Патогенетика сахарного диабета 1 типа и его осложнений: гены синтаз оксида азота и цитокинов

Тарасенко, Наталия Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Патогенетика сахарного диабета 1 типа и его осложнений: гены синтаз оксида азота и цитокинов
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Патогенетика сахарного диабета 1 типа и его осложнений: гены синтаз оксида азота и цитокинов"

На правах рукописи

ТАРАСЕНКО НАТАЛИЯ ВИКТОРОВНА

IIАТОГЕ НЕТИКА САХАРНОГО ДИАБЕТА 1 ТИПА И ЕГО ОСЛОЖНЕНИЙ: ГЕНЫ СИНТАЗ ОКСИДА АЗОТА И ЦИТОКИНОВ

03.00.15 - генетика 14.00.09 - педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск-2008

003453242

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г. Томск

Научные руководители:

академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Пузырёв Валерий Павлович

доктор медицинских наук, профессор Кондратьева Елена Ивановна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ковалёв Игорь Александрович

кандидат медицинских наук Минайчева Лариса Ивановна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « 10 » декабря 2008 года в И) час. 00 мин. на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 001.045.01 при ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН по адресу: 634009 г. Томск, пер. Кооперативный, д. 5 (актовый зал ГУ НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ медицинско генетики ТНЦ СО РАМН (634050 г. Томск, ул. Набережная р. Ушайки, д. 10).

Автореферат разослан « _» ноября 2008 года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук

Кучер А.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы:

Несмотря на многочисленные исследования, патогенез СД 1 типа остается во многом неясным. Общепринятой является «копенгагенская» модель аутоиммунной деструкции р-клеток, центральное место в которой отводится антигенам главного комплекса гистосовместимости (HLA) и провоспалительным ци-токинам (ИЛ-ip, ФНО-а, ИНФ-у) [Pakala, 1997; Rabinovitch et al., 1998; Балаболкин, 2000; Дедов и др., 2002]. Вклад наследственности, в предрасположенность к СД 1 типа составляет 80% [Дедов и др., 2002]. Однако для возникновения заболевания необходимо взаимодействие между не изученными до конца генетическими и средовыми факторами [Дедов и др., 2003; Носиков, 2005].

Используя различные геномные подходы (ассоциативные исследования, анализ сцепления, полногеномный скрининг) удалось убедительно доказать значение только для двух локусов в развитии СД 1 типа: локуса IDDM1 (гены HLA-системы, 6р.21.3) и локуса IDDM2 (ген инсулина, 11р15.5) [Davies et al., 1994; Hashimoto et al., 1994; Mein et al., 1998; Concannon et al., 1998; Todd, 2007]. Роль других участков генома в патогенезе СД 1 типа ещё предстоит изучить. Особый интерес представляют гены, продукты экспрессии которых прямо или косвенно участвуют в развитии патологического процесса [Фогель, Матульски, 1990; Дедов, 2002; Носиков, 2005].

В настоящее время доказано, что оксид азота (NO) обладает высокой реакционной способностью, цитотоксическим действием, вызывает поражение Р-клеток поджелудочной железы, активно влияет на процесс генетически запрограммированной гибели клеток - апоптоз [Ванин, 2000]. Экспрессия индуци-бельной NO-синтазы, именно в Р-клетках, и образование NO полностью угнетают секрецию инсулина [Corbett, 1995; Stevens et al., 1997; Takamura et al., 1998; Reddy et al., 1999; Балаболкин, 2000; Ярек-Мартынова, Шестакова, 2004]. Оксид азота, вырабатываемый эндотелиальной NO-синтазой, кодируемый геном NOS3, является самым мощным из известных эндогенных вазодилятаторов [Wilcox et al., 1997; Ванин, 1998]. Нарушения со стороны иммунной системы играют важную роль в манифестации заболевания и развитии осложнений [Осокина и др., 1995; Wu et al., 1998; Yoon et al., 1998]. Представляет интерес изучение вклада генов модификаторов иммунного ответа в развитии СД 1 типа и его осложнений. Состояние цитокинового профиля при СД 1 типа продолжает привлекать внимание ученых [Pakala, 1997; Sobel, 1998; Mandrup-Poulsen, 2003;

Rabinovitch, 2003; Roep et al., 2004; Aly et al., 2005; Arner, 2005; Зак и др., 2006]. Экспериментальные данные показали, что воспалительный аутоиммунный процесс в поджелудочной железе (инсулит) при дебюте заболевания связан с увеличением выработки провоспалительных цитокинов (ИЛ-lp, ФНО, ИФН, ИЛ-2, ИЛ-12). Цитокины стимулируют выработку NO, являются цитотоксичны-ми для Р-клеток и участвуют в развитии эндотелиальной дисфункции [Pakala, 1997; Asakawa et al., 1999; Burns et al., 1998; Zhu, 1999; Orbe, 1999; Zen, 1999; Rabinovich, 2003; Зак и др., 2006].

В литературе имеются немногочисленные данные, посвященные изучению вклада генов синтаз оксида азота и цитокинов в развитие СД 1 типа и его осложнений [Rabinovitch et al., 1998; Bidwell et al., 1999; Зак и др., 2002; Mandrup-Poulsen, 2003; Rabinovitch, 2003; Зак и др., 2006]. Вопрос о вкладе перечисленных генов-кандидатов СД 1 типа в развитие поздних осложнений диабета до сих пор остается открытым и требует дальнейшего изучения.

В последние годы развивается концепция «сшгтропных» заболеваний, которые представляют собой неслучайное сочетание нескольких болезней у индивидуума, и осуществляется поиск общих для них наследственных факторов -генов синтропии [Пузырев, 2003]. В составе полигландулярного аутоиммунного синдрома СД 1 типа сочетается с другими аутоиммунными заболеваниями [Jenkins et al., 2002]. Наиболее часто встречается сочетание СД 1 типа и аутоиммунного тиреоидита (АИТ) [Ueda et al., 2003; Chistiakov, 2005; Smyth et al., 2006; The Wellcome Trust Case Control Consortium, 2007]. В связи с этим, поиск общих генетических механизмов возникновения аутоиммунных заболеваний представляет научный и практический интерес. Цель работы:

Исследование вовлеченности полиморфных вариантов генов синтаз оксида азота (NOS1, NOS3) и генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, IL4, IL4RA, TNFA) в развитие и прогрессирование сахарного диабета 1 типа. Задачи исследования:

1. Провести анализ ассоциаций полиморфизмов генов NOS1 (С3392Т); NOS3 (С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T)\ IL1B (+3953 А1/Л2); 1L1RN (VNTR); IL4 {G717C)-, 1L4RA (A148G); TNFA (G(-308)A) с сахарным диабетом 1 типа и его осложнениями (диабетической ретинопатией, диабетической нефропатией, диабетической полинейропатией).

2. Описать структуру цитокинового профиля, взаимосвязь показателей клеточного и гуморального иммунитета, вазоактивных протеолитических систем у пробандов с сахарным диабетом 1 типа в зависимости от длительности заболевания, фазы компенсации, наличия осложнений.

3. Выявить ассоциации исследуемых полиморфных генетических маркеров с патогенетически значимыми для сахарного диабета 1 типа количественными признаками.

4. Провести сравнительный анализ вовлеченности генов модификаторов иммунного ответа (ILIB, IL1RN, 1L4, IL4RA) у больных сахарным диабетом 1 типа и аутоиммунным тиреоидитом.

Научная новизна: Получены новые данные по ассоциациям полиморфизмов генов синтаз оксида азота (NOS1, NOS3) и генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, 1L4, IL4RÄ) с клиническими проявлениями СД 1 типа в Сибирском регионе (г. Томск). Впервые обнаружены ассоциации аллеля С полиморфизма С3392Т гена NOS1, аллеля С полиморфизма С(-691)Т, аллеля С полиморфизма С774Т, аллеля G полиморфизма G894T гена NOS3, аллеля А2 полиморфизма +3953 А1/А2 гена IL1B, аллеля Л2 VNTR полиморфизма гена IL1RA с СД 1 типа. Впервые на семейном материале представлена комплексная оценка роли полиморфизмов генов синтаз оксида азота и генов цитокинов в развитии СД 1 типа и его осложнений. С помощью TDT установлены ассоциации аллеля В VNTR4A/B полиморфизма, аллеля С полиморфизма С774Т, аллеля G полиморфизма G894T гена NOS3, аллеля А полиморфизма A148G гена IL4RA с заболеванием. Для сосудистых осложнений получены следующие ассоциации: аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциирован с развитием диабетической ретинопатии; аллель В VNTR4A/B полиморфизма, аллель G полиморфизма G894T гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA вовлечены в развитие диабетической нефропатии; аллель С полиморфизма С3392Т гена NOS1, аллель В VNTR4A/B полиморфизма гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциированы с развитием диабетической полинейропатии; аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциирован с развитием всех трех изученных осложнений СД 1 типа.

Впервые изучены гаплотипы гена NOS3, образованные четырьмя полиморфизмами (С(-691)Т; VNTR4A/B, С774Т, G894T) у больных СД 1 типа. Показано, что гаплотип CBCG является предрасполагающим к развитию СД 1 типа.

Новым в исследовании является комплексное изучение характера и выраженности нарушений в структуре цитокинового профиля и взаимоотношений системы иммунитета, вазоактивных протеолитических систем в развитии диабета и его осложнений (диабетической ретинопатии, диабетической нефропатии, диабетической полинейропатии). Впервые изучены ассоциации генов синтаз оксида азота и цитокинов с количественными патогенетически значимыми признаками у больных СД 1 типа, проживающих в условиях Сибири.

Впервые проведен анализ включенности изученных генов модификаторов иммунного ответа в развитие сахарного диабета 1 типа и аутоиммунного тиреоидита у жителей Сибирского региона (г. Томск).

Научно-практическая значимость исследования:Установлены ассоциации полиморфных маркеров генов синтаз оксида азота и цитокинов с сахарным диабетом 1 типа и его осложнениями: диабетической ретинопатией, нефропа-тией и полинейропатией, а также с показателями систем иммунитета, протео-лиза и цитокиновым профилем. Полученные данные могут быть использованы в создании исследовательских и диагностических панелей генетических маркеров для изучения молекулярно-биологической основы и диагностики наследственной предрасположенности к развитию сахарного диабета 1 типа и его осложнений в семьях, отягощенных данным заболеванием.

Положения, выносимые на защиту:

1. Изученные полиморфные маркеры генов синтез оксида азота (NOS1, NOS3) и цитокинов {IL4RÁ) ассоциированы с сахарным диабетом 1 типа и его осложнениями.

2. Гаплотип CBCG гена NOS3, образованный четырьмя полиморфизмами (С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T) является предрасполагающим к развитию сахарного диабета 1 типа.

3. Развитие сосудистых осложнений сахарного диабета 1 типа сопровождается нарушением состояния вазоактивных протеолитических систем, повышением уровня провоспалительных цитокинов, которые контролируются генами оксида азота (NOS1, NOS3) и генами модифи-

, каторами иммунного ответа {IL4, IL4RA, TNFA).

Апробация работы: Основные результаты диссертационной работы доложены на II научной конференция с международным участием "Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и патологии" (Новосибирск, 2002); Региональной научно-практической конференции "Сахарный диабет и сердечно-сосудистая патология" (Томск, 2002); Всероссийской научно-практической конференции "Клиническая эндокринология - достижения и перспективы" (Санкт-Петербург, 2003); II Сибирской конференции эндокринологов "Эндокринология Сибири" (Красноярск, 2003); II межрегиональной научно-практической конференции "Клинические аспекты использования молекулярно-биоло-гической диагностики в медицине" (Новосибирск, 2003); III Всероссийском диабетологическом конгрессе (Москва, 2004); VII и VIII научных конференциях «Генетика человека и патология» (Томск, 2004; 2007); Конгрессе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006); кафедре педиатрии ФПК и ППС СибГМУ (Томск, 2007); межлабораторном научном семинаре ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2003,2007, 2008); Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы современной эндокринологии» (Москва, 2008). Результаты работы отмечены дипломом 1-й степени на Ш Всероссийском диабетологическом конгрессе (Москва, 2004); дипломом лауреата конкурса Томской области в сфере образования и науки и именной премией (Томск, 2004), дипломом 1-й степени на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы современной эндокринологии» (Москва, 2008).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 22 работы: 2 статьи в рецензируемых журналах ВАК; 5 статей в сборниках; 15 тезисов конференций (11 отечественных, 5 зарубежных).

Структура и объем диссертации: Диссертационная работа изложена на 195 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения и выводов. Данные проиллюстрированы 67 таблицами, 10 рисунками. Библиографический указатель включает 324 источника, из них 83 работы отечественных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Настоящее исследование включало следующие группы обследованных: общая группа больных сахарным диабетом 1 типа (дети, подростки и взрослые) -285 человек (табл. 1); для 114 пробандов с сахарным диабетом 1 типа (дети и подростки) был сформирован семейный материал: родственники больных СД 1 типа первой степени родства (родители (матери, отцы) - 190 человек, здоровые сибсы (братья, сестры) — 63 человека); больные атоиммунным тиреоидитом -120 человек (мальчиков - 19 человек, девочек — 101 человек, средний возраст -13,5+0,6). В генетической клинике ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН проведено клинико-генеалогическое обследование родственников больных из 110 семей (80 - полных, 30 - неполных). Общее количество обследованных родственников составило 4417 человек. В исследование были включены только пациенты, подписавшие добровольное информированное согласие.

Таблица 1

Характеристика больных сахарным диабетом 1 типа_

Сахарный диабет 1 типа, п=285, возраст от 6 до 53 лет

Средний возраст 21,60^11,35 лет

Женщины, п=146 Мужчины, п=139

Давность заболевания

До 3 лет, п=82 (31%) От 3 до 5 лег, п=50 (19%) Более 5 лет, п=130 (50%)

Сахарный диабет 1 типа без осложнений, п=87 (33%)

Диабетическая ретинопатия, п~135 (51%)

1 ст - п=95 (70%) И ст - гг=26 (19%) III ст —п=14 (11%)

Диабетическая иефропатия, п=107 (40%)

I ст-п=41 (38%) II ст — п=58 (54%) III ст - п=8 (8%)

Микроальбуминурия - п=46 (43%) Протеинурия-п=61 (57%)

Диабетическая полинейропатия, п~113 (42%)

I ст-п=112 (99%) II ст-п=1 (1%)

Сочетание ретинопатии и нефропатии, п=88 (33%)

Сочетание ретинопатии, нефропатии и полинейропатии, п=55 (21%)

СД 1 до 18 лет (дети и подростки) СД 1 с 19 до 53 лет (взрослые)

п =154 (54%) п =131 (46%)

Средний возраст 13,5б±2,67 лет Средний возраст 32,08±10,02 лет

Девочки, п=72 Женщины, п=75

Мальчики, п=82 Мужчины, п=56

Примечание: п — абсолютное число человек.

Диагностика СД 1 типа проводилась на базе эндокринологического отделе-■ ния Детской больницы № 1 и эндокринологического отделения Областной клинической больницы г. Томска в период с 1999 по 2005 г.г. Диагноз СД 1 типа устанавливали после детального клинико-инструментального обследования в условиях специализированного стационара на основании рекомендаций Федеральной целевой программы «Сахарный диабет» (2002). Критерием диагностики нефропатии у детей служила классификация Могщепэеп и др. (1983). Стадию микроальбуминурии диагностировали при уровне альбуминурии от 30 до 300

мг/сутки, стадию протеинурии — более 300 мг/сутки [Дедов и др., 2003]. Для диагностики диабетической ретинопатии использовали критерии Kohner и Porta (1992). Диагностика диабетической нейропатии основывалась на классификации Nathan (1993). Диагноз аутоиммунного тиреоидита ставили на основании требований, утвержденных Консенсусом «Аутоиммунный тиреоидит: клинические рекомендации по диагностике и лечению», 2002.

В качестве популяционного контроля использовали группу неродственных индивидов, составивших банк ДНК ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН. Общая численность контрольной выборки составила 243 человека русской национальности, проживающих в г. Томске (средний возраст 44,3±0,7 лет).

Биохимическое исследование, проведенное на кафедре биохимии СибГМУ (под руководством д.м.н., проф. Сухановой Г.А.; к.м.н. Спириной JI.B.) включало определение: гликированного гемоглобина, калликреина, капликреиногена [Пасхина, 1974], ангиотензин-превращающего фермента [Голиков и др., 1998], al-протеиназного ингибитора, а2-макроглобулина [Нартикова, Пасхина, 1979].

Иммунологическое исследование, проведенное в биохимической (зав. лабораторией - д.м.н. Сазонов А.Э.) и иммунологической (зав. лабораторией -д.м.н. Петровский Ф.И.) лабораториях ЦНИИ СибГМУ, включало определение уровня фактора некроза опухоли-альфа, интерлейкина-1, интерлейкина-4 в сыворотке крови (стандартные наборы «Протеиновый контур», Санкт-Петербург). Клеточный и гуморальный иммунитет исследовали путем определения популяций и субпопуляций лимфоцитов с помощью моноклональных антител, иммуноглобулинов классов А, М, G в сыворотке крови [Manchini, 1965], концентрации циркулирующих иммунных комплексов в крови больных [Гриневич, Алферова, 1981].

Всего изучено 10 полиморфных маркеров 7 генов-кандидатов СД I типа. Анализ полиморфных вариантов специфических участков генома проводили с использованием методов полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, используя структуру праймеров и соответствующие ферменты рестрикции, описанные в литературе (табл. 2).

' Распределение генотипов исследованных полиморфных локусов проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга (РХВ) с помощью точного теста Фишера [Вейр, 1995]. При проведении попарного сравнения частот аллелей, генотипов и гаплотипов, исследованных полиморфных вариантов генов между анализируемыми группами использовали критерий х2 с поправкой Йетса на непрерывность или двухсторонний точный критерий Фишера. Для оценки ассоциаций полиморфных вариантов генов с патологическим фенотипом рассчитывали показатель «отношение шансов» (OR) [Реагсе, 1993]. Для поиска ассоциации патологии с генетическими маркерами был использован критерий, оценивающий отклонения передачи исследуемого аллеля от гетерозиготных родителей потомкам - Transmission/Diseqilibrium Test (TDT) [Allison, 1997]. Неравновесие по сцеплению определяли с использованием алгоритма Левонтина [Lewontin, 1964]. Программа «Phase v. 2.0.2» использовалась для оценки частот гаплотипов [Stephens et al., 2001]. Для оценки связи количественных признаков с исследуемыми генетическими маркерами использовали сравнение средних значений

метрических показателей у носителей разных генотипов с помощью непараметрических тестов Манна-Уитни (при сравнении двух групп) и Краскела-Уоллиса (при сравнении трех групп). Статистически значимыми считали различия при р<0,05. Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программ «Statistica v.6» (StatSoft Inc., 1998); «GrafPAD InStat v. 1.12a» (GrafPAD Software, 1990); «SNPAlyze v. 5.0.4» (Dynacom, Japan).

Таблица 2

Ген Полиморфизм Локализация в гене Фермент рестрикции Литература

NOS1 С3392Т Экзон 18 Dra III Levecque et al., 2003

N083 С(-691)Т Промотор Fsp4H I Novoradovsky et al., 1999

С774Т Экзон 6 Fokl

G894T Экзон 7 FriOI

VNTR4A/B Интрон 4 -

IL1B (+3953) А1/А2 Экзон 5 TaqI Wilkinson et. al., 1999

1L1RN VNTR Интрон 2 - Tarlow et al., 1993

1L4 G717C З'-UTR Vnel (ApaLl) Пузырев и др., 2002

IL4RA A148G Экзон 3 Rsal Noguchi, 1999

TNFA G(-308)A Промотор Bspl91 Patel et al., 2000

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов N051, N053, Т№А, 1ЫВ, 1Ь4 и 1Ь4КА у больных сахарным диабетом 1 типа

Для всех полиморфных вариантов генов N081, N083, ШЕЛ, 1Ь1В, 1ЫШ, 1Ь4 и И4ЛА распределение генотипов соответствовало равновесию Харди-Вайнберга за исключением полиморфного маркера С3392Т гена N051 за счет избытка гетерозигот (х2=4,210; р<0,05) и полиморфизма ШТЯ4А/В гена N083 за счет недостатка гетерозигот (х2=3,106; р<0,05).

При попарном сравнении выявлено значимое различие в частотах генотипов между больными СД 1 типа и здоровыми лицами для следующих полиморфных маркеров (табл. 3). Анализ методом «случай-контроль» (больные СД 1 типа - популяционный контроль) показал наличие статистически значимой ассоциации аллеля С полиморфного маркера С3392Т гена МОБ1 с заболеванием (011=1,47; 95%С1: 1,05-2,04; р=0,02). Для изучаемых полиморфизмов гена N083 риск развития СД 1 типа возрастал от 1,49 (95%С1:1,09-2,05; р=0,01) для аллеля в полиморфного маркера в894Т до 1,72 (95%С1: 1,09-2,73; р=0,016) для аллеля С полиморфного маркера С(-691)Т. Наибольшее значение ОИ. было получено для аллеля С полиморфного маркера С774Т - 1,75 (95%С1: 1,05-2,91; р=0,031). Аллель А2 варианта +3953 А1/А2 гена 1ЫВ ассоциирован с развитием СД 1 типа (011=1,52; 95%С1: 1,02-2,26; р=0,04). Для аллеля А2 УИТК полиморфизма гена И1Ш получена статистически значимая ассоциация с заболеванием

(СЖ=1,78; 95%С1: 1,07-2,97; р=0,025). Для полиморфных маркеров: ШГЯ4А/В (ген N083), в(-308)А (ген ШГА), 0717С (ген И4), А1480 (ген И4М) взаимосвязь с заболеванием с помощью данного метода не обнаружена ((Ж<1).

Таблица 3

Сравнительный анализ частот генотипов у больных сахарным диабетом 1 типа и в контрольной группе_

Ген/Полиморфизм Генотипы Контроль, % СД 1 типа, % Р

N081 С3392Т СС 40 49 0,1088

СТ 48 47 0,8881

ТТ 12 4 0,0186

N053 С(-691)Т СС 67 79 0,0170

СТ 31 20 0,0277

ТТ 2 1 ■ 0,6895

СС 68 77 0,0407

N053 С774Т СТ 26 22 0,4634

ТТ 6 1 0,1069

вв 37 45 0,1340

N083 0894Т ОТ 44 46 0,7671

ТТ 19 9 0,0094

1ЫВ +3953А1/А2 А1А1 64 52 0,0274

А1А2 32 42 0.0717

А2А2 4 6 0,3514

IL1RN ттк А1А1 74 61 0,0180

А1А2 18 32 0,0039

А2А2 8 7 0,5309

Примечание: р-достигнутый уровень значимости.

Поиск ассоциаций с помощью ТОТ показал, что аллель В полиморфного маркера ШТЯ4А/В, аллель С варианта С774Т, аллель в полиморфного маркера 0894Т гена N083 и аллель Л полиморфизма А1480 гена ПАЯЛ ассоциированы с СД 1 типа, при этом показатель ТОТ составил 3,84 (р=0,05), 4,22 (р=0,03), 3,88 (р=0,05) и 5,56 (р=0,02) соответственно (табл. 4). Для остальных полиморфизмов исследуемых генов-кандидатов СД 1 типа ассоциация с заболеванием с помощью данного метода не выявлена.

Исследование структуры гаплотипов, образованных четырьмя полиморфными маркерами С(-691)Т, ШТЯ4А/В, С774Т и 0894Т гена N083, методом «случай-контроль», выявило 16 вариантов гаплотипов, четыре из которых (СВСв, САСй, СВСТ и СВТТ) явились наиболее распространенными в группе больных СД 1 типа и в сумме составили 83% от общего числа всех возможных вариантов. Анализ частот гаплотипов показал достоверное отличие (р=0,01) между больными СД 1 типа и контрольной группой (табл. 5). Гаплотип СВСС встречался у больных в 51% случаев, против 40% в группе популяционного контроля. Гаплотипы САСО, СВСТ и СВТТ не отличались по своему процентному соотношению в групппе СД 1 типа и популяционного контроля (табл. 5).

В литературе, нет описания данного сочетания гаплотипов гена N053, поэтому провести сравнение с другими этническими группами не представляется возможным.

Таблица 4

Частоты аллелей, унаследованных больными

сахарным диабетом 1 типа от гетерозиготных родителей

Ген Полиморфизм TDT p(d.f.=l)

N0S1 С3392Т 1,64 0,2000

NOS3 С(-691)Т 0,17 0,6770

VNTR4A/B 3,84 0,0500

С774Т 4,22 0,0309

G894T 3,88 0,0489

TNFA G(-308)A 0,66 0,4170

IL1B (+3953) AI/А2 1,75 0,1853

1L1RN VNTR 0,03 0,8744

IL4 G717C 0,02 0,8897

IL4RA A148G 5,56 0,0183

Примечание: р-достигнутый уровень значимости; d.f.-число степеней свободы.

Таким образом, гены синтаз оксида азота (NOS1, NOS3) и цитокинов {IL1B, IL1RN, IL4RÄ) ассоциированы с развитием СД 1 типа, а для полиморфизмов С774Т и G894T гена NOS3 данная ассоциация получена двумя методами («случай-контроль», TDT), что значительно повышает достоверность результатов. Гаплотип CBCG гена NOS3 является предрасполагающим к развитию сахарного диабета 1 типа.

Таблица 5

Гаплотипы гена NOS3 (С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T)

Гаплотипы гена NOS3 Контроль СД 1 типа P

CBCG 40% 51%

CACG 10% 8% 0,01

CBCT 14% 14%

CBTT 10% 10%

Примечание: р-достигнутьш уровень значимости.

Анализ ассоциаций изучаемых генов у больных СД 1 типа с диабетическими ангиопатиями

При изучении групп больных СД 1 типа с наличием осложнений (диабетическая ретинопатия - ДР, диабетическая нефропатия — ДН, диабетическая поли-нейропатия - ДПН) в качестве контроля была использована группа больных СД 1 типа без диабетических ангиопатий (ДА). Больные групп сравнения не отличались по возрасту, длительности заболевания, степени компенсации диабета и полу. Для всех полиморфных вариантов генов N051, N053, ШРА, 1ЫВ, И1Ш, К4 и 1Ь4ЯА в группах больных СД 1 типа с наличием ДР, ДН, ДПН и сочетанием трех осложнений распределение генотипов соответствовало РХВ, за исключением полиморфного маркера С3392Т гена N051 (р<0,05) за счет избыт-

ка гетерозигот в группах с ДН, ДПН и сочетанием трех осложнений. Не выявлено различий в частотах аллелей и генотипов между больными СД 1 типа без осложнений и больными СД 1 типа с наличием ДА для всех изученных полиморфных маркеров. Анализ методом «случай-контроль» (больные СД 1 типа без осложнений - больными СД 1 типа с наличием ДР, ДН, ДПН, сочетанием трех осложнений) не обнаружил отличий между исследованными группами. Однако, при поиске ассоциаций с помощью ТБТ выявлено: аллель В полиморфизма ШШ4А/В (4,50; р=0,03) и аллель в варианта в894Т (4,32; р=0,04) гена N083 ассоциированы с ДН; аллель С полиморфизма С3392Т гена N081 (4,69; р=0,03) и аллель В полиморфизма ШТК4А№ гена N083 (4,50; р=0,03) ассоциированы с ДПН; аллель А полиморфного маркера А148Б гена 11411А ассоциируется с ДР (4,22; р=0,04), ДН (4,97; р=0,03), ДПН (3,84; р=0,05) и с сочетанием трех осложнений (4,27; р=0,04).

Для сравнения частот гаплотипов гена N083 была выделена группа больных СД 1 типа, имеющая ДА или их комбинацию. Проведено сравнение данной группы с популяционным контролем. Получены следующие результаты: определено четыре наиболее распространенных гаплотипа в сумме составляющих 84%: СВСв, СЛСв, СВСТ и СВТТ. Сравнение частот гаплотипов показало достоверное отличие (р=0,05) менаду больными СД 1 типа, имеющими ДА и контрольной группой. Гаплотип СВСС встречался у больных СД 1 с ДА в 51% случаев, в отличие от группы популяционного контроля - 40%. Частоты встречаемости гаплотипов САСй, СВСТ и СВТТ не отличались от популяционных. Проведено сравнение распространенности частот гаплотипов гена N083 между группами больных СД 1 типа без ДА и больными СД 1 типа с ДА, отличий не получено (р=0,72). Таким образом, изученные полиморфные варианты генов синтаз оксида азота и цитокинов вносят вклад как в развитие СД 1 типа, так и его сосудистых осложнений.

Цитокиновый статус при сахарном диабете 1 типа и его зависимость от полиморфных вариантов генов

В общей группе больных диабетом было обнаружено высокое содержание ИЛ-1Р, ИЛ-4 и ФНО-а (табл. 6) по сравнению с показателями контрольной группы.

Таблица 6

Цитокины сыворотки крови больных сахарным диабетом 1 типа (Х±т)

Показатель Больные сахарным диабетом 1 типа (общая группа) Контроль Р

ИЛ-1Р, пг/мл 241,30±29,34 8,46±2,48 р<0,001

ИЛ-4, пг/мл 110,93±12,82 21,05±5,71 р<0,001

ФНО-а, пг/мл 189,95+32,25 12,39±7,03 р<0,001

Примечание: р-достоверность различия показателей по сравнению с контролем.

Повышение ИЛ-1Р и ФНО-а в общей группе больных с диабетом, по нашему мнению, связано с активным аутоиммунным воспалительным процессом у данной категории лиц. Отличий цитокинового профиля по половому признаку у

больных СД 1 типа не выявлено. Уровень цитокинов в группе взрослых с СД 1 типа был выше, чем в группе детей и подростков (табл. 7).

Таблица 7

Цитокины сыворотки крови больных сахарным диабетом 1 типа

в зависимости от возраста (Х±гп)

Показатель Больные сахарным диабетом 1 типа дети и подростки Больные сахарным диабетом 1 типа взрослые р* р**

ИЛ-10, пг/мл 209,78x8,50 284,6715,17 0,003 0,0020

ИЛ-4, пг/мл 87,19+6,81 142,58+9,41 0,002 0,0002

ФНО-а, пг/мл 182,87+4,78 201,95+5,09 0,003 0,0011

Примечание: р*- достигнутый уровень значимости для теста Маина-Уитни; р**-достигнутый уровень значимости для коэффициента ранговой корреляции по Спирману.

ИЛ-1Р, пг/мл

ИЛ 4, пг/мл

ФНО-а, пг/мл

■ Контроль □ Без осложнений

В Диабетическая ретинопатия 0 Диабетическая нефропатия В Диабетическая полинейропатия В Сочетание трех осложнений

Рис. 1. Содержание цитокинов сыворотки крови у больных сахарным диабетом 1 типа в зависимости от наличия осложнений. Примечание: р-достигнутый уровень значимости для теста Краскелла-Уоллиса; *-достоверность различий показателей по сравнению контролем (р<0,001); **—достоверность различия показателей между группами без осложнений и с ретинопатей, с нефропатией, с полинейропатией, с сочетанием трех осложнений (р<0,01).

Декомпенсация заболевания сопровождалась повышением уровня ИЛ-1|3 (р<0,05), ИЛ-4 (р<0,05) и ФНО-а. (р<0,05), что свидетельствовало о роли хронической гипергликемии в поддержании воспалительного процесса у больных с неудовлетворительной компенсацией диабета. Повышенное содержание ИЛ-1[), ИЛ-4 и ФНО-а зарегистрировано при манифестации заболевания. По мере разрушения {¡-клеток и стихания аутоиммунного процесса содержание изучаемых цитокинов в сыворотке крови у больных СД 1 типа уменьшалось, однако с увеличением длительности заболевания и возникновением ДА вновь

происходило значительное повышение уровня цитокинов, что согласуется с данными литературы и указывает на плохой прогноз течения заболевания [Martin et al., 2003; Skowronski et al., 2004; Schra et al., 2005]. Выявлена статистически значимая разница уровня изучаемых цитокинов между контрольной группой, группой больных СД 1 типа без осложнений и группами: ДР, ДН, ДНП, сочетанием трех осложнений (рис. 1). Таким образом, показатели цитокинового профиля у больных СД 1 типа отражают активность аутоиммунного процесса в первый год заболевания, а также наличие хронического воспаления при развитии ДА и зависят от степени компенсации диабета.

У больных сахарным диабетом 1 типа - носителей аллеля AI гена IL1B содержание ИЛ-4 было выше, чем у носителей аллеля А2 (р=0,05). В литературе имеются данные о том, что цитокины могут действовать не только локально (апокринно, паракринно) на клетку, но и дистантно, т.е. как обычные гормоны [Rabinovitch, 2003]. Аллель С полиморфизма G717C гена IL4 (р=0,03) ассоциирован со значительным увеличением ИЛ-1р по сравнению с аллелем G. В нашем исследовании у больных с СД 1 типа были повышены оба цитокина. Однако, ассоциированный с заболеванием аллель А2 гена IL1B наблюдался у больных с более низким содержанием противовоспалительного цитокина ИЛ-4, что может способствовать течению хронического воспалительного процесса у данных групп пациентов. Полученные ассоциации показывают сложность процессов взаимодействия цитокинов и неоднозначность их интерпретации.

Состояние клеточного и гуморального иммунитета при сахарном диабете 1типа и его зависимость от полиморфных вариантов генов

В связи с аутоиммунным характером заболевания изучение особенностей иммунного статуса у больных с СД 1 типа привлекает внимание исследователей на всех стадиях болезни. Результаты проведенного исследования показали, что у детей и подростков с СД 1 типа зарегистрировано низкое количество Т-лимфоцитов (CD3, р<0,05 и CD4, р<0,01), увеличение содержания CD72 и повышение их функциональной активности за счет избыточного образования циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) (р<0,01) (табл. 8). В зависимости от давности заболевания выявлены следующие особенности: на первом году заболевания было снижено общее количество лейкоцитов (р<0,05), лимфоцитов (р<0,05), Т- и В-лимфоцитов (р<0,05). Зависимости показателей иммунного статуса от степени компенсации СД 1 типа не установлено. Развитие ДА было ассоциировано со снижением соотношения CD4/CD8 (р<0,05) и повышенным уровнем ЦИК (р<0,05).

Дети и подростки с СД 1 типа - носители аллеля А полиморфизма G(-308)A гена TNFA имели низкие показатели числа лейкоцитов по сравнению с носителями аллеля G (р=0,032) и контрольной группой (р<0,05). Для полиморфизма +3953 А1/А2 гена IL1B получено две ассоциации: носители генотипа А2А2 имели повышенное содержание IgA (р=0,017) и соответственно более высокий показатель иммунологического индекса IgA/CD72 (р=0,005). Для больных СД 1 типа носителей аллеля А полиморфизма A148G гена IL4RA было характерно повышенное содержание IgG в сыворотке крови по сравнению с носителями

аллеля (? (р=0,05). Известно, что повышение активности гуморального иммунитета играет значительную роль в развитии СД 1 типа [Дедов и др., 2002]. Следовательно, найденные ассоциации генов-кандидатов СД 1 типа с показателями клеточного и гуморального иммунитета доказывают вовлеченность данных систем в развитие заболевания и его осложнений.

Таблица 8

Иммунологические показатели у детей и подростков с

сахарным диабетом 1 типа (Х±т)

Показатель Саха рный диабет 1 типа Контроль

Все дети и подростки Девочки Мальчики

Лейкоциты, 109/л 5,85±0,24 5,69±0,36 5,97±0,31 5,78±0,46

Лимфоциты, 109/л 2,22±0,11 2,18±0,18 2,89±0,20 2,54±0,32

СОз+, ЮУ/л 1,02±0,09* 0,82±0,09* 1,10±0,10 1,36±0,14

С04+, Ю7л 0,35±0,03** 0,35±0,04** 035±0,03** 0,89+0,13

С08 10у/л 0,45±0,04 0,46±0,08 0,43+0,05 0,41+0,08

С012\ Ю7л 0,61+0,05 0,56±0,08 0,64±0,07 0,50±0,14

ЦИК, о.е. 52,70±3,17** 48,79±4,17** 55,69±4,63** 26,37±5,47

А, г/л 2,03±0,11* 1,97±0,12 2,08±0,16** 1,46±0,24

^М, г/л 1,56±0,07 1,61±0,10 1,5210,09 1,11 ±0,28

ГЯ в, г/л 12,30+0,43 11,64+1,47 12,82±0,59* 10,07+1,55

Примечание: *-р<0,05, достоверность различия по сравнению с контролем; **-р<0,01, достоверность различия по сравнению с контролем.

Состояние вазоактивиых протеолитических систем при сахарном диабете 1 типа и их зависимость от полиморфных вариантов генов

Изучение активности калликреин-кининовой (ККС) и ренин-ангиотензино-вой (РАС) систем имеет большое значение для оценки процессов протеолиза, развития необратимых и обратимых реакций и прогнозирования сосудистых осложнений при СД 1 типа [Wirta et al., 2000; Rössing et al., 2003]. В общей группе больных СД 1 типа активность калликреина (КК) была увеличена в 1,6 раза, а активность калликреиногена (ККГ) снижена на 30%, что свидетельствовало об активации кининогенеза. Активность ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) сыворотки крови в общей группе больных СД 1 типа практически не отличалась от показателей у здоровых детей. В группе больных СД 1 типа не обнаружено значительных изменений активности ai-протеиназного ингибитора (оц-ПИ) и аг-макроглобулина (а2-МГ) (р>0,05), однако отмечена тенденция к снижению активности ссрПИ по сравнению с контролем (табл. 9).

Активность показателей КК и ККГ в сыворотке крови с увеличением длительности заболевания снижалась (р<0,05), особенно при продолжительности заболевания более 5 лет (р<0,05). Статистически значимое повышение активности АПФ отмечалась у больных с длительностью заболевания более 5 лет (р<0,05), а активность ai-ПИ и а2-МГ при этом снижалась (р<0,05). Развитие сосудистых осложнений приводило к снижению активности КК (р<0,05), осо-

бенно при развитии ДН. Активность ККГ не зависела от наличия сосудистых осложнений СД 1 типа. Повышенная активность АПФ сыворотки крови отмечалась у больных СД 1 типа при развитии ДН на стадии микроальбуминурии (МАУ) и протеинурии (ПУ) по сравнению с детьми без осложнений (51,3±3,4 и 57,0±2,9 против 33,2±2,5; р<0,05). При развитии ДА у больных СД 1 типа активность (ХгПИ и а2-МГ снижается по сравнению группой без осложнений (р<0,05). Снижение активности агПИ наблюдалось при ДН на стадии ПУ по сравнению с показателями группы контроля и больными без осложнений (р<0,05).

Таблица 9

Активность показателей вазоактивных протеолитических систем

Показатель Дети и подростки с сахарным диабетом 1 типа Контроль Р

Калликреин, мЕ/мл 102,6±6,4 62,1+6,4 р<0,05

Калликреиноген, мЕ/мл 260,7±12,8 373,2±22,6 р<0,05

Ангиотензин-превращающий фермент, мкмоль/мин-л 39,1±1,9 33,2±2,5 р>0,05

сц-Протеиназный ингибитор, ИЕ/мл 25,1±1,0 29,5±1,8 р>0,05

а2-Макроглобулин, ИЕ/мл 5,4+0,2 5,1+0,5 р>0,05

Примечание: р-достоверность различий показателей по сравнению контролем.

Дети и подростки больные СД 1 типа - носители аллеля С полиморфизма С774Т гена N083 имели более низкие показатели ККГ, чем носители аллеля Т (р=0,043). По нашим данным, аллель С связан с развитием СД 1 типа (р=0,031). Больные СД 1 типа, являющиеся носителями аллеля б полиморфизма в894Т гена N083, имели более низкие показатели агПИ, чем носители аллеля Г (р=0,008). В группе детей и подростков, больных СД 1 типа с ДН уровень активности а,-ПИ был низким по сравнению с детьми без осложнений. Кроме того, данный аллель был ассоциирован с развитием как СД 1 типа, так и ДН. Дети и подростки с СД 1 типа носители аллеля А полиморфизма 0(-308)А гена 7№Л, также имели низкие показатели активности агПИ. В нашем исследовании для гена TNFA не было найдено ассоциаций с СД 1 типа, однако по данным литературы установлена связь аллеля А с заболеванием [Аттепёгир е! а1., 2000; Науёеп й а!., 2004]. Активность АПФ была повышена у носителей аллеля А полиморфизма А148С гена Я.4&4 по сравнению с носителями аллеля С (р=0,008). С этим же аллелем нами получена ассоциация с СД 1 типа, ДР, ДН, ДПН и их сочетанием. Кроме того, как показали результаты работы и данные литературы [ЬЫег, 2001; Дедов, 2002], повышение АПФ сопровождает развитие ДА, особенно ДН. Таким образом, полученные ассоциации изучаемых генов-кандидатов СД 1 типа и его осложнений с показателями вазоактивных

протеолитических систем (ККГ, АПФ, ai-ПИ) подтверждают их участие в развитии эндотелиальиой дисфункции при диабете.

Сравнительный анализ генов модификаторов иммунного ответа у больных сахарным диабетом 1 типа и аутоиммунным тиреоиднтом

Сахарный диабет 1 типа очень часто сочетается с другими аутоиммунными заболеваниями, особенно с аутоиммунным тиреоидитом [Jenkins et al., 2002; Ueda et al., 2003; Chistiakov, 2005; Smyth et al., 2006]. В связи с этим, поиск общих механизмов возникновения аутоиммунных заболеваний представляет научный и практический интерес.

Распределение генотипов соответствовало РХВ во всех исследуемых группах: больные СД 1 типа без АИТ, больные СД 1 типа с АИТ, больные АИТ. Анализ «случай-контроль» (больные СД 1 типа без АИТ, больные СД 1 типа с АИТ, больные АИТ) обнаружил отличие между группами больных СД 1 типа без АИТ и больными с АИТ для аллеля А2 гена IL1B OR=1,80 (95%С1: 1,112,92; р=0,016). Группы больных СД 1 без АИТ и СД 1 типа с АИТ отличались от группы больных с АИТ по частотам аллеля А2 гена IL1RN, OR=l,96 (95%С1: 1,14-3,39; р=0,014) и <Ж=2,06 (95%С1: 1,10-3,88; р=0,023), соответственно. Для группы больных АИТ ассоциации с заболеванием для изучаемых генов модификаторов иммунного ответа не выявлено. Таким образом, нам не удалось выявить «синтропные» гены, участвующие в развитии изучаемых аутоиммунных заболеваний. Статистически значимая ассоциация генов IL1B и IL1RN с заболеванием, получена только для больных СД 1 типа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

tmm, 2007; Носиков, 2008]. Таким образом, около 50% информации о вкладе конкретных генов в развитие СД 1 типа до сих пор остается неизвестной. Для более надежной характеристики связи полиморфизмов генов с МФЗ используется мета-анализ, включающий одновременный анализ отдельных (индивидуальных) исследований. Так, в электронной базе данных HuGE Net (http://www.hugenavigator.net) содержится информация о генах-кандидатах 1935 МФЗ. В отношении СД 1 типа накоплена информация о 276 генах. Несмотря на большое количество публикаций (614 ссылок на статьи), мета-анализ был проведен только для 18 генов. Наиболее полно изучены следующие генетические маркеры: HLA-DQB1, HLA-DRB1, HLA-DQA1, CTLA4, INS. Информации о мета-анализах генов-кандидатов СД 1 типа, изучаемых в данной работе не найдено.

Особенностью настоящей работы является комплексный подход к анализу двух связанных между собой систем генов: синтаз оксида азота и модификаторов иммунного ответа, белковые продукты которых участвуют в патогенезе развития СД 1 типа и его осложнений. Предпринята попытка выявления синтроп-ных генов, участвующих в развитии аутоиммунных заболеваний: сахарного диабета 1 типа и аутоиммунного тиреоидита.

Получены данные о вкладе полиморфизмов генов синтаз оксида азота (NOS1, NOS3) и генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, IL4, IL4RA) в развитие СД 1 типа у лиц, проживающих в Сибирском регионе (г. Томск). Впервые получены ассоциации СД 1 типа с аллелем С полиморфизма С3392Т гена NOS1, аллелем С полиморфизма С(-691)Т, аллелем С полиморфизма С774Т, аллелем G полиморфизма G894T гена NOS3, аллелем А2 полиморфизма +3953 А1/А2 гена IL1B, аллелем А2 VNTR полиморфизма гена IL1RN.

На семейном материале осуществлена комплексная оценка роли полиморфизмов генов синтаз оксида азота и генов цитокинов в развитии СД 1 типа и его осложнений. Установлены ассоциации аллеля В VNTR4A/B полиморфизма, аллеля С полиморфизма С774Т, аллеля G полиморфизма G894T гена NOS3, аллеля А полиморфизма A148G гена IL4RA с заболеванием. Для сосудистых осложнений получены следующие ассоциации: аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA вносит вклад в развитие диабетической ретинопатии; аллель В VNTR4A/B полиморфизма, аллель G полиморфизма G894T гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA связаны с развитием диабетической нефропатии; аллель С полиморфизма С3392Т в гена NOS1, аллель В VNTR4A/B полиморфизма гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциированы с развитием диабетической полинейропатии; аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциирован с развитием трех изученных осложнений СД 1 типа. Для полиморфизмов С774Т и G894T гена NOS3 ассоциация с заболеванием подтверждена двумя методами («случай-контроль» и TDT).

Гаплотип CBCG гена NOS3 образованный четырьмя полиморфизмами (С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T) является предрасполагающим в развитии сахарного диабета 1 типа.

Обнаружены ассоциации исследованных генов с рядом количественных патогенетически значимых для развития заболевания показателей. Показано, что

развитие сосудистых осложнений сопровождается повышением уровня изучаемых цитокинов (ИЛ-1Р, ИЛ-4, ФНО-а), изменением показателей иммунитета (СБЗ, С04, СБ72, ^А, ЦИК), что отражает наличие хронического воспаления у данной категории больных, начиная с детского возраста. Результаты исследования показали, что ген ИВ может влиять на продукцию ИЛ-4, на повышенное содержание ^А в периферической крови у больных СД 1 типа. Для больных СД 1 типа носителей аллеля С гена ¡14 характерно повышенное содержание ИЛ-1Р в сыворотке крови. Ген 1Ь4ЯА участвует в регуляции выработки ^О. Доказано участие генов N083 и модификаторов иммунного ответа (И4ЯА, в развитии дисбаланса вазоактивных протеолитических систем при диабете. Носители аллеля С полиморфизма С774Т тън&ИОБЗ имели низкие показатели ККГ; носители аллеля б полиморфизма С894Т гена N083 и аллеля А гена Т№А характеризовались снижением с^-ПИ, что способствует избыточному образованию кининов, создавая тем самым дополнительные условия для развития микроангиопатий. Больные СД 1 типа носители аллеля А полиморфизма А148й гена И4ЯА имели повышенную активность АПФ. Повышение АПФ способствует накоплению ангиотензина И, в результате чего происходит сужение выносящего почечного сосуда, повышение внутриклубочкового давления и появление альбуминурии, а в дальнейшем и ПУ. В нашем исследовании высокий уровень АПФ зарегистрирован у больных СД 1 типа с ДН на стадии МАУ и особенно ПУ. Следовательно, выявленные связи генов-кандидатов СД 1 типа с патогенетически значимыми количественными признаками показывают их роль в регуляции и взаимодействии между различными системами организма: РАС и ККС, системой иммунитета.

Результаты исследования показали значительный вклад гена N083 в развитие заболевания и его осложнений: полиморфизмы С774Т и С894Т связаны с СД 1 типа («случай-контроль» и ТОТ), а полиморфизм С894Т вносит вклад не только в развитие диабета, но и диабетической нефропатии; УЫТК4А/В полиморфизм ассоциирован с заболеванием и двумя осложнениями (ДН, ДПН). Ассоциации с количественными признаками, характеризующие состояние вазоактивных протеолитических систем при данном заболевании, подтвердили полученные результаты. Полученные данные о вкладе провоспалительного гена 1Ь1В и его антагониста, играющего защитную функцию в развитии СД 1 типа, свидетельствуют о выраженном, и плохо контролируемом воспалительном процессе. Особое внимание заслуживают найденные ассоциации аллеля А полиморфизма А1480 гена 1Ь4ЕА с заболеванием (ТОТ), а также связь этого аллеля с диабетическими ангиопатиями и их сочетанием.

Результаты настоящего исследования могут быть использованы для разработки и внедрения алгоритмов медико-генетического консультирования семей, имеющих больных сахарным диабетом 1 типа, а также для выделения групп риска развития диабетических ангиопатий у больных СД 1 типа, что, возможно, позволит снизить частоту терминальных стадий заболевания. Противоречия в результатах исследований генетики диабета, полученные на различных популяциях, требуют дальнейшего изучения и коррекции в зависимости от этнической принадлежности больных сахарным диабетом 1 типа.

выводы

1. Установлена функциональная значимость аллельных вариантов генов NOS1 (полиморфный маркер С3392Т), NOS3 (полиморфные маркеры: С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T), IL1B (полиморфный маркер +3953 AI/A2), IL1RN (VNTR полиморфизм), IL4RA (полиморфный маркер A148G) в патогенезе сахарного диабета 1 типа. Для полиморфизмов С774Т и G894T гена NOS3 ассоциация с заболеванием подтверждена двумя методами: «случай-контроль» и по критерию TDT.

2. Гаплотип CBCG, образованный четырьмя полиморфизмами гена NOS3 (С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T), является предрасполагающим к развитию сахарного диабета 1 типа. Показатель неравновесия по сцеплению для полиморфизмов С774Т и G894T гена NOS3 у больных сахарным диабетом 1 типа выше, чем в группе популяционного контроля (русские, г. Томск), 0,80 и 0,74 (р<0,01), соответственно.

3. Выявлены ассоциации генов-кандидатов сахарного диабета 1 типа с развитием сосудистых осложнений: диабетической ретинопатией - ген IL4RA (полиморфный маркер A148G)\ диабетической нефропатией - гены NOS3 (полиморфные маркеры: VNTR4A/B, G894T),IL4RA (полиморфный маркер A148G); диабетической полинейропатией - гены NOS1 (полиморфный маркер С3392Т), NOS3 (VNTR4A/B полиморфизм) и 1L4RA (полиморфный маркер Â148G); сочетание трех сосудистых осложнений (ДР, ДН, ДНП) - ген IL4RA (полиморфный маркер A148G).

4. Для больных сахарным диабетом 1 типа характерно значительное увеличение уровня цитокинов (ИЛ-lß, ИЛ-4, ФНО-а) сыворотки крови, которое зависит от возраста, длительности течения патологического процесса и ассоциируется с развитием сосудистых осложнений, характеризуя наличие хронического воспаления.

5. Иммунный статус детей и подростков с сахарным диабетом 1 типа характеризовался повышением активности гуморального звена иммунитета, выраженной депрессией Т-клеточного звена иммунитета, нарушением соотношения субпопуляций Т-лимфоцитов CD4/CD8, что имеет значение для формирования микроангиопатий.

6. Показано, что при сахарном диабете 1 типа в первый год заболевания происходит увеличение активности калликреина на фоне снижения активности калликреиногена; развитие диабетической нефропатии, сопровождается повышенной активностью АПФ и снижением активности ai-протеиназного ингибитора плазмы крови. Установлено участие генов синтаз оксида азота (NOS1, NOS3) и цитокинов (IL1BJL1RN, JL4RA, TNFA) в развитии дисбаланса вазоактивных протеолитических систем при диабете.

7. Выявлены ассоциации генов-кандидатов сахарного диабета 1 типа с количественными патогенетически значимыми признаками: ген IL1B оказывает влияние на содержание ИЛ-4 и IgA; ген 1L4 влияет на продукцию ИЛ-lß; ген 1L4RA участвует в регуляции выработки IgG.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кондратьева Е.И., Кравец Е.Б., Костюкова М.В., Вылегжанина Е.В., Тарасен-ко Н.В. Особенности иммунологического статуса в семьях детей, больных инсулинзависимым сахарным диабетом / Материалы III съезд иммунологов и аллергологов СНГ, Сочи, 16-18 сентября 2000 г. / Аллергология и иммунология. - 2000. - Т. 1 - № 2. - С. 142.

2. Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Кравец Е.Б., Косянкова Т.В., Тарасенко Н.В., Спирина JT.B., Ваганова Т. В. Генетический анализ факторов риска развития сахарного диабета 1 типа и его осложнений // Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и патологии: сб. трудов 2-й научной конференции с международным участием, посвященной 80-летию со дня рождения Колпакова М.Г., г. Новосибирск, 15-17 октября, 2002 г. - Новосибирск,

2002. - С. 70.

3. Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Кравец Е.Б., Косянкова Т.В., Фрейдин М. Б., Тарасенко Н.В. Влияние полиморфизма генов NOS3, АСЕ и AGT на развитие сахарного диабета 1 типа в Сибирском регионе // Сахарный диабет и сердечно-сосудистая патология: материалы конференции, г. Томск, 14-15 ноября, 2002 г. - Томск, 2002. - С. 37-38.

4. Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Кравец Е.Б., Фрейдин М.Б., Косянкова Т.В., Тарасенко Н.В., Юрченко Е.В. Характеристика взаимосвязи полиморфизма генов эндотелиальной синтазы окиси азота, ангиотензинпревращающего фермента и ангиотензиногена с сахарным диабетом 1 типа / Генетика человека и патология: Сборник научных трудов / Под ред. В.П. Пузырева. - Вып. 6. - Томск: Печатная мануфактура, 2002. - С. 67-72.

5. Кондратьева Е.И., Тарасенко Н.В., Ваганова Т.В. Роль цитокинов при сахарном диабете 1 типа у детей и подростков / Клиническая эндокринология -достижения и перспективы: всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 80-летию со дня рождения проф. Д.Я. Шурыгина, г. Санкт -Петербург, 17-18 апреля 2003 г. - Санкт-Петербург. - 2003. - С. 51-52.

6. Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Кравец Е.Б., Косянкова Т.В., Тарасенко Н.В., Ваганова Т.В., Спирина JI.B. Нефропатия и ретинопатия при сахарном диабете 1 типа у детей / 2-й Российский диабетологический конгресс, г. Москва, 3-5 июня 2002 г. - Москва. - 2002. - С. 270.

7. Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Кравец Е.Б., Косянкова Т.В., Тарасенко Н.В., Юрченко Е.В. Возможности молекулярной биологии в ранней диагностике сахарного диабета 1 типа и сосудистых осложнений // Эндокринология Сибири: сб. трудов 2-й Сибирской конференции эндокринологов, г. Красноярск, 23-24 октября, 2003 г. - Красноярск, 2003. - С. 80-82.

8. Косянкова Т.В., Кондратьева Е.И., Тарасенко Н.В., Пузырев В.П. Сахарный диабет: генетические аспекты современной диагностики заболевания и его осложнений / Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике / Под. Ред. А.Б. Масленникова. - Вып. 4. - Новосибирск: Альфа Виста. -

2003.-С. 107-115.

9. Тарасенко Н.В., Кондратьева Е.И., Косянкова Т.В.,Пузырев В.П. Ген NOS3: полиморфизмы VNTR, С691Т, CHAT, G894T при сахарном диабете 1 типа и

сосудистых осложнениях / Материалы 3-го Всероссийского диабетологичес-кого конгресса / Москва. - 2004. - С. 52-53.

10. Кондратьева Е.И., Суханова Г.А., Спирина Л.В., Тарасенко Н.В., Ваганова Т.В., Кретова Е.Ю. Новые технологии в диагностике и лечении диабетической нефропатии у детей / Материалы 3-го Всероссийского диабе-тологического конгресса / Москва. - 2004. - С. 551- 552.

П.Косянкова Т.В., Трасенко Н.В., Пузырев В.П., Кондратьева Е.И. Полиморфизм гена эндотелиальной синтазы оксида азота в патогенезе сахарного диабета 1 типа / Сборник тезисов Ш съезда ВОГиС "Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития" / Москва. - 2004.

- С. 77.

12.Тарасенко Н.В., Косянкова Т.В., Кондратьева Е.И., Пузырев В.П. Полиморфизмы гена эндотелиальной синтазы оксида азота при сахарном диабете 1 типа и сосудистых осложнениях / Генетика человека и патология: Сборник научных трудов / Под ред. В.П. Пузырева. - Вып. 7. - Томск: Печатная мануфактура, 2004. - С. 238-246.

13.Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Суханова Г.А., Кравец Е.Б., Спирина Л.В., Косянкова Т.В., Тарасенко Н.В., Ваганова Т.В. Клинико-генеалогические и биохимические механизмы формирования диабетической нефропатии у детей // Проблемы эндокринологии . - 2005. - Т. 51. - № 1. - С. 30-34.

14.Тарасенко Н.В., Кондратьева Е.И., Косянкова Т.В.,, Пузырев В.П. Генетические аспекты диагностики сахарного диабета 1 типа и его сосудистых осложнений Н Медицинская генетика / Материалы V съезда Российского общества медицинских генетиков (Часть Ш). - 2005. - № 6. - С. 274.

15.Kosynkova Т., Tarasenko N.. Kondratieva Е., Puzyrev V. Polimorphism of the ACE (I/D), AGT (T174M), NOS1 (C/T), and NOS3 (VNTR, C691T, C774T, G894T) genes in patients with insulin-dependent diabetes mellitus H Eur. J. Hum. Genet. - 2005. - V.13. - Suppl.l. - P. 1056 .

16.Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Косянкова T.B., Тарасенко Н.В. Анализ взаимосвязи полиморфных вариантов гена NOS3 с показателями иммунитета у больных сахарным диабетом 1 типа // Медицинская иммунология / Материалы конгресса «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». - 2006. - Т. 8.

- № 2-3. - С. 227-228.

17.Tarasenko N., Kondratieva Е., Puzyrev V. Endothelial nitric oxide synthase (NOS3) haplotype is associated with diabetes type 1II Eur. J. Hum. Génet. - 2007. -V.15.-Suppl.l.-P. 0998.

18.Рудко A.A., Тарасенко H.B., Кондратьева Е.И., Янкина Г.Н., Лошкова Е.В., Степаненко Н.П., Назаренко Л.П., Пузырев В.П. Полиморфизм генов модификаторов иммунного ответа при синтропных заболеваниях / Генетика человека и патология: Сборник научных трудов / Под ред. В.П. Пузырева. -Вып. 8. - Томск: Печатная мануфактура, 2007. - С. 106-110.

19.Кондратьева Е.И., Пузырев В.П., Тарасенко Н.В., Косянкова Т.В., Милованова Т.А., Гулиева Н.Г., Гудкова Т.К. Гены синтаз оксида азота (NOS1, NOS3) в развитии предрасположенности к сахарному диабету 1 типа // Сахарный диабет. - 2007. - № 2. - С. 9-13.

20.Tarasenko N., Kondratieva E., Puzyrev V. Polymorphisms in NOS1 (C/T), NOS3 (VNTR4a/b, 894G/T), IL4RA (I50V) genes are associated with microvascular complications in patients with type 1 diabetes // Eur. J. Hum. Genet. - 2008. -V.16. - Suppl.2. - P06.293.

21.Rudko A.A., Kondratieva E., Tarasenko N., Loshkhova E.V., Yankina G.N., Stepanenko N.P., Puzyrev V. Association between polymorphisms of immune defense modifier genes and autoimmune diseases in Tomsk population // Eur. J. Hum. Genet. - 2008. - V.16. - Suppl.2. - P06.036.

22.Тарасенко H.B. Ассоциация генов-кандидатов сахарного диабета 1 типа с показателями вазоактивных протеолитических систем / Сборник материалов Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы современной эндокринологии» / Москва. - 2008. - С. 130.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

al-ПИ - альфа один протеиназный ингибитор

а2-МГ — альфа два макроглобулин

А ИТ - аутоиммунный тиреоидит

АПФ — ангиотензин-превращающий фермент

ДА - диабетические ангиопатии

ДН - диабетическая нефропатия

ДПН - диабетическая полинейропатия

ДР — диабетическая ретинопатия

ИЛ - интерлейкин

ИНФ-у - интерферон гамма

КК - калликреин

К КГ - калликреиноген

МАУ — микроальбуминурия

МФЗ - многофакторные заболевания

ПУ - протеинурия

РХВ - равновесие Харди-Вайнберга

СД 1 типа - сахарный диабет 1 типа

ФНО - фактор некроза опухолей

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

CD - клетки иммунной системы (cluster of differentiation)

HLA - главный комплекс гистосовместимости

IDDM - локусы предрасположенности к сахарному диабету 1 типа (insulin

dependent diabetes mellitus) Ig - иммуноглобулин NO - оксид азота

TDT - критерий, оценки отклонения передачи исследуемого аллеля от

гетерозиготных родителей потомкам (Transmission/DiseqilibriumTest) VNTR - полиморфизм по числу тандемных повторов (variable number of tandem repeats)

ООО «НИП» г.Томск, ул. Советская 47, «Штемпельная Мастерская» тел.: 53-14-70, 52-83-10 Заказ № 3689, Тираж 150 шт.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Тарасенко, Наталия Викторовна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Современная концепция сахарного диабета.

1.2. Сахарный диабет 1 типа (эпидемиология, этиология, патогенез).

1.2.1. Эпидемиология сахарного диабета 1 типа.

1.2.2. Современное представление об этиологии и патогенезе сахарного диабета 1 типа.

1.3. Роль наследственности в возникновении и развитии сахарного диабета 1 типа.

1.3.1. Семейные случаи сахарного диабета 1 типа.

1.3.2. Многофакторный характер генетической предрасположенности к сахарному диабету 1 типа.

1.3.3. Роль НЬА-системы в развитии сахарного диабета 1 типа.

1.3.4. Другие системы генов предрасположенности к сахарному диабету 1 типа.

1.4. Характеристика генов-кандидатов подверженности к сахарному диабету 1 типа, включенных в настоящее исследование.

1.4.1. Гены синтаз оксида азота (N051, N053).

1.4.2. Ген фактора некроза опухолей (ШРА).

1.4.3. Ген интерлейкина-1 (1ЫВ).

1.4.4. Ген антагониста рецептора интерлейкина-1 (1ЫКЩ.

1.4.5. Ген интерлейкина-4 (1Ь4).

1.4.6. Ген рецептора интерлейкина-4 (1Ь4КА).

1.5. Перспективы развития генетических исследований в области сахарного диабета 1 типа.

Глава 2. Материал и методы.

2.1. Дизайн исследования.

2.2. Характеристика методов исследования.

2.2.1. Клинико-лабораторные методы.

2.2.2. Молекулярно-генетические методы.

2.2.3. Статистический анализ результатов исследования.

Глава 3. Результаты и обсуждения.

3.1. Популяционные особенности полиморфизмов генов NOS1, NOS3, TNFA, IL1B, IL1RN, IL4 и IL4RA у жителей г. Томска (контрольная выборка).

3.2. Анализ ассоциаций полиморфных"вариантов генов NOS1, NOS3, TNFA, IL1B, IL1RN, IL4 и IL4RA у больных сахарным диабетом типа с заболеванием.

3.3. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов NOS1, NOS3, TNFA, IL1B, IL1RN, IL4 pi IL4RA у больных сахарным диабетом типа с наличием сосудистых осложнений.

3.3.1. Диабетическая ретинопатия.

3.3.2. Диабетическая нефропатия.

3.3.3. Диабетическая полинейропатия.

3.3.4. Сочетание диабетической ретинопатии, диабетической неф-ропатии и диабетической полинейропатии у больных сахарным диабетом 1 типа.

3.4. Анализ цитокинового статуса при сахарном диабете 1 типа и его зависимость от полиморфных маркеров генов.

3.5. Состояние клеточного и гуморального иммунитета при сахарном диабете 1 типа и его зависимость от полиморфных маркеров генов.

3.6. Состояние вазоактивных протеолитических систем при сахарном диабете 1 типа и их зависимость от полиморфных маркеров генов

3.7. Сравнительный анализ генов модификаторов иммунного ответа {1ЫВ, 1ЫЮV, 1Ь4, И4ЯА) у больных сахарным диабетом 1 типа и аутоиммунным тиреоидитом.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Патогенетика сахарного диабета 1 типа и его осложнений: гены синтаз оксида азота и цитокинов"

Сахарный диабет 1 типа (СД 1 типа) продолжает оставаться одной из важнейших медико-социальных проблем здравоохранения практически всех стран мира в связи с прогрессирующим ростом заболеваемости и ранней инвалидизацией больных, что определяет актуальность изучения данной патологии и поиск новых подходов для выделения групп риска и реабилитации больных диабетом [Дедов, 1996-2008; Балаболкин, 1996-2008; Касаткина, 1996-2008; Петеркова, 1998-2008; Кураева, 1998-2008; Алексеев, 1998-2008; Носиков, 2000-2008; Кравец, 1998-2006; Кондратьева, 1999-2008; Бондарь, 1997-2008; Болотова, 2008; Догадин, 2000-2008; Todd, 1995-2008; The Wellcome Trust Case Control Consortium, 2007]. Успехи современной диабетологии привели к увеличению продолжительности жизни больных СД 1 типа, что в свою очередь предопределило рост частоты поздних осложнений заболевания, среди которых ведущими являются ангиопатии [Tuomilehto, 1999; Балаболкин, 2000; Florez et al., 2003; Дедов и др., 2006].

Несмотря на многочисленные исследования, патогенез СД 1 типа до сих пор остается во многом неясным. В настоящее время обсуждается несколько гипотез патогенеза СД 1 типа: Копенгагенская модель — деструкция (3-клеток под влиянием антигена, высвобождение интерлейкина-1, стимуляция секреции лимфокинов (ФНО-а, ИНФ-у), индукция экспрессии генов HLA-ситемы II класса на клетках эндотелия капилляров и I-II классов в островковых клетках поджелудочной железы [Nerup et al. 1974; 1994]; Лондонская модель - индукция генов //L/i-ситемы II класса на (3-клетках поджелудочной железы под влиянием ФНО-а, ИНФ-у, высокая концентрация ИЛ-ip, аберрантная экспрессия генов DR3 и DR4, усиление гибели Р-клеток [Bottazzo et al., 1986]; Стенфордская модель - наличие у здоровых лиц в 57 положении Р-цепи локуса DO HLA-ситемы аспарагиновой кислоты, в то время, как у больных СД 1 типа она замещена другой аминокислотой (валин, серин или аланин) [McDevitt et al., 1987]. Общепринятой является 6 копенгагенская» модель аутоиммунной деструкции [3-клеток, центральное место в которой отводится антигенам главного комплекса гистосовместимости (HLA) и провоспалительными цитокинам (ИЛ-1(3, ФНО-а, ИНФ-у) [Pakala, 1997; Rabinovitch, Suarez-Pinzon, 1998; Балаболкин, 2000; Дедов и др., 2002]. Вклад наследственности в предрасположенность к СД 1 типа составляет 80% [Дедов н др., 2002]. Однако для развития СД 1 типа недостаточно иметь только наследственную отягощен ность. Для возникновения заболевания необходимо взаимодействие между не изученными до конца генетическими и средовыми факторами [Дедов и др., 2003; Носиков, 2005].

К настоящему времени известно более 35 локусов, участвующих в развитии генетической предрасположенности к СД 1 типа. Используя различные геномные подходы (ассоциативные исследования, анализ сцепления, полногеномный скрининг) удалось убедительно доказать значение только для двух локусов в развитии СД 1 типа: локуса 1DDM1 (гены HLA-системы, 6р.21.3) и локуса IDDM2 гена инсулина (ген инсулина, 11 р 15.5) [Davies et al., 1994; Hashimoto et al., 1994; Mein et al., 1998; Concannon et al., 1998; Concannon et al., 2005; Johannesen, 2006; Todd et al., 2007]. Роль других участков генома в патогенезе СД 1 типа ещё предстоит изучить. Особый интерес представляют гены, продукты экспрессии которых прямо или косвенно участвуют в развитии патологического процесса [Фогель, Матульски, 1990; Кондратьев Я.Ю., 1998; Дедов, 2002; Носиков, 2005; Пузырев и др., 2007; Todd et al., 2007].

В исследованиях последних лет получены интересные данные о важной роли гена эндотелиальной синтазы оксида азота (NOS3) в развитии эндотелиальной дисфункции при различных заболеваниях [Rolfs et al., 1994; Кондратьев и др., 1998; Дедов, 1998; Степанов и др., 1998; Ярек-Мартынова, Шестакова, 2004]. В настоящее время доказано, что оксид азота (NO) обладает высокой реакционной способностью, цитотоксическим действием и вызывает поражение Р-клеток поджелудочной железы, активно влияет на процесс генетически запрограммированной гибели клеток — апоптоз [Ванин, 2000]. Доказано, что экспрессия индуцибельной NO-синтазы, именно в |3-клетках и образование NO, полностью угнетают секрецию инсулина [Corbett, 1995; Stevens et al, 1997; Takamura et al., 1998; Reddy et al., 1999; Балаболкин, 2000; Ярек-Мартынова., Шестакова, 2004]. Оксид азота, вырабатываемый эндотелиальной NO-синтазой, кодируемой геном NOS3, является самым мощным из известных эндогенных вазодилятаторов [Wilcox, et al., 1997; Ванин, 1998; Гомазков, 2000]. Роль гена NOS3 широко исследуется в патогенезе других форм патологии [Miahara et. al., 1994; Novoradovsky et al., 1999; Wang, 2000; Степанов и др., 1998; Косянкова, Пузырев, 2000; Кондратьева, 2002; Косянкова, 2002; Скворцова и др., 2003; Макеева, 2004; Носиков, 2004; Сеитова, 2004]. Однако результаты исследований носят противоречивый характер.

Нарушения со стороны иммунной системы играют важную роль в манифестации СД 1 типа и развитии его осложнений [Осокина, 1995; Галактионов, 1998; Wu et al., 1998; Yoon et al, 1998]. Представляет интерес изучение вклада генов модификаторов иммунного ответа в развитии СД 1 типа и его осложнений. Состояние цитокинового профиля при СД 1 типа продолжает привлекать внимание ученых [Pakala, 1997; Rabinovitch, Suarez-Pinzon, 1998; Sobel, 1998; Mandrup-Poulsen, 2003 a, b; Rabinovitch, 2003; Roep, Atkinson, 2004; Aly et al., 2005; Amer, 2005; Зак и др., 2006]. Экспериментальные данные показали, что воспалительный аутоиммунный процесс в поджелудочной железе (инсулит) при дебюте заболевания связан с увеличенной выработкой провоспалительных цитокинов (ИЛ-1(3, ФНО-а, ФНО-Р, ИФН-а, ИНФ-у, ИЛ-2, ИЛ-12). Цитокины (ИЛ-lp, ФНО-а, ФНО-Р, ИФН-у) стимулируют выработку NO, являются цитотоксичными для Р-клеток и участвуют в развитии эндотелиальной дисфункции [Bonmann et al., 1997; Xu, 1997; Pakala, 1997; Sobel, 1998; Asakawa et al.,1999; Zhu, 1999; Orbe,

1999; Zen, 1999; Rabinovich, 2003; Зак и др., 2006]. В ряде работ отмечается защитное действие ИЛ-4, ИЛ-10 и ИЛ-13 по отношению к эндотелию и (3-клеткам [Terry, 1998; Mi et al., 2004; Chang et al., 2005]. В литературе имеются немногочисленные данные, посвященные изучению вклада генов синтаз оксида азота и цитокинов в развитие СД 1 типа и его осложнений [Бондарь, 1997, 2000; Pakala, 1997; Rabinovitch, Suarez-Pinzon, 1998; Bidwell et al., 1999; Зак и др., 2002; Mandrup-Poulsen, 2003 a,b; Rabinovitch, 2003]. Вопрос о вкладе перечисленных генов в предрасположенность к СД 1 типа и развитие поздних осложнений диабета до сих пор остается открытым и требует дальнейшего изучения.

В последние годы активно развивается концепция «синтропных» заболеваний, которые представляют собой неслучайное сочетание нескольких болезней у индивидуума, и осуществляется поиск общих для них наследственных факторов — генов синтропии [Пузырев, 2003, 2005]. В составе полигландулярного аутоиммунного синдрома СД 1 типа сочетается с другими аутоиммунными заболеваниями [Jenkins, Weetman, 2002; The Wellcome Trust Case Control Consortium, 2007]. Наиболее часто встречается сочетание СД 1 типа и аутоиммунного тиреоидита (АИТ) [Ueda et al., 2003; Chistiakov, 2005; Smyth et al., 2006; Altshuler, Daly, 2007]. В связи с этим, поиск общих механизмов возникновения аутоиммунных заболеваний представляет научный и практический интерес.

Цель работы:

Исследование вовлеченности полиморфных вариантов генов синтаз оксида азота (.NOS1, NOS3) и генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, IL4, IL4RA, TNFA) в развитие и прогрессировать сахарного диабета 1 типа.

Задачи исследования:

1. Провести анализ ассоциаций полиморфизмов генов NOS1 (С3392Т); NOS3 ОС(-691)Т; VNTR4A/B, С774Т, G894T); IL1B (+3953 А1/А2); (VNTR); IL4 (G717С); IL4RA (.A148G); 7Ж4 (G(-308)A) с сахарным диабетом 1 типа и его осложнениями (диабетической ретинопатией, диабетической нефропатией, диабетической полинейропатией).

4. Провести сравнительный анализ вовлеченности генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, . IL4, IL4RA) у больных сахарным диабетом 1 типа и аутоиммунным тиреоидитом.

Научная новизна:

Получены новые данные по ассоциациям полиморфизмов генов синтаз оксида азота (NOSI, NOS3) и генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, IL4, IL4RA) с клиническими проявлениями СД 1 типа в Сибирском регионе (г. Томск). Впервые обнаружены ассоциации аллеля С полиморфизма С3392Т гена NOS1, аллеля С полиморфизма С(-691)Т, аллеля С полиморфизма С774Т, аллеля G полиморфизма G894T гена NOS3, аллеля А2 полиморфизма +3953 А1/А2 гена IL1B, аллеля А2 VNTR полиморфизма гена IL IRA с СД 1 типа.

Впервые на семейном материале представлена комплексная оценка роли полиморфизмов генов синтаз оксида азота и генов цитокинов в развитии СД 1 типа и его осложнений. С помощью TDT установлены ассоциации аллеля В VNTR4A/B полиморфизма, аллеля С полиморфизма С774Т, аллеля G полиморфизма G894T гена NOS3, аллеля А полиморфизма A148G гена IL4RA с заболеванием. Для сосудистых осложнений получены следующие ассоциации: аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциирован с развитием диабетической ретинопатии; аллель В VNTR4A/B полиморфизма, аллель G полиморфизма G894T гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA вовлечены в развитие диабетической нефропатии; аллель С полиморфизма С3392Т гена NOS1, аллель В VNTR4A/B полиморфизма гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциированы с развитием диабетической полинейропатии; аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциирован с развитием всех трех изученных осложнений СД 1 типа.

Впервые были изучены гаплотипы гена NOS3 образованные четырьмя полиморфизмами (С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T) у больных СД 1 типа. Показано, что гаплотип CBCG является предрасполагающим к развитию СД 1 типа.

Новым в исследовании является комплексное изучение характера и выраженности нарушений со стороны цитокинового профиля, системы иммунитета, вазоактивных протеолитических систем в развитии диабета и его осложнений (диабетической ретинопатии, диабетической нефропатии, диабетической полинейропатии). Впервые получены ассоциации генов синтаз оксида азота и цитокинов с изучаемыми количественными патогенетически значимыми признаками у больных СД 1 типа проживающих в условиях Сибири.

Впервые проведен анализ вклада изучаемых генов модификаторов иммунного ответа в развитие сахарного диабета 1 типа и аутоиммунного тиреоидита у жителей Сибирского региона (г. Томск).

Научно-практическая значимость исследования:

Установлены ассоциации полиморфных маркеров генов синтаз оксида азота и цитокинов с развитием сахарного диабета 1 типа и его осложнений: диабетической ретинопатии, нефропатии и полинейропатии, а также с показателями систем иммунитета, протеолиза и цитокиновым профилем. Полученные данные могут быть использованы в создании исследовательских и диагностических панелей генетических маркеров для изучения молекулярно-биологической основы и диагностики наследственной предрасположенности в развитии сахарного диабета 1 типа и его сосудистых осложнений в семьях, отягощенных данным заболеванием.

Положения, выносимые на защиту:

1. Изученные полиморфные маркеры генов синтаз оксида азота {N081, N083) и цитокинов (1Ь4ЯА) ассоциированы с сахарным диабетом 1 типа и его осложнениями.

2. Гаплотип СВСО гена N053, образованный четырьмя полиморфизмами ОС(-691)Т, ШТЯ4А/В, С774Т, 0894Т) является предрасполагающим к развитию сахарного диабета 1 типа.

Апробация работы:

Основные результаты диссертационной работы доложены на II научной конференция с международным участием "Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и патологии" (Новосибирск, 2002); Региональной научно-практической конференции "Сахарный диабет и сердечно-сосудистая патология" (Томск, 2002); Всероссийской научно-практической конференции "Клиническая эндокринология - достижения и перспективы" (Санкт-Петербург, 2003); II Сибирской конференции эндокринологов "Эндокринология Сибири" (Красноярск, 2003); II межрегиональной научно-практической конференции "Клинические аспекты использования молекулярно-биологической диагностики в медицине" (Новосибирск, 2003); III Всероссийском диабетологическом конгрессе (Москва, 2004); VII и VIII научных конференциях «Генетика человека и патология» (Томск, 2004; 2007); Конгрессе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006); кафедре педиатрии ФПК и lJilC СибГМУ (Томск, 2007); межлабораторном научном семинаре ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2003, 2007, 2008); Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы современной эндокринологии» (Москва, 2008). Результаты работы отмечены дипломом 1-й степени на III Всероссийском диабетологическом конгрессе (Москва, 2004); дипломом лауреата конкурса Томской области в сфере образования и науки и именной премией (Томск, 2004), дипломом 1-й степени на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные проблемы современной эндокринологии» (Москва, 2008).

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 22 работы: 2 статьи в рецензируемых журналах ВАК; 5 статей в региональных сборниках; 15 тезисов конференций (11 отечественных, 5 зарубежных).

Структура и объем диссертации;

Диссертационная работа изложена на 195 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения и выводов. Данные проиллюстрированы 67 таблицами, 10 рисунками. Библиографический указатель включает 324 источника, из них 83 работы отечественных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Тарасенко, Наталия Викторовна

выводы

1. Установлена функциональная значимость аллельных вариантов генов NOS J (полиморфный маркер С3392Т), NOS3 (полиморфные маркеры: С(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T), IL1B (полиморфный маркер +3953 А1/А2), ILJRN (VNTR полиморфизм), IL4RA (полиморфный маркер A148G) в патогенезе сахарного диабета 1 типа. Для полиморфизмов С774Т и G894T гена NOS3 ассоциация с заболеванием подтверждена двумя методами: «случай-контроль» и по критерию TDT.

2. Гаплотип CBCG, образованный четырьмя полиморфизмами гена NOS3 ОС(-691)Т; VNTR4A/B, С774Т, G894T) является предрасполагающим в развитии СД 1 типа. Показатель неравновесия по сцеплению для полиморфизмов С774Т и G894T гена NOS3 у больных сахарным диабетом 1 типа был выше, чем в группе популяционного контроля (русские, г. Томск) 0,80 и 0,74 (р<0,01), соответственно.

3. Выявлены ассоциации генов-кандидатов сахарного диабета 1 типа с развитием сосудистых осложнений: диабетической ретинопатией — ген IL4RA (полиморфный маркер A148G)', диабетической нефропатией — гены NOS3 (полиморфные маркеры: VNTR4A/B, G894T), IL4RA (полиморфный маркер A148G)', диабетической полинейропатией - гены NOS1 (полиморфный маркер С3392Т), NOS3 (VNTR4A/B полиморфизм) и IL4RA (полиморфный маркер A148G); сочетание трех сосудистых осложнений (ДР, ДН, ДНП) -ген IL4RA (полиморфный маркер A148G).

5. Иммунный статус детей и подростков с СД 1 типа характеризовался повышением активности гуморального звена иммунитета, выраженной депрессией Т-клеточного звена иммунитета, нарушением соотношения субпопуляций Т-лимфоцитов С04/С08, что имеет значение для формирования микроангиопатий.

6. Показано, что при сахарном диабете 1 типа в первый год заболевания происходит увеличение активности калликреина на фоне снижения активности калликреиногена; развитие диабетической нефропатии, сопровождается повышенной активностью АПФ и снижением активности агпротеиназного ингибитора плазмы крови. Установлено участие генов синтаз оксида азота {N081, N083) и цитокинов (1ЫВ, 1Ь1Ш, П4ЯА, TNFA) в развитии дисбаланса вазоактивных протеолитических систем при диабете.

7. Выявлены ассоциации генов-кандидатов СД 1 типа с количественными патогенетически значимыми признаками: ген 1Ь1В оказывает влияние на содержание ИЛ-4 и ^А; ген 1Ь4 влияет на продукцию ИЛ-1 (3; ген 1Ь4ЯА участвует в регуляции выработки ^О.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Настоящее исследование посвящено изучению роли наследственных факторов в патогенезе сахарного диабета 1 типа и его клинических проявлений. Термин «патогенетика» обозначает генетические механизмы развития патологических признаков, пути превращения аномального генома в фенотип болезни [Murphy, Pyeritz, 1996]. Заметим, что медицинская патогенетика - это краткое обозначение «генетического» патогенеза болезней человека, генетических основ, как собственно наследственной патологии, так и заболеваний, в основе которых лежит наследственное предрасположение [Пузырев, 2001]. Выявление генов и факторов внешней среды, которые в совокупности приводят к формированию фенотипа, проявляющегося как заболевание, продолжает оставаться основной проблемой биологии. Сахарный диабет 1 типа относится к многофакторным заболеваниям, при которых взаимоотношения между фенотипом и генотипом имеют вероятностный характер, а в развитии участвует большое количество систем генов, что затрудняет проведение ранней точной диагностики и профилактики диабета [Балаболкин, 2000; Носиков, 2004; Дедов и др., 2006; Кондратьева, 2006; Пузырев и др., 2007; Todd, 2007; The Wellcome Trust Case Control Consortium, 2007]. На сегодняшний момент выявлено более тридцати локусов предрасположенности к СД 1 типа, и эта цифра постоянно увеличивается. Локусы IDDM1 и IDDM2 в сумме составляют от 40% до 60% семейной сегрегации, другие локусы имеют значительно более низкий вклад в развитие СД 1 типа [Носиков, 2004, 2008; Todd, 2007; The Wellcome Trust Case Control Consortium, 2007]. Таким образом, около 50% информации о вкладе конкретных генов в развитие СД 1 типа до сих пор остается неизвестной. Для разных популяций на первое место могут выступать различные генетические системы, например у арабских бедуинов это локус IDDM17 [Redondo, Eisenbarth, 2002; Bao et al., 2003; Babu et al., 2004; Eller et al., 2004]. Сложность проблемы заключается в разнородности получаемых результатов у различных популяций, которые не подтверждаются в других исследованиях. Для более надежной характеристики связи полиморфизмов генов с многофакторными заболеваниями используется мета-анализ, включающий одновременный анализ отдельных (индивидуальных) исследований. Так, в электронной базе данных HuGE Net (http://www.hugenavigator.net) содержится информация о генах-кандидатах 1935 многофакторных заболеваний. В отношении СД 1 типа накоплена информация о 276 генах. Несмотря на большое количество публикаций (614 ссылок на статьи), мета-анализ был проведен только для 18 генов. Наиболее полно изучены следующие генетические маркеры: HLA-DQB1, HLA-DRB1, HLA-DQA1, CTLA4, INS. Информации о мета-анализах генов-кандидатов СД 1 типа, изучаемых в данной работе не найдено.

Особенностью настоящей работы является комплексный подход к анализу двух связанных между собой систем генов: синтаз оксида азота и модификаторов иммунного ответа, белковые продукты которых участвуют в патогенезе развития СД 1 типа и его сосудистых осложнений. Предпринята попытка выявления синтропных генов, участвующих в развитии аутоиммунных заболеваний: сахарного диабета 1 типа и аутоиммунного тиреоидита.

Получены данные о вкладе полиморфизмов генов синтаз оксида азота (NOS1, NOS3) и генов модификаторов иммунного ответа (IL1B, IL1RN, IL4, IL4RA) в развитие СД 1 типа проживающих в Сибирском регионе (г. Томск). Впервые получены ассоциации СД 1 типа с аллелем С полиморфизма С3392Т гена NOS1, аллелем С полиморфизма С(-691)Т, аллелем С полиморфизма

С774Т; аллелем G полиморфизма G894T гена NOS3, аллелем А2 полиморфизма +3953 А1/А2 гена IL IB, аллелем А2 VNTR полиморфизма гена IL1RN.

G894T гена NOS3, аллеля А полиморфизма A148G TQuaIL4RA с заболеванием. Для сосудистых осложнений получены следующие ассоциации: аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA вносит вклад в развитие диабетической ретинопатии; аллель В VNTR4A/B полиморфизма, аллель G полиморфизма G894T гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA связаны с развитием диабетической нефропатии; аллель С полиморфизма С3392Т в гена NOS1, аллель В VNTR4A/B полиморфизма гена NOS3 и аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциированы с развитием диабетической полинейропатии; аллель А полиморфизма A148G гена IL4RA ассоциирован с развитием трех изученных осложнений СД 1 типа. Для полиморфизмов С774Т и G894T гена NOS3 ассоциация с заболеванием подтверждена двумя методами («случай-контроль» и TDT).

Гаплотип CBCG гена NOS3, образованный четырьмя полиморфизмами ОС(-691)Т, VNTR4A/B, С774Т, G894T) является предрасполагающим в развитии сахарного диабета 1 типа.

Обнаружены ассоциации исследованных генов с рядом количественных патогенетически значимых для развития заболевания показателей. Показано, что развитие сосудистых осложнений сопровождается повышением уровня изучаемых цитокинов (ИЛ-1 [3, ИЛ-4, ФНО-а), изменением показателей иммунитета (CD3, CD4, CD72, IgA, IgG, ЦИК), что отражает наличие хронического воспаления у данной категории больных, начиная с детского возраста. Результаты исследования показали, что ген IL1B может влиять на продукцию ИЛ-4, на повышенное содержание IgA в периферической крови у больных СД 1 типа. Для больных СД 1 типа носителей аллеля С полиморфизма G717C гена IL4 характерно повышенное содержание ИЛ-ip в сыворотке крови. Ген IL4RA участвует в регуляции выработки IgG. Доказано участие генов NOS3 и модификаторов иммунного ответа (IL4RA, TNFA) в развитии дисбаланса вазоактивных систем при диабете. Носители генотипа СС полиморфизма С774Т гена NOS3 имели низкие показатели ККГ; носители аллеля G полиморфизма G894T гена NOS3 и аллеля А гена TNFA характеризовались снижением сц-ПИ, что способствует избыточному образованию кининов, создавая тем самым дополнительные условия для развития микроангиопатий. Больные СД 1 типа носители аллеля А полиморфизма А1480 гена 1Ь4ЛА имели повышенную активность АПФ. Повышение АПФ способствует накоплению ангиотензина II, в результате чего происходит сужение выносящего почечного сосуда, повышение внутриклубочкового давления и появление альбуминурии, а в дальнейшем и протеинурии. В нашем исследовании высокий уровень АПФ зарегистрирован у больных с СД 1 типа в стадии МАУ и особенно ПУ. Следовательно, выявленные связи генов-кандидатов СД 1 типа с патогенетически значимыми количественными признаками показывают их роль в регуляции и взаимодействии между различными системами организма: РАС и ККС, системой иммунитета.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Тарасенко, Наталия Викторовна, Томск

1. Александровский Я.А. Молекулярные механизмы развития диабетических осложнений. Обзор. // Биохимия. 1998. -Т.63. -№ 11. - С. 1470-1479.

2. Алексеев Л.П., Хаитов P.M. Клиническая иммуногенетика // Цитокины и воспаление. 2005. - № 3. - С. 3-8.

3. Альтшулер Б.Ю., Ройтман А.П., Долгов В.В. Методические аспекты определения ангиотензинпревращающего фермента // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. - № 12. - С. 10-14.

4. Балаболкин М.И. Диабетология. М.: «Медицина» - 2000. - 627 с.

5. Балаболкин М.И. Состояние и перспективы борьбы с сахарным диабетом // Проблемы эндокринологии. 1997. - Том 43. - № 6. - С.3-9.

6. Балаболкин М.И. Эндокринология — М.: «Универсум паблишин», 1998 -392с.

7. Балаболкин М.И., Клебанова В.М. Патогенез ангиопатий при сахарном диабете// Сахарный диабет. -1999. № 2. - С. 2-6.

8. Башкатова В.Г., Вицкова Г.Ю., Наркевич В.Б. и др. Возможная роль оксида азота в патогенезе модельных судорожных состояний различной природы // Бюлл. эксперимент, биологии и медицины. 1998. — Т. 125. — № 1. - С. 26-30.

9. Ю.Болотова Н.В., Худошина C.B. Особенности течения и терапии периферической полинейропатии при сахарном диабете 1 типа у детей // Лечащий врач. 2007. -№ 10. - С. 84-85.

10. Бондарь И. А. Клинические, метаболические,иммунологические особенности формирования поздних осложнений сахарного диабета: Автореф. дисс. .д-ра мед. наук. Новосибирск, 1997. — 44 с.

11. Бондарь И.А., Климонтов В.В., Надеев А.П. Мочевая экскреция провоспалительных цитокинов и трансформирующего фактора роста-ß на ранних стадиях диабетической нефропатии // Терапевтический архив. -2008. -№ 1.-C. 52-57.

12. Бондарь И.А., Климонтов В.В., Поршенников Й.А. Окислительная модификация белков при диабетических микроангиопатиях // Сахарный диабет. 2000. -№3.- С. 9-12.

13. Ванин А. Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований // Биохимия. 1998. — Т. 63. - № 7. - С. 867-869.

14. Вейр Б. Анализ генетических данных. — М.: Мир, 1995. — 400 с.

15. Веремеенко К.Н. cti-Ингибитор протеиназ и его исследование в клинике // Клиническая медицина. 1985. - № 12. - С. 21-27.

16. Викторов И.В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ишемической патологии мозга // Вестник РАМН. — 2000. — № 4. — С. 5-10.

17. Возианов А.Ф., Бутенко А.К., Зак К.П. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства. Киев: Наукова думка, 1998 - 315 с.

18. Галактионов В.Г. Иммунология .М.: Изд-во МГУ, 1998. - 480с.

19. Герцог O.A., Сенников C.B., Коненкова Л.П. и др. Полиморфизм генов ILlB(+3953) и TNFA(-308) в патогенезе ревматоидного артрита // Цитокины и воспаление. 2005. - № 1. - С. 52-56.

20. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. / С. Гланц. М.: Практика, 1998. - 459 с.

21. Голиков П.П., Николаева Н.Ю. Экспресс-метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - № 1. - С. 11-13.

22. Голиков П.П., Николаева Н.Ю. Экспресс-метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - № 1. - С. 11-13.

23. Гомазков O.A. Эндотелий эндокринное дерево // Природа. - 2000. - № 5. -С. 38-46.

24. Громова А.Ю., Симбирцев A.C. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека// Цитокины и воспаление. 2005. - Т. 4. - № 2. - С. 3-12.

25. Давиденкова Е.Ф., Либерман И.С. Генетика сахарного диабета. -Ленинград: «Медицина» 1988. -160 с.

26. Дедов И.И., Кураева Т.Л., Петеркова В.А. Сахарный диабет у детей и подростков: Руководство для врачей. -М.: Гэогар- Медиа, 2008. 160 с.

27. Дедов И.И., Кураева Т.Л., Петеркова В.А., Щербачева Л.Н. Сахарный диабет у детей и подростков. М., 2002. - 391 с.

28. Дедов И.И, Никонова Т.В., Смирнова О.М. и др. Роль цитокинов в регуляции иммунного ответа и механизмы гибели ß-клеток при различных вариантах течения сахарного диабета 1 типа // Проблемы эндокринологии. -2005.-Т. 51.-№ 3. — С. 3-7.

29. Дедов И.И., Петеркова В.А Детская эндокринология. — М.: УП-Принт, 2008.-600 с.

30. Дедов И.И., Чазова Т.Е., Сунцов Ю.И. Эпидемиология сахарного диабета/ Пособие для врачей. — М.: Медицина, 2003. 70 с.

31. Дедов И.И., Шестакова М.В. Диабетическая нефропатия. М.: Универсум Паблишинг, 2000. - 240 с.

32. Дедов И.И., Шестакова М.В. Сахарный диабет и артериальная гипертензия. -М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. -344 с.

33. Дедов И.И., Шестакова М.В., Максимова' М.А. Федеральная целевая программа «Сахарный диабет» (методические рекомендации). М.: Медиа Сфера, 2002. - 88 с.

34. Зак К.П., Попова В.В. Цитокины и сахарный диабет 1 типа у человека (обзор с включением собственных данных) // Украшський медичний часопис. 2006. - Т. 51. - № 1. - С. 78-88.

35. Иванов A.B., Сунцов Ю.И. Медленно прогрессирующий сахарный диабет 1 типа (LADA) // Сахарный диабет. 2000. - № 1. - С. 33-37.

36. Имангулова М.М., Бакмаева А.Р., Хуснутдинова Э.К. Полиморфизм кластера гена интерлейкина 1 у больных туберкулезом легких // Цитокины и воспаление. -2005. -№ 1. С. 36-41.

37. Кондратьев Я.Ю. Полиморфные генетические маркеры и сосудистые осложнения сахарного диабета // Проблемы эндокринологии. 1998. - № 1.-С. 43-51.

38. Кондратьева Е.И. Клинико-генеалогические и иммуно-метаболические механизмы формирования сахарного диабета 1 типа и его осложнений у детей й подростков и их значение в выборе стратегии реабилитации: Дис. д-ра мед. наук Томск, 2001. (для авторефератов).

39. Кондратьева Е.И., Косянкова Т. В. Гены синтаз оксида азота (NOS) в патогенезе сахарного диабета и его осложнений // Проблемы эндокринологии. -2002. Т. 48. -№ 2. - С. 33-38.

40. Консенсус «Аутоиммунный тиреоидит: клинические рекомендации по диагностике и лечению», 2002.

41. Косянкова Т. В., Пузырёв К. В.Полиморфизм генов синтаз оксида азота: исследование в сибирских популяциях и у больных с сердечно-сосудистой патологией // Бюл. СО РАМН. 2003. - № 1. - С. 6-11.

42. Косянкова Т.В. Гены синтаз оксида азота: полиморфизмы в сибирских популяциях и их функциональное значение: Автореф. дис.канд. биол. наук. — Томск, 2002. — 22с.

43. Косянкова Т.В., Кондратьева Е.И., Тарасенко Н.В., Пузырев В.П. / Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике. / Под ред. А.Б. Масленникова. Вып. 4. - Новосибирск: Альфа Виста. - 2003. С. 107-115.

44. Кравец Е.Б., Рязанцева Н.В., Яковлева Н.М., Чудакова О.М. Патология мембраны тромбоцитов при сосудистых осложнениях сахарного диабета 1-го типа // Проблемы эндокринологии. 2006. — №. 6. — С. 10-14.

45. Макеева O.A. Структурно-функциональная организация наследственной компоненты подверженности к гипертрофии миокарда у человека: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Томск, 2004. — 22с.

46. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. М.: Мир, 1984. — 480 с.

47. Мустафина O.E., Шагисултанова Е.И., Насибуллин Т.Р. и др.

48. Полиморфизм минисателлита гена эндотелиальной синтазы окиси азота: исследование в популяциях Волго-Уральского региона и анализ ассоциаций с инфарктом миокарда и эссенциальной гипертензией // Генетика.-2001.-Т. 37.-№ 5.-С. 668-674.

49. Назаренко М.С. Анализ полиморфных вариантов генов метаболизма фолата, оксида азота и цитокинов в раннем периоде онтогенеза: Автореф. дис. .канд. мед. наук. Томск, 2006. - 20 с.

50. Нартикова В.Ф., Пасхина Т.С. Унифицированный метод определения активности ai-антитрипсина и осг-макроглобулина в сыворотке крови // Вопросы медицинской химии. 1979. -№ 4. - С.494-499.

51. Нартикова В.Ф., Пасхина Т.С. Унифицированный метод определения активности осрантитрипсина и а2-макроглобулина в сыворотке крови // Вопросы медицинской химии. 1979. -№ 4. - С. 494-499.

52. Недоспасов A.A. Биогенный оксид азота: десять лет второго пришествия, предыстория открытия аргининзависимого биосинтеза NO // Биорганическая химия. 1999. - Том 25. - № 6. - С. 403-411.

53. Никонова Т.В. Современные аспекты патогенеза сахарного диабета 1 типа // Сахарный диабет. 2006. - № 3. - С. 59-64.

54. Носиков В.В., Серегин Ю.А. Молекулярная генетика сахарного диабета типа 1: достижения и перспективы // Молекулярная биология. — 2008. Т. 42.-№5.-С. 867-879.

55. Носиков В.В. Генетика сахарного диабета типа 1 / Геномика — медицине. Научное издание / Под ред. академика РАМН В.И. Иванова и академика РАН Л.Л. Киселева. М.: ИКЦ «Академкнига», 2005. - С. 281-311.

56. Носиков В.В. Геномика сахарного диабета типа 1 и его поздних осложнений. // Молекулярная биология. 2004. - Т. 38. - № 1. — С. 150164.

57. Пасхина Т.С., Кринская A.B. Упрощенный пробирочный метод определения содержания калликреина и калликреиногена // Вопросы медицинской химии. — 1974. Т. 20. — вып. 6. - С. 660-663.

58. Петров Р.В., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунодиагностика иммунодефицитов // Иммунология. — 1997. — № 4. — С. 4-6.

59. Потапнев М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении. // Иммунол. 1995. - - № 4. - С. 34-40.

60. Пузырев В.П. Генетика мультифакториальных заболеваний: между прошлым и будущим // Медицинская генетика. 2003. - Т. 2. — № 12. - С. 498-508.

61. Пузырев В.П. Феном и гены-синтропии / Генетика человека и патология: Сборник научных трудов / Под ред. В.П. Пузырева. Вып. 7. - Томск: «Печатная мануфактура». - 2004. - С. 180-191.

62. Пузырев В.П., Степанов В.А. Патологическая анатомия генома человека. -Новосибирск: Наука. Сиб. Предприятие РАН, 1997. 224 с.

63. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Кучер А.Н. Генетическое разнообразие народонаселения и болезни человека. Томск: Печатная мануфактура, 2007.-319 с.

64. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Огородова JI.M., Кобякова О.С. Взаимосвязь полиморфных вариантов генов интерлейкинов и их рецепторов с атопической бронхиальной астмой // Медицинская генетика. 2002. - Т. 1. - № 2. — С. 86-92.

65. Раевский К.С. Оксид азота новый физиологический мессенжджер: возможная роль при патологии центральной нервной системы// Бюлл. эксперимент биологии и медицины. - 1997. - Том 123. - № 5. - С. 484-489.

66. Рудко А.А. Аллельные варианты генов подверженности к туберкулезу у тувинцев: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Томск, 2004. — 22с.

67. Рыдловская А.В., Симбирцев А.С. Функциональный полиморфизм гена TNFA и патология // Цитокины и воспаление. 2005. - № 3. - С. 4-10.

68. Сеитова Г.Н. Анализ взаимосвязи генов-кандидатов хронической обструктивной болезни легких с клиническими проявлениями болезни у татар и русских Западной Сибири: Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Томск, 2004. 22с.

69. Смольникова М.В., Коненков В.И. Клиническая иммуногенетика заболеваний человека // Медицинская иммунология. 2001. - Т.З. - №3. -С.379-389.

70. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека: Пер. с англ. М.: Мир, 1989. -Т. 1-313 с.

71. Фрейдин М.Б. Роль генов интерлейкинов и их рецепторов в формировании предрасположенности к атопической бронхиальной астме:

72. Автореф. дис. .канд. биол. наук. Томск, 2001. - 20 с.

73. Ярек-Мартынова И.Р., Шестакова М.В. Сахарный диабет и эндотелиальная дисфункция // Сахарный диабет. 2004 - № 2. - С. 48-52.

74. Яровая Г.А. Калликреин-кининовая система: новые факты и концепции (обзор)//Вопросымедицинской химии.-2001.-№ 1.-С. 5-10.

75. Яровая Г.А., Коровина Н.А., Магомедова М.Н. Калликреин-кининовая система крови и ингибиторы протеолиза плазмы крови при различных нефропатиях у детей // Вопросы медицинской химии. 1994. - № 3. - С. 16-18.

76. Aguillon J.С., Cruzat A., Aravena О. et al. Could single-nucleotide polymorphisms (SNPs) affecting the tumour necrosis factor promoter be considered as part of rheumatoid arthritis evolution? // Immunobiology. 2006. -V.211.-P. 75-84.

77. AH M., Khoo S.K., Turner S. et al. NOS1 polymorphism is associated with atopy but not exhaled nitric oxide levels in healthy children // Pediatr. Allergy Immunol. 2003. - V. 14. -№ 4. - P. 261-265.

78. Allison D.P. Transmission/Disequilibrium Test for quantitative traits. // Am.J.Hum.Genet. 1997. -V. 60. - P. 676-690.

79. Altshuler D., Daly M. Guilt beyond a reasonable doubt // Nature Genetics. -2007. V. 39. 7. - P. 813-814.

80. Alvarez R., Gonzalez P., Batalla A. et al. Association between the NOS3 (-786 T/C) and the ACE (I/D) DNA genotypes and early coronary artery disease // Nitric Oxide. 2001. - V. 5 - P. 343-348.

81. А1у Т., Devendra D., Eisenbarth G.S. Immunotherapeutic approaches to prevent, ameliorate, and cure type 1 diabetes // Am. J. Ther. — 2005. — V. 12. -№6.-P. 481-490.

82. American Diabetes Association Diagnosis and classification of diabetes mellitus // Diabetes Care. 2004. - V. 27 (suppl 1): S5-10.

83. Ammendrup A., Maillard A., Nielsen K. et al. The c-Jun amino-terminal kinase pathway is preferentially activated by interleukin-1 and controls apoptosis in differentiating pancreatic beta-cells // Diabetes. 2000. - V. 49. - № 9. - P. 1468-1476.

84. Aras O., Hanson N.Q., Bakanay S.M. et al. Endothelial nitric oxide genepolymorphism (Glu298Asp) is not associated with coronary artery disease in Turkish population // Thromb. Haemost. 2002. - V. 87. - P. 347-349.

85. Arner P. Resistin: yet another adipokine tells us that men are not mice // Diabetologia. 2005. - V. 48. - № 11. - P. 2203-2205.

86. Asakawa H., Kobayashi T. The effect of coculture with human smooth muscle cells on the proliferation, the IL-1 beta secretion, the PDGF production and tube formation of human aortic endothelial cells // Cell Biochem. Funct. 1999. - № 2.-P. 123-130.

87. Atkinson M.A., Eisenbarth G.S. Type 1 diabetes: new perspective on disease pathogenesis and treatment // Lancet. 2001. - V. 358. - P. 221-229.

88. Awata T., Neda T., Iizuka H. et al. Endothelial nitric oxide synthase gene is associated with diabetic macular edema in type 2 diabetes // Diabetes Care. -2004. V. 27. - P. 2184-2190.

89. Babu S.R., Conant G.C., Eller E. et al. A Second-Generation Genome Screen for Linkage to Type 1 Diabetes in a Bedouin Arab Family // Ann. N.Y. Acad. Sci. -2004. — V. 1037.-P. 157-160.

90. Bader M. Alterations in blood pressure and heart rate variability in. transgenic rats with low brain angiotensinogen // Hypertension. 2001. - V. 37. - P. 408413.

91. Bao F., Babu S. R., Roberts C.M. et al. Single Nucleotide Polymorphism Study of IDDM 17 in a Bedouin Arab Family // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2003. -V. 1005.-P. 348-351.

92. Becker K.G., Simon R.M., Bailey-Wilson J.E. et al. Clustering of non-major histocompatibility complex susceptibility candidate loci in human autoimmune diseases //Proc. Nat. Acad. Sci. 1998. -V. 95. - P. 9979-9984.

93. Bidwell J., Keen L., Gallagher G. et al. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases // Genes and Immunity. — 1999. V. 1. — P. 319.

94. Bottazzo G.F., Cossu E., Cirillo R. et al. Sardinia: a battlefield approach to type I diabetes epidemiology. Sardinia-IDDM Study Groups // Horm. Res. -1997. -V. 48, Suppl 4. P. 64-66.

95. Bottazzo G.F., Dean B.M., McNally J.M. et al. In situ characterization of autoimmune phenomena and expression of HLA molecules in the pancreas in diabetic insulitis//N. Engl. J. Med. 1986. -V. 313. - P. 353-360.

96. Bugawan T.L., Mirel D.B., Valdes A.M. et al. Association and interaction of the IL4R, IL4, and IL13 loci with type 1 diabetes among Filipinos // Am J Hum Genet.-2003.-V. 72.-P. 1505-1514.

97. Buraczynska M., Ksiazek P., Zaluska W. et al. Endothelial nitric oxide synthase gene intron 4 polymorphism in patients with end-stage renal disease // Nephrol. Dial. Transplant. 2004. - V. 19. - P. 2302-2306.

98. Casas G.P., Bautista L.E., Humphries S.E., Hingorani A.D. Endothelial nitricoxide synthase genotype and ischemic heart disease. Meta-analysis of 26 studies involving 23038 subjects // Circulation. 2004. - V. 109. - P. 1359-1365.

99. Chang Y., Piao S.L., Gao S. et al. Regulatory effects of micronutrient complex on the expression of Thl and Th2 cytokines in diabetic C57BL mice // Wei. Sheng. Yan. Jiu. 2005. - V. 34. - № 1. - P. 64-66.

100. Chern M.M., Anderson V.E., Barbosa J. Empirical Risk for Insulin -dependent Diabetes (IDD) in Sibs // Diabetes. 1982. - V. 31. - P. 1115-1118.

101. Chistiakov D.A. Immunogenetics of Hashimoto's thyroiditis // Journal of Autoimmune Diseases. 2005. - V. 2. - № 1. - P. 1740-2557.

102. Choi B.M., Pae H.O., Jang S.I. et al. Nitric oxide as a pro-apoptotic as well as anti-apoptotic modulator // J. Biochem. Mol. Biol. 2002. - V. 35. - P. 116126.

103. Chrysohoou C., Panagiotakos D.B., Pitsavos C. et al. Evidence for association between endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism (G894T) and inflammatory markers: the ATTICA study // Am. Heart J. 2004. - V. 148. -P. 733-738.

104. Concannon P. Seven regions of the genom show evidence of linkage to type 1 diabetes in a consensus analysis of 767 multiplex families // Am. J. Hum. Genet. 2001. - V. 69. - № 4. - P. 820-830.

105. Concannon P., Erlich H.A., Julier C. et al. Type 1 diabetes: Evidence for susceptibility loci from four genome-wide linkage scans in 1,435 multiplex families //Diabetes. 2005. -V. 54. -№ 10. - P. 2995-3001.

106. Concannon P., Gogolin-Ewens K.J., Hinds D.A. et al. A second-generation screen of the human genome for susceptibility to insulin-dependent diabetes mellitus // Nat. Genet. 1998. - V. 19. - № 3. - P. 292-296.

107. Copeman J.B., Cucca F., Hearne C.M. et al. Linkage disequilibrium mapping of a type 1 diabetes susceptibility gene (IDDM7) to chromosome 2q31-q33 // Nat. Genet. 1995. - V. 9. - № 1. - p. 80-85.

108. Cordell H.J., Kawaguchi Y., Todd J.A. et al. An expression of the maximum lod score method to X-linked loci // Am. J. Hum. Genet. 1995. - V. 59. - № 4. - P. 435-449.

109. Coutant R., Landais P., Rosilio M. et al. Low dose linomide in Type 1 juvenile diabetes of recensent onset: a randomized placebo-controlled double blind trial // Diabetologia. 1998. -V. 41. - P. 1040-1046.

110. Cox A.L., Skipper J., Chen Y. et al. Identification of a peptide recognized by five melanoma-specific human cytotoxic T cell lines // Science. 1994. - V. 264.-P. 716-719.

111. Dahlquist G., Frisk G., Ivarsson S.A., Svanberg L., Forsgren M., Diderholm H. Indications that maternal coxsackie B virus infection during pregnancy is a risk factor for childhood-onset IDDM. // Diabetologia. 1995. - V. 38. - P. 1371-1373.

112. Davis G.L., BalartL.A., Schiff E.R. Assessing health-related quality of life in chronic hepatitis C using the sickness impact profile // Clin. Therap. 1994. -V. 16.-P .334-343.

113. Delepine M., Pociot F., Habita C. et al. Evidence of a non-MHC susptibilitylocus type 1 diabetes lincked to HLA of chromosome 6 // Am. J. Hum. Genet. -1997.-V. 60.-№ l.-P. 174-187.

114. Denninger J.W., Marietta M.A. Guanylate cyclase and the NO/cGMP signaling pathway // Biochim. Biophys. Acta. 1999. - V. 1411. - P. 334-350.

115. Diabetes Epidemiology Research International Group Selular trends in incidence of childhood IDDM in 10 countries // Diabetes. 1999. - V. 39. - № 7.-P. 858-864.

116. Diabetes mellitus. General information. Diabetes Statistics // N1H Publication. 1998.-P. 96-3926.

117. Dinarello C.A. Biologic basis for interleukin-1 in disease // Blood. 1996. -V. 87.-№6.-P. 2095-2147.

118. Dixon J.S., Jen P.Y. Development of nerves containing nitric oxide synthase in the human male urogenital organs // Br. J. Urol. 1995. - V. 76. - № 6. - P. 719-725.

119. Donner H., Braun J., Seidl C. et al. Codon 17 polymorphism of the cytotoxic T lymphocyte antigen 4 gene in Hashimoto's thyroiditis and Addison's disease // J. Clin .Endocrinol. Metab. 1997. - V. 82. - P. 4130-4132.

120. Dosenko V.E., Lutay Y.M., Parkhomenko O.M. et al. Endothelial NO-synthase allelic polymorphism frequency in patient with acute coronary syndrome in Ukrainian population // Tsitol. Genet. 2005. - V. 39. - P. 49-54.

121. Dosenko V.E., Zagoriy V.Y., Haytovich N.V. et al. Allelic polymorphism of endothelial NO-synthase gene and its functional manifestations // Acta Biochimica Polonica. 2006. - V. 53. - P. 299-302.

122. Edge J.A. Cerebral o edema during treatment of diabetic ketoacidosis: are we any nearer finding a cause? // Diabetes Metab. Res. Rev. 2000. - V. 16 - P. 316-324.

123. Edge J.A., Hawkins M.M., Winter D.L. et al. The risk and outcome of cerebral o edema developing during diabetic ketoacidosis // Arch. Dis. Child. 2001. -V. 85.-P. 16-22.

124. Edwards J.H. Familial predisposition in man // Brit. Med. Bull. 1969. - V. 25.-P. 58-64.

125. Eisenbarth G.S. Type I diabetes mellitus. A chronic disease. // N. Engl. J. Med. 1986. - Vol. 314.-№ 21. - P. 1360-1368.

126. Eisenbarth G.S., Ziegler A.G., Colman P.A. Pathogenesis of insulin-dependent (type 1) diabetes mellitus. In: Joslins Diabetes Mellitus. Edd. Kahn C.R., Weir G.C. Philadelphia, Baltimore, Hong Kong, London, Munich, Sydney, Tokyo. -1994.-P. 216-239.

127. Eller E., Vardi P., Daly M.J. et al. IDDM17: Polymorphisms in the AMACO Gene Are Associated with Dominant Protection against Type 1A Diabetes in a Bedouin Arab Family//Ann. N.Y. Acad. Sci.-2004. V. 1037.-P. 145-149.

128. Elliot R.B., Chase H.P. Prevention or delay of type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus in children using nicotinamide // Diabetologia. — 1991. V. 34. —№ 5. - P. 362-365.

129. Estrada C., Murillo-Carretero M. Nitric oxide and adult neurogenesis in health and disease // Neuroscientist. 2005. - V. 11. - P. 294-307.

130. European Consortium for IDDM Stadies. A genomewide scan for type 1-diabetes susceptibility in Scandinavian families: identification of new loci with evidence of interactions//Ibid.-2002.-V. 69.-№ 6.-P. 1301-1313.

131. Falconer D.S. The inheritance of liability to certain diseases; estimated from the incidence among relatives // Ann. Hum. Genet. 1965. - V. 29. - P. 51-76.

132. Feathers A.S., Charron-Prochownik D., Siminerio L.M. et al Genetics and Type 1 Diabetes: Online Resources for Patients // The Diabetes Educator. -2004. V. 30. - № 6. - P. 972-979.

133. Fernandez-Real J.M., Ricart W., Arroyo E. Balança et al. Serum ferritin as a component of the insulin resistance syndrome // Diabetes Care. 1998. - V. 21. -P. 62-68.

134. Fischmann Т.О., Hruza A., Niu X.D. et al. Structural characterization of nitric oxide synthase isoforms reveals striking active-site conservation // Nat. Struct. Biol. 1999. - V. 6. - P. 233-242.

135. Florez J.C., Hirschhom J., Altshuler D. The inherited basis of diabetes mellitus: implications for the genetic analysis of complex traits // Annu. Rev. Genomics Hum. Genet. 2003. - V. 4. - P. 257-291.

136. Forstermann U., Boissel J-P., Kleinert H. Expressional control of the 'constitutive' isoforms of nitric oxide synthase (NOS I and NOS III) // The FASEB J.- 1998.-V. 12. -№ 10.-P. 773-790.

137. Frobose H., Ronn S.G., Heding P.E. et al. Suppressor of cytokine signaling (SOCS)-3 inhibits the beta-cytotoxic IL-1 signalling by targeting the TRAF6/TAK1 complex // Diabetologia. 2005. - V. 48 (Suppl. 1): A37.

138. Gao J., Shan G., Sun B. et al. Association between polymorphism of tumour necrosis factor alpha-308 gene promoter and asthma: a meta-analysis // Thorax. -2006.-V. 61.-P. 466-471.

139. Gao P.S., Kawada H., Kasamatsu T. et al. Variants of NOS 1, NOS2 and NOS3 genes in asthmatics // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - V. 267. - № 3.-P. 761-763.

140. Gearon C.L., Hussain M.J., Vergani D. et al. Lymphocyte vaccination protects prediabetic mice from developing diabetes mellitus // Diabetologia. 1997. -V. 40.-P. 1388-1395.

141. Gene Card for gene IL4RA Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.bioinfo.weizmann.ac.il/cards-bin/carddisp7IL4RA.

142. Gerstein Н.С. Cow's milk exposure and type 1 diabetes mellitus // Diabetes Care.-1994.-V. 17.-P. 13-19.

143. Ghilardi G., Biondi M.L., DeMonti M. et al. Independent risk factor for moderate to severe internal carotid artery stenosis: T786C mutation of the endothelial nitric oxide synthase gene // Clin. Chem. 2002. - V. 48. - P. 989993.

144. Gillespie K.M. Type 1 diabetes: pathogenesis and prevention // C.M.A.J.I

145. Grasemann H., Yandava C.N., Drazen J.M. et al. Neuronal NO synthase (NOS1) is major candidate gene for asthma // Clin. Exp. Allergy. 1999. - V. 29. Suppl. 4. — P. 39-41.

146. Grasemann H., Yandava C.N., Stormvan's Gravesande K. et al. A neuronal NO synthase (NOS1) gene polymorphism is associated with asthma // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - V. 272. - № 2. - P. 391-394.

147. Green A., Gale E., Patercon C.C. Incidence of childhood-oncet insulin-dependent diabetes mellitus; the EURODIAB ACE study // Lancet. 1992. -V. 24. - P. 905-909.

148. Green A., Sjolie A.K., Eshoj O. Trends in the epidemiology of IDDM durin 1970-2020 in Fyn County, Denmark // Diabetes Care. 1996. - V. 19. - № 8. -P. 810-816.

149. Hajeer A.H., Hutchinson I.V. Influence of TTVFalpha gene polymorphisms on TNFalpha production and disease // Hum. Immunol. 2001. - V. 62. - P. 11911199.

150. Harrap S.B., Cui J.S., Wong Z.Y.H., Hopper J.L. Familial and genomic analyses of postural changes in systolic and diastolic blood pressure // Hypertension. -2004. -V. 43. P. 586-591

151. Hartmann B., Bellmann K., Ghiera I. et al. Oral insuline for diabetes prevention in NOD mice: potentiation by enhancing Th2 cytokine expression in the gut through bacterial adjuvant // Diabetologia. 1997. - V. 40. - P. 902909.

152. Hashimoto L., Habita C., Beressl J.P. et al. Genetic mapping of a susceptibility locus for insulin-dependent diabetes mellitus on chromosome 1 lq //Nature. 1994.- V. 371. -P. 161-164.

153. Hay den M.S., Ghosh S. Signaling to NF-kappaB // Genes Dev. 2004. - V. 18. -№ 18.-P. 2195-2224.

154. Hefler L.A., Grimm C., Lantzsch T. et al. Polymorphisms of the endothelial nitric oxide synthase gene in breast cancer // Breast Cancer Res. Treat. — 2006. -V. 98.-P. 151-155.

155. Herrmann S.M., Ricard S., Nicaud V. et al. Polymorphisms of the tumour necrosis factor-alpha gene, coronary heart disease and obesity // Eur. J. Clin. Invest. 1998. - V. 28. - P. 59-66.

156. Hibi K., Ishigami T., Tamura K. et. al. Endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism and acute myocardial infarction // Hypertension. 1998. — V. 32.-P. 521-526.

157. Hingorani A.D. Endothelial nitric oxide synthase polymorphisms and hypertension // Curr. Hypertens. Rep. 2003. - V. 5. - P. 19-25.

158. Hingorani A.D., Liang C.F., Fatibene J. et. al. A common variant of the endothelial nitric oxide synthase (Glu (298)-Asp) is a major risk factor for coronary artery disease in the UK // Circulation. 1998. - V. 100. - P. 15151520.

159. Hirschhorn J.N. Genetic epidemiology of type 1 diabetes // Pediatric diabetes. — 2004. V. 4. - № 2. — P. 87-100.

160. Holla L.I., Stejskalova A., Znojil V. et al. Association study of promoter polymorphisms within the NOS3 gene and allergic diseases // Int. Arch. Allergy Immunol.-2006.-V. 141.-P. 103-109.

161. Hutyrova В., Pantelidis P., Drabek J. et al. Interleukin-1 gene cluster polymorphisms in sarcoidosis and idiopathic pulmonary fibrosis // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2002. - V. 165, Suppl. 2. - P. 148-151.

162. Jasinski J.M., Eisenbarth G.S. Insulin as primary auto-antigen for type 1A diabetes // Clin. Dev. Immunol. 2005. - V. 12. - P. 181-186.

163. Jeerooburkhan N., Jones L.C., Bujac S. et al. Genetic and environmental determinants of plasma nitrogen oxides and risk of ischemic heart disease // Hypertension. -2001. -V. 38. P. 1054-1061.

164. Jenkins R.C., Weetman A.P. Disease associations with autoimmune thyroid disease // Thyroid. 2002. - Vol. 12. - P. 977-988.

165. Johannesen J. Aspects of the molecular and functional genetics in T1JDM // Dan. Med. Bull.-2006.-V. 53.-№ 2.-C. 122-171.

166. Kavvoura F.K., Ioannidis J.P. CTLA-4 Gene Polymorphisms and Susceptibility to Type 1 Diabetes Mellitus: A HuGE Review and Meta-Analysis //Am. J. Epidemiol.-2005.-V. 162.-№ l.-P. 3-16

167. Kawashima Т., Noguchi E., Arinami T. et al. Linkage and association of an IL-4 gene polymorphism with atopic dermatitis in Japanese families // J. Med. Genet. 1998. - V.35. - P. 502-504.

168. Keller R.J., Eisenbarth G.S., Jacrson R.A. Insulin prophylaxis in individuals at high risk of type 1 diabetes // Lancet. 1993. - V. 341. - P. 927-928.

169. Kelly C.J., Gold D.P. Nitric oxide in interstitial nephritis and other autoimmune diseases // Semin Nephrol. 1999. -№ 19. - P. 288-295.

170. Kelly M.A., Rayner M.L., Mijovic C.H. et al. Molecular aspects of type 1 diabetes//J. Clin. Pathol.-2003. V. 56.-P. 1-10.

171. Kimura T., Yokoyama T., Matsumura Y. et al. NOS3 genotype-dependent correlation between blood pressure and physical activity // Hypertension. -2003.-V. 41.-P. 355-360.

172. Knight J.C., Kwiatkowski D. Inherited variability of tumor necrosis factor production and susceptibility to infectious disease // Proc. Assoc. Am. Phys. -1999.-V. 111.-P. 290-298.

173. Kristiansen O.P., Pociot F., Johannesen J. et al. Linkage disequilibrium testing of four interleukin-1 gene-cluster polymorphisms in Danish multiplex families with insulin-dependent diabetes mellitus // Cytokine. 2000. - V. - 12. - № 2. -P. 171-175.

174. Kroeger K.M., Carville K.S., Abraham L.J. The -308 tumor necrosis factor-alpha promoter polymorphism effects tranacription // Mol. Immun. 1997. - V. 34.-P. 391-399.

175. Leech N.J., Elsegood K.A., Narendran P. et al. T helper 1 profile of recently activated circulating T cells in type diabetes // Diabetologia. 1999. - V. 42 (Suppl. 1): A316.

176. Levecque C., Elbaz A., Clavel J. et al. Association between Parkinson's disease and polymorphisms in the nNOS and iNOS genes in a community-based case-control study // Hum. Mol. Genet. 2003. - V. 12. - № 1. - P. 7986.

177. Lewontin R.C. The interaction of selection and linkage. I. General considerations; heterotic models // Genetics. 1964. - V. 49. - P. 49-67.

178. Lo H.S., Hogan E.L., Soong B.W. 5'-flanking region polymorphism of the neuronal nitric oxide synthase gene with Parkinson's disease in Taiwan // J. Neurol. Sci. — 2002.-V. 194.-№ l.-P. 11-13.

179. Lowenstein C.J., Dinerman J.L., Snyder S.H. Nitric oxide: a physiologic messenger // Ann. Intern. Med. 1994. - V. 120. - P. 227-237.

180. Maclaren N., Atkinson M. Is insulin-dependent diabetes mellitus environmentally induced? //N. Engl. J. Med. 1992. - V. 327. - P. 302-307.

181. Maier L. M., Chapman J., Howson J. M. et al. No Evidence of Association or Interaction between the IL4RA, IL4, and IL 13 Genes in Type 1 Diabetes // Am. J. Hum. Genet. -2005. -V. 76. P. 517-521.

182. Mandrup-Poulsen T. Apoptotic signal transduction pathways in diabetes // Biochem. Pharmacol. 2003a. - V. 66. - № 8. - P. 1433-1440.

183. Mandrup-Poulsen T. Beta cell death and protection // Ann. N.Y. Acad. Sei. -2003b. № 1005. - P. 32-42.

184. Mandrup-Poulsen T. The role of interleukin-1 in the pathogenesis of IDDM // Diabetologia. 1996. - Vol. 39. -№ 9. - P. 1005-1029.

185. Marroni A.S., Metzger I.F., Souza-Costa D.C. et al. Consistent interethnic differences in the distribution of clinically relevant endothelial nitric oxide synthase genetic polymorphisms // Nitric Oxide. 2005. - V. 12. - P. 177-182.

186. Martin S., Fueth R., Forster S. et al. Prediction of mortality in haemodialysis patients by gene expression analysis on mRNA level // Diabetologia. 2003. -Vol. 46 (Suppl. 2): A334.

187. McDonald D.M., Alp N.J., Channon K.M. Functional comparison of the endothelial nitric oxide synthase Glu298Asp polymorphic variants in human endothelial cells // Pharmacogenetics. 2004. - V. 14. - P. 831-839.

188. McKusick V.A. Genomics : Structural and functional of genoms // Genomics. 1997. - V. 45. - P. 244-249.

189. Mein C.A., Esposito L., Dunn M.G. et al. A search for type 1 diabetes susceptibility genes in families from the United Kingdom // Nat. Genet. 1998. -V. 19. -№ 3.-P. 297-300.

190. Mi Q.S., Ly D., Zucker P. et al. Interleukin-4 but not interleukin-10 protects against spontaneous and recurrent type 1 diabetes by activated CD ld-restricted invariant natural killer T-cells // Diabetes. 2004. - V. 53. - № 5. - P. 13031310.

191. Milutinovic A., Hruskovicova H. The eNOS gene polymorphism does not have a major impact on lipid parameters and premature coronary artery disease in Slovene men (Caucasians) // Folia Biol. (Praha). 2005. - V. 51. - P. 47-49.

192. Mirel D.B., Valdes A.M., Lazzeroni L.C. et al. Association of IL4K Haplotypes With Type 1 Diabetes // Diabetes. 2002. - V. 186. - № 9. - P. 3336-3341.

193. Mitsuyasu H., Izuhara K., Mao X.-Q. et al. Ile50Val variant of IL4RA upregulates IgE synthesis and associates with atopic asthma // Nature Genet. -1998.-V. 19.-P. 119-120.

194. Miyahara K., Kuwamoto T., Sase K. et. al. Cloning and structural characterization of the human endothelial nitric oxide synthase gene // Eur. J. Biochem. 1994. - V. 223. - P. 719-726.

195. Mogensen C.E., Christensen C.K., Vittinghus E. The stages in diabetic renal diseases. With emphasis on the stage of incipient diabetic nephropathy // Diabetes. 1983. - V. 32. - № 4. - P. 64-78.

196. Moncada S., Higgs E.A. Endogenous nitric oxide: physiology, pathology and clinical relevance // Europ. J. of clin. Investing. 1991. - V. 21. - № 4. - P. 361-374.

197. Morahan G., Huang D., Ymer S.I. et al. Linkage disequilibrium of type 1 diabetes susceptibility locus with a regulatory IL12B allele // Nature Genet. -2001. V. 27. -№ 2. - P. 218-221.224.Murphy, Pyeritz, 1996

198. Nerup, J., Platz P., Andersen O. O. HL-A antigens and diabetes mellitus // Lancet. 1974. - V. 1. - P. 864-866.

199. Nerup, J., T. Mandrup-Poulsen, S. Helqvist et al. On the pathogenesis of IDDM // Diabetologia. 1994. - V. 37. - Suppl 2: S82-S89.

200. Nistico L., Buzzetti R., Pritchard L.E. et al. The CTLA-4 gene region of chromosome 2q33 is linked to, and associated with, type 1 diabetes // Hum. Mol. Genet. 1996. - V. 5. - № 7. - P. 1075-1080.

201. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T. et al. Association asthma and IL-4 promoter polymorphism of Japanes // Clin. Exp. Allergy. 1998. - V. 28. - P .449-453.

202. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T. et al. Association asthma and IL-4 promoter polymorphism of Japanes // Clin. Exp. Allergy. 1998. - V. 28. - P. 449-453.

203. Noguchi E., Shibasaki M., Arinami T. et al. No association between Atopy/Asthma and the Ile50Val polymorphism of IL-4 receptor // Am. Respir. Crit. Care. Med. 1999. - V. 160. - P. 342-345.

204. Nolsoe R.L., Kristiansen O.P., Larsen Z.M. et al. Complete mutation scan of the human Fas ligand gene: linkage studies in Type I diabetes mellitus families //Diabetologia.-2002.- V. 45.-№ l.-P. 134-139.

205. Novoradovsky A., Brantly M.L., Waclawiw M.A. et al. Endothelial nitric oxide synthase as a potential susceptibility gene in the pathogenesis of emphysema in alphal-antitrypsin deficiency // Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. -1999.-V. 20.-P. 441-447.

206. Ntais C., Polycarpou A. Association of the endothelial nitric oxide synthase (NOS3) Glu298Asp gene polymorphism with the risk of Alzheimer's disease -a meta-analysis // J Neurol. 2005. - V. 252. -№ 10. - P. 1276-1278.

207. Pakala S.V., Kurrer M.O., Katz J.D. T helper 2 (Th2) T cells induce acute pancreatitis and diabetes in immune-compromised nonobese diabetic (NOD) mice // J. Exp. Med. 1997. - V. 186. - № 2. - P. 299-306.

208. Park K.W., You K.H., Oh S. et al. Association of endothelial constitutive nitric oxide synthase gene polymorphism with acute coronary syndrome in Koreans // Heart. 2004. - V. 90. - P. 282-285.

209. Parks C.G., Cooper G.S., Dooley M.A. et al. Systemic lupus erythematosus and genetic variation in the interleukin 1 gene cluster: a population based study in the southeastern United States // Ann. Rheum. Dis. 2004. - V. 63, Suppl. 1. -P. 91-94.

210. Patel R., Lim D.S., Reddy D. et al. Variants of trophic factors and expression of cardiac hypertrophy in patients with hypertrophic cardiomyopathy // J. Mol. Cell. Cardiol. 2000. - V. 32. - № 12. - P. 2369-2377.

211. Pearce N. What does the odds ratio estimate in a case-control study? // Int. J. Epidemiol. -1993.-V. 26.-P. 1189-1192.

212. Pieper G.M., Siebeneich W., Moore-Hilton G., Roza A.M. Reversal by L-arginine of a dysfunctional arginine/nitric oxide pathway in the endothelium of the genetic diabetic BB rat // Diabetologia. 1997. - V. 40. - №. 8. - P. 910915.

213. Pociot F., McDermott M.F. Genetics of type 1 diabetes mellitus // Genes Immun. 2002. - V. 8. - P. 235-249.

214. Poirier O., Mao C., Mallet C. et al. Polymorphisms of the endothelial nitric oxide synthase gene: no consistent association with myocardial infarction in the ECTIM study // Eur. J. Clin. Invest. 1999. - V. 29. - P. 284-290.

215. Poli F., Boschiero L., Giannoni F. et al. Tumour necrosis factor-alpha gene polymorphism: implications in kidney transplantation // Cytokine. 2000. -V. 12.-P. 1778-1783.

216. PozzilIi P., Di Mario U. Autoimmune Diabetes Not Requiring Insulin at Diagnosis (Latent Autoimmune Diabetes of the Adult) // Diabetes Care. 2001.- V. 24. № 8. - P. 1460-1467.

217. Prast H., Philippu A. Nitric oxide as modulator of neuronal function // Prog. Neurobiol. 2001. - V. 64. - P. 51-68.

218. Pritchard J.K. Are rare variants responsible for susceptibility to complex diseases? //Am. J. Hum. Genet. -2001. -V. 69. P. 124-137.

219. Pritchard J.K., Cox N.J. The allelic architecture of human disease genes: common diseases — common variant. or not? // Hum. Mol. Genet. — 2002. — V. 11.-№20.-P. 2417-2423.

220. Pritchard M.A., Baker E., Whitinore S.A. et al. The interleukin-4 receptor gene (IL4R) maps to 16pl 1.2—16pl2.1 in human and to the distal region of mouse chromosome 7 // Genomics. 1991. - P. 801-806.

221. Rabinovitch A. Immunoregulation by cytokines in autoimmune diabetes // Adv. Exp. Med. Biol. -2003. -V. 520. P. 159-193.

222. Rabinovitch A., Suarez-Pinzon W.L. Cytokines and their roles in pancreatic islet beta-cell destruction and insulin-dependent diabetes mellitus // Biochem. Pharmacol. 1998. -V. 55. -№ 8. - P. 1139-1149.

223. Rapoport M.J., Bistritzer T., Aharoni D. et al. Th/Th2 cytokine secretion of first degree relatives of T1DM patients // Cytokine. 2005. - V. 30. - №5. P 219-227.

224. Redondo M.J., Eisenbarth G.S. Genetic control of autoimmunity in Type I diabetes and associated disorders // Diabetologia. 2002. - V. 45. - P. 605-622.

225. Reed M.A., Zhou C., Muller C. J. Conductance of a Molecular Junction // Sciense. 1997. - V. 278. - P. 252-254.

226. Reich D.A., Lander E.S. On the allelic spectrum of human disease // Trends Genet.-2001.-V. 17.-P. 502-510.

227. Reid J.G., Simpson N.A., Walker R.G. et al. The carriage of proinflammatory cytokine gene polymorphisms in recurrent pregnancy loss // Am. J.' Reprod. Immunol. 2001. - V. 45. - P. 35-40.

228. Roep B.O., Atkinson M. Animal models have little to teach us about type 1 diabetes: 1. In support of this proposal // Diabetologia. 2004. - V. 47. - № 10. -P. 1650-1656.

229. Rossing K.T., Cesari M., Zanchetta M. et al. The T-786C endothelial nitric oxide synthase genotype is a novel risk factor for coronary artery disease in Caucasian patients of the GENICA study // J. Am. Coll. Cardiol. 2003. - V. 41.-P. 930-937.

230. Sam F. Sawyer B. D., Xie Z. Mice lacking inducible nitric oxide synthase have improved left ventricular contractile function and reduced apoptotic cell death late after myocardial infarction // Circ. Res. 2001. - V. 89. - № 5. - P. 351-356.

231. Santangelo C., Marchetti P., Marselli L. et al. Suppressors of cytokine signaling (SOCS) in cytokine-induced human islet cell damage // Diabetologia. 2001. — V. 44 (Suppl. 1): A41.

232. Shimasaki Y., Yasue H., Yoshimura M. et al. Association of the missense Glu298Asp variant of the endothelial nitric oxide synthase gene with myocardial infarction // J. Am. Coll. Cardiol. 1998. - V. 31. - № 7. -P. 15061510.

233. Shinkai T., Ohmori O., Hori H., Nakamura J. Allelic association of the neuronal nitric oxide synthase (NOS1) gene with schizophrenia // Mol. Psychiatry. 2002. - V. 7. - № 6. - P. 560-563.

234. Shirakawa T., Kishi F. Genetic variations of NRAMP1 and active tuberculosis in Japanese populations // Clin. Genet. 2000. - V. 58. - P. 74-76.

235. Sibille Y., Marchandise F-X. Pulmonary immune cells in health and disease: Polymorphonuclear neutrophils // Eur. Respir. J. 1993. - № 6. - P. 15291543.

236. Simpson N.E. The genetics of diabetes mellitus in man // Can. J. Genet. And Cytol. 1980. -V. 22. - № 4. - P. 497-506.

237. Skowronski M., Zozulinska D., Juszczyk J., Wierusz-Wysocka B. Assessment of inflammatory markers in patients with diabetes mellitus and chronic hepatitis C virus infection // Diabetologia. 2004. - V. 47 (Suppl. 1): A296.

238. Smith Ch. Statistical resolution of genetic heterogeneity in familian disease // Ann. Human Genet. -1976. -V. 39. № 3. - P. 281-291.

239. Smyth D.J., Howson J.M., Payne F. et al. Analysis of polymorphisms in 16 genes in type 1 diabetes that have been associated with other immune-mediated diseases // BMC Medical Genetics. 2006. - V. 7. - P. 1471-2350.

240. Sobel D.O., Creswell K., Yoon J.W. et al. Alpha interferon administration paradoxically inhibits the development of diabetes in BB rat // SO — Life Sci. -1998.-V. 62. -№ 15.-P. 1293-1302.

241. Solezs G. Diabetes in the young: a peadiatric and epidemiological perspective // Diabetologia. 2003. - V. 46. - P. 447-454.

242. Spielman R.S., Ewens W.J. A Sibship Test for Linkage in the Presence of Association: The Sib Transmission/Disequilibrium Test // Am. J. Hum. Genet.1998.-V. 62-?. 450-458.

243. Steck A. K., Bugawan T. L., Valdes A. M. et al. Association of Non-HLA Genes With Type 1 Diabetes Autoimmunity // Diabetes. 2005. - V. 54. - P. 2482-2486.

244. Steck A. K., Bugawan T. L., Valdes A.M. et al. Association of Non-HLA Genes With Type 1 Diabetes Autoimmunity // Diabetes. 2005. - V. 54. ~ P. 2482-2486.

245. Stephens M., Donnelly P. A comparison of bayesian methods for haplotype reconstruction // Am. J. Hum. Genet. 2003. - V. 73. - P. 1162-1169.

246. Stephens M., Smith N.J., Donnelly P. A new statistical method for haplotype reconstruction from population date // Am. J. Hum. Genet. 2001. - V. 68. - P. 978-989.

247. Stevens R.B., Sutherland D.E., Ansite J.D. et al. Insulin down-regulates the inducible nitric oxide synthase pathway: nitric oxide as cause and effect of diabetes? // J. Immunol. 1997. - V. 9. - № 11. - P. 5329-5335.

248. Storling I., Binzer J., Andersson A.K. et al. Nitric oxide causes activation of JNK suppression of Akt in insulin-secreting cells // Diabetologia. 2005a. - V. 48 (Suppl. 1): A38.

249. Storling I., Binzer J., Andersson A.K. et al. Nitric oxide contributes to cytokine-induced apoptosis in pancreatic beta cells via potentiation of JNK activity and inhibition of Akt // Diabetologia. 2005(b). - V. 48. - № 10. - P. 2039-2050.

250. Tanus-Santos J.E., Desai M., Flockhart D.A. Effects of ethnicity on the distribution of clinically relevant endothelial nitric oxide variants // Pharmacogenetics. 2001. - V. 11. - P. 719-725.

251. Tarlow J.K., Blakemore I.F., Lennard A., et al. Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable number of an 86-bp tandem repeat // Hum. Genet. 1993. - V. 91. - P. 403-404.

252. TeiTy C.M., Clikeman J.A., Hoidal J.R., Callahan K.S. Effect of tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1 alpha on heme oxygenase-1 expression in human endothelial cells // Am. J. Physiol. 1998. - V. 274. - P. 883-891.

253. The Wellcome Trust Case Control Consortium Genome-wide association study of 14000 casees of seven common diseases and 3000 shared controls // Nature. 2007. - V. 447. - P. 661-678.

254. Thio C.L., Goedert J J., Mosbruger T. An analysis of tumor necrosis factor a gene polymorphisms and haplotypes with natural clearance of hepatitis C virus infection I I Genes and Immunity. 2004. - V. 5 - P. 294-300.

255. Todd J.A., Walker N.M., Cooper J.D. et al. Robust associations of four new chromosome regions from genome-wide analyses of type 1 diabetes // Nature Genetics. 2007. - V. 39. - № 7. - P. 857-864.

256. Tuomilehto J., Borch-Johnsen K., Molarius A. et al. Incidence of cardiovascular disease in Type 1 (insulin-dependent) diabetic subjects with and without diabetic nephropathy in Finland // Diabetologia. 1998. - V. 41. № 7. -P. 784-790.

257. Tuomilehto J., Karvonen M., Pitkaniemi J. et al. Record-high incidence of Type I (insulin-dependent) diabetes mellitus in Finnish children. The Finnish Childhood Type I Diabetes Registry Group // Diabetologia. 1999. - V 42. № 6.-P. 655-660.

258. Ueda H., Howson J.M., Esposito L. et al. Association of the T-cell regulatory gene CTLA4 with susceptibility to autoimmune disease // Nature. 2003. - V. 423.-P. 506-511.

259. Undlien D.E., Lie B.A., Thorsby E. HLA complex genes in type 1 diabetes and other autoimmune diseases. Which genes are involved? // Trends Genet. -2001.-V. 17.-P. 93-100.

260. Vasilescu A., Heath S.C., Ivanova R. Genomic analysis of Thl-Th2 cytokine genes in an AIDS cohort: identification of IL4 and IL10 haplotypes associated with the disease progression // Genes Immun. 2003. - V. 4. -№ 6. - P. 441449.

261. Veijola R., Knip M., Puukka R. et al. The immunoglobulin heavy-chain variable region in insulin-dependent diabetes mellitus: affected-sib-pair analysis and association studdies // Am. J. Hum. Genet. 1997. - V. 59. - P. 462-470.

262. Ventura S; Burnstock G.Variation in nitric oxide synthase-immunoreactive nerve fibres with age and along the length of the vas deferens in the rat // Cell. Tissue Res. 1996. -V. 285. -№ 3. - P. 427-434.

263. Verge C.F., Vardi P., Babu S. et al. Evidence for oligogenic inheritance of type 1 diabetes in a large bedouin arab family // J. Clin. Invest. 1998. - V. 102.-P. 1569-1575.

264. Villalobo A. Nitric oxide and cell proliferation // FEBS. J. 2006. - V. 273. -P. 2329-2344.

265. Wang X.L., Oosterhof J. Tumour necrosis factor a G-308—»A polymorphism and risk for coronary artery disease // Clin. Sci. (Lond). 2000. - V. 98. - P. 435-437.

266. Wang X.L., Wang J. Endothelial nitric oxide synthase gene sequence variations and vascular disease // Mol. Genet. Metab. — 2000. V. 70. - P. 241251.

267. Wang X.Y., Hurme M., Jylha M. et al. Lack of association between human longev and polymorphisms of IL-1 cluster, IL-6, IL-10 and TNF-alpha genes in Finnish renagenarians // Mech. Ageing Dev. 2001. - V. 123, Suppl. 1. - P. 29-38.

268. Warram J.H., Martin B.C., Krolewsri A.S. Risk of IDDM in Chiidren ofdiabetes mothers descreases with oncreasing maternal age et pregnancy // Diabetes. 1991. -V. 40. -P. 1679-1684.

269. Weiss K.M., Terwilliger J.D. How much disease does it take to map a gene with SNPs? // Nature Genet. 2000. - V. 26. - P. 151-157.

270. Wilcox J.N., Subramanian R.R., Sundell C.L. et al. Expression of Multiple isoforms of nitric oxide synthase in normal and atherosclerotic vassels // Atheroscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. - V. 17. - P. 2479-2488.

271. Wilkinson R.J., Patel P., Llewelyn M. et al. Influence of Polymorphism in the Genes for the Interleukin (IL)-l Receptor Antagonist and ILl-p on Tuberculosis //J.Exp. Med.-1999.-V. 189. № 12.-P. 1863-1873.

272. Wilson A.G., Symons J.A., McDowell T.L. et al. Effects of polymorphism in the human tumour necrosis factor alpha promoter on transcriptional activation // Proc. Acad. Sci. USA. 1997. - V. 94. - P. 3195-3199.

273. Wirta O.E., Jansen-Durr P., Berger P. et al. Diseases of aging // Vaccine. -2000.-V. 18.-P. 1567-1583.

274. Wright A.F., Carothers A.D., Pirastu M. Population choice in mapping genes for complex disease // Nature Genet. 1999. - V. 23. - P. 397-404.

275. Wu A.Y., Schulman S.J., Marconi L.A. et al. Protection against diabetes by MHC heterozygosity and reversal by cyclophosphamide // Cell Immunol. -1998.-V. 184.-№2.-P. 112-120.

276. Wu F., Park F., Cowley A.W.Jr., Mattson D.L. Quantification of nitric oxide synthase activity in microdissected segments of the rat kidney // Am. J. Physiol. 1999. - V. 276. - № 6 (Pt 2). - P. F874-81.

277. Xu R., Morales J.A., Muniyappa R. et al. Interleukin-1 beta-induced nitric oxide production in rat aortic endothelial cells: inhibition by estradiol in normal and high glucose cultures // Life Sci. 1999. - V. 64. - № 26. - P. 2451-2462.

278. Yoon J.W., Jun H.S., Santamaría P. Cellular and molecular mechanisms for the initiation and progression of beta cell destruction resulting from the collaboration between macrophages and T cells // Autoimmunity. 1998. - V. 27.-№2.-P. 109-122.

279. Yoshimura M., Yasue H., Nakayama M. et al. A missense Glu298Asp variant in the endothelial nitric oxide synthase gene is associated with coronary spasm in the Japanese // Hum. Genet. 1998. - V. 103. - P. 65-69.

280. Zanchi A., Moczulski D.K, Hanna L.S. et al. Risk of advanced diabetic nephropathy in type 1 diabetes is associated with endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism // Kidney Int. 2000. - V. 57. - P. 405-413

281. Zhao Q., Su S.Y., Chen S.F. et al. Association study of the endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms with essential hypertension in northern Han Chinese // Chin. Med. J. (Engl). 2006. - V. 119. - P. 1065-1071.

282. Zhou J., Bruñe B. NO and transcriptional regulation: from signaling to death // Toxicology. 2005. - V. 208. - P.223-233.

283. Zhu Y., Liao H.L., Lin J.H., Verna L., Stemerman M.B. Low-density lipoprotein augments interleukin-1-induced vascular adhesion molecule expression in human endothelial cells // Atherosclerosis. 1999. - V. 144. - № 2.-P. 357-365.

Информация о работе

Тарасенко, Наталия Викторовна
кандидата медицинских наук
Томск, 2008
ВАК 03.00.15

Диссертация

Патогенетика сахарного диабета 1 типа и его осложнений: гены синтаз оксида азота и цитокинов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы