Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование механизма взаимодействия противоопухолевого антибиотика оливомицина с ДНК методами люминесцентно-абсорбционного анализа

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Питина, Любовь Рафаиловна

ВВВДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

§ 1.1. Выделение и физико-хтшчесш'ю свойства оливомицина.

§ 1.2. Биологическое действие оливомицина и его производных.

§ 1.3. Биологическое действие оливомицина и его производных.

§ 1.4. Взаимодействие оливомицина с ДНК.

§ 1.5. Использование оливомицина в качестве зонда для ДНК.

§ 1.6. Г-Ц специфичные антибиотики.

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

§ 2.1. Исходные препараты и приготовление растворов.

2.1.1. Оливомицин.

2.1.2. Оливин.

2.1.3. ДНК.

2.1.4. Полимер поли-£^(А-Т)7 -поли [¿(А-Т)]

2.1.5. Хлористые соли А/а , Ссс »М^ $г,Ва,Мь,Со ,&г.

2.1.6. Этиловый спирт. '

2.1.7. Сахароза.

2.1.8. Диоксан и глицерин.

§ 2.2. Измерение спектральных характеристик.

2.2.1. Измерение спектров поглощения.

2.2.2. Измерение спектров флуоресценции.

2.2.3. Измерение характеристических времен затухания флуоресценции.

2.2.4. Измерение степени поляризации флуоресценции.

§2.3. Определение среднего угла флуктуации (подвшшости) антибиотика, связанного с ДНК, из стационарных измерений деполяризации флуоресценции.

§ 2.4. Изучение кинетики комплексообразова

глава ш. жумнесдентно-абс0рщ40бше свойства молекулы оливомицина и ее взаимодействие с ионами двухвалентных металлов

§3.1. Лгаминесцентно-абсорбционные свойства молекулы оливомицина

3.1.1. Фотодеструкция.

3.1.2. Зависимость флуоресценции оливомицина от температуры.

3.1.3. Зависимость спектральных свойств оливомицина от концентрации.

3.1.4. Влияние ионной силы на спектральные характеристики оливомицина.

3.1.5. Влияние рН-среды на спектральные характеристики оливомицина.

3.1.6. Влияние полярности растворителей на спектральные характеристики оливомицина.

3.1.7. Обсуждение результатов.

§ 3.2. Взаимодействие оливомицина с ионами магния

3.2.1. Экспериментальные результаты.

3.2.2. Обсуждение результатов.

§ 3.3. Взаимодействие оливомицина с ионами

Са2\5%2\Ьа2\М^2\Сс2\^2+.

ГЛАВА 1У. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ОЛИВОМИЦИНА С ДНК

§ 4.1. Экспериментальные результаты

4.1.1. Изучение связывания оливомицина с ДНК методом равновесного флуоресцентного титрования.

4.1.2. Кинетические измерения.

§ 4.2. Обсуждение результатов

4.2.1. Равновесные измерения.

4.2.2. Кинетические эксперименты.

4.2.3. Модель комплекса оливомицин

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование механизма взаимодействия противоопухолевого антибиотика оливомицина с ДНК методами люминесцентно-абсорбционного анализа"

В современной химиотерапии интенсивно используются противоопухолевые антибиотики, причем обширную группу составляют препараты, мишенью для которых в клетке является ДНК. Эти вещества являются удобными объектами для исследования действия лекарства на молекулярном уровне вследствие того, что структура их рецептора в клетке хорошо известна. Изучение молекулярного механизма взаимодействия таких антибиотиков с ДНК необходимо для осуществления направленного синтеза новых лекарств и для понимания связи между структурой вещества и его биологической активностью.

В данной работе в качестве объекта исследования был взят антибиотик группы ауреоловой кислоты - оливомицин. С одной стог роны, оливомицин является эффективным противоопухолевым препаратом, успешно применяемым в клинической практике в случае целого ряда злокачественных новообразований. С другой стороны, этот антибиотик представляет собой удачный модельный объект для изучения молекулярного механизма его действия по следующим причинам: I) оливомицин проявляет высокую специфичность, взаимодействуя в клетке лишь с ДНК; при этом представлялось интересным выяснить, какова роль гликозидной природы молекулы в проявлении такой избирательности действия; 2) этот антибиотик Г-Ц специфичен и изучение молекулярного механизма взаимодействия его с ДНК может приблизить нас к пониманию общей природы Г-Ц специфичности; 3) агликон оливомицина (оливин) является хромофором, то есть он поглощает свет и интенсивно флуоресцирует в видимой области спектра, что является благоприятным обстоятельством для использования высокочувствительных методов люминес- ■ центно-абсорбционной спектроскопии; 4) в связи с избирательностью действия оливомицина по отношению к ДНК и наличием собственной флуоресценции оливомицин используется как зонд для количественных и качественных определений ДНК.

Исходя из изложенного выше, целью настоящей работы являлось изучение механизма процесса комплексообразования оливомицина с ДНК. Для решения этой задачи использовалась система люминесцент-но-абсорбционных и кинетических методов. Изучение механизма взаимодействия природного антибиотика оливомицина с ДНК имеет практическое значение, поскольку такие исследования раскрывают молекулярный механизм противоопухолевой активности оливомицина и подобных ему ДНК-тропных соединений, а также представляет теоретический интерес в рамках основной задачи молекулярной фармакологии - соотношения между химической структурой физиологически активного вещества и его биологической функцией. Полученные в работе результаты по использованию кинетических методов исследования комплексообразования позволяют наметить путь исследования взаимодействия с ДНК веществ, обладающих собственной флуоресценцией, высокочувствительными и в то же время сравнительно простыми методами с целью оценки потенциальной ДНК-тропности. Новые данные о механизме взаимодействия оливомицина с ДНК будут способствовать большей информативности методов, использующих этот антибиотик как зонд в фундаментальных и прикладных исследованиях.

Настоящая работа состоит из четырех глав, введения и заключения. Во введении дано обоснование проведенного исследования. В первой главе - литературном обзоре - рассмотрены результаты исследований оливомицина с момента его открытия в 1962 году по настоящее время. Из приведенных литературных данных вытекают конкретные задачи настоящей работы. Во второй главе описаны используемые методы люминесцентно-абсорбционных стационарных и кинетических исследовании. В третьей главе приведены результаты исследования абсорбционных и флуоресцентных свойств чистого оли-вомицина и влияние на них ряда факторов (рН раствора, температуры, времени освещения, ионной силы среды и т.п.), а также изложены экспериментальные данные по изучению связывания оливомици-на в хелатный комплекс с ионами магния и с некоторыми другими ионами металлов, имеющих либо близкий ионный радиус (¿Ц, Со? Мп ), либо сходное строение внешней электронной оболочки ( Са,} Вас). В четвертой главе рассмотрены данные по изучению связывания оли-вомицина с ДНК. Приведены результаты стационарных и кинетических измерений, на основании которых определены основные константы, характеризующие процесс комплексообразования, и предложена модель комплекса олив омицин-ДНК.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Питина, Любовь Рафаиловна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В подавляющем большинстве случаев цри изучении связывания различных лигандов с ДНК используются стационарные методы: центрифугирование в градиенте плотности сахарозы, исследования комплексов антибиотиков с ДНК оптическими или ЯМР-методами; рентгено-структурный анализ, конформационные расчеты и т.д. Даже в тех случаях, когда взаимодействие регистрируют по изменениям спектров поглощения и флуоресценции, измерения проводят, как правило, в стационарных условиях. При этом удается определить только некоторые эффективные равновесные константы, характеризующие процесс комплексообразования. В то же время такие фундаментальные характеристики связывания как наличие промежуточных комплексов и время жизни комплекса лиганд-ДНК с помощью перечисленных выше методов не определяются. К настоящему времени лишь немногие исследователи прибегали к использованию кинетических методов в изучении взаимодействия антибиотиков с ДНК. Следует учитывать, что эффективность действия химического соединения как биологически активного вещества определяется набором двух параметров: констант связывания (или диссоциации), которая показывает, какое количество лиганда при данной его концентрации связется с биополимером, и временем жизни комплекса лиганд-ДНК, которое характеризует эффективность вещества при блокировании обычных функций ДНК (репликации, транскрипции). Полученные в настоящей работе результаты по использованию кинетических методов исследования комплексообразования позволяют наметить путь исследования взаимодействия с ДНК веществ, обладающих собственной флуоресценцией, высокочувствительными и в то же время сравнительно простыми абсорбционно-люминесцентными методами с целью оценки потенциальной биологической активности.

После обнаружения самого факта взаимодействия по изменению спектральных свойств в ультрафиолетовой и видимой областях спектра необходимо смоделировать эти изменения подбором соответствующих физико-химических параметров окружения (растворители, рН раствора, ионная сила среды и т.п.). Использование этих данных существенно облегчает понимание механизма образования комплекса лиганд-ДНК. Если же в дальнейшем ходе исследования применяют кинетические методы, то это в значительной мере облегчает понимание деталей процесса комплексообразования.

Оливомицин - антибиотик гликозидной природы, поэтому интересно сопоставить полученные данные о роли Сахаров в образовании комплекса с ДНК с аналогичными данными для других гликози-дов, взашлодействующих как с ДНК, так и с другими биополимерами. Как показано в работе, сахара ответственны за неспецифическую часть связывания и стабилизируют комплекс оливомицина с ДНК. В случае гликозидных антибиотиков антрациклинового ряда (рубомицин, в частности) сахарный остаток татю обеспечивает неспецифическое взаимодействие антибиотика с сахаро-фосфатным остовом ДНК и стабилизирует комплекс /100/. В сердечных гликозидах, мишенью для которых является зависимая АТФ-аза, сахара также стабилизируют комплекс препарата с рецептором /101/. Можно полагать, таким образом, что сахарные остатки в молекулах веществ, обладающих фармакологической активностью, обеспечивают высокую избирательность действия по отношению к мишени, обеспечивают неспецифическое связывание с рецептором и стабилизируют комплекс биологически активного вещества с биополимером.

По результатам настоящей работы можно сделать следующие выводы.

I. Исследованы спектрально-люминесцентные свойства оливомицина и показано, что в зависимости от условий окружения молекула оливомицина может существовать, -в"-двух таутомерных".формах

А и В, переходы между которыми осуществляется как в основном электронном, так и в возбужденном состояниях.

2. Экспериментально показано, что оливомицин в нормальных физиологических условиях существует не в ранее приписываемой ему B-форме, а в А-форме. Эти результаты подтверждены квантово-хими-ческим расчетом.

3. При образовании комплекса оливомицина с ионами магния эффективный гидродинамический объем молекулы уменьшается примерно в 3 раза. Предложена кинетическая схема процесса, включающая две стадии: быструю бимолекулярную и медленную мономолекулярную; при этом учитывается, что комплекс с ионами магния образуют обе таутомерные формы (А и В) молекулы оливомицина. Суммарная константа процесса образования комплекса оливомицин-магний составляет 1,6-Ю3 1Г1.

4. Методом равновесного флуоресцентного титрования определены константы связывания оливомицина с ДНК в присутствии (I,7*I06 М-1) и в отрутствие ионов магния (2,0'105 М-1). Число участков связывания в обоих случаях равно ~-0,03. Константа связывания в присутствии магния увеличивается за счет экранировки ионом металла отрицательно заряженных окси- и кетокислородов хромофора и придания благоцриятной (более компактной) конформации молекуле антибиотика.

5. Изучена кинетика процесса комплексообразования оливомицина с ДНК в присутствии магния. Показано, что процесс протекает в две стадии. Измерены константы скорости реакции и энергетические параметры для обеих стадий процесса. Время жизни комплекса оливомицина с ДНК составляет 70 сек.

6. Г-Ц специфичность оливомицина по отношению к ДНК обусловлена взаимодействием кетонного кислорода боковой цепи агликона с

2-аминогруппой гуанина, и неспецифическое взаимодействие обусловлено образованием связи между сахарными остатками оливомицина и сахаро-фосфатным остовом ДНК.

7. Предложена стереохимическая модель комплекса оливомицин

ДЙК. й ЗЕ £

В заключение считаю своим приятным долгом выразить благодарность моим руководителя!»!: Владимиру Хаимовичу Брикенштейну и Григорию Матвеевичу Баренбойму.

Благодарю также моих коллег: Е.П.Баранова и Б.И.Гринченко, оказавших мне непосредственную помощь в работе.

Выражаю глубокую признательность Георгию Георгиевичу Гау-зе за стимулирование постановки настоящего исследования, а также за многочисленные плодотворные обсуждения результатов работы.

Выражаю благодарность Георгию Валериановичу Гурскому за полезные дискуссии и помощь в построении модели комплекса оли-вомицин-ДНК.

Благодарю Щрия Адольфовича Берлина за научные консультации, внимание к работе и предоставление препарата оливина.

Благодарю Андрея Игоревича Полетаева за помощь в освоении метода и содействие в работе.

Благодарю также И.Л.Шамовского за проведение квантово-химического расчета, характеризующего спектральные свойства тау-томерных форм агликона оливомицина.

Благодарю весь коллектив лаборатории молекулярной биофизики за создание дружественной атмосферы, благоприятствующей работе.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Питина, Любовь Рафаиловна, Купавна

1. Berlin Yu.A., Kiseleva O.A., KolosovM.N., Schemyakin M.M., Soifer V.S., Vasina 1.V., Yartseva I.V., Kuznetsov V.D. Aureo-lie acid group of anti-tumor antibiotics. - Nature, 1968,v. 218, N 5137, P- 193-194.

2. Гаузе Г.Ф., Ухолина P.O., Свешникова M.A. Оливомицин новый антибиотик,o6pa3yeM$Actinomyces oiivoreticuli. - Антибиотики, 1962, т. 7, №3, с. 34-38.

3. Rao К. V., Oullen W.P., Sobin B.A. A new antibiotic with anti-tumor properties. Antibiotics and Chemotherapy, 1962, v. 12, N 3, p. 182-186.

4. Бражникова М.Г., Кругляк Е.Б., Ковшарова И.Н., Константинова Н.В., Прошлякова В.В. Выделение, очистка и изучение некоторых физико-химических свойств нового антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1962, т. 7, № 3, с. 39-44.

5. Бражникова М.Г., Кругляк Е.Б., Борисова В.Н., Федорова Г.Б. Исследование однородности оливомицина. Антибиотики, 1964, т. 9, Л 2, с. I4I-I46.

6. Мезенцев А.С., Кругляк Е.Б., Борисова В.Н., Федорова Г.Б., Бражникова М.Г. Получение некоторых производных оливомицина и их физико-химическая характеристика. Антибиотики, 1965,т. 10, 5, с. 410-414.

7. Кущ А.А., Федосеева Г.Е., Киселева О.А., Зеленин А.В. Сравнительный анализ механизмов биологического действия антибиотиков группы ауреоловой кислоты и их производных. Антибиотики, 1972, т. 17, $6, с. 504-513.

8. Макаров В.Л., Полетаев А.И., Свешников П.Г., Кондратьева И.О., Письменский В.Ф., Доскочил Я., Коуделка Я., Волькен-штейн М.В. Круговой дихроизм комплексов ДНК с красителями.

9. Алыков H.M. Экстракционно-флюориметическое определение оли-вомицина. Антибиотики, 1980, т. 25, № 3, с. 175-179.

10. Бракникова М.Г., Кругляк Е.Б., Мезенцев А.С., Федорова Г.Б.

11. Продукты кислотного гидролиза антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1974, т. 9, №6, с. 552-553.

12. Berlin Yu.A., Esipov S.E., Kolosov M.N., Shemyakin М.М., Brazhnikova M.G. Olivomycin. I. Methanolysis. Tetrah. Lett., 1964, N 21, p. 1323-1328.

13. Берлин Ю.А., Васина И.В., Клящицкии Б.А., Колосов М.Н., Пек Г.Ю., Пиотрович Л.А., Чуцрунова О.А., Шемякин М.М. Строение оливина. ДАН СССР, 1966, т. 167, №5, с. 1054-1056.

14. Мезенцев А.С., Кругляк Е.Б., Тютюкова В.А., Бражникова М.Г. Об отличии оливина от агликонов хромомицина A3, митрамицина и антибиотика 3014. ДАН СССР, 1966, т. 168, гё I, с. 207210.

15. Miamoto M., Morita К., Kawamatsu Y., ÎToguchi S., Marumoto R., Tanaka K., Tatsuoka S., Hakanishi K., Nakadira Y., Bhaacca U.S. Chromomycine, the sglycone of chromomycin Ay Tetrah. Lett., 1964, N 34, p. 2355-2365.

16. Berlin Yu.A., Esipov S.E., Kolosov M.N., Shemyakin M.M., Bra2hnikova M.G., Olivomycin. II. Structure of the carbohydrate components. Tetrah. Lett., 1964, N 47, p.3513-3516.

17. Berlin Yu.A., Esipov S.E., Kolosov M.U., Shemyakin M.M., Olivomycin. IV. The structure of olivomycin. Tetrah. Lett., 1966, N 14, p. 1431-1436.

18. Берлин Ю.А., Есипов С.Е., Киселева О.А., Колосов М.Н., Шемякин М.М. Строение оливомицинов и хромомицинов. ДАН СССР, 1966, т. 171, №4, с. 863-866.

19. Гаузе Г.Г., Лошкарева Н.П., Дудник Ю.В. О механизме действия оливомицина. Антибиотики. 1965, X, №4, с. 307-313.

20. Hayasaka T., Inoue Y. Chromomycin А^ studies in aqueous solutions. Spectrophotometric evidence for aggregation and interaction with Herring sperm. deoxyribonucleic acid. Biochemistry, 1969, v.8, N 6, p. 2342-2347.

21. Торопова Е.Г. Метод культивирования опухолевых клеток в пробирках и его использование для первичного отбора новых противоопухолевых антибиотиков. Антибиотики, 1962, т.7, № 7, с. 598-601.

22. Шорин В. А., Россолимо O.K., Станиславская М.С., Блюмберг Н.А., Фшшппосьян С.Т., Лепешкина Г.Н. Противоопухолевая активность антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1962, т. 7, № 3, с. 60-64.

23. Россолимо АО .К. Действие оливомицина на развитие меланомы (штамм Гардинг-Пасси) у мышей. Антибиотики, 1964, т.9, J6 3, с. 249-252.

24. Кунраг И.А. Всасывание, циркуляция и выделение из организма антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1962, т. 7, № 3,с. 44-48.

25. Гольдберг JI.E., Кремер В.Е. Фармакологическое исследование антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1962, т. 7, № 3, с. 53-57.

26. Баумштейн В.Е., Гольдберг Л.Е. Экспериментальное изучение влияния оливомицина на функцию почек и печени. Антибиотики, 1964, т. 9, & 3, с. 252-257.

27. Вертоградова Г.П. Действие антибиотика оливомицина на кровь лабораторных животных. Антибиотики, 1962, т. 7, & 3, с. 48-53.

28. Белова И.П., Муравейская B.C. Гистопатологические изменения в органах животных после введения антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1962, т. 7, № 3, с. 57-59.

29. Маевский М.М., Романенко Е.А., ЦУразова А.П., Мольков Ю.Н., Тимофеевская Е.А., Бондарева А.С., Мазаева В.Г., Тальцина В.А., Вязова О.И. Влияние антибиотика оливомицина на перевивные опухоли. Антибиотики, 1962, т. 7, № 3, с. 64-66.

30. Кучкарев Р.Н. Предварительные результаты клинического испытания антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1962, т. 7,1. J£ 3, с. 67-70.

31. Кучкарев Р.Н. Опыт клинического изучения новых противоопухолевых антибиотиков хризомаллина и оливомицина. Автореферат, дис. канд. мед. наук, М., 1966.

32. Шорин В.А., Россолимо O.K. Экспериментальное исследование противоопухолевой активности 6 антибиотиков из группы оливомицина. Антибиотики, 1965, т.10, № I, с.48-53.

33. Седов К.А., Сорокина И.Б., Берлин Ю.А., Колосов М.Н. Оливо-мицин и родственные антибиотики. ХХШ. Действие оливомицинов, хромомицинов и листрамицина на лейкоз мышей линии С57 ВС. Антибиотики, 1969, т. 14, № 8, с. 721-725.

34. Милонов Б.В., Раевский И.Г. Клиническое применение антибиотика оливомицина. Антибиотики, 1964, т. 9, № 7, с. 649652.

35. Смирнова Й.Н. Результаты лечения больных с тонзиллярными опухолями оливомицином. Антибиотики, 1969, т. 14, Je 3, с. 271-274.

36. Астрахан В.И., Гарин А.М. Оливомицин в терапии больных со злокачественными опухолями яичка. Антибиотики, 1970, т. 15, В 9, с. 837-840.

37. Савинова В.Ф. Противоопухолевые антибиотики оливомицин, бру-неомицин, рубомицин и их применение в клинике. М.: Медицина, 1971, с. 296-317.

38. Переводчикова Н.И. Клиническая химиотерапия опухолевых заболеваний. М.: Медицина, 1976, с. 79-81.

39. Нифонтова Т.П. Экспериментальное изучение действия оливомицина на меланобластому сосудистого тракта глаза. Антибиотики, 1978, т. 23, № 8, с. 736-740.

40. Новикова I.A., Савинова В.Ф. Химиотерапия при хорионэпите-лиоме матки. Вестн. АМН СССР, 1968, & 6, с. 53-57.

41. Ильинская Е.Г., Панков А.К., Сидоренко Ю.С., Бирбраер В.М.

42. Применение оливомицина в лечении рака шейки штки. Вопр. онкол., 1976, т. 22, $6, с. 31-36.

43. Кундзиня И.А., Зитаре И.Я., Местное применение оливомицина в лечении раковых язв. Антибиотики, 1963, т.8, № 12, с. III3-III6.

44. Лайко A.B. О действии некоторых противоопухолевых антибиотиков на синтез нуклеиновых кислот в клетках стафилококков. Антибиотики, 1962, т. 7, В 7, с. 601-605.

45. Ляшенко В.А. Влияние оливомицина на содержание нуклеиновыхкислот в перевиваемой саркоме 180 мышей. Антибиотики, 1964, т. 9, № 6, с. 520-524.

46. Глушакова Н.Е., Таранович Г. Л. Влияние оливомицина на нуклеиновый, аминокислотный и энергетический обмен. Антибиотики, 1965, т. 10, № 9, с. 804-808.

47. Хохлова Д.С. Влияние оливомицина на биосинтез РНК опухоли печени крыс in vivo. Вопр. мед. химии, 1969, ХУ, вып.З, с. 280-286.

48. Гаузе Г.Г., Лошкарева H.H. Действие оливомицина на клетки асцитной карциномы Эрлиха. Вопр. мед. химии, 1965, XI, вып. 4, с. 64-66.

49. Залмансон Е.С., Зеленин A.B., КафианиК.А., Лобарева Л.С., Ляпунова Е.А., Тимофеева М.Я. О механизме действия антибиотика оливомицина. Вопр. мед. химии, 1966, ХП, вып.1,с. 58-62.

50. Гаузе Г.Г., Лошкарева Н.П., Збарокий И.Б. Влияние оливомицина и эхиномицина на инициирование и рост молекул РНК, катализируемых РНК-полимеразой. Мол. биол., 1969, т. 3, вып. 4, с. 566-570.

51. Hartmann G., Beissner К.A., Behr W., Honikel К., Sippel А. Antibiotica als Hemmstoffe der Hukleinsäure und Proteinsynthese. Angew. Chem., 1968, Bd. 80, Nr 18, S. 710-718.

52. Kersten W., Kersten H. Die Bindung von Daunomycin, Cinerubin und Chromomycin A^ an Nukleinsäuren. Biochem. Z., 1965, Bd. 341, Nr 2, S. 174-183.

53. Ward D.C., Reich E., Goldberg I.H. Base specifity in the interaction of polynucleotides with antibiotic drugs. -Science, 1965, v. 149, p. 1259-1263.

54. Behr W., Hartmann G. Spectralphotometrische Untersuchungenber die Wechselwirkungen zwishen Chromomycin A^ und Nukleinsäuren. Biochem. Z., 1965, Bd. 343, S. 519, 527.

55. Nayak R., Sirst M., Podder S.K. Role of magnesium ion on the interaction between chromomycin A^ and deoxyribonucleic acid. FEBS Lett., 1973, v. 30, p. 157-162.

56. Kurnit D.M., Shafit B.R., Maic J.J. Multiple satellite deoxyribonucleic acids in the calf and their relation to the sex chromosomes. J. Mol. Biol., 1973, v. 81, p. 274284.

57. Kersten W., Kersten H., Szybalski W. Physicochemical properties of complexes between deoxyribonucleic acid and antibiotics with affect ribonucleic acid synthesis. Biochemistry, 1966, v.5, N 1, p. 236-244.

58. Франк-Каменецкий М.Д. Теоретическое рассмотрение влияния различных факторов на тепловую денатурацию ДНК. ДАН СССР, 1964, т. 157, $ I, с. 187-190.

59. Kersten Н., Kersten W. Inhibitors of nucleic acid synthesis.- Berlin: Springer-Verlag, 1974, p. 90-92.

60. Дудник Ю.В., Нетыкса E.M. Взаимодействие сибиромицина с ДНК вытеснение актиномицина Д и оливомицина А из комплексов с ДНК - Антибиотики, 1972, т. 17, № I, с. 44-48.

61. Зеленин А.В., Залманзон Е.С., Петрикевич С.Б. О применении люминесцентной микроскопии для исследования процессов внутриклеточного распределения антибиотиков. Фармакология и токсикологич, 1967, т. 30, №6, с. 751-754.

62. Hill Bridget Т., Wattley S., A simple, rapid microassay for DM. PEBS Lett., 1975, v. 56, N1, p. 20-23.

63. Дмитриевская Т.В., Орехов А.Н., Попова О.Н., Баренбойм Г.М. Использование проточной цитофлуориметрии для анилиза связывания оливомицина и других противоопухолевых антибиотиковс ДНК в целых фиксированных клетках. Химт- фарм.ж., 1981.

64. Редаи И., Болдог И., Юсупова С. Влияние нейтрального красного на цитотоксическую активность оливомицина. Антибиотики, 1980, т. 15, №6, с. 460-464.

65. Баренбойм Г.М., Дмитриевская Т.В., Иванов I.C., Морозова

66. Г.И. Контактная флуоресцентная икроскопия в фармакологии и биологических испытаниях химических соединений. Хим.-фарм. ж., 1982. т. 16, №9, с. 15-19.

67. Lerman L.S. Structural considerations in the interaction of DM and acridines. J. Mol. Biol., 1961, v. 3, I 1, p. 18-30;76v Гурский Г.В. Структура комплекса ДНК актиномицин. - Мол. биол., 1969, т. 3, вып. 5, с. 749-757.

68. Iyer V.N., Szybalski W. A molecular mechanism of mitomycin action: linking of complementary DM strands. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1963, v. 50, И. 2, p. 355-362.

69. Крылов А.С. Молекулярные модели комплексов с ДНК противоопухолевых антибиотиков, специфичных к определенным основаниям ДНК. -Антибиотики, 1982, т. 27, №3, с. 61-74.

70. Reichman M.E., Rice S.A., Thomas C.A., Doty P. A further examination of the molecular weight size of desoxypentose nucleic acid. -J. Amer. Chem.Soc., 1954,v.74, N 11, p.3047-305

71. Karpel R.L., Shirley M.S., Holl S.R. Interaction of the ruthenium red cation with nucleic acid double helices. -Biophys. Chem., 1981, v. 13, N 2, p. 151-165.

72. Аванесян O.C., Бендерский B.A., Лрикенштейн B.X., Броуде В.Л.

73. Лаврушко А.С., Тартаковский И.И., Филиппов П.Т., Особенности генерации света и ВКР в кристаллах антрацена. Квантовая электроника, 1977, т. 4, с. 725-729.

74. Рябинин Ю.А. Стробоскопическое осциллографирование. М., Сов, радио, 1972, 272 с.

75. Galanin M.D., Khan-Magometova Sh.D. The spectroscopic investigation of the fluorescence decay time of the antracene crystal. J. Lumin., 1974, v.9, N 6, p. 459-466.

76. Berlman I.B. Handbook of Fluorescence Spectra of Aromatic Molecules. Academic Press, 1965, 258 p.

77. Shinitzky M., Difnoux A., Gitler C., Weber G. Microvisco-sity and order in the hydrocarbon region of micelles and membranes determined with fluorescent probes. I. Synthetic micelles. Biochemistry, 1971, v. 10, U 11, p. 2106-2113.

78. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биомембран. -М.: Наука, 1980, с. 67-68.

79. Perrin Р. Polarisation de la lumiere de fluorescence. Vie moyenne des molecules dans l'etat excite. J. Phys. Radium, 1926, v. 7, N12, p. 390-401.

80. Барлтроп Дж., Койл Дж. Возбужденные состояния в органической химии. М.: Мир, 1978, с. 67-70.

81. Ellis R.L., Kuehnlenz G., Jaffe H.H. The use of the CNDO method in spectroscopy.VI.Further n- Transitions.- Theoret. chip.acta, 1972, v.26, p. 131-140.

82. Шамовский И.1., Баренбойм Г.М.»Овчинников А.А. Определение оптимальных параметров атом атомных потенциальных функций.- Биоорг. хим., 1982, т. 8, №12, с. 1677-1690.

83. Степанов Введение в химию и технологию органических красителей. -М.: Химия, 1971, 447 с.

84. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста. М.: Медицина, 1975, 304 с.

85. Dickson J.A., Calderwood S.K. Effects of hyperglycemia and hyperthermia on the pH, glicolysis, and respiration of the Yoshida Sarcoma in vivo. J.Nat.Cancer Inst., 1979, v.63, N 6, p. 1371-1381.

86. Скорик H.A., Кумок B.H. Химия координационных соединений.- М.: Высш. школа, 1975, 207 с.

87. Burns V.W.F. Fluorescence polarisation characteristics of the complexes between ethidium. bromide and r-RNA, t RNA, and DNA. Arch. Biochem. and Biophys., 1971, v. 145, N 1, p. 248-254.

88. Баранов Е.П., Брикенштейн B.X., Дмитриевская Т.В., Барен-бойм Г.М. Исследование взаимодействия рубомицина и его агликона с ДНК флюоресцентными методами. Антибиотики, 1984, т. 29, №3, с. 208-214.

89. Yoda A., Yoda S. Influence of рН on the interaction of cardiotonic steroids with sodium- and potassium-dependent adenosine triphosphatase. Mol. Pharm., 1978, v. 14, IT 4, p. 624-632.