Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование метилирования ряда генов, вовлеченных в канцерогенез, в различных типах опухолей

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Землякова, Валерия Владимировна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Метилирование ДНК.

1.1.1. Количество и распределение динуклеотидов CpG в геноме.

1.1.2. Профили метилирования.

1.1.3. Ферменты метилирования.

1.1.4. Метилирование генома как динамический процесс.

1.1.5. Влияние метилирования ДНК на структуру хроматина.

1.1.6. Методы анализа метилирования ДНК.

1.2. Молекулярно-генетические механизмы канцерогенеза.

1.2.1. Гены, вовлечённые в канцерогенез.

1.2.2. Гены-супрессоры опухолевого роста.

1.2.3. Гены, регулирующие клеточный цикл.

1.2.4. Метилирование генов, вовлеченных в канцерогенез.

1.2.5. Метилирование ДНК, как характеристика опухолевого процесса.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Клинический материал.

2.2. Забор крови и операционного материала.

2.3. Выделение геномной ДНК.

2.4. Рестрикционный анализ.

2.5. Метил-чувствительная ПЦР (МЧ-ПЦР).

2.6. Обработка ДНК бисульфитом натрия.

2.7. Метил-специфическая ПЦР (МС-ПЦР).

2.8. Электрофорез в ПААГ.

2.9. Ультратонкое окрашивание нитратом серебра.

2.10. Определение нуклеотидной последовательности.

2.11. Программное обеспечение.

2.12 Статистическая обработка данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Метилирование исследуемых генов в нормальных тканях.

3.2. Сравнение метилирования исследуемых генов в различных типах опухолей.

3.3. Аномальное деметилирование гена IGF2 при разных типах опухолей.

3.4. Характеристика гипотетического «метилотипа» при HMPJI, РМЖ, ретинобластоме и OJI.

3.5. Исследование аномального метилирования локуса INK4a/ARF на примере CpG-островков, расположенных в промоторных областях генов р16 и pl4/ARF.

3.6. Исследование ассоциации метилирования промоторных областей изучаемых генов-супрессоров опухолевого роста с клиническими параметрами опухолей (HMPJI, ретинобластомы и OJI).

3.6.1. Ассоциации метилирования с клинико-патологическими характеристиками образцов НМРЛ.

3.6.2. Ассоциации метилирования с клинико-патологическими характеристиками образцов ОЛ.

3.6.3. Ассоциации метилирования с клинико-патологическими характеристиками образцов ретинобластомы.

3.6.4. Ассоциации метилирования с клинико-патологическими характеристиками образцов РМЖ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование метилирования ряда генов, вовлеченных в канцерогенез, в различных типах опухолей"

Идентификация генетических факторов, ассоциированных с канцерогенезом, является одной из наиболее острых проблем современной молекулярной онкологии. На разных этапах канцерогенеза происходят различные варианты инактивации генов, участвующих в регуляции клеточного цикла. Инактивация генов-супрессоров может происходить в результате структурных повреждений, которые представлены делециями или точковыми мутациями, а также в результате функциональных аномалий, которые связывают с гиперметилированием регуляторных областей гена (Costello et al, 2001). Процесс злокачественной трансформации клетки является многоступенчатым, в нем участвует большое количество генов, поэтому исследование молекулярной патологии генов, регулирующих рост и дифференцировку клеток, представляет особый интерес, как для науки, так и для практики. С теоретической стороны, такие исследования способствуют изучению фундаментальных механизмов патогенеза опухолей, пониманию законов функционирования генома опухолевой клетки, а с практической стороны - позволяют осуществлять поиск новых молекулярных маркеров для ранней диагностики, прогноза и мониторинга заболевания.

В норме метилирование ДНК играет важную роль в таких биологических процессах как, регуляция экспрессии тканеспецифических генов, клеточная дифференцировка, геномный импритинг, инактивация X хромосомы, регуляция структуры хроматина, репликация ДНК, латентный период у вирусов, старение. При злокачественной трансформации наблюдается нарушение в равновесии метилирования/деметилирования, что выражается в глобальном деметилировании генома опухолевой клетки и локальном гиперметилировании CpG-островков, локализованных в промоторных областях генов-супрессоров. В результате деметилирования генома происходит активация онкогенов и ростовых факторов, что приводит к их гиперэкспрессии, в то время как гены с супрессорными функциями в результате гиперметилирования CpG-островков, расположенных в промоторных районах, подвергаются инактивации. Подобная инактивация генов может происходить на разных стадиях развития опухоли (Costello et al, 2001).

В последнее время, большая роль в возникновении злокачественных новообразований отводится нарушению эпигенетической регуляции активности генов. Доказано, что потеря экспрессии генов-супрессоров опухолевого роста в результате аномального гиперметилирования CpG-островков, расположенных в промоторных областях, является одним из самых ранних событий, происходящих в злокачественной клетке, что позволяет использовать аномальное метилирование этих генов, в качестве раннего маркера злокачественного процесса (Belinsky et al., 2000). Гиперметилирование генов, непосредственно участвующих в регуляции клеточного цикла, таких как RBI, pl6/CDKN2a, pl5/CDKN2b, pl4/ARF наблюдается при различных типах опухолей (Esteller et al., 2001). Но существуют гены, чья инактивация характерна для конкретного типа опухоли, что делает возможным связывать их с возникновением, развитием и характером прогрессии определенной опухоли (CDH1, ER, CALCA).

Исследования в области молекулярной онкологии, направленные на выявление генов, эпигенетические изменения которых могут сопровождать опухолевую трансформацию клеток или являются её причиной, имеют своей конечной целью решение проблемы ранней диагностики и прогнозирования течения онкологического заболевания.

Целью настоящей работы является характеристика аномального метилирования CpG-островков ряда генов, вовлеченных в регуляцию клеточного цикла и канцерогенез в образцах опухолей, имеющих различное тканевое происхождение.

Задачи исследования.

1. Разработать эффективные методики определения метилирования промоторных районов исследуемых генов-супрессоров опухолевого роста на основе метилчувствительной и метилспецифической ПЦР, провести их сравнительный анализ.

2. Охарактеризовать метилирование промоторных районов генов RBI, pl6/CDKN2a, pl5/CDKN2b, pl4/ARF, CDH1, ER, CALCA, RB1CC1, MGMT, HIC1 и N33 при немелкоклеточном раке легкого (HMPJI), раке молочной железы (РМЖ), ретинобластоме и острых лейкозах (OJ1).

3. Определить характер метилирования CG-динуклеотидов CpG-островков, расположенных в промоторных и регуляторных областях генов pN/ARF и pl6/CDKN2a, покуса р 16/ARF.

4. Выявить возможные ассоциации между метилированием CpG-островков конкретных генов, интенсивностью метилирования всей панели из 10 исследуемых генов (RBI, P16/CDKN2a, р 15/CDKN2b, р 14/ARF, CDH1.ER, CALCA, MGMT, HIC1, N33) и клинико-морфологическими характеристиками изучаемых опухолевых образцов.

5. Охарактеризовать частоту потери импринтинга в результате деметилирования промоторной области гена IGF2 в исследуемых типах опухолей.

Научная новизна.

В результате проведенного исследования изучено аномальное метилирование генов, вовлеченных в регуляцию клеточного цикла и канцерогенез: RBI, pl6/CDKN2a, pl5/CDKN2b, pl4/ARF, CDH1, ER, CALCA, RB1CC1, MGMT, HICl, N33 и IGF2 при РМЖ, HMPJI, ретинобластоме и ОЛ. Показано, что в разных типах опухолей характер метилирования исследуемых генов различен. В образцах ОЛ выявлена наименьшая интенсивность метилирования панели исследуемых генов по сравнению с другими изучаемыми типами опухолей (Р<0.05). Показано, что при НМРЛ, РМЖ и ретинобластоме уровень метилирования генов р14, CDH1 и HIC1 достоверно выше, чем при ОЛ (Р<0.05). Гены CALCA и р1б достоверно чаще метилированы при НМРЛ и РМЖ, чем при ОЛ (Р=0.006). В образцах НМРЛ частота метилирования гена N33 статистически достоверно выше, чем в остальных типах опухолей (Р=0.01). Гены, характеризующиеся повышенной частотой метилирования в опухоли определенного типа, дополнили гипотетический «метилотип» для НМРЛ, РМЖ, ретинобластомы и ОЛ, составленный на основе данных литературы. Показано, что в лимфоцитах периферической крови здоровых доноров аномальное метилирование изучаемых генов практически отсутствует.

Исследован характер метилирования генов pl6/CDKN2a и pN/ARF в локусе 9р21. Впервые показано, что CpG-островки, расположенные в промоторных и регуляторных областях этих генов, имеют различный характер метилирования. Используя МЧ-ПЦР, МС-ПЦР и МС-секвенирование, определена большая чувствительность метода МЧ-ПЦР, по сравнению с МС-ПЦР.

Изучены возможные ассоциации между интенсивностью метилирования используемой панели генов и клинико- морфологическими параметрами опухоли при HMPJI, ретинобластоме и OJI. Не обнаружено ассоциации метилирования исследуемых генов с такими клиническими параметрами заболевания, как возраст, пол, количество бластных клеток в периферической крови больных и осложнениями заболевания (рецидив, смерть) при OJ1. Не было выявлено достоверных различий метилирования исследуемых генов в группах больных с односторонней и двухсторонней формами РБ. Не определено достоверных различий метилирования исследуемых генов в морфологически различных типах HMPJ1. Впервые показано, что гены RB1 и р1б достоверно чаще метилированы в опухолях без выраженного метастатического процесса (Р=0.003б и Р=0.011, соответственно) при HMPJ1. Впервые выявлена ассоциация метилирования гена р14 с наличием метастатического процесса (Р=0.02) в том же типе опухоли. Установлено, что интенсивность метилирования панели изучаемых генов, которую отражает ИМ, коррелируют с наличием метастатического процесса (Р=0.021) и размерами опухоли при HMPJI (Р=0.028).

Практическая значимость.

Исследовано 90 образцов острых лейкозов, 54 образцов немелкоклеточного рака легкого, 60 образцов ретинобластомы, 85 образцов рака молочной железы в целях определения метилирования промоторных районов 11 генов.

Разработаны методики мультилокусной метилчувствительной ПЦР для оценки метилирования промоторных областей каждого из исследуемых генов. Проведен сравнительный анализ методов МЧ-ПЦР и МС-ПЦР, и показана большая чувствительносить метода МЧ-ПЦР. Выявлено, что потеря импринтинга гена IGF2 может являться молекулярным маркером опухолевого процесса при HMPJI, РМЖ, ретинобластоме и OJ1.

Результаты, полученные в представленной работе, могут быть использованы для разработки системы молекулярно-генетических маркеров, характеризующих исследуемые типы опухолей.

Апробация работы.

Материалы исследования докладывались на ежегодных конференциях Европейского общества генетиков в 2002-2003 гг., на международных конференциях «Геном человека» в 2001-2002 гг., на конференции ГНТП «Геном человека» в 2001 г., на Всероссийсих научно-практических конференциях по генетике человека и межлабораторных семинарах МГНЦ РАМН. По результатам исследования опубликовано 6 статей и 9 тезисов.

Положения выносимые на защиту.

1. Гены, вовлеченные в канцерогенез, по-разному метилированы в разных типах опухолей (РМЖ, HMPJl, OJI и ретинобластоме).

2. GpC-островки, расположенные в промоторной области и районе перового экзона генов р1б и р14 могут иметь различный характер метилирования.

3. Потеря импринтинга ростового фактора IGF2 в результате деметилирования его промоторной области является молекулярным маркером опухоли при РМЖ, HMPJl, OJI и ретинобластомы.

4. Метилирование генов, вовлеченных в канцерогенез, может быть ассоциировано с некоторыми клинико-морфологическими параметрами опухоли.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Землякова, Валерия Владимировна

выводы

1. Разработаны эффективные методики определения метилирования изучаемых генов-супрессоров, основанные на метилчувствительной и метилспецифической полимеразной цепной реакции. Показано, что метод МЧ-ПЦР более чувствителен, по сравнению с МС-ПЦР. Результаты подтверждены метилспецифическим секвенированием.

2. Выявлено различное метилирование генов RBI, p!6/CDKN2a, p!5/CDKN2b, pl4/ARF, CDHI, ER, CALCA, RB1CC1, MGMT, HIC1 и N33 в разных типах опухолей (рак молочной железы, немелкоклетотчный рак легкого, острый лейкоз и ретинобластома). Наименьшая интенсивность метилирования генов определена при остром лейкозе (Р<0.05) по сравнению с другими типами опухолей.

3. Исследован характер метилирования локуса INK4a/ARF на примере генов pl6/CDKN2a и pl4/ARF . Показано, что при различных типах опухолей не происходит полного метилирования всей 5'-области, содержащей несколько CpG-островков, генов р14 и р16, а, следовательно, и полностью всего локуса INK4a/ARF.

4. Определена связь между интенсивностью метилирования исследуемой панели генов и такими клиническими параметрами опухоли как наличие метастазов и размер опухоли при немелкоклеточном раке легкого. Показано, что гены RB1 и р!б достоверно чаще метилированы в образцах немелкоклеточного рака легкого при отсутствии метастатического процесса (Р=0.0036 и Р=0.011, соответственно), а метилирование гена р14 достоверно чаще выявляется в метастазирующих опухолях (Р=0.02). Показана ассоциация между индексом метилирования и наличием метастазов (Р=0.021), а так же с размерами опухоли при условии отсутствия метастазов (Р=0.028).

5. Показано, что потеря метилирования промоторной области гена IGF2 характерна для исследованных типов опухолей. Частоты гипометилирования промоторной области гена IGF2 составляют при раке молочной железы - 29%, немелкоклеточном раке легкого - 16%, ретинобластоме - 28%, острых лейкозах -18%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Анализ функционирования различных генов в злокачественной опухоли показывает отсутствие экспрессии одних и гиперэкспрессию других. Аномальное метилирование CpG-островков генов-супрессоров в опухоли, на ряду со структурными повреждениями, является одним из наиболее значимых механизмов канцерогенеза. Метилирование промоторной области генов-супрессоров, с последующей их инактивацией, может выступать, и как первое, и как второе событие, приводящее к развитию опухоли по теории Кнадсена. В настоящее время для большого количества генов-супрессоров показано метилирование как одного, так и обоих аллелей в опухоли. В связи с этим, определение профиля метилирования известных и вновь клонированных генов-кандидатов, одной из функций которых может быть регуляция клеточного цикла, в образцах различных опухолей, является необходимым моментом в характеристике гена и ДНК-диагностике при определенном заболевании.

В настоящей работе исследовано аномальное метилирования промоторных районов генов RBI, pl6/CDKN2a, pl5/CDKN2b, pl4/ARF, CDHl, ER, CALCA. RB1CC1, MGMT, HlCl и N33, вовлечен ных в регуляцию клеточного цикла и канцерогенез в образцах опухолей, имеющих различное тканевое происхождение.

Важная роль аномального метилирования промоторных и регуляторных районов генов продемонстрирована на значительном клиническом материале (289 образцов опухолевого материала). Исследовано 90 образцов острых лейкозов, 54 образцов немелкоклеточного рака легкого, 60 образцов ретинобластомы и 85 образцов рака молочной железы.

Для оценки статуса метилирования промоторных областей изучаемых генов-супрессоров в образцах опухолей РМЖ, HMPJT, ретинобластомы и OJI разработан метод мультилокусной метилчувствительной ПЦР.

В результате проведенного исследования было показано, что в разных типах опухолей характер метилирования исследуемых генов различен. Было выявлено, что для OJI характерна наименьшая интенсивность метилирования исследуемой панели генов по сравнению с другими изучаемыми типами опухолей. На основании полученных результатов и данных литературы представлен гипотетический «метилотип» для каждого исследуемого типа опухоли.

В представленной работе исследован характер метилирования генов р14 и р16, расположенных в локусе 9р21. Показано, что промоторные области и первые экзоны этих генов метилируются не зависимо друг от друга, а, следовательно, метилирование всего локуса носит неравномерный характер.

Изучена корреляция между интенсивностью и частотой метилирования используемой панели генов и клинико-патологическими параметрами опухоли при HMPJ1, ретинобластоме и OJ1. Показана корреляция между метастатическим процессом и частотой метилирования генов RB1, р14 и р16 в образцах НМРЛ. Выявлено, что интенсивность метилирования панели изучаемых генов, которую отражает ИМ, коррелирует с наличием метастатического процесса и размерами опухоли при НМРЛ. Показаны достоверные различия в уровне метилирования используемой панели генов для различных типов ОЛ.

Поиск и характеристика молекулярных маркеров ранней диагностики и прогноза развития опухолевого процесса на сегодняшний день являются наиболее актуальными проблемами онкологии. Современные подходы в диагностике онкологических заболеваний предполагают использование полного комплекса молекулярно-биологических методов, которые позволяют определить генетические и эпигенетические повреждения, которые являются причиной злокачественной трансформации клетки, от крупных хромосомных перестроек и точковых мутаций, до метилирования промоторных и регуляторных областей генов-супрессоров.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Землякова, Валерия Владимировна, Москва

1. / Канцерогенез / Под. ред. Заридзе Д.Г. М.: НАУЧНЫЙ МИР, 2000. 86-87.

2. Бабенко О.В., Землякова В.В, Саакян С.В., и др. Функциональная патология генов RB1 и р16 в ретинобластомах.// 2002. Мол. Биол. 36, 777-783.

3. Баранова А.В., Янковский Н.К. Гены-супрессоры опухолевого роста.// 1998.Мол. Биол., т. 32, 206-218.

4. Бровкина А.Ф. Ретинобластома.//2001. В кн. "Наследственные и врожденные заболевания сетчатки и зрительного нерва" под ред. А.М.Шамшиновой. М. Медицина, 360-371.

5. Залетаев Д., Немцова М., Бочков Н. Метилирование ДНК как этиологический фактор канцерогенеза.// 2002. Вестник академии медицинских наук 4,6-11.

6. Залетаев Д.В. ДНК-диагностика в онкологии.// 2000.Мол.биол. 34,671-683.

7. Залетаев Д.В. Эпигенетическая патология при наследственных и онкозаболеваниях.// 2000. Сб. научных трудов РАЕН «Проблемы биомедицины на рубеже XXI века». М., 2000, 303-309.

8. Зборовская И.Б, Татосян А.Г. Молекулярно-генетические маркёры при раке лёгкого: онкогены и гены-супрессоры.// Новое в терапии рака лёгкого, М, 1997, 517.

9. Зборовская И.Б. Молекулярно-биологические исследования онкогенов и генов-супрессоров опухолевого роста в клинической практике.// Канцерогенез. М. 2000, 361-380.

10. Землякова В.В., Жевлова А.И., Стрельников В.В. и др. Аномальное метилирование некоторых генов-супрессоров при спорадическом раке молочной железы.// 2003. Мол. биол. 37, 693-703.

11. Киселева Н.П., Киселев Ф.Л. Эпигенетические изменения и канцерогенез.// Канцерогенез. М. 2000,93-105.

12. Козлова С.И., Демикова Н.С., Семанова Е., Блинникова О.Е., Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование.// 1996. Москва, изд. Практика: 304-305.

13. Копнин Б.П., Опухолевые супрессоры и мутаторные гены.// Канцерогенез. М. 2000, 75-92.

14. Лихтейнштейн А.В., Киселева Н.П. Метилирование ДНК и канцерогенез.// 2001. Биохимия 66, 3,293-317.

15. Мазин А.Л., Ванюшин Б.Ф. Потеря CpG динуклеотидов из ДНК. III. Метилирование и эволюция гистоновых генов.// 1987. Мол. биол, 21, 678-687.

16. Немцова М.В., Землякова В.В., Жевлова А.И. и др. Профиль метилирования генов-супрессоров опухолевого роста при различных формах рака.// 2002.Вестник института молекулярной медицины ММА им. И.М. Сеченова. 2, 65—84.

17. Стрельников В.В., Немцова М.В., Чеснокова Г.Г., и др. Диагностика синдрома Мартина-Белл на основе анализа структурно-функциональных изменений 5'-нетранслируемой области гена FMR1.// 1999.Мол. Биол. 33, 330-336.

18. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Статистика рака молочной железы.// 1998. В кн. «Новое в терапии рака молочной железы» под ред. Переводчиковой Н.И., М., 6-10.

19. Aggerholm A., Guldberg P., Hokland М. Extensive intra- and interindividual heterogeneity of р15™К4В methylation in acute myeloid leukemia.// 1999,Cancer Research, 59,436-441.

20. Ahuja N., Issa J.P. Aging, methylation and cancer. Histol Histopathol.// 200015, 835-842.

21. Ahuja N., Li Q., Baylin S.B., et al. Aging and DNA methylation in colorectal mucosa and cancer.// 1998. Can.Res. 58, 5489-5494.

22. Antequera F., Bird A. CpG islands.// 1993. EXS., 64, 169-185.

23. Archer S.Y., Hodin R.A. Histone acetylation and cancer.// 1999. Curr Opin Genet Dev. 9, 171-174.

24. Baur A.S., Shaw P., Burn N. et al. Frequent methylation silencing of pl5INK4B(MTS2) and Р16™К4А (MTS1) in B-cell and T-cell lymphomas.// 1999. Blood. 94, 1773-1781.

25. Baylin S.B., Esteller M., Rountree M.R. et al. Aberrant pattern of DNA methylation, chromatin and gene expression in cancer.// 2001. Hum. Mol. Genet. 10, 687-692.

26. Baylin S.B., Herman J.G., Graff J.R., et al. Alterations in DNA methylation: a fundamental aspect of neoplasia.// 1998. Adv. Cancer. Res. 72, 141-196.

27. Belinsky S.A, Nikula K.J, Baylin S.B. Icreased cytosine DNA-methyltransferase activity is target-cell-specific and an early event in lung cancer.// 1996, PNAS, 93,4045-4050.

28. Belinsky S.A., Nikula K.J., Palmisano W.A. et al. Aberrant methylation of pi 6 (INK4a) is an early e vent in 1 ung сancer and a potential b iomarker for early d iagnosis.// 1 998. PNAS. USA. 95,11891-11896.

29. Bestor Т.Н. DNA methylation: evolution of a bacterial immune function into a regulator of gene expression and genome structure in higher eukaryotes.// 1990. Philos Trans R Soc Lond В Biol Sci., 30; 326, 179-187.

30. Bestor Т.Н., Vergine G.L. DNA methyltransferases.// 1994. Curr Opin Cell Biol., 6, 380399.

31. Bhattacharya S.K., Ramchandani S., Cervoni N., Szyf M. A mammalian protein with specific demethylase activity for mCpG DNA.// 1999. Nature, 397, 579-583.

32. Bian J., Wang Y., Kim H. et al. Suppression of in vitro tumor growth and induction of suspension cell death by tissue inhibitor of metalloproteinases-3 (TIMP-3).// 1996. Carcinogenesis 17,1805-1811.

33. Bird A. The essentials of DNA methylation.// 1992. Cell 70, 5-8.

34. Bird A., Wolffe A.et al. Methylation-induced repression-belts, braces, and chromatin.// 1999. Cell. 99,451-454.

35. Bisogna M., Calvano J.E., Ho G.H. et al. Molecular analysis of the INK4A and INK4B gene loci in human breast cancer cell lines and primary carcinomas.// 2001. Cancer Genet Cytogenet. 125. 131-138.

36. Bova, G. S., MacGrogan, D., Levy, A., et al. Physical mapping of chromosome 8p22 markers and their homozygous deletion in a metastatic prostate cancer.// 1996. Genomics 35,46-54.

37. Brabender J., Usabel H., Danenberg K.D. et al. APC gene promoter hypermethylation in non-small cell lung cancer is associated with survival.// 2001. Oncogene 20, 3528-3532.

38. Bremner R„ Du D.C., Connolly-Wilson M., Bridge P., Ahmad K., Mostachifi H., Rushlow D. and Gallie В. Deletion of RB exons 24 and 25 causes low-penetrance retinoblastoma.// 1997. Hum. Genet. 61,559-570.

39. Burbee D.C., Forgacs E., Zochbauer-Muller S. et al. Epigenetic inactivation of RASSF1A in lung and breast cancer and malignant phenotipe suppression.// 2001. Natl. Cancer Inst. 93, 691-699.

40. Cairns P.,Polascik Т., Eby Y., Tokino K., et al. Frequency of homozygous deletion at pl6/CDKN2 in primary human tumors.// 1995. Nat.Genet., 210-212.

41. Chan A.O., Kim S.G., Bedeir A. et al. CpG island methylation in carcinoid and pancreatic endocrine tumors.// 2003. Oncogene 13, 924-934.

42. Chano Т., Ikegawa S., Kontani K. Identification of RBI CC1, a novel human gene that can induce RBI in various cells.// 2002. Oncogene 21, 1295-1298.

43. Choy K., Pang С., To K. et al. Impaired expression and promotor hypermethylation of 06-methylguanine- DNA methyltransferase in retinoblastoma tissues.// 2002. Inv. Opthal. & Visual Sci. 43,1344-1349.

44. ChuangL.S., Ian H.I., Koh T.W., Ng H.H., Xu G., Li B.F. Human DNA-(cytosine-5) methyltransferase-PCNA complex as a target for p21WAFl.// 1997. Science, 277, 19962000.

45. Clark S.J., Harrison J., Paul C.L., Frommer M. High sensitivity mapping of methylated cytosines.//1994. Nucleic Acids Res., 11, 22, 2990-2997.

46. Corn P.G., Smith B.D., Ruckdeschel E.S. et al. E-cadherin expression is silenced by 5' CpG island methylation in acute leukemia.// 2000. Clinical Cancer Research, 6, 42434248.

47. Costello J„ Plass C. Methylation matters.// 2001. J. Med. Genet., 38,285-303.

48. Creusot F., Acs G., Christman J.K. Inhibition of DNA methyltransferase and induction of Friend erythroleukemia cell differentiation by 5-azacytidine and 5-aza-2'-deoxycytidine.// 1982. J. Biol. Chem. 25; 257,2041-2048.

49. Cui H., Cruz-Correa M., Giardiello F.M. et al. Loss of IGF2 imprinting: a potential marker of colorectal cancer risk.// 2003. Science. 14, 1753-1755.

50. Dallol A., Fernandes Da Silva N., Viacava P., et al. SLIT2, a human homologue of the Drosophila Slit2 gene, has tumor suppressor activity and is frequently inactivated in lung and breast cancers.// 2002. Can.Res. 62, 5874-5880.

51. Dimri G.P., Itahana K., Acosta M., Campisi J. Regulation of a senescence checkpoint response by the E2F1 transcription factor and pl4ARF tumor suppressor.// 2000. Mol. Cell. Biol. 20, 273-285.

52. Doerfler W. Patterns of de novo DNA methylation and promoter inhibition: studies on the adenovirus and the human genomes.//1993. EXS., 64, 262-299.

53. Dominguez G., Silva J., Garcia J.M. et al. Prevalence of aberrant methylation of pl4ARF over pl6INK4a in some human primary tumors.// 2003.Mutat Res. 29, 9-17.

54. Droufakou S., Deshmane V., Roylance R., et al. Multiple ways of silencing E-cadherin gene expression in lobular carcinoma of the breast.// 2001. Int. J. Cancer. 92,404-408.

55. Dyson N., Balmain A. Oncogenes and cell proliferation.// 1999. Curr.Opin.Genet.Dev. 9, 1,11-14.

56. Enmark, E., Pelto-Huikko, M., Grandien, K. et al. Human estrogen receptor beta-gene structure, chromosomal localization, and expression pattern.// 1997. J. Clin. Endocr. Metab. 82,4258-4265.

57. Esteller M., Corn P., Baylin S., Herman J. A gene hypermethylation profile of human cancer.//2001. Can.Res. 61,3225-3229.

58. Esteller M., Fraga M.F., Guo M. DNA methylation patterns in hereditary human cancers mimic sporadic tumorigenesis.// 2001. Human Molecular Genetics, 10,26,3001-3007.

59. Esteller M., Toyota M., Sanches-Cespedes M. Inactivacion of DNA repair gene O6-methylguanine-DNA methyltransferase by promoter hypermethylation is associated with G to A mutation in K-ras in colorectal tumorigenesis.// 2000. Can.Res. 60,2368-2371.

60. Feamhead N.S., Britton M.P., Bodmer W.F. The ABC of APCM 2001. Hum. Mol. Genet. 10, 721-733.

61. Feinberg A.P., Vogelstein В. Hypomethylation distinguishes genes of some human cancers from their normal counterparts.// 1983. Nature 301, 89-92.

62. Ferguson A.T., Evron E., Umbricht C.B. et al. High frequency of hypermethylation at the 14-3-3 a locus 1 eads to gene silencing in breast с ancer.// 2 000. PNAS, 97, 1 1, 6 0496054.

63. Ferguson A.T., Nass S.J. DNA methylation and breast cancer.// 2000. Oncogene, 6, 13981409.

64. Fraga M.F., Esteller M. DNA methylation: a profile of methods and applications.// 2002. Biotechniques 33, 632-649.

65. Fujii H., Biel M.A., Zhou W. et al. Methylation of the HIC-1 candidate tumor suppressor gene in human breast cancer.// 1998. Oncogene 16,2159-2164.

66. Garcia-Manero G., Bueso-Ramos C., Daniel J. DNA methylation pattern at relapse in adult acute lymphocytic leukemia.// 2002. Clin.Can.Res., 8,1897-1903.

67. Garcia-Manero G., Daniel J., Smith T.L. DNA methylation of multiple promoter-associated CpG island in adult acute lymphocytic leukemia.// 2002. Clin.Can.Res., 8, 2217-2224.

68. Gardiner-Garden M, Frommer M. CpG islands in vertebrate genomes.// 1987. J. Mol. Biol., 196, 261-282.

69. Gonzales-Gomes P., Bello M.J., Alonso M.E. et al. CpG island methylation status and mutation analysis of the RBI gene essential promoter region and protein-binding pocket domain in nervous system tumor.// 2003. British J. of Cancer, 88, 109-114.

70. Gradie В., Cayuela J-M., Martini S., et al. Genomic alteration of the pl9ARF encoding exons in T-cell acute lymphoblastic leukemia.// 1998. Blood, 91, 1016-1020.

71. Graff J.R., Herman J.R., Myohanen S. et al. Mapping patterns of CpG island methylation in normal and neoplastic cells implicated both upstream and downstream region in de novo methylation.// 1997. J. Biol. Chem. 227, 22322-22329.

72. Graff J.R., Herman J.R., Myohanen S. et al. Mapping patterns of CpG island methylation in normal and neoplastic cells implicated both upstream and downstream region in de novo methylation.// 1998. J. Biol. Chem. 227, 22322-22329.

73. Graff J.R., Herman J.G., Lapidus R.G. et al. E-cadherin expression is silenced by DNA hypermethylation in human breast and prostate carcinomas.// 1995. Cancer Res.55, 51955199.

74. Grimm C., Sporle R., Schmid Т.Е. Isolation and embryonic expression of the novel mouse gene Hicl, the homologue of HIC1, a candidate gene for the Miller-Dieker syndrome.// 1999. Hum Mol Genet. 8, 697-710.

75. Gustafsson J.A., Warner M. Estrogen receptor beta in the breast: role in estrogen responsiveness and development of breast cancer.// 2000. J Steroid Biochem Mol Biol. 30, 245-248.

76. Hakkarainen M., W ahlfors J., M yohanen S. e t a 1. H ypermethylation о f с alcitonin g ene regulatory sequences in human breast cancer as revealed by genomic sequencing.// 1996. Int J Cancer. 20, 471-474.

77. Herman J., Civin C., Issa J., et al. Distinct pattern of inactivation of pl5INK4B andpl6INK4A characterize the major types of hematological malignancies.// 1997. Can.Res. 57, 837-841.

78. Herman J. G., M erlo A., M ao L., e t al. Inactivation о f t he С DKN2/p 16/MTS1 g ene i s frequently associated with aberrant DNA methylation in all common human cancers.// 1995. Can. Res. 55,4525-4530.

79. Herman J.G., Civin C.I., Issa J.P. et al. Distinct patterns of inactivation of pl5INK4B and pl6INK4A characterize the major types of hematological malignancies.// 1997. Cane. Res. 1,837-841.

80. Herman J. G., Graff J. R., Myohanen S., Nelkin B.D., Baylin S.B. M ethyl ation-specific PCR: a novel PCR assay for methylation status of CpG islands.// 1996. PNAS 3; 93, 9821-9826.

81. Herman J.G. Hypermethylation of tumor suppressor genes in cancer.// 1999. Semin Cancer Biol. 9, 359-367.

82. Hiltunen M.O., Koistinaho J., Myohanen S., et al. Hypermethylation of the APC gene promoter region in human colorectal carcinoma.// 1997. Int.J.Can. 70,644-648.

83. Hiraguri S, Godfrey T, Nakamura H et al. Mechanisms of inactivation of E-cadherin in breast cancer cell lines.// 1998. Cancer Res. 1, 1972-1977.

84. Hirama Т., Koeffler H. et al. Role of the cyclin-dependent kinase inhibitors in the development of cancer.// 1995. Blood 73, 841-854.

85. Hofmann W.K., Takeuchi S., Frantzen M.A. et al. Loss of genomic imprinting of insulinlike growth factor 2 is strongly associated with cellular proliferation in normal hematopoietic cells.// 2002. Exp Hematol. 30, 318-323.

86. Houle В., Rochette-Egly C., Bradley W. et al. Tumor-suppressive effect of the retinoic acid receptor p in human epidermoid lung cancer cells.// 1993. PNAS. USA 90,985-989.

87. Huang S.C., Chen C.R., Lavine J.E. et al. Genetic heterogeneity in familial juvenile polyposis.// 2000. Cancer Res. 15. 6882-6885.

88. Hui R., Macmillan D., Kenny F.S. et al. INK4a gene expression and methylation in primary breast cancer: overexpression of pl6INK4a messenger RNA is a marker of poor prognosis.// 2000 .Clinical Cancer Resaerch, 6,2777-2787.

89. Iguchi-Ariga SM, Schaffner W. CpG methylation of the cAMP-responsive enhancer/promoter sequence TGACGTCA abolishes specific factor binding as well as transcriptional activation.// 1989. Genes Dev. 3, 612-619.

90. Ihalainen J., Pakkala S., Savolainen E.R. et al. Hypermethylation of the calcitonin gene in the myelodysplastic syndromes.// 1993. Leukemia. 7, 263-267.

91. Iida S., Akiyama Y., Nakajima Т., et al. Alterations and hypermethylation of pl4ARF gene in gastric cancer.// 2000. Int.J.Cancer 87, 654-658.

92. Iravani M., Dhat R., Price C.M. Methylation of the multi tumor suppressor gene-2 (MTS2, CDKN1, pl5INK4B) in childhood acute lymphoblastic leukemia.// 1997. Oncogene 20, 2609-2614.

93. Issa J.P., Zehnbauer B.A., Kaufmann S.H. et al. HICl hypermethylation is a late event in hematopoietic neoplasms.// 1997. Cancer Res. May 1, 1678-1681.

94. Issa J.P., Ottaviano Y. L., Celano P., Hamilton S. R. et al. Methylation of the oestrogen receptor CpG island links ageing and neoplasia in human colon.// 1994. Nature Genet. 7, 536-540.

95. Jarrard D.F., Sarkar S., Shi, Yeager T.R., et al. pl6/pRb pathway alteration are required for bypassyng senescence in human prostate epithelial cells.// 1999. Can.Res. 59, 2957-2964.

96. Jones P. A. The DNA methylation paradox.// 1999. Trends Genet .15, 34-37.

97. Jones P.A., Baylin S.B. The fundamental role of epigenetic events in cancer.// 2002. Nat.Rev.Genet. 3, 415-428.

98. Jones P.A., Leard P., et al. Cancer epigenetics comes of age.// 1999. Nat. Genet. 21, 163-167.

99. Jones P.A., Takai D. et al. The role of DNA methylation in mammalian epigenetics.// 2001. Science 293,10,1068-1070.

100. Jost C.A., Marin M.C., Kaelin W.G. et al. p73 is a human p53-related protein that can induce apoptosis.// 1997. Nature 389, 191-194.

101. Jost J.P., Jost Y.C. Mechanism of active DNA demethylation during embryonic development and cellular differentiation in vertebrates.// 1995. Gene 19,265-266.

102. Joyce J.A., at al. Imprinting IGF2 and HI9: lack of reciprocity in sporadic Beckwith-Wiedemann syndrom.// 1997. Hum.Mol.Genet. 6, 1543-1548.

103. Kane M.F., Loda M., Gaida G., et al. Methylation of the hMLHl promoter correlates with lack of expression of hMLHl in sporadic colon tumors and mismatch repair-defective human tumor cell lines.// 1997. Can.Res. 57, 808-811.

104. Kennet S.B., Udvadia A.J., Horowitz J.M. Sp3 encodes multiple proteins that differ in their capacity to stimulate or repress transcription.// 1997. Nucleic Acids Res., 26, 31103117.

105. Kim D.H., Nelson H.H., Wiencke J.K. et al. pi6 (INK4a) and histology-specific methylation of CpG island by exposure to tobacco smoke in non-small cell lung cancer.// 2001. Cancer Res. 61,3419-3424.

106. Kiono Т., Foster S.A., Koop J.I., et al. Both Rb/pl6INK4a inactivation avd telomerase activity are required to immortalize human epithelial cells.// 1998. Nature 396, 84-89.

107. Kohda M., Hoshiya H., Katoh M. et al. Frequent loss of imprinting of IGF2 and MEST in lung adenocarcinoma.// 2001. Mol Carcinog. 31, 184-191.

108. Konishi N., Nakamura M., Kishi M. et al. DNA hypermethylation status of multiple genes in prostate adenocarcinomas.// 2002. Jpn. J. Can. Res. 93, 767-773.

109. Kramer A., Schultheis В., Bergmann J. et al. Alteration of the cyclin Dl/pRbl/pl6 (INK4A) pathway in multiple myeloma.//2002. Leukemia 16, 1844-1851.

110. Kretzschmar S., Massague J. et al. SMADs: mediators and regulators of TGF-b signaling.// 1998. Curr.Opin.Genet.Dev. 8,103-111.

111. Kuiper, G. G., Enmark, E., Pelto-Huikko, M., et al. Cloning of a novel estrogen receptor expressed in rat prostate and ovary.//1996. PNAS 93, 5925-5930.

112. Kwong J., Lo K-W., To K-F. et al. Promoter hypermethylation of multiple genes in nasopharyngeal carcinoma.//2001. Clin.Can.Res., 8,131-137.

113. Laird P.W. The power and the promise of DNA methylation markers.// 2003. Cancer, 3,253-266.

114. Lapidus R.G., Ferguson A.T., Ottaviano Y.L. et al. Methylation of estrogen and progesterone receptor gene 5' CpG islands correlates with lack of estrogen and progesterone receptor gene expression in breast tumors.// 1996. Clin Cancer Res. 2, 805810.

115. Lee S., Kim W.H., Jung H.Y. et al. Aberrant CpG island methylation of multiple genes in intrahepatic cholangiocarcinoma.//2002. Amer J. Pathol. 1, 1015-1021.

116. Lee W. H., Lee E. Y. The retinoblastoma gene: from its basic umderstanding as a signal mediator for growth find differentiation to its use in the treatment of cancer.// 1997. Gan To Kagaku Ryoho 24,1368-1380.

117. Lee W.H., Bookstein R., Hong F.D. et al. Human retinoblastoma susceptibility gene: cloning, identification, and sequence.// 1987. Science 235, 1394-1399.

118. Li Q., Jedlicka A., Ahuja N., et al. Concordant methylation of the ER and N33 genes in glioblastoma multiform.// 1998. Oncogen 16, 3197-3202.

119. Lohmann D.R., Gerick M., Brandt В., et al. Constitutional RBI-gene mutation in patient with isolated unilateral retinoblastoma.// 1997. Am. J. Hum. Genet. 61, 282-294.

120. Luo D., Liu Q.F., Gove C., Naomov N., Su J.J., Williams R. Analysis of N-ras gene mutation and p53 gene expression in human hepatocellular carcinomas.// 1998. World J Gastroenterol., 4,97-99.

121. MacGrogan D., Levy A., Bova G. S., et al. Structure and methylation-associated silencing of a gene within a homozygously deleted region of human chromosome band 8p22.//1996. Genomics 35, 55-65.

122. MacLeod A.R., Rouleau J., Szyf M. Regulation of DNA methylation by the Ras signaling pathway.// 1995. J. Biol. Chem. 12,11327-11337.

123. Macleod K. Tumor supressor genes.// 2000. Curr.Op.Gen. Dev., 10, 81-93.

124. Mancini D., Singh S., Ainsworth P., Rodenhiser D. Constitutively methylated CpG dinucleotides as mutation hot spots in the retinoblastoma gene (RBI).// 1997. Hum. Genet. 61, 80-87.

125. Meehan R., Cross S. Transcriptional repression by methylation of CpG.// 1992. J.Cell Sci. Suppl. 16, 9.

126. Melki J.R., Vincent P.C., Brown R.D. Hypermethylation of E-cadherin in leukemia.// 2000. Blood 95, 10,3208-3213.

127. Melwin M.J., McGurt M.E., Bort S.J. Hypomethylation of the interferon-gamma gene correlates with its expression by primary T-lineage cells.// 1995. Eur. J. Immunol. 25, 426-430.

128. Mittnacht S. Control ofpRb phosphorylation.// 1998. Curr.Opin.Genet.Dev. 8, 21-27.

129. Moscow J. A., Townsend A. J., Goldsmith, M. E. et al. Isolation of the human anionic glutathione S-transferase cDNA and the relation of its gene expression to estrogen-receptor content in primary breast cancer.// 1988. PNAS 85. 6518-6522.

130. Nakamura M., Yonekawa Y., Kleihues P. et al. Promoter hypermethylation of the RBI gene in glioblastomas.// 2001. Laboratory Investigation, 81, 77-82.

131. Nakyama M., Wada M., Harada Т. et al. Hypomethylation status of CpG sites at the promoter region and overexpression of the human MDR1 gene in acute myeloid leukemias.//1998. Blood. 92,4296-4307.

132. Nass S.J., Herman J.G., Gabrielson E., et al. Abberant methylation of the estrogsn receptor and E-canherin 5' CpG islands increases with malignant progression in human breast cancer.// 2000. Can.Res. 60, 4346-4348.

133. Natarajan A.T., Vermeulen S., Darroudi F. et al. Chromosomal localization of human 0(6)-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) gene by in situ hybridization.// 1992. Mutagenesis 7,83-85.

134. Ng H.H., Zhang Y, Hendrich В et al. MBD2 is a transcriptional repressor belonging to the MeCPl histone deacetylase complex.//1999. Nat Genet, 23, 58-61.

135. Nicoll G., Crichton D.N., McDowell H.E. et al. Exspression of the Hypermethylated in cancer gene (HIC-1) is associated with good outcome in breast cancer.// 2001. Br.J.Cancer 14, 1878-1882.

136. Nilsson O., Chiysis D., Pajulo O. et al. Localization of estrogen receptors-alpha and -beta and androgen receptor in the human growth plate at different pubertal stages.// 2001. J. Endocrinol 177, 319-326.

137. Nojima D., Li L.C., Yeh C.C. et al. Cloning and characterization of human estrogen receptor beta promoter.// 2001. Biochem Biophys Res Commun. 28, 682-689.

138. Nosaka K., Maeda M., Tamiya S. et al. Increasing methylation of the CDKN2A gene is associated with the progression of adult T-cell leukaemia.// 2000. Can.Res., 60, 10431048.

139. Noyer-Weidner M., Trautert A. Methylation of DNA in prokaryotes.// 1993. EXS., 64, 39-108.

140. Okano M., Bell D.W., Haber D.A., Li E. DNA methyltransferases Dnmt3a and Dnmt3b are essential for de novo methylation and mammalian development.// 1999. Cell 99, 247257.

141. Okano M., Xie S. Dnmt2 is not required for de novo and maintenance methylation of viral DNA in embryonic stem cells.//1998. Nucleic Acids Res. 1, 26, 2536-2540.

142. Okano M., Xie S., Li E. Cloning and characterization of a family of novel mammalian DNA (cytosine-5)-methyltransferases.// 1998. Nature Genetics 19, 219-220.

143. Orlow I., Lacombe L., Hannot G., et al. Deletion of the pi5 and pi6 genes in human bladder tumors.// 1995. J.Natl.Cancer Inst. 1524-1529.

144. Osada H., Tatematsu Y., Yatabe Y. et al. Frequent and histological type-specific inactivation о f 1 4-3-3sigma i n h uman 1 ung с ancers.// 2 002. С lin С ancer R es. 7, 2 4452451.

145. Palmissano W.A., Divine K.K., Saccomanno G. et al. Predicting lung cancer by detecting abberant promoter methylation in sputum.// 2000. Cancer Res 60, 5954-5958.

146. Plass C., Soloway P.D., , DNA methylation, imprinting and cancer.// 2002. Eur. J. of Human Genetics 10, 6-16.

147. Rathi A., Virmani A.K., Schorge J.O. et al. Methylation profiles of sporadic ovarian tumors and nonmalignant ovaries from high-risk women.// 2002. Clin Cancer Res. 8, 3324-3331.

148. Razin A, Shemer R. DNA methylation in early development.// 1995. Hum Mol Genet., 4,1751-1755.

149. Robertson K.D., Jones P.A. et al. The human ARF cell cycle regulatory gene promotor is a CpG island which can be silenced by DNA methylation and down-regulated by wild-type p53.// 1998. Molecular and Cellular Biology, 18, 11, 6457-6473.

150. Roman J., Castillejo J.A., Jimenez A. et al. Hypermethylation of the calcitonin gene in acute lymphoblastic leukaemia is associated with unfavourable clinical outcome.// 2001. Br J Haematol. 113, 329-338.

151. Rougier N, BourcTiis D, Gomes DM, Niveleau A et al. Chromosome methylation patterns during mammalian preimplantation development.// 1998. Genes Dev. 15, 12, 2108-2113.

152. Sadri R., Hornsby. P.J. Rapid analysis of DNA methylation using new restriction enzyme sites с reated bу b isulfite modification.// 1 995. О xford University P ress, 5 0585059.

153. Sakai T, Toguchida J, Ohtani N, et al. Allele-specific hypermethylation of the retinoblastoma tumor-suppressor gene.//1991. Am. J. Hum. Genet. 48, 880-888.

154. Sambrook J., Fritsh E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual.// 1989. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY.

155. Sasaki H, Allen ND, Surani MA. DNA methylation and genomic imprinting in mammals.// 1993. EXS. 64, 469-86.

156. Schmidt M., Migeon B.R. Asynchronous replication of homologous loci on human active and inactive X chromosomes.// 1990. PNAS USA., 87, 3685-3689.

157. Selker E.U. Gene silencing: repeats that count.// 1999. Cell, 16, 157-160.

158. Selker E.U., Fritz D.Y., Singer M.J. Dense nonsymmetrical DNA methylation resulting from repeat-induced point mutation in Neurospora.//1993. Science, 10, 262, 1724-1728.

159. Sharpless N., DePinho R., The INK4A/ARF locus and its two gene product.// 1999. Curr.Opin.Genet.Dev. 9, 22-30.

160. Sherr C.J., Weber J.D. The ARF/p53 pathway.// 2000. Curr.Opin.Genet.Dev., 10, 9499.

161. Silva J., Silva J. M., D ominguez G. e t al. С oncomitant e xpression о f p 16INK4a and pl4ARF in primary breast cancer and analysis of inactivation mechanisms.// 2003. J Pathol. 199, 289-297.

162. Singal R., Ginder G.D. DNA methylation.// 1999. Blood, 93, 12, 4059-4070.

163. Skliris G.P., Munot K., Bell S.M. et al. Reduced expression of oestrogen receptor beta in invasive breast cancer and its re-expression using DNA methyl transferase inhibitors in a cell line model.// 2003. J Pathol. 201.213-220.

164. Tada Y., Wada M., Kuroiwa K. et al. MDR1 gene overexpression and altered of degree of methylation at the promoter region in bladder cancer during chemotherapeutic treatment.// 2000. Clin.Can.Res. 6,4618-4627.

165. Tang X., Khuri F.R., Lee J.J. et al. Hypermethylation of the death-associated protein (DAP) kinase promoter and agressiveness in stage I non-small cell lung cancer.// 2000. J. Natl. Cancer Inst. 92,1511-1516.

166. Tazi J, Bird A. Alternative chromatin structure at CpG islands.// 1990. Cell 60, 909920.

167. Tchou J.C., Lin X., Freije D. et al. GSTP1 CpG island DNA hypermethylation in hepatocellular carcinomas.//2000. Int.J.Oncol. 16, 663-676.

168. Thomas XTeillon М,Н., Вelhabri A. et al. Hypermethylation о f сalcitonin gene i n adult acute leukemia at diagnosis and during complete remission.// 1999. Hematol Cell Ther. 41,19-26.

169. Toyooka S., Toyooka K.O., Maruyama R., DNA methylation profiles of lung tumors.// 2001. Molecular Cancer Therapeutica 1, 61-67.

170. Toyota M., Ahuja N., Suzuki H. et al. Aberrant methylation in gastric cancer associated with the CpG island methylator phenotype.// 1999. Cancer Res. 59, 54385442.

171. Toyota M., Kopecky K.J., Toyota M-O., Methylation profiling in acute myeloid leukemia.// 2001. Blood 97, 9,2823-2829.

172. Turker M.S. The establishment and maintenance of DNA methylation patterns in mouse somatic cells.//1999. Semin Cancer Biol. 9, 329-337.

173. Turker M.S., Mummaneni P. et al. Region- and cell type-specific de novo DNA methylation in cultured mammalian cells.// 1991. Somat Cell Mol Genet. 17, 151-157.

174. Virmani A.K., Muller C., Rathi A. et al. Aberrant methylation during cervical carcinogenesis.// 2001. Clin Cancer Res. 7, 584-589.

175. Virmani A.K., Rathi A., Sathyanarayana G., et al. Aberrant methylation of the Adenomatous polyposis coli (APC) gene promoter 1A in breast and lung carcinomas.// 2001. Clin.Can.Res. 7, 1998-2004.

176. Virmani A.K., Tsou J. A., Siegmound K.D. et al. Hierarchical clustering of lung cancer cell lines using DNA methylation markers.// 2002. Cancer Epidemiol. Biomarkers Prevention. 11, 291-297.

177. Wales M.M., Biel M.A., Deiry W. et al. p53 activates expression of HIC-1, a new candidate tumour suppressor gene on 17pl3.3.// 1995. Nature Med. 1, 570-577.

178. Walsh C.P., Bestoe Т.Н. Cytosine methylation and mammalian development.// 1999. Genes Dev. 1, 13, 26-34.

179. Wang W., Wu J., Zhang Z., Characterization of regulatory element on the promoter region of pie114"443 that contribute to overexpression of pl6 in senescent fibroblasts.// 2001. J. of Biological Chemistiy, 276,48655-48661.

180. Weintraub S. Inactivation of tumor suppressor proteins in lung cancer.// 1996. Am. J. Respir. Cell .Mol. 15,150-155.

181. Widschwendter M., Jones P.A.,, DNA methylation and breast cancirogenesis.// 2002. Oncogene 21, 5462-5482.

182. Wong I.H.N., Lo Y.M.D., Yeo W. Frequent pl5 promoter methylation in tumor and peripheral blood from hepatocellular carcinoma patients.// 2000. Clin. Cane. Res. 6, 35163521.

183. Wong I.H.N., N g M .H.L., H uang D .P. e t al. Aberrant p 15 p romoter methylation i n adult and childhood acute leukemia of nearly all morphologic subtypes: potential prognostic implications.//2000. Blood 95,1942-1949.

184. Woodcock D.M., Linsenmeyer M.E., Doherty J.P., et al. DNA methylation in the promoter region of the pl6 (CDKN2/MTS-1/INK4A) gene in human breast tumors.// 1999. Br.J.Can. 79,251-256.

185. Woodford-Richens K., Bevan S., Churchman M. et al. Analysis of genetic and phenotypic heterogeneity in juvenile polyposis.// 2000. Gut. 46. 656-660.

186. Xing E.P., Nie Y., Song Y., Uang G.-Y., et al. Mechanism of inactivation of pl4(ARF), pl5(INK4b) and pl6(INK4a) genes in human esophageal cell carcinoma.// 1999. Clin.Can.Res., 2704-2713.

187. Xiong Z., Laird P. W. COBRA: a sensitive and quantitative DNA methylation assay.// 1997. Oxford University Press, 2532-2534.

188. Xu G.L., Bestor Т.Н., Bourc'his D., Hsieh C.L. et al. Chromosome instability and immunodeficiency syndrome caused by mutations in a DNA methyltransferase gene.// 1999. Nature, 402,187-191

189. Xu L.X., Wu L.C., Du F., et al. Inactivation of human SRBC, located within the 1 Ipl5.5-pl5.4 tumor suppressor region, in breast and lung cancers.// 2001. Can.Res. 61, 7943-7949.

190. Yang Q., Nakamura M., Nakamura Y., et al. Two-hit inactivation of FHIT by loss heterozygosity and hypermethylation in breast cancer.// 2002. Clin.Can.Res. 8, 28902893.

191. Yang X., Yan L., Davidson N.E., DNA methylation in breast cancer.// 2001. Endocrine-Related Cancer, 8,115-127.

192. Yoshiura K., Kanai Y., OchiaiA.,, Silencing о f the E-cadherin invasion-suppressor gene by CpG methylation in human carcinomas.// 1995. PNAS 92, 7416-7419.

193. Yu J., Ni M., Zhang H. et al. Methylation profiling of twenty promoter-CpG island of genes which may contribute to hepatocellular carcinogenesis.// 2002. BMC Cancer, 2, 2943.

194. Yuan Y., Mendez R., Sahin A., et al. Hypermethylation leads to silencing of the SYK gene in human breast cancer.// 2001. Can.Res. 61, 5558-5561.

195. Zochbauer-Muller S., Fong K., Virmani A., et al. Abberant promoter methylation of multiple genes in non-small cell lung cancer.// 2001. Can.Res. 61, 249-255.

196. Zochbauer-Muller S., Fong K.M., Maitra A., et al. 5' CpG island methylation of the FHIT gene is correlated with loss of gene expression in lung and cancer.// 2001. Can.Res. 61,3581-3585.

197. Zochbauer-Muller S., Minna J., Gazdar A. Aberrant DNA methylation in lung cancer: biological and clinical implications.// 2002. Oncologist. 7,451-457.