Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование активных центров сериновых гидролаз методом спиновых меток

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Дорохов, Константин Евгеньевич

ВВЕДЕНИЕ. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

ГЛАВА I. НИТРОКСИЛЬНЫЕ СПИНОВЫЕ МЕТКИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ СЕРИКОВЫХ ЩРОЛАЗ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Спектры ЭПР нитроксильных радикалов.

1.2. Определение скоростей вращения.

1.3. Параметры, характеризующие полярность окружения.

1.4. Взаимодействие глезду парамагнитными частицами.

1.5. Сериновые гидролазы и метод спиновых меток.

1.6. сС-ХТР и холинэстеразы - общие сведения.

1.7. Изучение оС-к'ГР методом спиновых меток.

1.8. Холинэстеразы.

1.8.1. Использование ковалентно связывающихся спин-меченых ингибиторов.

1.8.2. Нековалентно связывающиеся ингибиторы.

ГЛАВА 2. МАТЕРИМЫ И МЕТ0ДД.

ГЛАВА 3. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СПИН-МЕЧЕНОГО ПРОИЗВОДНОГО

ИНДОЛА С СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЪБУШНОМ.

3.1. ¡эксперименты по конкуренции.

3.2. Влияние органических растворителей.

3.3. САЧ, ковалентно модифицированный спиновои меткой.

3.4. Влияние рИ и ионной силы среды.

3.5. Температура денатурации комплекса 1-ЬСА.

3.6. Связывание антибиотиков и ингибиторов с САЧ.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОГО ЦЕНТРА оС-ХШ0ТРИПСИ11Л.

4.1. Спектр Ы1Р комплекса ÍI-XTP.

4.2. Влияние парамагнитных катионов и анионов.

4.3. Введение спинового зонда в активным центр

Фо сфорил-химо трипси на.

4.4. Концентрационная зависимость кажущейся константы диссоциации комплекса II-XTP.Ill

4.5. Влияние органических растворителей на комплекс 11-ХТР.±

4.6. КонФормационное изменение при переходе от нейтральных к кислым значениям pH.

4.7. Взаимодействие спиновоп метки XI с трипсином.

ГЛАВА 5. ВЗAlivio,' iE . СТВКЕ СПИН-ыЕЧЕННХ ИНГИБИТОРОВ

С ЖТИВННЫ ЦЕНТРОМ БуХЭ.

5.1. Спектр оПР соединения ill в присутствии Б;уХЭ.i

5.2. Локализация радикала 111 в комплексе с БуХЭ.

5.3. Сопоставление данных ЭПР и (йергле нтатив hoij. ки не тики.

5.4. Влияние ионной силы и органического растворителя на связывание Iii с ЪуХЗ.

5.5. Расположение нитроксила 111 в углублении белковом молекулы.

5.6. Влияние pH на взаимодействие 111 с БуХЭ.

5.7. Не специфические центры связывания.

5.8. Взаимодействие нитроксила 1 с БуХЭ.

5.9. Взаимодействие нитроксила 1У с БуХЭ.

5.10. Влияние спин-меченого новокаина на активность БуХЭ.

5.11. Взаимодействие катионов парамагнитных металлов с БуХЭ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование активных центров сериновых гидролаз методом спиновых меток"

Актуальность теш. В настоящее время остаются невыясненными многие аспекты строения активных центров и механизма действия сериновых гидролаз. Одним из основных подходов анализа их структурно-функциональных свойств является исследование термент-ингибиторных взаимодействии. Чрезвычайно полезное в подобных исследованиях представляется возможность сопоставления данных, полученных традиционными методами суб-стратно-ингибиторного анализа с результатами применения методов непосредственное регистрации фермент-ингибиторных комплексов, таких, как метод спиновых меток. В литературе данных такого рода практически нет. Использование спин-меченых конкурентных ингибиторов позволяет в принципе определять методом ьПР константы диссоциации (Кд) фермент-ингибиторных комплексов. бта величина очень чувствительна к коншормации активного центра, изменение Кд непосредственным образом указывает на изменение функционального состояния белка. Однако достоверное выявление ко информационных эффектов требует высокой точности и воспроизводимости определения Кд, а метод оПР традиционно считается мало приспособленным к такого рода экспериментам, ото осложняло изучение некоторых тонких кон-формационных эффектов в активных центрах даже таких относительно хорошо изученных ферментов, как ОС-хикютрипсин ( <Х-ХТР,КФ 3.4.4.5). Весьма интересен, например, вопрос о конформационной лабильности активного центра ОС-1ТР в растворе при изменении рН. Рассмотрение ьтого вопроса затруднено необходимостью учета рН-зависимои ассоциации фермента. Молекулярное строение активного центра бутирилхолинистеразы

БуХЭ, КФ 3.1.1.8) изучено значительно хуже, чем в случае <РС-1ТР. В последнее время в литературе высказывается сомнение относительно правильности общепринятого понимания метаболической роли холинэстеразы (Чабб,1984 /98/). Систематического изучении активного центра БуХЭ методом спиновых меток не проводилось вообще. Получение данных такого рода позволило бы расширить наши представления о структурно-срункциональных особенностях сериновых ферментов, что важно не только для понимания механизмов ферментативного катализа, но может иметь существенное значение для медицины и биотехнологии.

Цель и задачи исследования. В соответствии с изложенной проблематикой, основной целью работы явилось изучение с помощью конкурентных спин-меченых ингибиторов активных центров сериновых ферментов - сб-ХТР и БуХЭ. При этом фермент-ингиби-торные комплексы регистрировали методом оПР, а для анализа состояния активных центров использовали определенные по спектрам о'ПР Кд фермент-ингибиторных комплексов. В рамках поставленной цели мы решали следующие конкретные задачи:

1. Отработать методику точного определения методом ЬПР Кд комплексов белков со спин-меченими лигандаш.

2. Используя ату методику, с помощью конкурентного спин-меченого ингибитора о£-ХТР изучить влияние рН среды на кон-формацию активного центра с учетом влияния олигомеризации фермента на кажущееся значение Кд.

3. Методами ЭПР и ферментативной кинетики провести сравнительное изучение антихолинэстеразной активности и взаимодействия с активным центром БуХЭ спин-меченых лигандов душ установления локализации спиновых меток в комплексе,получения данных о строении связывающих участков и о влиянии на эти комплексы различных факторов внешней среды.

Научная новизна. Впервые показано, что при переходе к кислым рН нарушу с диглеризациеи в активном центре сС-1 ТР происходит конформационное изменение с рК, близким к 6. Определена антихолинэстеразная активность спин-меченых новокаина и метацина, установлена их локализация в активном центре БуХЭ. методами ЭПР спиновых меток и ферментативное кинетики определены К и Кищ? комплексов спин-меченых ингибиторов с БуХЭ и получено хорошее совпадение между этими величинами.

Впервые обнаружено, что вблизи анионного центра БуХ<з на раса стоянии, не превышающем 10-Х2А, расположен участок связнва 0+ л / 2+ ния парамагнитных катионов и /\л и зарегистрирована

А О, их конкуренция с ионами и! за место связывания. Предложена модель строения анионного центра БуХЭ.

Научно-практическая ценность исследования. Полученные в работе данные о конформационных возможностях активного центра оС-ХТР, антихолинэстеразнои активности спин-меченых новокаина и метацина и о строении анионного центра БуХЭ существенны для выяснения механизмов действия сериновых гидролаз и структурных особенностей, обеспечивающих эти механизмы. Результаты работы ведут к пониманию природы сил, стабилизирующих комплексы ферментов с ингибиторами, выяснению топографии активного центра БуХЭ и могут иметь важное значение при построении структурно-функциональных моделей активных центров сериновых ферментов. Данные о рП-зависимости конформациоиного состояния активного центра сС-лТР и о связывании ионов двухвалентных металлов вблизи активного центра холинэстеразы необходимо учитывать в дальнейшем при анализе механизмов регуляции активности этих ферментов. Разработанные методики открывают возможность определения Кд белок-лигандных комплексов методом с/ПР с повышенное точностью, существенно увеличивая эффективность использования метода спиновых меток для количественного изучения белок-лигандных комплексов.

Апробация работы. Основные положения диссертации обсуждались на У совещании по конформационным изменениям биополимеров в растворе, Телави,1980; 1 Всесоюзном биофизическом съезде, Москва,1982; Всесоюзном симпозиуме "Магнитным резонанс в биологии и медицине", Черноголовка,1981, а такие на конкурсах молодых ученых и заседании секции биофизическом химии ученого совета НИИ по БИХС Минмедпрома СССР, Купавна, 1984.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано б печатных работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырех глав, содержащих изложение методик и экспериментальных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Диссертационная работа изложена на 124 страницах, содержит 40 рисунков и 5 таблиц. Список цитируемом литературы содержит 206 работ советских и зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Дорохов, Константин Евгеньевич

выводы.

1. Значительно повышена точность определении методом ¿ПР 1С Д комплексов белков со спин-мечеными лигандами. ото позволило рассмотреть ряд тонких эбхиектов, связанных с влиянием среды на взаимодействие спин-меченых ингибиторов с оС-химотрипсином и бутирилхолинэстеразоя, и спин-меченого аналога индола с сывороточным альбумином. Обнаружено, что влияние 3-5$ органического растворителя на Кт, комплекса спин-меченого ингибитора с оС-ХТР - пренебрежимо мало, с БуХЭ - слабо выражено, а в случае САЧ - увеличивает К в 5-10 раз.

2. Получена рН-зависимость истинном, не зависящей от олиго-меризалии К комплекса с(-ХТР с незаряженным спин-меченым ингибитором. 3[оказано, что при повышении рН происходит изменение коноюрмагаш активного центра мономерной формы <?С-ХТР. рК этого конжормаиионного изменения меньше 6.

3. Показано, что спин-меченые метацин и новокаин являются обратимыми конкурентными ингибиторами БуХЭ, изучены зависимости ^инг от И01Ш0н сшш и содержания органического растворителя. Обнаружено, что введение гпшеридинового фрагмента в молекулу метацина усиливает его антихолинэстеразную активность. На связывание этих ингибиторов влияет ионогенная группа с рК 6,5, что близко к значению рК имидазола Гис.

4. Методом оПР выявлено наличие двух видов связывающих центров спин-меченого метацина, один из которых идентифицирован как активные центр БуХо. Значение К определенное для этого центра ио спектрам оПР, совпадает с Кшр , полученной классическим методом. Показано, что сиин-меченые ингибиторы локализуются в анионном центре БуХо, комплекс стабилизирован

- IVO кулоновским и гидр офобным взаимодействием. Гидрофобные фрагменты спиновых меток расположены вне эстеразного центра. о

5. Обнаружено, что на расстоянии не более I0-I2A от участка анионного центра БуХй, комплементарного аминоалкилънои группе, располол:ен участок связывания парамагнитных катионов Со и Ана котором связывается также аллостерическия эффектор ион Са^+. Предложена модель анионного центра, расположенного в гидрофобном складке макромолекулы и включающего участки связывания органического катиона и иона двухвалентного металла.

- 167 -ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Прямым методом регистрируя ферглент-ингибиторный комплекс, № выявили ряд тонких кон ¡.орма^-ионных эффектов в активных центрах ферментов, в том числе и такие, которые не удается обнаружить классическими методами ферментативной кинетики. При тщательной постановке эксперимента точность данных, полученных методом ЗПР вполне сравнима с точностью биохимических методов, что видно из хорошего совпадения констант диссоциации и ин-гибирования. Фетод Ы1Р был применен нами и для изучения белков, не обладающих Ферментативной активностью. Альбумин был использован в качестве мо,цел-.ной системы, однако полученные при этом результаты показывают, что свойства и биологические функции этого белка нуждаются в дальнейшем изучении. При взаимодействий с антибиотиками наглядно проявилось взаимовлияние связывающих центров САЧ; несколько неожиданным оказался факт связывания с САЧ конкурентных ингибиторов холинэстераз. Учитывая литературные данные о собственной ьстеразноы активности альбумина, более детальное рассмотрение этих свойств очень интересно.

Выявление нового рН-зависимого конформационного изменения оС -ХТР вносит вклад в решение продолжительного научного спора /10,115,127 /. Это изменение следует с осторожностью относить к протонированию Гис-57 в виду неполного соответствия его рК данным для рК Гис. Однако в любом случае оно указывает на определенную лабильность активного центра оС-ХТР, возможно, играющую роль в катализе и регуляции уермеитативной активности. Следует отметить, что построение в данном случае изотерм адсорбции оказалось нерезультативным, поскольку процесс взаимодействия соединения П с сС -ХТР не укладывается в допущения механизма адсорбции по Лэнгмюру.

В настоящее время молекулярное строение сывороточной холинэстеразы находится на стадии изучения, несмотря на огромное количество публикаций, посвященных биохимическому изучению холинэстеразной активности. Чабб,1984 /98/ недавно справедливо указал, что биологические функции холинэстераз могут состоять не только в участии в синаптическок передаче нервного импульса. Об этом свидетельствует несовпадение распределения холинэстераз и субстрата (ацетилхолина) в организме, наличие холинэстераз у организмов, не имеющих синапсов, а так же данные о протеазноп и амидазнои активности холинэстераз /98/. Наши данные развивают представление о топографии активного центра БуХЭ и о механизмах регуляции ее активности. Исследование взаимодействия этого фермента с ионами парамагнитных металлов открывает широкие возможности для дальнейших работ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Дорохов, Константин Евгеньевич, Москва

1. X. Абдувахабов A.A.»Зупарова K.M.»Годовиков H.H.»Кабачник M.И., Краше шок А.И.Михайлов С.С.»Розенгарт В.И. О новые гидрофобных участках в районе зстеразного центра холинэстераз. -Докл.АН СССР,1973,т.2X1,¿5,с.Х209-Х2Х2.

2. Анциферова Л.И.,Вассерман A.M.,Иванова А.Н.,Лившиц В.А., Наземец Н.С. Атлас спектров электронного парамагнитного резонанса спиновых меток и зондов.- М.,Наука,1977

3. Белоногова О.В.,уролов E.H.,Иллюстратов Н.В.»Лихтенштейн Г.И. Влияние температуры и степени гидратации на подвижность спиновых меток в поверхностных слоях белков.-Мол.биол.,1979,т.ХЗ,№,с.567-575.

4. Богатков C.B.Игумнова Н.Д.,Кругликова Р.И.Дундрюцкова Л.А./Черкасова Е.М. Исследование протяженности участков связывания в активном центре ХЭ при помощи ингибирования бензоатами аминоспиртов. Биохимия, 1974, т.39,лз1, с. X35-I40.

5. Бресткин А.П.,Брик И.Л.»Волкова Р.И.»Майзель Е.Б., Розенгарт Е.В. Влияние ионнои силы и органических растворителей на взаимодействие холинэстераз с субстратами и ФОИ. Биохимия, 1970, т. 35,jé2, с .382-393.

6. Бучаченко А.Л.,Вассерман A.M. Стабильные радикалы. М., Химия,X973.

7. Волкова Р.И.Дочетова Л.М. Алкилирование холинэстераз Д/ИАдиметил-2-фе нилазаридинием и А//¡/-Диме тил-2- П -нитроне нилазаридинием. Биоорг .химия, X977, т .3 ,Jii£I, с. Х539-Х55Х.

8. Григорян Г.Л. .Сускина В.И.,Розанцев о.Г.Далмансон А.Э. Исследование методом ШР конформационных переходов в сывороточном альбумине с помощью иминоксильных свободных радикалов.- Мол.биол.,1968,т.2,jî2,с.148-154.- 172

9. Григорян Г.Л.Дусовская Т.П.»Яковлев В.А.,Розанцев у.Г. Изучение активного центра оС-химотрипсина с помощью спин-меченых ингибиторов. Тез.докл. 7го медцунар.симп.по химии природн.соед. Рига,1970,с.136.

10. Григорян Г.Л. Изучение структурных перестроек в активном центре -химотрипсина. -Докл.АН СССР, 1971, т, 201,аз1 , с. 224

11. Григорян Г.Л.Дорхмазян М.М.,Розанцев о.Г. 0 влияинии температуры на спектры оПР ишшоксильного радикала, введенного в активный центр сС -химотрипсина.- Биошизика,1972, т.ХУП ,^¿4, с. 69 2-693.

12. Григорян Г.Л.Розанцев э.Г.Деплов Н.Е.,Иванов В.П., Корхмазян М.М. Исследование оС-химотрипсина, спин-меченого по серину-195.- Изв.АН СССР,сер.хим.,1973,В7,с.1654

13. Григорян ГЛ. Исследование структурно-функциональных свойств биополимеров методом спиновых меток. Дисс.докт. биол.наук,М.,1979.

14. Григорян Г.Л.,Дорохов К.Е. Связывание химотрипсином незаряженного спин-меченого ингибитора при нейтральных и кислых рН. Тез.докл.I Всесоюзн.биофизич.съезда,Москва, 1982. Т.1.,с.123,М.,1982.

15. Григорян Г.Л.Дорохов К.Е. Связывание о£-химотрипсином спин-меченого конкурентного ингибитора при различных рН.-Докл.АН СССР, 1982, т. 263,135, с. 1265-1267.

16. Доровска В.Н.,Варфоломеев С.Д.,Мартинек К. Температурная зависимость реакции деацилирования ацил-химотрипсиновых производных алифитических карбоновых кислот.- Биохимия, 1973,т.38, с.381-392.

17. Дорохов К.Е.,Григорян Г.Л. 0 влиянии органических растворителей на поверхностно-адсорбционные свойства глобулярных- 173 белков. Материалы У совещ. по конформ.изм.биополимеров в растворах.Телави,1980,с.82.

18. Дорохов К.Е.,Григорян Г.Л. Влияние органических растворителей на адсорбционные свойства и конформационное состояние сывороточного альбумина. Тез.докл.Всес.симп."Магнитный резонанс в биологии и медицине",Черноголовка,1981,с.127.

19. Дорохов К.Е.,Григорян Г.Л. Влияние органических растворителей на связывание спин-меченого аналога индола с сывороточным альбумином.- Биофизика,1982,т.ХХУП,^3,с.534-535

20. Дорохов К.Е.,Григорян Г.Л.,Карданов H.A.»Жданов Р.И., Трифонова С.А.,Годовиков H.H.Дабачник М.Н. О взаимодействий спин-меченого метацина с бутирилхолинэстеразой.-Биофизика , 1985, т. XXX, jül, с. 23-26.

21. Дудич И.В.Тимофеев В.П.,Волькенштейн М.В.,Мишарин АЛО. Измерение времени вращательной корреляции макромолекул методом ШР в случае ковалентно связанной спиновой метки.-Мол. биол., 1977, т. il,jVö , с. 685-689.

22. Коров B.C.,Розенгарт Е.В.,Говырин В.А.,Хромов-Борисов Н.В.> Бровтдына Н.Б. Коншормации алкиламмониевых и гетероциклических ониевых производных ацетилхолина и границы анионного центра БуХЭ.- Докл.АН СССР,1976,т.231,JS,с.215-218.

23. Замараев К.И.,Молин Ю.Н.Салихов K.M. Спиновый обмен. Теория и физико-химические приложения.- Новосибирск,Наука,1977

24. Кабачник М.И. ^осфорорганические физиологически активные вещества.- Вестник АН CCCP,X964,Al0,c.60-68.

25. Кесватера Т.А.,Игумнова Н.Д.Авиксаар A.A. Проявление двух основных групп в активных централе холинастераз в реакциис N-метилкарбомаилхолином.- Биоорг.химия,1981,т.7, ^7, с.1016-1023.- 174

26. Кирш Ю.Ь.Довнер В.Я.,Кокорин А.И. ,3амараев К.И. Даба-нов В.А. Особенности коглплексообразования в водном растворе производных поли- 4 -винилпиридина и ионов Cu(it). -Докл.АН СССР,1973,т.212,с.138-141.

27. Кокорин А.И.,3амараев К.И.,Григорян Г.Л.»Иванов В.П., Розанцев о.Г. Измерение расстоянии между парамагнитными центрами в твердых растворах иминоксильных радикалов, би-раднкалов и спин-меченых белков.- Биофизика, 1972, т.ХУИ,j ¿1, с. 34-41.

28. Краше нюк А. И., Михаилов С. С., Розе fir арт В. И. ,Абдувахабов A.A.,Зупарова K.M. Влияние ионнои силы на антихолинэс-теразные свопства некоторых новых фосфорорганических соединений. Укр. биохим. журн., 1974, т. 46,J55, с. 586-590.

29. Кузнецов А.Н.»Лившиц В.А. Исследование лиотропных жидких кристаллов методом спинового зонда.- ¿¡урн.шиз.хим., 1974,т.48,Н 2,с.2995-2999.

30. Кузнецов А.И.,сберт Б. Исследование конформационных изменении молекул сывороточного альбумина в предденатура-ционном интервале температур методом спинового зонда.-Мол. биол., 1975, т. 9, , с. 407-414.

31. Кузнецов А.Н.,оберт Б.,Гюльханданян Г.В. Исследование броуновского вращения молекулы о(-ХТР методом спинового зонда.- Мол. биол. ,1975, т. 9,Ji6, с. 871-878.

32. Кузнецов А.Н. Метод спинового зонда.- М.,Наука,1976.

33. Кузнецов А.Н.Дарахонычева Н.В.,Огурцов С.И. Об исследовании адсорбции непарамагнитных соединении на белках методом спинового зонда.- Биофизика, 1977,т.XXIIс.212

34. Куликов A.B.Лихтенштейн Г.И.Розанцев э.Г.,Сускина В.И., Шапиро А.Б. 0 возможности определения расстоянии между- i75 функциональными группами белков методом спиновых меток.-Биофизика ,1972, т .ХУП, ¿и, с. 42-48.

35. Лангель Ю.Л.,Ярв Я.Л. Константа диссоциации анионного центра БуХЭ.- Биоорг.химия, 1978,t4,jsI0,с. 1352-1357.

36. Лангель Ю.Л.,Ярв Я.Л. Влияние рН на гидрофобное связывание нафталина в активном центре БуХЭ.- Реакц.сп.орг.соед.,1978, т.ХУ,Й4(56),с.456-463.

37. Лангел 10Л.,Спээк М.А.,лрв Я.Л. Влияние рН на гидролиз холинзстеразой различных субстратов.- Биохимия,1980, т.45, ^12,с.2130-2138.

38. Ландау М.А. Молекулярные механизътм действия физиологически активных соединении.- М.,НаукаД981.

39. Лихтенштейн Г.И. Метод спиновых меток в молекулярной биологии.- М.,Наука,1974.

40. Максумов И.С. ,Липкинд Г.М.,Попов Е.М. Конформационные возможности аминокислотных остатков активного центра сС-ХТР.-Биоорг. химия, 1976, т. 2, ¡¿6, с. 737-745.

41. Маркович М.Н. ,Шрайбер ,Аверьева Е.В.,Клинчев В.Ф. Калориметрическое изучение молекулярного механизма ком-плексообразования в системе САЧ-пенициллин. Тез.докл.

42. X Всес.конф. по калориметрии и химич. термодикамшсе. М.,1984,0.345-348.

43. Миль В.М.,Завриев O.K.,Григорян Г.Л.Друглякова К.Е. Изучение структурных переходов спин-меченол ДНК.- Докл. АН СССР,1973,т.209, J&,с.217-220.

44. Михельсон М.Я. ,3еималь Э.В. Ацетилхолин.- JI.,Наука,1970.

45. Нейман М.Б. ,Мамедова К).Г.,Розанцев Э.Г. Синтез свободных радикалов ряда 2,2,6,6-тетраметил-^ -пиперидоноксила.- 176

46. Аз epd. хигл. журн., 1962, jß6, с. 37-40.

47. Огурцов С.И.,Beсела И.В.Дамерницгаш A.B.,Мошковским Ю.Ш., Терезина А.К.Дарахонычева Н.В.Кузнецов А.И. Исследование связывания спин-меченого прогестерона с сывороточным альбумином . Биофизика, 1978, т. ХХШ, .еЗ, с. 432-435.

48. Райхман Л.М.Дннаев Б., Розанцев ¿.Г. Исследование кондюр-мационных переходов цитохрома С методом спиновых меток.-Мол. биол., 1972, т. 6 Д4, с. 553-558.

49. Розанцев d.r. 0 реакциях нового органического радикала без затрагивания сводобноя валентности.- Изв.АН СССР, сер.хим., 1963Д9,с.1669-1672.

50. Розанцев о.Г.,Сускина В.К. Синтез новых стабильных свободных радикалов в ряду 2,2,6,6-тетршлетилпиперидин-1-ок-сила.- Изв.АН СССР,сер.хим.,1969Д5,с.1191-1193.

51. Розанцев у. Г., Григорян Г.Л. ,1'усовская Т.П.,Годовиков H.H., Теплов U.E. Синтез некоторых спин-меченых ингибиторов и субстратов холинэстераз.- Изв.АН СССР,сер.хим.,1971,j ¿10, с. 2334-2336.

52. Садыков A.C. Дозенгарт Ё.В. Дбдувазгабов A.A. »Асланов Х.А. Холинэстеразы. Активный центр и механизм действия.- Ташкент, "и>ан", 1976.

53. Сергеев II.В. Дльянкина Т.И. ,Сеншулла Р.Д. ,Гребенщиков Б.Ю., Лихтенштейн Г.И. Исследование взаимодействия стероидов с ЧСА методом спиновых меток.- Мол.биол.,1974,т.8Д2,с.206-217.

54. Сочилина Е.Е.,Самокиш В.А. Побочные реакции при взаимодействии ФОИ с холинэстеразами.- Реакц.сп.орг.соед.,1973, т.ХД4(38) ,с.999-1003.

55. Стрюков В.Б.,Соснина Т.В.Драицберг A.M. Исследование вращательной подвижности иминоксильных радикалов.- Внсокомол.- 177 соед.,сер.А,1973,т.15,жб,с!397-1406.

56. Тищенко В.М. Исследование четвертичном структуры БуХЭ сыворотки крови лошади.- Биофизика, 1978,т.XXIII,isl,с. 153

57. Фролов E.H.»Лихтенштейн Г.И.Дургин Ю.И.,Белоногова О.В.0 динамической структуре активного центра сС-ХТР.- Изв.АН СССР, сер.хим., 1973,, с. 231 -232.

58. Фролов E.H.Дарахонычева Н.В.»Лихтенштейн Г.И. Исследование динамическом структуры ЧСА методом спинового зонда.-мол. биол., 1974, т. 8, лзб, с. 886-893.

59. Харахонычева Н.В.,Сигпдин Я.А.,Лихтенштейн Г.И. Изучение взаимодействия антиревматических препаратов с белками методом спиновых меток.- /арм. и токе. ,1975,JiiL,с. 108-109.

60. Харахонычева Н.В. ,Рудзит о.А.,Рамхман JI.M. ,Мошковский Ю.Ш. Исследование взаимодействия сывороточного альбумина человека с пенициллинами методом спиновых меток.- Антибиотики, 1975, т. 20 ДЮ, с. 917-921.

61. Ходаковская O.A.Яковлев В.А. Исследование холиньстеразы сыворотки крови с помощью спин-меченого ингибитора.- Изв. АН СССР,сер.биол.,1975,14,с.570-579.

62. Хургин Ю.И.,Бурштеин К.Я. Механизмы переноса протона в реакциях ацилировакия о£-ХТР.- Докл.АН СССР, 1974,т.217,JÜ4,с.965-968.

63. Яковлев В.А. Кинетика ферментативных реакций.-М.,Наука,1965.62. >1Ковлев В.А.,Ходаковская O.A.,Гусовская Т.П. ИсследованиеоС -химотрипсина с помощью спин-меченого ингибитора.- Биофизика , 1974, т. XIX, ¿2, с. 224-232.

64. Бемли Н. Статистические методы в биологии.- М.,Мир,1962.

65. Берлинер JI.(ред.) Метод спиновых меток. Теория и применение.1. М.,Мир,1979.

66. Гамильтон К.Л.,МакКоннелл. Спиновые метки.- Успехи химии, 1970, т. 39,Ш, с. 531-559.

67. Гриффит 0.,Дност П. Липидные спиновые метки в биологических мембранах.- В кн. :Берлинер JI. (ред.)Метод спиновых меток. Теория и применение. М.,Мир,1979,с.489-570.

68. Диксон М.,Уэбб Э. Ферменты.- М.,Мир,1982.

69. Лакхарст Дж. Бирадикалы как спиновые зонды.- В кн.: Берли-нер JI. (ред.) Метод Спиновых меток. Теория и применение.1. М.,Мир,1979,с.156-206.

70. Моррисетт Дм. Применение спиновых меток для исследованияструктуры и функции ферментов.- там же, стр.298-366.

71. Abou-Donia М.В.,Rosen G.M. A spin-labeled ACh-analog inhibitor of AChE.-Int .3 .biochem. ,1975, v. 6,116,p. 393-398.

72. Abou-Donia Li.B. ,Rosen G.M. Kinetics of inhibition of AChE by soin-labeled Ach-analogs.-Biophys.Chem. ,1976,v.6П1 ,t>.15

73. Abou-Donia M.В.,Rosen G.M.,Paxton J. Spin-labeled AChanalogs as probes to study the anionic active site of AChE. Int .J .Biochem., 1976 ,v. 7 8,p .371-376.

74. Anderson ?.V. A mathematical model for the narrowing ofspectral lines.- J.Phys.Soc.Jap. ,1954,v.9,H3,n.316-339.

75. Asacura T.,Brott H.R.,Yonetani T. Studies on cytochrome С peroxidase.- J,Biol.Chem.,1969,v.244 Л 25,p.6626-6631.

76. Aune TC.C. ,Timasheff S.iT. Dimerisation of o£-ChTR. oH-dependence in acid region.- Biochemistry,1971,v.10,о.1609.

77. Barratt H.D.,Davies A.P. ,Evans Ivi.T.A. Maleirniae isoma-leimide nitroxide spin labels.- Eur.j .Biochem. ,1971 ♦ v.24,11 2 p.2oO-283.

78. Bauer R.S. .Beriiner L.J. Spin iabei investigation of

79. ChTR active site structure in single crystals.- J.Hoi.

80. Biol. ,1979iV.128 JT1 ,p.l-19.

81. Bender LI.L.,Kezdy F.J. The current status of the oC -ChTR mechanism.- J .Amer .Chem.Soc.,1964,v.86 ¿118,p.3704-3714.

82. Benga G.Interpretation of the ESR spectra of nitroxiae-maleirnide labeled proteins. Biochem.Biophys.Acta, 1975, v. 400 N1 ,p. 69 -79.

83. Benhola H. Uberblick uber die transportfunktion der serumeineisshorper,- in: Peeters (ed.), Protiaes of the biological fluids. 9-th Coll. »Bruges,Elsevier publ.comp., 1961,0.58.

84. Berliner L.J. ,McConnell H.I.i. A spin-labeled substrate foroi -ChTR. Proc .IT at .Acad .Sci.USA, 1966 ,v .55 ,P. 708-712.

85. Berliner L.J. JvlcConnell II.M. Spin label orientation at the active site of oC-ChTR in single crystals. Biochem. Biophys .Res .Com., 1971 ,v .43 Ji 3 ,p .651-657.

86. Berliner L.J. Urea denaturation of active-site spin-labeled ChTR. Biochemistry,1972,vll^T 15,p.2921-2924.

87. Berliner L.J. Aoplication of spin-labelling to structure-conformation studies of enzymes.- Progr.Bioorg.Chem., 1974,v.3 ,p. 1-52.

88. Berliner L.J.,\7ong S.S. -Spin-labeled sulphonyl fluoridesas active-site probes of protease structure.- J.Biol.Chem., 1974,v.249 -p.1668-1677.

89. Berliner L.J.,Bauer R.S. Structural changes withing unit cell submits in crosslinkea oC-CTR crystals.- J.Mol.Biol. , 1979,v.l29,pl65-168.

90. Berman H.A. ,Beet el''/., Taylor P. Spectroscopic studies on AChE. Biochemistry, 1981 ,v. 20 16 ,p .4803.- 180

91. Blow I).1.1. The structure of chymotrypsin.- in: Boyer V.Z. (ed.) The enzymes. IIY-L. ,1971 ,P.185.

92. Brimijoin S. ,1'iintz I\.P. ,Prendergast F.G. Dansylarginine amide. A potent & selective inhibitor of BChE.- Biochem. Pharmacol. ,1983,v.32 fi 4,p.699.

93. Brown J.R.,Hartley B.S. Location of disulphide bridges by diagonal paper electrophoresis.- Biochem.3.,1966,v.101,1. HI,p. 229.

94. Brown J.R. Serum albumin.- in: Rosenoer V.LT. (ed.) Albumin structure. Oxf.»Perg.pr.,1977,P.27-49.

95. BuckmanT.,Kennedy F.S. ,7/ood J.LI. Spin labelling of vitamin Bx2>- Biochemistry ,1959,v.8,p.¿1437

96. Bulger J.33,,Lloyd R.V.,Struve '".7.G. 9-tempoylacridine: a spin-labeled,fluorescent probe of AChE.- Anal.Lett.,1978, v.ll,p935-945.

97. Cartwright C., La Valle J.,Gardner S.,Struve W. Stereo-specific spin-labelling of o£-ChTR.- in: 9th Intern.Congr. of Biochem. Abstr. book.Stokholm,1973,0.47.

98. ChanL.i.I. ,Himmel C.H. ,IJain A.R. Active-site directed fluorescent probes in the kinetics and spectroscopy of purified ChE.~ Biochemistry,1974,v.13,p.86.

99. Chen R.F. Removing of fatty acids from serum albumin by charcoal treatment.- J.Biol.Chem.,1967,v.242,p.173.

100. Christian S.T. ,Janentsko R, A comparatuve study of the interactions of the nonpolar fluorescent ligands with BChïï P-. AChE. Arch.Biochem.Biophys. ,1971,v. 145 ,p.l69.

101. Chubb I. AChE: multiple functions?- in: Brzin Li.,Barnard E.A.-Sket D. (eds.) Cholinesterases.Fundamental and- 181 applied aspects. Proc.of Una Intern .meeting on cholines-t erases. Bleed,Yugoslavia, 1983. Berl. 17-Y. ,1984,p.345.

102. Cohen S.G. ,Crossley J. Kinetics of hydrolysis byo£-ChTR.-J.Airier .ChemSoc., 1964. v.86,p.4999.

103. CohenR.G.,Klee L.II., We in stein S.Y. Action of cC-ChTR on the diethyl esters of furnaric,maleic & acetylen dicarbo-xylic acids.- J.Araer.Chera.Soc.,1966,v.88,p.5302.

104. Cooke R.,Duke J. The synthesis of a spin labeled analogue of adenosintriohosohate.- J.Biol.Chem.,1971,v.246,p.6360.

105. Cruickshank 7.H. ,ICaplan II. Properties of the hystidines of chymotrypsinogen. J.Biol.Chem.,1974,v.83,p.267.

106. Darnall D.W. ,Birnbaum E.R. et al. An estimation of the distance from the active site to the calcium binding site in trypsin. in: Ribbons D.VJ. (ed.) Proteolysis and physiological regulation. Ü .-Y. ,1976,p.394.

107. Dawson R.M.,Grone H.D. The effect of alyphatic alcohols on the hydrolysis by AChE.- J21eurochem.,1975,v.24,o.411.

108. Faller L.I). .La Fond R.E. Binding properties of olygomeric ChTR.- Biochemistry,1971,v .10, p.1033-1041.

109. Fersht A.R.,Requena Y. Equilibrum P-, rate constants for the inter convent ions of two conformations of ChTR.-J.I.lol. Biol. 1971,v.61,p.279.

110. Fife T.H. ,Milstein J.B. Steric effects in the deacylation of acyl- ChTR.- Biochemistry,1967,v.6,p.2901.

111. Fink A.L. Effect of IMSO on the interaction of proflavin with oC -ChTR. Biochemistry, 1974, v. 13, p. 277.

112. Flohr K.,Kaiser E.J. Enantiomeric specifity i the ChTR catalysed hydrolysis.- J.Amer.Chem.Soc.,1972,v.94,p.3675.

113. Flohr K.,Paton R.M. Kaiser E.T. Studies on the interactions of spin-labeled substrates with ChTR R-, cycloamyloses.- 182

114. T .Amer.Chem.Soc. ,1975v.97,p. 1209.

115. Freed J.H.,Frsenkel J.K. Theory of linewidths in ESR spectra.- J.Chem.Phys.,1963,v.39,p.326.

116. Fujioka T.,Tanizava K".,Iianaoka Y. Specific spin-labeling at trypsine active site.-Biochem.Biophys.Acta,1980,v.612,p.205.

117. Gammon K.L.,Smallcombe S.H.,Richards J.H. Magnetic resonance studies of the protein small molekule interactions.- J.Amer.Chem.Soc. ,1972 , v. 94,p.4-573.

118. Gillelana M.J. ,Bender M.L. Kinetics of ©C-GhTR dimeri-sation.- J .Biol.Chem.,1976,v.251,p.498.

119. Goldman S.A.,Bruno G.V.,Polnascek C.F.,Freed J.H. An ESR study of anisotropic rotational reorientationJ.Chem. Phys.,1972,v.56,p.716.

120. Pe Ilaen C. ,Heurath H. ,Teller B.C. The phylogeny of tryp-sin-relatea serine proteases.- J .Mol.Biol. ,1975 ,v.92,p.225

121. Herskovits T .T . ,GaaegbecnB. ,Jaillet Ji. uu the structural stability ana solvent aeuaturation of proteins.-J .Biol. Chem.,1970,v.245,p.2588.

122. Hsia J.C.,Kosman T).J.,Piette L.II. Organophosphate spinlabel studies of inhibited esterases. Biochem.Biophys. Res.Com.,1969 v.36,p.75.

123. Hsia J.C.,Kosman D.J.,Piette L, II. ESR-probing of macro-molecules.- Arch.Biochem.Biophys.,1972,v.149,p.441.

124. Horbett T.A.,Teller L'.C. Lou oli aimerisation behavior of bovine oC-ChTR.- Biochemistry ,1973 v. 12,p. 1349.

125. Jerv J.,Langel TJ. pH-dependent conformational change of BChE active site.- Biochem.Soc.Trans. ,1981,v.9,p.221.

126. Jorio Ll.A. ,Michalek II. Interaction of propidium iodides with ChE and AChE. Eur .J .I.tod. Chem. -Chim .Ther., 1982, ' v.17,p.249.

127. Jansz H.S.,Cohen J.A. Pseudocholinesterase from horse serum. Biochem.Biophys.Acta,1962 ,v.56 ,p.531.

128. Johnson G.H. ,I\tiov;les J.R. The binding of inhibitors tocC-^hTR.- Biochem.J. ,1966,v. 101,p.56.

129. Johnson G.H.,Fnowles J.R. The binding of inhibitors tooC-€hTR at alkaline pH.- Biochem.J.,1967,v.103 ,p.428.

130. ICamaric L. Allosteric reactions of horse serum ChE.-Croat.Ghem.A ct a,1975,v.43,p.287.

131. ICamaric L.M. The inhibition by tubocurarine of horse-serum GnE-catalysed hydrolysis.- Bio chem. Dharm.,1975, v.24,p.1663.

132. Kato G.,Yung I. ,Ihnat M., II MR studies of AChE. Hoi. Pharmacol. ,1970,v.6,p.588.

133. Fato G. Yung I. The use of j'ilTR to describe the binding of atropine analogues to AChE. Llol.Pharm. ,1971,v.7,p.33.

134. ICato G. AChE.I.A study by illiR of the binding of inhibitors to the enzyme.-I.lol.Pharm. ,1972,v.8,p.575.

135. Kawamura T. Matounami S. ,Yomozmva T. Solvent effects on the g-value of Pi-t-butyl nitric oxide.- Bui.Chem.Soc.1. Jap.,1967,v.40,0.1111.

136. Kava n agh-ICaron C. ,Caron LI. ,BrissonN ,Dugas II. Evaluation of a spin-labeled inhibitors of AChE.- Can .J .Chera. ,1976, v.54,p.3545.

137. I'itz R.J. ,Bras\vcll L.L1. ,Ginsburg S. On the question: is AChE an allosteric protein?- Mol.Pharm.,1970,v.6,p.108.

138. Kivelson D. theory of ESR linewidths of free radicals.-J.Chem.Phys. ,I960 ,v.33 ,p. 1094.

139. Koshland P.E. Application of a theory of enzyme specificity to protein synthesis.-Proc.iTat .Acad.Sei.TISA ,195Q v.44,o.98.

140. Kosman P.J.JIsia J.C. ,Pictte L.H. ESR Probing of macro-molecules function.- Arch.Biochem.Biophys. ,1969,v.l33,p29.

141. Kosman D.J.,Piette L.H. ESR probing of macromolecules.-in: Frankoni G.(ed.) Magnetic resonances in biological research. H .-Y. L. - Paris, Gordon&Breach,1971 ,p.287.

142. Kosman B.J. Electron paramagnetic resonance probing of macromolecules.- J.Mol.Biol.,1972,v.67,p.247.

143. Kosman B.J.,Piette L.H. ESR-probing of macromolecules.-Arch.Biochem.Biophys.,1972,v.l49,p.452.

144. Krupka P.M. Chemical structure and functions of the active centre of AChE.- Biochemistry,1966;v.5?p.1988.

145. Kuznetsov A.;T. ,Vasserman A .1.1. ,Volkov A.U.,ICorst iT .'T. Determination of rotational correlation time of nytric orride radicals in a viscous medium.- Chem.Phys.Lett., 1971-v.12,p.103.

146. Kuznetsov A.i.,Ebert B.Lassman G.,Suskina W.I. Spinprobe studies of oC -GhTR. Studia Biophysica ,1973 , v.41 p.59.- 185

147. ICuznetsov A.;T.,Ebort B.,Lassman G., Shapiro A.B. Adsorption of small molecules to BSA studied by the spin probe method. Biochem.Biophys .Acta,1975 »v.379,p.139.

148. Lagercrantz C. J(arlsson H.,Setalca M. Quantitative studies on competitive ligand binding to BSA.-Eur.J .Biochem., 1978,v.83,p.197.

149. Lee J.C.,Harpst J.A. Purification and properties of BChE from horse serum.- Arch.Biochem.Biophys.,1971,v.145,p.55.

150. Lockridge 0. Substance P hydrolysis by human serum Cholinesterase . -J .Ileurochem. ,1982 ,v.39 ,p.l06.149. r.Iarini L.JL. ,Caplow M. Substrate-induced olv perturbations with ChTR.- J.Amer.Chem.Soc.,1971,v.93,p.5560.

151. I.Iarquis J.K. WebbS.D. Interactions of Ca+2 with purified and intact cell AChE of Electric eel.- Biochem.Pharm., 1974vv.23;p.3459.

152. Marquis J.K. Y/ebb G.J). The effect of Ca+2 and La+3 on the interaction of decamethonium with soluble AChH.- J.ileurochem. ,1976,v.27,p.329.

153. I.Iattews D.W. ,Sigler P.B. Three-dimensional structure of tosyl-oC -OhTR. 41 ature, 1967 ,v. 214, p. 652.

154. Havridis A. Tu 1 in slcy A. ,Leibman 1.1 .H . Assymetrical changes in the tertially structure of oC-Ch.TR with change in oH.-Biochemistry ,1974 ,v.l3 18 ,p .3661.

155. McConnell H.LI. Effect of anisotropic hyperfine interactions on oaramagnetic relaxation ia liquids.- J.Chem. Phys.,1956,v.25,p.709. 15V. McCoanell H.M. .Mc^arland B.G. Physics ana chemistry of spin labels.- Quat.Rev.Biophys.,1970,v.3,p.9l.

156. McMenamy R.II. Binding of indole analogues to HSA.- J.Biol. Chem.,1965,v.240,p.4235.

157. McMenamy H.II. Albumin binding sites.- in: Rosenoer V.I.I, et al. (eds.) Albumin structure,function and uses. Orf., °erg.pr.,1977,P.143.

158. Llorrisett J ,D. ,Broomfielo O.A. A new spin-label for the active site of serine enzymes.- J.Biol.Chem,,1969,v.244, 0.5758-5761.

159. Morrisett J.D. ,Broomfield C.A. Active site spin-labeledod-ChTR. J .Amer .Chem.Soc., 1971,93 ,TJ 26,p.7297-7304.

160. Morrisett J .1). ,Broomfield O.A. A comparative study of spin-labeled serine enzymes.- J.Biol.Chem.,iy72,v. 247 27,0.7224-/231.

161. Morrisett J.D. ,Pawrial H.J.,Gotto A.M. Bovine serum albumin.Study of the fatty acid and steroid binding sites using spin-labeled lipias.- J.Biol.Chem.,1975,v.250,1. U 7,0.2407-2494.

162. IT arayanan R.,Balaram P. Fluorescence and TT MR study of the binding of cholinergic fluorescence probes to horse serum Cholinesterase.- Int .J .Pept .Protein Res.,1981,v.17,p.170.

163. Parmon V JT . ,Zhidomirov G.M. Calculation of the ESR spectrum shape of the dynamic biradical system.- Mol. Phys. ,1974.v.27iT2,p.367.- 187

164. Patocka J. The influence of Al+3 on ChE ana AChE activity.- Acta Biol.IJea .Germ. ,1971 ,v.26,p.845.

165. Pavsilr: M.,Shara M. Motional freedom of the AChE-active site "bound spin label.-,T. Iaagn.Reson. ,1980^.41,0.207.

166. Pecar S. ,Stale A. Some -properties of spin-labeled esters of organophosphonic acid.-Earm.Vestnik,l978,v.29,p.23.

167. Pecar S.Shara M.,Stals A. .Zupancic A.0.,Sentjurc M. The effect of aliphatic chain length of various spinlabeled molecules bound to membrane AChE on the E3R spectra.- Studia Biophysica,1979,v.77,p.33.

168. Pecar S. , sent jure I.l.,Schara M., Stale A. , Zupancic A.O.2

169. Hi ana ascorbate ion influence.- Period .Biolog. ,1981, v. 83 111,p. 177-179.

170. Polgar L. On the mechanism of proton transfer in the catalysis by serine proteases.- J.Theor.Biol.,19711v.31,p.l65.

171. Putnam P.V. Structure and function.of the plasma proteiss.-iti: Heurath II. (ed.) The proteins. H.-Y. L.,Acad.pr., 19651V.3,p.l87.

172. Rehfela S.J.,Eatough D.J.,Plachv V.S. The binding isotherms for the interaction of 5-doxylstearic acid with BSA and USA. J.Lipid Res.,1978,v.l9,p.841.

173. Rosen G.LI. ,Rauclcman 'E.J. ,Hord VIM, Spin labeled TMA analogs as probes to study the anionic site of AChE. Gen. Pharm. , 1977,v.8 -H 5/6, p. 355.

174. Rosenberry T.L. Acetylcholinesterase.- in: Meister A.ed.) Advances in enzymology and related areas of molecular biology. 1975 v.43,p; 103-218.- 188

175. Rosenoer V.M. (ed.) Albumin structure,function and uses.-Oxf. , Perg. ?r. , 1977 , P. 152.

176. Ruf H.H.«Gratzl Li. Binding of nitroxide stearate spin labels to BSA. Biochem .Biophys .Acta ,1976,v.4-46 ,p.l34.

177. Sent jure Li. Stale A.,Zupancic A.O. Selective spin-labeling of serine in the catalytic center of AChE. Iugosl.'Physiol. Pharmacol.Acta,1975,v.11,p.3.

178. Sentjurc LI.,Stale A.,Supancic A.O. Oa the location of active serines of membrane AChE.- Biochem.Biophys.Acta, 1976,v.438,p.131.

179. Sent,-jure LI.,Stale A.,Zupancic A.0.,Shra LI. An ESR study on the influence of some physico-chemical factors on the conformation of a postsynaptic AChE.- ibid.,1976,v.429. .' 2, p. 421-428.

180. Shimshick E.J. ,I.IcCon>-.ell II.1.1. Rotational correlation time of spin-labeled ot-ChTR.- Biochem.Biophys,Res.Com., 1972,v.46,p.321.

181. Simpkins H. .Panko E. ,Tay S. The interaction of procaine with the nonmyelinated nerve axon.- Can.J.Biochem.,1972, v.50i:T 2,p.l74.

182. Sinha B.K. ,Ch'ignell C.F. Synthesis and biological activity of soin-labeled analogs of biotin ,hexa-,aecametho-nium,dichlorisoproterenol and propanolol.- J.Med.Chem.,1975,v.18,p.669.

183. Smallcombe S.II. ,Gammon K.L. »Richards II.J. Magnetic resonance studies of protein-small molecule interaction.

184. J.Amer.Chem.Soc.,1972,v.94,P.4581.

185. Soltys B.H.JIsia J.C. Fatty acid enhancement of HSA binding properties.- J.Biol.Chem.,197?,v.2524043.

186. Soltys B.J.JIsia J.C. HSA. On the relation of fatty acid and "bilirubin binding sites. J .BioI.Chem. ,1 ;78,v.253 ,t>. 3023

187. Stale 11. .Sentjure Li. ,Z,upancic A.O. On the location of active serines. Period.Biolog.,1975,v.77»p.141.

188. Stale A. , Sent jure I.I. Some data on the kinetics and HSR soectra of membrane AChE. Period.Biolog. ,1976 ,v.78,^.161.

189. Stale A.,?ecar S.,Sentjurc I.I.,Shara Li. ,Zupancic A.O.

190. ESR-studies of the active centre of membrane AChE.- Period. Biolog.,1978,v.80,o.101.

191. Stale A.,Z,uoancic A.O. ,Sent jure LI.,Shara M.,Pecar S. Llicrogeographic studies of AChE active site. Period. Biolog.,1980,v.82,p.369.

192. Stale A. , Sent jure Li. ,Pecar S.,Shara M. ,Zupancic A.O. Distance between active serine and enzyme surface of membrane AChE.- Period.Biolog.,1982,v.84,p9l.

193. Steitz r.A.,Henderson R. ,Blow D.M. Structure of crystalline chymotrypsin. J .I.iol.Biol. ,1969,v.46,p.337.

194. Stone J /!. ,Buckman T.,'Iordio P ,L. ,LicConnell H.LI. Spin labeled biomolecules. Proc .Hat .Acad .Sci.USA ,1965 ,v.54, lf4,r>1010-1017.

195. Walsh K.A. ,Wilcox P.E. Serine proteases. inrPerlmann G.E. (ed.)Methoas in enzymology.1970 ,v.lV,p#109.

196. Wee v.T.,Sinha BJC. Interaction of spin-labeled bisqua-temary ammonium ligands with AChE,- Mol .Pharm. ,1976, v.12,p.677.

197. Wei R.,Almirez R. Spinimunoassay of progesterone.- Bio-chem.Biophvs.Res.Com.,1975,v.62,p,510,

198. Werber H.Li. ,Greenzaid P. ChTR-catalysed reactions of phenylhippurate with alcohols.- Biochem.Biophys.Acta, 1973,v.293,p.208.

199. Wilcox P.E. Chymotrypsinogens chymotrypsyns. - in: Perlmann G.E. (ed.) Methods iu enzymology,1970,v.19,p.l09.

200. Wilson I.B.,Bergman P. Studies on Cholinesterase.-J .Biol.Chem., 1950, v. 185 ,p.4-79 ♦

201. Wood P.C.,YJood J. Pharmacologic and biochemical considerations of niSO.- Ann IT-Y Acad.Sei. ,1975,v.243,p.7-19.