Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование некоторых биохимических компонентов респираторного ответа нейтрофилов в норме и патологии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Глоба, Александр Георгиевич

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. РЕСПИРАТОРНЫЙ ВЗРЫВ И СВОЙСТВА NApPH-оксидазы.

§ I.I. Индукция респираторного взрыва

§ 1.2. Кислородные продукты нейтрофилов.

§ 1.3. Свойства NADPH-оксидазы.

§ 1.3.1. Флавопротеин (ЕР).

§ 1.3.2. Цитохром £

§ 1.3.3. Хиноны

§ 1.4. Функциональные уровни оксидазы.

ГЛАВА П. ФОРМИРОВАННЫЕ ПЕПТИДЫ И РЕКОГНОСЦИРОВОЧНЫЕ

РЕАКЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ.

§ 2.1. Формованные пептиды.

§ 2.2. Свойства фюрмиллпептидных рецепторов

§2.3. Рекогносцировочные реакции нейтрофилов.

ГЛАВА Ш. РЕАКЦИИ ТРАНСДУШЩ И АКТИВАЦИИ NADPH-оксидазы

§ 3.1» Основные этапы активации NADPH-оксидазы.

§ 3.2. Трансдукцш.

§ 3.2.1. Ионно-транспортные события

§ 3.2.2. Оборот фосфоинозитидов

§ 3.2.3. Изменения уровня [Са^+](

§ 3.2.4. Протеинкиназа С (ПКС).

§ 3.2.5. СТР-связывающие регуляторные белки

§ 3.3. Терминальные реакции активации NADPH-оксидазы

ГЛАВА ГУ, ОБРАЗОВАНИЕ ПЛАЗМАМЕМЕРАННОП) СИШАЛВНОГО АТР И ЕГО ВОЗМОЖНАЯ РОЛЬ В РАЗВИТИИ РЕСПИРАТОРНОГО

ОТВЕТА НЕЙТРОФИЛОВ

§ 4.1. Синтез ATP на плазматической мембране.

§ 4.2. Возможная роль ПС-АТР в активации нейтрофилов

41GTb П. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛВДОВАШЙ.

ГЛАВА У. МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА.

§ 5.1. Модели патологии

§ 5.2. Выделение клеток

§ 5.3. Получение обогащенных плазматическими мембранами частиц (01Ш) из нейтрофилов и макрофагов.

§ 5.4. Исследование биосинтеза плазмамембранного сигнального АТР (ПС-АТР) препаратами ОПМЧ.

§ 5.4.1. Инкубация и остановка реакции

§ 5.4.2. Изоляция и идентификация ПС-АТР.

§ 5.5. Исследование включения [32Р] -ортофосфата в мембранные белки перитонеальных нейтрофилов морской свинки

§ 5.6. Измерение продукции супероксдда

§ 5.7. Исследование связывания ШЪР с рецепторами нейтрофилов

§ 5.8. Измерение флюоресценции триптофана в безбелковых фракциях сыворотки крови и гомогенатов тканей

§ 5.9. Использованные реактивы.

ГЛАВА 71. ЭНЗИЖТШЕСМЯ ПРОДУКЦИЯ СУПЕРОКСИДА НЕЁГРОЖА

В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ

§ 6.1. Продукция супероксида нейтрофилами крыс и морских свинок при экспериментальной генерализованной инфекции.

§ 6.2. Продукция супероксида нейтрофилами обожженных крыс; влияние даларгина в системе "in vitio ".

§ 6.3. Влияние даларгина "'п V,Y0 " на продукцию супероксида нейтрофилами обожженных и инфицированных крыс.

§6.4. Продукция супероксвда нейтрофилами человека при ожоговой болезни.

ГЛАВА УЛ. СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛЬБЫХ РЕЦЕПТОРОВ К ШИР

В НОРМЕ И ДАТОЛОШИ.

§ 7.1. Состояние нейтрофильных рецепторов к формилпептвду у крыс, .инфицированных Ps, аег. ^ л л л

§ 7.2. Влияние даларгина на связывание IMIP с рецепторами нейтрофилов интактных, инфицированных и обожженных крыс.

§ 7.3. Состояние нейгрофильных рецепторов к ГМ1Р у ожоговых больных.

ГЛАВА УШ. СИНТЕЗ 1ШАВМАММЕРАННОГО СИШАЛЪНОГО АТР КАК РЕАКЦИЯ ТРАНСДУКЦИИ В АКТИВАЦИИ НЕЙТРОФШЕОЕВ

ПОД ДЕЙСТВИЕМ Ш1Р

§ 8.1. Зависимость биосинтеза плазмамембранного сигнального АТР препаратами ОЛШ нейтрофилов морской свинки от концентрации ШХР в среде и от времени инкубации

§ 8.2. Влияние TSBA на синтез плазмамембранного сигнального АТР перитонеальными нейтрофилами морской свинки, активированными IMIP.

§ 8.3. Влияние ингибиторов дыхания митохондрий на синтез плазмамембранного сигнального АТР перитонеальными нейтрофилами морской свинки

- 5

§ 8.4. Синтез плазмамембранного сигнального АТР препаратами 01Ш, выделенными из перитонеальных макрофагов морской свинки

§ 8.5. Связь АТР-образующей активности 01Ш нейтрофилов инфицированных крыс с продукцией супероксида

§ 8.6, Синтез плазмамембранного сигнального АТР нейтро-филами периферической крови человека в норме и при хирургической инфекции.

ГЛАВА II. ОБСЩЦЕШЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование некоторых биохимических компонентов респираторного ответа нейтрофилов в норме и патологии"

В последние 20 лет многочисленные исследования до некоторой степени прояснили механизм, посредством которого нейтрофилы участвуют в "обороне" организма и развитии, защитных воспалительных реакции. Эти клетки снабжены весьма разнообразными "устройствами", расположенными на наружной клеточной поверхности, в плазматической мембране и в цитозоле и позволяющими распознавать инородные объекты и отвечать на ряд сигналов, активирующих различные функции, такие, как. хемотаксис, эндоцитоз (пиноцитоз, фагоцитоз), дыхание с продукцией свободных радикалов 0g и HgOg, секреция энзимов и факторов, находящихся во внутриклеточных органеллах. Благодаря совокупности этих функциональных возможностей нейтрофилы накапливаются в воспаленных участках, поглощают и убивают инфекционные агенты и опухолевые клетки, разрушают поврежденные ткани и антигены, продуцируют сигналы для развития воспаления и выполняют ряд других функций.

Респираторный взрыв, сопровождаемый продукцией кислородных радикалов, является наиболее выраженным ответом нейтрофилов на действие различных стимулов. Эти стимулы активируют NADPH-окси-дазу - сложный ферментный комплекс, расположенный в Щ нейтрофилов (Z attL cuid Rossi, 196$ ). Действие определенной группы стимулов, к которой относятся хемоаттрактантные пептиды, опосредуется связыванием со специфическими рецепторами на поверхности нейтрофилов { К о о е£ аЛ., 4eS2- ). Вслед за связыванием стимула при участии GTP-связьюающих белков активируется каскад реакций трансакции лиганд-рецепторного сигнала. Эти реакции

О I оборот фосфоинозитидов, повышение внутриклеточного Са , выход ПКС из цитозоля и другие) изучены не полностью из-за их многообразин и специфичности проявления при действии определенной группы стимулов (Rossi, 1 ). Конечные реакции, ответственные за переход респираторной системы в активное состояние неизвестны, но предполагается, что терминальная регуляция активности №А|>ТН-оксидазы осуществляется ее фосфорилированием с Rossi, me ).

Фосфорилирование является компонентом фазы трансдукции, необходимым, например, для рециклинга фосфоинозитидов (Соск-zoft et at-, 1985 ), для диссоциации о г-ИМ и возврата в цито-золь ПКС ( // tt ccL.t 19S5 ), для активации фосфолипазы С ( Wl'shjZU КсЦ I 98 Н ). В настоящее время общепризнано, что в передаче сигнала от лиганд-рецепторного комплекса к эффектор-ным системам клетки существует АТР-зависимый этап. Несколько лет назад было обнаружено, что в процессе передачи гормонального сигнала от полипептидных факторов роста, клеточной дифферен-цировки и пролиферации на плазматических мембранах клеток-мишеней синтезируется АТР (Карелин, 1982-89). Этот АТР, выполняющий одновременно энергетическую и регуляторную функции в процессе преобразования и усиления гормонального сигнала, получил название "плазмамембранныи сигнальный АТР" (ПС-АТР). Он синтезируется на ПМ после связывания стимула с рецепторами из неорганического фосфата и ДВР путем аэробного фосфорилирования с использованием собственной редокс-цегш Ш и энергию ионного (скорее всего, натриевого) градиента (Карелин и др., 1982-89). Об этой, качественно новой реакции трансдукции в литературе ранее не сообщалось. Эволюционное сходство механизмов роста, пролиферации и хемотаксиса ( SinjeY. et а£.} 198 6 ) и идентичность ионно-транспортных событий при активации эукариотических клеток различными стимулами позволили предположить, что синтез ПС-АТР происходит и в нейтрофилах при их активации, в частности, при возникновении респираторного ответа.

Респираторный ответ нейтрофилов зависит от функционального состояния, в котором находится WARPH-оксидаза (покой, примиро-вание или активация). При различных видах патологии респираторный ответ модулируется большим количеством факторов, которые экспрессируют или ингибируют рекогносцировочные и трансдукцион-ные реакции или повреждают отдельные компоненты активации нейтрофилов (Ross i , 1986). В литературе имеются сведения о снижении миграционной и фагоцитарной функций нейтрофилов у больных с раневой инфекцией (Кузин и др., 1981), о повышении каталитической активности А/ДОРН-оксидазы при ожогах и стрессах (Heck ei «х1?м 1979 ), об угнетении респираторного ответа у больных с хроническим грануломатозом ( BaEioz et ai.,1973 ) и с остеомиелитом (Герасимов и др., 1986), о снижении количества рецепторов к M1LP в нейтрофилах больных с ювенильным парадонтитом ( Van D^ke, 1985*). Однако в целом состояние респираторной системы нейтрофилов в патологии изучено слабо, а при сепсисе и на различных стадиях ожоговой болезни респираторный ответ нейтрофилов не исследовался. В литературе также отсутствуют какие-либо сведения о влиянии на респираторный ответ нейтрофилов синтетического опиоидного пептида даларгина, который в последнее время находит все более широкое применение в качестве иммунокорректо-ра.

Цель настоящей работы заключалась в изучении респираторного ответа нейтрофилов в норме и патологии и возможности участия плазмамембранного сигнального АТР в его возникновении.

Исследуемыми видами патологии были ожоговая болезнь и раневая инфекция в клинике, экспериментальная септикопиемия и ожоговая болезнь на крысах, экспериментальный локальный гнойно-некротический процесс на морских свинках. Объектом исследования были нейтрофилы человека и вышеуказанных животных, выделенные из периферической крови. В качестве активатора нейтрофилов использовался N -формил-L -метионил-L -лейцил-L -фенилаланин (F MLP). Основные задачи исследования перечислены ниже.

1. Оценка респираторного ответа по продукции супероксида в норме и при вышеуказанных видах клинической и экспериментальной патологии.

2. Исследование влияния терапевтических доз даларгина на респираторный взрыв в нейтрофилах интактных, обожженных и инфицированных крыс.

3. Анализ взаимодействия FMLP с рецепторами нейтрофилов обожженных и инфицированных крыс и исследование влияния даларгина на это взаимодействие.

4. Изучение АТР-образующей активности ОПМЧ нейтрофилов интактных и инфицированных крыс и установление корреляции с респираторным ответом нейтрофилов из тех же объектов.

5. Выяснение условий биосинтеза ПС-АТР (времени инкубации, концентрации FMLP в среде, влияния ингибиторов протеинкиназ и дыхания митохондрий) в препаратах ОПМЧ перитонеальных нейтрофилов морской свинки.

В представленной работе впервые проведено исследование респираторного ответа нейтрофилов на FMLP при ожоговой, болезни в эксперименте и клинике и при экспериментальной септикопиемии. Установлено, что на ранних сроках воздействия стрессовых и патогенных факторов респираторный ответ нейтрофилов на FMLP усиливается, по-видимому, за счет перехода NJ АДРН-оксидазы в состояние примирования.

Стимулирующий эффект FMLP (А" СО) предложен в качестве диагностического теста на снижение резистентности организма к инфекции и угрозу сепсиса, так как установлено, что в этих случаях показатель А СО резко снижается.

Методом скетчердовского анализа впервые исследовано состояние рецепторов к FMLP в нейтрофилах интактных, обожженных и инфицированных крыс и некоторых обожженных больных. Установлено, что снижение числа рецепторов к FMLP в нейтрофилах при этих видах патологии не коррелирует с активностью респираторного ответа. Показано, что лечение обожженных и инфицированных крыс далар-гином приводит jc уменьшению сродства рецепторов к FMLP, нормализует исходно повышенный респираторный ответ нейтрофилов на FMLP и уменьшает летальность подопытных, животных.

Обнаружена ранее не описанная реакция трансакции сигнала к респираторному ответу нейтрофилов - синтез ПС-АТР. Установлено, что ПС-АТР образуется в ответ на связывание FMLP со своими специфическими рецепторами из неорганического фосфата и ADP в условиях аэробного фосфорилирования. Показано, что возникновение респираторного ответа в нейтрофилах под действием FMLP всегда параллельно сопровождается образованием ПС-АТР препаратами ОПМЧ, выделенными из этих нейтрофилов и активированными FMLP и что интенсивность респераторного ответа на FMLP в патологии коррелирует со способностью ОПМЧ нейтрофилов к АТР-образованию.

Методом ингибиторного анализа показано, что ПС-АТР потребляется плазмшембранными протеинкиназами.

Проведенные исследования вносят существенный вклад как в

- 14

Часть I. Обзор литературы.

Введение

Настоящий обзор рассматривает литературные данные о биохимических событиях, приводящих к возникновению респираторного ответа в нейтрофилах, которые являются основным объектом исследования. Фермейшй комплекс, катализирующий образование супероксида, NAD]?H - оксидаза и основные продукты респираторного взрыва рассматриваются в главе I. Глава П посвящена форматированным пептидам, один из которых является инструментом проведенных исследований, а также рассматривает свойства фор-милпептидного лиганд-рецепторного комплекса. Преобразование рецепторного сигнала и завершающий этап развития респираторного ответа - активация МАДРН-оксидазы рассматриваются в Ш главе. 1У глава касается биологической роли плазмамембранного сигнального АТР, возникающего вслед за образованием лиганд-рецепторного комплекса и, возможно, участвующего в возникновении респираторного ответа нейтрофилов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Глоба, Александр Георгиевич

Выводы

I. Респираторный ответ нейтрофилов на действие FM/.P, измеренный по продукции Og, повышается на 60-200% на ранних сроках экспериментальных моделей патологии (ожоги, септикопиемия, локальный гнойно-некротический процесс), а также у группы обожженных больных с обширными глубокими ожогами на стадии реконвалесценции. Это повышение является нормальной реакцией неистощенной иммунной системы на патогенные и стрессовые факторы. Снижение респираторного ответа нейтрофилов на FMJLP наблюдается при достаточно длительном воздействии на организм патогенных факторов и свидетельствует об истощении иммунной системы. При генерализации инфекции у морских свинок с локальным гнойно-некротическим процессом респираторный ответ нейтрофилов на FMLP снизился на 50%.

2. Стимулирующий эффект FMLP, разность между уровнями продукции Og стшлулированными и нестимулированными нейтрофилами (ДСО), может служить диагностическим и прогностическим тестом на падение резистентности организма к инфекции и угрозу сепсиса, так как снижение этого показателя наблюдается перед началом генерализации инфекции. У морских свинок с гнойными ранами в вышеуказанный период Л СО снизился на 36%, а при развитии у них. сепсиса это снижение составило 70%. У обожженных больных ЛСО снижался в среднем на 62% при угрозе сепсиса и на 73% при его возникновении.

3. Лечение инфицированных и обожженных крыс даларгином нормализует исходно повышенный респираторный ответ нейтрофилов на

FMLP и одновременно снижает летальность животных на 30-55%.

4. Воздействие стрессовых и патогенных факторов на организм приводит к уменьшению количества рецепторов к FMLP, а в некоторых случаях (инфицирование крыс Staph, ешь., ожоги) - к экспрессии высокоаффинных центров (Kd 4,3 - 13,3 нМ), доля которых составляет 13-40%. При исследованных моделях патологии количество нейтрофильных рецепторов к FMLP снижалось на 60-80% и это снижение не коррелировало с интенсивностью респираторного ответа нейтрофилов на FMLP.

5. Даларгинж vivo и -/'и v'dzo в концентрации М уменьшает аффинность рецепторов к FMLP в нейтрофилах инфицированных и обожженных крыс, одновременно снижая интенсивность респираторного ответа нейтрофилов на FMLP. Число рецепторов при этом не изменяется. Этот эффект даларгина проявляется только в патологии и не выражен в норме.

6. Синтез плазмамембранного сигнального АТР в ОПМЧ нейтрофилов всегда опосредован оккупацией FMLP своих специфических рецепторов, ПС-АТР образуется при "фагоцитарных" и в меньшей степени при "хемотаксических" концентрациях FMLP в нейтрофилах и в макрофагах, которые также имеют рецепторы к FMLP. В отсутствии стимула прирост ПС-АТР в препаратах ОПМЧ нейтрофилов и макрофагов не наблюдается.

7. Респираторный ответ нейтрофилов связан с синтезом ПС-АТР. Его возникновение в нейтрофилах под действием FMLP всегда параллельно сопрововдалось образованием ПС-АТР препаратами ОПМЧ, выделенными из этих нейтрофилов и активированными FMLP. Время максимального накопления ПС-АТР (45 сек) практически совпадало со временем развития респираторного ответа в нейтрофилах (32-42 сек). Интенсивность респираторного ответа на FMLP в патологии коррелировала со способностью ОПМЧ нейтрофилов к АТР-образованию при действии этого стимула. Повышение АСО у морских свинок, инфицированных Ps. a€zupin.osq , на 170% сопровождалось увеличением количества АТР, синтезированного препаратами 01ШЧ нейтрофилов в ответ на FMLP на 380%.

8. ПС-АТР потребляется мембранными протеинкиназами. Внесение в инкубационную среду ингибитора протеинкиназ FSB А в концентрации —б

10 М приводило к троекратному накоплению количества АТР в препаратах ОПМЧ нейтрофилов и к двукратному уменьшению включения Я 2 PJ-ортофосфата в белки ПМ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Глоба, Александр Георгиевич, Москва

1. Абрамов М.Г. Гематологический атлас. - 2-е изд., пере-раб. и доп. М.: Медицина,1985.

2. Виноградов В.А., Смагин В.Г., Титов М.И. Синтетические пептиды как лекарственные вещества. // В сб.: Нейропеп-тиды в экспериментальной и клинической практике. // Под ред. чл корр. АМН СССР проф. В.Г.Смагина. М.: 1986. -183 с.

3. Вольский Н.Н., Козлов В.А., Лозовой В.П. Влияние гидрокортизона на продукцию супероксидного радикала фагоцитирующими клетками селезёнки. // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1987. - т. 103. - №6. - С.694 - 696.

4. Герасимов A.M., Гудошникова Л.В., Махсон Н.Е., Уразгиль-диев З.й. Свойство полиморфноядерных лейкоцитов крови продуцировать супероксид при остеомиелите. // Вопр. мед.химии. 1986. - № 5. - С. 103 - 106.

5. Данилина Е.М., Писаржевский С.А., Дудникова Г.Н., Карелин А.А. Роль микробного фактора, некротических масс и инородного тела в развитии гнойного процесса в ранах.// Бюл. экспер. биол. 1983. - № 3. - С. 31 - 35.

6. Карелин А.А. Изоляция, идентификация и количественное определение АТФ, синтезируемого препаратом обогащенных плазматическими мембранами частиц из скелетных мышц крысы в присутствии инсулина. // Вопр. мед. химии. 1981.- № 5. С. 679 - 685.

7. Карелин А.А. Сопряжение инсулин-рецепторного комплексас системой мембранного транспорта через механизм генерации плазматическими мембранами АТФ. // Вестн. АМН СССР.- 1987. № 3. - С. II8-I23.

8. Карелин А.А. Роль генерируемого плазматическими мембранами АТФ-Mg в опосредовании сигнальной передачи от рецептора инсулина и других регуляторов на мембранную кина-зу. // Вестн. АМН СССР. 1986. - № 8. - С. 77 - 9Q.

9. Карелин А.А. Аденозин-5-трифосфат и трансмембранный перенос внеклеточного регуляторного сигнала. // Вестн. АМН СССР. 1987. - №8. - С. 35 - 41.

10. Карелин А.А., Втюрин Б.В. Связь стимулируемого инсулином образования АТФ с действием инсулина на накопление креатина в обогащенных плазматическими мембранами частицах из скелетных мышц крысы. // Вопр. мед. химии. 1982.-14. С. 118 - 123.

11. Карелин А.А., Демвдова B.C., Глоба А.Г., Марчук А.И., Втюрин Б.В. Стимулируемое интерлейкином 2 образование АТФ препаратами обогащенных плазматическими мембранами частиц из Т-клеток. // Вопр. мед. химии. 1989. - № 3. - С. 120 - 124.

12. Кузин М.И. ,Белоцкий С.М., Карлов В.А. Иммунология раневой инфекции. // В кн.: Раны и раневая инфекция. // под ред. академика АМН СССР проф М.И. Кузина, проф.- 155

13. Б.М.Коетючёнок. М: Медицина. - 1981. -С. 219 - 220.

14. ЛюбаревА.Е., КургановБ.И. Принципы пространственно-временной организации клеточного метаболизма. // Успехи современной биологии. 1989. - т. 108. - вып. №1(4). - С. 19 - 35.

15. Прохазка37, ШебестаК., ТомашекВ. Бумажная хроматография. // В кн: Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам: Пер. с англ. // Под ред. О.Микеша. М: Мир, 1982. - С. 70 - 71.

16. ТкачукВ.А. Введение в молекулярную эндокринологию: Учеб. пособие. М., Изд-во Моск. ун-та, 1983.

17. ШимкевичЛЛ., ТепляковВ.Г., ВовкЕ.Д. Способ моделирования сепсиса. Авт. свид. * 1273977, 1984.

18. IranyiP* Deuterium isotope effects on the rates of steroid-glucocorticoid receptor interactions. // Eur. £» Biochem. -1984. W. 138. - P. .89 - 92»

19. BabiorB.M. Oxygen-dependent microbial killing by phagocytes. // N. Engl. J. led. 1978.- V. 298. - P. 659 - 668.- 156

20. Clin. Invest. 1973. - V.52. - P. 741 - 744. 23. BabiorB.M., PetersW*J|* The 02 -producing enzyme human neutrophils. Further properties, // J, Biol. Ghem. «* V* 256* - 1981. P. 2321 - 2323.

21. BadweyJ.il», CSirautteJ.T.» RobinsonJ.M. , BerdeG.B., Karaovs-kyM.J., KarnovskyM.L. Effects of the free fatty aeids on release of superoxyde and on change of shape by human neutrophils.

22. J. Biol* Ghem. 1984. - V. 259. - P. 7870 - 7877.

23. BadweyJ.A., KarnovskyM.J. Production of Superoxide and Hydrogen peroxide by an HADPH-oxidase in Guinea Pig Polymorphonuclear leucocytes. %! J.Biol. Ghem* 1979. - V.254. - P.11530 11537.

24. BadweyJ.A., KarnovskyM.L. Active oxygen species and the functions of Phagocytic Leucocytes. // Annu. Rev. Biochem. -1980. V. 49. P.659 - 726*

25. BeckerE.L. Ghemotactic factors of inflammation. // Trends Pharmacol. 1983. - V.4. - P. ЙГЗ - 225.

26. BeckerE.L. Leucocyte stimulation: Receptor, membrane and metabolic events. // FED.Proc. 1986. - V.45* - P. 2148-2150*

27. BeckerE.L., KermodeP.H., NaccacheP.H., YassinR., MarshM.L., MunozJ.J., ShaafiR.I. Inhibition of neutrophil granule enzyme secretion and chemotaxis by pertussis toxin. // J. Gell Biol. 1985. - V. 100. -P. 1641 - 1646.

28. BellaviteP., BertonG.» DriP.»SoranzoM.R. Enzymatic basis of gthe respiratory burst of guinea pig resident peritoneal ma-tmerophages. // J. Res. V. 29. - P. 47 - 60»

29. BellaviteP., CassatellaM.A., PapiniE.,MegyeriP., RossiF. Presence of cytochrome b-245 in NADPH-oxidase preparations from human neutrophils. // PEBS Lett* 1986. -V, 199. -P. 159 - 163.

30. BellaviteP., Delia BiancaV., SerraM.O., PapiniE., RossiF. NADPH-oxidase in neutrophils forms superoxide anion but does not reduce cytochrome G and dichlorophenolindophenol. // PEBS Lett. 7. 170. - P. 157 - 161.

31. BellaviteP., PapiniE., ZeniL., Delia BiancaV*, RossiF. Composition of partially purified NADPH-oxidase from pig neutrophils. // Free Radicals Res. Oomnmn. 1985. - V» 1. - P. 11 -29.

32. BellaviteP., SerraM.®., DavoliA., BannisterJ.V., RossiF. The NADPH-oxidase of guinea pig polimorphonuelear leucocytes. Properties of the deoxycholate extracted enzyme. // Molec Cell Biochem. — 52. P. 17 25.

33. BerkowS.b., DodsonR.W», KraftA.S. Human neutrophils contain distinct cytosolic and particulate tyrosine kinase activities: possible role in neutrophil activation, // Biophim et biophys. Acta. Biomembranes. 1989. - V. 997. - P. 292 - 301.

34. BerridgeM.J. Inositol triphosphate and diacylglicerol as second messengers. // Biochem. <7. 1984. - V. 220. - P. 345 -360.

35. BerridgeM.J., IrvineR.F. Inositol triphosphate, a novel second messenger in cellular signal transduction. // Nature. 1984.- V. 312. P. 315 - 321.

36. BertonG., Zenil»., GasatellaM.A.» HossiP. Gamma interferon is able to enhanee the oxidative metabolism of human neutrophils. // Biochim Biophys. les. Gommun. 1986. - V.183. - P.1276 -1282.

37. У. 45. P. 249 - 255. ,50. BismaraC., BonoraG.M., TonioloC., BeckerE.L., PreerR.J.

38. Syntetic homoligomethionine chemoattractants: A conformation- 159 -activity study. // Int. J. Peptide Protein Res. 1985* V. 26.- P. 482 492.

39. BorregaardN., HeipleJ.M., SimonsS.R., ClarkR.A. Subcellular localization of the b-cytochrome component of the human neutrophil microbiocidal oxidase: translocation during activation. // J. Cell Biol. 1983. - F. 97. - P. 52 - 61.

40. BorregaardN., SimonsE.R., ClarkR.A. Involvement of cytochrome b-245 in the respiratory burst of human neutrophils. // Infect. Imuran. 1982. - V* 38. - P. 1301 - 1303.

41. BorregaardN., TauberA.I. Subcellular localization of the human neutrophil NADPH-oxidase. // J. Biol. Ohem. -1984. V. 259. - P. 47 - 52.

42. BojrumlU Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood. //Scan. J.Glin. Lab. Invest. 1968. - ^.97 (Suppl.21). - Р» 77 - 89.

43. BradfordP.S., RubinR.P. Characterization of formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine stimulation of inositol triphosphate accumulation in rabbit neutrophils. // Molec. Pharmacol. 1985.1. V. 27. P. ?4 - 78.

44. BretzU., BaggioliniM. Biochemical and morphological characterization of azurophil and specific granules of human neutrophilic polymorphonuclearlleukocytes. //J. Cell Biol. 1974*- T. 63. P. 251 - 269.

45. BrombergY., PickS. Unsaturated fatty acids stimulate NADPHoxidase superoxide production by cell free system derived from macrophages. // Cell Immunol. 1984. - V. 88. - P. 213 - 221.

46. BrorabergY., PickE. Activation of NADPH-dependent superoxide production in а сell-free system by sodium dodecyl sulfate. // J. Biol. Chem. 11985. - 260. - P. Щ9 - 13545*

47. BrombergY., ShaadD., PickE; Activation of the superoxide forming NADPH oxidase in a macrophage-derived сell-free systemby fatty &6idss and detergents. //J. Clin. Invest. 1986. -V. 16. - Abstr. 269.

48. BurkaJ.P. Effect of compound 48/80 and foBmyl-methionyl-leucyl-phenylalanine on isolated guinea pig.airways» // Int. Arch. Allergy Appl. Jjmranol. Т984* - V.73. - P. 309 - 313.

49. CarperD., NishimuraC.» ShinpharaT., DietzcholdB., WistowG., CraftG'. , KadorP., KinoshitaJ.H. Aldose reductase oftd p-ery»- • tallin belong to the same protein superfamily ss aldehyde; reductase. // FEBS Lett. T987. - V. 220 (1). -P. 209 - 213.

50. CasatellaM., Delia BiancaY., BertonG•, RossiP. Activation produce toxic oxigen molecules is accompanied by decreased Km of the; superoxide-generating NADPH oxidase. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985» - V. 132. -P. 908 - 914.

51. ChenowethD.E., LaneT.A., RoweJ.G., HughT.E. Quantitative comparisons of neutrophul chemotaxis in four animal species. // Clin, Immunol. Immunopathol. 1980. - V. 15» - P. 525 - 535.

52. ClarkR.A., LeidalK.J., IngrahamL.M., NauseefW.M. NADPH oxidaseactivation in human neutrophils subcellular fractions role of2+a cytosol factor, arachidonic acid, Mg J ATP and GTP. // Eur. J. Clin. Invest. 1987. - 7.17. - Pt. 2. - P. 60#

53. ClarkR.A., LeidalK.G.» PearsonD.W., NauseefW.M. NADPH oxidase of human neutrophils. Subcellular localization and superoxide-generating system. // Clin. Res. 1986. - V. 34. - Abstr.772A.

54. CrawfordD.R.f ShhneiderD.L* Identification of ubiquinone-50 in human neutrophils and its role in microbicidal events. // J. Biol Chem. 1982. - V. 257. - P. 6662 - 6668.

55. CrosaA.R., JonesO.T.S. The effect of the inhibitor diphenylene iodonium on the superoxlde-generating system of neutrophils. Specific labelling of a component polypeptide of the oxidase. // Biochem. J. -1986. V. 237. - P. 111 - 116.

56. Crossl.R., JonesO.T.C., GarciaR., SegalA#W. The assotiation of PAD with the cytochrome b-245 of human neutrophils. // Biochem. J. 1982. - ¥.208. - P. 759 - 763.

57. CrossA.R., Parkinson J.F., JonesG.T.G. Absorbtion spectra of 0.4 samples Wea recorded in a rapid-scanny spectrophotometer. // Biochem.J. 1984. - V* 223. - P. 337 - 344.

58. DewaldB., BaggioliniM. Activation of NADPH oxidase in human neutrophils. Synergism between FMLP and the neutrophil products PAF and LTB4. // Biochem. Biophys. Res. Сошли». 1985» - V. 1280). - P# 297 - 3Q4.

59. DewaldB., PajpaeT^G.» BaggioliniM. Activation of NADPH oxidase of human neutrophils. Potentiation of chemotactic peptide bya diaeylglycerol. // Biochim. Biophys. Res. Gommun. 1984. — T. 125. - P. 367 - 373*

60. DonabedianH., GallinJ.I. Deactivation of human neutrophil che-motaxis by chemoattractants: Effect on receptor for the chemotactic factor f-Met-Leu-Phe. // J. Immunol. 198T. - V. 127.- P. 839 844.

61. DoussiereJ., VignaisP.'VV Purification and properties of an Og-generating oxidase from bovine polimorphonuclear neutrophils* // Biochemistry» 1985. - Ж 24* - P. 7231 - 7239.

62. EnglishD.t Rolloff J.S., LukensJ.N. Regulation of human polymorphonuclear leukocyte superoxide release by cellular responsesto chemotactic peptides. // JV Immunol. 11981. - V» 126» -P* 165 - 171»

63. FreerR.J., DayA#R*„ MuthukumaraswamyN», PinonD», WuA*t, Showell H*,J#t BeckerE.Ii», Formyl peptide chemoattractantss A. model of the receptor in rabbit neutrophils. // Biochemistry. 1982* -V» 21. - Р» 257 - 263»

64. JLcad». Sci» USA» « 1984» Y» at. - P. 1416 - 1420. 101* GerardC., Me^PhailJMJ.* Marfatt», Stimber-GerardN.P», BassD.A»,

65. КооС», LefkowitzR.J., SnydermanR. Guanine nucleotides modulate the binding affinity of the oligopeptide chemoattractant receptor on human polimorphonuclear leukocytes, ft J. Clin. Invest. 1983. - V. 72. - P. 748 - 753.

66. KorchakH.M., RutherfordE», WeissmannG. Stimulus response coupling in the human neutrophils. Differential requirements for receptor occupancy in neutrophil responses to a chemoattractant. // J. Biol*

67. Chem. 1984. - V* 259. -P. 4070 - 4075.

68. Pro©* Natl. Acad* Sci. 1985» - V» 82» - P* 3144 - 3148»153* MelloniB»t -PontremoliS., BiehettlM»* Saeco®», SparatoreB*,

69. HoreckerB.L. The involvement of calpain in the aestivation ofprotein kinase G in neutrophils stimulated by phorbol miristicacid* // J* Biol. Chem* 1986* - V» 261. - P. 4101 - 4105»

70. NiedelJ* Detergent solubilization of the formylpeptide chemo-tactic receptor. // J. Biol. Chem. 1981* - V. 256. - P. 9295 -9299.

71. OthaH., OkajimaF., UiM. Inhibition Ъу islet-activating proteinof a chemotactic peptide-induced early breakdown cjf inositol2+phospholipids and Ca mobilization in guinea pig neutrorhils. // J. Biol. Chem. 1985. - V. 260. - P. 15771 - 15780.

72. PalmbladJ.E.W0.Stress-related modulation of immunity? A review of human studies. // Cancer Detect, and Prev. 1987. - Suppl. 1©1. P. 57 - 64. . L ' ;

73. PapiniE., GrzeskowiakM., BellaviteP., RossiF. Protein kinase С phosphorylates a component of NADPH oxidase of neutrophils. // FEBS Lett. 1985. - V. 190. - P. 204 - 208.

74. PeraberS.O., HeylB.L., KinkadeJ.M., Lambeth jr. D. Cytochrome

75. B-558 from bovine granulocytes. Partial purification from Triton

76. X-114 extracts and properties of the isolated cytochrome. // -498 b

77. J. Biol. Chem. V. 259. - P. 10590 - 10595.

78. PozzanT., LewD.P., WollheimC.B», TsienR.Y. Is cytosolic i6ni-zed calcium; regulating neutrophil activation? // Science. -1983. 221. - P. 1413 - 1415.

79. SawyerD.W., SullivanJ.A*, MandelS.b. Intracellular free calcium localization in neutrophils during phagocytosis. // Science. 1985. - V. 230. - P. 663 - 666»

80. Schiffmaml», ShowellH.J., CorcoranB.A., WardP.A., SmithE.t BeckerE*.!» The isolation and partial characterisation of neutrophil chemotactic factors ftorn E coli, // J. Immunol. 1975» - V. 114. - P. 1831 - 1837.

81. Ann. Rev. Cell. Biol» ~ 1986 V. 2. - P. 337 - 365» 199* SkulachevY#P. Membrane electricity as a convertable energy currently for the cell» // Canad* J. Bio chem» - 1Э80» - V» 58» -P* 161 - 175»

82. TsongT.Y. Talking points: deciphering the language of cells* // Trends in Biochem. Sci. 1989* - Y* 14* - P. 89 - 92.

83. С with membranes is regulated by Ca , phorbol esters and ATP*

84. Список научных работ, опубликованных по материалам диссертации

85. Образование сигнального АТФ плазматическими мембранами полиморфноядерных лейкоцитов, активированных формилметио-ниллейцилфенилаланином (соавт. А.А.Карелин, B.C. Демидова, А.И. Марчук). Вопросы медицинской химии, 1986, 5, с. 93-98.

86. Энзиматическая продукция супероксида полиморфноядер-ными лейкоцитами человека при ожоговой болезни (соавт. А.А.Карелин, А.А. Алексеев, B.C. Демидова, А.И. Марчук). Вопросы медицинской химии, 1988, № 5, с. I07-II0.

87. Повышение уровня флюоресценции триптофана в сыворотке крови при генерализации гнойной инфекции (соавт. М.А. Зайден-берг, С.А. Писаржевскии, Р.П. Терехова, А.А. Карелин). Хирургия, 1989, № 6, с. 51-54.

88. Связь образования мембраносвязанного АТФ с ионнотранспортными событиями на плазматической мембране (соавт. А.А. Карелин, B.C. Демидова). Материалы 19-й конференции ФЕБО, июль, 1989, Н004, Италия.

89. Влияние регуляторных пептидов на функциональную активность полиморфноядерных лейкоцитов крыс (соавт. С.Б. Па-шутин, "ПИ. Самыкина). Тез. докл. Всесоюзного иммунологического съезда, Москва, 1989, с. 306.

90. Образование плазмамембранного сигнального АТФ активированными нейтрофилами и макрофагами: связь с продукцией супероксида (соавт. Н.В. Зайцева, В.Г. Тепляков, А.А. Карелин) Вопросы медицинской химии (в печати).