Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ, МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ И ЭШЕРИХИЙ В КИШЕЧНИКЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГНОТОБИОТИЧНЫХ ЦЫПЛЯТ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ, МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ И ЭШЕРИХИЙ В КИШЕЧНИКЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГНОТОБИОТИЧНЫХ ЦЫПЛЯТ"

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР ПТИЦЕПРОМ СССР

Всесоюзный научно-исследовательский к технологический институт птицеводства

: ¿ с ¿¿г

На правах рукописи

Тимошко Мария Андреевна

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БИФИ ДО БАКТЕРИЙ, МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ И ЭШЕРИХИЙ В КИШЕЧНИКЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГНОТОБИОТИЧНЫХ

ЦЫПЛЯТ

Специальность: 03.00,07 — микробиология

■ : Автор е ф е р а т

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ЗАГОРСК • 1973

1ЮНИСТКРСГВ0 СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА. СССР ПТИЦЕПРОМ СССР

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССадОВАТБШЖИЙ и ТЮШ0Д01МЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ ; ПТИЦЕВОДСТВА .

На правах рукописи:

Твмошко Мария Аядреевна

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИШДЕЙСТВШ БИФВДОБШТЗРИЙ, НОЛОЧГОКИОЩИ БАКТЕРИЙ И ЭШЕРИХИЙ В КИШЕЧНИКЕ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГШТОШУГИЧШХ ЦЫШИГ

Специальность:- 03.00.07 - микробиолога*

Автореферат 1

. диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук ■

Загорск * 1973■

Работа выполнена'в Отделе микробиологии Академии;наук Мол-> ■'■ "^Гг давсяой ССР (1970 - 1973 ), - " . ■ ' .. ' . • - - • ; ; ; ; ; Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста

состоит вэ введения, УI глав.вкдючаюцях 46 таблиц и 52 рисунка, ^

У'-; ■ ваккочения я выводов. . /'-> й'й, '/¡с-' V^vV-T-^v

■ Список литературы включает 305.наименований, из пих 171 за-' рубежшсс авторов.

• V Научный руководитель £ !; '''-Г У.Уг^Т/ ■'■■i

: кацдэдат ветеринарных наук,старсшй научный сотрудник

.Научный консультант '."•••'••'. j . ; • ''„' '[■■¿У- ■

''•••/•• доктор медицинских наук Вилываяская Ф.Л. •;/ ' ' . •, '-'.

. • : ; - ' Официальные оппоненты: л?> .v'.!

• Доктор ветеринарных ваук ; Сидоров М.А.

у Кавдвдат ветеринарных наук Воробьев С,А. ~ .• •

Ведущее предприятие ~ Мооковская Ветеринарная Академия V

; 'л АвтотеФбрат разослал " И « ;: ;*;

' - j Зашита диссертаций соотойтоя " ' " " ф^Лр-С^^!^- v>' ' _ на.заседании Учёного Совета Всесоюзного научцо-ассл"!дователь-- •' -: " ского и технологического института птицеводства. . • . .' ; ; -. '.,.: ;; '. О диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИТИП '••••••".: '

' Отзывы к замечания яа:автореферат в двух экземплярах , '.*' . v.. • > заве.лшшецвчатьв. просим направлять во адресу: I4I300,г.Загорск ^ - И,Московски области,ул.Птидеградская,дом 2б,Учёний Совет. .. .

; : '. Учёпый секретарь Совета - " ■■ ~ ■■':'■.

• кандидат ветеринарных 'наук : ■ ."; •„.,• ' >: (Н.Г.Федорчеюсо) - .....

: -.:.- .-ч - v..

ВВЕДЕН И-В'.-

В решении задач,направленных * на повышение - продуктивности животных,весьма;: актуальный является изучение качественного количественного состава нормальной шшрофлорн пищеварительного тракта.Нормаяьная микрофлора ксяечяика; играет' важную физиологическую, иммунобиологическую'■ антагонистическую роль в жизнедеятельности оргаиизма.Вместе о этим она характеризуется. отяоож -тельным постоянство«' видового состава, . • .. "'Л-Vv;

* Согласно современным представлениям -организм человека к. мсвотююс на*одитоя:в определённом экологическом; равновескж'о представителями■нормальное микрофлоры ж в тесной симбиотячесвой связи с вей,Это.позволяет,рассматривать макроорганизм и микро бов его l населявднх как "сйазалсированауюя экологичесную сиотвмз; в которой стабильность микробных ассоциаций определяется Г как эубиоз .Нарушение количественного соотношения» характерного ' для нормального биоценоза, следует расценивать как диобиоз или дио -бактергоз,Это явление нередко наблвдается в результате применения евтябиотиков.сУльфанЕламвдных- препаратов и других лекаре'-. твенкых средств,а также как следствие развития инфекционного к других' процессов в KHme^mweiBaflbmtocit^illfeefiHtfepr^SSS^aabiiiaa-ская,ШтеПнберг,Х970;Вяльшаникая о соавт,, 1972 ^др*), . ; , Большое значение. имеет изучение: этого вопросаи для развн-; тяя космонавтика,так как ■ при строгой" изоляции человека и живот-' наг в замкнутых биологических системах" изменяется качественный и количественный состав кишечной микрофлоры,что'приводит к раз; витии дисбактериоэа( Бенгсон, Томе, 1966; Luekey, 1938;Лебедев,Пе -, тров,1971;Шмов'с'соавт. ,1972;Сороклн,Тимошко,НЕКолаева ,1973 X ■i Профилактика и лечение дисбактериоза заключается в восстав новяении нормальной микрофлоры путём направленного заселения кн* швчиика^её представителями.Лля этих целей используются ктеяробы-антагонисты, в .частности: бифндобакте pira,молочнокислые ~бакте ржи, полезныештаммы; эшерихий и др. .Экспериментальные исследования : по выяснению -взаимодействия различных видов бактерий - .предста-с вителей нормальной"; кишечной' микрофлоры - должны • быть направлен« . па боле?эффективное; использование их; в практике в качастве ле-■чебно-профилактичеекгсе средств при дисбактериозах' различной этиологии. По зтоь^: вполне обоснована необходимость проведения эко~' ; перименталышх исследований по ' подбору - специфических и активных . штаммов бйфвдобактерий и молочнокислых байте рий, ; которые'.. можно было бы' испольэовать в различных сочетаниях для скармливания' -;':

цыплятам в условия* птицефабрик. ' .у V ' *..;' -: - .:">

V Г.* г Учитывая вышеизложенное,, в задачу наших исследований его. ; V

;у. "-:-;.дмог У'у^у; •;' ■ ■-к 'л

'.."..': I«Изучение становления микрофлоры кишечника дшият о учй -

V-том количестваосновных представителей нормальной микрофлоры ки- : -7 ш9чнш1а:б^вдобактерий,молоч1ю1отслнх с(ажтерий и эшеригий. • / ,

_ > 2,Выделение чистик культур бифидобактерий и молочнокислы*. ' , бактерий кз содержимого кишечника цыпкят и кур л определение юс - ; видовой принадлежности. ' ' -- ' ,у '' ■'■ ' У.' ■. '"-Х'1

■ /3.Подбор оптимальных питательных сред для вдяьтквированшх '. ■

■ ;-■■■ .;;■■ ввдаленных штаммов 'бифидобактерий и'Молочнокислых: бактерий в;" у . 'У / лабораторных условиях и для получения микробной масс«. ■■■

:■ 4 »Изучение приживания и'взаимодействия между. би$идобакте-> ■•••'•

; - ряями, молочнокислыми бактериями и 'эшерихиями М-17 в ' шщеваря • - - тельном тракте гнотобиотичшх цыплят при введении одного,двух и 1 * 'тр&е видов бактерий, а также 1а тхгго при совместном их посеве • .,•• на питательной среде. '..УУ -...'уу: --■ -У'. У-'У-У У!уУ

:.: У.;У - '5.Применение .наиболее активных штаммов1 бифидобактерий и но- * - лочноккс/пос бактерий, а также штшш эшерихяй М-17 прявыралргаа- - '

"уу У. нии шалях 6 птицеводческих хозяйствах» ;УУ '; 'У""-. .V :'У • у

у *у-;,у ■'■'.., обзор литературы , „ . _

.У ■У - У.. ';? Данные литературы свидетельствуют о том, что в состав норУ ■ мальной микрофлоры кишечника человека и животных входят бифядо- ; \ ; <:'..'у - бактерии,молочнокислые бактерии,энтерококки, зшерюсии,стафилокок- ' >> ;■ ■ г; У; У'ки и спороносные анаэробные микроорганизмы типа клострвдий(Ба - ;''■;' 'у, , сина,1931;Вогулкин,1949|ЗЬ»р1гов1 я1.,I949}Га Ймбер £,1957; Гейм-У: У .

: . . берг о соавт.,1934;1>иЬоа 1936;Лизько, 1959;МаI» *1»Д9о9 .У' >г'У-_ ШЛвиока, 1969;Ввгпвя,Хшреу 1970;Мог!вЫ1а в г »1,,:1971 • Шилов -У ' У,; У с соавт., 1372;Сорокин,Тишшко,Нш{олаева, 1973 и др.Ь" -уУ-.УУУ. ;,У ; "."• -у1:". Большое внимание уделяется вопросу о формировании микроб-ч ного пейзажа кюечника человека и животных.При этом рядом авто- " . -■У ров■в опытах-на базмикробшх животных установлена специфичность V У'.-У . представителей нормальной микрофлоры кишечника для определённых^'-;" . ^ у: видов животных,а такжч показаны сложные 'симбиотические и 'антагонистические взаимоотношения между микроорганизмами (шдаиока, 'у.;Л969;Мог1а1ги* е 1 .Л 971;Тш.юшко,Сорокен,1972;Сорокин,Тимогако':У' г--'■',:./* V,. 1973;Сорокин,Ттюико, Николае па, I" 73 и. др.).- "■ уУ ;7 '

.;'■у - .у,-Материалы по изучению взаимодействия микроорганизмов в кй-- ; ' ^' - • • шечнике гнотобяотичных животных сввдетельствуст' о том, что без - У. "О У - У ;у' микробные.'животные являются незаксншлой моделью для изучения и ."

J г' ^ " • Г

.-'Л' 1 • ' ■ ' \ ' * ' ' t , ' ^ i--— 1 ; ■ i . ч *

получения достоверных результатов,о характере"течения биологи « .V v -ческих процессов1 во многих областях экспериментальной биолог**, ; -в частности микробиологии,!} условиях точного-эксперимента о *о- .. ' : „ пользованием гнотобиотичных животных представяяетсявозможным , -наиболее полно установить характер, вааимодвйстшм'меаду рвэдет-'Л;' ':^

■ ннми видаки микроорганизмов,а также ы'еяду opramrafOM хозяина ш 'микробами, -' ' Г ^ '■ \ ' ',■"*.' -.'■" * :"' .-. V :

; Внимание исследователей привлекает ряд факторов,вызывапвдх' , нарушение нормального состояния микробного биоценоза в кишечни- ' ; ке.К таковым относятся:применение.антибактериальных препаратов,: ::: '/.-; ' обладающих'широким спектром действия по отношению не только. К ' ''ч: , патогенным микробам, но и к полеэноЙ М2крофлорв;развитив - иифек- * - --•. аионного процесса, a также строгая изоляция человека Е:живо*ннх. 'О. ./ ■ в биологически замкнутой системе и дальнейшее^пребывание в ств-V ршгьних условиях .Вместе с тем даётся обоснование лечения * про; ' V. фмактики дисбактервоэа.выэванного вышеуказанными причинами,ко-,;^ ' " торов сводится к применении чистых культур микробов-антагонжо - ?

: тов о учётом.строгой специфичности испытуемых культур бактерий ' г : ' ' С- -- '.'■ для, определённых видов животных, ■■ " . V. ■ ' ; ■'■'' ■

х Учитывая частоту, возникновения в последние годы дисбактрк-

. - ~оэа,в литературе уделяется внимание вопросам лечения о помощью ¡-..'О1' микробов-антагонистов.При этом ¡ряд авторов( Klt*uok»I969; Mori -eblta et *1.,-1971;Тишшо,Сорокин,1972;Сорокин,Тим0шко,Нико -г ./' : ', , - лаева,1973 и др. )указывают, что при подборе таких микробов ис - , ключительно важно учитывать их специфичность дюг определённых •• . г-у .■■'■■■ видов животных. у."". ■ '-'"Г ■ у. у -- ■ ' A-.'V.. v ; v'y' -ч1

Отмечено,что' поиски новых специфических штаммов бактерий •:.' « антагонистовнеобходимо проводить среди облигатло-аваэробвнх, ' ; ' ' факультативно-анаэробных и аэробных груш микроорганизмов. • Г . ■

:: ' методика работы :v;

г' . . • Исследования проводились в лаборатории гнотобиологии ан "-••-«. : Молдавской ССР и на' Дубоссарском Госпяемптинезаводе. J Зр

■ ^ : ■ Количественное,содержание бифидобактернй, молочнокислых ;

- '■■'.■ бактерий и эшеряхий в содеряштм кишечника цыплят определяли . ■ - ■■ '■: по общепринятой методике:навеску свежих фепес1ив более 2-3 ча-ч сов хранения в холодильнике) разводили в. 10 раз стерильным фи -, -"".-■ . ,зиологическгал.раствором,тщательно"размешивая,в пробирках с ре-~ "" : эиновыми пробкагт.Из основного разведения фецео делали ряд по-4-, ' : слсдуших десятикратных разведэнкй до 1СГ* .Из соответствующих ■ разведений проводили посевы та следующие питательные - 'среди . :

Блаурокка, + 1ил:ТВИНа-60 --для определения - * количества; бифмдо -,бактерий;Рогоэа в,шдификадяи Ленцнера г для определения'-коли--;, чества шлочнокислшс. йактёриа и Эндо - для рпределвния количества эшерюсяЯ.На гказашще штательт1в-среди-засеБали-по'0Д/ ил материала из 5-11:раз¿адаиий.Для установления роста бифидобак терийишлочнокиолыхбактерийв чашки Петри вносили материал к 'заливали растопленными и охлаждёнными до„45-50°С средами Елау

рокка и Рогоза;а' для выявления эшерихий материал высевали на па верхнооти шдсу111енной..срздаЭадо и раопредеяяли'по среде шпате-лем.Чашки о пооеваш инкубировали при, 37; 45и 46,5°С в течение 24-Э6чао6в в аэробных я анаэробных условиях.После термостата -^рования ;пооевов шдочятнвали колоншбантерий и определяли ко -личеотвенное содер^жадае мшс^ выражали: в десятичшк логари$»/ах. ■ . ;

-Быделениечистыхкультурбвфидобата^ ;;вн -

"росших:колоний:на среде■Блаурокка.Выделенные культуры из содер-. зсшоро: кишечника цыплят и кур идентифицировали по схеме, предлог.

*внной«и»иок». (1959). . /: X;

■¿■';•; Чистые культуры молочвокисхтк бакте рий вццеляли из колоний,' выросших на среде Рогоза в модификации Ленцнера. Бвдовую принад-- л е*нооть выделенных' штаммов молочнокислых бактерий из; содержи иоро кишечника цыплят икуропределялипо схеме, предложенной ; Левдиером (1971)..'; < - " -г'^у,

_ Дна проведения исследований по - изучение взаимодействия би-' фидобактарий, молочнокислых бактерий и эшерихий" т!*о необхо -димы были безмикробные цыплята.Получали - и. выращивала гнотобво -тичнет!щплятш,штодщ1е,раэработалноа.в:ла<3оратории'гнотоби1^' 'Логии АН Моадав'ской ССР.для чегоиспользовали изолятор; предло • -жешшй Сор,кинымЧ19б9),Стерштэацто.изолятора осущвствляяи т ч' формальдегидом в гаэообразпом виде (по Травничек и Маядел,1966), в надуксусной кислотой в 2?-ном растворе.при двухчасовой 'эксда-эпцин.из расчёта 1л ва11р обьёма .Надуксуоную кислоту готовили ; по Карнокицкоцу_(1961),В шлюзах в качестведеэобарьвра нспаль ~ вовалн раствор диовдш* 1:1000.

; ■ - 7 Микробиологический "контроль стерильности изолятора,материала» корма нживотвых осуществляли по - методу. Вагнера ( ш»епег » 1959).; глл;;^

;У> В'качестве даетн- при выращивании безшкробных цыплят" при меняли; раивон ь^-гааР; разработанный »««у^в^дЛ/г'^хюа^.'^^^^"^;-?'

Отершшзапт коша.водн.а также инструментов и других '

\ ; вспомогательных материалов для выралшшния беэмикробных' цыплят проводили в специальных контейнерах путём двухкратного автокла-; . • вированвя при 121°с в течение 2S минут о суточным интервалом. "Í-V ; Контейнер асептически подстыковывался к изолятору. : • ' . ;■-■■.

; . .. Воздух, поступающий в изолятор, стерилизовали фильтрованием

через фильтр из стекловолокна или фильтр Петряпова .марки ФШ-Ii -■-■^■■у ',:..-'. К подготовленной системе через дезобарьер,после соответ -

' "! ствующей обработки, подавали 19-дневпые эмбриокы.Вылупивпгаеся цы- Л;. _->; ' \ шита, после определения стерильности,служили экспериментальной; '■"■' ' моделью для проведения дальнейших исследоваллй. • • . ..

.v' ■', / .Изучение взаимодействия между бифидобактериями.молочнокио- •

- ."• лыми бактериями и эшерихилми проводили в опытах la Titro и- la • ■.•;> • ri*o .при этом использовали,взделепиые нами из содержимого «ж-.-;шечника цыплят и кур,итаммы бифгаобактерий Blfldobacterium *Ьею-•.шорйНит var.avlum и молочнокислых бактерий beotobaolllua а»-

iivarlúa таг.•aviue " и,применяемый для приготовления отечео. - . . 'j. ■■■ твенного препарата колибактерина,шталм Escheriohia coli < W-I7.. . .<*- ■ Опыты ln vitroпроводили путём посева кавдого' штамма иопы • ' ' туемых бактерий совместно и раздельно'на оптимальной питатель - 4 . ... ....... цой средеЛерез различные сроки ипкубалии определяли, путём по* - ' ceDa из серийных разведения 4на среды Блаурокка, Рогоза и Эндо , : -> '-' ■7"'."■ количественное содержание в 1мл питательной среды кавдого

взятых в опыт,штамма; W ■- ^ '- ."': .'."-'.'.'■■■'"":'

■.; ; • Опыты ib viv'o осуществляли на гнотобиотячных цыплятах.

Каждому цыплёнку, после определения стерильности,вводили одно -" Г;. кратно соответствующие культуры бактерий в количестве 10^ ми - "„■:;; г» '/-ч кробных клеток в-1мл.Через "определенные интервалы времени : от л \ " ..'■' цыплят брали пробы фецео и определяли в них-количество изуча - . V ¿ У' . Л,, емых бактериЙ.В конце каждого опыта цыплят, забивали и выясняли 1

количественное содержание' бактерий в 1г. содержимого различных ■ V"", ■.■■■*■ " отделов пищеварительного тракта, ■■ '■/.г ■ ■'; " . 7■■■

■ '■;. Результаты исследований обрабатывали статистически по.не- - : -тоду Ашмарина и Воробьёва (ISS2). • ■■;■;■> " '

>'■ >; ' : Изучение'-эффективности применения культур бактерий при взращивании цыплят проводили на Дубоссароком.Госплемптивеэаводе, ■ ^ "В опытах использовали пышшт породы белый леггорн при клеточ -

ном соде ржании .Цыплятам вводили перорально или в смеси с корм- . -. ■ • ом культуры би^идобактерай,молочнокислых бактерий и эшерихЕй ' M-I7. по 106м;1кроб1шх. клеток на каждого циплаыка.%льтуры вво- -'у.■:■[■■; . :: ; • дшги нцшштагл одан раз 'в' день за 2 часа до первого кормления ;

'вдв о' первым кормлением, и в дальнейшей раэличяымакурсами.Ука - Г:.

в смд-

он по два и три ввда микробов;При атом учитывали эффективность ' - ■ у введения микробов путём регистрации ежедневного отхода.привесов ; -; г. цыш1ят после их взвешивания через- каждые-5-7 дней до 20-30 7. «вевного возраста .Одновременно учитывалось количество бифвдо г ' " баетеркй.молочтокисяых бактерий и эшэрихий в содврхшюы кшпеч --у'*: 'ни» опытннх и контрольных цыплят. ..С-■ лЛ-:.Х';7-^" . V1*' . . ""Статиотическую обработку результатов исследований по при - /У/' .

: . ьесам цыплят осудаствляяи по методу з»*»1,Тогг1с (1960). • . .

.'л\ ■ становление; микромощ,гащвчника шшлщ1.л ^

: ■- Известно,что в утробе матери животные обычно развиваются.в; '•'. : .' : : стерильных условиях,Посла рождения о первым вдохом воздуха но-'

■ порожденный встречается с различными микроорганизмами,которые' •'•• ^ находятся во внешней среде.В связи с втим большой теоретический .г':/'-' я практический интерес представляет изучение вопроса приживания "

у у микроорганизмов, а такзса формирования микробного биоценоза в ш- ...-. щеварительном тракте. '.' ■■ ^ ' ■■*"-■"'','?'

■ ■ ЕцЗ в 1949 году зь»р1гсг«1 «1, в результате детального я-г'-.У

; ■ ■ . 7 ,тщательного изучения микрофлоры разлпчных отделоэ кишечника шш- ^ - у яят вшпашш,что; количество общих аэробныхмикроорганизмов,лак - . V тобактерий и. эшерихий через: 16 часов шел в первого кормлениядо- -'*',.-"1 --.у' стигает максимального уровня. ■ ~ -у- _ . *'';

Н-чпи опыты по изучению становления микрофлоры в кишечнике . цыплят породы белый леггорн в условиях птицефабрики показали, " •.. <"■:.- ■: что, бифидобактерии, молочнокислые бактерий а эшврнхиа до первой

го кормяения в кишечнике не обнарукены.Но уже сцустя_2 „ часа 1 :■ после первого кормиения в кишачнике были выявлена эгаерихия'.; и ; • ; '." у : V.. > бифидобактерии.Молочнокислые бактерии'высевались из проб фецео •.

от цлшгг 4-дневного возраста.Максимальный уровень количествен^ у'' вого содержания изучаемых групп бактерий установлен для этери- /у " ' ■хий к недельному возрасту,для бифвдобактерий'- к двухнедельно- .; ^ ■ 7 цг возрасту и для молочнокислых бактерий - к месячное воэрас-' '■ 'г ■■'*,■' ;ту*В количостввпом отношении доминирующее' положение .эаипмаит

■ , - - бифидобакгврш, на втором месте - молочнокислые бактерии и' на Л

третьем - эиорихии. :■■ ■ '.'. >.' ■ -'; ' ■ " ■ '■:,;

■ ' Иде нтвфикацию выделе иных 'штаммов бактерий осуществляли по ;

■ ■' :"- морфологическим, физиологическим и биохимическим; свойствам.Ха - , V

■', .„, рактеристйка бифидобактерий получена при использовании' 24 тес-., •' / ■' ^ *; тов, рекомендованных :шлвиока (19&9) .При этом • установлена^ их . ^

принадлежность к роду aixidob«ct»rtua и дну« ввдам Bifidobao-/Urina ".ttMrnopbilm У HBlfldot>*ct«riiu» peaudolongui» .ИцбНТИфИ-

капшо молочнокислых бактерий проводили на'Хб теотах.рекоиеидо-ванных Денцнером (I97X) .Приэтоы установлена!!* принадлежность; К роду L»ot©b»cillue и двум Видам.ЭТОГО роде Ь*»»11т»Пвш

L.aoldopbllue. . ■ .■■ У'У.';^ •'}.. У ... '•>' - У". У

изучение взшпяействия мшу вифидо бактериями. ' ' 4 .'"

■ МОДОЧНОКЖЛЫМИ БАКТЕРИЯМИ И ЭШЕРИКИЯМИ И-17 ' - .У'

щ vitro иг» vivo в кишвчнкке ееэмикрот^ íyjqjyffx у-у ^

■ В шщеварительноы тракте.. человека и животных находится большое количество различных микроорганизмов,между которыми складываются определенные &кйлогячдские взаишотвооения.В ре « аультате этого наступает динамическое равновесие - формирует -оя количественный, и^ видовой состав нормальной микрофлоры. :;";

' ' С развитием гнотобиологии откршюсь возможность более глубокого и детального исследования взаимоотношений между микро организмами, васелявдами организм человека в жиэотннх.По данным Duclujstau et ali(I963), Ducluz«au,KaÍbaud (19б8,196Э),Чахава (1372),Сорокина и Николаевой (1973) для моделирования этогоне-ваменишй объектом служат безмикробные животние .Возможность жк шльзования базвдтробныг жизотных при изучении антагонизма я симЗиоза мелду микроорганиэшми показана Танами (1966) ,4иллипо (I9S6), Horlehlta et al. (1971) И др. 'у> У'-;};.,: ХУ^Д'У ■ Исследованиями, проввдетшми »uclui•au, Наibaud (1968,1969), v«n der Waaij et *1.Ц969),Чахава(1972) z др.»установлено,.'"что при последовательном заселенш^пищаварительного тракта гното -биотичных животных определёнными видами бактерий можно создать стабильною микрофлору,которая оказывает "сопротивление* вселению новых случайных видов микроорганизмов. Защитна 9 действие нормальной микрофлоры кишечника обусловлено не только антаго -низдам между микробами,но и повышением сопротиыяешстн орга —• низма к патогенным" микроорганизмам*" ' /У'-У у'У У7У

. При подборе наиболее активных штаммов, бактерий для с кар — мливания цыплятам на птицефабриках необходимо было изучить возможность получения ассоциаций из различных видов бактерий" представителей нормальной микрофлоры кишечника гошлят,. У"

■ Для .решения поставленных задач были проведены 4 серии опытов, вкоторих изучали динамику, размножения, приживания и взаи модействия Bifidobacterium t hemophilus var.*TÍua,L»ctobacil -lua »alirarius var.aTiua и Escherichia colU-IV В кишечнике

, : Л . гнотобиотичныхяыплят, а также возможность ■ совмвстного культиви- '. : У < •• рования указанных видов бактерий'на питательных средах,

.'■-* а)ВэашюдеЙСТВИе между Bifidobacterium tberuopbilua J-:г-'--'.г'-" - .' таг«»viurn ' и Eecherichi» coli ||—17 •■' v v^'y^

' ■■■■ Изучение взаимодействия в,thtrnophilua var.aviua в Б. со - у.*;- ; •"•'.' il . M-I7 в опытах in ritro показало (рис.1),что через сутки » \' . •.".•. '.• - при раздельном и совмеотноы посеве,количество' бактерла в 1мл .. \ '. питательной среды было, почти на одинаковой уровне - 9,03 и 9,23 , ; log /г соответствеяно.Череэ 72 часа'оба" вща бактерий'при сов 7

■ : -у; местноикультивироваялн обшруживалзгсь 'вУ большем количестве.чем-

* при раэделыгом.Это свидетельствует о том, что между бифвдобакте- • :•' \ . ршши а эшернхиями М-17существует свмбнотнческая взаимосвязь ., . . •.-т»е. они'«иодируют рост друг друга.; • : " :.'.'/ • .

"ifi'v^vV; Для выяснения тех же вопросов на бёэлп1к'роб1«1сс.цышштах,''поо- ' ••;.*';

-. ледпих в 3-дневном возрасте заражали культурой ЕГсо11' М-17.Как * . •'.- / • видно из рио.2,уже через 6-часов после дачи цыплятам бифвдобак-. V -['■'■!.} терий их-иоличество_ в 1г фепео составляла" 6 ¡,25 log /г микробных ' ' :• каеток,а черев 72 чеса их количество достигало максимального -уровня - I2;83lo«/г.ма1сроб1!ых кяеток,После да'ш второй культу- ; ' ■ • ■ ры,несштряна максимальное~ содержат!® бифгвдобакгерна в кшпеч -; ."'V:' :^яике;шш[ят» отершаш^аюи/хо]^^

п^оле их дачи,или 160!часов от начала опыта,они бшги обнаружены *- . *• '' У в максимальном количестве - 9,46log /г мйкроб1шх клеток. Нри- .

этом количество убифцдобактерий- в конце опыта составило' 12,21 log . ' шкробпых клеток в 1г фецес.Такш образом,проведенные исследо ~ . : - вания шкаэалн,что как in Tit го ,так и in г1гсмежду би^идобак

■ 7 териями.а аверихиямн M-I7 иаблодаются симбиотические взаююот -^УЧи--'

.; ношения.Следовательно, испытуемые штаммы бактерий можно оовмест- \ -;; • : - у но'культивировать на питательных сродах и скармливать цыплятам.

.'./•'•'.;:; ( б)Взатюдейотвие между Lactobacillus ealiTariue тег. . ;.У" тЧ-.•'/' • .aviue и Escherichia coli 14-17- . - v/Wy • . .'

При изучении взаимодействия l.eall»iiriua 'var.aTiue и Е.' * ■' : colt ИМ7;в опытах in vitro установлено,что при совместном кул»- *■ '.; • ■ -' тшироваяии молочнокислые: бактерии высеваются в большем коли ., - • : ^ :.; . честве.чем ара раздельном и уже через 24 часа после посева ока- '. . -,;; -8ываг^ 1юдавдящее действие та-р. от эшерихий 1^17Лерез 48 ^ад ' • 'оов•совместного культивирования рост последних не установлен . ,7 : .-v'-'. ^ 'Гi '.(рнОфЭ) .Болъйюй^янхврбо' представяжю: выяснение вопроса взаимз ^ / действия этсаэанишс бактерий в кшзчнике беэмикробшос .цыплят.'

, ' ; Кои видно из рио. 4, молочнокислые бактерии уте через неоколько, ; J V г • часов после введения ихщпшггам, обнаруживается г большом ко- . . яичестве ,чем эшеристи в пробах фзцео.Приэтоммевду указан -v ними группаш/бактерий ■ создаются определённые экологические' . 1

. . ' ооотяошения» ■";■ vr '■■'■. : - *■■ v" ■; ■

; •' Полученные данные подтверждают мнение H*«n»l,iwiier-Beu- : : г ; -;tbow (1963), Seel leer, w«rn*r (1963),Ленцнера(19в4,1972),Марко 1 ::r : VV-'S^^ (1967,1970), Moriehita »1. (1971),Шилова о соавт.(1972)и др. : : i.': а том,что,в содержимом кишечника^человека и животвшсшлочнск • ;; киолые бактерии в количественном отношения превалируют над ^ " Уащерихиями, ^ . • ■ ~ * ; ■' '••• /.-,' ";

. • , 'н в)Взаимодействие между Lactobacilli)» e»ll»arlus

: f. " .- 'var.aviua в ^Ifldobactrlua th«n»ophllua таг« ^ ■,. чат1им in vitro и in vivo. 4 , ■ У■.

■ . > ; ; При изучении взаимодействия L.etilvariua var.aviua и Б,- .

tb«r»ophiiua v«r,«Tiua в опытах 1» vitro установлено,что би- ^ • / V фвдобактерии оказывает отиьулируодее действие на рост молочно-' ' кислшс.бактерий (рис.5),т.к.при совместном культивировании ' , ■■- - последние: обнаруживаются в большем количестве, чем при раэдаль- ' : ; ном .Это ■ подтверждаетi что ыевду испытуемыми видами бактерий ' ' - ■ ■ ;

■ - - ■ существует: сгиЗиотнческая взаимосвязь и сввдетельствует о воз- ■ -

' можности совместного культивирования: этих двух видов бактерий *-v*. ; ,v-L .и применения их'в комплексе при скармливания цыплятам;' V \ v\; При даче культур бвфидэбактерай и молочнокислых бактерий v-.v-:

■ ; безмикробшм цыплятам установлено (рис.6 ),что молочнокислые бак- '' * : ', < ■ ". терпи интенсивно размножаются в их кишечнике и через 72 часа ..

после введения достигают максимального уровня,в среднем 9,06 .-'У/ log /гмикробных клеток.Несмотря-на максимальное содержание молочнокислых бактерий в кишечнике цыплят,после скармливания - .-■^л";-:,■'■.' бифидобактерий они также хорошо размножались иуже через 43 л - часов, после введения, или через 114 часов о начала опыта, и до конца опытного периода занимали доминирующее положение.Таким; ■ • образом, в кишечнике цыплят'Испытуемые культуры бактерий раз- у ,. " ; . . виваются в симбиозе,не подавляя роста друг друга,при атом в. ' .'-I ■■ ■;' количественном отношении превалирующее положение занимает би*; фидобактерии, что подтверзяает мнение Лизько(1969),'|ог1вЦ*» ; ' et »1. (X97I),Шилова е ооат.(1972) и др. о превалировании би-; • у" г Фидобактерий над молочнокислыми бактериями в кишечнике. . ;/ .. ■

vV-i.-:;;V;: Л г)Взаиыодействие мевду Bifidob»cteriia tb«Taopbi.iua '.'-V/

Eech«richi«coli И-17 in vitro' и в кишечнике гно-;•■ ^ '

'-Г .i .. '• .. •. ; ' . " • л " тобяотичных ЦЫПЛЯТ ' . :; Г

" При проведении этих опытов ш считали целесообразным изу'~ -• ".,' чить взаимодействие между тремя представителями нормальной. ма- ■

крофлоры _ кишечника, из которых два является специфическими • . для \. " г :.кишечника цшытт и кур,а треттий - для киаечцшса человека.Кроме • : .того,один из них является облигатным анаэробом {в. tberaophiiua . • ' . v»r.»vium j,второй- факультативным анаэробом" ( L.e«liv«rlu* . '; \'• V • - r«r.«riiw ) и третий - аэробом. ( б.coll. М>»17) .V '

"'.'.' . : Из представленного рис.7 видно,что совместное ^льтивиро - > ; • .. вание in vitro испытуемых штатов бифидобактерий,молочнокислых .'. •' бактерий в'эшерихий невозможно,так как уже через 72 часа после/. ' ;'.

- шоева рост эшерихий'полностью"подавляется.-■ .'"'»'• ' v ..": . :

опытах '• in /five на гнотобиотичных цыплятах-установлено ■

что все тря культуры хорошо размножаются в кижечнике и не смо- • " л' тря на то,что первые 72 ;часа молочнокислые бактерии и эшерихии ' • . ' V:.. -'^высевались,в'максимальном количестве!после введения третьей ' • ' •' ' культура,т.е.бифидобакгерий.пооледняе также.хорошо раэмиожа ;- ' •. . лись и спустя 48 часов после.их введена« или 114 часов о пача- ■ -•; ла опыта и до конца опытного периода занимали доминирующее по- • ■ ■ ,

.'ложение.Вместе с тем,молочнокислые бактерии и эшерихии не" по'- "

. .-'•*. дааляля рост друг друга и продолжали высеваться в определённых •/ '■-■^Я экологических соотношениях.В конце опыта, (через' IG0 часов) сред- ' v V*- V; нее - количество бифвдобактерий,молочнокислых' бактерий и >шери - - • .;.; ;

хий в 1г фецес било:11,59;9;15 и 7,3log микробных клетофис • • / ' . Таким образом, полученные^ результаты показывает, что|1нтахо- ; : ч [у. ' :нистическая активность микрооргавизшв, обнаруживаемая на . ¿секу-: -: • ственных питательных .средах,даёт только приблизительное пред.- • , i ".

- - ставление 'о взаимоотношениях между микробами. Наши'данные, на" - л ;

глядно подтверждают известное полохение,что опыты in vitro я»- • • -•. ляются первой ступенью познания сложных взаимоотношениях мёдцу.

микроорганизмами (Блшшов,Казьмина, 1969), . ,:>'* • '■'■'-.

;; Л, /"Поскольку изучаемые нами;мшероорганазмы занимают основное: меото" в *составе нормальной микрофлоры, кишечника; представлялось "; л необходимым'установ!ггь количеотвешше их соотношения в различных отделах пищеварит'ельпого тракта при одновременном введении . /'цыплятам всех трёх.представателей.С этой целы» в конце опыта ; ;";7-1дан1ят;забивали и:определллк'кол^с^еш1ое -сЬдер^^

А

-9

12 11

_ "I 10

i Э 9 в

ч-н

-S Т

■й 6 »

111,

во.

M о

Б"

Z4: '

-г— 48

Чаем

72 ^

.Днв&мпса peçsytlOi Bifiäob*et«riu> th^raophilw»

о

• s

:ь **

V ■ ■ ■ M -

s'

i: .-я

- Л о.

- . <n i

8 .

о .

■>.-.. й ■

ы> о

рвМПШ

T»rt*rlw* (I) ,fcecberlcb-i» со11Ц|-17(2) ■ Leoto-

■illrarl s оовивомом кт»ммро>ая»1

Ъ*olllu* ■»llT«rlue таг.»»1ил(3)пр1 раздельной

»(I",2Ç « 5")

D 6 Д2 24 36 72 .7590 102^114 126 143 16P- -

Рио.В.ДанаийКа раавития 3if id,cib»cterlua t heraopËllm» ■„

• Ter,«Tluïi ■ {!)» Lactob*clllua e»llr»rtue rar.'

, »»lue- (2)и taciierichl» colU-17 В кишечяшее гпотобиотичпих цшяях :

микроорганизмов в раз -литаых отделах пвдева -' рительного4тракта. Эта ; исследования показали;У (рис.9),что. бйфидобакто-' ' рин, молочнокислые бактв-, 4 рии и эшершсш прахива- : ются во всех'отделан пищеварительного- ; тракта гнотобиотичных'цыплят . В количественном отно - у шеншгмолочнокислые бак-: терия.превалировали в " содерхимом зоба и желуд-' ка.бЕь^идобактерии^-; в содерхимом двенадцати -ператной, тощеЙ, нодвздот»' ной кишок ж слепых от - ' ростков,а ашерихии.во » всех отделах обнаружи вались в меньшем коли- -честве.- .

■ Г К п1 • Í Т П С Пр

1 Рис»9.Содержание B.themophl-. luM T»r.»riu» (I) i.eali»ari-. -' ue' т»г. ivlue (z)M E^soli U-I7(3Jb различных отделах- - >,. , .,

лииеварительвого тракта гво- 4

тобиотияяых цыплят "V /у'■.'■■

'3-эоб{I-желудок зД-ав ей адцати- ' "

- перстяая кивка;т-товдн кишка; , - ч П-подвадооаая 1шяка;С-слепыа -" : ' ■■■*-"- . -

огроотицПр-пряиая низка . ■ ; .--■',"

' V ЭКСПЕРИШТАЛЫЮЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ДЙСБАКТЕРИОЗА-- у-_ . ; а)Влияние тетрациклина яа нормальную микрофлору ■

'■Л. ' - .■ v' . кишечника цыплят •

V;; -Учитывая,что в .медицинской и ветеринарной практике широко применяются антибиотики,а в литературе имеются.данные о.подавляющем действии ' их на представителей нормальной микрофлоры,мы считали'важным выяснить в опытах in Tiro на гнотобиотичнкх цыплятах влияние тетрациклина на количественный состав микрофлоры их "кишечника при исскуствеяном введении трёх видов бактерий 3. iberio phi lúa Var» ariuot, L, aalivariu* v»r.a?iua иЕ.соИ M-I7. Для: этого цыплятам в 9-дневном возрасте при максимальном содержании в их кишечнике указанных бактерий вводили .тетрациклин в

лозе. 6800 За в сутки.на цыпленка в три приёма (по 2200 Ед на / ' :• .. ' один приём).При изучении количественного содержания микрофлоры X■■..;= ■ установлено,что" уже через 24 .часа после прекраоения'дачи тетрг* -- шайтана'наблюдаются резкие изменения в количестве всех . трёх *. " • ..

- видов бактерия в кишечнике. цыплят!рис ДО),При атом количество • • бкфидобактерий уменьшилось от 11,58 до.?,33}молочнокислых бак- • -

- теряй - от 9,15 до 3,66 и эагерихий - от 7,3 до 2,33 1о8 микроб- „\ ■ >.'■•

У ; ;а".: ннх клеток в 1г фепес.Затем через 2-3 оуток наблюдалось посте- . . -венное увеличение количества испытуемых бактерий.Полное восста- . • вовление;количества изучаемых микроорганизмов наступило ув.со- • /

••-'• г 11 М-17 через 5 суток.а ух,.0а11уаг1це таг.ат1ив нВ.Мюг -

. порЫ1иш таг.ву1ипперез 6-суток.Весьма важно отметить,что если , ,'. в пробах фецес восстановление микрофторы уже наступило,то в »'

различных отделах' пищеварительного тракта цыплят,к этому вре - .у. , меня в количественном отношении микрофлора ещё не восстанови .

-V : ■ ласъ.Оледовательно',даже кратковременное скармливание цыплятам. ; . "тетрадиилина-в лечабаой'дозе приводит., к реэкоьу изменению коли--пественного состава нормальной микрофлоры кишечника. •' .• "..'" 'V - У '. ■ Таким образом,проведенные эксперименты - с использованием. . ; ; гиотобиотииных циплят показали, что . применение антибиотиков - .

У тетрациклинового ряда приводит к наруаепип нормального мккроб-

. ного биоценоза'кишечника,который восстанавливается не сраэу ': ' У после прекращения их дачи.Процесс восстановления нарушенного уу'; ■ микробного биоценоза происходит значительно дольше,чем перво - . ' •• • -•• начальное становление микрофлоры в кишечнике цыплят, ; ':.'" ■ -

* У. б; Влияние' содержания цышшт в биологически замкнутой /

■ ;.<;1 ...'.; системе на количественный состав микрофлоры кишечника " -

" . Данные литературы, свидетельствующие о том,что строгая . ' изоляция человека и животных в биологически замкнутой систе-.: . ' . ке приводит х резкому изменению в микрофлоре кишечника, .к

упроиению её ■ ■. количественного и. видового : состава, побудили нас . , провести исследования по изучению количественного состава ми -* - ;крофлора■ кишечника;цыплят при помещении их. в .замкнутой системе.;' -.1., .. После уСтаноаяеиия исходного количества бифидобактеркй, ш - У, У - " "лочноки(?шх бактерия и зшерихий в I г фецес.трЗх' цыддят в 27 ■: •- дневном возраоте,поместили в специальный герметический-боко:а в дальнейшем им давали стерильный корм,воду,а вентиляцию • . -;.* л;-* проводили . стерильным воз духом. Про веденные наблюдения - позво' -

• лили устадавить(рис.II),что состав кишечной микрофлоры цып - ' \ . - . •• ляг сохранялся почти на *. одинаковом .уровне - в течение лишь ■■.{'

• • ч

•ДГ

! « \ . «

Т

12 11 10

в

18:-,

Я?.«

.• м •*v 3

S

^ - -1 í г 24 Эб 43 60 7¿ 9ó . 120 144 , ■ Р«оЛб.Дияацика рааввия Eeeheriobi^wll^ . - ■

' - • ¿ritta (2)l Blfidob»ct»rlua th«r- ,

aopbilua ¥*r.»Tiua гсвшечяям

- ГВОТООИОТМЧВ1.------------

тетрациклина

•s

. 1 7. .10 - - 1ï.- ' V: - 24(x;.- 31; / : РиоЛГ.Дшнамика раавитмд

'^OftKiepiatJJ» ввврвхжй (2)в киечяихв обычвых - v"r ..

вдшлят, содержащие» в оямомчесга «амкиутой- ;} , ;

„■ сютеие

iV-i.ï--'?

"¿Г"' ' '' V. :

- f.-

; 7 дней с момента изоляции,а в дальнейшем паблвдалось уменьше - .

ние количества бифвдобактерлй и молочнокислых бактерий,коли* - •'. ...г' , чество же эшерихий снизилось лишь к 10-му дню. К концу опытного ^' ■.ч периода количество микробных'клеток изучаемых бактерий.в Хг фе* -,

пес резко уменьшилосьгбкфидобактерий - от 10,14 до 5,Э;молоч -'•; ' нокислых бактерий^- 'от 8,45 до 3,9.иэтерихиЙ - от .9,52 до 5,2 ' 7 ■ 1о£ /г'соответственно.При этом уменьшение количества указанных ,; ■ : бактерий происходило во всех: отделах пищеварительного тракта. . V - V- • ■'-■*• цышит.Наши данные подтверждают, выводы БенгсопаДоме (1966) , Ьискеу (19б8),Лизько (1969),Лебедева и Петрова (1971),Шилова о : ,

^соавт.(1972).и др. о том,что содержание животных в биологичео-" % ' ки замкнутой системе* оказывает влияние, на микробный ценоз ки - V,' .. • шечника и.приводят к уменьшению количественного состава основ-: '.'•'..*' яых представителей его микрофлоры, т.е.к развитию дисбантериоза - •

. ЗМЕК^ИВНОСТЬ ПТОЛЕНЕПИЯ-КУЛЬТУР вхироваст'жтим-'■'"" , ' -_". ■" ' тнейморшхта уан.ауиш,ьастовас1ы.щ ваыуадшз - ' . . ; 7 '

' ■г : ... •-• удаитшэ--' и езснемсша сои м-17 в РАЗгачпнх

v-, ': ,; ' :. сочетаниях: при выращивании цшдят ■:. . л7.:;':/.ч:;

.7.-.. - Положительные результаты по благоприятному действию бифи- ^ ,' - -■' .^-л добактерий,молочнокислых бактерий'и зшерихий М-17,полученные '.'¡V''; 7'"при введении их'гнотобиотичвнм цыплятам,побудили нас,провести'; ,■ . .г7 'исследования по:изучению влияния указанных культур микроорга -' ниэдав'ва рост тоимг,содержащихся в естестветшх условиях па ■ птидефабрике-Цыплятам в, суточном возрасте" перорально вводились _ '-7 А, культуры биЗлдобактерий,молочнокислых бактерий и эшерихий в : - л

различных сочетаниях и различными курсами,Разовая доза состав- . '7:1 ■ ',•.•• - ляла I- млн микробных клеток на цыплёнка.В течение опытов реги- ■■

отрировали отход шпшгг.ло дням,привесы по мере развития и ,-7 определяли количество бифидобактерий,молочнокислых бактерий и' ; згаерихий( без дифференциации -их на виды) в пробах фецео цыплят .

. в динамике „При этом в опытншс группах отход цыплят на протяже- .' 77'7' нии опытного периода" (33 дня) бнл ниже по сравнению сконтро- - ;

лем на 4,08 - 5,9?. /■]■■"' '••■■■'^''-1. '.7 : '.7'; '.'■'.^7-''■■.- 7'';'

7 7'■■■■ Как вкотоиз данных таблицы I,привесы опытных цыплят были ■ 7'.

-т . ■ сравнительно; выше контрольных в "среднем на 10,5 - 22,5$.При ;:> ': 7 К- -."■ У--©том лучший: эффект был шлучен в группе,где цыплята получали ' ' .

специфические для них.ттаммы бактерий -B.therniophiliw .var.' " У \ н ' ' ат!ад> и1>.еа11уаг1ш *9г.в»1ив в течение 15 дней,через день <*г.' ■

' . '.л,; V; ■ .• ■■ .i 'V.--' /"у у Tft б Л и Ц a I , ■

'Привэоы шлшят при скармливании км культуры Bifidobacterium . thermopliilum тег.avium,Laоtobас11lue salivartua var.avlua и -• .: . Eeohericbia coll М~17. в различных сочетаниях ' . ^

Группы .. ■ цыплят Средний вео цыплят в гпаммах Уведи-- чение' -привеса

Дни г. '

I 5 12 19 ... 26 33

I 32,1 43,6 67,0 116,6 179,3 237,6 116,6

.2. 33,1 44,4- 34,8 112,2 173,7 i 224;9 110,5

Опытные 3 31,7: 43,0 66,1' 120,6 188,6: 249,3 122,5:

4 зз,7 44,6 73.3 126.3 191.9 : 238,4 II7.I

Контрольная 5 36,9 45,5 34,1 109,0 165,4" 203,5 100,0,

I ■ группа получала основной рацион (0,Р.)+ культуру В. thertnopblluM var.avium ;2 груша - 0,Р,+. культуру Ь. ealivariue' Tar.avlua , (3~Группа - 0.Р.+ смесь культур В* tbenaophllum rar.avium и L. salivarlue таг. a viae -4 груп- -i па - 0.P.+ смеоь культур B.thermophllum var.avluie , I. ealivariue var.aviue иE.ooli М~Г7;5 группа - только O.P.

Опыт к контролю.

члш групп Р=0, ООО5; ляя - 3-й группы

Р=0,025; для 4-й группы ВД005 • . J

' • Количественное содержание шлочнокислы* бактерий во всех . - пробах фецес опытных цыплят было выше,чем у контрольных; в тече-... кие всего опытного пераода.В конце опыта количество их состав --:': ляло у 1-й группы 8,56;у' 2-й группы 8,B6jy 3-й группы S,41j; у.;. , : ' 4-й группы 9,63 и у контрольной (5-Й группы) 6,65 log микроб них'клеток на 1г фецес (табл.2). '■.;';.

. Данные таблицы 2 показывают,чтоколячеотвенное^содержание у, . ' бифвдобаятерий-было такжевыше у опытных цыплят по сравнению о ' контрольными и в конце опыта составило:9,4;9,14;9,76;9,93 в 8,в :.' . log /г микробных клеток соответственно. 4 л \г- . ' > ' У ' Количество jee- эшерихий в пробах фецес. контрольных цышшт V .на протяжении всего опытного периода было;больше,чем у опытных.уч • .цыплят "первых трех групп.При атом в пробах фецес,взятых от кон-."-трольных шлият, установлен рост лактозонегативных штаммов кшпоч- : ной палочки,тогда как у опытных цыплят их не обпаружили.Наимень- у". У шее количество атерихий в-кишечнике цшият установлено-во 2-Й г' ' >'группе,где давалась культура Lactobacillus e&livariua var.avius, y У ^ 'С ' .. /Таким образом,установлено,что:применение культур B.tbermo- :'" -"■-. philua var.aviura,L.aalivariue var.avlue и В.collM-I7 при . . .'J -'ч .у выращивании цыплят о первого дня их жмэни позволяет снизить •; '--.'•

ОТКОЛ.на увеличить привесы в среднем на 10,5-22,5 % ,

Это. обясняется увел пением количества бифидобактеряй.молочно 'кг^ых бактерий :в кишечнике н: уменьшением количества; эшерихяй у за счёт; подавления роста лактозоотрицат'ельных птаммов. ," г:\; Лучшие. результат! были получены■ при' скаршиванки пшшггам ; смеси культур бифвдобактерий+шлачноксшлых бактерий - бактерий." При 9том установлено", что1 наиболее - эффективным: оказалось; приме невие культур в течение 15 дней,через день. •

;; ■■У--.'-^.'.." ' Таб л и д а 2

Размножение различных грудп бактерий в. кишечнике цшшгг -: ■ , при. скаршшвании культур - В1Г1ЛоЪао1ег1ит: №е1таор1111г«т .. увг.ат1цт;1ло^Ьао111ив' ва11гаг1ив .т«,ат1ив ¿ЕесЬег!--''■•-.■.'-'' /г: сЬ1в'со!1 М-17 в. различных сочетаниях :. >.

Бактерии

Среднее десятич!шх логарифмов ( log )коля-

л-"- '.":""..' Таен Дм

; 4 I Л' 6 . 8 . 13' 22 31

I 4,50 6,88 9,20 9,33 9,90 9,76 9,86 9,40

*'"■ *'-' l 2 i;?8 5,70 7,70 8,36 8,58 9,30 9,24 9,14

Бя|ядо - Зштнна, 3 3.29 7,78 9,00 9,63 9,78 10,0 10,4 9,76 ■-.-'

бактерии 4 3,77 7,37 8,67 1437 IQ5.4 9,94 9,93 9,98 -

■'■" ; f " -.." Ънтроль 5 1,44 4,30 5,45 7,44 8,47 8,36 8,37 8,60

- ■ " "J ' ч: ■ I : — 2,49 4,38 6,60 8,08 8,35 3,43 8,56 ;

2 4,23 6,92 8,15 9,40 9,58 8,88 8,87. 8,80 '

Молочно- Эпытнне- 3 3.30 6,90 7,79 8,95 9,34 8,62 8,72 8,44.

кислые - -бактерии 4 3,53 6,10 7,27 8,58 9,08 9,42 8.95 8Г63

контроль : ная 5 6,39 6,50 6,96 6,85 6,73 6,65.

.-. -,•■■ . . I 2.46 5,25 6,85 7,56 8,18 8,44 8,34; 8,15 -v

"i ' г 1,41 4,69 6,08 6,80 7,79 7,65 7,47 7,13 -f 'v

Эшерихин )штпые 3 2,33 4,70 7,35 8,51 8,62 8,64 8,03 8,05 .

4 2,83 6,98 22 9,61 9,30 8,55 8,76' 8.59

(онтроль на^ - 5 2,57 5,59 7,64 8,37 9,40 а, зо 8,84 8,65 . - •

I группа получала'основной■ рацион (O.P.)+гсультуотgifidobaoteriivn tbeimopbilun aviumïB Группа - 0.P.+ культуруbactobacillue oall-■.Tftriûa ..var, T aviua Î.3 группа - O.P. .+ смесь культур В,-ЬЬегаррЫг lumvar.aviWB +l,eolivarias var.sviue jl группа — O.P. -

+ смесь Культур В, thermophiltm таг. aviiw + Ь.в«11таг1из . var aviue: HE.coli W-I7 ;5 группа - только O.P. .. • " -

/ Экономическая^эффективность от применения культур бифидо -■бажгерий и молочнокислых бактерий-составляет. в, среднем 45 руб - ; лей на 1000' цыплят • дшшшой яйценоской породы.Бсли учитывать ,, что одна птицефабрика выращивает I; миллион' цшшп; в год, то ' при : сяаршивании чистых культур бифтаобактерий я шлочнокислнх бак- ; терий экономическая эффективность может составить' в среднем' 45 "тысяч рублей в год. • •• 'U' "'"'■;'"'■: vv - '<

• -у ."ВЫВОД Ы ^иг ■ \

- -■ / . I »Из содержимого кдаечника цыплят; и. взрослых; кур выделены' .чистый культуры бифвдобактерийBifidobact«riumth*rmopbiiumтаг -aviujB и МЭДОЧНОКШУШХ бактерийLactobacillus eällvariue vaxpViuui/.

2.В опытах in vitro установлена свмбпотическая взаидосвзь ■' мааот B.tberrcophilu var/i avlim:и В. со 11' M-I7; между. B.themopki-lum var.oviue . и lisaiivariviaVyer.aviua ■ »несовместимость ..' ;aalivariuB ;-far.aviueie;культуре о E.coli M-17, атакже;весовмести-

- мэоть; бифвдобактерий. й! молочнокислых бактерий ■ о 'эшерюсйями М-17/. ,т.к."; при. совместном культивирование рост' 'последних подавляется .;

: З.йа моделях' гногобиогичных; цыплят, путём введения ям одного двух и трех ввдов испытуемых бактерий/изучено взаимодействие мзд-ду; бифидобантериями, молочнокислыми бактериями и зшерихилмй Ы-17, ;, 4чв; опытах m vivo .на■ гнотобиотичиых цыплятах установлено; ,* ' приживание испытуемых бактерий; в, кишечнике при. введении по одно-" .ЧУ виду. и симбиотическое/взаимодействие меадушши^при введении ; ■ цыплятам двух, и ■ трёх видов бактерий .В. tberaophUum '¿. var. I;, avium; ' аджно скармливать'цыплятам совместно о L.ealivariua" vex.aviae; и о E.coll ; №-17,а также 'в комплексе по три_ вида указанных бактерой.

■>.■5*Краттовреме1Шое'-сюртт1вание цыплятам антибиотика гетра -' циклиш в лечебной дозе резко угнетает poor бифядобактерий,молочнокислых/бактерий и эшершшй.Восотаноаяение, исходного уровня количества этих бактерий в кишечнике наступает ДЛЯ B.tbermopbilara. var.avium .' ЕС L. ealivariua ^var,avine через 6 суток,а ДЛЯ E.coli M-I7 через 5 суток после прекращения дачи препарата.'/ ; •.'.' ;/;

'б,Содераание*обычных цышотг в биологически замкнутой'систе-ые приводит к резцгаму снижению количества микроорганизмов в их ! рсишеч:шке,а имвнно:бифидобактерйй с 10,14 до 5,3;молочнокислых бактерий; с' 8,46 ЯСГ' 3иадерихий о 9,52 да 5,21og/ микробных . / ■вдё1»К:Ва;1г,фёцев*/:-Х^ ;";.;/:-V v^//'/^/"У у-Ъ

■"■ 7 7.Скармливание шпшггам в у словиях_атшефабрики культур В."..; th впво philum var.аvium,L.oalivariuä veSTayiuä и E.eoli M-J7 в' различных' сочетаниях и ^ различными курсами по зваляэт -снизить/, /;

; 'отход;цыплят на 4,08-5,9% и увеличить их ■ привесы на Ю,5-22,В%, ? - 'у цыплят нормализуется микробный биоценоз кишечника,что внра - ;' / " •, жается в увеличении. количества 'бифадобактерий, шлочнокиелых бан-'п ■ ; терий и уменьшении количества эшеризшЙ.При этом установлена »ко-номичекая эффективность в размере 45рублей на 1000 щяият Олег менной яйценосной породы, 11 V;' , ^' ., ' ; : 8.Для дальнейшего внвдрениявсроизводство при выралщвании цыплят иэгут быть рекомендованы культуры бяфидобактервй и молоч-, нокислых бактерий, специфичных для кишечника щпият и кур,а так-'*■ же питательные среди для получения мщсробной массы указанных . ' " ■. бактерий.■'■у':. Л/л ■ ' . У

* \

\ V - р

4 "" '' Опубликованные рабогы но теме диссертации ..

I .Взаимодействие; эиерихий и бифядобактерийв кшпечваке цен- , тшт^отобиоятов; "Известия АН МОСР^Сврия биологических * хими-чесмх:в^%# 3,1972^7 Г '*;"'■■■..■У/',-У' /

: : 2,0собевности: роста лактобактерий в ввгерихий при совмест - ; '. нoм и piзздeльвoм кгльтивиpoвaяии ln ,rltгo и iI» т1то в гашвчни-. гее цыплят-гвотобжонтовТИзвеотия АН МХР, Серия биологических н 1 ' химических наук"¿Я 4,1972 ' ' . У':'-■'У У

; 1 • У 3. Исследования' вэ аимэдействия самбиотиче ско й микрофлора ки- <• ■ шечника' с использованием дапият-гнотобионтбя.Реэюие докладов на ' , Всесоюзной '"конференции по птицеводству.Ална-Ата,апрель,1972. - ;

- 4#Йриживлёние .и"размвожение ь.ва11гвг1и0 тар.»т1и0 в шт1вч- .■'■■■' гаке тсплят-гнотобионтов.Тезисн докладов на ЛИ конференции молодых учёных Молдавии,Кявянёв, 1972. У';- ^ .'■:'/■■'

"'■"'■.. 5 .Экология некоторых видов облигатной микрофлорнвраэлич-ных отделах пищеварительного тракта гнотобиотичных цыплят.Пер«- :

: довой научно-производственный опыт в птицеводстве.Экспресс ин ^ : формация.Москва,Л 10,1972.' "''.■■ -;.'.■'1 ;*

6.Влияние тетрациклина на микрофлору кишечника цыплят."Ве- '... теринария",Л"IX;1972У; -У \■ .ч-'У-'-'г/,'. ■'

7,Вэалмэсвязь молочнокислых бактерий к бифидобактерий в ■ кишечнике цыплят-гнотобионтов."Ветеринария",Л 3,1973.1

в.Зкология бифидобактерий и эшерихий в кишечнике обычннх и гнотобиотичных щемят. "Из ве стия АН МССР, С еряя биологиче ских и х»- ■ химических наук",Л 2,1973. У У- 'У ' ■■:'.'У""*'

'.9 .Нормальная микрофлора кишечника животных,Кишинёв,Иэл-во

■ "Штгошца,,;1973. 'У "• V ' ' : ■ -.

Результаты экспериментальных исследований по теме 1 У * '•' • яяссертаоти долоиены: у 'У"У У-: ,-УУ

/ 1.На ЗУ Всесоюзной конференция молодых учёных и аспирантов работающих в области птицэводства.Всесоюэннй научно-исследова '-..■>" , тельсклй н технологический институт птицеводства.Март,1972Г." ;

* • ■; 2.На республиканской конференции" "Внедрение научннхшеюм- V дованжй 'молоднх учённг в производство *. Кишинёв, Июнь,1972г.

3»На УИ1 коаферешцт молодых учёных •Мблдавта.Кятгаёв, : ■ ' -

■ Декабрь, 1972 г. • • • ' .■/ У - .л ■ '.'..' /"'' У'"■-: ;г 4,НаХУ1 конференции-молодых учётах и аспирантов, работаю - "

; щта в области птицеводотва.Всесопэшйнаучно-исследовательский У и технологический институт лтицеводства.Июнь,1973г.

-у

Лоя.1чсяно в печет»* 5.X.I979 г. Формат бумаг» 60 х 90 1/16. 11еч,л. 1,5. Заказ 797.Тира* 150.Бесплатно;

Типография иядатвльства н1тиинца",27700А,Кияине»,ул.Бер8арина,10: