Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование ассоциации ряда генов-кандидатов с диабетической полинейропатией у пациентов с сахарным диабетом типа 1

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Исследование ассоциации ряда генов-кандидатов с диабетической полинейропатией у пациентов с сахарным диабетом типа 1"

На правах рукописи

ЯКУНИНА НАТАЛЬЯ ЮРЬЕВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ АССОЦИАЦИИ РЯДА ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ С ДИАБЕТИЧЕСКОЙ ПОЛИНЕЙРОПАТИЕЙ У ПАЦИЕНТОВ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ ТИПА 1

03.00.03 - Молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2006

АР06Й

Работа выполнена в лаборатории молекулярной диагностики и геномной дактилоскопии Государственного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов (ФГУП оГосНИИ генетика»)

Научный консультант- Доктор биологических наук, профессор Носиков Валерий Вячеславович

Научный руководитель' Кандидат биологических наук Воронько Ольга Евгеньевна

Официальные оппоненты Доктор медицинских наук, профессор Кандидат биологических наук Асанов Алий Юрьевич Бабенко Ольга Владимировна

Ведущая организация' Институт общей генетики РАН

Защита состоится «д?^» г в___00 часов на заседании

Диссертационного совета Д 217 013 01 при Государственном научно-исследовательском институте генетики и селекции промышленных микроорганизмов по адресу 117545, г Москва, 1-й Дорожный проезд, 1

С диссертацией можно ознакомиться а библиотеке ФГУП «ГосНИИ генетика»

Реферат разослан 4!Ь

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

В И Щербакова

РОС. НАЦИОНАЛЬНА» БИБЛИОТЕКА С.Г 08

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сахарный диабет (СД) типа 1 является одним из наиболее распространенных и тяжелых наследственных заболеваний человека Как правило, при наличии генетической предрасположенности он развивается в раннем возрасте и вызывает тяжелые осложнения, такие как поражения кровеносных сосудов, почечную недостаточность, слепоту, гангрены

Лечение уже развившегося СД типа 1 и его осложнений требует огромных материальных ресурсов С другой стороны, при своевременной профилактике заболевания у пациентов с повышенным генетическим риском можно как минимум значительно отсрочить появление первых симптомов развития осложнений

Одним из поздних осложнений сахарного диабета является диабетическая полинейропатия (ДПН) Эпидемиологические исследования свидетельствуют, что распространенность ДПН незначительна в момент диагностики СД типа 1 и прогрессивно нарастает по мере увеличения длительности и тяжести диабета Распространенность ДПН составляет 1-2% при впервые выявленном СД типа 1 и 50-70% при длительности СД свыше 15 лет Предполагается что патогенез ДПН является многофакторным Для развития данной патологии необходимым условием являются метаболические и сосудистые нарушения, но скорость развития ДПН зависит от генетической предрасположенности

Установление ассоциации генов-кандидатов с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению СД типа 1 и его осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента Поэтому в настоящее время одним из наиболее прогрессивных подходов является разработка стратегии ранней диагностики, прогнозирования и превентивной терапии заболевания с использованием генетических маркеров

Цель работы. Целью данной работы было изучение ассоциации с развитием ДПН при СД типа 1 ряда полиморфных маркеров генов-кандидатов I/D гена АРОВ, кодирующего аполипопротеин В, G(-186)T и е2/еЗ/е4 гена АРОЕ, кодирующего аполипопротеин Е, Leu55Met и Gln192Arg гена PONI, кодирующего параоксоназу 1, Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2, кодирующего параоксоназу 2, Рго72Агд гена ТР53, кодирующего супрессор опухолевого роста р53

Для достижения этой цепи были поставлены следующие задачи

1 Определить частоты аплелей и генотипов полиморфных маркеров генов АРОВ, АРОЕ, PON1, PON2 и ТРбЗ в группах русских больных СД типа 1 с ДПН и без ДПН

2 Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованных вь<борках для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием ДПН и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии

Научная новизна работы В данной работе впервые была изучена ассоциация полиморфных маркеров I/D гена АРОВ, G(-186)T и e2/s3/s4 гена АРОВ, Leu55Met и G>n192Arg гена PONI, Ala148Giy и Cys311Ser гена PON2 и Рго72Агд гена ТР53 с ДПН у русских пациентов г Москвы с СД типа 1

Практическая ценность работы. Изучение ассоциации полиморфных маркеров с ДПН у пациентов с СД типа 1 позволит оценить риск развития заболевания, прогнозировать его развитие и прогрессирование задолго до клинического проявления и, наконец, правильно формировать группы риска Эти исследования также могут способствовать наиболее эффективному проведению профилактики СД (мониторинг лиц группы риска, использование иммуно-модуляторов и/или иммуносупрессоров, превентивной инсулинотерапии и др )

Апробация работы. Диссертационная работа была представлена на заседании Секции молекулярной биологии Ученого совета ФГУП "ГосНИИ генетика" 27 февраля 2006 г Результаты настоящей работы докладывались на 14-ой Ежегодной научной конференции NEURODÍAB (г Регенсбург, Германия , 2004 г )

Публикации. По материалам работы опубликовано 5 печатных работ, включая 4 статьи, а также тезисы докладов и сообщений на международных конференциях

Структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов-введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, выводы и список литературы Материалы диссертации изложены на 114 страницах машинописного текста и содержат 9 таблиц и 4 рисунка

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Формирование групп больных СД типа 1 с наличием и отсутствием диабетической полинейропатии.

Для проведения исследования использовали геномную ДНК 186 больных СД типа 1 с наличием (группа "ДПН+") и отсутствием (группа "ДПН-) диабетической полинейропатии Группы пациентов формировали по принципу не перекрывающихся ("полярных") фенотипов В группу ДПН+ вошли больные с длительностью СД типа 1 менее 5 лет и наличием диабетической полинейропатии Контрольную группу "ДПН-" составили пациенты, болеющие СД типа 1 на протяжении 10 и более лет без клинического диагноза ДПН Характеристика групп больных представлена в таблице 1

Геномную ДНК пациентов использовали для амплификации фрагментов ДНК, содержащих полиморфные маркеры ряда генов, предположительно вовлеченных в патогенез ДПН при СД типа 1

Анализ нуклеотидных последовательностей интересующих нас регионов осуществляли с помощью системы NCBI в сети Интернет (www ncbi nlm nih gov) Использовали следующие разделы MapView (построение генетической карты), dbSNP (информация о полиморфных маркерах) Для подбора праймеров и рестриктаз использовали пакеты программ DNAStar и VectorNTI 9 О

Таблица 1.

Общая характеристика обследованных групп больных СД типа 1 с наличием ("ДПН-«'") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Показатель (средний ± в 0 *) «ДПН+» «ДПН-»

Пол, м/Ж 58/37 31/60

Возраст, лет 25,5 ± 14,5 27,5 ±8,5

Возраст начала СД типа 1, лет 22,4 ±6,3 12,0 ± 3,0

Длительность СД типа 1, лет 1,5 ± 1,4 15,5 ±5,5

Уровень НЬА1, % 6,3 ±1,5 7,1 ± 1,7

* S D - стандартное отклонение

Идентификация аллелей полиморфных маркеров проводилась с использованием полимеразной цепной реакции, расщепления фрагментов ДНК рестриктазами и электрофоретического разделения фрагментов ДНК в 8%-ном полиакриламидном геле

2. Исследование ассоциации полиморфных маркеров G(-186)Tu е2/еЗ/е4 гена АРОЕ с ДПН при СД типа 1.

Аполипопротеин Е (ароЕ) играет ключевую роль в транспорте липидов Он присутствует в липопротеинах очень низкой плотности (ЛПОНП), в липопротеинах низкой плотности (ЛПНП), и в антиатерогенных липопротеинах - липопротеинах • высокой плотности (ЛПВГ!) (Miettinen, 1991) АроЕ участвует в доставке

холестерина к тканям от мест его синтеза или всасывания в составе ^ липопротеинов Эта функция осуществляется благодаря взаимодействию данного

апобелка с рецепторами ароВ, ароЕ и рецепторами ЛПНП, расположенными на мембранах гепатоцитов и клеток периферических тканей

Также предполагают, что синтез ароЕ стимулируется окислением липидоз (Zhang, 1994) В исследованиях в условиях in vitro было показано, что ароЕ может блокировать окислительный стресс за счет связывания некоторых металлов, стимулирующих образование цитотоксичных радикалов (Miyata et al, 1996)

Помимо этого ароЕ является главным аполипопротеином нервной ткани и в качестве основного переносчика холестерина вовлечен в процессы регенерации миелиновых оболочек нервных волокон (Mahley et al, 1988)

Ген аполипопротеина Е расположен на длинном плече хромосомы 19 -19q13 2 Известен ряд полиморфизмов в гене АРОЕ и фланкирующих егс областях В промоторной области гена АРОЕ расположен однонуклеотидный полиморфизм G/T в положении -186 В ряде работ было показано, что существует корреляция этого маркера с уровнем экспрессии гена АРОЕ Изучение ассоциации полиморфного маркера G(~186)Tгена АРОЕ с ДПН в других популяциях ранее не проводилось

В нашей работе частоты аллелей в группах "ДПН+" и "ДПН-" составили аллель Т- 0,628 и 0,610, аллель G - 0,372 и 0,390, соответственно Частота 1 аллеля Т оказалась выше в группе "ДЛН+". но это различие не было

статистически значимым ' Распределение частот генотипов оказалось следующим 8 группе "ДПН+"

ТТ— 0,351, TG - 0 553, GG - 0,096, в группе "ДПН-" 7Т- 0,308, TG - 0,604, GG -0,088 При сравнительном анализе распределения аплелей и генотипов полиморфного маркера в группах "ДПН+" и "ДПН-" статистически достоверных различий получено не было (табл 2) Таким образом, полученные данные

свидетельствуют об отсутствии ассоциации полиморфного маркера в(-186)Тгена АРОЕ с развитием ДПН при СД типа 1

Таблица 2.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера 6(-186)Т гена АРОЕ у больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели и генотипы Частоты аллелей и генотипов Р

ДПН+ ДПН-

Аллель Т 0,628 0,610 > 0,05

Аллель G 0,372 0,390 >0,05

Генотип TT 0,351 0,308 >0,05

Генотип TG 0,553 0,604 >0,05

Генотип GG 0,096 0,088 >0,05

В кодирующей области гена описаны два полиморфных участка, определяющие образование трех изоформ аполипопротеина Е Это однонуклеотидные полиморфизмы С/Т, которым соответствуют аминокислотные полиморфизмы Arg/Cys в положении 112 и 158 полипептидной цепи, и, соответственно, изоформы е2 (Cys в положениях 112 и 158), s3 (Cys в положении 112, Arg в положении 158) ие4 (Arg в положениях 112 и 158) (Hixson et al, 1990)

Изучение ассоциации полиморфного маркера s2/e3/e4 гена АРОЕ с ДПН в других популяциях ранее не проводилось Основная часть работ указывает на аллель е4 как на важный маркер дислипидемии (Luc et al, 1994, Wilson et al, 1994) и фактор риска сосудистых патологий (Wilson et al, 1996, van Boekxmeer et al, 1992; Eichner et al, 1993) В то же время, на многих популяциях была исследована ассоциация полиморфного маркера е2/еЗ/е4 гена АРОЕ с развитием диабетической нефропатии (ДН) Положительная ассоциация аллеля е2 гена АРОЕ с развитием ДН при диабете типа 1 была обнаружена у европейцев i

Великобритании (Chowdhury et al, 1998) и Франции (Hadjadj et al, 2000) Аналогичные результаты были получены и на группе пациентов с сахарным диабетом типа 1 в европейской популяции Германии (Werte et al, 1998) и России (Воронько О Е и соавт , 2002)

В нашей работе идентификацию аллелей проводили после расщепления продукта амплификации длиной 252 п н рестриктаэой Hhal Аллелю s2 на

полиакриламидном геле соответствовали фрагменты 91 и 83 л н , аллелю еЗ - 91 48 и 35 пн , аллелю е4 - 72, 48, 35 и 19 пн (рис. 1)

Рис.1. Злектрофоретмческое разделение в 10% полиакриламидном геле продуктов расщепления рестриктазой НИа1 амплифицированного фрагмента ДНК гена АРОЕ. Генотипы по дорожкам: 1,7- ¿3/еА\ 2 - 5, 9 -10 - еЗ/еЗ; 6 - е2/еЛ\ 8 - еУЕЗ\ 11 -12 -еШ2.

Наиболее часто в обеих группах (табл 3) встречался аллель еЗ (0,731 и 0,663 в группах "ДПН+" и "ДПН-", соответственно), а наиболее распространенным генотипом был еЗ/еЗ (0 637 и 0,558, соответственно)

Таблица 3.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера е2/еЗ/вЛ гена АРОЕ у больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели и генотипы Частоты аллелей и генотипов Р

ДПН+ ДПН-

Аллель е2 0,181 0,237 >0,05

Аллель еЗ 0,731 0,663 >0,05

Аллель е4 0,088 0,100 >0,05

Генотип е2/е2 0,121 0,116 >0,05

Генотип е2/еЗ 0,066 0,137 >0,05

Генотип е2/е4 0,055 0,105 >0,05

Генотип Зе/еЗ 0,637 0,558 >0,05

Генотип вЗ/е4 0,121 0,074 >0 05

Генотип е4/е4 0,000 0,011 >0,05

В распределении генотипов наблюдалось возрастание доли генотипа еЗ/еЗ в

группе "ДПН+" (0,637 против 0,558 в группе "ДПН-") при уменьшении содержания

всех остальных генотипов, кроме в2/е2 и еЗ/в4 (0,121 в обеих группах) Однако после введения поправки на множественность генотипов разница значений оказалась статистически не достоверной (табл 3)

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об отсутствии ассоциации полиморфного маркера еТ/еУеА гена А РОЕ с развитием ДПН при СД типа 1 у русских пациентов г Москвы

3. Исследование ассоциации полиморфного маркера //0 гена АРОВ с ДПН при СД типа 1.

Аполипопротеин В (ароВ) - один из основных белков, входящих в состав ЛПОНП и ЛПНП Он является компонентом всех классов липопротеинов, с которыми связывают развитие атеросклероза, причем повышенная концентрация ароВ в плазме - фактор риска ИБС и развития атеросклероза у лиц с ожирением (1_атагсЬе е( а1, 1996)

Аполипопротеин В необходим для синтеза и секреции хиломикронов и ППОНП и является основным лигандом для рецептора ЛПНП Помимо этого, он принимает участие в транспорте холестерина и триглицеридов в составе липопротеинов

АроВ известен в двух основных формах ароВ-100, синтезирующийся в печени, и ароВ-48, синтезирующийся в кишечнике и связанный с транспортом хиломикронов и ЛПОНП из кишечной стенки в лимфу, а оттуда в кровь В отличие от ароВ-100, ароВ-48 не способен связываться со специфическими рецепторами и связывание липа протеиновых частиц, содержащих этот апобелок, происходит при участии аполипопротеина Е, передаваемого на них с ЛПВП

Оба варианта ароВ кодируются одним геном, расположенным на коротком плече хромосомы 2 в области 2р23-р24 В гене АРОВ известен ряд полиморфных участков Полиморфный маркер 1/0 представляет собой полиморфизм типа вставка/отсутствие вставки в области, кодирующей сигнальный пеггтид Аллели различаются на 9 нуклеотидов, кодирующих аминокислоты 14-16 сигнального пептида (1_еи-А1а-1.еи)

В нашей работе были обнаружены следующие частоты аллелей в группах "ДПН+" и "ДПН-" аллель I - 0,758 и 0,654, аллель О - 0,242 и 0,346, соответственно У больных с "ДПН+" самым распространенным генотипом были гомозиготы И, тогда как в группе "ДПН-" преобладали гетерозиготы ¡/О

Распределение частот генотипов оказалось следующим' в группе "ДПН+"- II -0,557, Ю - 0,402, ОО - 0,041; в группе "ДПН-"' II - 0,385, Ю - 0,538, ОО - 0,077 При сравнительном анализе распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера в группах "ДПН+" и "ДПН-" были получены статистически достоверные различия в распределении обеих аллелей и генотипа II (табл 4) При этом риск развития патологии связан с носительством аплеля I (ОЯ = 1,66; С1 = 1,06 - 2,59) * и возрастает при накоплении данного аплеля У гомозиготных носителей генотипа

II Ой равен 2,01 (С1 = 1,12 - 3,6) Аллель О, напротив, ассоциирован с » пониженным риском развития ДПН (ОИ = 0,6, С1 = 0,39 - 0,95)

Таблица 4.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера 1Ю гена АРОВ й группе больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели и генотипы Частоты аллелей и генотипов Р OR Cl

ДПН+ ДПН-

Аллель / 0,758 0,654 0,031 1,66 1,06-2,59

Аллель О 0,242 0,346 0,031 0,60 0,39 - 0,95_

Генотип II 0,557 0,385 0,020 2,01 1,12-3,60

Генотип /О 0,402 0,538 нд 0,58 0,32-1,03

Генотип ОО 0,041 0,077 нд 0,52 0,15-1,83

OR - отношение шансов, от английского odds ratio

Известно, что сигнальный пептид играет важную роль во внутриклеточном транспорте вновь синтезированного белка, а также в секреции и деградации аполипопротеина Многие данные говорят о том, что ген АРОВ вовлечен в развитие сердечно-сосудистых патологий, при этом полиморфный маркер 1/D ассоциирован в различных популяциях с изменениями липидного профиля Выла установлена связь между данным полиморфизмом и уровнем триглицеридов (Хи I et al, 1990), общего холестерина и ЛПНП в плазме (Visvikis et al, 1993) Также было

показано, что у гомозиготных носителей генотипа DD снижена секреция ароВ по t сравнению с носителями аллеля I (Riches et al, 1998)

У китайцев аллель D также связан с пониженным уровнем ЛПВП в плазме (Ye et al 1994) Однако работа выполненная на японской популяции, не подтвердила связи полиморфного маркера 1/D с уровнем триглицеридов и ЛПВП (Zaman et al, 1997)

Данные об ассоциации аллеля D с неблагоприятным липидным профилем получены и в исследованиях, проведенных в Испании и Дании (Turner et al, 1995; Hansen et al, 1994) В исследованиях, проведенных на сербской (Glisic et al, 1997) и шотландской (Gaffney et al, 1993) популяциях такой ассоциации не было обнаружено Несколько работ демонстрируют связь аллеля D с повышенным уровнем холестерина в плазме у больных с инфарктом миокарда (Turner et al, 1995; Bohn et al 1994) В работе, сделанной на норвежской популяции, <

приводятся данные об ассоциации аллеля I с низким содержанием ЛПНП и холестерина, связанного с ЛПНП (Bohn et al, 1994) Однако не показано никакой 1

ассоциации данного полиморфного маркера с уровнем ЛПВП в плазме (Peacock et al, 1994).

Ассоциацию гена АРОВ с ДПН при СД типа 1 ранее не изучали, и полученные нами результаты - первый пример достоверной ассоциации гена АРОВ с ДПН при СД типа 1 Следует отметить, что, как и в случае с нефропатией (ДН) при СД типа 1, повышенный риск развития ДПН ассоциирован с аллелем I и генотипом II гена АРОВ (Воронько и соавт, 2005), что косвенно свидетельствует о существовании общих механизмов развития диабетических осложнений при СД типа 1.

Полученные нами результаты позволяют сделать вывод о том, что полиморфный маркер I/O гена аполипопротеина В ассоциирован с развитием ДПН при СД типа 1 у русских пациентов г Москвы

4. Исследование ассоциации полиморфного маркера Рго72Агд генаТР53 с ДПН при СД типа 1,

Белок р53 играет важную роль в регуляции транскрипции и поддержании геномной стабильности, взаимодействует со многими клеточными белками Показано, что повреждение ДНК приводит к накоплению р53, который в свою ^

очередь блокирует прогрессирование клеточного цикла в фазе G1 таким образом препятствуя репликации ДНК до репарации повреждения Если репарация повреждения невозможна то белок р53 запускает механизм апоптоза

Ген ТР53, кодирующий белок р53, расположен на хромосоме 17q13 1 В данном гене и его фланкирующих областях обнаружен ряд полиморфных участков, в том числе однонуклеотидный полиморфизм G/C, которому соответствуёт аминокислотный полиморфизм Pro/Arg в положении 72

попипептидной цепи (Бухман и соавт , 1988; Ara et al, 1990) В белке р53 описано несколько функционально-значимых доменов (Ко et al, 1996) Участок, образованный аминокислотными остатками с 43 по 73, образует дополнительный транскрипционный домен (Walker et al, 1996) Участок, обогащенный остатками пролина, между аминокислотами 63 и 97 предположительно вовлечен в процессы транскрипционно-зависимого (Venot et al, 1998) и транскрипционно-независимого апоптоза (Sakamuro et al, 1997)

Проведенные на зарубежных популяциях исследования с использованием полиморфного маркера Рго72Агд гена ТР53 в основном посвящены изучению генетической предрасположенности к раку (Granja et al, 2004, Papadakis et al, 2002) Интересно, что при сравнении частот аллелей полиморфного маркера Рго72Агд в различных популяциях наблюдалось увеличение доли аплеля Pro в близких к экватору популяциях (Beckman et al, 1994)

Так как принято считать, что белок р53 является одним из основных участников клеточных процессов, приводящих к программируемой гибели клеток, была исследована ассоциация полиморфного маркера Рго72Агд гена ТР53 с первичной открыто угольной глаукомой Такое исследование проводилось на китайской популяции и было установлено, что с развитием патологии ассоциирован аллель Pro (Lin et al, 2002) Недавно было показано, что р53 ингибирует развитие аутоиммунного диабета и модулирует врожденный иммунитет через взаимодействие с фактором STAT-1 (signal transducer and activator of transcription) и цитокинами, связанными с иммунитетом и воспалительными реакциями (Zheng et al, 2005)

Также была показана роль р53 в апоптозе ретиноцитов у больных с диабетической ретинопатией (El-Asrar et al, 2004) В то же время, ассоциация полиморфных маркеров гена ТР53 с диабетической полинейропатией ранее не изучалась

В нашей работе частоты аллелей в группах "ДПН+" и "ДПН-" Были следующими- аллель Pro - 0,676 и 0,505, аллель Arg - 0,324 и 0,495, соответственно Распределение частот генотипов оказалось следующим в группе "ДПН+" Pro/Pro - 0,505, Pro/Arg - 0,341, Arg/Arg - 0,154, в группе "ДПН-" Pro/Pro - 0,316, Pro/Arg -0,379, Arg/Arg - 0 305 Различия в распределении частот генотипов и аллелей между группами были статистически достоверны (табл 5) При этом риск развития патологии связан с носительством аллеля Pro (OR - 2,04 Cl = 1,34 - 3,11) и

генотипа Pro/Pro (OR - 2,21; CI = 1,22 - 4,02) Аллель Arg, напротив, ассоциирован с пониженным риском развития ДПН (OR = 0,49; CI = 0,32 - 0,75), также как и генотип Arg/Arg (OR = 0,41; CI = 0,20 - 0,85)

Таблица S.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Рго72Агд гена ТР53 в группах больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели и генотипы Частоты аллелей и генотипов Р OR CI

ДПН- ДПН+

Аллель Pro 0,505 0,676 0,001 2,04 1,34-3,11

Аллель Arg 0,495 0,324 0,001 0,49 0,32 - 0,75

Генотип Pro/Pro 0,316 0,505 0,011 2,21 1,22-4,02

Генотип Pro/Arg 0,379 0,341 >0,05 0,85 0,46-1,54

Генотип Arg/Arg 0,305 0,154 0,016 0,41 0,20 - 0,85

Таким образом, можно сделать вьвод о том, что полиморфный маркер Рго72Агд гена ТР53 ассоциирован с развитием ДПН при СД типа 1 у русских пациентов г Москвы

5. Исследование ассоциации полиморфных маркеров LeuSSMet и Gln192Arg гена PON1 с ДПН при СД типа 1.

Параоксоназа-1 (PON-1) представляет собой зависимую от йонов кальция эстерилгидролазу В условиях т vitro она способна гидролизовать множество субстратов включая ароматические карбоксикислоты и органофосфаты, такие как параоксон (метаболит пестицида паратиона ингибитор холинэстеразы) (Mackness et al, 1996) В условиях in vivo PON-1 связана с apoAl, основным белком ЛПВП

В 1991 году было показано что PON-1 ингибирует зависимое от ионов меди окисление ЛПНП Была выдвинута гипотеза о том, что существуют механизмы, осуществляющие деградацию ранних продуктов окислительного стресса и прекращающие процессы окисления, причем в один из них вовлечена параоксоназа (Furlong et al, 1993) На различных линиях мышей было продемонстрировано что максимальной антиокислительной защитой обладают ЛПВП из плазмы мышей с повышенным уровнем PON-1 в плазме и повышенным уровнем экспрессии мРНК гена PON1 (Shih et al, 1996) А ЛПВП у мышей, дефектных по гену РОЛ/1, не способны предотвращать перекисное окисление

липидов, даже в присутствии других антиокислительных агентов (Shih et al, 1998) Предполагают, что PON-1 гидролизует окисленную форму пальмитоил-арахидонилфосфатидилхолина - компонента ЛПНП (Watson et al, 1995)

Ген параоксоназы (PONI) расположен на длинном плече хромосомы 7 -7q21-q22 (Humbert et al, 1993) и принадлежит к кластеру, содержащему кроме него еще 2 гена того же семейства' PON2 и PON3

В кодирующей последовательности гена PON1, обнаружены два аминокислотных полиморфизма Met/Leu в положении 55 и Gin/Arg в положении 192 полипептидной цепи (Humbert et al, 1993)

Уровень PON-1 в плазме различается существенно, однако активность этого фермента относительно постоянна у каждого конкретного индивида (Blatter-Garin et al, 1994, Oavies et al, 1996) Предполагается, что молекулярной основой данных различий является полиморфизм Gln192Arg PON1A изоформа с низкой активностью по отношению к параоксону содержит глутамин в позиции 192 полипептидной цепи, в то время как PON1B - изоформа с высокой активностью по отношению к параоксону, содержит аргинин в данной позиции Способность этих изоформ гидролизовать параоксон различается почти в 8 раз (Davies et al, 1996) Полиморфизм Met/Leu в положении 55 не связан с активностью фермента, но существует сильное неравновесие по сцеплению между данными полиморфизмами (Antikainen et al, 1996, Hermann et al, 1996, Suehiro et al, 1996)

Данные по изучению ассоциации полиморфных маркеров гена PON1 с ДПН на других популяциях отсутствуют Однако в ряде работ было показано, что наличие аллеля Gin связано с более сильной защитой против окислительного стресса, несмотря на более низкую активность фермента У носителей генотипа Arg/Arg параоксоназа, хотя и обладает большей параоксоназной активностью, менее эффективна при защите от перекисей (Mackness et al, 1997, 1998)

На двух группах больных СД типа 2 из европейской и японской популяций была показана положительная ассоциация аллеля Arg и генотипа Arg/Arg полиморфного маркера Gln192Atg с развитием ишемической болезни сердца (Ruiz et al, 1995, Odawara et al, 1997) Ассоциация аллеля Arg с развитием сердечно-сосудистых патологий при СД типа 2 найдена у китайцев (Osei-Hyiaman et al, 2001), однако другая работа, выполненная на китайской популяции, такой ассоциации не показала (Cao et al, 1999)

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Leu55Met гена PON1 в группах "ДПН+" и "ДПН-" показано в таблице 6 Частоты аллелей в фуппах "ДПН+" и "ДПН--" были следующими аллель Leu - 0,668 и 0,667, аг.лвль Met - 0,332 и 0,333, соответственно Распределение частот генотипов оказалось следующим- в группе "ДПН+"- Leu/Leu - 0,402, Leu/Met - 0,533, Met/Met - 0,065, в группе "ДПН-" Leu/Leu - 0,393, Leu/Met - 0,548, Met/Met- 0,060

Таблица 6.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера LeuS5Met гена PON1 у больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели и генотипы Частоты аллелей и генотипов Р

ДПН+ дпн-

Аллель Leu 0,668 0,667 >0,05

Аллель Met 0,332 0,333 >0,05

Генотип Leu/Leu 0,402 0,393 >0,05

Генотип Leu/Met 0,533 0,548 >0,05

Генотип Met/Met 0,065 0,060 >0,05

Различия в распределении частот генотипов и аллелей между группами были статистически недостоверны (табл 6) Таким образом, полученные данные свидетельствуют об отсутствии ассоциации полиморфного маркера LeuSöMet гена PON1 с развитием ДПН при СД типа 1

Для идентификации аллелей полиморфного маркера Gln192Arg гена PON1 использовали расщепление амплифицированного фрагмента ДНК этого гена, содержащего данный полиморфный участок, рестриктазой BspPI (рис 2) Распределение аллелей и генотипов этого полиморфного маркера в группах "ДПН+" и "ДПН-" показано в таблице 7 В обеих исследованных группах наблюдалось значительное преобладание аллеля Arg по сравнению с аллелем Gin В обеих группах с наибольшей частотой встречались гомозиготы Arg/Arg Гомозиготы Gln/Gln наблюдались редко - частота данного генотипа в группе "ДПН+" составила 0,02, а в группе "ДПН-" такой генотип не наблюдался вообще (табл 7) Различия в распределении частот аллелей и генотипов в сравниваемых группах были статистически недостоверными

/П

Рис.2. Элвктрофоретическое разделение в 10% полиакриламидном геле продуктов расщепления рестриктазой BspPI амплифицированного фрагмента ДНК гена PON1, содержащего полиморфизм Gln192Arg. Генотипы по дорожкам: 1,2, 4, 5,9 - Arg/Arg; 3, 6,8,10 - Gin/Arg; 7 - Gln/Gln.

Таблща 7.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Gln192Aij гена параоксомазы у больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов

ДПН+ ДПН-

Аллель Arg 0,847 0,863 > !,05

Аллель Gin 0,153 0,137 >0Р5

Генотип Arg/Arg 0,716 0,725 >0,05

Генотип Arg/Gin 0,263 0,275 0,05

Генотип Gln/Gln 0,021 - >0,05

На основании полученных данных можно сделать вывод об отсутствии ассоциации полиморфного маркера Gln192Arg гена PON1 с развитие ДПН при СД типа 1 у русских пациентов г Москвы Наши результаты согпсуются с полученными ранее данными об отсутствии ассоциации полиморфныхмаркеров гена PON1 с развитием другого осложнения СД типа 1 - диа&пческой нефропатии

6. Исследование ассоциации полиморфных маркеров AM48G/) и Cys311Ser гена PON2 с ДПН при СД типа 1.

Параоксоназы кодируют ферменты антиокислительной защиты органи1а. участвуют в гидролизе окисленных производных липопротеинов, а таке

вовлечены во внутриклеточные процессы, индуцированные окислительным стрессом Физиологическая роль параоксоназы-2, продукта гена PON2, еще до конца не изучена Экспрессия гена PON2 обнаружена во многих тканях, включая мозг, печень и почки, а также выявлена ассоциация полиморфных маркеров данного гена с развитием диабетической нефропатии при сахарном диабете типа 2

Полиморфный маркер Ala148Gly гена параоксоназы 2 представляет собой однонуклеотидный полиморфизм G/C, которому соответствует аминокислотный полиморфизм Ala/Gly в положении 148 полипептидной цепи

В нашей работе аллель Ala преобладал в группе "ДПН+", а в группе "ДПН-", напротив, преобладающим был аллель G/y, но это различие не было статистически значимым Распределение частот генотипов оказалось следующим' в группе "ДПН+" Ala/Ala - 0,295, Ala/Gly - 0,663 и Gly/Gly-0,042; в группе "ДПН-"

Ala/Ala - 0,198, Ala/Gly - 0,758 и Gly/Gly - 0,044 При сравнительном анализе i

распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера в группах "ДПН+" и "ДПН-" статистически достоверных различий получено не было (табл 8)

Таблица 8.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера А1а148в!у гена РОЛ/2 у больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели ft грнотипы Частоты аллелей и генотипов Р

ДПН+ ДПН-

Аллель Ala •'■ ■ 0,626 0,577 >0,05

Аллель Gly ■ 0,374 0,423 >0,05

Генотип Ala/Ala 0,295 0,198 >0,05

Генотип Ala/Gly 0,663 0,758 >0,05

Генотип Gly/Gly 0,042 0,044 >0,05

Таким образом полиморфный маркер Ala148Gly гена РОЮ не ассоциирован с ДПН при.гСД типа 1 у русских пациентов г Москвы, но это не является доказательством незначительной роли данного гена в патогенезе микроангиопатий По-видимому, необходимы дальнейшие исследования, направленные на поиск новых полиморфных маркеров в данном гене и увеличение размера групп больных при сохранении условий отбора пациентов

Полиморфный маркер Cys311Ser гена PON2 представляет собой однонуклеотидный полиморфизм G/C которому соответствует аминокислотный полиморфизм Cys/$er в положении 311 полипептидной цепи

В нашей работе при исследовании распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера Сув3115вг гена РОЫ2 в группе больных с ДПН по сравнению с группой больных без ДПН статистически достоверных различий обнаружено не было (табл 9)

Таблица 9.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера СуяЗИЗвг гена РОЫ2 у больных СД типа 1 с наличием ("ДПН+") и отсутствием ("ДПН-") диабетической полинейропатии.

Аллели и генотипы Частоты аллелей и генотипов Р

ДПН+ ДПН-

Аллель Cys 0 353 0,397 >0,05

Аллель Ser 0,647 0,603 >0,05

Генотип Cys/Cys 0,076 0,098 >0,05

Генотип Cys/Ser 0,554 0,598 >0,05

Генотип Ser/Ser 0,370 0,304 >0,05

В обеих группах наибольшая частота была у аллеля Ser (0,647 в группе "ДПН+" и 0,603 в группе "ДПН-") Наиболее распространенным генотипом были гетерозиготы Cys/Ser Гомозиготы Cys/Cys встречались наиболее редко - их доля в выборках больных ДПН в контрольной группе составила 0,076 и 0,098 соответственно Гомозиготы Ser/Ser встречались с частотой 0,370 и 0,304

Таким образом, полиморфный маркер Cys311 Ser гена PON2 не ассоциирован с ДПН при СД типа 1 у русских пациентов г Москвы

Ассоциация полиморфных маркеров гена РОЫ2 с диабетическими ангиопатиями была исследована в нескольких работах, связанных с изучением генетики сахарного диабета типа 2 В двух из них не было обнаружено ассоциации полиморфного маркера Cys311Ser с развитием сосудистых осложнений при сахарном диабете типа 2 Однако еще в одной работе показана ассоциация обоих полиморфных маркеров (Alai48Glyи Cys311Ser) гена PON2 с развитием диабетической нефропатии при СД типа 2. К сожалению, отсутствуют литературные данные об ассоциации данных полиморфных маркеров с ДПН, что не позволяет нам в полной мере интерпретировать пслученные нами результаты

7. Заключение

Обобщая полученные результаты, можно сделать следующее предположение о роли исследованных генов-кандидатов в развитии диабетической полинейропатии у пациентов с СД типа 1, проживающих в г Москва

Вероятно, ведущую роль в патогенезе ДПН на ранних стадиях играют гены связанные с нарушениями липидного обмена. При этом повреждение эндотелия сосудов связано, скорей всего, с дисбалансом в содержании различных групп липопротеинов (ЛП) и увеличении доли атерогенных липопротеинов Аполипопротеины выполняют функцию лигандов во взаимодействии ЛП со специфическими рецепторами и таким образом вовлечены в регуляцию содержания различных групп ЛП в плазме крови Ассоциация полиморфного маркера I/D гена АРОВ с развитием ДПН, показанная в нашем исследовании, подтверждает данное предположение

Окисление липидов, играющее важную роль в атероскперотическом поражении крупных сосудов, по-видимому, не оказывают заметного влияния на патологические процессы в микроциркулярном русле Подтверждением этому служит отсутствие ассоциации полиморфных маркеров Leu55Met и Gln192Arg гена PON1 и Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2 с развитием ДПН при СД типа 1

Одной из причин развития диабетических микро- и макроангиопатий, являются нарушения в функционировании клеток эндотелия сосудов При этом показано, что активирующийся при окислительном стрессе белок р53 регулирует экспрессию ряда генов, белковые продукты которых являются ингибиторами ангиогенеза (Dameron et al, 1994,) Показанная нами ассоциация полиморфного маркера Рю72Агд гена ТР53 с развитием ДПН полностью согласуется с данными других исследователей (Un et al, 2002) и демонстрирует важную роль гена ТРбЗ в развитии диабетических ангиопатий

выводы

1 Изучено распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров I/O гьна АРОВ, G(-186)T и е2/вЗ/е4 гена АРОЕ, Leu5Met и Gln192Arg гена PON1, Ala148Gly и Cys311Ser гена РОЛ/2 и Pro72Arg raw ТР53 в группе русских больных СД типа 1 с диабетической полинейропатий и без диабетической поли-нейропатии.

2 Для полиморфных маркеров генов АРОЕ, FON1 и РОЛ/2 показано отсутствие ассоциации с диабетической полинейропатией <ри СД типа 1 у русских пациентов г. Москвы.

3 Обнаружена ассоциация полиморфного ифкера I/O гена аполипопротеина В с развитием диабетической полинейропатиилри СД типа 1 у русских пациентов г Москвы Носители аллеля I имеют повьиенный риск развития диабетической полинейропатии (OR - 1,66, CI = 1,06 - 2,5»), который возрастает при накоплении данного аллеля у гомозигот II OR равен 2'1 (С! = 1,12 - 3,6) Аллель D, напротив, ассоциирован с пониженным риском рявития диабетической полинейропатией {OR - 0,6, CI = 0 39-0,95)

4 Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Рго72Агд гена TPS3, кодирующего супрессор опухолевого роста рЗ, с развитием диабетической полинейропатии при СД типа 1 у русских па1,и»нтов г Москвы Риск развития патологии связан с носительством аллеля Pro (DR- 2,04; CI = 1,34 - 3,11) и генотипа Pro/Pro (OR = 2,21, CI = 1,22 - 4,02) Аллегь Ai\ напротив, ассоциирован с пониженным риском развития диабетической пелинейрэпитии (OR - 0,49; CI ~ 0,32 - 0,75), так же как и генотип Arg/Arg (OR = 0,41, CI = 0,:0 - 0,85)

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Воронько, О Е , Якунина, H Ю , Строков, И А, Лаврова, И H , Носиков В В (2005) Ассоциация полиморфных маркеров генов липидного обмена с диабетической полинейропатией при сахарной''диабете типа 1 Молекулярная биология, 39(2), 230-234

2 Воронько, О Е , Якунина, Н Ю , Шесгакова, М В , Зотова, Е В , Чугунова, Л А , Шамхалова, М Ш , Викулова, О К , Дебабов, В Г , Дедов, И И , Носиков В В (2005) Поиск ассоциации полиморфных маркеров генов PON1 и PON2 с развитием диабетической нефропатии у больных сахарным диабетом типа 1 Гэнетика, 41(G), 638-692

3 Якунина, Н Ю , Шесгакова, М В , Воронько, О Е , Викулова, О К , Савостьянов, KB, Чугунова, Л А, Шамхалова, ,М Ш . Дедов, И И , Носиков В В (2005) Полиморфные маркеры генов липидного обмена ассоциированы с диабетической нефропатией при сахарном диабете типа 1 Гэнетика, 41(7), 760-765

I

4 Якунина, Н Ю , Шесгакова, М В , Воронко, О Е , Викулова, О К , Савостьянов,

К В , Чугунова, Л А, Шамхалова, М Ш , Дедов, И И , Носиков В В (2005)

Полиморфные маркеры генов липидного обмена ассоциированы с диабетической

нефропатией при сахарном диабете типа 1 Гэнетика, 41j[7), 760-765

•и 1

5 Voron'ko, О Е , Yakunina, N Yu , Strokov, ! А , Nosikov, V V Apolipoprotein 8 gene contributes to the genetic predisposition to diabetic polyneuropathy m type 1 diabetes mellitus Abstracts of the 14* Annua! Scientific Meeting of the Diabetic Neuropathy Study Group of the EASD (NEURGDIAB), p;173, Regensburg, Germany (September 2 - 5, 2004) ,

«8 - 7 8 4в

i

i

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Якунина, Наталья Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.Полиморфные маркеры.

1.1.1.Типы полиморфизмов и методы их исследования.

1.1.2.Использование полиморфных маркеров в исследовании генетики мультифакторных заболеваний.

1.2.Сахарный диабет типа 1 (СД типа 1).

1.2.1.Общая характеристика заболевания.

1.2.2.Вклад генетических и негенетических факторов в л развитие сахарного диабета 1 -го типа.

1.2.3.Общая характеристика диабетических ангиопатий.

1.2.4.Диабетическая нейропатия.

1.2.4.1.Генетические факторы в патогенезе диабетической полинейропатии.

1.3.Характеристика исследованных в работе генов и полиморфных маркеров.

• 1.3.1. Гены липидного обмена.

1.3.1.1. Ген аполипопротеина Е (АРОЕ).

1.3.1.2. Ген аполипопротеина В (АРОВ).

1.3.2. Ген белка супрессора раковых опухолей (ТР53).

1.3.3.Ген параоксоназы-1 (PON1).

1.3.4.Ген параоксоназы-2 (РОЛ/2). к 2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1.Реактивы и ферменты.

2.2.Буферные растворы.

2.3.Формирование групп больных и здоровых индивидов.

Ф 2.4.Выделение геномной ДНК.

2.5.Амплификация ДНК.

2.6.Расщепление продуктов амплификации рестриктазами.

2.7.Электрофоретическое разделение ДНК.

2.8.Статистическая обработка результатов.

2.8.2.Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов.

Точный критерий Фишера. Поправка Бонферрони.

2.8.3.0ценка относительного риска. Odds ratio.

• Доверительный интервал.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ.

3.1.Общая характеристика исследованных групп.

3.2.Иследование ассоциации полиморфных маркеров геновкандидатов с ДПН при СД типа 1.

3.2.1.Иследование ассоциации полиморфных маркеров G(-186)T и s2/s3/s4 гена АРОЕ.

3.2.2.Исследование ассоциации полиморфного маркера

Ю гена АРОВ с ДПН при СД типа 1.

3.2.3.Исследование ассоциации полиморфного маркера

Рго72Агд гена ТР53 с ДПН при СД типа 1.

3.2.4.Исследование ассоциации полиморфных маркеров Leu55Met и Gln192Arg гена PON1 с ДПН при СД типа 1.

3.2.5.Исследование ассоциации полиморфных маркеров Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2 с ДПН при СД типа

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование ассоциации ряда генов-кандидатов с диабетической полинейропатией у пациентов с сахарным диабетом типа 1"

Исследование молекулярно - генетических основ многофакторных заболеваний относится к одной из наиболее серьезных задач современной генетики.

Поздние осложнения сахарного диабета являются основной причиной инвалидизации и смертности в развитых странах, представляя собой не только глобальную медицинскую, но и социально-экономическую проблему.

Для многофакторных заболеваний характерен сложный механизм формирования фенотипа, в основе которого лежит взаимодействие генетических факторов с факторами внешней среды. Однако для каждого конкретного заболевания можно выделить группу, так называемых генов-кандидатов, продукты которых могут быть прямо или косвенно вовлечены в развитие данной патологии.

Одним из наиболее перспективных направлений в современной молекулярной генетике заболеваний является поиск полиморфных маркеров в генах-кандидатах и выявление их ассоциации с наследственными заболеваниями.

При исследовании ассоциации сравнивают распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера, расположенного внутри или рядом с геном-кандидатом, в группах больных и здоровых доноров. Наличие достоверных различий в распределении свидетельствует об ассоциации полиморфного маркера с заболеванием.

Установление ассоциации гена с заболеванием и последующая оценка индивидуального генетического риска имеют важное значение для разработки дифференцированного подхода к профилактике и лечению данной патологии и ее осложнений в зависимости от наследственной предрасположенности конкретного пациента.

Цели и задачи работы

Целью данной работы явилось изучение ассоциации полиморфных маркеров нескольких генов-кандидатов, кодирующих аполипопротеин В (АРОВ), аполипопротеин Е (АРОЕ), ген апоптоза (ТР53), параоксоназу-1 (PON1) и параоксоназу-2 (PON2). Предполагается, что продукты этих генов вовлечены в патогенез сосудистых осложнений диабета. В настоящей работе исследована ассоциация полиморфных маркеров данных генов с развитием диабетической полинейропатии при сахарном диабете типа 1.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить частоты аллелей и генотипов полиморфных маркеров I/D гена АРОВ и G(-186)T, s2/c3/e4 гена АРОЕ в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1.

2. Изучить распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров Leu55Met и Gln192Arg гена PON1 в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1

3. Изучить распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2 в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1.

4. Изучить распределение аллелей и генотипов маркера Рго72Агд гена ТР53 в группах больных с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1.

5. Провести сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфных маркеров данных генов-кандидатов в исследованной выборке для выявления ассоциации изученных маркеров с развитием заболевания и определения вклада данных генов в наследственную предрасположенность к патологии.

Научная новизна и практическая значимость работы

В данной работе впервые изучена ассоциация полиморфных маркеров генов АРОЕ, PON1, PON2 и ТР53 с диабетической полинейропатией при сахарном диабете типа 1 у русских пациентов г. Москвы. Впервые показана ассоциация полиморфного маркера I/D гена АРОВ и ассоциация полиморфного маркета Рго72Агд гена ТР53 с развитием диабетической полинейропатии при сахарном диабете типа 1 у русских пациентов г. Москвы.

Для полиморфного маркера I/D гена АРОВ показано, что аллель / и генотип 1/1 являются факторами риска развития диабетической полинейропатии у русских пациентов г. Москвы.

Для полиморфного маркера Рго72Агд гена ТР53 показано, что риск развития патологии связан с носительством аллеля Pro и генотипа Pro/Pro. Аллель Агд, напротив, ассоциирован с пониженным риском развития диабетической полинейропатии, так же как и генотип Агд/Агд.

Полученные результаты позволяют оценить вклад генетических факторов риска в развитие диабетических ангиопатий для московской популяции и могут быть использованы для прогнозирования течения и профилактики осложнений данных заболеваний.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Якунина, Наталья Юрьевна

выводы.

1. Изучено распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров I/O гена АРОВ, G(-186)T и е2/еЗ/е4 гена АРОЕ, Leu55Met и Gln192Arg гена РОЛ/7, Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2 в группе русских больных СД типа 1 с диабетической полинейропатией и без диабетической полинейропатии.

2. Для полиморфных маркеров генов АРОЕ, PON1 и PON2 показано отсутствие ассоциации с диабетической полинейропатией при СД типа 1 у русских пациентов г. Москвы.

3. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера I/D гена аполипопротеина В с развитием диабетической полинейропатией при СД типа 1 у русских пациентов г. Москвы. Носители аллеля / имеют повышенный риск развития ДПН (OR = 1,66; CI = 1,06 -2,59), который возрастает при накоплении данного аллеля: у гомозигот 1/1 относительный риск развития осложнения равен 2,01, CI = 1,12 - 3,6. Аллель D, напротив, ассоциирован с пониженным риском развития ДПН (OR = 0,6; CI = 0,39 - 0,95).

4. Обнаружена ассоциация полиморфного маркера Рго72Агд гена ТР53 с развитием ДПН при СД типа 1 у русских пациентов г.

Москвы. Риск развития патологии связан с носительством аллеля

Pro (OR = 2,04; CI = 1,34 - 3,11) и генотипа Pro/Pro (OR = 2,21; CI =1,22 - 4,02). Аллель Агд, напротив, ассоциирован с пониженным риском развития ДПН (OR = 0,49; CI = 0,32 - 0,75), так же как и генотип Arg/Arg (OR = 0,41; CI = 0,20 - 0,85).

Заключение.

Обобщая полученные результаты, можно сделать следующее предположение о роли исследованных генов-кандидатов в развитии диабетической полинейропатии при СД типа 1 среди пациентов г. Москвы.

Вероятно, ведущую роль в патогенезе ДПН на ранних стадиях играют нарушения липидного обмена, обусловленные гипергликемией. При этом повреждение эндотелия сосудов связано, скорей всего, с дисбалансом в содержании различных групп липопротеинов (ЯП) и увеличении доли атерогенных липопротеинов. Аполипопротеины выполняют функцию лигандов во взаимодействии ЛП со специфическими рецепторами и таким образом вовлечены в регуляцию содержания различных групп ЛП в плазме крови. Ассоциация полиморфного маркера I/D гена АРОВ с развитием ДПН, показанная в нашем исследовании, подтверждает данное предположение. Окисление липидов, играющее важную роль в атеросклеротическом поражении крупных сосудов, по-видимому, не оказывают заметного влияния на патологические процессы в микроциркулярном русле. Подтверждением этому служит отсутствие ассоциации полиморфных маркеров Leu55Met и Gln192Arg гена PON1 и Ala148Gly и Cys311Ser гена PON2 с развитием ДПН. Одной из причин развития диабетических микро- и макроангиопатий, являются нарушения в функционировании клеток эндотелия сосудов. При этом показано, что активирующийся при окислительном стрессе белок р53 регулирует экспрессию ряда генов, белковые продукты которых являются ингибиторами ангиогенеза (Dameron et al, 1994,). Показанная нами ассоциация полиморфного маркера Рго72Агд гена ТР53 с развитием ДПН полностью согласуется с данными других исследователей (Lin et al, 2002) и демонстрирует важную роль белка р53 в развитии диабетических ангиопатий.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Якунина, Наталья Юрьевна, Москва

1. Abu-EI-Asrar AM, Dralands L, Missotten L, Al-Jadaan IA, Geboes K. Expression of apoptosis markers in the retinas of human subjects with diabetes.// Invest Ophthalmol Vis Sci. 2004 V. 45(8). P.2760-6

2. Akagi Y., Kador P.F., Kuwabara T. Aldose reductase localization in human retinal mural cell. // Invest. Ophthalmol. Visual Sci. 1983. V. 24. P. 1516-1619.

3. Akhmedova S.N., Yakimovsky A.K., Schwartz E.I. Paraoxonase 1 Met-Leu 54 polymorphism is associated with Parkinson's disease.//J. Neurol. Sci. 2001. Vol. 184(2). P. 179-182.

4. Altman D„ Sanson D., Marsh S. What is the basis for HLA DQ association with autoimmune diseases? // Immunol. Today. 1991. V.12. P. 267-270.

5. Ara S, Lee P.S.Y., Hansen M.F. Codon 72 polymorphism of the TP53 gene. // Nucleic Acids Res. 1990. V. 18. P.4961.

6. Araki S., Makita Y., Canani L, Ng D., Warram J.H., Krolewski A.S. Polymorphisms of human paraoxonase 1 gene (PON1) and susceptibility to diabetic nephropathy in type I diabetes mellitus. // Diabetologia. 2000. Vol. 43(12). P. 1540-1543.

7. Araki S.C., Zanchi A., Moczulski D.K., Wantman M., Krolewski A.S. ApoE s2 allele increases the risk of diabetic nephropathy (DN) in IDDM: results of a family based study. // Diabetes. 1998. V. 47 (Suppl. 1). P. A76.

8. Aubo C., Senty M., Marrugat J., Tomas M., Vila J., Sala J., Masia R. Risk of myocardial infarction for the association of the Gln/Arg 192 polymorphism of human paraoxonase gene and diabetes mellitus. // Eur Heart J. 2000. V. 21. P. 33-38.

9. Beckman G, Birgander R, Sjalander A, Saha N, Holmberg PA, Kivela A, Beckman L Is p53 polymorphism maintained by natural selection? // Hum Hered. 1994 V. 44(5) P. 266-270.

10. Bohn M., Bakken A., Erikssen J., Berg K. The apolipoprotein В signal peptide insertion/deletion polymorphism is not associated with myocardial infarction in Norway. // Clin Genet. 1994. V. 45(5). P. 255-259.

11. Botazzo G., Dean В., Swift P., Gamble D. In situ characterization of autoimmune phenomena and expression of HLA mole-cules in the pancreas in diabetic insulinitis. // N. Engl. J. Med. 1985. V. 313. P. 353-356.

12. Brown D.L., Gorin M.B., Weeks D.E. Efficient strategies for genomic searching using the affected-pedigree-member method of linkage analysis. // Am. J. Hum. Genet. 1994. V. 54. P. 544552.

13. Cameron N. E., Cotter M. A. Metabolic and vascular factors in the pathogenesis of diabetic neuropathy. // Diabetes. 1997. V.46. P. 31-37.

14. Castano L, Urrutia I., Calvo ВBilbao JR. Insulin gene 5' VNTR polymorphism in Basque type I diabetes. // Diabetologia. 1997. V.40. P. 49.

15. Ceriello A., dello Russo P., Amstad P., Cerntti P. High glucose induces antioxidant enzymes in human endothelial cells in culture: evidence linking hyperglycemia and oxidative stress. // Diabetes. 1999. V.45. P. 471-477.

16. Charlesworth C., Sniegovski P., Stephan W. The evolutionary dynamics of repetitive DNA in eukaryotes. // Nature. 1994. V. 371. P. 215-220.

17. Chatterjee N.K., Nejman C. Insulin mRNK content in pancreatic beta cells of coxsakievirus B4-induced diabetic mice. II Molec. Cell. Endocr. 1988. V. 55. № 2-3. P. 193-202.

18. Choong M.L., Koay E.S., Khaw M.C., Aw T.C. Apolipoprotein В 54ns/Del and З'-VNTR polymorphisms in Chinese, Malay and Indian singaporeans. // Hum Hered. 1999. V. 49(1). P. 31-40.

19. Chowdhury T.A., Dyer P.H., Kumar S. et al. Association of apolipoprotein epsilon2 allele with diabetic nephropathy in Caucasian subjects with IDDM. // Diabetes. 1998. V. 47. P. 278280.

20. Cooke J.P., Tsao P. Cytoprotective effects of nitric oxide. // Circulation. 1993. V. 88. P. 2451-4.

21. Coria P., Rubio I., Nunez E., Sempere A.P., Santa Engarcia N., Bayon C., Cuadrado N. Apolipoprotein E variants in ischemic stroke. //Stroke. 1995. V. 26. P. 2375-2376. Letter.

22. Cristan В., Akerblom H., Nerup J. Incidence of chilhood IDDM in Denmark, Finland, Norway and Sweden. // Acta Endocrinol. 1981. V. 98. P. 68-80.

23. Dallongeville J., Lussier-Cacun S., Davignon J. Modulation of plasma triglyceride levels by apoE phenotype: a meta analysis. // J Lipid Res. 1992. V. 33. P. 447-454.

24. Davies E., Bonnardeaux A., Lathrop G.M., Carvol E., Soubrier F. Angiotensin II (type-1) receptor locus: CA repeat polymorphism and genetic mapping. // Hum. Mol. Genet. 1994. V. 3. P. 838.

25. Davies H.G., RichterR.J., KeiferM., Broomfield C.A., Sowalla J., Furlong C.E. The effect of the human serum paraoxonase polymorphism is reversed with diazoxon, soman and sarin. // Nat. Genet. 1996. V. 14. P. 334-336.

26. De Los Rios M. G., Durruty P. Патофизиология диабетической нейропатии. II Диабетография, 1999. V. 13. P. 2-5.

27. Dyck P.J., Taylor B.V. Diabetic neuropathy. Philadelphia. W В Saunders. 1999. P. 407-413.

28. Economou E., Bergen A., Warren A., Antonarakis S. The polyadenylate tract of Alu-repetitive elements is polymorphic in the human genome. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. P. 2951-2954.

29. Edwards A., Hammond H.A., Jin L., Caskey C.T., Chakraborty R. DNA typing and genetic mapping with trimeric and tetrameric tandem repeats. //Am. J. Hum Genet. 1991. V. 49. P. 746-756.

30. Eichner J.E., Kuller L.H., Orchard T.J., Grandits G.A., McCallun L.M., Ferrell R.E., Neaton J.D. Relation of apolipoprotein E phenotype to myocardial infarction and mortality from coronary artery disease. // Am J Cardiol. 1993. V. 71. P. 160-165.

31. Eto M., Horita К., Morikawa A. et al. Increased frequency of apolipoprotein epsilon 2 allele in non-insulin dependent diabetic (NIDDM) patients with nephropathy. // Clin. Genet. 1995. V. 48. P. 288-292.

32. Farese R.V., Linton M.F., Young S.G. Apolipoprotein В gene mutation affecting cholesterol levels. // J Intern Med. 1992. V. 231. P. 643-652.

33. Forsberg L., de Faire U., Morgenstern R. Low yield of polymorphism from EST Blast searching: analysis of genes related to oxidative stress nnd verification of the P197L pjlymorphism in GPX1. II Hum. Mutat. 1999. V. 13. P. 294-300.

34. Gaffney D., Freeman D.J., Shepherd J., Packard C.J. The ins/del polymorphism in the signal sequence of apolipoprotein В has no effect on lipid parameters. // Clin Chim Acta. 1993. V. 218(2). P. 131-138.

35. Gardemann A., Ohly D., Fink M., Katz N., Tillmanns H., Hehrlein F.W., Haberbosch W. Association of the insertion/deletion gene polymorphism of the apolipoprotein В signal peptide with myocardial infarction.//Atherosclerosis. 1998. V. 141. P. 167-175.

36. Goht L, Eaton J.W. Hereditary catalase deficiencies and increased risk of diabetes. // Lancet. 2000. V. 356. P. 1820-1821.

37. Granja F, Morari J, Morari EC, Correa LA, Assumpcao LV, Ward LS. Proline homozygosity in codon 72 of p53 is a factor of susceptibility for thyroid cancer. // Cancer Lett. 2004. V. 16. 210(2). P. 151-7.

38. Greene D.A. A sodium-pump defect in diabetic peripheral nerve corrected by sorbinil administration: relationship to myo-inositol metabolism and nerve conduction slowing. // Metabolism. 1986. V.35. P. 60-5.

39. Hachinski V., Graffagnino C., Beaudry M., Bernier G., Buck C., Donner A., Spence J.D., Doig G., Wolfe B.M. Lipids and stroke: a paradox resolved. //Arch Neurol. 1996. V. 53. P. 303-308.

40. Hamada H., Seidman M., Howard В., Gorman C. Enchanced gene expression by Poly(dT-dG) Poly(dC-dA) sequence. /7 Mol. Cell. Biol. 1984. V. 4. P. 2622-2630.

41. Hansen P.S., Klausen I.C., Lemming L., Gerdes L.U., Gregersen N., Faergeman O. Apolipoprotein В gene polymorphisms in ischemic heart disease and hypercholesterolemia: effects of age and sex. // Clin Genet. 1994. V. 45(2). P. 78-83.

42. Heinecke J.W., Lusis A.J. Paraoxonase -gene polymor-phisms associated with coronary heart disease: Support forthe oxidative damage hypothesis? //Am J Hum Genet. 1998. V. 62. P. 20-24.

43. Herrmann S.M., Blanc H., Poirier O., Arveiler D., Luc G., Evans A., Marques-Vidal P. et al. TheGln/Arg polymorphism of human paraoxonase (PON 192) is not related to myocardial infarction in the ECTIM study. //Atherosclerosis. 1996. V. 126. P. 299-303.

44. Hixson J.E., Vernier D.T. Restriction isotyping of human apolipoprotein E by gene amplification and cleavage with Hha\. И J Lipid Res. 1990. V. 31. P. 545-548.

45. Hong S.H., Lee C.C., Kim J.Q. Genetic variation of the apolipoprotein В gene in Korean patients with coronary artery disease. // Mol Cells. 1997. V. 7(4). P. 521-525.

46. Horita K., Eto M., Makino I. Apolipoprotein E2, renal failure and lipid abnormalities in non-insulin dependent diabetes mellitus. // Diabetes. 1994. V. 107. P. 203-211.

47. Humbert R., Adler D.A., Distecke СМ., Hassett C., Omiecinski C.J., Furlong C.E. The molecular basis of the human serum paraoxonase activity polymorphism. // Nat. Genet. 1993. V. 3. P. 73-76.

48. Hussain SP, Hollstein MH, Harris CC. p53 tumor suppressor gene: at the crossroads of molecular carcinogenesis, molecular epidemiology, and human risk assessment. // Ann N Y Acad Sci. 2000. V. 919. P. 79-85.

49. Innerarity T.L.,Weisgraber K.H., Arnold K.S. Familial defective apolipoprotein B-100: low density lipoproteins with abnormality receptor binding. // Procl Natl Acad Sci USA. 1987. V. 86. P. 6919-6923.

50. Jeffreys A. J., Wilson V., Thein S.L. Hypervariable 'minisatellite' regions in human DNA. // Nature. 1985. V. 316. P. 67-73.

51. Jelinek W., Schmid C. Repetitive sequences in eukaryotic DNA and their expression. //Ann. Rev. Biochem. 1982. V. 51. P. 813844.

52. Johannesen J., Vejijela R., Hansen P. M., et al. Analysis of polymorphism in the interferon-y gene in Danish and Finnish IDDM patients and control subjects. // Diabetologia. 1997. V.40. P. 29.

53. Kandemir N., Acikgos E., Yordan N. The epidemiology of juvenile onset insulin - dependent diabetes mellitus in Turkish children. A retrospective analysis of 477 cases. // Turk. J. Pediatr. 1994. V. 36. P. 191-195.

54. Karvonen M., Tuomilehto J., Libman I., LaPorte R. A review of recent epidemiological data on the worldwide incidence of Type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus. // Diabetologia. 1993. V. 36. P. 883-892.

55. Khalil I., Deshamps I., Lapage V., al-Daccak R., Degos L, Mors J. Dose effect of cis- and trans-encoded HLA-DQab heterodimers in IDDM susceptibility. // Diabetes. 1992. V.41. P.378-384.

56. Kimura H., Suzuki J., Gejyo F., Karasawa R., Miyazaki R.,Suzuki S., Arakawa M. Apolipoprotein E4 reduced risk of diabetic nephropathy in patients with NIDDM. // Am J Kidney Dis. 1998. V. 31. P. 666-673.

57. Koch M, Hering S, Barth C, Ehren M, Enderle MD, Pfohl M. Paraoxonase 1 192 Gln/Arg gene polymorphism and cerebrovascular disease: interaction with type 2 diabetes. // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. 2001. V. 109(3). P. 41-45.

58. Kokubo У., Chowdhury A.H., Date С., Yokoyama Т., Sobue И., Tanaka H. Age-dependent association of apolipoprotein E genotypes with stroke subtypes in a Japanese rural population. // Stroke. 2000. V. 31. P. 1299-1306.

59. Krolewski A.S., Warram J.H., Rand Li. Risk of proliferative diabetic retinopathy in juvenile-onset type I diabetes: a 40-year follow-up study. // Diabetes Care. 1986. V.9. P. 443—452.

60. Laakso M. How good a marker is insulin level for insulin resistance? // Am J Epidemiol. 1993. V. 137. P. 959-965.

61. Lander E., Kruglyak L. Genetic dissection of complex traits: guidelines for interpreting and reporting linkage results. // Nat Genet 1996. V. 11. P. 241-247

62. Lapinleimu H., Viikari J., Ronnemaa T. Apolipoprotein E polymorphism and serum lipids in a randomized, prospective trialof an infant diet with reduced saturated fat and cholesterol. // Pediatrics. 1996. V. 98. P. 757-762.

63. Larsen Z.M., Kristiansen O.P., Johanesen J., Nerup J., Pociot F. No linkage of the CTLA-4 region (IDDM12) to type I diabetes in the Danish population. // Diabetologia. 1997. V.40. P.51.

64. Lebedev N., Kuraeva Т., Sergeev A., Gubanov N., Dedov I. Epidemiology of type 1 and type 2 diabetes in the young population of Moscow. // Diabetologia. 1992. V. 35. P. A130.

65. Li H., Gyllensten U.B., Gui X., Saiki P.K., Erlich H.A., Arncheim N. Amplification and analysis of DNA sequences in single human sperm and diploid cells. // Nature. 1988. V. 335. P. 414-417.

66. Li H.L., Liu D.P., Liang C.C., Paroxonase gene polymorphisms, oxidative stress, and diseases. // Mol. Med. 2003. V. 81 (12). P. 766-779.

67. Lin S, Chen Z, Chen MH, Wang HM. Express of human papillomavirus, P53 and H-ras gene in laryngeal cancer., // Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2002. V. 31(4). P. 231234.

68. Mackness В., Durrington P.N., Abuashia В., Boulton A.J.M., Mackness M.I. Low paraoxonase activity in type II diabetes mellitus complicated by retinopathy. // Clinical. Science. 2000. V. 98. P. 355-363.

69. Mackness M.I., Arrol S., Mackness В., Durrington P.N. Alloenzymes of paraoxonase and effectiveness of highdensity lipoproteins in protecting low-density lipoprotein against lipid peroxidation. // Lancet. 1997. V. 349. P. 851-852.

70. Mackness M.I., Harty D., Bhatnagar D., Winocour P.H., Arrol S., Ishola M. Serum paraoxonase activity in familial hypercholesterolemia and insulin-dependent diabetes mellitus. //Atherosclerosis. 1991b. V. 86. P. 193-199.

71. Mackness M.I., Mackness В., Durrington P.N., Connelly P.W., Hegele A. Paraoxonase: biochemistry, genetics and relationship to plasmalipoprotein. // Curr Opin Lipidol. 1996. V. 7. P. 69 -76.

72. Л0Л .Mannervik B. The isozymes of glutathione transferase. // Adv. Enzym. Relat. Areas Molec. Biol. 1985. V. 57. P. 357-417

73. Miesfield R., Krystal M., Arnheim N. A member of new repeated sequence family which is conserved eucaryotic evolution is found between the human delta- and beta-globin genes. // Nicleic Acids Res. 1981. V. 9. P. 5931-5947.

74. Miettinen H.E., Korpela K., Hamalainen L, Kontula K. Polymorphisms of the apolipoprotein and angiotensin converting enzyme genes in young North Karelian patients with coronary heart disease. // Hum Genet 1994. V. 94(2). P. 189-192.

75. Miyata M., Smith J.D. Apolipoprotein E allele-specific antioxidant activity and effects on cytotoxicity by oxidative insults and b-amyloid peptides. II Nat Genet. 1996. V. 14. P. 55-61.

76. Юб.Л/epom G.T. Molecular mechanism of MHC defined genetic susceptibility to IDDM. И Diabetologia. 1997. V.40. P. 7-9.

77. Neugebauer S., Baba Т., Watanabe T. Association of the nitric oxide synthase gene polymorphism with an increased risk for progression to diabetic nephropathy in type 2 diabetes. // Diabetes. 2000. V. 49. P. 500-503.

78. A/go I.S.L., Pace R., Richard M.V. Methods for analysis of multiple cystic fybrosis mutations. // Hum.Genet. 1991. V. 87. P. 613-617.

79. Odawara M., Tachi Y., Yamashita K. Paraoxonase polymorphism (Gln192-Arg) is associated with coronary heart disease in Japanese noninsulin-dependent diabetes mellitus. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1997. V. 82. P. 2257-2260.

80. Опита Т., Laffel L.M., Artgeiico M.C., Krolewski A.S. Apolipoprotein E genotypes and risk of diabetic nephropathy. // J. Am. Soc. Nephrol. 1996. V. 7. P. 1075-1078.

81. Osei-Hyiaman D., Но и L., Mengbai F., Zhiyin R., Zhiming Z., Капо K. Coronary artery disease risk in Chinese type 2diabetics: is there a role for paraxonase 1 gene (Q192R) polymorphism?// Eur J Endocrinol. 2001. V. 144(6). P. 639-644.

82. Palmer J.P. Prediction, Prevention and Genetic Counselling in IDDM. // John Wiley & Sons Ltd. 1996. 445 p.

83. Pari JP, Lai ST, Chiang SC, Chou SC, Chiang AN. The risk of coronary artery disease in population of Taiwan is associated with Cys-Ser 311 polymorphism of human paraoxonase (PON)-2 gene. Zhonghua Yi Xue Za Zhi (Taipei) 2002. V. 65. P. 415-421.

84. Papadakis ED, Soulitzis N, Spandidos DA. Association of p53 codon 72 polymorphism with advanced lung cancer: the Arg allele is preferentially retained in tumours arising in Arg/Pro germline heterozygotes. // Br J Cancer. 2002. V. 21. P. 87(9): 10138.

85. Pasz/y C., Maeda N., Verstuyft J., Rubin E.M. Apolipoprotein A-l transgene corrects apolipoprotein E deficiency-induced atherosclerosis in mice. //J Clin Invest. 1994. V. 94. P. 899-903.

86. Pociot F., Norgaard K., Nobolth N., Andersen O., Nerup J. A nationwide population-based study of the familial aggregation of Type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus in Denmark. // Diabetologia. 1993. V. 36. P. 870-875.

87. Primo-Parmo, S. L; Hsu, C.; Law, D. J.; La Du, B. N. Location and arrangement of three paraoxonase genes: PON1, PON2, and PON3, on human chromosome 7. // Am. J. Hum. Genet. 1996. V. 59. P. 406.

88. Raza H., Robin M.A., Fang J.K., Avadhani N.G. Multiple isoforms of mitochondrial glutathione-S-trsnsferases and their differential induction under oxidative stress. // Biochem. J. 2002.

89. Rewers M., LaPorte R.E., King H., Tuomilehto J. Trends in the prevalence and incidence of diabetes: insulin-dependent diabetes mellitus in childhood. // World Health Stat. 1988. V. 41. P. 179.

90. Ml.Risch M. Accesing the role of HLA-linked and unlinked determinants of disease. // Am. J. Hum. Genet., 1987, V. 40, P. 1-14.

91. Rorhwell P.M., Staines A., Smail P., Bodansky J., McKinney P.A. Seasonality of birth and diseases onset in childhood diabetes. // Diabetologia. 1995. V. 38. P. 35.

92. Rosenbiat M., Dragonov D., Watson C.E., Bisgaier C.L. Mause machrophage paraxonase-2 activity is increased whereas cellular paraoxonase-2 activity decreased under oxidative stress. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2003. V. 22. P. 468.

93. Saha N., Tay J.S., Chew L.S. Influence of apolipoprotein В signal peptide insertion/deletion polymorphism on serum lipidsand apolipoproteins in a Chinese population. // Clin Genet. 1992. V. 41(3). P. 152-156.

94. Saha N., Tay J.S., Heng C.K., Humphries S.E. DNA polymorphisms of the apolipoprotein В gene are associated with obesity and serum lipids in healthy Indians in Singapore. // Clin Genet. 1993. V. 44(3). P. 113-120.

95. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Muilis KB., Horn G.T., Erlich H.A., Arnheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for sickle cell anemia.// Science. 1985. Vol. 230. P. 1350-1354.

96. Sajithal G.B., Chithra P., Chandrakasan G. The role of medal-catalyzed oxidation in the formation of advanced glycation and products: an in vitro study of collagen. // Free Radic. Biol. Med. 1998. V. 25. P. 265-269.

97. Sakamuro D, Sabbatini P, White E, Prendergast GC. The polyproline region of p53 is required to activate apoptosis but not growth arrest. //Oncogene. 1997. V. 18. 15(8). P. 887-98.

98. Sanghera O.K., Aston C.E., Saha N., Kamboh M.I. DNA polymorphisms in two paraoxonase genes (PON1 and PON2) are associated with the risk of coronary heart disease. // Am. J. Hum. Genet. 1998. V. 62. P. 36-44.

99. Schmidt S., Ritz E. Genetic determinants of diabetic renal disease and their impact on therapeutic interventions. // Kidney Int. 1997. V. 52 (Suppl. 63). P. S27-S31.

100. Senti M., Tomas M., Marrugat J., Elosua R. Paraoxonase1-192 polymorphism modulates the nonfatal myocardial infarction risk associated with decreased HDLs. // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2001. V. 21(3). P. 415-420.

101. Sheehy H. HLA and IDDM. II Diabetes. 1991. V.40. P.123-129.

102. S/7/T7 D.M., Gu L., Hama S., Xia Y.-R., Navab M., Fogelman A.M., Lusis A.J. Genetic-dietary regulation of serum paraoxonase expression and its role in atherogenesis in a mouse model. //J. Clin. Invest. 1996. V. 97. P. 1630-1639.

103. Stengard J.H., Zerba K.E., Pekkanen J., Ehnholm C., Nissinen A., Sing C.F. Apolipoprotein E polymorphism predicts death from coronary heart disease in a longitudinal study of elderly Finnish men. //Circulation. 1995. V. 91. P. 265-269.

104. Stevens M.J., Feldman E.L., Greene D.A. The aetiology of diabetic neuropathy: the combined roles of metabolic and vascular defects. // Diabetic Medicine. 1995. V.12. P. 566-579

105. Stiller C., Dupre J., Wolfe B. Effects of cyclosporine immunosupression in IDDM of recent onset. // Science. 1984. V. 223. P. 1362-1367.

106. Suehiro Т., Nakauchi Y., Yamamoto M., Arii K,, Itoh H., \

107. Hamashige N., Hashimoto K. Paraoxonase gene polymorphism in Japanese subjects with coronary heart disease. // Int. J. Cardiol. 1996. V. 57. P. 69-73.

108. Thomson G., Robinson W., Gottschell L. Genetic heterogeneity modes of inheritance and risk estimates for a joint study of Caucasians with IDDM. // Am.J.Hum.Genet. 1988. VI. 43. P. 799-816.

109. Tiret L, de Knijff P., Menzel H-J., Ehnholm C., Nicaud V., Havekes L. M. ApoE polymorphism and predisposition to coronary heart disease in youths of different European populations. The EARS Study. // Arterioscler. Thromb. 1994. V. 14. P. 1617-1624.

110. Todd J.A, Bell J., McDevitt H. Both DQ alpha and DQ beta genes contribute to susceptibility and resistance to IDDM. // Nature. 1987. V. 329. P. 599-604.

111. Ukkola O., Kervinen K., Salvela P.I., Dickhoff K.V., Laakso M., Kesaniemi Y.A. Apolipoproteine E phenotype is related to macro- and microangiopathy in patients with non-insulin diabetes mellitus. //Atherosclerosis. 1993. V. 101. P. 9-15.t

112. Vafiadis P., Bennett S.T., Todd J.A., Nadeau J., Crabs R., Goodyer C.C.G., Wickramasinghe S., Coll E., Polychronakos C. Insulin expression in human thymus is modulated by INS VNTR alleles at the IDDM2 locus. // Nature Genet. 1997. V. 15. P. 289292.

113. Van Dam P.S., Van Asbeck B.S., Erkelens D.W., Marx J.J.M., Gispen W-H., Bravenboer B. The role of oxidative stress in neuropathy and other diabetic complications. // Diabetes metabolism reviews. 1995. V.11. P. 181-192.

114. Veijola R., Halminen M., Reijonen H., Ilonen J., Akerblom H.K., Knip M. Impact of insulin gene polymorphism on IDDM susceptibility and insulin secretory capacity. // Diabetologia. 1995. V.38. P.29.

115. V/'n/Tc A.I., Park T.S., Stansberry K.B., Pittenger G.L. Diabetic neuropathy. // Diabetologia. 2000. V.43. P. 957-973.

116. U'l.Wang J, Liu Z. No association between paraoxonase 1 (PON1) gene polymorphisms and susceptibility to Parkinson's disease in a Chinese population. // Mov Disord. 2000. V.15(6).P. 1265-7.

117. Weissenbach J., Gyapay G., Dib C. et. al. A second-generation linkage map of the human genome. // Nature. 1992. V. 359. P. 794-801.

118. Werle E., Fiehn W., Hasslacher C. Apolipoprotein E polymorphism and renal function in German type 1 and type 2diabetic patients. // Diabetes. Care. 1998. V. 21. P. 994-998.

119. Wilson P.W., Schaefer E.J., Larson M.G., Ordovas J.M. Apolipoprotein E alleles and risk of coronary disease: a metaanalysis. //Arterioscler Thromb Vase Biol. 1996. V. 16. P. 1250 -1255.

120. Wilson P.W.F., Myers R.H., Larson M.G., Ordovas J.M., Wolf P.A., SchaeferE.J. Apolipoprotein E alleles, dyslipidaemia, and coronary heart disease:the Framingham Offspring Study. // JAMA. 1994. V. 272. P. 1666-1671.

121. Ye P., Chen B.S., Wang S.W. Apolipoprotein В signal peptide insertion/deletion polymorphism in Chinese patients with coronary heart disease. // Chung Hua I Hsueh Tsa Chih. 1994. V. 74(6). P. 341-344, 389-390.

122. Yun/cerK., Egerberg J., Kromann H., Nerup J. An autopsy stu-dy of the islets of Langerhans in acute-onset juvenile dia-betes mellitus. //Acta Pathol. Microbiol. Scan. 1977. V. 85. P. 699-706.in

123. Zanchi A., Moczulski D.K, Hanna L.S., Wantman M., Warram J.H., Krolewski A.S. Risk of advanced diabetic nephropathy in type 1 diabetes is associated with endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism. // Kidney Int. 2000. V. 57. P. 405413.

124. Zheng X, Rao XM, Snodgrass CL, McMasters KM, Zhou HS. Selective replication of E1B55K-deleted adenoviruses depends on enhanced E1A expression in cancer cells. // Cancer Gene Ther 2005. V. 9; Epub ahead of print.

125. Алексеев Л.П., Дедов И. И., Зилов А. В. Межпопуляционный подход в установлении ассоциированной с HLA генетической предрасположенности к инсулинзависимому сахарному диабету. // Сахарный диабет, 1998. V. 1. Р.19-21.

126. Анциферов М.Б., Ростовцева Я.Г. Сахарный диабет: принципы медико-социальной защиты больных. М.: Изд-во «Пресса», 1997, 148.

127. Балаболкин М.И. Патогенез сосудистых осложнений сахарного диабета: Тезисы докладов первого российского диабетологического конгресса. Москва, 1998, 36.

128. Балаболкин М.И. Сахарный диабет. М.: Медицина, 1994, 383.

129. Балаболкин ММ., Клебанова Е.М., Креминская В.М. Патогенез ангиопатий при сахарном диабете. // Сахарный диабет. 2001,1,5-11.

130. Бергер М., Старостина Е.Г., Йоргенс В., Дедов И. Практика инсулинотерапии. Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 1990, 365.

131. Бухман, Нинкина, Чумаков « Два аллельных гена р53 человека кодируют белки, различающиеся по аминокислотной последовательности» Генетика 1988,Дек. 24(12). 2101-9

132. Дедов И. И. Сахарный диабет в Российской Федерации: проблемы и пути решения. // Сахарный диабет. 1998. 1, 718.

133. Дедов И. И., Фадеев В. В. Введение в диабетологию. М.: Изд-во "Берег", 1998. С. 199.197Дедов И.И. Сахарный диабет в Российской Федерации: проблемы и пути решения.// Сахар, диабет. 1998. No. 1. С. 718.

134. Демуров Л. М. Полиморфные маркеры в изучении генетической предрасположенности к сахарному диабету и диабетическим ангиопатиям: Дис. .канд. биол. наук. -Москва, 1998. С. 120.

135. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. Руководство для врачей.// Питер Ком. Санкт-Петербург. 1999. 505 стр.

136. Команцев В.Н., Заболотных В.А. Методические основы клинической электронейромиографии. Руководство для врачей. С-Петербург. 2001.

137. Носиков В.В. Геномика сахарного диабета типа 1 и его поздних осложнений. Молекулярная биология. 38, 150-164.

138. Пузырев В. П., Степанов В. А. Патологическая анатомия генома человека. Новосибирск: Наука. Сибирское предприятие РАН, 1997; 223 с.

139. Строков И.А., Новосадова М.В., Баранов А.Н., Яхно И.И. Клинические методы оценки тяжести диабетической полиневропатии // Неврологический журнал. 2000. Т.5, 14-18.

140. Чистяков Д. А., Дедов И. И. Локусы генетической предрасположенности к диабету 1 типа IDDM 2 (Сообщение 2) // Сахарный диабет. 1999. Том. 4, 53-56.

141. Чистяков Д. А., Дедов И.И. Локусы генетической предрасположенности к диабету 1 типа IDDM 3, IDDM 4 и IDDM 5(Сообщение 3) // Сахарный диабет. 2000. Том. 1, 49-51.