Исследование содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии

Сайфудинов, Ахлиддин Киемович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Исследование содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии"

На правах рукописи

Сайфудинов Ахлиддин Киёмович

Исследование содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии

Специальность 03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Душанбе- 2004

Работа выполнена в лаборатории фармакологии Института химии им. В.И. Никитина АН Республики Таджикистан

Научный руководитель:

доктор химических наук Научный консультант:

академик АН РТ, доктор медицинских наук

Кадыров Абдурахмон Хафизович

Хайдаров Карим Хайдарович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук кандидат биологических наук

Гиясов Тавакал Джураевич Бабаджанова Хуршеда Иномовна

Ведущая организация:

Таджикский государственный медицинский университет им. Абуали ибн Сино

Защита состоится «_У » Ф/СебрЗ 2004 г. в /7 ¡ртационного совета К ^737.(^04.01 в Таджике!

часов на заседании

диссертационного совета К ''737.604.01 в Таджикском государственном национальном университете (734025, г.Душанбе, пр. Рудаки, 17).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Таджикского государственного национального университета

Автореферат разослан « & » 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор /у биологических наук, профессо

Х.Ю. Юлдашев

2004-4 29246

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы Современная диагностика и целенаправленное лечение желчнокаменной болезни и ее осложнений остаются до настоящего времени актуальной и окончательно не решенной проблемой для гастроэнтерологических учреждений Поэтому поиски методов современной диагностики и лечения желчнокаменной болезни, ее многочисленных и тяжелых осложнений, опасных для жизни больных, продолжают привлекать внимание широкого круга биохимиков и клиницистов.

Среди различных заболеваний желчевыводящей системы основное место занимает желчнокаменная болезнь-55-65% (Василев, 1989)

Поэтому проблема лечения желчнокаменной болезни остается одной из важнейших задач, которая может быть решена путем постоянного контроля за изменениями содержания и состава желчных кислот в желчном пузыре и в сыворотке крови (Мансуров, 1981; Мансуров, 1982) Известно, что решающее значение в этиологии желчнокаменных болезней имеет нарушение нормального метаболизма холестерина и его производных в желчные кислоты. С другой стороны, те же самые кислоты и их аналоги, в ряде случаев могут служить эффективными средствами для лечения желчнокаменной болезни. Все это показывает перспективность развития всесторонних исследований по выявлению существующей связи между химией желчных кислот и других компонентов желчи, включая методы их трансформации и определения.

Среди желчных кислот особый интерес представляют основные первичные и вторичные желчные кислоты: холевая ГХК), хеподезоксихолеваяХДХК), читохолевая (ЛХК), дезоксихолевая (ДХК) и дегидрохолевая (Дег ХК), которые входят в основной компонент желчи и сыворотки крови.

Значительное распространение заболеваний печени и трудности распознавания их побудили нас к поиску более надежных и достаточно информативных методов диагностики Количественное определение желчных кислот в желчи приобретает важное значение в целях диагностики и оценки эффективности лечения Разработка высокоточных методов определения содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови здоровых людей и у больных разных патологии печени является актуальной задачей.

Изучение изменений содержание и состава этих кислот под действием различных препаратов в организме, представляют актуальную задачу как для биохимических исследований, так и для практической медицины.

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований явилось систематическое определение содержания желчных кислот в желчи и в сыворотке крови здоровых людей и у больных с разным характером патологии печени, желчевыделительной системы, изучение изменений состава основных желчных кислот под влиянием некоторых литолитических препаратов, использование полученных результатов для лечения и профилактики желчнокаменной болезни

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1'ОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА Петербург

- разработать оптимальную методику определения содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови у здоровых лиц и у больных с различным характером патологии печени и желчевыделительной системы;

- исследовать количество и характер изменений желчных кислот при использовании некоторых литолитических препаратов;

- провести сравнительный анализ желчных кислот в желчи и в сыворотке крови на различных стадиях желчнокаменной болезни.

Научная иовизна. Модифицирована методика определения содержания желчных кислот в желчи и в сыворотке крови у больных с различным характером заболеваний печени и желчевыделительной системы методом газожидкостной хроматографии, определен состав этих кислот под действием хенодезоксихолевой кислоты, геранола, глицериновых эфиров хенодезоксихолевой кислоты, бальзама "Сино" и других препаратов. Впервые экспериментально установлена зависимость «

содержания желчных кислот от стадии заболевания желчнокаменной болезнью. При этом выявлена закономерность, что у здоровых лиц преобладает содержание хенодезоксихолевой кислоты. Для физико-химических стадий болезни характерна секреция печенью литогенной желчи (избыток холестерина, уменьшение содержания ^

желчных кислот). При хирургической стадии заболевания имеет место снижение общей суммы желчных кислот (в первую очередь хенодезоксихолевой) при одновременном увеличении содержания холевой и дегидрохолевой кислот.

Практическая ценность. Результаты газохроматографического определения содержания желчных кислот в желчи и в сыворотке крови можно использовать для дифференциации различной патологии печени и желчевыделительной системы. Точное определение содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови приобретает важное значение для оценки эффективности лечения при использовании различных литолитических препаратов с целью химического растворения желчных камней в случае желчнокаменной болезни. Результаты исследования состава и содержания желчных кислот могут быть использованы для определения функционального состояния гепатоцитов.

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались на республиканской научной конференции, посвященной 50-летию Института химии им В.И. Никитина АН РТ, (Душанбе, 1996), республиканской научной конференции «Морфологические и физиологические основы адаптации организма», (Душанбе, 1997), республиканской научной конференции посвященной 50-летию ТГНУ (Душанбе, 1998), республиканской конференции молодых ученых ТГНУ (Душанбе, 2002), республиканской научной конференции «Актуальные проблемы производства лекарственных препаратов на основе местного сырья» (Душанбе, 2003), международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы физиология человека и животных» (Душанбе, 2003) и республиканской конференции Общества биохимиков Республики Таджикистан «Вклад биохимиков Таджикистана в развитие биологической науки» (Душанбе, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них 4-статьи и 3 тезисы докладов

Обьем и структура диссертации: диссертация изложена на 92 страницах

компьютерного текста, состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и списка

использованной литературы, включающего 76 отечественных авторов и стран СНГ, и 68 иностранных источника. Содержит 11 таблиц и 9 рисунков

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ (Экспериментальная часть)

Краткая характеристика методов исследований. Для выполнения данной работы необходимо было осуществить серию синтезов исходных источников желчных кислот, и их соответствующих метиловых эфиров.

Для определения степени чистоты исходных и различных фракций очищенных веществ были использованы тонкослойная и газожидкостная хроматографии

Для разделения метиловых эфиров желчных кислот использовали смесь, состоящую из хлороформа и этилового спирта в соотношении 10:1. Анализ проводился на пластинках «силуфол», а в качестве проявителя использовался йод.

При отборе проб у обследуемого контингента использовали специальную методику замораживания желчи и ее ампулирования. Для изучения показателей липидного обмена помимо проб желчи, консервировалась сыворотка крови обследуемых лиц.

Контрольную группу составили практически здоровые люди (50 доноров). Среди них было 28 женщин в возрасте от 13 до 61 лет и 22 мужчин в возрасте от 19 до 46 лет. Всем им проводилось полное клиническое и лабораторное обследование, изучалось функциональное состояние печени и желчевыделительной системы

Нами обследованы желчь и сыворотка крови у 148 больных с различным характером болезни печени и желчевыделительной системы.

Исследование физико-химических свойств желчи. Значения рН измеряли на универсальном иономере ЭВ-74 Инфракрасные спектры (ИК- спектры) снимали на приборе «ЗРЕССЖО-Л 75».

Для изучения химизма желчи выбиралась наиболее темная пузырная золотисто-желтая печеночная порция желчи, в которой определяли концентрацию общего билирубина, холестерина, суммарное количество желчных кислот, содержание холевой кислоты, фосфолипидов Содержание каждой по отдельности основной желчной кислоты в желчи и сыворотке кровы определяли методом газожидкостной хроматографии.

Содержание общего билирубина определялось по Индрашику-Грофу (1973)

Изучение показателей липидного обмена. Для определения концентрации общего холестерина в желчи использовался модифицированный метод Илкома (1973), реакция Либериона-Бурхарда.

Содержание фосфолипидов определялось по методу Зильверсмит и Девис(1950).

Определение суммарных желчных кислот (СЖК) и холевой кислоты в желчи проводили по методу Р.А. Поповой с соавторами (1969).

Определение индекса литогенности желчи. Индекс литогенности желчи -холото-хлостериновый коэффициент рассчитывался математически, как отношение суммарных желчных кислот к холестерину отдельно для каждой порции желчи.

Оценка насыщенности желчи холестерином у больных проводилась с использованием кривой насыщения, предложенной X X. Мансуровым и соавторами (1985).

Газохроматографическое исследование.

а). Определение содержания желчных кислот в желчи проводилось методом газожидкостной хроматографии с использованием газового хроматографа «хорм-5», чешского производства с пламенно-ионизационным детектором при программировании температуры в интервале 250-265°С, при 0,5 мл/мин. по методике А X. Кадырову и соавторов (1986).

б) Содержание свободных желчных кислот в сыворотке крови определяли методом газожидкостной хроматографии. В качестве внутреннего стандарта использовали За,7а-дигидрокси-12-кетометилхолот (Кадыров А.Х. 1986,1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Газохроматографическая оценка желчных кислот в желчи здоровых людей и у больных желчнокаменной болезнью

Для проведения биологических исследований по изучению растворяющий способности холестериновых камней ряда новых препаратов необходимо уточнить содержание желчных кислот в желчи и в сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии, так как определение содержания желчных кислот в желчи и в сыворотке крови дает точную информацию о характере болезни у больных с различными патологиями печени и желчевыделительной системы.

Эти результаты приобретают важное значение для диагностики и оценки эффективности лечении.

Для определения содержания первичных желчных кислот в составе желчи (холевой кислоты и хенодезаксихоловой кислоты) и для некоторых вторичных (деюксихолевой, литохолевой и дегидрохолевой) кислот нами был модифицирован метод Куоз1к Т8а<1а (1986; 1964).

Газохроматографическим анализом определяли количество первичных желчных кислот - холсвая кислота (ХК), хенодезоксихолевая кислота (ХДХК) и вторичных -литохолевая кислота (ЛХК), дезоксихолевая кислота (ДХК), дегидрохолевая кислота (Дсг ХК), рассчитывали их суммарное количество и соотношение в желчи. С целью вычисления относительного поправочного коэффициента для каждой из желчных кислот, к анализируемой пробе желчи добавляли точно измеренное количество стандарта В качестве внутреннего стандарта использовали За,7а-дигидрокси-12-кетометилхолог Затем проводили анализ ряда искусственных смесей исследуемых веществ со стандартом, снимали ряд хроматограмм и рассчитывали соотношение площадей пиков (или высот пиков) для определения концентрации желчных кислот На основе полученных хроматограмм строили график образцов калибровочных кривых для метиловых эфиров желчных кислот.

На рис 1 приведены данные о зависимости отношения площади пика стандарта к площади пика исследуемого вещества, от отношения концентрации стандарта и исследуемого компонента На рис.1 видно, что все эти зависимости имеют прямолинейный характер

С целью получения более существенных результатов и установления норм в качестве объекта исследования использовали пузырную желчь 15 здоровых людей (порция В), полученную при дуоденальном зондировании. Исследование проведено 10 женщин и 5 мужчин в возрасте от 20 до 57 лет (контрольная группа). Одновременное

Рис.1. Образцы калибровочных кривых для метиловых эфиров желчных кислот: 1 - ХК; 2 - Дег.ХК; 3 - ХДХК, 4 - ДХК; 5 -ЛХК.

исследование функциональных показателей печени, микроскопическое и биохимическое изучение желчи у здоровых людей не выявило каких-либо патологических изменений.

На рис 2. приведена хроматограмма контрольной желчи порции В.

Результаты хроматографирования желчи у 15 здоровых людей представлены в табл 1. Из данных табл. 1 и рис 2 видно, что в желчи 15 здоровых людей содержание желчных кислот в мг/мл составляет: ЛХК-0,30; ДХК-1,25 ХДХК-3,80; ХК 2,26, Дег ХК-0,22.

Затем были сопоставлены результаты анализа содержания желчных кислот в пузырной желчи здоровых людей, больных холилитиазом в различной стадии его развития, с применением нового внутреннего стандарта и формулы расчета'

■ч

8 - 1

Рис.2. Хроматограмма контрольной желчи: 1 -ЛХК; 2 - ДХК; 3 - ХК; 4 - ХДХК; 5 - Дег.ХК и б-За,7а-дигидрокси-12-кетометилхолот.

С- концентрация желчных кислот

Нк- высота пика кислот

К- относительный поправочных коэффициент

100-пост, величина

Кст- =1пост

Нсш-высота пика стандарта

А- количество желчи или сыворотки крови в гр

М-масса стандарта.

При подборе желчи в качестве объекта исследования мы всегда использовали классификацию желчнокаменной болезни, предложенную Х.Х. Мансуровым (1981), согласно которой болезненный процессе может быть подразделен на два периода; 1 доклинической период и 2-клинический период, включающий физико-химическую стадию, период образования камней и хирургическую стадию. Биохимическая характеристика доклинического периода может выявить наличие генетического или приобретенного дефекта в метаболизме холестерина, желчных кислот или фосфолипидов.

В клиническом периоде происходит секреция печенью литогенной желчи, обнаруживается избыток холестерина, уменьшение содержания желчных кислот и фосфолипидов

В стадии нарушения физико-химических свойств желчи в дуоденальном содержимом возможно обнаружение кристаллов холестерина и билирубина

На основании результатов микроскопического и биохимического исследования желчи установлена физико-химическая стадия желчнокаменной болезни, 15 больных -1-я группа (10 женщин, 5-мужчин в возрасте от 23 до 63 лет).

При микроскопическом изучении пузырной порции желчи вывялено большое количество кристаллов холестерина и билирубината кальция. Биохимическое исследование желчи показало резкое повышение содержания холестерина и ХК с одновременными снижением суммарного количества желчных кислот, фосфолипидов и холото-холестеринового коэффициента.

Если соотношение ЛХК, ДХК, ХДХК, ХК, Дег.ХК у здоровых людей составляло (0,30; 1,25; 3,80; 2,26; 0,22мг/мл), то интересные результаты выявлены при анализе газохроматографических данных, которые получены при исследовании пузырной желчи у больных, находящихся на физико-химической стадии. В данном случае соотношение этих кислот составляло- ЛХК-0,24-ДХК-0,18; ХДХК-0,35; ХК-0,36; Дег. ХК-0,65 мг/мл.

Вторую группу также составили 15 больных с клинической стадией желчнокаменной болезни (13 женщин, 2 мужчин в возрасте от 37 до 61 года)

Газохроматографический анализ результатов, полученных при исследовании состава желчных кислот в желчи, у больных с желчнокаменной болезни на хирургической стадии показал, что увеличивается содержание холевой и дегидрохоловой кислот в сравнении с контрольной группой Соотношение ЛХК, ДХК, ХДХК, Дег. ХК составляло - 0,30; 0,72; 1,13; 3,48; 1,36 мг/мл.

На рис. 3 представлена хроматограмма желчи с диагнозом желчнокаменной болезнью (хирургическая стадия) Приведенные результаты свидетельствуют о том, что у больных с желчнокаменной болезни на хирургической стадии увеличивается содержание ХК и Дег.ХК по сравнению с приведенной контрольной хроматограммой (рис.2).

Все результаты газохроматографических анализов желчи приведены в таблице 1 На основании данных таблицы построен график зависимости содержания желчных кислот от различных стадий заболеваемости при желчнокаменной болезни (рис 4) Результаты количественного определения первичных и вторичных желчных кислот в пузырной желчи у здоровых и больных желчнокаменной болезнью показали, что у здоровых преобладает содержание ХДХК и ХК и отмечается лишь небольшое количество Дег.ХК. В отличие от здоровых у больных желчнокаменной болезнью, особенно в ее начальной, физико-химический стадии, наблюдалось резкое снижение количества всех исследуемых желчных кислот Содержание же Дег ХК у больных по сравнению со здоровыми увеличивалось Примечательно, что если в физико-химической стадии литогенеза уровень ХДХК заметно снижен у всех больных, то в хирургической стадии он несколько выше. Содержание ХК на различных этапах литогенеза, ее показатели в физико-химической стадии холелитиаза довольно низкие по сравнении с нормой, но в хирургической стадии уровень ХК в желчном пузыре оказывается даже несколько выше, чем в контрольной группе Следовательно, в процессе литогенеза наблюдаются не только периоды активного течения заболевания, но и периоды, когда происходить, по-видимому, мобилизация организмом приспособительных механизмов на пути интенсивного развития литогенеза.

—1-Г"

25 20

—Г"

—г-

Рис.3. Газожидкостная хроматография метиловых эфиров желчных кислот при желчнокаменной болезней на хирургической стадии: 1 -ЛХК, 2 - ДХК„ 3 - ХДХК, 4 - Дег.ХК, 5.- За,7а-дигидрокси-12-кетометилхолот и 6 - ХК.

Содержание Дег.ХК постепенно возрастало от физико-химической до хирургической стадии.

Таким образом, газохроматографическое исследование количественного содержания желчных кислот в желчи на различных стадиях желчно каменной болезни позволяет уточнить значение каждой отдельно взятой кислоты в развитии литогенности и образования желчных камней.

Практическая значимость метода заключается в том, что эти данные можно исполыовать для дифференциации различной патологии печени и желчевыделительной системы.

При количественном определении желчных кислот в желчи методом I аюжидкостпой хроматографии впервые установлено, что Дег ХК содержится в минимальных количествах у здоровых людей и в больших количествах у больных желчно каменной болезнью.

Таким образом, впервые экспериментально установлена зависимость содержания желчных кислот от стадии заболевания желчнокаменной болезнью.

Таблица 1

Содержание желчных кислот в пузырной желчи здоровых людей, больных холелитиазом на различной стадии его развития

ДХК, мг/мл ХДХК, мг/мл ХК, мг/мл Дег ХК, мг/мл Сумма желчных кислот, мг/мл

Стадии ЖКБ Стадии ЖКБ Стадии ЖКБ Стадии ЖКБ Стадии ЖКБ

Здоровые Физико-ммическкая 1 § к о и т Е и. а & Здоровые Физико-:имическкая 5 ¡С о и г в и. о. >. о. Здоровые Физико-;имическкая 8 О и г о. о. Здоровые Физико-;имическкая § О и яК и а. £ Здоровые Физико-имическкая £ г т Е £ с.

X X X X X

0,90 0,025 1,25 3,40 0,068 1.20 2.56 0.07 3,35 0,25 0,75 1,60 7,11 0,21 7,40

0,83 0,50 0,65 2,80 0,90 1,70 2,10 0,90 3,77 0,33 0,70 1,50 6,06 3,50 7,62

0,93 0.075 0,65 2,90 0,13 0,90 1.60 0,18 3,30 0,25 0,88 2,40 5,68 0,49 7.25

1,66 0,05 0,40 4,30 0,10 0,90 3,30 0,12 4,40 0,03 0,42 1,60 9,21 0,29 7,30

1,68 0,05 0,40 2,80 0,18 0,80 1,90 0,22 3,03 0,03 0,60 1,90 6,43 0,45 6,13

1,20 0.05 0,25 3,70 0,025 0,90 2,50 0.09 2,83 0,15 0,28 1,30 7,55 0,18 5.28

1,21 0,02 0,38 3,40 0,18 0,90 2,40 0.22 2,73 0,09 0,26 1,20 7,09 0,48 5,21

1.20 0,27 0,22 3,80 0,10 1,10 2,80 0,12 4,06 0,11 0,23 0,45 7,91 0,52 6,83

1,50 0,18 0,98 5,90 0,20 0,80 4,40 0,28 3,93 0,25 0,65 0,45 12,05 1,31 6,15

1,60 0.35 0,90 5,80 0,48 1,60 3,30 0,50 3,73 0,53 0,80 0,30 11,23 2,13 7.53

1,35 0,41 0,88 3,63 0,39 1,27 3,00 0,60 3,88 0,40 0,69 1,51 8,38 2,09 8,54

1,30 0,28 0,20 3,28 0,20 1,80 2,65 0,92 4,05 0,03 0,56 1,23 7,25 1,46 6,28

1.26 0,34 0,95 2,99 0,60 1,25 2,80 0,88 3,20 0,02 0,54 1,40 7,06 1,86 5.80

1.00 0.09 0,60 4,03 0,79 0,90 2,44 0,53 2,83 0,08 0,59 1,60 7,55 2,01 6,93

1,03 0.05 0,52 4,09 0,51 0,98 2,33 0,90 3,11 0,05 0,52 1,87 7,48 1,98 6,48

1,25 0,18 0,72 3,80 0,35 1,13 2,26 0,36 3,48 0,22 0,65 1,36 7,76 1,26 6,64

С,,

Контрол. ф|тико- ЖБК Стадии

Химич. заболеваемости

Рис 4 Зависимость содержания желчных кислот от стадии заболевания желчнокаменной болезнью

Сравнительная оценка содержания желчных кислот в сыворотке крови здоровых лиц и у больных хроническим холециститом

Исследование содержания желчных кислот и их соотношения в сыворотке крови стало одним из высокочувствительных и информативных методов диагностики различных заболеваний печени и желчевыводящих путей

Болезни печени, занимающие значительное место в клинической патологии, сопровожу потея нарушением одной важнейших ее функций - экскреции желчи, что приводит к значительному накоплению желчных кислот в сыворотке крови, а также к изменению состава желчных кислот в сыворотке крови и к изменению в их соотношении.

Нами была разработана методика определения содержания деконъюгированных форм желчных кислот сыворотки крови методом газожидкостной хроматографии Мы попытались выяснить информативность данного метода, а также его доступность в клинических условиях. Всего обследовано сыворотка крови 12 практически здоровых людей в возрасте от 19 до 50 лет, среди которых было 7 женщин и 5 мужчин.

Содержание сывороточных желчных кислот определяли газохроматографичес ким методом, для чего использовали хроматограф «Хром-5», с пламенно-ионизационными детектором При обследовании применяли клинико-лабораторныс методы определения функционального состояния печение и желчевыделительной системы.

Было определено содержание отдельных первичных желчных кислот (холевая и хенодезоксихолевая) и вторичных (дезоксихолевая и литохолевая) вычислена их общая сумма, а также показатель соотношения желчных кислот.

Общая сумма желчных кислот вычислялась по формуле (1) и составила ХК-0,68; ДХК-0,37; ХДХК-0,64мг%.

Общая сумма желчных кислот составила в среднем 1,68+0,27мг%.

В таблице 2 представлены результаты определения методом газожидкостной хроматографии содержания желчных кислот сыворотки крови здоровых людей и больных хроническим холециститом

Метод газохроматографического определения содержания желчных кислот получил широкую популярность в связи с тем, что он является точным и информативным, оп позволяет изучать различные взаимопревращения желчных кислот при многих заболеваниях печени и желчевыделительной системы

Первичные желчные кислоты (холевая и хенодезоксихолевая) синтезируются исключительно в печени, поэтому информация об их количественном содержании необходима для определения функционального состояния гепатоцитов Кроме того, что часть этих кислот конъюгируются с аминокислотами - глицином и таурином, они совершают непрерывный кругооборот между печенью и кишечником Благодаря такой циркуляции в организме осуществляется балансировка синтеза желчных кислот. Но при разных патологиях печени и желчевыделительной системы изменяется концентрация желчных кислот в желчи и сыворотке крови.

Нами определялось также содержание основных желчных кислот сыворотки крови больных хроническим некалькулёзным холециститом в зависимости от

особенностей сократительной функции желчного пузыря в сравнении с здоровыми людми В сыворотке крови контрольных лиц были определены первичные желчные кислоты холевая, хенодезоксихолевая и вторичная желчная кислота - дезоксихолевая, редко обнаруживались следы дегидрохолевой кислоты. Количество изученных желчных кислот в сыворотке крови у лиц контрольной группы в среднем составляло 1,69+0,33мг% (холевая-0,68мг%; хенодезоксихолевая-0,64мг%, дезоксихолевая-0,37мг%, а дегидрохолевая - в виде следов). Как видно из представленных в таблице 2 данных соотношение первичных желчных кислот - ХК, ХДХК и вторичной - ДХК, в сыворотке крови контрольных лиц составило в среднем 1:1:0,3.

Таблица 2.

Определение методом газожидкостной хроматографии содержания желчных кислот в сыворотке крови здоровых людей и больных хроническим холециститом

№ п. П У здоровых людей мг / % У больных хроническим холециститом, мг / %

ХК ДХК ХДХК Дег.ХК ХК ДХК ХДХК Дег. ХК

1 0,58 0,22 0,28 - 17,91 10,60 9,05 2,98

2 0,52 0,25 0,70 - 18,00 9,99 9,10 2,28

3 0,79 0,60 0,60 - 16,99 10,01 8,89 3,09

4 0,88 0,65 0,59 - 18,01 10,10 8,88 3,07

5 0,55 0,19 0,68 - 17,88 10,12 8,79 3,01

6 0,58 0,39 0,54 след 17,27 10,81 9,11 3,03

7 0,71 0,29 0,58 - 18,33 10,77 9,16 2,88

8 0,67 0,33 0,61 - 18,44 10,80 9,22 2,89

9 0,56 0,19 0,69 след 18,57 10,81 8,70 2,79

10 0,83 0,28 0,72 - 16,91 10,88 8,78 3,05

11 0,50 0,30 0,56 - 17,39 11,00 8,91 2,90

12 0,88 0,44 0,80 - 18,14 10,59 8,96 2,93

13 0,80 0,43 0,81 - 17,90 10,73 8,93 2,82

14 0,73 0,50 0,77 след 17,79 10,80 9,12 3,01

15 0,70 0,51 0,73 - 18,27 10,73 9,04 3,04

Среднее содержание желчных кислот 0,68 0,37 0,64 * 18,56 10,58 8,97 2,91

Анализ результатов, полученных при исследовании состава желчных кислот в сыворотке крови у больных хроническим холециститом с нарушением сократительной способности желчного состава, показал, что показатели общего количества изученных желчных кислот у больных с указанной патологией оказались значительно выше, чем у лиц контрольной группы.

Надо отметить, что у больных хроническим холециститом с пониженной сократительной способностью желчного пузыря происходит увеличение

концентрации желчных кислот, (табл.2) Общее количество желчных кислот достоверно повышается (р=0,001) и составляет 41,02+2,0мг% (холевая-18,5+ 1,0мг%, хенодезоксихолевая9,0+0,8мг%, дезоксихолевая-10,52=1,2мг%).

При газохроматографическом анализе нами впервые были обнаружены сигналы о появлении дегидрохолевой кислоты в сыворотке кровы у больных холециститам, хотя у контрольных лиц она появилась в виде следов. Важно отметить, что под влиянием фермента оксидазы, содержащейся в микрофлоре кишечника, катализируется процесс окисления гидроксильных групп молекулы холевой кислоты и в результате образуется дегидрохолевая кислота, которая поступает в печень при энтерогипатической циркуляции желчных кислот.

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что у больных хроническим холециститом соотношение сывороточных желчных кислот составляет (2,1; 1,1; 3,03). Таким образом, при холецистите нарушается холатообразующая функция печени, степень нарушения ее коррелирует с характером нарушений моторной функции желчного пузыря. Изменение общей концентрации сывороточных желчных кислот у больных холециститом свидетельствует о нарушении функционального состояния гепатоцитов.

Содержание свободных желчных кислот сыворотки крови у больных хроническим гепатитом

Исследование содержания желчных кислот и их соотношения в сыворотке крови имеет важное диагностическое значение при оценке функционального состояния гепатецитов. Поэтому нами было обследовано сыворотка крови 21 больных хроническим гепатитом (15-хроническим активным гепатитом, 6-персистирующим гепатитом). Контролем служила сыворотка 18 практически здоровых людей.

Содержание сывороточных желчных кислот определяли газохроматографическим методом, пламенно-ионизационными детектором (Кадыров, Сайфудинов, Мансурова, 2004). В сыворотке крови здоровых лиц были идентицифированы следующие желчные кислоты: холевая, хенодезоксихолевая, и вторичные желчные кислоты- дезоксихолевая и литохолевая, концентрация которых составляла соответственно: 0,51+0,08; 0,56+0,1; 0,34+0,02; 0,12+0,01 и выражалось в процентах. Что касается дегидрохолевой кислоты, то она обнаруживалась в виде следов. В группе больных хроническим гепатитом суммарная концентрация сывороточных желчных кислот достоверно повышалась. Наиболее выраженное повышение содержания желчных кислот сыворотки кровы наблюдалось у больных хроническим активным гепатитом. При этом средние величины суммарной концентрации желчных кислот составляли - 20,7+2,8 (холевая - 7,1+1,7, хенодезоксихолевая - 4,8+1,0, дезоксихолевая - 7,2+0,7, дегидрохолевая кислота 1,6+0,5 и литохолевая кислота -1,3+0,3).

В группе больных хроническими персистирующим гепатитам уровень сывороточных желчных кислот оказался сравнительных низким - 12,6+1,6 (холевая кислота-3,6+_0,6 дезоксихолевая кислота-3,7+0,4дегидрохолевая кислота -1,5+0,5 и литохолевая кислота -1,1+0,1). Возрастание концентрации сывороточных желчных

кислот происходило за счет увеличения всех фракций по-видимому, вследствие нарушения синтетической и секреторной деятельности гепатоцитов. Таким образом, определения содержания желчных кислот в сыворотке крови дает ценную информацию о функциональном состоянии гепатоцитов, и уровень их в периферической крови во многом зависит от степени выраженности патологического процесса в печени при гепатитах.

Уровень желчных кислот сыворотки крови у больных циррозом печени

Общая концентрация желчных кислот и их соотношение существенно меняется йри ряде заболеваний. При патологии печени и желчевыводящих путей особый интерес представляет изучение их содержания для распознавании раннего периода течения заболевания у больных циррозом печени.

Поэтому дальнейшие наши исследования были посвящены изучению содержания основных желчных кислот, а также их соотношения в сыворотке крови у больных циррозом печени в сравнении с сывороткой контрольных лиц. Исследовано содержание желчных кислот в сыворотке крови у 14 больных циррозом печени различной этиологии Контролем служили результаты исследования желчных кислот сыворотки крови у 18 практически здоровых лиц (11-женшин, 7-мужчин) в возрасте от 19 до 50 лет, у которых суммарное количество желчных кислот составило 1,41+0,17 и выражалось в процентах. При этом холевая кислота составляла 0,51+0,08, хенодезоксихолевая кислотаь-0,5+0,1, дезоксихолевая кислота 0,18+002.

В хроматограмме метиловых эфиров желчных кислот у лиц этой группы определялась также дегидрохолевая и литохолевая кислоты, но - в виде следов. Показатель соотношения отдельных желчных кислот составлял - ХК: ХДХК:ДХК-1.1 0,3.

Полученные данные подтверждалось тем, что у всех больных циррозом печени содержание желчных кислот сыворотки крови достоверно повышалось и составляло 0,17+3,7 (холевая кислота - 9,1+1,8) хенодезоксихолевая кислота - 5,2+0,8, дезоксихолевая кислота - 6,4+0,9, литохолевая-0,9+0,3 и дегидрохолевая- 1,2+0,2) Средние величины суммарных желчных кислот в 17-18 раз были выше у больных циррозом печени в сравнении с содержанием желчных кислот сыворотки крови у лиц контрольной группы Следует указать на появление в хроматограммах метиловых эфироп желчных кислот сыворотки крови у больных циррозом печени, пики литохолевой и дегидрохолевой кислот, нарастание их концентраций, что свидетельствует о тяжести течения процесса. Полученных данные были использованы для построения графика зависимости содержания желчных кислот от различных стадий поражения печени (рис 5).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что у больных циррозом печени наблюдается значительное повышение концентрации сывороточных желчных кислот, изменяется соотношение желчных кислот сыворотки крови, увеличивается содержание холсвой кислоты, на хроматограммах метиловых эфиров желчных кислот сыворотки крови у больных циррозом печени обнаружено нарастание содержания дегидрохолевой кислоты .

мг/мл

дхк

хдхк

Дег.ХК

■ I | '

Контроль Хр.аюив Хр.персистирую Цирроз гепатит щий гепатит

Рис.5. Зависимость содержания желчных кислот от различной патологии печени

Влияние бальзама «Сино», геранола и хенодезоксихолевой кислоты на характер изменения содержания желчных кислот при желчнокаменной болезни

Известным преимуществом экстрактов лекарственных растений перед всеми другими синтетическими лекарствами является то, что они экологически чисты и не вредны для организма. Поэтому изучение, критический анализ и экспериментальная проверка всего ценного, что есть в многовековых медицинских традициях и книгах, открывает перед нами большие возможности в решении вопросов, связанных с лечением и профилактикой ряда патологий печени и желчевыделительной системы. Динамика биохимических преобразований желчи экспериментальных животных под влиянием бальзама «Сино» хорошо обнаруживается на данных газожидкостной хроматографии.

До введения бальзама «Сино» количество дезоксихолевой кислоты (ХДХК) составляло-0,35; хенодезоксихолевой кислоты (ХДХК) 0,98; холевой (ХК)-0,87 мг/мл в то время как в контрольной группе содержание дезоксихолевой кислоты составляло -1,02; холевой - 0,38мг/мл.

После введения бальзама «Сино» количество дезоксихолевой кислоты увеличилось и стало - 0,49; хенодезоксихолевой - 1,40; холевой - 0,64мг/мл.

Полученные данные свидетельствуют о том, что бальзам «Сино» нормализует спектр желчных кислот, повышает тем самым коллоидную стабильность желчи, препятствует процессу литогенеза.

Таким образом, опыты проведенные на белых крысах и морских свинках показали, что бальзам «Сино» вызывал активный желчегонный эффект, проявляющийся в достоверном повышении объема секретируемой желчи. Наряду с этим препарат активно вмешивался в химизм желчи, наблюдалась уменьшение концентрации холестерина и билирубина с одновременным повышением содержания суммарных желчных кислот и фосфолипидов. Если учесть, что растворимость холестерина прямо пропорционально концентрации желчных кислот и фосфолипидов (МсЗегЫвег с! гл, 1966), то активное вмешательство бальзама «Сино» в химизм желчи можно считать весьма ценным эффектом при тех заболеваниях печени и желчевыделительной системы, в результате которых наблюдается повышение степени литогенности желчи.

Нами было исследовано влияние препарата геранола на содержание желчных кислот в пузырной желчи здоровых людей и больных холелитиазом в различной стадии его развития.

С целью получения более существенных результатов газохроматографичес-кому анализу подвергали желчь здоровых людей и желчь больных желчнокаменной болезнью в ее физико-химической и хирургической стадии.

В таблице 3 приведены результаты газохроматографического анализа метиловых эфиров желчных кислот здоровых и больных желчнокаменной болезнью под влиянием препарата геранола. Увеличенные до лечения концентрации деюксихолевой, дегидрохолевой и холевой кислот в процессе лечения снизились достоверно до значений, ниже контрольных. Содержание хенодезоксихолевой кислоты возросло с 5,85+ 0,34 ммоль/л до 20,18+1,1 ммоль/л при норме 17,17+1,08

ммоль/л в желчи больных на физико-химическом стадии, и с 4,25+0,46 ммоль/л до 16,95+1,1 ммоль/л, в желчи больных на хирургическом стадии, что свидетельствовало о восстановлении процессов стабилизации в желчи, препятствующих образованию ядра и формированию холестериновых конкрементов.

Таким образом, газохроматографические исследования желчных кислот в желчи порции «В» у больных желчнокаменной болезнью свидетельствует о том, что препарат геранол стабилизируют химический состав желчи, восстанавливает коллоидное равновесие желчи, а также способствует процессу ускорения энтерогепатической циркуляции желчных кислот.

Таблица 3

Содержание желчных кислот в желчи у больных желчнокаменной болезнью(ЖКБ) до и после лечения геранолом

Группы больных Лечение Содержание желчных кислот (М ±т), м моль/л, порции «В»

лхк дхк ХДХК Дег.ХК ХК Сумма ЖК

ЖКБ (фнэико-хнм стадии). 20-больных До Р после Л 1,38±0,23 0,42+0,09 <0,001 10,16±0,65 < 0,001 1,05+0,14 0,001 5,85±0,34 0,001 20,18+1,1 3,75+0,18 0,001 1,24+0,27 4,25+0,25 0,05 1,68±0,42 0,02 25,39±0,84 24,1510,77 0,01

ЖКБ (хирургичес. стадия) 20-больных ДО Р после Л 1,27+0,28 0,50±0,11 <0,01 9,15±0,78 <0,001 2,75±0,32 0,02 4,25±0,46 0,001 16,95±1,1 4,36+0,33 0,001 1,48±0,86 3,18±0,66 1,44±0,86 0,01 22,2110,69 0,001 23,12+0,54 0,001

Практически здоровые люди 20 человек 1,26+0,17 4,33±0,47 17,17±1,08 1,36±0,24 3,15±0,37 27,4710,76

Р, Р] - рассчитано по отношению к контролю соответственно до и после лечения.

Хенодезоксихолевую кислоту применяют в основном для растворения холестериновых желчных камней или камней, состоящих в основном из холестерина (более 50%) Как ранее отметили, у больных (ЖКБ) желчнокаменной болезнью в составе желчных кислот превалирует холевая кислота.

Как видно из приведенных в табл. 4 результатов газохроматографического анализа желчных кислот у больных желчнокаменной болезнью до и после лечение ХДХК при продолжительном лечении больных холелитиазом хенодезоксихолевой кислотой с целью химического растворения холестериновых или преимущественно холестериновых камней строго по определенным показаниям происходит значительная нормализация желчных кислот.

До лечения наблюдалось достоверное повышение количеств дезоксихолевой и дегидрохолевой кислот на фоне низкой концентрации хенодезоксихолевой кислоты. Как видно уровень холевой кислоты был умеренно увеличен

После лечения хенодезоксихолевой кислотой в желчи больных желчнокаменной болезнью наблюдалось достоверное снижения содержания дезоксихолевой и дегидрохолевой кислот. Концентрация хенодезоксихолевой кислоты значительно превысила контрольные значения.

Таблица 4

Динамика газохроматографического анализа желчных кислот в желчи до и после введения хенодезоксихолевой кислоты у больных желчнокаменной болезни (ЖКБ)

Группы больных Лечение Содержание желчных кислот (М ±т), м моль/л, порции «В»

лхк дхк хдхк Дег.ХК хк Сумма ЖК

ЖКБ. (хирургичес. стадия) 20 больных До Р после 1,31±0,14 0,4310,10 13,01±0,81 0,001 1,2010,14 5,21+0,34 0,001 23,1610,75 4,01+0,28 0,001 1,2610,33 3,90+0,14 1,0510,11 27,44+1,00 27,0410,58

Р, 0,001 0,001 0,001 - 0,001 -

Практически здоровые люди 20 человек 1,26±0,17 4,33+0,47 17,17+1,08 1,36+0,24 3,15+0,37 27,4+0,76

Р, Я, - рассчитано по отношению к контролю соответственно до и после лечения.

ВЫВОДЫ

1. Результаты количественного определения первичных и вторичных желчных кислот в пузырной желчи у здоровых и больных желчно -каменной болезнью показали, что у здоровых преобладав! содержание хенодезоксихолевой, холевой кислот и отмечается лишь небольшое количество дегидрохолевой ксилоты.

2 В отличие от здоровых у больных желчнокаменной болезнью, особенно в ее начальной, физико-химической стадии, наблюдается резкое снижение количества всех исследуемых желчных кислот. Содержание дегидрохолевой кислоты у больных по сравнению со здоровыми увеличивается. В физико-химической стадии литогенеза уровень хенодезоксихолевой кислоты заметно снижен у всех больных, а в хирургической стадии он несколько выше. Содержание холевой кислоты в физико-химической стадии холелитиаза довольно низкие по сравнению с нормой, но I хирургической стадии уровень холевой кислоты в желчном пузыре оказывается даж> несколько выше, чем в контрольной группе.

3. Предложена модифицированная методика определения желчных кислот в желчи и в сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии, при различных патологиях печени и желчевыделительной системы. При газохроматографическом анализе нами установлено, что в сыворотке крови у больных холециститом содержание ХК- 18,56±1,0 мг %; ХДХК - 9,0±0,8 мг %, ДХК -10,52±1,2 мг %, Дег.ХК - 2,9±0,2 мг %, а также в первые былы обнаружены сигналы дегидрохолевой кислоты в сыворотке крови у больных холециститом. Предложенная методика позволила экспериментально установить зависимость содержания желчных кислот от стадии заболеваемости желчнокаменной болезнью.

4. Всесторонне было также изучено содержание желчных кислот в сыворотке крови у больных хроническим гепатитом и циррозом печени методом газожидкостной хроматографии. Установлено, что при хронически активном гепатите содержание желчных кислот составляет: ХК-7,1 ±1,7, ХДХК - 4,8±1,0, ДХК- 7,2±0,7, Дег.ХК -1,6±0,5 и ЛХК -1,3±0,3) мг %) у больных циррозом оно составляет: ХК -9,1±1,8; ХДХК -5,2±0,8; ДХК -6,4±0,9; ЛХК -0,94:0,3 и ДегХК - 1,2+0,2 мг %.

5. Выявлена динамика изменений содержания желчных кислот в желчи у больных желчнокаменной болезнью под влиянием геранола и хенохола. Установлено, что препараты геранол и хенохол стабилизируют химический состав желчи, восстанавливают коллоидное равновесие желчи, способствуют ускорению энтерогепатической циркуляции желчных кислот.

6. Установлено, что геранол, хенохол и бальзам «Сино» снижают содержание холевой и дегидрохолевой кислот в желчи больных желчнокаменной болезнью при этом концентрация хенодезоксихолевой кислоты значительно возрастала в сравнении с контролем.

Основные содержания диссертации изложены в следующих публикациях:

1 Хайдаров К.Х Кадыров A.A. Сайфудинов А.К Влияние бальзама «Сино» на сердечно-сосудистую систему Тезисы докладов республиканской научной конференции, поев. 50-летию Института химии АН РТ.-Душанбе,1996.-С.35-36.

2 Кадыров А.Х Хайдаров К.Х. Сайфудинов А К. Состав и свойства высококачественного бальзама «Сино» Докл АН РТ, 1999, т XL, №1-2.-С.48-51.

3 Сайфудинов А К Влияние бальзама «Сино» на желчеобразовательную функцию печени //Труды республиканской конференции молодых ученых ТГНУ.-Душанбе,2001.-С.193-194.

4 Сайфудинов. А.К. Особенности влияния бальзама «Сино» на некоторые функции печени//Материалы научной конференции молодых ученых ТГНУ -Душанбе, -2002 -С 93-95.

5 Сайфудинов А К, Кадыров А.Х., Мансурова Ф.Х., Хайдаров К.Х. Газохроматографическая оценка желчных кислот в желчи здоровых людей и у больных желчнокаменной болезныо//Материалы республиканской конференции «Актуальные проблемы производства лекарственных препаратов на основе местного сырья». -Душанбе, 2003.-С. 152-157.

6 Сайфудинов А. К., Кадыров А. X., Мансурова Ф. X., Олимов 3. М., Хайдаров К.Х. Сравнительная оценка содержания желчных кислот в сыворотке крови у больных хроническим холециститом//Ма!ериалы международной научно-практической конференции// «Актуальные проблемы физиологии человека и животных».-Душанбе, 2003.-С -55-59.

7 Кадыров А X , Сайфудинов А.К , Мансурова Ф.Х. Определение содержания сывороточных желчных кислот у больных гепатитом и циррозом печени. Труды третьей республиканской научной конференции биохимиков РТ «Вклад биохимиков Таджикистана в развитие биологической науки».-Душанбе, 2003. -С.93-95

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Заказ № 63. Тираж 100 экз. издательство "Нодир", ул.Айни, 44

РНБ Русский фонд

2004-4 29246

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сайфудинов, Ахлиддин Киемович

Введение

ОГЛАВЛЕНИЕ

Глава 1. Биохимия желчных кислот (литературный обзор).8

1.1. Химия и энтерогепатическая циркуляция желчных кислот. 12

1.2. Определение содержания желчных кислот в некоторых биологических объектах.16

1.3. Влияние различных факторов на химизм желчи и содержание желчных кислот.18

Глава 2. Объекты и методы следований.27

2.1. Краткая характеристика методов исследований.27

2.2. Исследование физико-химических свойств желчи.

2.3. Изучение показателей липидного обмена.29

2.4. Определение суммарного содержания желчных кислот ихолевой кислоты желчи.30

2.5. Определение индекса литогенности желчи.

2.6. Газохроматографическое исследование желчных кислот.31

Глава 3. Собственные исследования. Исследование содержания желчных кислот у здоровых лиц и у больных с различной патологией печени и желчевыделительной системы.34

3.1. Газохроматографическая оценка желчных кислот в желчи здоровых людей и у больных желчно каменной болезни.34

3.2. Сравнительная оценка содержания желчных кислот в сыворотке крови здоровых лиц и у больных хроническим холециститом.47

3.3. Содержание свободных желчных кислот в сыворотке крови у больных хроническим гепатитом.55

3.4. Уровень желчных кислот в сыворотке крови у больных циррозом печени.56

3.5. Влияние бальзама «Сино», геранола и хенодезоксихолевой кислоты на характер изменения содержания желчных кислот при желчнокаменной болезни.61

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии"

Актуальность проблемы. Своевременная диагностика и целенаправленность лечения желчнокаменной болезни и ее осложнений остаются до настоящего времени актуальной и окончательно не решенной проблемой в гастроэнтерологических исследованиях. Проблема своевременной диагностики и лечения желчнокаменной болезни, ее многочисленных и тяжелых осложнений, опасных для жизни больных, остается окончательно не решенной и продолжает привлекать внимание широкого круга биохимиков, клиницистов и научных исследователей.

Надо отметить, что среди различных заболеваний желчевыводящей системы основное место занимает желчнокаменная болезнь - 55 - 65% (Василеев, 1989).

Поэтому благодаря многочисленным исследованиям интерес к желчнокаменной болезни в последние годы приобрел новый оттенок (Мансуров, 1981; 1982; 1983).

Как известно, проблема лечения желчнокаменной болезни в медицине стала одной из важнейших задач, которая может быть решена путем постоянного контроля за изменением содержания желчных кислот в желчном пузыре и в сыворотке крови наряду с другими компонентами, а также одновременно изменение состава этих компонентов в организме.

Известно, что решающее значение в этиологии желчнокаменных болезней имеет нарушение нормального метаболизма холестерина и его производных в желчные кислоты. С другой стороны, те же самые кислоты и их аналоги, в ряде случаев, могут служить эффективными средствами для лечения желчнокаменной болезни (Мансуров, 1981; Manssurov, 1981).

Все это показывает перспективность развития всесторонних исследований по выявлению существующей связи между химией желчных кислот и других компонентов желчи, включая их трансформацию и методы определения.

Среди широкого круга физиологически активных стероидов важное место занимают желчные кислоты. Особый интерес представляют основные первичные и вторичные желчные кислоты, такие как холевая, хенодезоксихолевая, литохолевая, дезоксихолевая и дегидрохолевая кислоты, которые входят в основной компонент желчи и сыворотки крови.

Значительное распространение заболеваний печени и трудности распознавания их побуждают искать более надежные и достаточно информативные методы диагностики. В связи с этим количественное определение желчных кислот в желчи приобретает важное значение в целях диагностики и оценки эффективности лечения, а также рассмотренные изменения содержания указанных кислот в организме под действием различных литолитических препаратов.

Учитывая все это, разработка достоверных и доступных методов определения содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови здоровых людей и у больных с разными патологиями печени, а также распознавание изменения этих кислот под действием различных препаратов в организме, представляют собой актуальную задачу как в аспекте развития биохимических исследований, так и для практической медицины.

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований явилось систематическое определение содержания желчных кислот в желчи и в сыворотке крови здоровых людей и у больных с разным характером патологии печени, желчевыделительной системы, изучение изменений состава основных желчных кислот под влиянием некоторых литолитических препаратов, использование полученных результатов лечения и профилактики желчнокаменной болезни.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Научная новизна. Модифицирована методика определения содержания желчных кислот в желчи и в сыворотке крови у больных с различным характером заболеваний печени и желчевыделительной системы методом газожидкостной хроматографии, определен состав этих кислот под действием хенодезоксихолевой кислоты, геранола, глицериновых эфиров хенодезоксихолевой кислоты, бальзама "Сино" и других препаратов.

Впервые экспериментально установлена зависимость содержания желчных кислот от стадии заболевания желчнокаменной болезнью. При этом выявлена закономерность, что у здоровых лиц преобладает содержание хенодезоксихолевой кислоты. При физико-химических стадий болезни характерна секреция печенью литогенной желчи (избыток холестерина, уменьшение содержания желчных кислот). При хирургической стадии заболевания имеет место снижение общей суммы желчных кислот (в первую очередь хенодезоксихолевой) при одновременном увеличении содержания холевой и дегидрохолевой кислот.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Сайфудинов, Ахлиддин Киемович

ВЫВОДЫ

1. Результаты количественного определения первичных и вторичных желчных кислот в пузырной желчи у здоровых и больных желчно -каменной болезнью показали, что у здоровых преобладает содержание хенодезоксихолевой, холевой кислот и отмечается лишь небольшое количество дегидрохолевой ксилоты.

2. В отличие от здоровых у больных желчнокаменной болезнью, особенно в ее начальной, физико-химической стадии, наблюдается резкое снижение количества всех исследуемых желчных кислот. Содержание дегидрохолевой кислоты у больных по сравнению со здоровыми увеличивается. В физико-химической стадии литогенеза уровень хенодезоксихолевой кислоты заметно снижен у всех больных, а в хирургической стадии он несколько выше. Содержание холевой кислоты в физико-химической стадии холелитиаза довольно низкие по сравнению с нормой, но в хирургической стадии уровень холевой кислоты в желчном пузыре оказывается даже несколько выше, чем в контрольной группе.

3. Предложена модифицированная методика определения желчных кислот в желчи и в сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии, при различных патологиях печени и желчевыделительной системы. При газохроматографическом анализе нами установлено, что в сыворотке крови у больных холециститом содержание ХК- 18,56±1,0 мг %; ХДХК - 9,0±0,8 мг %, ДХК -10,52±1,2 мг %, Дег.ХК - 2,9+0,2 мг %, а также в первые было обнаружены сигналы дегидрохолевой кислоты в сыворотке крови у больных холециститом. Предложенная методика позволила экспериментально установить зависимость содержания желчных кислот от стадии заболеваемости желчнокаменной болезнью.

4. Всесторонне было также изучено содержание желчных кислот в сыворотке крови у больных хроническим гепатитом и циррозом печени методом газожидкостной хроматографии. Установлено, что при хронически активном гепатите содержание желчных кислот составляет: ХК-7,1 ±1,7, ХДХК - 4,8+1,0, ДХК- 7,2±0,7, Дег.ХК -1,6±0,5 и ЛХК -1,3±0,3) мг %) у больных циррозом оно составляет: ХК -9,1±1,8; ХДХК -5,2±0,8; ДХК -6,4±0,9; ЛХК -0,9±0,3 и ДегХК - 1,2±0,2 мг %.

6. Установлено, что геранол, хенохол и бальзам «Сино» снижают содержание холевой и дегидрохолевой кислот, в желчи больных желчнокаменной болезнью при этом концентрация хенодезоксихолевой кислоты значительно возрастала в сравнении с контролем.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема современной диагностики и лечения желчно - каменной болезни, ее многочисленных тяжелых осложнений, опасных для жизни больных, остаётся окончательно не решённой и продолжает привлекать внимание широкого круга научных исследователей (Кадыров и др., 2000).

Помимо всего этого надо отметить, что значительное распространение заболеваний печени и трудность распознавания их побудил в нас стремление искать более надежные и достаточно информативные методы диагностики.

В последние двадцать лет, большое внимание уделяется изучению метаболизма желчных кислот. Известно, что решающее значение в этиологии желчнокаменных болезней имеет нарушение нормального метаболизма холестерина и его производных в желчные кислоты. Первичные желчные кислоты (холевая и хенодезоксихолевая) синтезируются исключительно в печени, благодаря чему данные об их количественном и качественном составе могут быть использованы для суждения о функциональном состоянии гепатоцитов. Более точное исследование содержания кислот в биологических объектах, в частности, в желчи и сыворотке крови, стало возможным благодаря применению метода газожидкостной хроматографии.

В связи с этом нами предложена модифицированная методика определения желчных кислот в желчи и в сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии. Практическая значимость метода заключается в том, что эти данные можно использовать для дифференциации различной патологии печени и желчевыделительной системы.

Надо отметить, что в последние годы проблема химического растворения желчных камней привлекает к себе все большее внимание.

Поэтому количественное определение желчных кислот в желчи и в сыворотке крови приобретает важное значение для диагностики и оценки эффективности лечения.

В результате проведения многочисленных исследований желчи и сыворотке крови нам удалось улучшить метод экстрагирования желчных кислот и отделения их от жирных кислот, а также определения желчных кислот на хроматографе модели «Хром -5» с пламенно-ионизационным детектором.

Исследование желчных кислот в биологических объектах, в частности в сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии, трудно из-за отсутствия вещества, применяемого в качестве внутреннего стандарта. Благодаря нашим исследованиям в области химии желчных кислот и их синтеза на их основе, нам удалось синтезировать За, 7а- дигидрокси -12-кетохолевую кислоту при гидролизе соответствующего За, 7а- диацето -12-кетометилхолата с едким калием в растворе диоксана (Сайфудинов и др., 2003, Кадыров, 1990).

В дальнейшем для анализов желчных кислот методом газожидкостной хроматографии мы использовали синтезированную нами За, 7а-дигидрокси-12- кетохолевую кислоту в качестве внутреннего стандарта.

С целью получения более существенных результатов и установления нормы в качестве объекта исследования использовали пузырную желчь 15-здоровых людей, полученную при дуоденальном зондировании.

Таким образом, методом газожидкостной хроматографии нами было установлено, что в желчи 15- здоровых людей содержание литохолевой, дезоксихолевой, хенодезоксихолевой, холевой и дегидрохолевой кислот в среднем составляет 0,50, 1,25, 3,80, 2,26, 0,22 мг/мл.

Далее с целью установления нормы в качестве объекта исследования использовали сыворотки крови 15 практически здоровых людей.

Было определено содержание отдельных желчных кислот первичных (холевая и хенодезоксихолевая) и вторичных (дезоксихолевая и литохолевая). Вычислена их общая сумма, а также показатель соотношения желчных кислот.

Общая сумма желчных кислот вычислялась по формуле (1) и составила ХК-0,68; ДХК-0,37; ХДХК-0,64 мг%. Общая сумма желчных кислот составляла в среднем 1,69±0,27 мг%.

Интересные результаты выявлены при анализе хроматографических данных, которые получены при исследовании пузырной желчи у больных находящихся на физико-химической стадии. В данном случае соотношение этих кислот составляет ЛХК-0,24: ДХК-0,18: ХДХК-0,35: ХК-0,36: Дег.ХК-0,65 мг/мл.

Газохроматографический анализ результатов, полученных при исследовании состава желчных кислот в желчи у больных желчно - каменной болезнью на хирургической стадии показывает, что при этом увеличивается содержание холевой и дегидрохолевой кислот по сравнению с контрольной группой. Здесь нами было установлено, что соотношение JIXK, ДХК, ХДХК, Дег.ХК составляет-0,30: 0,72: 1,13: 3,48: 1,36 мг/мл.

Особенно надо отметить, что нами впервые на хроматограммах метиловых эфиров желчных кислот обнаружен пик дегидрохолевой кислоты, содержание которой: минимально - у здоровых, максимально - у больных желчнокаменной болезнью.

Наблюдаемое в начальной стадии литогенеза резкое снижение содержания желчных кислот в пузырной желчи имеет тенденцию к постепенному возрастанию в конечной, хирургической стадии, что свидетельствует о мобилизации организмом приспособительных механизмов и ослаблении патологического процесса.

Нами впервые экспериментально установлена закономерность зависимости содержания желчных кислот от стадии заболеваемости при желчнокаменной болезни.

Полученные нами газохроматографические данные свидетельствуют о том, что у больных хроническим холециститом с пониженной сократительной способностью желчного пузыря происходит увеличение концентрации желчных кислот.

Общее количество желчных кислот достоверно повышается (Р<0,001) и составляет 41,02 ± 2,0 мг% (холевая -18,5 ±1,0 мг%, хенодезоксихолевая -9,0 ±0,8 мг%, дезоксихолевая - 10,52 ± 1,2 мг%, дегидрохолевая -2,9 ± ±0,2 мг%).

При газохроматографическом анализе нами впервые были обнаружены сигналы дегидрохолевой кислоты в сыворотке крови у больных холециститом. Хотя у контрольных лиц она появилось в виде следов.

С целью получения более достоверных результатов нами была исследована сыворотка крови 21 больного хроническим гепатитом, и было рассмотрено поведение желчных кислот в этом случае.

Было определено, что в группе больных хроническим гепатитом суммарная концентрация сывороточных желчных кислот достоверно повышалась. При этом- установили, что суммарная концентрация желчных кислот составляла - 20,7 ±2,8 (холевая -7,1 ±1,7; хенодезоксихолевая -4,8 ±1,0; дезоксихолевая -7,2 ±0,7, дегидрохолевая кислота 1,6 ±0,5 и литохолевая кислота 1,3 ±0,3).

Для сравнения и получения более достоверного результата нами была предпринята попытка исследовать содержание желчных кислот в сыворотке крови и у больных с диагнозом циррозом печени.

Полученные данные подтвердили, что у всех больных циррозом печени содержание желчных кислот в сыворотке крови достоверно повышалось, составляло при этом 21,7±3,7 (холевая кислота - 9,1 ±1,8; хенодезоксихолевая кислота -5,2±0,8; дезоксихолевая кислота -6,4 ±0,9; литохолевая -0,9±0,3 и дегидрохолевая -1,2±0,2)

Нами установлено, что появление на хроматограммах метиловых эфиров желчных кислот сыворотки у больных циррозом печени пика литохолевой и дегидрохолевой кислот, нарастание концентрации которых говорят о тяжести течения процесса.

Обобщая полученных газохроматографические данные сывороточных желчных кислот у больных хроническим гепатитом, неактивным хроническим гепатитом и циррозом печени, нами выявлены более достоверные закономерности, которые указаны на рисунках 7 и 8.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что у больных хроническим активным гепатитом и циррозом печени наблюдается значительное повышение концентрации сывороточных желчных кислот.

Надо отметить, что в обоих случаях на хроматограммах метиловых эфиров желчных кислот у больных хроническим гепатитом и циррозом печени наблюдается заметное увеличение концентрации холевой и дегидрохолевой кислот.

Как мы уже отметили, было бы интересно рассмотреть поведение содержания желчных кислот под влиянием препаратов растительного происхождения - бальзама «Сино», геранола и медикаментозных - хенохола.

Как известно, опыты проведенные на лабораторных животных показали, что бальзам «Сино» вызвал активный желчегонный эффект, проявляющиеся в достоверном повышении объёма секретируемой желчи. Наряду с этим препарат активно вмешивался в химизм желчи.

Это наблюдалось в уменьшении концентрации холестерина и билирубина с одновременным повышением содержания суммарных желчных кислот и фосфолипидов.

Бальзам «Сино» вызвал заметное повышение холатохолестеринового коэффициента состава желчи. Если учесть, что растворимость холестерина прямо пропорциональна концентрации желчных кислот и фосфолипидов, то активное вмешательство бальзама «Сино» в химизм желчи можно считать весьма ценным эффектом при тех заболеваниях печени и желчевыделительной системы, в результате которых наблюдается повышение степени литогенности желчи.

Не менее важное значение в терапии больных желчнокаменной болезнью имеет препарат геранол. Геранол обладает выраженным спазмолитическим действием, холеретическим и холекинетическим эффектом.

Геранол, по-видимому, индуцирует гидроксилирование холестеринового кольца и устраняет дефицит желчные камни путем биосинтеза из избыточного количества холестерина.

Эксперименты показывали, что под влиянием геранола снизились уровни общего билирубина, общего холестерина, возросло содержание суммарных желчных кислот, фосфолипидов. Вырос холатохолестериновый коэффициент. На основе газохроматографических данные видно, увеличение количество хенодезоксихолевой кислоты с 5,85±0,34 ммоль/л до 20. 18+11 ммоль/л в сравнении с величинами в желчи практически здоровых лиц, которые равны 17,17±1,08 ммоль/л при одновременном снижении содержания дезоксихолевой, дегидрохолевой и холевой кислот до значений ниже контрольных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сайфудинов, Ахлиддин Киемович, Душанбе

1. Березов Т.Т. Биологическая химия. -М.: Изд-во УДН,1970.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1982.-752с.

3. Васильев Р.Х. Бескровные методы удаления желчных камней. Изд-во «Высшая школа», М., 1989 .-С.5 -6.

4. Вяхирев Д. А., Шушунова А.Ф. Руководство по газовой хроматографии. М., 1975. С.38 -41.

5. Галкин В.А. Хронический некалькулезный холецистит// В кн. Успехи гепатологии. Рига, 1975. Вып. 5.-С.427 - 435.

6. Галкин В.А. Принципы лечения и профилактики некалькулезного холецистита. Актуальные вопросы патологии печени. Под редакцией Х.Х. Мансурова. Вып. 9. -1985. С. 117 - 121.

7. Галкин В.А. Хронический неколькулезный холецистит. М.: Медицина,1986.-С. 126.

8. Галкин В. А. Принципы диагностики, лечения и профилактики хронического некалькулезного холецистита. Тер. Архив.,1987. - №5.-С.130 -135.

9. Геня Л.П. Гребнев А. Л. Новые возможности в лечении желчнокаменной болезни//В журнале Клиническая Медицина, 1988. № 5-С.30-37.

10. Георгадзе А.К., Карпов А.П., Коратков В.В. Медикаментозное лечение желчнокаменной болезни хенодезоксихолевой и урсодезоксихо-левой кислотой (обзор зарубежной литературы)//В журнале Клиническая Медицина, 1987 .№1.-С.32-37.

11. Гребнев А.Л., Геня Л.П. Отдаленные результаты холелитической терапии у больных желчнокаменной болезнью препаратами хено и урсодезоксихолевых кислот//В журнале клиническая медицина, 1991№ 6,с.63-66.

12. Гребнев А.Л., Голчевская B.C., Геня Л.П. Опыт применения препарата хенофальк у больных желчнокаменной болезнью. -Душанбе, 1981.-С.121-123.

13. Збарский Б.И., Иванов И.И., Мардашев С.Р. Биологическая химия. -М.: Медицина, 1972.

14. Кадыров А. X., Мансуров Х.Х. К сравнительной оценки методом газожидкостной хроматографии состава желчных кислот в пузырной желчи человека и собаки. / в кн. Актуальные вопросы патологии печени. -Душанбе, 1985. Вып. 9.-С. 43-47.

15. Кадыров А.Х., Орзиев З.М. Определение желчных кислот сыворотки крови методом газожидкостной хроматографии//Лабораторное дело. М.: «Медицина», 1986.-С.26 28.

16. Кадыров А.Х., Ташмурадова Г.Б., Гафорва М.А. Определение желчных кислот в желчи методом газожидкостной хроматографии. -Лабораторное дело-1986. №6. -С.343-345.

17. Кадыров А. X. Хайдаров К.Х. Разработка метода получения высококачественного бальзама «Сино» на основе лекарственных растений// Материалы научной конференции, посвященной памяти академика И. У. Нуманова.-Душанбе, 1994. -С.59.

18. Кадыров А.Х. Холиков Д.Х. Некоторые реакции За, 7а, 12а, -тригидроксихолановой кислоты. //Тезисы докладов 3-ей Региональной совещании республик Средней Азии и Казахстана по химическим реактивам. -Ташкент, 1990, т. 1. ч. 11 .-С.266.

19. Кадыров А.Х. Хайдаров К.Х. Гиёсов А.Ш. Синтез и биологическая активность некоторых производных желчных кислот. -Душанбе: Изд-во «Хайём»,, 2000. -198с.

20. Кадыров А.Х., Хайдаров К.Х., Сайфудинов А.Х. Состав и свойства высококачественного бальзама «Сино» Докл. АН РТ, 1999, т XLII, №1-2.-С. 48-51.

21. Кан В.К. Холестаз: новое в патогенезе, диагностике и лечении// Проблемы гастроэнтерологии. -Душанбе: Изд-во «Дониш», 1999, №1,2.-С.10-14.

22. Карякина Е.В., Косягин Д.В. // Лаб. дело.-1982.-10.-С.591-593.

23. Кипишидзе Н.Н. Летаева Д.И. Разделенние желчных кислот методом тонкослойной хроматографии. НВ. Кн, Успехи геиатологии. Рига, 1973, вып. 4. с. 125.

24. Кодирова А.А, Хайдаров К.Х., Кадиров А.Х. Влияние бальзама «Сино» на желчеобразовательную функцию печени у лабораторных животных// В. кн. «Достижения в области химии и химической технологи»-Душанбе, 2002.-С.135-137.

25. Кодирова А.А., Хайдаров К.Х., Кадыров А.Х. Результаты изучения холелитолитического действия бальзама «Сино»//Международная научно-практическая конференция «Актуальные проблемы физиологии человека и животных». -Душанбе, 2003-С.91-94.

26. Колб В.Г. Камышников B.C. Справочник по клинической биохимии. Минск. 1982.-с. 366.

27. Крикштопайтис М.И. Визуалирования характеристика моторных нарушений желчевыводящих путей при помощи ультразвука //Материалы пленума ВНОГ, Смоленск, 1988, с.389-391.

28. Логинов А.с. Медикаментное лечение желчнокаменной болезни. Тер. архив, 1985,№2,с.З-5.

29. Маграчева Е. Я. Разделение липопротеидов сыворотки крови методом дискового электрофореза в полиакриламидном геле.//Вопросы медицинской химии,1973. -Т. 19.-№6.-С.652-655.

30. Мансуров Х.Х. О ведущих механизмах развития и прогрессирования холестеринового холепитиаза//В журнале Клиническая медицина,!931.-№9. С. 17-21.

31. Мансуров Х.Х. Современные представления о механизме образования желчных камней. В кн. Желчно - каменная болезнь. Душанбе, 1981. с. 25-29.

32. Мансуров Х.Х. Основные достижения в изучении патогенеза и лечения холелитиаза. Тер. архив, 1982, 12.-С.27-31.

33. Мансуров Х.Х. Желчно каменная болезнь//В кн. Актуальные вопросы патологии печени. Вып. 9, Душанбе, 1985. -С.7-8.

34. Мансуров Х.Х. Желчнокаменная болезнь. -Душанбе, 1991 -222с.

35. Мансуров Х.Х. Ключевые вопросы патогенеза желчекаменно-обрзования//Проблемы гастроэнтерологии.-Душанбе: Изд-во «Дониш»,1993, №1.-С.З-9.

36. Мансуров Х.Х. Кахоров А. К. О генезе апитогенности желчи у собак.//В кн. желчно-каменная болезнь. -Душанбе, 1981.-С.29-31.

37. Мансуров Х.Х., Мансурова Ф.Х. О химическом растворении холестериновых желчных камней под влиянием хенодезоксихолевой кислоты. В кн. Актуальны вопросы патологии печени. Вып. 9. 1985. Душанбе: «Дониш» с. 84-92.

38. Мансуров Х.Х. Мансурова Ф.Х. Как эффективнее растворять желчные камни. Здравоохранение Таджикистана. 1988. - №1. - с. 26 - 34.

39. Мансуров Х.Х. Мансурова Ф.Х. О химическом растворении холестериновых желчных камней уреодезоксихолевой кислотой. 1988. №2. -с. 84-89.

40. Мансуров Х.Х., Мансурова Ф.Х., Гафорова М.А. Характеристика химизма желчи на разных стадиях развития холестеринового холепитиаза. В кн: Материалы пленума ВНОГ, посвящ. Памяти акд. В.Х. Василенко. -Москва Смоленск. - 1988. - с.502 - 504.

41. Мансуров Х.Х., Мансурова Ф.Х., Кадыров А.Х. Терапия зиксорином больных с поражением гепатобилиарной системы. В кн.актуальные вопросы патологии печени. -Душанбе: Изд-во «Дониш»,1985. Вып.9.с.122-130.

42. Мансуров Х.Х., Мансурова Ф.Х., Кадыров А.Х. Терапия зиксорином, больных с поражением гепатобилиарной системы, \\ Венгерская фармакотерапия. Изд. «Медицина». Будапешт Венгрия, НИ. 0133 - 5413. 3044884. с. 123 - 128.

43. Мансуров Х.Х., Мансурова Ф.Х., Олимова С.О., Султонова У .К., Молчагина Р.П. Опыт использования нормазе в терапии желчнокаменной болезни// Проблемы гастроэнтерологии. -Душанбе: Изд-во «Дониш», 1993, №2.-С.56-64.

44. Мансуров Х.Х. Муратов Ф.Х. Мансурова Ф.Х. Расчёты по определению насыщения желчи холестерином. Методич. рекомендации. -Душанбе- 1985. с. 24.

45. Мансуров Х.Х., Муратов Ф.Х., Тимеркаев B.C. Математические расчёты при определёнии литогенности желчи. Актуальные вопросы патологии печени. 1985. с. 48 - 54.

46. Мансурова Ф.Х. Новые подходы для раннего патогенетического лечения и предупреждения камнеобразования. Автореф. Дисс. . канд. мед. наук. -Душанбе . 1983. с. 10-12.

47. Мансурова Ф.Х. Желчно каменная болезнь в Таджикистане автореф. Дисс. док. мед. наук. -Душанбе, 1997. с. 174- 176.

48. Мараховский Ю.Х. Способ диагностики холецистита. И бюллетень открытия и изобретения. 1985. №40. с. 64.

49. Мардашев С.Р. Биохимические проблемы медицины. -М.: Медицина, 1975.

50. Минушкин О.Н., Бурдина Е.Г. Желчнокаменная болезнь. Елин. медицина, 1990,№ с.35-44.

51. Назарова З.Д. За, 7а, 12а Тригидроксихолевая кислота и синтезы на её основе. Автореф. Дисс. канд. хим. наук. Душанбе, 1999. с. 22- 24.

52. Нуралиев Ю. Н. Азонов Д.А. изд. А Н Тадж. Сер. Дтд. биол. наук, 1989, №4, с. 74 -79.

53. Попова Р. А. Рипатги П.Л., Бехтерева З.А. Коган Т.Б. Определение суммарного содержания желчных кислот и холевой кислоты в желчи. Лаб. дело. 1961. №11. с. 664 - 665.

54. Сайфудинов А.К. Влияние бальзама «Сино» на желчеобразовательную функцию печени. Мат. Республиканский конференции молодых ученых, Душанбе, 2001. с. 193- 194.

55. Сайфудинов А.К. Особенности влияния бальзама «Сино» на некоторые функции печени, Мат. научной конференции молодых ученых ТГНУ, Душанбе, 2002. с. 93 - 95.

56. Скуя Н.А. Тихар Л.Ю. Эпидеомологические исследование желчных путей (о синдроме правого подреберья).-Тер. Архив. 1984.-№1.с.39- 43.

57. Спиричев В.Б., Барашнев Ю.И. Врожденные нарушения обмена витаминов. -М.: Медицина, 1977.

58. Хайдаров К.Х., Кадыров А.А., Сайфудинов А.К. Влияние бальзама «Сино» на сердечно сосудистую систему. Труды республиканской научной конференции посвяш. 50 летаем Института химии АН РТ. Душанбе, 1996.

59. Черкасов М.Ф., Харагезов А.Д. Учебный материал Российской коллекции рефератов РГМУ каф. хир. болезни.-№2, 1996.

60. Adler R.D., Duane W.C. Effects of Low doss of chenodeoxycholic acid feeding on biliary lipid metalbolism/ Gastroenterology, 1975, V.68,m p.326-334.

61. Anderson K.E., Kok E., Javit N.B. Bile acid synthesis in man. Metabolism of 7a hidroxyucholesterol 14c and 26 - hudroxucholesterol - 3H.-I. Clin. Invest., 1972, v. 51. p. 112 - 117.

62. Barnes S., Gallo G. A., Trash D.В., Marris J.S. Diagnostic value of serum bile acid estimation in eiver disease. //1. Clin. Path. 1975, v. 28. p. 506.

63. Bateson M. C. Ross P.F. Murisson J. Bouchier J.A. D. Comparison of fixed dises of chenodeoxycholic acid for gallstone Dissolution. Lancet. 1978. -№8074.-p. 1111-1114.

64. Bergstrom S. Danielsson H. Formation and metabolism of bile acids In: Code CF, Heidel W, eds. Handbook of physiology, Sect, 6 vol V. Washington DC: American physiological Socity, 1968: 2391 2407.

65. Bjorkhem I. Danielsson H. Biosunthesis and metabolism of bile acids in man. In: Progress in liver disease, v. eds. by H. Popper and F. Schaflher. New York, Grune and Stratton, 1976.

66. Blankenstein M/van., Freked M. et. al.-Did. Dis. Sei.,1983. vol.28,-p.137-144.

67. Blomstrand R. Gas liquid chromatography of Human bile acids // Pro. soc. Exp. Biology and med. 1961. v. 107, p. 126.

68. Bonazzi P. Calaresu C, Galeazzi R. Bile acid analysis: A. Rapid and sensitive Gas Liquid Chromatora phic metbool. // Pharmacological Research communications. 1984. v. №6 p. 549 -552.

69. Bouchlor Y.A.D. Nonsurylcal treatment or gallstones: Many contenders, but who will win the crown- Gut 1988, №29, p.137-142.

70. Carey M.C. The enter hepatic circulation. In: arias I, Popper H, Schachter D, et al, eds. The liver: biology and pathobiology. New York: Raven press, 1982; 429-465.

71. Cato J., Kato H., Sarenta V., Nambara T. Separation and determination of bile acids in numan bile by high Peformance liquid chromatography. // Lig chromatics. 1980; 3. p. 991 - 1103.

72. Cohen B.I., Hofmann A.F., Mosback E.H. et al. Differing Effect of Nonursodeoxycholic or ursodeoxycholic acid on hepatic hisnology and bile acid metabolism in the rabbit. Gastroenterology. - 1986. v. 91. -№1. - p. 189 -197.

73. Coune M., Chung A., Dietary cholesterol Influences henodeoxcycholic acid inhibition of Heratic Cholesterol Synthesis Gastroenterology, 1976, V.70, F-163/874.

74. Croen F.K., Ottenhoff R., Noordam C. et al. Cholesterol nucleation promoting activity shifts cholesterol and phospholipids from the, icellar to the vesicular pgase in model bile. Gastroenterol. - 1987. vol. 92.

75. Danzinger R.G., Hofmann A.F. Thistle J.L. et al. effect of Aral chenodeoxycholic acid on bile acid kinetics and biliary lipid composition women with cholelithiasis. J. Clin. Inrest. - 1973. vol. 52. - p. 2809 - 2821.

76. Deschner E.E., Hallak A., Rozen P., Gilat T. Prolonged administration of bile salts for gallstone dissolution and its effects on rectal epithelial cell proliferation. Didest. Dis. Sei. 1987 - vol. 32. - №9. - p. 991 - 996.

77. Dowling R.H. Apersonal view of gallstone //Hepatology, 1989, V.3 editorial, p.9-12.

78. DyfVerman A., Sjovall J. Ion pair extraction of bile acids with Lipidex gel. Anal Biochem 1983; 134: 303 - 308.

79. Einarson K., Nilsell K., Leijd B. et al. Influence of age on secretion of cholecterol and synthesis of bile acids by the liver. N. Engl. J. Med. - 1985. vol. 313.-p. 277-282.

80. Einarson K., Nilsell K., Leijd B. tt al. Influence of age on secretion of

81. Ferraris R., Colombatti G., Elorentini M. T. et. Al. Ibit, p- 129 136.

82. Festi D., Vorselli A.M., Aldo Roda et. al. Hepatology, 1983,vol. 3,-p.707-712.

83. Folch J., Lees M., Stenly G. H. Hreparetion of Gas Chromatography samples in the bile acids H I. Chem. 1967. v. 226, p. 497.

84. Fromm H. Bile acids by 1987: newish physiology, pathopysiology and therapeutic aspects. Urso - Cheno - Report-1987.№33.-p. 126 - 132.

85. Heaton K.W. Dietary fibre and Biliary Lipids in Gallbladder Disease ed by Raven Press, New York. 1985. - p. 213 - 222.

86. Hoffmann A.F., Paumgarner G. Chenogeoxycholic Acid Therapy of Gallstones Progress Report. Schaffer verlag, Stuttgart new-York-1975.p. 23.

87. Hofmann A. F. Chemistru and tnterohepatic Circulation of bile acids.

88. Hofmann A. F. The enter hepatic circulation of bile acids in man. Clin Gastroenterol 1977; 6; 3 24.

89. Iwata T. Vamasaki K. Ensymatic determination and thin layer chromatography of bile acids in blood. J. Biochem (Tokyo) 1964; 56: 424 - 431.

90. Jarret L.N., at .ol. bifraductial Infusion of Mono-Octanoin Experience in 24 Patients Retained Common Duct Stones.-Lancet, 1981, vol.1, №8211, p.68-70.

91. Knipp J., Rubulis A., Flood M.S., Faloon W.W. Therapy of Retained Common Duct Stones by Oral Chenodeoxycholic Acid- Gastroenterology, 1976, v.70, №5,Al 39/987.

92. Kuksis A. Gas ligyid chromatography of bile acids J of the Ame. Chem. soc. 1965. v. 42. p. 276.

93. Kuksis A. Gordon B.A. Gas liguid chromatography of bile acils. HJ Am Chem Soc. 1964. v. 32. p. 360.

94. Kwann K.H. Higuchi W.J. Hofinann A.F. Dissolution Kinetics of cholesterol in simulated bile. //. Influence of simulated bile composition. J. pharm. Sci. - 1987. vol. 67. - №12. - p 1711 - 1714.

95. Kyosuke Tsuda, Voshihiro Sato et. al. // Chem. Pharm. Bull vol. 12. №6, p. 710. 1964.

96. Lack L. Weiner I.M. Intestinal bile soft transport: structure activity relationships and other properties. Am J Physiol 1966; 210: 1142 - 1152.

97. Lamorte W.W. Schoets D.G. et. al. J. Gastoenerology, 1979. v.77. p. 580- 592.

98. Lansford C, Mehta S., Kern F. The Treatment of Retained stones in the common bile duct with sodium cholate jnfuslon Gut., 1974, V.15, p.48-51.

99. Larusso N.F. Szezepanik P.A. Hofinann A.F. et al Effect of deoxycholic acid indestion on bile acid metabolism and biliary lipid secretion in normal subjects. Gastroenterology 1977; 72: 132 140.

100. Makino I. Hashimoto H. Shinozaki K, et al. Sulfated and nonsulfated, ile acigs in urine, serum, bile of patients with hepatobiliary diseases. Gastroenterology 1975; 68: 545-553.

101. Ml. Manssurov H.H. The chemical dissolution of cholesterol gallston and elimination of the litogenic properties of the bile by means of chenodexycholic acid. // cheno Urso - Report. 1981. №9. p. 251 - 258.

102. Manssurov H.H. The chemical dissolution of cholesterol gallstones and elimination of the litogenic properties of the bile by means of chenodeoxycholic acid. //Chino Urso - Report. 1981, №9. p. 251 - 258.

103. Manssurova F.H. Conges in bile chemistry and dissolonged of cholesterol calculi under prolonged therapy with chenodtoxycholic acid // Cheno -Urso Report, 1988, № 9. p. 259 - 268.

104. Martean C., Reynier M. O., Mule A. et al. Action of cholic and

105. Mekhjian H.S. Phillips S.F. Hofinann A.F. Colonic secretion of water and electrolytes induced by bile acids. J. Clin. Inrest.-l971.-vol.50.p.l569-1577.

106. Nakauama P. Cholesterol holding capacity of bile in relation to gallstone formation. // Clin. Chem. Acta. - 1996. - v. 14. p. 171 - 176.

107. Niderhiser P, Roth, Wederster L. Studies on the importence of lecithin for cholesterol solubilisation in bile.// J. Lab clin. Med. 1966. - v- 68 - p. 90 -102.

108. Palmer K.R., Hoffinann A. F. Inraductal mono-octanoin for the direct dissolution of dile duct stones; Experience in 343 patients- Gut.-1986, V.27, №1, p.196-202.

109. Penington С. R., Ross P. E., Bochier. GUT, 1977. vol. 77. - p. 580

110. Roda A, Hofmann A. F., Mysels K. J. The influence of bile salt structure on self association in aqueous solutions. J Biol Chem 1983; 258 : 6362 -6370.

111. Roda A, Roda E, Aldini R. et al. Results with six «kit» radioimmunoassays for primery bile acids in human serum intercompared. Cein Chem 1980; 26: 1677 1682.

112. Ross F E Pennington C.R . Bouchier A D Gas lignid chromatographic assay of serum bile acids. H J analytical biochemistry. 1987. v 80. p. 458 -465.

113. Ruben A.Th. Gerard P.A. Sample reverac phase high pressure liguid chromatographic determination of conjugated bile acids in serum and bile using a norel radial compress sion separation system. H Clinica chemica acta. 1982, v. 119. p. 302-309.

114. She fer S., Cheng F. W., Dayal В et al. A 25 hydroxylation pathway of cholic acid biosynthesis in man and rat.- J. Clin. Invest, 1976. v. 57. p. 897 - 903.

115. Shehaffer E., Small D. Gallstone disease; pathogenesis and Manayment-Cuss.Probl.Surg., 1976,V.19№7 ,p.3-72.

116. Shoenfield L. F. Lachin J.W the NCGS steering Committee, the NCGS Group. A controlled trial of the efficacy and safety of chenodeoxycholic acid for dissolution of gallstones. Ann.Intern. Med. - 1981.- vol. 95.-p. 275 - 282.

117. Stiehl A. Beloit sulfates in homeostasis. Eur J. Clin Invest 1974; 4 : 5963.

118. Street I. M. Trafford DIH, Makin H. L. J. The quantitative e stimation of bile asids and their conjugates in human biological fluids. J Lipid Res 1983; 24 : 491-511.

119. Thistle J.L. Carlson G.L. Hofmann A.F. Babayan V. Medium Chain Glycerides. Rapidly dissolve Cholesterol Gallstones in Vitro. Gastroenterology, 1977, vol. 72, p. 1141.

120. Thistle J.L. Dissolution of gallstones using ursodeoxycholic acid with or without chenodeoxcholic acid or taurine. DC International bile acid meeting abstracts Invied lectures, basel.-1986, p. 80-81.

121. Thistle J.L. Hofmann A.F. Efficacy and Specificity of Chenodeoxycholic Acid Therapy for Dissolving Gallstones. New Engl. J.Med.,-1973, V.289, p.655-659

122. Thistle J.L., Carlson G.L., Hofmann A.F., Babayan V. Medium Chan Glycerides Rapidy Dissolve Cholesterol Gallstones in vitro. Gastroenterology, 1987, V.74, p.ll03(abs).

123. Thistll J.L, Hofmann A.F., Babayan V.K. MCG Rapidly dissolve cholesterol Gallstones// Gastroenterology, 1977 V,72, p. 1141.

124. Tint G.S., Salen G., Colalillo A. at Ursodeoxcholic acid a safe and effective agent for dissolving cholesterol gallstones- Ann. Intern. Mid, 1982, V.97, p.351-358.

125. Tooli J., Jablonski P., Watts J Dissolution of human Gallstones Surg. Res., 1975, v.74,p. 47-53.

126. Turley S.D. Dietschy J M Re evaluation of the 3a - hgdroxysteroid dehydrogenase assay for total bile acids in bile. J. Lipid Res 1978; 19: 924 - 928.

127. VanG.P. Henegouwen В Ruben A . Bradt K.H. Quantitative anaiysis of bile acids in serum and bile , using GLC. // clinica Chimica acta. 1974. v. 54. p. 249.

128. Vlahcevic I. R. Miller J. R. Farrar J. T. et al. Kinetics and pool sise of primary bile acids in man. Gastroenterology 1971; 61 : 85 90.

129. Wies H.J., Holtermuller K.H., Gllsdorf P. Gallstone dissolution with chenodeoxcholic acid // A Clinical study, Klin. Wschr., 1980, V.58,№ 6, p.313-320.

Информация о работе

Сайфудинов, Ахлиддин Киемович
кандидата биологических наук
Душанбе, 2004
ВАК 03.00.04

Диссертация

Исследование содержания желчных кислот в желчи и сыворотке крови методом газожидкостной хроматографии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы