Фармакологическое обоснование применения кишечного стабилизатора в птицеводстве

Амбулова, Наталья Григорьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Фармакологическое обоснование применения кишечного стабилизатора в птицеводстве
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармакологическое обоснование применения кишечного стабилизатора в птицеводстве"

На правах рукописи

АМБУЛОВА НАТАЛЬЯ ГРИГОРЬЕВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ КИШЕЧНОГО СТАБИЛИЗАТОРА В ПТИЦЕВОДСТВЕ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидат биологических наук

21 " ~ Я 2013

005539530

Краснодар - 2013

005539530

Работа выполнена на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ»

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент кафедры

микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» Пашник Татьяна Ивановна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

кафедры биотехнологии, биохимии и биофизики ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» Кощаев Андрей Георгиевич

у кандидат ветеринарных наук, старший

научный сотрудник лаборатории фармакологии ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН Тяпкина Евгения Викторовна

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская

государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится «А£>л013 года в «/Р% часов на заседании диссертационного совета Д - 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» http://vvww.kubsau.ru и официальном сайте ВАК РФ - http://vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан « ^ » 2013 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук

И.А. Родин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Развитие птицеводства основывается на максимальном обеспечении населения страны пищевым яйцом и мясом птицы отечественного производства, что необходимо для решения проблемы продовольственной безопасности страны (Барановский А.Ю., 2000; Василюк A.B. и др., 2001; Данилевская Н.В., 2007; Малик Н.И., 2002; Borriello S.P., 1986).

В условиях промышленного ведения птицеводства содержание, кормление и другие факторы технологических приемов не соответствуют биологическим потребностям птицы, что негативно отражается на их физиологическом состоянии. Воздействие неблагоприятных факторов часто отрицательно влияет на иммунитет птицы, что приводит, в первую очередь, к снижению продуктивности и ослаблению устойчивости птицы к различным болезням. Одним из важных факторов снижения устойчивости организма и продуктивности птицы является бессистемное применение антибиотиков и химиотерапевтических средств, что приводит к нарушению нормальной микрофлоры организма. В результате чего, участились случаи заболевания органов пищеварения и накопление остаточных количеств лекарственных веществ в мясе и продуктах птицеводства (Бабина М.П., 1998; Барановский А.Ю., 2000; Каноев Б., 2003). Актуальной задачей ветеринарной практики является не только разработка новых препаратов для профилактики заболеваний, но также и разработка способов повышения их эффективности (Малик Н.И., 2002).

Пробиотики являются наиболее безвредными препаратами, стабилизируют состав микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте, повышают иммунитет, сохранность поголовья, обладают ростостимулирующим эффектом. Но пробиотики не следует использовать бесконтрольно, так как разный состав препарата, дозировка, длительность применения, возрастной период птицы по-разному определяют фармакодинамику препарата и соответствующее его влияние на организм (Воробьев A.B. и др., 2001; За-цепилова Т.А., 1999; Каблучеева Т.И., 2004; Красочко П.А. и др.,2008; Панин А.Н., 1999; Тараканов Б.В., 1999; Хисамов P.P., 2001; Collins M.D., 1999).

В связи с этим, изучение фармакодинамики новых отечественных пробиотиков является актуальным.

Цель работы - разработка фармакологического обоснования использования ро-дафена в птицеводстве.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

• дать физико-химическую и токсикологическую оценку родафена;

• изучить фармакодинамику родафена, его влияние на микробиоценоз пищеварительного тракта птицы, иммунитет, обмен веществ, продуктивность; провести производственные испытания;

• разработать схемы применения препарата;

• разработать нормативную документацию на препарат.

Научная новизна. Научно обоснованы оптимальные схемы применения рода-фена на цыплятах-бройлерах и курах-несушках, обеспечивающие получение максимального фармакологического эффекта, улучшения продуктивного здоровья птицы, рентабельности производства.

Практическая значимость. Обосновано применение пробиотика родафен на цыплятах-бройлерах и курах-несушках для нормализации кишечной микрофлоры, увеличения активности ферментов кишечника, повышения иммунитета, продуктивности, сохранности поголовья. По результатам проведенных исследований была разработана и утверждена инструкция по применению пробиотической кормовой добавки «Родафен» от 12.09.2012 года, утвержденная заместителем Руководителя Россельхоз-надзора Е.А. Непоклоновым, технические условия ТУ 9291-006-39988364-2012 и выдано свидетельство о государственной регистрации (учетная серия 56-2-25.12-5418, регистрационный номер № ПВР-2-25.12/02863).

Положения, выносимые на защиту:

• результаты изучения состава и токсикологических свойства родафена;

• фармакодинамика пробиотика;

• применение на цыплятах-бройлерах и курах-несушках;

• научно-обоснованные предложения по внедрению в птицеводство оптимальных профилактических доз, схем применения родафена.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации представлены, опубликованы и одобрены на VI Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы зоотехническогй науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных» (Ставрополь, 2009); на Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства Российской Федерации по направлению «Ветеринарные науки» в трех этапах с I местом в первых двух (Краснодар, Ростов-на-Дону, Ставрополь, 2010); на Международной научно-практической конференции посвященной 65-летию Краснодарского науч-ноисследовательского ветеринарного института «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011); на Международной научно-практической конференции «Современные проблемы животноводства и ветеринарии: состояние и пути решения» (Краснодар, 2013); на ежегодных научных конференциях преподавателей ветеринарной медицины Кубанского ГАУ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 6 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК, в которых отражены основные результаты экспериментальных исследований.

ной литературы (276 источников, в т.ч. 101 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 22 таблицами, 27 рисунками, имеет приложения.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2006 по 2013 год'на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии факультета ветеринарной медицины КубГАУ в соответствии с плановыми тематиками НИР.

Научно-производственные опыты и апробацию результатов научных исследований на птице проводили в лабораториях терапии, микробиологии и микологии, фармакологии Краснодарского научно исследовательского ветеринарного института РАСХН; в Межрайонной ветеринарной лаборатории г. Новороссийска; на ЗАО п/ф «Щербиновская»; на ЗАО ПТФ «Новороссийск», на ООО «Птицефабрика Натухаевская», на ООО «Раевская птицефабрика» г. Новороссийска

В экспериментах и научно-производственных опытах было использовано 300 цыплят-бройлеров кросса «Росс-308», 300 кур-несушек породы «Ломанн Браун», 120 голов молодняка кур, 20 беспородных крыс-самцов, 125 белых мышей, 38 кроликов, 20 морских свинок. Для проведения исследований подвергнуто изучению после дека-питации в опытах 140 голов. Объем лабораторных исследований составил 2985 проб.

При постановке экспериментов были использованы токсикологические, микробиологические, фармакологические, биохимические, морфологические, иммунологические, клинические, патологоанатомические, зоотехнические методы исследования и методы вариационной статистики. Объектами лабораторных исследований были: кровь, содержимое подвздошной кишки, толстого кишечника, а также корм и помет. Всего проведено 4 серии опытов.

Микробиологические исследования проводили согласно современных методов диагностики дисбактериоза толстого отдела кишечника (Иванов В.П., 2002). Подсчет общего количества микроорганизмов вели по Бриду (1957). Определяли численность молочнокислых, амилолитических, лактатферментирующих, целлюлозолитических микроорганизмов, бактерий группы кишечной палочки. Посевы для бактерий делали из разведений и вносили на среды по 0,1 мл. Для количественного учета молочнокислых бактерий и их выделения, была использована среда Квасникова Е.И. Бифидобак-терии культивировали на среде бифидум, лактобактерии - на лактобакагаре, бактероиды гр. В. й^Шв - на кровяном анаэробном бактоагаре с канамицином и желчью; амилолитические микроорганизмы - на среде Хамлина; лактатферментирующие микроорганизмы - на среде Кистнера; на среде Эндо - бактерии группы кишечной палочки. Методом последовательных разведений от 10"4 до 10"6 определяли титр целлюлозолитических микроорганизмов. Энтерококки - на среде энтерококкагаре, стафилококки - на желточно-солевом агаре, гемолитические микроорганизмы - на 5% кровя-

ном агаре, дрожжеподобные грибы - на агаре Сабуро, клостридии - на среде Вильсо-на-Блера. (Каблучеева Т.И., 2004) Статистическая обработка микробиологических данных проводилась по B.C. Асатиани.

ЛЖК определяли на газовом хроматографе «Кристалл - 2000М», оборудованном кварцевой капиллярной колонкой HPFFAP с внутренним диаметром 0,32 мм, производство США. Для количественных расчетов содержания компонентов в пробе применялся метод абсолютной калибровки. По методу Уголева A.M. (Уголев A.M., 1965) на фотоэлектроколориметре при красном светофильтре изучали амилолитиче-скую активность ферментов в содержимом желудочно-кишечного тракта. Целлюлозо-литическую активность ферментов микроорганизмов определяли в слепых отростках (Каблучеева Т.И., 2004). Протеолитическую активность - по Херриотту Р., Проскурякову М.Т. (1950, 1973).

Морфологические исследования крови включали в себя определение количества: гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, цветного показателя, скорости оседания эритроцитов, лимфоцитов, (относительный и абсолютный показатель, Т - и В - клетки), базо-филов, псевдоэозиноилов, сегментоядерные нейтрофилов, моноцитов. Подсчет эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов проводился по методикам Фриед и Лукачёвой в модификации И.Ф. Болотникова с помощью камеры с сеткой Горяева; скорость оседания эритроцитов - на аппарате Панченкова; выведение лейкоформулы - на счетчике лабораторном С-5М-стимул плюс (Антипов В.А. и др., 2009; Кассирский И.А., 1970). Подсчёт лимфоцитов проводился по методике Филипченко (Болотников И.А., 1979; Леонович В.В., 1953). Биохимические показатели крови: Ca, неорганический Р, К, Fe, Na, Mg, общий белок, глюкозу, общий билирубин, триглицериды, холестерин, ферменты АЛТ и AST, мочевую кислоту, щелочную фосфотазу, а- амилазу, липазу, мочевину, ß-липопротеиды, белковые фракции — определяли на биохимическом анализаторе OLYMPUS для «invitro» диагностики с автоматической программой расчета (Бугуев И.П., 2005; Гугушвили H.H., 2000). Калориметрическим количественным методом определяли щелочную фосфатазу, неорганический фосфор - ферментативным UV тестом, общий кальций, общий белок и фракции белка - калориметрическим фотометрическим тестом. Методом электрофореза определяли белковых фракций сыворотки крови на бумаге по A.M. Горяч-ковскому (1994). Изучали фагоцитарную активность, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, фагоцитарную емкость, завершенный фагоцитоз по О.Г. Алексеевой (1966), в качестве тест-культуры для ОФР использовали золотистый стафилококк- St. aureus 209 р (Грошева Г.А., 1996; Ковальская Л.А., 1996; Меркулов Г.А., 1969). Фото-нефелометрическим методом проводили определение бактерицидной активности сыворотки крови в модификации О.В. Смирнова и Т.А. Кузмина. При постановке реакции использовали культуру St. aureus штамм 209 р (Вершигора А.Е., 1980, Герберт У Дж., 1974, Жуковская H.A. и др., 1966). Тубидиметрическим методом в модификации Х.Я. Грант определяли лизоцимную активность. В качестве тест-культуры использовали ацетоновый порошок М. lysodeicticus (Гугушвили H.H., 2000). Дифферен-

цировку Т и В - лимфоцитов проводили по методике Есакова Н.Р (Бернет Ф.М., 1971; Гурвич А.Е., 1978).

Для гистологических исследований селезенку, поджелудочную железу, печень и тонкий отдел кишечника фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Проводку материала осуществляли общепринятыми в патоморфологии методами (Г.А. Меркулов, 1969). Заливку материала осуществляли в парафин и после этого при помощи санного микротома МС-2 готовили серийные парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином (Меркулов Г.А., 1969).

Токсикологические исследования пробиотика родафен были проведены на лабораторных животных (белых мышах, крысах, кроликах, морских свинках) на определение: токсичности, острой токсичности, хронической токсичности, раздражающего действия, микробиоценоза кишечника. Данные показатели определяли согласно методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия фармакологических средств, методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных; ГОСТу Р 540632010 «Средства лекарственные для животных. Методы определения безвредности»; Методическим указанием по изучению общетоксического действия фармакологических средств. Определение безвредности препарата проводили на белых мышах массой 18,0-20,0 г, которым вводили однократно через рот по 0,5 см3 (0,5 дозы) взвеси добавки с помощью инъекционной иглы.

Результаты всех экспериментальных исследований обрабатывались биометрическими методами вариационной статистики (Ойвин И.А., 1960) и использовалась программа компьютера по программе Excel-7,0 из пакета Microsoft offise - 2000 с определением критерия достоверности. Схема опыта в таблице 1.

Опыт 1 проводили на молодняке кур кросса «СК-Русь» на птицефабрике «Родина» Краснодарского края. Вели учет: состава микроорганизмов зоба, тонкого (подвздошная кишка) и толстого кишечника (слепые отростки).

Токсико-фармакологическое влияние пробиотика родафен на организм лабораторных животных изучали в опыте 2 на базе Межрайонной ветеринарной лаборатории г. Новороссийска. Испытание препарата на токсичность в опыте 2.1 проводили на здоровых лабораторных белых мышах. Вели учет: клинического состояния и выживаемости животных. Острую токсичность пробиотика определяли в опыте 2.2 на крольчихах. Учитывали: клиническое состояние (термометрию), динамику массы тела и выживаемость животных.

Хроническую токсичность определяли в опыте 2.3. Испытания проводили в течение 3-х месяцев на белых мышах, морских свинках, кроликах, беспородных крысах-самцах. В период наблюдения учитывали: прирост массы тела, гематологические и биохимические показатели, патологоанатомические изменения и массу внутренних органов. Кожно-резорбтивное действие пробиотика изучали в опыте 2.4 на белых кроликах-самцах. Учитывали реакцию по наличию: покраснения, появления кожной складки.

Таблица 1 - Схема опытов

Группа Число голов Продолжительность опыта, дней Условия кормления

Опыт № 1 (молодняк кур)

1-К | 120 | 1-150 | ОР (основной рацион)

Опыт № 2 (лабораторные животные)

Опыт № 2.1 (белые мыши)

с 1 по Ю-О 50 24 ОР + родафен (1-я группа - 0,1 г/10 мл физраствора, 2-я - 0,2 г/10 мл, 3-я - 0,3 г/10 мл, 4-я - 0,4 г/10 мл, 5-я - 0,5 г/10 мл, 6-я - 0,6 г/10 мл, 7-я - 0,7 г/10 мл, 8-я - 0,8 г/10 мл, 9-я - 0,9 г/10 мл, 10-я -1,0 г/10 мл по 0,5 мл на голову в течение 14-и дней)

И-К 5 24 ОР

Опыт № 2.2 (крольчихи)

1-0 5 10 ОР + родафен (500 мг на голову с водой в объеме 3 мл перед кормлением)

2-0 5 10 ОР + родафен (1000 мг на голову с водой в объеме 3 мл перед кормлением)

3-К 5 10 ОР + (водопроводная вода в объеме 3 мл перед кормлением)

Опыт № 2.3 (лабораторные животные)

1-0 10 62 ОР + родафен (50 мг/кг белым мышам)

2-0 10 62 ОР + родафен (200 мг/кг морским свинкам)

З-О 10 62 ОР + родафен (250 мг/кг кроликам)

4-0 10 62 ОР + родафен (200 мг/кг беспородным крысам-самцам)

5-К 10 62 ОР (белые мыши)

6-К 10 62 ОР (морские свинки)

7-К 10 62 ОР (кролики)

8-К 10 62 ОР (беспородные крысы-самцы)

ОпытЛх 2.4 (белые кролики самцы)

1-0 1 3 Кожная проба пробиотика родафена (0,01 г/мл)

2-0 1 3 Кожная проба пробиотика родафена (0,1 г/мл)

З-О 1 3 Кожная проба пробиотика родафена (1,0 г/мл)

Опыт № 2.5 (белые мыши)

1-0 | 50 | 13 | ОР + родафен(0,1 гна ЮОгкормас 1-го по 10-йдень)

Опыт № 3 (куры-несушки)

1-К 100 100-337 ОР

2-0 100 100-337 ОР + бифилакт (10 мл на голову)

З-О 100 100-337 ОР + родафен (4 г на 2000 голов со 100 дней в течение 3 недель)

Опыт № 4 (цыплята-бройлеры)

1-К 100 1-39 ОР

2-0 100 1-39 ОР + родафен (1 г на 2000 голов в возрасте 1-4 суток и 2 г в возрасте 21-24 суток)

З-О 100 1-39 ОР + родафен (2 г на 2000 голов с 1-4-е сутки и 4 г с 21 по 24-е сутки)

Влияние пробиотика родафен на микробиоциноз кишечника изучали на белых мышах в опыте 2.5. Определяли популяционный уровень микроорганизмов до и через 5, 10 дней в течение опыта, и через 3-й дня после окончания скармливания пробиотика.

Действие пробиотика родафен изучали на курах-несушках породы «Ломани Браун» на ЗАО ПТФ «Новороссийск» в опыте 3. Вели учет: морфологических, иммунологических и биохимических показателей крови, сохранности поголовья; продуктивности (яйценоскости), периода продуктивности, качества яйца (количество дефективных яиц; толщину скорлупы, массу, длину и ширину яйца; массу белка и желтка); состав микрофлоры толстого кишечника.

В опыте 4 на ЗАО ПТФ «Новороссийск» на цыплятах-бройлерах кросса «Росс-308» изучали действие пробиотика родафен. Вела учет: морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови, сохранности поголовья, летучих жирных кислот в содержимом слепых отростков; микроорганизмов слепых отростков; целлюлозолитических, амилолитических, протеолитических ферментов содержимого слепых отростков; массы внутренних органов; живой массы, гистологических, токси-ко-фармокологических исследований.

2.2.1 Микроорганизмы желудочно-кишечного тракта птицы в возрастной динамике

Стрессы, рацион кормления и многие другие факторы оказывают влияние на состав микроорганизмов желудочно-кишечного тракта. Но в разные периоды жизни птицы формирование микрофлоры происходит по-разному.

В результате проведенных исследований было установлено общее число микроорганизмов в подвздошной кишке молодняка кур на протяжении всех исследований колебалось в пределах от 2,38 до 3,26 млрд/г; в слепых отростках увеличивалось в течение всего периода времени. (Таблица 2)

Молочнокислые бактерии в зобе, подвздошной кишке и слепых отростках являются преобладающими, но в слепых отростках птицы в 84 дня количество молочнокислых бактерий составляло 4925,0 млн/г, а в 112 дней - 4800,0 млн/г. Такое уменьшение молочнокислых бактерий в 112 дней приводит к росту других микроорганизмов, таких как кишечная палочка, амилолитических микроорганизмов. Количество молочнокислых бактерий в зобе цыплят снижается в 154 дня на 810 млн/г по отношению к 112-и дням, в подвздошной кишке в 112 дней на 66 млн/г по отношению к 56 дню.

Количество амилолитических микроорганизмов в подвздошной кишке и слепых отростках в 56 дней меньше на 1,4 млн/г, чем в 14 дней, но со 112-и дней возрастает.

На протяжении всего периода исследования количество лактатферментирую-щих бактерий в зобе возрастает, в подвздошной кишке снижается. Лактатферменти-

рующие микроорганизмы в 56 дней были на 2,6 млн/г меньше, чем в 14 дней. В последствие, наблюдалось возрастание лактатферментирующих бактерий в слепой кишке с 84 по 154 день с 4,01 млн/г до 4,32 млн/г соответственно.

Содержание бактерий группы кишечной палочки в зобе снижается в 56 дней на 0,8 млн/г. В слепых отростках количество бактерий группы кишечной палочки в 84 дня было меньше на 0,15 млн/г, чем в 56 дней; с возрастом увеличиваются на 2,2 млн/г. Установлено, что наибольший рост колоний группы кишечной палочки наблюдается до 56-и дневного возраста, затем интенсивность их роста замедляется.Таким образом, нашими исследованиями установлено, что в возрасте 28-56, 112 дней требуется коррекция микрофлоры кишечника пробиотическими препаратами.

Таблица 2 - Микрофлора желудочно-кишечного тракта птицы с возрастом

Возраст, дней 14 28 56 84 112 140 154

Общее количество микроорганизмов, млрд/г Подвздошная кишка 2,38 2,49 3,21 3,26

Слепая кишка 64,4 68,02 72,99 80,74 83,5 84,06 89,03

Молочнокислые, млн/г Зоб 785,0 - 1355,0 - 1630,0 - 820,0

Подвздошная кишка 172,0 - 114,0 - 48,0 51,0

Слепая кишка 973,3 3540, 0 4475,0 4925,0 4800,0 5550,0 5150,0

Амилолити-ческие. млн/г Зоб 10,7 - 23,8 - 29,1 - 29,9

Подвздошная кишка 14,0 - 12,6 19,3 - 21,5

Слепая кишка 28,5 30,0 26,0 26,0 39,0 42,5 49,0

Лактатфер-ментирую-щие, млн/г Зоб 0,5 - 1,9 - 1,9 - 2,1

Подвздошная кишка 0,619 - 0,545 0,560 0,543

Слепая кишка 6,19 3,98 3,59 4,01 4,19 4,18 4,32

Группа E.coli, млн/г Зоб 1,2 - 0,4 - 1,6 - 1,4

Подвздошная кишка 0,37 - 0,48 0,52 0,56

Слепая кишка 2,7 4,2 5,05 4,9 5,1 5,1 5,75

2.3 Физико-химическая характеристика пробиотика

Для коррекции микрофлоры в желудочно-кишечном тракте в установленные возрастные периоды были взяты пробиотики бифилакт и наш пробиотик родафен. Рода-феи - порошок белого цвета, без запаха, сладкого вкуса, растворим в воде, 7 Т, не содержит примесей. Препарат содержит штаммы Bacillus subtilis ВКПМ 2574 и Bacillus licheniformis ВКПМ Б-020 (1 *10' КОЕ/г)

Бифилакт - кисломолочный продукт, вырабатываемый сквашиванием цельного пастеризованного молока симбиотической закваской, состоящей из молочнокислых и бифидобактерий. Включает штаммы бифидобактерий B.bifidum 1, B.bifidum 791, B.longum В379М, лактобактерий Lactobacillus plantarum 8PA3, Lact. plantarum 296D, Lact.fermentum 90TC4, Lact.fermentum 1-20. В 1мл препарата содержится 1,5-2x109 жизнеспособных лактобацилл и 2^1x108 жизнеспособных бифидобактерий.

2.4 Токсикологическая оценка и безопасность применения родафена

В опыте 2 проводили исследования по определению острой и хронической токсичности, кожно-резорбтивного действия, количества кишечной микрофлоры. Животные подбирались и распределялись по группам по принципу парных аналогов, содержались в идентичных условиях кормления и содержания. В опыте 2.1 признаков токсикоза и гибели мышей, получавших пробиотик, не наблюдалось. По результатам исследований в опыте 2.2 пробиотик родафен не обладает острой токсичностью. Гибель кроликов не наблюдалась. Живая масса тела во 2-й опытной группе стала на 20 г больше чем в контрольной и 1-й опытной группе. Температурные показатели в группах находились в пределах физиологической нормы. Клинические признаки интоксикации: внешний вид, поведенческие реакции - не выявлены.

Длительное применение пробиотика родафен в опыте 2.3 не позволило выявить отрицательного воздействия на организм животных: регионарные и мезентериальные лимфатические узлы, внутренние органы лабораторных животных, ответственные за метаболизм и элиминацию чужеродных соединений, были без признаков патологии. Вес животных под конец опыта увеличился в опытной группе на 5,24 г, по отношению к контрольной (табл. 4). Таким образом, пробиотик вызывал увеличение массы тела животных без нарушения развития внутренних органов. На протяжении всего срока эксперимента гибель животных не наблюдалась.

В ходе изучение раздражающего действия пробиотика родафен в опыте 2.4 у кроликов не отмечалось образования эритемы и отека кожи.

В опыте 2.5. в кишечнике мышей увеличивалось количество бифидобактерий, энтерококков; снижалось - лактобактерий, с последующим их увеличением (табл. 5).

Таблица 4 - Массовые показатели внутренних органов крыс-самцов при изучении хронической токсичности _

Группы Вес жи- Вес живот- Вес внутренних органов(г)

живот- вотных до ных в конце Серд- Легкие Печень Почки Селезен-

ных опыта, г опыта, г це ка

Кон- 87,26± 103,98± 0,68± 0,9± 3,9± 1,18± 0,4±

троль- 2,91 1,17 0,1 0,13 0,35 0,24 0,08

пая

Опыт- 88,44± 109,22± 0,54± 1,04± 3,94± 1,0± 0,36±

ная 1,61 1,41* 0,07 0,19 0,37 0,17 0,12

Таблица 5 - Влияние пробиотика родафен на микрофлору кишечника мышей

Наименование микроорганизмов Популяционный уровень микроорганизмов, КОЕ/г

до введения на 5-й день введения на 10-й день введения на 3-й день после окончания введения

Bifidobacterium sp. 1,65 X 10" ±0,35 2,7X10" ±0,35* 4,1х109 ±0,55** 5,3X10" ±0 42***

Lactobacillus sp. 4,4х108 ±0,9 4,1x10'' ±0,5 3,7 XI О7 ±0,25 5,3 X 109 ±0,6

Enterococcus sp. 3,9x10" ±0,2 ЗХ109 ±0,3* 4,1x10" ±1,2 5,9 XI О9 ±0,25***

Escherichia coli 1,7x107 ±0,3 2,7x10' ±0,5 4,1хЮэ ±0,4** 5,1x10' ±0 49***

Здесь и далее р <0,05* - 0,95; р <0,01** - 0,99; р <0,001*** - 0,999.

Гистологические исследования в опыте 4 на цыплятах-бройлерах показали, что в контрольной группе при морфологическом исследовании печени птиц определялись все ее структурные компоненты. В некоторых участках печени выявляли острую венозную гиперемию, по периферии таких участков отмечали гипертрофию отдельных гепатоцитов. При морфологическом исследовании поджелудочной железы, селезенки, кишечника патологических изменений в структуре не обнаруживали. С применением родафена в морфологическом строении печени цыплят отмечали гиперемию сосудов, гипертрофию гепатоцитов; в структуре селезенки птицы обнаруживали гиперемию сосудов, отек стенки и десквамацию эндотелия артерий фолликулов. В слизистой кишечника отмечали слизистую дистрофию и десквамацию эпителия кишечных ворсинок. Поджелудочная железа не имела патологических изменений.

2.5Фармакодинамика пробиотикародафен 2.5.1 Влияние пробиотика па состав симбионтных микроорганизмов пищеварительной системы птицы

Применение родафена на курах-несушках в опыте 3 показало, что в тонком и толстом отделах кишечника в 134 дня препарат стимулировал увеличение общего количества микроорганизмов на 44,6 млрд/г и на 734,4 млрд/г соответственно. С возрастом данная тенденция повторяется. Родафен в 134 дня стимулирует рост молочнокислых бактерий на 242499,9 млн/г и на 172497,1 млн/г, с последующим снижением в 337 дней. Такая же тенденция наблюдается и с лактатферментирующими бактериями. Количество бифидобактерий в слепых отростках с возрастом достоверно увеличивается с 24000,0 млн/г до 8550000,0 млн/г. Родафен в 134 дня в толстом отделе кишечника повышал количество бактерий группы кишечной палочки на 35845 млн/г, в 337 дней -снижал на 135000,0 млн/г.

Применение пробиотика бифилакт на курах-несушках в опыте 3 показало, что в тонком и толстом отделах кишечника препарат стимулирует увеличение общего количества микроорганизмов в 134 дня на 977,7 млрд/г и на 861,8 млрд/г.

В 337 дней бифилакт повышает количество микроорганизмов на 1305,7 млрд/г; молочнокислых; лактатферментирующих. Бифилакт значительно снижает количество бактерий группы кишечной палочки в 134 дня в тонком и толстом отделах кишечника на 0,2565 млн/г и на 154,8 млн/г. Количество бактерий группы кишечной палочки в 337 дней снижалось на 255000 млн/г.

Таким образом, в опыте 3 родафен в 3-й группе в 134 дня способствовал увеличению общего количества микроорганизмов, молочнокислых, лактатферментирующих, бифидобактерий и бактерий группы кишечной палочки. В 337 дней в 3-й группе количество бактерий группы кишечной палочки снижается. Пробиотик бифилакт в 337 дней способствовал увеличению общего количества микроорганизмов, молочнокислых, лактатферментирующих и бифидобактерий; снижению бактерий группы кишечной палочки.

Родафен у цыплят-бройлеров в опыте 4 в толстом кишечнике значительно увеличивал количество бифидобактерий 1х1012 КОЕ/г. (Таблица 7) С возрастом наблюдалось снижение количества бифидобактерий, энтеробактерий.

Во 2-й группе увеличивалось количество лактозонегативных энтеробактерий, бактероидов; поддерживались на уровне бифидобактерии; снижалось в 2 раза количество сапрофитных стафилококков; уменьшалось число лактобактерий, лактозопозитивных энтеробактерий, энтерококков, клостридий.

Родафен в 3-й группе увеличивал число бактероидов, энтеробактерий, кандид; способствовал стабильному балансу лактобактерий; снижал количество энтерококков на 8*10', сапрофитных стафилококков 4,9х Ю3 КОЕ/г, клостридий.

Таблица 6 - Микрофлора тонкого и толстого отделов кишечника кур-несушек в 134 и 337 дней при даче пробиотиков

№ группы Общее количество микроорганизмов, млрд/г Молочнокислые бактерии, млн/г Лактатфер-ментирющие бактерии, млн/г Бифидобяк терии, млн/г Бактерии группы Е.соН, млн/г

134 дня (тонкий отдел)

1 Контрольная 1060,5 0,0825± 0,00745 0,02± 0,00101 22,75± 1,125 0,275± 0,145

2 Бифи- лакт 2038,2 0,6175± 0,01705*** 0,1725± 0,0124 282,5± 12,45* 0,185±0,0097

3 Родафен 1105,1 242500,0± 3600,0*** 16,0± 0,905* 37,75± 17,5*** 177,5±12,4

134 дня (толстый отдел)

1 Контрольная 1007,6 2,9 ± 11,0 0,046 ± 0,0018 182,5± 6,6 155,0± 10,15

2 Бифн- лакт 1869,4 3,625 ± 0,486*** 0,05575± 0,016* 232,5± 11,55* 0,23 5± 0,01175***

3 Родафен 1742,0 172500,0 ± 9500,0** 1,45± 0,08*** 24000,0± 1390,0* 36000,0± 910,0***

337 дней (толстый отдел)

1 Контрольная 1742,0 0,009 ± 0,00079 0,009± 0,00066 250000,0± 195000,0 557500,0± 12000,0

2 Бнфи-лакт 4149,7 542500,0± 12400,0*** 2025,0± 91 д*** 66000000,0± 1500000,0*** 302500,0± 7700,0***

3 Родафен 3047,7 0,125 ± 0,0115 0,125± 0,01165 8550000,0± 250000,0*** 422500,0± 12400,0**

Здесь и далее р <0,05* - 0,95; р <0,01** - 0,99; р <0,001*** - 0,999.

Таблица 7 - Микрофлора толстого отдела кишечника цыплят-бройлеров при даче пробиотика родафен

№ группы 1 контрольная 2 родафен 1 г/2000 голов 3 родафен 2 г/2000 голов

Микроорганизмы, КОЕ/г 11 суток 39 суток 11 суток 39 суток 11 суток 39 суток

Бифидобакте-рии 1х1012 1x105 1х10ш 1x10і 1х1012 1x10*

Лактобактерии 1x108 1х108 1x10і 1x10" 1х108 1x10"

Бактероиды 1х103 1x10' 5x10Ь* 1x10і 1x10' 5x10'*

Энтеробакте-рии Л+ 5х104 ЗхЮ2 1х102 1,2x102* 5x10' 1x10'*

Энтеробакте-рии Л- 1х105 1х102 7x102* 3x10"* 1х104 5x10'*

Энтерококки 1,2x105 1х105 5x107* 5,8x104* 1x10' 2x104*

Золотистый стафилококк нет нет нет нет нет нет

Сапрофитные стафилокки ЗхЮ-1 5x106 5x10'* 5x103 1x10°* 7x10'

Гемолитические м/о 1х104 нет нет нет нет нет

Кандиды нет 1х102 нет 4х102* 1x10' 8x102*

Клостридии 1x10і 1х104 1x10і 1x10' 1x10' 1x10'

2.5.2 Влияние родафена на иммунитет

Дача пробиотика в опыте 3 вызывала сильный.иммунный ответ организма у кур-несушек, в результате чего в 134 дня происходило увеличение абсолютного, относительного количества Т-лимфоцитов и у-глобулинов: 12,44х109/л; 58,0 % и 33,1 % соответственно. В последующем, уже после 10 дней дачи препарата эти показатели нормализовались: 4,86х109/л; 52,0 % и 23,9 %. В сыворотке крови птицы в 337 дней после дачи пробиотика лизоцимная, бактерицидная, фагоцитарная активность увеличивались на 11,8 мкг /%; 2,67 %; 13%.

Пробиотик бифилакт в 134 дня увеличивал абсолютное количество Т-лимфоцитов на 0,13><109/л; снижал ЛАСК на 13,6 мкг/%, БАСК на 5,4 %. С возрастом во 2-й группе наблюдалось повышение БАСК на 35,3 %.

Проведенные исследования клеточного, гуморального иммунитета цыплят в опыте 4 показали, что в группах с применением родафена в 39 дней было увеличение общего и абсолютного количество Т-лимфоцитов; незначительное уменьшение относительного количества В-лимфоцитов, но не выходящее за пределы физиологической нормы показателей крови. Фагоцитарная активность в 39 дней снижалась во 2-й группе на 8,4 %; 3-й группе - на 2 %, по отношению к контролю.

2.4.3 Влияние на обмен веществ у птицы при использовании родафена

Морфологические исследования крови кур в опыте 3 показали, что количество эритроцитов и гемоглобина в 134-х дневном возрасте в 3-й группе с родафеном увеличивалось на 0,3х1012/л и на 12,0 г/л, в 337 дней данные показатели находились в пределах нормы. Количество тромбоцитов и лейкоцитов с возрастом снижалось (табл. 8). Со 134-х дневного возраста по 337-й день наблюдалось снижение сегментоядерных нейтрофилов на 16,0 % и 33 %; повышение лимфоцитов - на 16,0 % и 40 % соответственно. Моноциты, псевдоэозинофилы, базофилы находились в пределах физиологической нормы. Таким образом, родафен увеличивает количество гемоглобина, эритроцитов; снижает лейкоциты.

Пробиотик бифилакт в 134 и 337 дней увеличивал гемоглобин на 16 г/л и 22 г/л. Количество тромбоцитов и лейкоцитов с возрастом снижалось. В 134 дня возраста по 337-й день наблюдалось снижение сегментоядерных нейтрофилов на 16,0 % и 33 %; повышение лимфоцитов - на 18 % и 7 % соотвественно, по отношению к контролю.

Пробиотик родафен в 134 и 337 дней увеличивает количество общего белка на 6,2 г/л и на 4.8 г/л (рис. 1).

□ 1-контроль ■ 2-бифилакт 3-родафен

Рис. 1 — Изменение биохимических показателей крови кур после применения препаратов

г-m m s

m en

о «

о s Ю

0 a. с

S s o. с

с «

(L>

о.

й! S

m о о. а s ч

са к о с cu s ы

о ч о

•е-а. о

св

я s ч ю а H

Лейкоформула м,% 1 134 дня 1 1,00± 0,19 -н о cn о — —" о" 1,00± 0,25 I 337 дней 1 3,00± 0,21 3,00± 0,15 1,00t #** 0,12

s? ч 51,00± 2,00 69,00± *** 1,84 67,00± 1,67 ¿ё о о — m 39,00± *** 1,92 Ü * 2 ° * Ч, —" * (n

s? в? 1 и 46,00± 2,07 -н о * <n о * —^ сю" * <4 (n -н ° * Ч ° * о * — m 59,00± 1,10 -н о * cn о * сч (n * ~ 26,00± *** 1,52

пэ,% 1,00± 0,27 1,00t 0,15 1,00± 1,52 6,00± 0,25 Д » "о о * <4 ^ * о ¿J * о о * -г * о

Б,% 1,00± 0,27 1,00± 0,18 1,00± 0,25 1,00± 0,27 2,00± ** 0,14 1,00t 0,15

•irg 'II ti 1,40± 0,18 1,80± 0,19 - 1,40± 0,10 1,50t 0,13 1,40± 0,18 1,40± 0,25

'J± 94,40± 0,20 96,00± 1,64 * " <n — on 96,00± 1,64 69,0t *** 1,30 -н „ __ <ч ; <n S * о

"•/»OI 'да 1,30± 0,16 1,30± 0,19 1,60± 0,12 1,40± 0,10 s * 2 о * ~ ы * <=> 1,50t 0,11

«7,01 'і 40,60± 0,14 -н о * гч 00 * Ч, оо » о 32,00± 1,61 34,00± 1,41 18,20± *** 0,11 12,80t *** 0,20

ir/j 'чн 60,00± 0,15 76,00i #** 0,07 72,00± .*** 0,17 72,00± 0,17 94,00± *** 0,12 72,00t 0,19

-u.ûIj "ЛГ - а - f ю іл о - и - f м 1Л о в.

Причем в 134 дня его значение было наибольшим и составило 53,8 г/л. Дача ро-дафена активизировала жировой обмен. С возрастом родафен способствует увеличению количества альбуминов, глюкозы, общего билирубина, ALT и AST. В 134 дня количество общего билирубина в группе с родафеном находилось в пределах нормы (3,65 мкмоль/л), при длительной применении пробиотика, наблюдалось его увеличение - 9,99 мкмоль/л (р<0,001). В 337дней показатели ALT и AST увеличились до 12,5 Ед/л и 74,5 Ед/л соответственно. Так как увеличение данных показателей было меньше, чем в пять раз, родафен не оказывал отрицательного воздействия на печень. Би-филакт к 337-у дню снижает общий белок на 2,3 %; повышает (3-глобулины на 4,6 % и глюкозу на 3,4 %. В 337дней показатели ALT и AST увеличились до 9,6 Ед/л и 74,5 Ед/л соответвсвенно. Наибольше значение альбуминов наблюдалось во 2-й группе с бифилактом.

Морфологические исследования крови цыплят-бройлеров в опыте 4 в 39 суток показали, что количество гемоглобина, эритроцитов во 2-й группе было больше на 20,0 г/л; 0,74x1012/л, чем в контрольной группе. В 3-й группе с 39 дней увеличивался гемоглобин на 9,2 г/л, в сравнении с 1-й группой. Применение пробиотика способствует незначительному снижению количества тромбоцитов, цветного показателя. Таким образом, 3-я группа наилучшим образом влияла на морфологические показатели крови и живую массу цыплят, поэтому с возрастом дозировку препарата следует увеличивать. Отрицательного воздействия родафена на морфологические показатели крови не наблюдалось. В опыте 4 в сыворотке крови цыплят 2-й группы родафен увеличивал общий белок, альбумины, глюкозу, а-глобулины, нормализовал холестерин, общий билирубин, ALT и AST; уменьшал Р-глобулины. В 3-й группе происходило незначительное увеличение триглицеридов; общего билирубина, а-глобулинов; повышение общего белка, альбуминов, глюкозы, ALT и AST; нормализовал холестерин. Количественное соотношение кальция и неорганического фосфора в крови находилось в пределах нормы. У цыплят 3-й группы в 39 дней содержание железа (Fe) достоверно увеличивалось (р<0,05). Применение препаратов незначительно снижало количество каротина.

Активность целлюлозолитических ферментов содержимого кишечника цыплят в опыте 4 в 11 суток во 2-й и 3-й группах увеличивалась на 1,7 % и на 2,2 %; в 39 - на 8,3 %; 2,1 %, чем в контроле. Амилолитическая активность у цыплят бройлеров 2-й группы в 11 суток была ниже на 37,9 %, чем в контроле. С возрастом амилолитическая активность ферментов во 2-й группе повысилась на 16,6 %, а в 3-й - на 1,4 %

В 11 и 39 дней наибольшая протеолитическая активность ферментов слепых отростков была с родафеном в 3-й группе на 2,42 и 1,73 мкМ тирозина/час, чем в контроле; во 11 и 39 дней во 2-й группе соответственно на 1,82 и 0,82 мкМ тирозина/час, чем в 1 -й группе. С возрастом происходило увеличение протеолитической активности во всех группах.

В толстом кишечнике цыплят в 39 дней в группе с родафеном преобладали лак-тобактерии, энтерококки, бифидобактерии, бактероиды, сапрофитные стафилококки, энтеробактерии Л-, клостридии, кандиды, энтеробактерии Л+ и соответственно им -уксусная, пропионовая, масляная, валериановая, изовалериановая, изомасляная, капроновая кислоты.

2.4.4 Влияние пробиотика на продуктивные показатели

Пробиотики родафен и бифилакт во 2-й и 3-й группе у кур ускоряли начало яйцекладки на 7 дней. Яйценоскость в 3-й группе увеличилась на 2,39 %; выход дефективных яиц снизился на 2,7 % в 134 дня; на 9,1 % - в 337 дней. Бифилакт увеличивал яйценоскость на 2,4 %; выход дефективных яиц снижал на 9,1 %. дня. С возрастом такая тенденция по группам сохранялась. (Таблица 9)

Таблица 9 - Яйценоскость и качество яиц после применения родафена

3 с а. и 134 дня 337 дней %, дефективных яиц

Яйценоскость, шт % Яйценоскость, шт %

1 К 7,06 ± 0,52 8,00 74,60 ± 0,91 84,5 29,45

2 Бифилакт 11,0 ±0,12 12,5 77,34 ± 0,80 87,6 15,80

3 Родафен 9,45 ± 0,87 10,7 75,34 ± 0,68 85,3 20,37

В опыте 4 в результате исследования массы внутренних органов цыплят-бройлеров в 39-и дневном возрасте установлено, что родафен во 2-й группе увеличивал массу мышечного желудка и печени на 1,8 и 0,5 г; массу поджелудочной железы уменьшал на 0,08 г. В 3-й группе наблюдалось увеличение массы печени, массы внутреннего жира и массы кишечника на 9,12; 4,5 и 0,9 г соответственно.

В 39 суток в 3-й группе живая масса цыплят составила 2365 г, что на 347,5 г больше, чем в контрольной группе и на 219 г, чем во 2-й группе.

2.7 Экономическая эффективность применения родафена в птицеводстве

Применение пробиотика родафен в опыте 3 на цыплятах способствовало повышению затрат на корма на 100 голов на 100 рублей; увеличению денежной выручки от реализации мяса на 1143 рубля и экономического эффекта на рубль затрат на - 0,2 рубля. Использование родафена на курах в опыте 4 снижает затраты на препарат на 5044 рубля, за счет малой дозировки и небольшой стоимости - 6 рублей за 1 грамм, чем с бифилактом. Родафен способствовал увеличению денежной выручки от реализации яиц на 80,4 тысячи рублей. Затраты на гидрогемол на 7644 рубля больше, чем с родафеном, при увеличении денежной выручки на 123 тысячи рублей, чем в контроле.

4. ВЫВОДЫ

1. Установлено, что у молодняка кур в желудочно-кишечном тракте с возрастом общее количество микроорганизмов в подвздошной кишке увеличивается в пределах от 2,38 до 3,36 млрд/г, в слепых отростках - от 64,4 до 89,3 млрд/г. В 112 дней количество молочнокислых бактерий снижается на 124,0 млн/г по сравнению с 14-ю днями, что приводит к росту бактерий группы кишечной палочки. В 28-56 дней лактатфер-ментирующие бактерии уменьшаются. В возрасте 56 дней бактерии группы кишечной палочки увеличиваются на 2,35 млн/г. Указанные изменения в количестве микрофлоры в возрастные периоды связаны с проведением плановых вакцинаций, стрессами, изменением рациона кормления.

2. Пробиотик родафен, в состав которого входят штаммы Bacillus subtilis ВКПМ 2574 и Bacillus licheniformis ВКПМ Б-020, не оказывает токсического и раздражающего действия. В опытах при определении острой и хронической токсичности гибели животных не наблюдалось. Препарат не оказывает негативного влияния на обменные процессы, морфологические и биохимические показатели крови. Внутренние органы лабораторных животных без признаков патологии. В кишечнике мышей увеличивается количество бифидобактерий, энтерококков.

3. Родафен (с дозировкой 1 г на 2000 голов в возрасте 1-4 суток и 2 г в возрасте 21-24 суток) у цыплят увеличивает в толстом отделе кишечника количество бифидо-бактерии до 1 х 105 КОЕ/г, лактозонегативных энтеробактерии - до 3 х 101 КОЕ/г, лак-тобактерии - до 1 х10б КОЕ/г; преобладали ЛЖК пропионовая, уксусная, масляная. Способствует увеличению целлюлозолитической и протеолитичекой активности ферментов химуса слепых отростков; количества общего белка в сыворотке крови, железа, гемоглобина, лимфоцитов, бактерицидной активности; нормализует содержание альбуминов, a-, ß-, у-глобулинов, фосфора. Увеличивает массу сердца, мышечного желудка, печени; повышает живую массу; сохранность поголовья на 12 %; денежную выручку от реализации мяса и экономический эффект на рубль затрат.

4. Родафен у кур в кишечнике способствует увеличению общего количества микроорганизмов, бифидобактерий, лактатферментирующих, молочнокислых бактерий; уменьшает содержание бактерий группы кищечной палочки; повышает фагоцитарную активность — на 13 %, общий белок - на 13 %; снижает количество тромбоцитов на 28 %, псевдоэозинофилов - на 5,0 %, сегментоядерных нейтрофилов- на 33,0 %, моноцитов - на 2 %. Ускоряет начало яйцекладки на 7 дней; увеличивает яйценоскость на 0,8 %, вес яйца и толщину скорлупы на 0,9 г и 0,06 мм; снижает количество дефективных яиц на 9,1 %, затраты на препарат; увеличивает денежную выручку от реализации яиц.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендуем применять пробиотик родафен цыплятам-бройлерам с кормом или водой на 1-4-е сутки 1 г на 2000 голов и с 21 по 24-е сутки 2 г для нормализации кишечной микрофлоры; увеличения целлюлозолитическую и протеолитическую активности ферментов кишечника, бактерицидной активности сыворотки крови, гемоглобина, лимфоцитов; увеличения живой массы и сохранности поголовья.

2. Курам-несушкам применять со 100 дней в дозе 4 г на 2000 голов в течение 3-х недель для нормализации микрофлоры, повышения иммунитета, яйценоскости, снижения выхода дефективных яиц.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Каблучеева, Т.И. Влияние препаратов «Гидрогемол», «Бифилакт», «Мидивет», «Гид-рогемол+» на микробный биоценоз тонкого кишечника кур / Т.И. Каблучеева, Н.Г. Подлес-ная // Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики: материалы международной научно-практической конференции / «Агрус». - Ставрополь, 2009. - С. 56-60.

2. Каблучеева, Т.И. Влияние препаратов «Гидрогемол», «Бифилакт», «Мидивет», «Гид-рогемол+» на микробный биоценоз толстого кишечника кур / Т.И. Каблучеева, Н.Г. Подлес-ная // там же, 2009. - С. 61-63.

3. Каблучеева, Т.И. Влияние различных дозировок препарата «Родафен» на морфологические показатели крови цыплят-бройлеров в возрастной динамике / Т.И. Каблучеева, Н.Г. Подлесная // Актуальные проблемы современной ветеринарии: материалы международной научно-практической конференции, поев. 65-летию ветеринарии Кубани / Краснодар, 2011. -Часть 1.-С. 47-49.

4. Каблучеева, Т.И. Влияние препаратов «Бифилакт» «Гидрогемол+», на неснеци-фическую резистентность организма кур / Т.И. Каблучеева, Н.Г. Подлесная // Тр. / КубГАУ. - 2011. - Вып. № 3 (30). - С. 195-199.

5. Каблучеева, Т.И. Влияние препаратов «Гидрогемол», «Мидивет», на неспецифическую резистентность организма кур / Т.И. Каблучеева, Н.Г. Подлесная // Тр. / КубГАУ. -2011. - Вып. № 3 (30). - С. 217-221.

6. Каблучеева, Т.И. Коррекция иммунного статуса цыплят-бройлеров препаратом родафен / Т.Н. Каблучеева, Н.Г. Амбулова // Ветеринария Кубани. - 2012. - № 5. - С. - 810.

7. Каблучеева, Т.И. Эффективность использования пребиотического препарата Гидрогемол для повышения иммунитета и профилактики колибактериоза у цыплят-бройлеров / Т.И. Каблучеева, Е.Д. Федосеева, Н.Г. Амбулова // 90 лет со дня Рождения доктора ветеринарных наук, профессора, участника ВОВ ГАРКАВИ БОРИСА ЛЬВОВИЧА: материал научной студенческой конференции факультета ветеринарной медицины по итогам работы за 2011/12 г. Краснодар, 2013. - С. 168-172.

8. Антипов, В.А. Воздействие пробиотического препарата бифилакт на биоценоз пшцеварнтельного тракта птиц / В.А. Антипов, Т.И, Каблучеева-Пашник, Т.В. Куш-нир, Н.Г. Амбулова // Тр. / КубГАУ. - 2013. - Вып. № 6. - С. 176-178.

9. Каблучеева-Пашник, Т.И. Воздействие пробиотнческих препаратов бифилакт, ве том, биокорм пионер на состов микрофлоры пищеварительного тракта птицы // Т.И. Каблучеева-Пашник, Н.Г. Амбулова, И.Г. Позднякова / Тр. / КубГАУ. - 2013. — Вып. № 6.-С. 179-180.

10. Каблучеева-Пашннк, Т.И. Эффективность использования пребиотического препарата гидрогемол для повышения иммунитета и профилактики колибактериоза у цыплят-бройлеров // Т.И. Каблучеева-Пашник, Н.Г. Амбулова, Е.Д. Федосеева/ Тр. / КубГАУ. -2013. - Вып. № 6. - С. 181-182.

Список сокращений:

AJTT - аланинаминотрансфераза

ACT - аспартатаминотрансфераза

БАСК — бактерицидная активность сыворотки крови

ЛАСК — лизоцимная активность сыворотки крови

ЛЖК - летучие жирные кислоты

МПА— мясопептонный агар

МПА - мясопептонный бульон

КОЕ - колониеобразующие единицы

ФА — фагоцитарная активность нейтрофилов

ПП — процент переваривания нейтрофилов

ФЧ- фагоцитарное число

ФЕ — фагоцитарная емкость

ФИ - фагоцитарный индекс

СОЭ — скорость оседания эритроцитов

Тл— Т лимфоциты

Вл - В лимфоциты

Лабе. - абсолютное количество лимфоцитов

С-Я - сегментоядерные лимфоциты

Л — лимфоциты

М — моноциты

ЦП - цветной показатель

ПЭ - псевдоэозинофилы

Б — базофилы

Нв—гемоглобин "

Тг- тромбоциты Ег- эритроциты L — лейкоциты

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт КОЕ - колониеобразующие единицы

Подписано в печать 16.10.2013г. Формат А5 60x84 1/16 Печать цифровая Усл. печ. л. 1,0 Заказ № 1789

бумага офсетная

тираж 100 экз.

Типография «Световод»

350004, г. Краснодар ул. Калинина 134/2

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Амбулова, Наталья Григорьевна, Краснодар

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

04201452248 АМБУЛОВА НАТАЛЬЯ ГРИГОРЬЕВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ КИШЕЧНОГО СТАБИЛИЗАТОРА В ПТИЦЕВОДСТВЕ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, Т.И. Пашник

Краснодар 2013 1

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ.................................................................................5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................................8

1.1 Влияние пробиотиков на формирование симбионтной микрофлоры в желудочно-кишечном тракте................................................................8

1.2 Влияние пробиотических препаратов на иммунитет птицы...............22

1.3 Влияние пробиотиков на обмен веществ..............................................33

1.4 Использование пробиотических препаратов в птицеводстве...............37

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................................47

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ......................................................47

2.2 Микроорганизмы желудочно-кишечного тракта птицы в возрастной динамике........................................................................................54

2.3 Физико-химическая характеристика родафена.................................57

2.4 Токсикологическая оценка и безопасность применения препарата......61

2.5 Фармакодинамика пробиотика родафен.......................................78

2.5.1 Влияние препарата родафен на состав симбионтных микроорганизмов пищеварительной системы птицы...................................................78

2.5.2 Влияние родафена на иммунитет................................................83

2.5.3 Влияние на обмен веществ........................................................85

2.5.4 Влияние пробиотика на продуктивные показатели........................96

2.6 Экономическая эффективность после применения родафена..................100

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.....................................................................102

4. ВЫВОДЫ..............................................................................108

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.......................................110

6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ........................111

7. ПРИЛОЖЕНИЯ.....................................................................138

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АЛТ - аланинаминотрансфераза

АСТ - аспартатаминотрансфераза

БАСК - бактерицидная активность сыворотки крови

ЛАСК - лизоцимная активность сыворотки крови

ЛЖК - летучие жирные кислоты

МПА - мясопептонный агар

МПА - мясопептонный бульон

КОЕ - колониеобразующие единицы

ФА - фагоцитарная активность нейтрофилов

ПП - процент переваривания нейтрофилов

ФЧ-фагоцитарное число

ФЕ - фагоцитарная емкость

ФИ - фагоцитарный индекс

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

Тл- Т лимфоциты

Вл - В лимфоциты

Лабс. - абсолютное количество лимфоцитов

С-Я - сегментоядерные лимфоциты

Л - лимфоциты

М - моноциты

ЦП - цветной показатель

ПЭ - псевдоэозинофилы

Б - базофилы

Нв- гемоглобин

Тг- тромбоциты

Ег- эритроциты

Ь - лейкоциты

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Развитие птицеводства основывается на максимальном обеспечении населения страны пищевым яйцом и мясом птицы отечественного производства, что необходимо для решения проблемы продовольственной безопасности страны. [12, 26, 37, 79, 192]

В условиях промышленного ведения птицеводства содержание, кормление и другие факторы технологических приемов не соответствуют биологическим потребностям птицы, что негативно отражается на их физиологическом состоянии. Воздействие неблагоприятных факторов часто отрицательно влияет на иммунитет птицы, что приводит, в первую очередь, к снижению продуктивности и ослаблению устойчивости птицы к различным болезням. Одним из важных факторов снижения устойчивости организма и продуктивности птицы является бессистемное применение антибиотиков и химиотера-певтических средств, что приводит к нарушению нормальной микрофлоры организма, а также снижению иммунного статуса птицы. В результате чего, участились случаи заболевания органов пищеварения, накопления остаточных количеств лекарственных веществ в мясе и продуктах птицеводства. Актуальной задачей ветеринарной практики является не только разработка новых препаратов для профилактики желудочно-кишечных заболеваний у молодняка, но также и разработка способов повышения их эффективности (Н.И. Малик, 2002).

Пробиотики являются наиболее безвредными препаратами: стабилизируют состав микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте, повышают иммунитет, сохранность поголовья, обладают ростстимулирующим эффектом. Но пробиотики не следует использовать бесконтрольно, так как разный состав пробиотика, дозировка, длительность применения, возрастной период птицы по-разному определяют фармекодинамику препарата и соответствующее его влияние на организм. [29, 46, 53, 56, 67, 98, 125, 136, 154, 185]

В связи с этим, изучение фармакодинамики новых отечетвенных про-биотиков является актуальным.

Цель работы - разработка фармакологического обоснования использования родафена в птицеводстве.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

• изучить состав микроорганизмов птицы в возрастной динамике;

• дать физико-химическую и токсикологическую оценку родафена;

• разработать схемы применения препарата;

• разработать нормативную документацию на препарат.

Научная новизна работы. Научно обоснованы оптимальные схемы

применения родафена на цыплятах-бройлерах и курах-несушках, обеспечивающие получение максимального фармакологического эффекта, улучшения продуктивного здоровья птицы, рентабельности производства.

Практическая значимость. Обосновано применение пробиотика ро-дафен на цыплятах-бройлерах и курах-несушках для нормализации кишечной микрофлоры, увеличения активности ферментов кишечника, повышения иммунитета, продуктивности, сохранности поголовья. По результатам проведенных исследований была разработана и утверждена инструкция по применению пробиотической кормовой добавки «Родафен» от 12.09.2012 года, утвержденная заместителем Руководителя Россельхознадзора Е.А. Непокло-новым; технические условия ТУ 9291-006-39988364-2012 и выдано свидетельство о государственной регистрации (учетная серия 56-2-25.12-5418, регистрационный номер № ПВР-2-25.12/02863).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• результаты изучения состава и токсикологических свойства родафена;

• фармакодинамика пробиотика;

• применение на цыплятах-бройлерах и курах-несушках;

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации представлены, опубликованы и одобрены на VI Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы зоотехническогй науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных» (Ставрополь, 2009); на Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства Российской Федерации по направлению «Ветеринарные науки» в трех этапах с I местом в первых двух (Краснодар, Ростов-на-Дону, Ставрополь, 2010); на Международной научно-практической конференции посвященной 65-летию Краснодарского научноисследовательского ветеринарного института «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011); на Международной научно-практической конференции «Современные проблемы животноводства и ветеринарии: состояние и пути решения» (Краснодар, 2013); на ежегодных научных конференциях преподавателей ветеринарной медицины Кубанского ГАУ.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 138 страницах компьютерного текста, включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы (276 источников, в т.ч. 101 зарубежный автор). Работа иллюстрирована 22 таблицами, 27 рисунками, имеет приложения.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Влияние пробиотиков на формирование симбионтной микрофлоры в

желудочно-кишечном тракте птицы

В промышленном птицеводстве желудочно-кишечные заболевания занимают 2-е место после вирусных заболеваний и являются основной причиной гибели молодняка птицы. [30, 100] Причины нарушения равновесия микрофлоры кишечника разнообразны: нарушение рациона питания, длительное применение лекарственных средств (противомикробных и др.), лучевая и химиотерапия, попадание в организм токсинов из окружающей среды (свинец, кадмий, ртуть и др), стрессовые состояния, кишечные инфекции, оперативные вмешательства, создания условий для широкой циркуляции штаммов и клонов условно-патогенных микроорганизмов, обладающих множественной устойчивостью к антибиотикам, заболевания желудочно-кишечного тракта и др. [12, 46,121,236]

В состав индивидуальной экосистемы животного входят микроорганизмы, которые участвуют в питании, дыхании, выделении и защите макроорганизма. Однако, микроорганизмы, участвующие в обеспечении каждой из перечисленных функций животного имеют разную степень чувствительности к экспериментальным и регуляторным воздействиям. Наименее чувствительными и имеющими прикладное значение являются симбиоты среднего отдела кишечника. Сохранность этого звена индивидуальной экосистемы возможно 2-я путями: 1 - подселением соответствующих микроорганизмов (пробиотиков) и 2 - повышение жизнеспособности собственных микроорганизмов (пребиотиков). [24, 218]

Вся поверхность кишечника здоровой птицы покрыта слоем бактерий толщиной в одну микробную клетку, поэтому вновь поступившим в кишечник другим видам бактерий трудно «втиснуться» в этот слой, принять участие в симбиотическом процессе. Просто применить пробиотик не достаточно. Для безусловного получения профилактического и лечебного эффекта надо еще обеспечить его «включение» в пищеварительный процесс. Описано

много случаев, когда применение симптоматической пробиотикотерапии позволило нормализовать пищеварение у птиц разных возрастов и направлений продуктивности. [46, 73, 124, 134, 137, 240, 258]

Популяция бактерий в пищеварительном тракте обычно имеется двух типов. Первой является та, которая существует в тесной связи с эпителием кишечника, а вторая встречается в кишечном содержимом. Популяции, которые самопроизвольно устанавливаются в пищеварительном тракте, могут быть полезными или вредными для хозяина. При установлении полезных бактерий создаются благоприятные условия для существования организма. Окончательная местная кишечная микрофлора является очень сложной и содержит около 1014 микроорганизмов, представляющих более 400 видов бактерий. [134, 140,156, 238]

В результате изучения кишечной микрофлоры у клинически здоровых цыплят было установлено, что лактобактерии в суточном возрасте обнаружены у 40 % цыплят, бифидобактерий - у 20 %. [49, 88, 98, 203] Доминирующими видами лактобацилл в кишечнике цыплят являются L. helveticus, L. acidophilus, L. fermentum, L. salivarius. [79] Слизистая оболочка тонкого и толстого кишечника суточных цыплят не содержит, либо содержит недостаточное количество сайтов прикрепления бифидобактерий. При наличии этих бактерий в оптимальном количестве в окружающей среде в просвете толстого кишечника, они появляются на 1-е сутки и к 7-м суткам формируется определенный уровень ассоциированной микрофлоры в обоих участках кишечника. Формирование бифидофлоры происходит вначале в содержимом толстой кишки, затем к 6-7-м суткам формируется микрофлора, ассоциированная со слизистой тонкой и толстой кишок. [49, 88, 98, 203] В 4-5-и дневном возрасте кишечный тракт наиболее активно колонизируют эшерихии и некоторые другие аэробы, численность которых достигает максимума на 5-6-е сутки. В целом, становление кишечной микрофлоры характеризуется доминирующей численностью бифидобактерий, вторыми, третьими по численности становятся лактобациллы и эшерихии, четвертыми - энтерококки, пяты-

ми - спорообразующие аэробные бактерии. Так же выявлены гемолитические эшерихии, Enterobacter spp, Citrobacter, Hafnia spp., Klebsiella spp., Salmonella spp., Proteus spp.,стафилококки, дрожжи. Плесвые грибы в 15-20 дней выделяются практически в 100 % случаев. [79, 189, 263]

По выполняемым функциям микрофлора делится на: защитную (бифи-добактерии, лактобактерии, эшерихии); сапрофитную (дрожжи, сапрофитный и эпидермальный стафилококк); условно-патогенную (протей, кандид, коагу-лазоположительный стафилококк, гемолитеский стафилококк, спороносные аэробы); патогенную (сальмонеллы, шигеллы, энтеропатогенные эшерихии, клостридии, хеликобактер, иерсинии). Данное деление, в определенной степени условно, однако, с позиции характеристики функционального состояния колонизационной резистентности кишечника, оно вполне целесообразно и обосновано. [170, 202, 203, 246]

Бифидобактерии расщепляют моно-, ди, олиго- и полисахариды, используя их как энергетический и пластический субстрат. При этом они могут ферментировать белки, в том числе и для энергетических целей; не требовательны к поступлению с пищей большинства витаминов, но нуждаются в пантотенатах. [90, 178, 242] Лактобактерии также используют различные углеводы для энергетических и пластических целей, однако плохо расщепляют белки и жиры, поэтому нуждаются в поступлении извне аминокислот, жирных кислот, а также жирорастворимых и водорастворимых витаминов. Очевидно, что питание сапрофитной микрофлоры и ее нормальное функционирование принципиально зависит от поступления к ней непереваренных углеводов (ди-, олиго- и полисахаридов) для энергетических целей, а также белков, аминокислот, пуринов и пиримидинов, жиров, углеводов, витаминов и минералов — для пластического обмена. Залогом поступления к бактериям необходимых нутриентов является рациональное питание макроорганизма и нормальное течение пищеварительных процессов. [182, 187, 189, 201, 204, 230, 241]

При воздействии различных факторов среды снижается количество нормальной и прежде всего бифидо- и лактофлоры, которая из доминирующей микрофлоры кишечника переходит в разряд малочисленной, уступив экологическую нишу другим бактериям, главным образом энтеробактериям. При снижении количества лактозопозитивных гемолитических эшерихий, возрастает доля эшерихий со слабой лактозной активностью, обладающими гемолитическими свойствами. Доля лактозонегативных энтеробактерий увеличивается у больных в сравнении со здоровыми с 6,0 % до 34,0 %. Повышается количество энтерококков на 0,5-2,0 lg/r. [36, 200]

При оценке нарушения микрофлоры кишечника учитывают следующие показатели: количественный показатель нарушения анаэробного компонента (отсутствие или снижение бифидобактерий); количественные показатель аэробного компонента (увеличение количества условно-патогенных возбудителей - протея, лактозонегативных энтеробактерий, гемолизирующего стафилококка и др. и или появления и увеличения грибов); изменения качества представителей аэробной флоры - появление лактозонегативных и гемолизи-рующих Е. coli, патогенного стафилококка и др.; соотношение анаэробного и аэробного компонентов микрофлоры. [65, 142, 151]

Симбионты желудочно-кишечного тракта в отношении патогенной микрофлоры проявляют антагонистическую активность в результате их способности продуцировать спирт, перекись водорода, молочную, уксусную и другие органические кислоты, лизоцим и антибиотики широкого спектра действия (лактолин, лизин, лактоцид, лактококцин, ацидоцин, плантарицин и др.). Они могут угнетать рост других микроорганизмов так же за счет быстрого размножения, более короткой lag-фазы, изменения pH среды. Все эти механизмы обуславливают лечебно - профилактический эффект пробиотиче-ских препаратов в отношении различных болезней желудочно-кишечного тракта. [8, 217, 235]

Пробиотики - стабилизированные культуры симбионтных микроорганизмов или продукты их ферментации. В состав пробиотических лекарственных средств входят микроорганизмы, безопасные для здоровья человека и животных, обладающие широким спектром протективных свойств, в частности, бифидобактерии, молочнокислые бактерии, L. acidophilus, L. plantarum, L. rhamnosus, L. fermentum; стрептококки Str. faecium, Str. lactis diastaticus; спорообразующие бактерии Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis и т.д. [102, 185, 190, 262] Поиск новых микроорганизмов, пригодных для приготовления пробиотиков, не теряет актуальности. Как известно, пробиотический эффект бактерий определяется суммой специфических активностей этих организмов. [97, 150, 151

Информация о работе

Амбулова, Наталья Григорьевна
кандидата биологических наук
Краснодар, 2013
ВАК 06.02.03

Диссертация

Фармакологическое обоснование применения кишечного стабилизатора в птицеводстве - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы