biochemistry, v. 30, p. 1836-1845.

107. Housset D., Habersetzer-Rochat C., Astier J.P., Fontecilla-Camps J.C.1994. J.Mol. Biol., v. 238, p. 88-103.

108. Jablonsky M.J. Watt D.D., Krishna N., Krishna R. 1995. J. Mol. Biol., v. 248, p. 449-458.

109. Mikou A., LaPlante S.R., Guitter E., Lallemand J.Y., Martin-Eauclaire M.F., Rochat H. 1992. J. Biomol. NMR, v. 2, p. 57-70.

110. Lee W., Jablonsky M.J., Watt D.D., Krishna N.R. 1994. Biochemistry, v. 33, p. 2468-2475.

111. Pashkov V.S., Maiorov V.N., Bystrov V.F., Hoang A.N., Volkova T.M., Grishin E.V. Biophys. Chem., v. 31, p. 121-131.

112. Pintar A, Possani L.D., Delepierre M. 1999. J. Mol. Biol., v. 287, p. 359367.

113. Tugarinov V., Kustanovich L., Zilberberg N., Gurevitz M., Anglister J. 1997. Byochemistry, v. 36, p. 2414-2424.

114. Zhao B., Carson M., Ealick S.E., Bugg C.E. 1992. J. Mol. Biol, v. 227, p. 239-252.

115. Krimm I., Gilles N., Sautiere P., Stankiewicz M., Pelhate M., Gordon D., Lancelin J.M. 1999. J. Mol. Biol., v. 285, p. 1749-17643.

116. Koradi R., Billeteter M., Wuthrich K. 1996. J Mol. Graph., v. 14, p. 51-55.

117. Bontems F., Roumestand Ch., Gilquin B., Menez A., Toma F. 1991. Science, v. 254, p. 1521-1523.

118. Bruix M. Jimenez M.A. Santoro J., Gonzalez C., Colilla F.J., Rico M. 1993. Biochemistry, v. 32, p. 715-724.

119. Catterall W.A. 1986. Annu. Rev. Biochem., v. 55, p. 953-985.

120. Catterall W.A. 1992. Pharmacol. Rev., v. 72. (suppl.), p. S15-S48.

121. Catteral W.A. 1977. J. Biol.Chem., v. 252, p. 8660-8668.

122. Strichartz G., Rando T., Wang G.K. 1987. Annu. Rev. Neurosci., v. 10, p. 237-267.

123. Gordon D., Zlotkin E, Catterall W.A. 1985. Biochim. Byophys. Acta, v. 821, p. 130-136.

124. Soderlund D.M., Gubs R.E., Adams P.M. 1989. Comp. Biochem. Physiol., v. 94C, p. 255-259.

125. Dong K., Scott J.G., Weiland G.A. 1993. Pesticide Biochem. Physiol., v. 46, p. 141-148.

126. Church C.J., Knowles C.O. 1993. Comp. Biochem. Physiol., v. 104C, p. 279-287.

127. Gordon D., Zlotkin E. 1993. FEBS Lett., v. 315, p. 125-128.

128. Pauron D., Barhanin J., Lazdunski M. 1985. Biochem. Biophys. Res. Comm., v. 131, p.1226-1233.

129. Lima M.E., Martin M.F., Diniz C.R., Rochat H. 1986. Biochem. Biophys. Res. Commun., v. 139, p. 296-302.

130. Cestele S., Ben Khalifa R., Pelhate M., Rochat H., Gordon D. 1995. J.

131. Biol. Chem., v. 270, p. 15153-15161.

132. Fainzilber M., Kofman O., Zlotkin E., Gordon D. 1994. J. Biol. Chem., v. 269, p. 2574-2580.

133. Isom L.L., De Jongh K.S., Patton D.E., Reber B.F., Offord J., Charbonneau H., Walsh K., Goldon A.I., Catterall W.A. 1992. Science, v. 256, p. 839842.

134. Isom L.L., Ragsdale D.S., De Jongh K.S., Westenbrock R.E., Reber B.F., Scheuer T., Catterall W.A. 1995. Cell, v. 81, p. 433-442.

135. Morgan K. Stevens E.B., Shah B., Cox P.J., Dixon A.K., Lee K., Pinnock R.D., Hughes J., Richardson P.J., Mizuguchi K., Jackson A.P. 2000. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, v. 97, p. 2308-2313.

136. Noda M., Ikeda T., Kayano T., Suzuki H., Takeshima H., Kurasaki M., Takahashi H., Numa S. 1986. Nature, v. 320, p. 188-192.

137. Loughney K., Kreber R., Ganetzky B. 1989. Cell, v. 58, p. 1143-1154.

138. Gordon D., Moskowitz H., Eitan M., Warner C., Catterall W.A., Zlotkin E. 1992. Biochemistry, v. 31, p. 7622-7628.

139. Moscowitz H., Herrman R., Zlotkin E., Gordon D. 1994. Insect. Biochem. Mol. Biol., v. 24, p. 13-19.

140. Gordon D. Merrick D., Wollner D.A., Catterall W.A. 1988. Biochemistry, v. 27, p. 7032-7038.

141. Gordon D., Moscowitz H., Zlotkin E. 1990. Biochim. Biophys. Acta, v. 1026, p. 80-86.

142. Moscowitz H., Zlotkin E., Gordon D. 1991. Neurosci. Lett., v. 124, 146152.

143. Pelhate M., Sattelle D. B. 1982. J. Insect. Physiol., v. 28, p. 889-903.

144. Pelhate M, Zlotkin E. 1982. J. Exp. Biol., v. 97, p. 67-71.

145. Zlotkin E., Kadouri D., Goirdon D., Pelhate M., Martin M.F., Rochat H. 1985. Arch. Biochem. Biophys., v. 240, p. 877-887.

146. Gordon D., Jover E., Couraud F., Zlotkin E. 1984. Biochem., Biophys. Acta, v. 778, p. 349-458.

147. Catterall W.A. 1979. J. Gen. Physiol., v. 74, p. 375-391.

148. Couraud F., Jover E., Dubois J.M., Rochat H. 1982. Toxicon, v. 20, p. 916.

149. Darbon H., Jover E., Couraud F., Rochat H. 1983. Biochem. Biophys. Res. Commun., v. 115, p. 415-422.

150. Meves H., Simard J.M., Watt D.D. Ann. NY Acad. Sci., v. 479, p. 113132.

151. Jover E. Massacrier A., Cau P., Martin M.F., Couraud F. 1988. J. Biol. Chem., v. 263, p. 1542-1548.

152. Wang G.K.,StrichartzG. 1982. Biophys. J., v.40, p. 175-179.

153. Croud F., Rochat H., Lassitzky S. 1978. Biochem. Biophys. Res. Commun., v. 83, p. 1525-1530.

154. Catterall W.A., Beress L. 1978. J. Biol. Chem., v. 253, p. 7393-7396.

155. Yatani A., Kirsh G.E., Possani L.D., Brown A.M. 1988. Am. J. Physiol., v. 254, (Heart Circ. Physiol. 23), p. H443-H451.

156. Jover E., Martin-Moutot N., Couraud F., Rochat H. 1980. Biochemistry, v. 19, p. 463-467.

157. Gordon D., Martin-Eauclaire M.F., Cestele S., Kopeyan C., Calier E., Ben Khalifa R., Pelhate M., Rochat H. 1996. J. Biol. Chem., v. 271, p. 80348045.

158. Nonner W., 1979. In Advances in Cytopharmacology (Ceccarelli B., Clementi F., ed.), v. 3, p. 345-352 (Raven Press, New York).

159. Zlotkin E., Miranda F., Rochat H. 1978. In Handbook of Exprimental Physiology (Bettini S., ed.), v. 48, p. 317-369.

160. Zlotkin E. 1986. In Neuropharmacology and Pesticides Action (Lutt M.G.G., Raey R.C., Usherwood P.N.R., ed.), p. 352-383 (Ellis Horwood,1. Weinheim, Germany).

161. Ziotkin E. 1993. In Toxins and Signal Transduction (Lazarowici P, Gutman Y, ed.), p. 95-117 (Harwood Press, Amsterdam).

162. Ben Khalifa R, Stankiewics M, Lapied B, Turkov M, Zilberberg N, Gurevitz M, Pelhate M. 1997. Life Sei, v. 61, p. 819-830.

163. Couraud F, Jover E. 1984. In Insect Poisons, Allergens and Other Invertebrate Venoms, Handbook of Natural Toxins (Tu A.T, ed.), p. 659678 (Marcel Dekker, New York).

164. Trequattrini C, Zamudio F.Z, Petris A, Prestipino G, Possani L.D, Franciolini F. 1995. Comp. Biochem. Physiol, v. 112A, p. 21-28.

165. Kirsch G.E, Skattebol A, Possani L.D, Brown A. 1989. J. Gen. Physiol, v. 93, p. 67-83.

166. Meves H, Simard M.J, Watt D.D. 1984. J. Physiol. (Paris), v. 79, p. 185191.

167. Barhanin J, Gigio J.R, Leopold P, Schmid A, Sampaio S.V., Lazdunski M. 1982. J. Biol. Chem, v. 257, p. 12553-12558.

168. De Lima M.E, Martin-Eauclaire M.F. 1995. J. Toxicol. Toxin Rev, v. 14, p.457-481.

169. Gurevitz M, Froy O, Zilberberg N, Turkov M, Strugatsky D, Gershburg E, Lee D, Adams M.E, Tugarinov V, Anglister J, Shaanan B, Loret E, Stankiewics M, Pelhate M, Gordon D, Chenajovsky N. 1998. Toxicon, v. 36, 1671-1682.

170. El Ayer M, Darbon H, Bahraoul E.M, Vargas O, Rochat H. 1986. Eur. Biochem, v. 155,p. 289-294.

171. Benjamin D.C, Berzofsky J.A, East I.J, Gurd F.R.N, Hannum C, Leach S.J, Margoliash E, Michael J.G, Miller A, Prager E.M, Reichlin M, Sercarz E.E, Smith-Gill S.J, Todd P.E., Wilson A.C. 1984. Annu. Rev. Immunol, v. 2, p. 67-101.

172. Fontecilla-Camps J.C., Almassy R.J., Bugg C.E. 1981. Trends Biochem. Sei., v. 6, p. 291-296.

173. Darbon H., Angelides K.J., 1984. J. Biol. Chem., v. 259, p. 6074-6084.

174. Sampieri F., Habersetzer-Rochat C. 1978. Biochim. Biophys. Acta, v. 535, p. 100-109.

175. El Ayeb M., Bahraoui E.M.,Gamier C., Delori P., Van Rietschoten J., RochatH. 1984. Mol. Immunol., v. 21, p. 223-232.

176. Fontecilla-Camps J.C., Almassy R.J., Suddath F.L., Bugg C.E. 1982. Toxicon, v. 20, p. 1-7.

177. Menez A. 1998. Toxicon, v. 36, p. 1557-1572.

178. GurevitzM., ZilberbergN. 1994. J. Toxicol. Toxin Rev., v. 13, p. 65-100.

179. Kharrat R., Darbon H., Granier C. Rochat H. 1990. Toxicon, v. 28, 509523.

180. Ziberberg N., Gordon D., Pelhate M., Adam M.E., Norris T., Zlotkin E., Gurevitz M. 1996. Biochemistry, v. 35, p. 10215-10222.

181. Zibergberg N., Froy O., Gordon D., Loret E., Arad D., Gurevitz M. 1997. J. Biol. Chem., v. 272, p. 14810-14816.

182. Altamirano M.M., Garcia C., Possani L.D., Fersht A.R. 1999. Nature Biotechnol., v. 17, p. 187.

183. Bernadi H. Fosset M., Lazdunski M. 1988. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, v. 85, p. 9816-9820.

184. Hille B. 1984. In Ionic Channels in Excitable Membranes Sinauer Associated (Sunderland, Massachusetts).

185. Rogawski M.A. 1985. Trends Newrosci., v. 8,p. 214-219.

186. Tempel B.L., Papazian D.M., Schwarz T.L., Jan Y.N., Jan L.Y. 1987. Science, v. 237, p.770-775.

187. Timpe L.C., Schwarz T.L., Tempel B.L., Papazian D.M., Jan Y.N., Jan L.Y. 1988. Nature, v. 331, p. 143-145.

188. Leonard R.J., Karschin A., Jayashree-Aiyar S., Davidson N., Tanouye M.A., Thomas L., Thomas G., Lester H.A. 1989. Proc. Natl. Aead. Sei. USA, v. 86, p. 7629-7633.

189. Tanabe T. Takeshima H., Mikami A., Flockerzi V., Takahashi H., Kangawa K., Kojima M., Matsuo H., Hirose T., Numa S. 1987. Nature, v. 328, p. 313-318.

190. Papazian D., Schwarz T.L., Tempel B.L., Jan Y.N., Jan L.A. 1987. Science, v. 237, p. 749-753.

191. Kamb A., Tseng-Crank J., Tanoye M.A. 1988. Neuron, v. 1, p. 421-430.

192. Pogs O., Kecskemethy Muller R., Krah-Jentgens I., Baumann A., Klitz H.H., Canal I., Llamazares S., Ferrus A. 1988. EMBO J., v. 7, p. 10871096.

193. Schwarz T.L., Tempel B.L., Papazian D.M., Jan Y.N., Jan L.Y. 1988. Nature, v. 331, p. 137-142.

194. Iverson L.E., Tanouye M.A., Lester H.A., Davidson N., Rudy B. 1988. Proc. Natl. Acad. Sei. USA, v. 85, p. 5723-5727.

195. Tempel B.L., Jan Y.N., Jan L.Y. 1988. Nature, v. 332, p. 837-839.

196. Christie M.J., Adelman J.P., Douglass J., North R.A. 1989. Science, v. 244, p. 221-224.

197. McKinnon R., Miller C. 1989a. Biochemistry, v. 28, p. 8087-8092.

198. Stuhmer W., Ruppersberg J.P., Schroter K.H., Sakmann B., Stocker M., Giese K.P., Perschke A., Baumann A., Pongs O. 1989. EMBO J., v. 8, p. 3235-3244.

199. Buthler A., Wei A., Baker K., Salkoff L. 1989. Science, v. 243, p. 943-947.

200. Frech G.C., VanDongen A.M.J., Schuster G., Brown A.M., Joho R.H. 1989. Nature, v. 340, p. 642-645.

201. Schwarz W., Passow H. 1983. Annu. Rev. Physiol., v. 5, p. 359-374.

202. Petersen O.H., Maruyama Y. 1984. Nature, v. 307, p. 693-696.

203. Blatz A.L., Magleby K.L. 1987. Trends Neurosci., v. 10, p. 463-467.

204. Latorre R., Oberhauser A., Labarca p., Alvarez O. 1989. Annu. Rev. Physiol, v. 51, p. 385-399.

205. Blatz A.L., Magleby K.L. 1986. Nature, v. 323, p. 718-720.

206. Menez A., Bontems F., Roumestand C., Giquin B., Torna F., 1992. Proc. R. Soc. Edinburg, v. 99B, p. 83-103.

207. Bontemps F., Roumestand C., Boyot P., Gilquin B., Dolianski Y., Menez A., Torna F. 1991a. Eur.J. Biochem., v. 196, p. 119-128.

208. ZeiTouk H., Mansuelle P., Benslimane A., Rochat H., Martin-Eauclaire M.F. 1993. FEBS Lett., v. 320, p. 189-192.

209. Goldstein S.A.N., Miller C. 1993. Biophys. J., v. 65, p. 1613-1619.

210. MacKinnon R., Miller C. 1988. J. Gen. Physiol., v. 91, p. 335-349.

211. MacKinnon R., Latorre R., Miller C. 1989b. Biochemistry, v. 28, p. 80928099.

212. Galvez A., Gilmenez-Gallego G., Reuben J.P., Roy-Constancin L., Feigenbaum P., Kaczovski G.J., Gacia M.L. 1990. J. Biol. Chem., v. 265, p. 11083-11090.

213. Giangiacomo K.M., Garcia M.L., McManus O.B. 1992. Biochem., v. 31, p. 6719-6727.

214. De Dianous S., Hoaro F., Rochat H. 1987. Toxicon, v. 25, p. 411-417.

215. Nutt R.F., Arison B.H., Smith J.S. 1992. In Peptides (Schneider C.H., Eberle A.N., ed.), p. 101-102 (ESCOM Science).

216. Gurrola O. Possani L.D. 1995. Biochem. Mol. Biol. Int., v. 37, p.527-535.

217. Vaca L., Gurrola G.B., Possani L.D., Kunze D.L. 1993. J. Membrane Biol., v. 134, p. 123-129.

218. Nieto A.R., Gurrola G.B., Vaca L., Possani L.D. 1996. Toxicon, v. 34, p. 913-922.

219. Bednarek M.A., Bugianesi R.M., Leonard R.J., Felix J.P. 1994. Biochem.

220. Biophys. Res. Commun., v. 198, p. 619-625.

221. Bontemps F., Roumestand C, Gilquin B., Menez A., Toma F. 1991b. Science, v. 254, p. 1521-1523.

222. Dauplais M., Gilquin B., Possani L.D., Gurrola-Briones G., Roumestand C., Menez A. 1995. Biochemistry, v. 34, p. 16563-16573.

223. Eipper B. A., Storfers D. A. & Mains R. E., Thé biosynthesis of neuropeptides: peptide a-amidation. Annu. Rev. Neurosci., 1992, 15, 57-85.

224. Fernandez I., Romi R., Szendeffy S., Martin-Eauclaire M.-F., Rochat H., Pons M. & Giralt E., Kaliotoxin (1-37) shows structural différences with potassium channel blockers. Biochemistry, 1994, 33, 14256-14263.

225. Garcia M. L., Garcia-Calvo M., Hidalgo P., Lec A. & MacKinnon R., Purification and characterization of three inhibitors of voltage-dependent K+ -channels from Leiurus quinquestriatus var. hebraeus venom. Biochemistry, 1994, 33, 6834-6839.

226. Bontemps F., Roumestand C., Gilquin B., Menez A. & Toma F., Refined structure of charybaotoxin: Common motifs in scorpion toxins and insect defen-sins. Science, 1991b, 254, 1521-1523.

227. Olaceendi-Portugal T., Oomez-Lagunas F., Ourrola 0. B. & Possani L. D., A novel structural class of K+-channel blocking toxin from the scorpion Pandinus imperator. Biochem J., 1996, 315, 977-981

228. Becerril, B., Corona, M., Mejia, M.C., Martin, B.M., Lucas, S., Bolivar, F. & Possani, L.D. (1993) The genomic region encoding toxin gamma from the scorpion Tityus serrulatus contains an intron. FEBSLett. 335, 6-8.

229. Delabre, M.L., Pasero, P., Marilley, M. & Bougis, P.E. (1995) Promoter structure and intron-exon organization of a scorpion toxin gene. Biochemistry 34, 6729-6736.

230. Corona, M., Zurita, M., Possani, L.D. & Becerril, B. (1996) Cloning and characterization of the genomic region encoding toxin IV-5 from the scorpion Tityus serrulatus Lutz andMello. Toxicon 34, 251-156(1996).

231. Gurevitz, M., Urbach, D., Zlotkin, E. & Zilberberg, N. (1991) Nucleotidesequence and structure analysis of a cDNA encoding an alpha insect toxin from the scorpion Leiurus quinquestriatus hebraeus. Toxicon 29, 12701272.

232. Xiong, Y.M., Ling, M.H, Wang, D.C. & Chi, C.W. (1997) The cDNA and genomic sequences of a mammalian neurotoxin from the scorpion Buthus martensiiY^msoh. Toxicon 35, 1025-1031.

233. Xiong, Y.M, Ling, M.H. Lan, Z.D, Wang, D.C. & Chi, C.W. (1999) The cDNA of an excitatory insect selective neurotoxin from the scorpion Buthus martensii Karsch. Toxicon 37, 335-341.

234. Zilberberg, N, Zlotkin, E. & Gurevitz, M. (1992) Molecular analysis of the transcript encoding the depressant insect selective neurotoxin of the scorpion Leiurus quinqueslriatus hebraeus. Insect Biochem. Mol. Biol. 22, 199-203

235. Zlotkin, E, Gurevitz, M, Fowler, E. & Adams, M.E. (1993) Depressant insect selective neurotoxins from scorpion venom: Chemistry, action and gene cloning. Arch. Insect Biochem. Phvsiol. 22, 55-73.

236. Becerril, B, Marangoni, S. & Possani, L.D. (1997) Toxins and genes isolated from scorpions of the genus Tityus: a review. Toxicon 35, 821835.

237. Senapathy, P, Shapiro, M.B. & Hams, N.L. (1990) Splice junctions, branch point sites, and exons: Sequence statistics, identification and application to genome project. Methods Eniymol. 183, 252-278.

238. Gurevitz, M, Zilberberg, N. Froy, O, Urbach, D, Zlotkin, E, Hammock, B. D, Herrmann, R, Moskowitz, H. and Chejanovsky, N. (1996)

239. Utilisation of scorpion insecticidal neurotoxins and baculoviruses for the design of novel selective biopesticides. In Modern Agriculture and the Environment, eds. D. Rosen and E. Tel-Or, pp. 81-96. Kluwer Academic Publ., Lancaster, U.K.

240. Zlotkin. E. Teiielbaum, Z., Rochat, H. and Miranda, F. (1979) The insect toxin from the scorpion Androcioma inauretanicuy. Purification, characterization and specificity. Insect. Biochem. 9, 347-354.

241. Zlotkin. E. (1983) Insect selective toxins derived from scorpion venoms: an approach to insect neuropharmacology. Insect. Biochem. 13,219 236.

242. Lester, D., Lazarovici, P. Pelhate, M. and Zlotkin, E. (1982) Two insect toxins from the venom of the scorpion Butholus judaicus. Purification, characterization and action. Biochim. Biophys. Ada 701, 370-381.

243. Dufton. M. J. and Rochul. H. (1984) Classification of scorpion toxins according to amino acid composition and sequence. J. Mol. Ero/. 20, 120127.

244. Strichaitz, G. R. (1986) The structure and physiology of toxin binding sites on voltage-gated sodium channels. In Natural Toxins Animal Plant and Microbial, ed. J. B. Harris, pp. 265-284. Clarendon Press, Oxford.

245. Kopnenhofer, E. and Schmidt. H. (1968a) Die wirkung von skorpiongift auf die ionenstrome des Ranvierschen schnurrings. 1. Die permeabilitaten PNa und PK. Pfluegers Arch. 303, 133-149

246. Zlotkin. E. Rochat. H., Kupeyan, C., Miranda, F. and Lissitzky, S. (1971) Purification and properties of the insect toxin from the venom of thescorpion Androclonus australis Hector. Biochimie 53, 1073-1078.

247. Cesteie, S., Sampieri, F., Rocnat, H. and Gordon, D. (1996) Tetrodotoxin reverses brevetoxin allosteric inhibition of scorpion alpha-toxin binding on rat brain sodium channels. J. Biol. Chem. 271, 18329-18332.

248. Brown, G. B., Gaupp, J. E. and Olsen, R. W. (1988) Pyrethroid insecticides: stereospecific allosteric interaction of the balrachotoxinin-A benzoate binding site of mammalian voltage-sensitive sodium channels. Mol. Pharmacol 34, 54-59.

249. Lombet A., Mourre C. and Ladzunski M. (1988) Interaction of insecticides of the pyrethroid family with specific binding sites on the vollage-dependent sodium channel from mammalian brain. Brain Res. 459, 44-53.

250. Maeda S., Volrath S.L., Hanzlik T.N., Harper S.A., Majuma K., Maddox D.W., Hammock B.D. and Fowler E. (1991) Insecticidal effects of an insect-specific neurotoxin expressed by a recombinant baculovirus. Virology 164, 777-780.

251. Slewart L.M.D., Hirst M., Ferber M.L., Merryweather A.T., Cayley P.J. and Possee R.D. (1991) Construction of an improved baculovirus insecticide containing an insect-specific toxin gene. Nature 352, 85-88.

252. Tomalski M.D. and Miller L.K. (1991) Insect paralysis by baculovirus-mediated expression of a mite neurotoxin gene. Nature 352, 82 85.

253. Chejanovsky N., Zilberberg N., Rivkin H., Zlotkin E., and Gurevitz M. (1995) Expression of a functional alpha scorpion neurotoxin in insect cells and in insect larvae. FEBSLett. 376, 181484.

254. Gershburg E., Stockholm D., Froy O., Rashi S., Gurevitz M., and

255. Chejanovsky N. (1998) Baculovirus-mediated expression of a scorpion depressant toxin improves the insecticidal efficacy achieved with excitatory toxins. FEBS Len. 422, 132 136.

256. Sampieri. F. and Habersetzer-Rochat, C. (1978) Structure-function relationships in scorpion neurotoxins: identification of the superactive lysine residue in toxin I of Androctonus ans Irai is Hector. Biochem. Biophvs. Ada 535, 100-109.

257. Zlotkin E., Fishman Y., Elazan M. 2000. Biochimie , v.82, p.869-881.

258. Miranda F., Kupeyan C., Rochat H., Lissitzkys. 1970, Eur. J. Biochem., v. 16, p.514-523.

259. Martin-Euclaire M.F., Rochat H. 1986. Toxicon, v. 16, p. 1131-1139.

260. Луцик M.Д., Панасюк Е.Н., Луцик M.Д. 1981 Лектины, стр. 13-16.

261. Косицкий Г.И. 1985, (Москва «Медицина»), стр. 24-26.

262. Laemli U.K. 1970. Nature, р680-685.

263. Reisfeld R.A., Lewis U.J., Willam D.E. 1962 Nature, v.28, p.281-285.

264. Dubois M., Gilles К.A., Halmilton J.K., Rebers P.A., Smith F., 1956. Anal.Chem., v.28, p.350-356.

265. Хорлин А.Я., Шиян С.Д., Маркин В.А., Насонов В.В., Мирзаянова М.Н. 1986 Биоорг. Химия, т. 12,№9, стр. 1203-1212.

266. Коль O.P., Максимов Г.В., Ревин В.В., Федоров Г.Е. 2000 Биофизика, т. 45, вып. 3, стр. 547-551.

267. Волкова Т.М., Гарсия А.Ф., Телажинская И.Н., Потапенко Н.А., Гришин Е.В., 1985 Биоорг. Химия, т.11, №11, стр.1445-1456.

268. Aue W.P., Bartolchi E., Ernst R.R., 1976. J.Chem.Phys., v.64, p.2229-2246.

269. Nagayama K., Kuman A., Wuthrich K.,Ernst R.R.,1980 J.Magn.Reson.,v.40,p.321 -334.

270. Kuman A., Ernst R.R., Wuthrich K., 1980 Biochem. Biophys. Res. Commun., v.95, p. 1-6.

271. Jenner J., Meier B.H., Bachmann P., Ernst R.R., 1979. J. Chem. Phys., v.71, p. 4549-4553.

272. Fukushima E., Roeders B.W., 1981 Experimental pulse NMR A nuts and bolts approach. London. Amsterdam. Don Mills, Ontarto. Sydney.

273. Wider G., Macura S., Kumar A., Ernst R.R., Wuthrich K., 1984 J Magn. Reson., v.56, p.207-234.

274. Gurevich A.Z., Barrukov I.L., Arseniev A.S., Bystrov V.F. 1984 J.Magn.Reson., v.56, p.471-478.

275. Арсеньев А.С., Барсуков И.Л., Шепель Е.Н., Быстров В.Ф., Иванов И.Т., 1985 Биоорг. Химия, Т.М., №1, стр.5-20.

276. Soroceanu L., Gillespie Y., Khazaell M.B., Sonthelmen H. 1998 Cancer Res., v.58, p.4871-4879.

277. Legos C., Martin-Eauclaire M.F., 1999 Bull. De Soc. Zool.fr. ,v 124, p. 127-137.

278. Whittemore F.W., Keegand H.L., 1963 Venomous and poisonons animals and noxious plants of the pacific region.P.107

279. Balint G., Ricin A.1974.Toxicology, N.2, P.77-102

280. Boyd W., Rguera R.1949. J. Immunol, v.62, p.333-339

281. Fisher E., Nguyen Q.K., Letendre G., Brossmer R. 1994, Glycoconjugate Journal, v.l 1, p.51-58.

282. Liang S.P., Pan X. 1995, Toxicon, v.33, p.875-882.

283. Neter E. 1956 Bacteriol. Rev., v.20, p.166-188.

284. Лахтин В.М. 1994 Молекулярная биология, т.28, вып.2,стр. 245-273.

285. Zenouaki L, KhaiTat R., Sabatier J.M., Devax С., Karoni H., Van Retsihoten J., El Ayeb M., RochatH. 1997. Vaccine, v. 15, p. 187-197.

286. Еришин E.B., Волкова M., Солдатова JT.H. 1982 Биоорг. Химия, т.8, N.1, стр 155-164.

287. Гуляева Н.Д., Лахтин В.М., Заславский Б.Ю., Ямсков И.А., 1993 Биохимия, т.58, N.8, стр. 1283-1289.

288. Шевченко А.А., Кост О.А., Казанская Н.Ф., 1994 Биохимия, т. 59, №Ц, стр. 1707-1713.

289. Ogilvie M.L., Dickter М.Е., Wenz L., Gertner Т.К., 1986 J. Biochem., v.100, p.1425-1431.

290. Pocock J.M., Cousin M.A., Parkin J. Nicholls D.G., 1995 Neuroscience, v.67, p.596-607.

291. Чараха A.P., Шевченко Л.В., Молодкин A.K., Плужников К.А., Волокова Т.М., Гришин Е.В., 1997 Биоорган. Химия, т.23, №3, стр. 163-167.

292. Schweit Н., Bruhn Т., Guillemare Е., Moinien D., Lanceling J.M., Beress L., Lazdunski M., 1995 J. Biol. Chern., v.270, p.25121-25126.

293. Cahalan M.D., 1975 J. Physiol., v.244, p.511-534.

294. Crus J.S., Matavel A.C., Leao-Filho H.M., Moraes-Santos Т., Beirao P.S. 2000 Neuroscience Lett., v.282. p. 25-28.

295. Hahin R., Chen Z, Reddy G. 2000 Toxicon, v.38, p.645-660.

296. Hoang N.A., Berezin B.B., Yamskov LA. 1998 J. Biology (Vietnam J.) v.20, p.39-42.

297. Couraud F., Jover E., Dubois J.M., Rochat H., 1982 Toxicon, v.20, p.9-16.

298. Cestele S., Catterall W.A., 2000 Biochimie, v.82, p.881-892.

299. Miller C., 1995 Neuron, v.5, p.5-10.

300. Gomes-Lagunas F., Olamendi-Portugal Т., Zanudio F.Z., Possani L.D.1996 J. Membr. Biol., v. 152, p.49-56.

301. Gimnez-Gailego G., Navia M.A., Reuben J.P., Katz G.M., Kaczonowski G.J., Garcia M.L. 1988. Proc. Natl. Acad. Science USA, v.85, p.3329-3333.

302. Luchesi K., Ravidran A., Young H., Moczydlowski E., 1989 J. Membr. Biol., v. 109, p.269-281.

303. Bontems F., Roumestand C., BoyotP., Gilquin B.,Doljansky Y., Menez A., TomaF, 1991 Eur. J. Biochem., v. 196, p.19-28.

304. Bontems F., Roumestand C., Gilquin B., Menez A., Toma F., 1991 Science, v.254, p. 1521-1523.

305. Cocaincich S., Ghazi A., Hetru C., Hoffman J.A., Letellier L., 1993 J. Biol. Chem., v.268, p. 19239-19245.

306. Cocaincich S., Goyffon M., Bontems F., Bulet P., Bonet F., Menez A., Hoffman J., 1993 Biochem. Biophys. Res. Commun., v. 194, p. 17-22.

307. Gooley P.R., Blunt J.W., Norton R.S., 1984 FEBS Left., v. 174, p. 15-19.

308. Gooley P.R.,Norton R.S., 1985 Eur. J. Biochem., v. 153, p.492-539.

309. Gooley P.R., Norton R.S., 1986 Biochemistry, v.25, p.2349-2356.

310. Dobson C.M., Perguson S.J., Poulsen F.M., Willams R.J.P., 1978 Eur. J. Biochem., v.92, p.99-103.

311. Arseniev A.S., Balashova T.A., Utkin Y.N., Tsetlin V.I., Bystrov V.F., Ivanov V.T., Ovchinnikov Y.A., 1976 Eur. J. Biochem., v.71, p.595-606.

312. Tacunora M., Tasumi M., Miyazawa T., 1978 Chem. Laft., N.7, p. 739742.

313. Tacunora M., Tasumi M., Miyazawa T., 1976 Biopolymer, v.15, p.393-401.

314. Nagayama K., Wuthrich K., Ernst R.R., 1979 Biochem. Biophys. Res. Commun., v.90, p.305-311.

315. Wuthrich K., 1976 NMR in biological research: peptides and proteins.

316. Amsterdam, North Holland Publishing Company).

317. NagayamaK., WüthrichK., 1981 Eur. J. Biochem., v.115, p.653-657.

318. Wüthrich K., Wider G., Wagner G., Braun W., 1982 J Mol. Biol., v. 155, p.311-315.

319. Wagner G., Wüthrich К., 1982 J. Mol. Biol., v. 155, p.347-366.

320. Billeter M., Braun W., WüthrichK., 1982 J. Mol. Biol., v.159, p.321-346.

321. Arseniev A.S., Wider G., Robert F.J., Wüthrich К., 1982 J. Mol. Biol., v.159, p.323-354.

322. Bystrov V.F., Arseniev A.S., Gavrilov Yu. D., 1978 Magn. Reson., v.3, p.151-184.

323. Быстров В.Ф., Оханов B.B., Арсеньев A.C., Афанасьев В.А., Гуревич А.З., 1980 Биоорг. Химия, т.6, №3, стр.386-392.

324. Keller R.M., Bauman R., Eng-Hiang, Hunziker-Kwik, Joubert F.J., Wüthrich K., 1983 J. Mol. Biol, v. 163, p.623-646.

325. Tanocura M., 1983 Biochim. Et. Biophys. Acta., v.742, p.586-596.

326. Bundi A., Wüthrich K., 1979 Biopolymer, v.18, p.285-297.

327. Bundi A., Grathnohl C., Hochman J., Keller R.M., Wagner G., Wüthrich K.,1975 J. Magn. Reson., v.18, p.191-198.

328. Marion D., Wüthrich K., 1983 Biochem. Biophys. Res. Commun., v.113, p.967-974.

329. Bodenhausen G., Kogle H., Ernst R.R., 1984 J. Magn. Reson., v.58, p.370-388.

330. Keeper J.W., Jamer T.L., 1984 J. Magn. Reson., v.57, p.404-426.

331. Bystrov Y.F., 1976 Prog. NMR Spectroscopy, v.10, p.41-81.

332. Braun W., Wagner G., Wögöher E, Vasäk M., Kägi J.H.R., Wüthrich K., 1986 J. Mol. Biol., v.187, p.125-129.

333. Hurby V.J., 1979 In Chemistry and Biochemistry of amino acids, peptides and proteins (Weinstein W., ed.), v.3, (New York, Marcell Dekker, ed.).

334. Braun W, Wider G, Lee K.H, Wüthrich K.,1983 J. Mol. Biol, v.169, p.921-948.

335. Kumar A, Wagner G, Ernst R.R, Wüthrich K, 1980 Biochem. Biophys. Res. Commun, v.96, p.l 156-1163.

336. Wüthrich K, Billeter M, Braun W, 1984 J. Mol. Biol, v.l80, p.715-740.

337. Lewis P.N, Momany F.A, Scheraga H.A., 1973 Biochim. et. Biophys. Acta, v.303, p.211-229.

338. Арсеньев A.C., Кондаков В.И, Майоров B.H, Волкова Т.М, Гришин Е.В, Быстрое В.Ф, Овчинников Ю.А, 1983 Биоорг. Химия, т.9, №6, стр.768-793.

339. Kumar ЬА, Wagner G, Emst R.R, Wüthrich К, 1981 J. Amer. Chem. Soc, v.103, p.3654-3656.

340. Kraus E.M, Cowburn D, 1981 Biochemistry, v.20, p. 671-679.

341. Wüthrich К, Strop P, Ebina S, Willamson M.P, 1984 Biochem. Biophys. Res. Commun, v. 122, p.l 174-1178.

342. Шульц Г, Ширмер P, 1982 Принципы структурной организации белков. Москва, изд. Мир.

343. Molday R.S, Englander S.W, Kallen R.G, 1972 Biochemistry, v.ll, p.150-158.

344. Almassy R.J, Fontecilla-Camp J.S, Suddath F.L, Bugg C.E, 1983 J. Mol. Biol, v.l70, p.497-527.

345. Arseniev A.S, Kondakov V.I, Maiorov V.N, Bystrov V.F, 1984 FEBS Left, v,165,p.57-62.

346. Perkins S.J, Wüthrich K, 1979 Biochem. et. Biophys. Acta, v.576, p.409-423.

347. Ell A, Ealick S.E, Bugg C.E, 1985 In Molecular Architecture of protein and enzymes, p. 65-97 (New York, Academic press).

348. Babin D.R, Watt D.D., Goos S.M, Mlejnek R.V, 1974 Arch. Biochem.

349. ВюрЬув., у.164, р.694-706.

350. Гришин Е.В., 1985 Доктор. Дис. М.: Институт Биоорганической Химии РАН.

351. Гришин Е.В., Волкова Т.М., Солдатова Л.Н., 1982 Биоорг. Химия, т.28, №2, стр. 155-164.