Использование плацентарно-эмбрионально-маточного гидролизата для культивирования различных микроорганизмов

Галиуллина, Эльвира Равиловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Использование плацентарно-эмбрионально-маточного гидролизата для культивирования различных микроорганизмов
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Использование плацентарно-эмбрионально-маточного гидролизата для культивирования различных микроорганизмов"

На правах рукописи

ГАЛИУЛЛИНА ЭЛЬВИРА РАВИЛОВНА

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЛАЦЕНТАРНО-ЭМБРИОНАЛЬНО-МАТОЧНОГО ГИДРОЛИЗАТА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РАЗЛИЧНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ (НА ПРИМЕРЕ БРУЦЕЛЛ)

03.00.07 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2006

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животные- ВНИВИ» (г. Казань).

Научные руководители: Доктор биологических наук

Гильмутдинов Рустам Якубович Доктор ветеринарных наук Фомин Алексей Максимович

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук

Хисматуллииа Наиля Анваровна Заслуженный деятель науки РТ и РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Госманов Рауис Госманович

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский

институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (г. Москва)

Защита состоится « » р 91 2006 г. в <о ^часов на

заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГУ «Федеральный центр токсикологический и радиационной безопасности животных - ВНИВИ» (420075, Казань, Научный городок-2, ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр токсикологический и радиационной безопасности животных - ВНИВИ» (г. Казань).

Автореферат разослан »

2006 г.

Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат ветеринарных наук, л

ст. научный сотрудник Степанов

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Совершенствование мер борьбы с инфекционными заболеваниями напрямую связано с улучшением их микробиологической диагностики. Для этого необходимы эффективные питательные среды надлежащего качества, применение которых, наряду с решением соответствующих задач, обеспечит реальные предпосылки для моделирования процессов культивирования бактерий и создания алгоритмов производства медико-биологических препаратов. , . .

Номенклатура выпускаемых питательных сред постоянно расширяется, их качество улучшается, однако в целом, межведомственная проблема питательных сред продолжает оставаться актуальной, поскольку- научные и практические учреждения нашей страны все еще не в полной мере обеспечены качественными микробиологическими средами. Такое положение сложилось в результате несоответствия между возросшей значимостью питательных сред и знаниями, которыми располагает микробиологическая наука по вопросам их конструирования (Б.М. Раскин, Г.П. Калина, 1988 и др.). ....

Конструирование и производство питательных сред—одна из важнейших проблем биотехнологии вообще, и ветеринарной—медицинской микробиологии в частности (Г.А. Смирнова, 1991).

На практике чаще используют полусинтетические среды с добавлением в качестве источника азотистого питания гидролизатов (казеина, мяса, рыбопродуктов и др.) с известными показателями аминокислотного спектра и величиной аминного азота. В зависимости от питательной потребности микроорганизмов, уменьшая или увеличивая содержание гидролизата в среде, можно регулировать в ней уровень аминного азота в определенных пределах (ЛЛ. Телишевская, 2000 и др.).

Несмотря на многообразие существующих сред для культивирования и , индикации возбудителей инфекционных болезней животных и человека, проблема повышения их эффективности путем замены традиционно применяемых пищевых белков мяса, печени, рыбы и яиц, остается актуальной (А.З. Равилов и соавт., 1999). Дороговизна микробиологических сред на основе мясо-молочных и других пищевых продуктов, применяемых в производстве вакцин и других биологических препаратов, резко повышает себестоимость последних. Взамен мясных питательных сред нашли применение гидролизаты из растительного и непищевого сырья животного происхождения (И.Н. Бабушкин, 1964; К.Д. Геслаидзе, 1968; Л.А. Дерябина, 1971; Н.М. Алтунян, 1973; С.И. Цыганкова, Л.И. Трусова и др., 1982; А.Л. Винник, А.К. Варгина, 1986; А.П. Простяков, 1988; и др.).

Исследованиями, проводимыми на протяжении нескольких лет в ФГНУ

ВНИВИ (ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ»), обнаружены высокие ростовые свойства для ряда микроорганизмов различных систематических групп гидролизагной основы из плацентарно-эмбрионально-маточного материала стельных животных (ГПЭМ) и маточной ткани яловых коров (ГМЯК), являющихся отходами производства мясокомбинатов (Н.К. Мамлеева и др., 1993; Р.Я. Гильмутдинов и др., 1995; М.П. Торбина и др., 1996; Е.К. Акимов, 1999; Х.Н. Макаев и др., 2002; Н.И. Галиакберова, 2003).

Направление это перспективно. Сырье, используемое для изготовления ГПЭМ и ГМЯК, в связи с резким подорожанием мясных продуктов в 20-25 раз дешевле печени и мяса, используемых в традиционных микробиологических средах, а расход его на приготовление среды во много раз меньше.

Цели и задачи исследования. Целью исследований явилась разработка новых основ бактериологических питательных сред из дешевых гидролизагов - отходов производства мясокомбинатов для культивирования бруцелл и других микроорганизмов. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Усовершенствовать технологию изготовления гидролизатов из плаценты, мышц плодов, матки стельных животных и матки яловых коров (установить оптимальный температурный режим и сроки гидролиза).

2. Изыскать оптимальные варианты питательной среды для культивирования бруцелл на основе ГПЭМ и ГМЯК.

3. Исследовать культурально-биохимические, морфологические и тинкгориальные свойства бруцелл при длительном культивировании на жидких (бульонных) и плотных (агаровых) питательных средах с основой из ГПЭМ и ГМЯК.

4. Изучить ростовые свойства ГПЭМ коров, свиней, лошадей, овец и ГМЯК для микроорганизмов, относящихся к разным систематическим группам (микобактерий, микоплазмы и др.).

Научная новизна. В экспериментах с использованием широкого спектра видов и штаммов бруцелл доказано, что, независимо от видовых особенностей исходных тканей, гидролизаты из плацентарно-эмбрионально-маточного материала крупного рогатого скота, свиней и лошадей, как в отдельности, так и в смеси, являются хорошей ростстимулирующей основой питательных сред для' культивирования бруцелл и других микроорганизмов. Показана возможность использования изученных гидролизатов в качестве полноценного заменителя традиционных основ микробиологических сред.

Практическая ценность. Широкое внедрение в микробиологическую практику новой эффективной питательной среды для бруцелл с использованием дешевого, доступного белоксодержащего сырья из отходов производства мясокомбината, ранее для этих целей не используемого, позволит значительно удешевить производство бактериальных вакцин и внесет значительный вклад

в область микробиологических исследований.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Всероссийских научно-производственных конференциях по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, -2002; 2004; 2006);, Международной конференции по научным основам обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний (Казань, 2005); Международной практической конференции по профилактике, диагностике и лечению инфекционных болезней общих для людей и животных (Ульяновск, 2006); Всероссийской научно-практической конференции по перспективам агропромышленного производства регионов России в условиях реализации приоритетного национального проекта «Развитие АПК» (Уфа, 2006). Основные положения, выносимые на защиту:

- биохимические показатели ГПЭМ и ГМЯК (содержание аминокислот, аминного азота, триптофана, степень расщепления белков, выраженная в соотношении аминного и общего азота и др.);

- варианты экспериментальных сред для бруцелл на основе ГПЭМ и ГМЯК;

- данные протеолитической активности поджелудочной железы разных видов животных;

- результаты длительного культивирования бруцелл на бульонных и агаровых средах с основой из ГПЭМ и ГМЯК;

- применение сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для культивирования различных видов микроорганизмов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ. Объем и структура работы. Диссертация состоит из разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, заключение, практические предложения. Работа изложена на 123 страницах компьютерного текста, содержит 46 таблиц и 5 рисунков. Список использованной литературы включает 232 библиографических источника, из них 32 иностранных автора.

2. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в лаборатории культур клеток, питательных сред и гибридомной техники совместно с лабораторией контроля и индикации возбудителей бактерийных инфекций Федерального государственного учреждения «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных - ВНИВИ» в течение 2000-2006 года по теме: «Разработка лабораторных технологий изготовления живых вакцин против бруцеллеза крупного рогатого скота и изучение их эффективности' в" лабораторных и производственных условиях», № гос. регистрации

01.20.0202602. В исследованиях использовали в качестве основы питательных сред для культивирования и индикации возбудителя бруцеллеза плацентарно-эмбрионально-маточный гидролизат и гидролизат матки яловых коров. Гидролизаты готовили из матки, плаценты и мышц плодов разных видов животных или тканей матки яловых коров, полученных в ОАО «Казанский мясокомбинат» с соблюдением максимальной чистоты. Ферментативный гидролиз осуществляли по Хоттингеру из говяжьего мяса согласно методических рекомендаций (Л.П. Дьяконов, 1986). Одну партию гидролизагов подвергли лиофильному высушиванию в лаборатории контроля и стандартизации биопрепаратов ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ».

Сравнительное изучение аминокислотного состава гидролизагов методом хроматографии (тонкослойной и ионообменной) было проведено совместно с к.б.н. К.С. Хаертыновым в Центре по профилактике и борьбе со СПИДом при МЗ РТ (г. Казань).

Физико-химический (определение содержания общего азота, индола, массовой доли аминного азота, пептидов и триптофана) и биологический контроль (оценка ростовых свойств сред) каждой партии основного гидролизата производили согласно методических рекомендаций (А.П. Простяков и др. 1983).

Контрольной служила общепринятая бульонная печеночно-пептонная глюкозо-глицериновая среда. Для приготовления плотных сред дополнительно вводился агар-агар в количестве 2 %.

Качество сред, приготовленных из гидролизатов, оценивали по следующим показателям: плотные - по среднему количеству колоний, выросших на чашках Петри за указанное время; жидкие — по плотности роста на фотоэлекгроколориметре КФК—ХЛ 4.2 при зеленом светофильтре и рабочей длине кювет 3 мм.

В работе использовали следующие штаммы бруцелл из коллекции лаборатории - музея штаммов возбудителей ООБ ФГУ «ФЦТРБ- ВНИВИ»:

1. В. abortus 19, высеянный из сухой вакцины, сер. 840 в 1960 году, штамм вакцинный, находится в S - форме, S - агглютинабилен.

2. В. abortus 82, штамм, полученный из крови абортированного плода коровы, отрицательно реагировавшей на бруцеллез. Установлено, что данная культура является стабильной, слабовирулентной и находится в диссоциированной SR - форме. Штамм агглютинабилен по отношению к S- и R- сывороткам.

3. В. abortus 82-ПЧ, штамм, полученный путем селекции в ВНИВИ г. Казани заведующим лабораторией бактерийных инфекций профессором K.M. Салмаковым и доктором ветеринарных наук Г.А. Белозеровой в 1979 г. Культурально - биохимические свойства типичные, растет на средах с

эритритолом (1 мг/мл) и тионином, и не растет на средах с пенициллином,, Штамм слабоагглютиногенный, положительно реагирует в РА с S - и R - сыворотками.

4. В. abortus 544 — штамм референтный, биотип 1, поступил, в лабораторию-музей штаммов возбудителей ООБ ВНИВИ из Института,, эпидемиологии и микробиологии (ИЭМ) им. Н.Ф. Гамалеи 22 февраля 1977 года. Является вирулентным для морских свинок и крупного рогатого скота, находится в S — форме, аплютинабилен, агглютиногенен.

5. В. suis 1330 — штамм референтный, биотип 1, поступил в лабораторию-музей штаммов возбудителей ООБ ВНИВИ из ВИЭВ (г. Москва) 21 октября 1977 года, является слабовирулентным для лабораторных животных и находится в S — форме.

6. В. melitensis 16-М — штамм референтный, поступил в лабораторию-музей штаммов возбудителей ООБ из ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи 3 июня 1971 года (получен из коллекции культур центральной ветеринарной лаборатории Вейбриджа, Англия). Культура находится в S — форме, обладает типичными для данного вида бруцелл культурально — биохимическими свойствами.

Культуры хранили на 11111 ГА, с pH 6,6, в закрытых резиновыми пробками пробирках при температуре 4-5°С в холодильнике.

Формы колоний бруцелл, выращенных на экспериментальных средах с основой из ГПЭМ И ГМЯК, определяли в чашках Петри в течение 72 часов. Для этого колонии просматривали под микроскопом при прямопроходящем и косом освещениях, а также в затемненном поле. Колонии микробов дифференцировали также методом окраски по Уайту-Вилсону. Пересевы штаммов проводили один раз в 2-3 месяца.

Культуры бруцелл дифференцировали по следующим показателям: потребности в углекислоте, образованию сероводорода, уреазной активности на среде Кристенсена, а также бактериостатическим методом (по редуцирующей активности в отношении красок: основного фуксина, тионина и сафранина). Каталазную активность бруцелл исследовали перманганатным способом (М.А. Сидоров и др., 1995). Способность микробов разлагать перекись водорода оценивали по наличию пузырьков газа. Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл изучали на препаратах, окрашенных методами Козловского и Грама.,. Состояние культур бруцелл определяли общепринятыми тестами: реакцией агглютинации на стекле с использованием гипериммунных S-, SR-, и R- антисывороток, акрифлавиновой агглютинацией, термоагглютинацией и солевой агглютинацией (в 1; 2,5 и 5% растворах хлористого натрия). Безвредность вакцины из штамма 82—ПЧ, полученной на среде с ГПЭМ, проверяли на белых мышах. В качестве контроля использовали вакцину, полученную на 111 И ТА. Белых мышей прививали в дозе 3 млрд. клеток /мл по

3 головы на каждую культуру. Убивали мышей через 25 суток. Инфицированность животных определяли серологически с помощью реакций агглютинации (РА) и связывания комплемента (РСК).

У вакцин, полученных из штамма 82-ПЧ на экспериментальной и контрольной средах, проверяли вирулентные свойства. Минимальную инфицирующую дозу обеих серий вакцины исследовали на 60 морских свинках. Для этого использовали дозы: 10, 100, 1000, 10 тыс., 100 тыс., 1 млн., 10 млн., 100 млн., 1 млрд., 3 млрд. микробных клеток в 1 мл. На исследование каждой дозы использовали по 3 животных, которым вводили вакцину в объеме 1 мл подкожно.

, Кроме бруцелл в экспериментах использовали 3 вида микоплазм (М. bovis mastidis; М. granularum 379; М. laidlawii) и 4 вида микобактерий (БЦЖ, М. bovis; М. scrofulaceum; М. intracellulare; М. fortuitum), а также Е. coli шт. 0126, Staphylococcus aureus шт. 209 Р, Micrococcus lysodeicticus, исследования с которыми проведены совместно с канд. биол. наук, ст. науч. сотрудниками ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» P.M. Ахмадеевым и Г.Н. Спиридоновым.

3. Результаты исследований 3.1. Биохимический состав различных гидролизатов

При изучении биохимических показателей ГПЭМ и ГПМ (гидролизат плацентарно-маточный от крупного рогатого скота) обнаружено, что в ГПЭМ содержание аминного азота и пептидов достоверно выше (Р<0,05), чем в ГПМ (табл.1).

Анализ экспериментальных данных, представленных в таблице и характеризующих скорость и глубину гидролиза плацентарно-эмбрионально-маточного материала, свидетельствовал, что при осуществлении этого процесса в температурном режиме 42-45°С (в отличие от 37°С, согласно ранее разработанного регламента) перечисленные показатели достигали своего максимального значения на 3-4 сутки и сохранялись на этом уровне до его окончания (7 сут.). При этом наблюдался максимальный выход гидролизата с хорошими химическими показателями.

В процессе гидролиза плацентарно-эмбрионально-маточного материала нами в сравнительном аспекте исследована ферментативная активность панкреатической железы крупного рогатого скота и свиней (по инструкции: 150 г железы на 1 кг фарша тканей), а также трипсина фирмы «Difco» (1% к массе тканей). Обнаружено, что при использовании панкреатической железы гидролиз протекает более активно, особенно эффективна свиная железа. Различия по величине аминного азота в динамике гидролиза статистически достоверны (Р <0,05).

Таблица 1 — Динамика изменения биохимического состава ГПЭМ, ГМЯК и ГПМ в процессе гидролиза

Ввд гидролизата Продолжительность щцролиза, суг. Биохимические показатели

аминныйаэот, мп% ПМШЩЬ1,% тритофан,%

ГПЭМ 1 382+13 2,86±0Д1 137+1,2

2 399+2,7 239+03 137+1,1

3 441+6,5 2,17+0,22 174+8,1

4 440+6,2 2,1+0,1 181+12

6 438+4,2 2,15+0,1 171+8,2

7 445+5,4 2,03+0,12 171+5,1

ГМЯК 1 430+43 3,01+0,2 138+7,2

2 442+2,1 2,75+0,23 140+1,1

3 460+1,7 2,70+0,1 160+6^

4 480+4,4 2,60+0,2 158+1,1

6 470+53 235+0,1 163+8,1

7 490Ь63 2,5+0,22 167+13

ГПМ 1 304+3,1 1,86+0,24 137+2,1

2 323+1,9 1,77+0,1 142+9,2

3 357+2^ 1,68+0,05 186+4,2

4 354+1,8 1,7+0,05 181+8,4

6 368+1,6 1,71+0,08 157±и

7 373+1,7 1,6+0,16 164+1,2

Как указывалось выше, ГПЭМ включает в себя несколько компонентов: ткани матки, плаценты (80-90%) и мышцы плода (10-20%). Сравнительное изучение биохимических свойств отдельных компонентов ГПЭМ, а также гидролизата маточной ткани яловых коров, показало, что по уровню аминного азота, триптофана и пептидов гидролизаты плацентарной ткани и мышц плода были сопоставимы в отличие от ГМЯК, выделявшегося значительно более высоким содержанием аминного азота и пептидов. По аминокислотному составу ГПМ не уступает ГПЭМ и по уровню некоторых аминокислот значительно богаче импортного гидролизата лактальбумина (табл. 2). Содержание в ГПЭМ таких аминокислот как треонин, серин, глутаминовая кислота — в 2 раза превышало их количество в гидролизате лактальбумина; в сравнении с гидролизатом мышц, уровень таких, ведущих в метаболизме бруцелл, аминокислот как глутаминовая кислота, серин, апанин и фенилалании совпадал.

Таблица 2 — Аминокислотный состав (мг %) гидролизатов некоторых белковых препаратов

Виды аминокислот Виды гидролизатов

ГПЭМ ГПМ ФГМ ТПС ГЛА

Лизин 0,047 0,048 0,067 0,06 0,06

Гистидин 0,018 - 0,04 0,016 0,02

Аргинин 0,033 0,055 0,049 0,05 0,024

Аспарагиновая кислота 0,046 0,033 0,031 0,037 0,004

Треонин 0,022 0,023 0,022 0,024 0,013

Серии 0,028 0,031 0,03 0,033 0,016

Глутаминовая кислота 0,053 0,047 0,062 0,077 0,027

Пролин 0,032 0,054 0,017 0,066 -

Глицин - - 0,016 - 0,001

Алании 0,027 0,037 0,024 0,028 0,012

Валин 0,035 0,039 0,034 0,037 0,036

Изолейцин 0,037 0,032 0,034 0,037 0,04

Лейцин 0,04 0,043 0,052 0,046 0,084

Тирозин 0,016 0,017 0,018 0,015 -

Фенил аланин 0,03 0,05 0,03 0,02 0,03

Метионин 0,014 0,01 0,02 0,011 0,02

Примечания: ФГМ - ферментативный гидролизат мышц; ТПС - триптический перевар сердца

3.2. Оценка эффективности использования среды с ГПЭМ для культивирования бруцелл

Как уже отмечалось, для культивирования бруцелл, в частности, с целью получения противобруцеллезных вакцин используют различные питательные среды. Основу их составляют белки таких пищевых продуктов как печень и мясо, расход которых при крупномасштабных производствах вакцин, естественно, большой.

С целью оптимизации состава среды для культивирования бруцелл, нами испытано несколько вариантов питательных сред на основе ГПЭМ (табл.3), отличающихся по содержанию аминного азота (90-130-180 мг/%), которое регулировали дополнительным введением в среду пептона или большего количества ГПЭМ.

Таблица 3 - Варианты экспериментальных сред на основе ГПЭМ для культивирования бруцелл

Компоненты среды Варианты сред, %

1 1 2 3 I 4

ГПЭМ 1,4 2,0

Пептон - 1 1,0 - 1 1,0

Хлористый натрий, хч 0,5

Глюкоза, хч 1,0

Глицерин 3,0......

Агар-агар -V 2,0

Диет, вода, мл до 100

Аминный азот, мг % 90 | 130 | 180

Примечание: pH среды 7,2

Резкого отличия по «урожайности» испытанных штаммов В. abortus 82, 544, и В. suis 1330 на разных средах не обнаружено (табл. 4). Вариант 1 по ростовым свойствам для бруцелл практически не отличался от обогащенной среды вариантов №№ 2, 3 и 4, поэтому в дальнейших исследованиях использовался вариант №1 среды на основе ГПЭМ. На печеночно-пептонном глюкозо-глицериновом агаре (контроль) рост колоний бруцелл задерживался на 1 — 2 суток.

Таблица 4 - Количество колоний бруцелл (при разведении 100 м. к./мл), выросших на разных вариантах сред с основой из ГПЭМ

Виды/штаммы бруцелл Варианты сред

1 2 3 4 5(контроль)

В. abortus 82 54±3,1 47±4,2 50±5,3 52±2,2 45±2,4

В. abortus 544 46±3,3 49±3,1 45±3,1 42±3,4 39±2,2

В. suis 1330 41±6,1 36±2,4 38±2,4 42±3,2 36±3,3

Результаты биохимических исследований свидетельствовали о том, что состав гидролизатов из плацентарно—эмбрионально — маточных тканей коров, свиней, лошадей, овец по величинам аминного азота и пептидов отличался, что, однако, не отразилось на ростовых свойствах сред. Для поддержания в питательной среде на основе ГПЭМ из тканей свиней оптимального уровня

аминного азота, равного 90 мг/%, в нее вводили несколько больше основного гидролизата.

Об эффективности среды с гидролизатами тканей разных видов животных судили по ее ростовым свойствам для различных штаммов бруцелл. Выявлена тенденция к лучшему росту (количество выросших колоний выше) В. abortus 544; В. suis 1330; В. melitensis 16-М. Наряду с этим, на гидролизатных средах регистрировался и более ранний рост (на 1-2 суток) колоний бруцелл, а по величине колонии были крупнее.

Результаты изучения свойств исходных культур бруцелл различных штаммов и их репродуцируемых популяций при длительном пассировании на плотных - агаровых (50 пассажей) и жидких - бульонных (30 пассажей) экспериментальной и контрольной средах свидетельствуют о сопоставимости контрольных сред и сред на основе ГПЭМ, которые в большинстве случаев превосходили традиционную среду для бруцелл. Колонии бруцелл, выросшие на средах из ГПЭМ, были крупнее и рост их начинался в более ранние сроки в сравнении с контрольной средой, причем морфология и тинкториальные свойства бруцелл оставались типичными.

Многократное пассирование на плотных гидролизатных средах не отражалось на биохимических характеристиках бруцелл.

В отношении ростовых свойств экспериментальной среды на основе ГПЭМ для культивирования вакцинных штаммов бруцелл при длительном их пассировании на жидких средах, следует отметить следующее. После 5-ти кратного культивирования и последующего пересева на плотные питательные среды (табл. 5) видимые колонии бруцелл обнаруживались на 1-2 суток раньше в сравнении с контрольной средой 11111 ГБ. При подсчете, на 5-е сутки роста, количество колоний на среде из ГПЭМ несколько превышало их число в контроле, колонии штаммов 82 и 19 были несколько крупнее. Тенденция к лучшему росту на экспериментальной среде из ГПЭМ сохранялась также после 15 и 30 пассажей.

Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл, указанных штаммов, оставались типичными для конкретного вида. Длительное культивирование на жидких средах не отражалось на их биохимической характеристике: все культуры обладали каталазной и уреазной активностью, реакция сероводородобразования была положительной во всех случаях.

Таблица 5 - Количество колоний вакцинных штаммов В. abortus после 5-ти кратного пассирования на бульонных средах с ГПЭМ и последующего пересева на плотные среды

Штаммы R abortus Иэсодная культура Пасафование на среде

1М1Б (контроль) с ГПЭМ (эксперимент)

Количество вьросиих колоний (разведение культуры Ю"8)

на среде ППГГА (контроль) m среде с ITEM на среде ППГТА (контроль) на среде с ГПЭМ на среде ППГГА (контроль) на среде с ГПЭМ

19 17±5,7 19147 28НЗ 3613,3 34*2,3 40±22

82 20±U 23±U 29±23 34dt2,3 30*3,7 32±5,4

82-ПЧ 22£1,4 26±2,1 39±2,7 45i%2 40Ы,3 47±1,0

3.3. Оценка эффективности использования среды с ГМЯК для культивирования бруцелл

Матка яловых коров, также как и плацентарно-эмбрионально-маточный материал стельных животных, является дешевым сырьем для получения ферментативных гидролизагов—белковой основы питательных сред. В качестве дополнительных ростовых факторов в питательную среду на основе ГМЯК вводили сыворотку крови крупного рогатого скота в концентрациях 1 - 3 - 5% и экстракт кормовых дрожжей в концентрациях 0,5 - 1 - 2 % . Испытания проводили на жидких и Плотных средах.

Исследованиями по изысканию оптимальной среды для выращивания бруцелл обнаружены хорошие ростовые свойства питательной среды с основой из ГМЯК. Ростобеспечивающая способность среды с ГМЯК по показателям оптической плотности была сопоставимой со средой 111111 Б, а в случае со штаммом 19 даже превосходила. Ростовые факторы, введенные в среду, не повышали ее эффективность. Морфология и тинкториальные свойства бруцелл, выращенных на средах с ГМЯК, оставались типичными.

Генетическая стабильность бруцелл при многократном культивировании на среде с ГМЯК испытана с использованием следующих штаммов бруцелл: а) вакцинные штаммы В. abortus 19,82,82-ПЧ; б) референтные штаммы В. suis 1330; В. melitensis 16-М. После 5-ти кратного пассирования бруцелл ростобеспечивающая способность экспериментальной среды с ГМЯК по показателям оптической плотности была сопоставимой со средой ППГТБ, за исключением, как отмечалось выше, штамма В. abortus 19, который более

интенсивно размножался на экспериментальной среде. Оценка стабильности бруцелл после 15-ти кратного культивирования на экспериментальной и контрольной средах была проведена в отношении только вакцинных штаммов с испытанием гидролизата матки яловых коров 2-х серий изготовления. Различий между опытом и контролем не обнаружено. При многократном пассировании на плотных гидролизатных средах из ГМЯК (до 30-ти пассажей) у В. abortus штамма 82 отмечались лучшие показатели роста по количеству выросших колоний. Рост других штаммов В. abortus был сопоставим на обеих средах. Колонии В. suis 1330; В. melitensis 16-М отличались более крупной величиной. Сроки обнаружения видимых колоний, их форма, цвет, консистенция, морфология бруцелл, выращенных на разных средах были сопоставимы.

Остальные показатели (рост бруцелл в присутствии красок и пенициллина, окрашиваемость колоний по Уайту-Вилсону, агглютинабельность в S- и R- сыворотках) в динамике 10-ти кратного пассирования не отличались. Биохимические характеристики бруцелл (сероводородообразующая способность, каталазная и уреазная активности) после 5-ти и 10-ти кратных пассажей на экспериментальной и контрольной средах также были сопоставимы.

При изготовлении вакцин из штамма 82-ПЧ (всего 5 серий) на экспериментальной среде с ГПЭМ отмечались хороший рост и характерная морфология колоний бруцелл. Концентрация бруцелл во взвеси, полученной с этой среды, находилась на уровне таковой с 111111 А, а в двух случаях даже превышала и была в пределах 180-200 млрд./мл (взвесь, полученная с 11111 ГА 160-180 млрд./мл).

При определении безвредности вакцины из штамма 82-ПЧ, полученной на среде с ГПЭМ, все животные реагировали идентично: в РА в титре 1:20 — 1:40 и не реагировали - в РСК. Индекс инфицированное™ составил 30 %.

У экспериментальной и контрольной серий вакцины из штамма 82-ПЧ проверены вирулентные свойства. Животных убивали через 26 - 27 суток после прививки.

Установлена идентичность показателей у животных обеих групп. Минимальная инфицирующая доза определена для обеих групп и составила 100 тыс; микробных клеток. На эту дозу реагировали все морские свинки. Индекс инфицированности у них составил 20-60 %. Кроме того, в контрольной группе на дозу 10 тыс. микробных клеток получена одна культура из пахового (регионального) лимфоузла. Взвесь культуры, полученной с ГПЭМ, использована для изготовления вакцины, с помощью которой успешно иммунизирован крупный рогатый скот в производственных условиях.

Вакцина, полученная на среде с ГПЭМ, по физическим, морфологическим

и вирулентным свойствам не отличалась от контрольной и была безвредна для белых мышей.

3.4. Ростовые свойства сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для микроорганизмов различных таксономических групп

При испытании эффективности питательных сред из ГПЭМ и ГМЯК для размножения бактерий относящихся к другим, чем бруцеллы, таксономическим группам, подбирались среды со сбалансированной смесью необходимых питательных компонентов в концентрациях обеспечивающих наилучший рост микроорганизмов. Для изучения эффективности размножения микоплазм на рассматриваемых средах, 3 тест-культуры выращивали на жидких средах с последующим высевом на плотные среды трех разных разведений кулыуры (после титрования) и подсчетом колоний. Показано, что жидкие и плотные среды, приготовленные с использованием ГПЭМ разных видов животных и ГМЯК, по ростовым свойствам для микоплазм не отличались и были сопоставимы с общепринятой средой из триптического перевара сердца (табл.6).

" " Таблица 6 - Ростовые свойства для микоплазм (количество КОЕ/мл) сред на основе ГПЭМ разных видов животных

Питательньге среды

Виды тле ГПЭМ

микоплазм (контроль) (овец) (лошадей) (коров и свиней) (свиней)

М.Ьо\15 5х109 8х109 ЗхЮ9 7х109 2 х Ю9

та^сИв 7х109 10 х 109 5х109 ЮхЮ9

М £гапи1агит 379 4х109 6х109 ЗхЮ9 2х109 ЗхЮ9 ЗхЮ9 4хЮ9 9х Ю9

М Ыс11а\уи 5х109 6х109 12 х 109 15 х 109 19 х 109 13х 109 18 х 109 ЗхЮ9

Изучение культурально-биохимических свойств микобактерий туберкулеза и атипичных микобактерий при субкультивировании на экспериментальной среде с ГПЭМ показало, что рост культур микобактерий бычьего вида и вакцинного штамма БЦЖ на контрольных средах (Левенштейна-Йенсена и Финна) характеризовался появлением влажных, выпуклых, средней величины колоний, располагавшихся по всей поверхности пйтательной среды.

Колонии этих же микобактерий, выросшие на средах с основой из ГПЭМ, были сухими, морщинистыми, крошковатыми, больших размеров. При пересеве культур с экспериментальных сред на контрольные (на основе яиц и мяса) морфология колоний восстанавливалась - они становились такими же влажными, выпуклыми, средних размеров, как исходные, и наоборот. Культурально-биохимические свойства атипичных микобактерий (М. scrofulaceum, М. intracellular, М. fortuitum) при выращивании на экспериментальных средах были стабильными.

Установлено, что количество колоний Е. coli шт. 0126 выросших на мясо-пептонном агаре (контроль) и гидролизатных средах, было сопоставимо (р<0,05). Ростообеспечивающая способность (по количеству колоний) сред на основе гидролизатов в отношении тест-культур St. aureus шт. 209 Р и М. lysodeicticus превышала таковую на мясо-пептонном агаре (р<0,05). Колонии Е. coli и St. aureus на средах из ГПЭМ овец, лошадей и ГМЯК были крупнее.

Выводы

1. Показана возможность использования основы из ГПЭМ в средах для выращивания бруцелл и других микроорганизмов в качестве альтернативы основам из мяса и печени, применяемым в традиционных рецептурах при наработке бакмассы с целью изготовлении вакцин. Диссоциация бруцелл при этом отсутствовала.

2 Аминокислотный состав ГПЭМ коров сопоставим с общеизвестными гидролизатными основами бактериологических сред, такими кактриптический перевар сердца (ТПС), гидролизат лактальбумина (ГЛА) и ферментативный гидролйзат мышц (ФГМ), а по содержанию треонина, серина, тирозина, глутаминовой и аспарагиновой кислот значительно (в среднем в 1,5 раза) превосходит ГЛА.

3. Основные биохимические показатели (содержание аминного азота, полипептидов и триптофана) ГПЭМ коров и лошадей сопоставимы и превосходят таюовые ГПЭМ свиней и овец на 20-60 %.

4. Комбинация ГПЭМ разных видов животных, отличающихся ростовыми свойствами, изменяет последние пропорционально соотношению соответствующих показателей использованных гидролизатов.

5. Оптимальными для осуществления гидролиза плацентарно-эмбрионально-маточного материала являются температура 42-45 °С и длительность 3-4 суток.

6. Оптимальным для выращивания бруцелл является следующий компонентный состав среды с основой из ГПЭМ (или ГМЯК): ГПЭМ — от 1,4 % (ГМЯК - 1,3%); хлористый натрий — 0,5 %; глюкоза - 1 %; глицерин — 3 %;

агар-агар — 2% и дистиллированная вода — до 100 мл (аминный азот — 90-180 мг%). Длительное культивирование различных видов и штаммов бруцелл на среде с ГПЭМ не влияет на их морфологические, тинкториальные и культурально-биохимические свойства. Биохимические добавки, в частности, сыворотка крупного рогатого скота и экстракт кормовых дрожжей при использовании ГМЯК в качестве основы культуральной среды не улучшали ее ростовых свойств.

7. Ростовые свойства (количество выросших колоний, длительность роста) среды с ГПЭМ при культивировании бруцелл превосходили таковые на ill ill А

- рост колоний наблюдался на 1-2 суток раньше и колонии были крупнее.

8. Замена в средах для микоплазм (ТПС), микобактерий (Левенштейна -Йенсена, Финна), а также Е. coli, М. lysodeicticus и St. aureus (МПА) гидролизатов сердца и мяса животных, куриных яиц, гидролизатами плацентарно-эмбрионально-маточного материала не снижает ростовых свойств соответствующих культуральных сред и не отражается на культурально-биохимических свойствах перечисленных микроорганизмов.

Практические предложения

Результаты выполненных исследований используются:

- в учебном процессе в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана.

- в производственном процессе, при изготовлении питательных сред в научных подразделениях Федерального государственного учреждения «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных - ВНИВИ».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Галиуллина, Э.Р. Биохимический состав ГПЭМ в зависимости от условий гидролиза и соотношения компонентов плацентарно-эмбрионально-маточного материала / Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов // Матер. Всерос. научно-практич. конф. по акт. проблемам ветеринарии и зоотехнии. — Казань. — 2002. -Ч. 1.- С. 35-36.

2. Галиуллина, Э.Р. Аминокислотный состав различных гидролизатов, используемых для культивирования бруцелл / Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов, К.С. Хаертынов // Матер. Всерос. научно-практич. конф. по акт. проблемам Агропром. комплекса. — Казань. - 2004. - Ч. 1. - С. 25-26.

3. Галиуллина, Э.Р. Ростовые свойства ГПЭМ для различных штаммов бруцелл / Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов, А.М. Фомин // Мапгер. Всерос. научно-практич. конф. по акт. проблемам Агропром. комплекса. - Казань. - 2004.

- Ч. 1.- С. 26-27.

4. Галиуллина, Э.Р. Культуральные особенности сред на основе ГМЯК при выращивании различных штаммов - бруцелл / Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов, A.M. Фомин // Матер. Междунар. симпозиума «Научные основы обеспечения животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний», 28-30 ноября, Казань, 2005. -4.2.-С. 89-92.

5. Галиуллина, Э.Р. Ростовые характеристики питательных сред на основе гидролизата матки яловых коров для различных штаммов бруцелл/ Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов, А.М. Фомин // Междунар. науч но-практи ч. конф. по профилактике и лечению инфекц. болезней, общих для людей и ж-х.

- Ульяновск. - 2006. - С. 46-49.

6. Галиуллина, Э.Р. Возможности использования сред на основе гидролизатов ГПЭМ и ГМЯК для культивирования микоплазм и микобактерий/ Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов // Всерос. научно-практич. конф. по перспективам агропромышленного произ-ва регионов России в условиях реализации приоритетного национального проекта «Развитие АПК». — Уфа. -2006.-С. 30-31.

7. Галиуллина, Э.Р. Адекватность состава ГПЭМ пластической составляющей метаболизма бруцелл / Э.Р. Галиуллина, Р.Я. Гильмутдинов // Маггер. Всерос. научно-практич. конф. по акт. проблемам Агропром. комплекса.—Казань. - 2006. -С. 23-24.

8. Галиуллина, Э.Р. Гидролизат плацентарно-эмбрионально-маточного материала животных — биологический активный препарат / Э.Р. Галиуллина, Т.В. Гарипов, Р.Я. Гильмутдинов // Ученые записки КГАВМ. «Особенности физиологических функций животных в связи с возрастом, составом рациона, продуктивностью, экологией и этологией». - Казань. - 2006. - т. 185. - С. 34-38.

На правах рукописи

ГАЛИУЛЛИНА ЭЛЬВИРА РАВИЛОВНА

03.00.07 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2006

Подписано в печать 10.11.2006 Сдано в набор 14.11.2006 Заказ № 29

Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman Усл. печ. л. 1,2. Бумага офсетная. Способ печати - оперативный Тираж 100 экз.

Отпечатано с оригинал-макета в типографии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Галиуллина, Эльвира Равиловна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Отходы мясокомбинатов - перспективное непищевое сырье для микробиологических сред

1.1.1. Биохимический состав матки, плаценты и эмбрионов (пло- 10 дов)

1.1.2. Использование плацентарно - эмбрионально - маточного материала в микробиологических средах

1.2 Бруцеллы

1.2.1. Биохимические и культурально-морфологические свойства бруцелл

1.2.2. Питательные среды для бруцелл

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Биохимический состав различных гидролизатов

2.2.2. Оценка эффективности использования среды с ГПЭМ для 47 культивирования бруцелл

2.2.2.1. Варианты питательной среды для бруцелл на основе ГПЭМ

2.2.2.2. Изучение культивирования бруцелл на средах с ГПЭМ

2.2.2.2.1. Использование агаровой среды на основе ГПЭМ

2.2.2.2.2. Использование бульонной среды на основе ГПЭМ

2.2.3. Оценка эффективности использования среды с ГМЯК для культивирования бруцелл

2.2.3.1. Варианты питательных сред на основе ГМЯК

2.2.3.2. Изучение культивирования бруцелл на средах с ГМЯК

2.2.3.2.1. Использование агаровой среды на основе ГМЯК

2.2.3.2.2. Использование бульонной среды на основе ГМЯК 79 2.2.4. Возможности применения сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для культивирования других микроорганизмов

2.2.4.1. Ростовые свойства сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для микоплазм и микобактерий

2 2 4 2.

Ростовые свойства сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для Е. coli,

М. lysodeicticus и St. aureus

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование плацентарно-эмбрионально-маточного гидролизата для культивирования различных микроорганизмов"

Номенклатура выпускаемых питательных сред постоянно расширяется, их качество улучшается. Однако в целом межведомственная проблема питательных сред продолжает оставаться актуальной, поскольку научные и практические учреждения нашей страны все еще не в полной мере обеспечены качественными микробиологическими средами. Такое положение сложилось в результате несоответствия между возросшей значимостью питательных сред и знаниями, которыми располагает микробиологическая наука по вопросам их конструирования (Б.М. Раскин, Г.П. Калина, 1988 и др.).

Конструирование и производство питательных сред - одна из важнейших проблем биотехнологии вообще, и ветеринарной - медицинской микробиологии в частности (Г.А. Смирнова, 1991).

Общеизвестен слабый рост ряда микроорганизмов, используемых в производстве различных бактериальных препаратов, на синтетических питательных средах с источником азота в виде аммонийных солей ввиду недостаточности так называемых ростовых веществ (Ю.А. Козлов, 1950; М.О. Бир-гер, 1982 и др.).

Несмотря на многообразие существующих сред для культивирования и индикации возбудителей инфекционных болезней животных и человека, проблема повышения их эффективности путем замены традиционно применяемых пищевых белков мяса, печени, рыбы и яиц остается актуальной (Ра-вилов А.З. и соавт., 1999). Дороговизна микробиологических сред на основе мясо-молочных и других пищевых продуктов, применяемых в производстве вакцин и других биологических препаратов, резко повышает себестоимость последних. Взамен мясных питательных сред нашли применение гидролиза-ты из растительного и непищевого сырья животного происхождения (И.Н. Бабушкин, 1964; К.Д. Геслаидзе, 1968; JI.A. Дерябина, 1971; Н.М. Алтунян, 1973; С.И. Цыганкова, Л.И. Трусова и др., 1982; А.Л. Винник, А.К. Варгина, 1986; А.П. Простяков, 1988; и др.).

Исследованиями, проводимыми на протяжении нескольких лет в ФГНУ ВНИВИ (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»), обнаружены высокие ростовые свойства для ряда микроорганизмов различных систематических групп гид-ролизатной основы из плацентарно-эмбрионально-маточного материала стельных животных (ГПЭМ) и маточной ткани яловых коров (ГМЯК), являющихся отходами производства мясокомбинатов (Н.К. Мамлеева и др., 1993; Р.Я. Гильмутдинов и др., 1995; М.П. Торбина и др., 1996; Е.К. Акимов, 1999; Х.Н. Макаев и др., 2002; Н.И. Галиакберова, 2003).

Исследования в этом направлении перспективны. Сырье, используемое для изготовления ГПЭМ и ГМЯК в связи с резким подорожанием мясных продуктов, в 20-25 раз дешевле печени и мяса, используемых в традиционных микробиологических средах, а расход его на приготовление среды во много раз меньше.

Цели и задачи исследования. Целью исследований явилась разработка новых основ бактериологических питательных сред из дешевых гидролизатов - отходов производства мясокомбинатов для культивирования бруцелл и других микроорганизмов. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

2. Изыскать оптимальные варианты питательной среды для культивирования бруцелл на основе ГПЭМ и ГМЯК.

3. Исследовать культурально-биохимические, морфологические и тинкториальные свойства бруцелл при длительном культивировании на жидких (бульонных) и плотных (агаровых) питательных средах с основой из ГПЭМ и ГМЯК.

4. Изучить ростовые свойства ГПЭМ коров, свиней, лошадей, овец и ГМЯК для микроорганизмов, относящихся к разным систематическим группам (микобактерии, микоплазмы и др.).

Научная новизна. В экспериментах с использованием широкого спектра видов и штаммов бруцелл доказано, что, независимо от видовых особенностей исходных тканей, гидролизаты из плацентарно-эмбрионально-маточного материала крупного рогатого скота, свиней и лошадей, как в отдельности, так и в смеси, являются хорошей ростстимулирующей основой питательных сред для культивирования бруцелл. Впервые теоретически обоснована возможность использования изученных гидролизатов в качестве полноценного заменителя традиционных основ микробиологических сред.

Практическая значимость. Широкое внедрение в микробиологическую практику новой эффективной питательной среды для бруцелл с использованием дешевого, доступного белоксодержащего сырья из отходов производства мясокомбината, ранее для этих целей не используемого, позволит значительно удешевить производство бактериальных вакцин, и внесет значительный вклад в область микробиологических исследований.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Всероссийских научно-производственных конференциях по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002; 2004; 2006); Международной конференции по научным основам обеспечения защиты животных от экоток-сикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний (Казань, 2005); Международной практической конференции по профилактике, диагностике и лечению инфекционных болезней общих для людей и животных (Ульяновск, 2006); Всероссийской научно-практической конференции по перспективам агропромышленного производства регионов России в условиях реализации приоритетного национального проекта «Развитие АПК» (Уфа, 2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые для защиты:

- варианты экспериментальных сред для бруцелл на основе ГПЭМ и ГМЯК;

- данные протеолитической активности поджелудочной железы разных видов животных;

- результаты длительного культивирования бруцелл на бульонных и агаровых средах с основой из ГПЭМ и ГМЯК;

- применение сред на основе ГПЭМ и ГМЯК для культивирования различных видов микроорганизмов.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, заключение, практические предложения. Работа изложена на 123 страницах компьютерного текста, содержит 46 таблиц и 5 рисунков. Список использованной литературы включает 232 библиографических источника, в том числе 32 на иностранном языке.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Галиуллина, Эльвира Равиловна

ВЫВОДЫ

2 Аминокислотный состав ГПЭМ коров сопоставим с общеизвестными гидролизатными основами бактериологических сред, такими как триптиче-ский перевар сердца (ТПС), гидролизат лактальбумина (ГЛА) и ферментативный гидролизат мышц (ФГМ), а по содержанию треонина, серина, тирозина, глутаминовой и аспарагиновой кислот значительно (в среднем в 1,5 раза) превосходит ГЛА.

3. Основные биохимические показатели (содержание аминного азота, полипептидов и триптофана) ГПЭМ коров и лошадей сопоставимы и превосходят таковые ГПЭМ свиней и овец на 20-60 %.

6. Оптимальным для выращивания бруцелл является следующий компонентный состав среды с основой из ГПЭМ (или ГМЯК): ГПЭМ - от 1,4 % (ГМЯК - 1,3%); хлористый натрий - 0,5 %; глюкоза - 1 %; глицерин - 3 %; агар-агар - 2% и дистиллированная вода - до 100 мл (аминный азот - 90-180 мг%). Длительное культивирование различных видов и штаммов бруцелл на среде с ГПЭМ не влияет на их морфологические, тинкториальные и культу-рально-биохимические свойства. Биохимические добавки, в частности, сыворотка крупного рогатого скота и экстракт кормовых дрожжей при использовании ГМЯК в качестве основы культуральной среды не улучшали ее ростовых свойств.

7. Ростовые свойства (количество выросших колоний, длительность роста) среды с ГПЭМ при культивировании бруцелл превосходили таковые на ППГГА - рост колоний наблюдался на 1-2 суток раньше и колонии были крупнее.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Результаты выполненных исследований используются:

- в учебном процессе в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана.

- в производственном процессе, при изготовлении питательных сред в научных подразделений Федерального государственного учреждения «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных -ВНИВИ».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Галиуллина, Эльвира Равиловна, Казань

1. Абдуллин, Х.Х. Серологическая диагностика бруцеллеза и пути повышения ее эффективности / Х.Х. Абдуллин // Науч. труды Казанск. гос. вет. ин-та. 1980. - т. 135. - С. 16-21.

2. Абуашвили, Н.М. Питательная среда для выращивания вакцинных штаммов бруцелл / Н.М. Абуашвили, Т.В. Биркадзе, В.Н. Кикалишвили и др. // Авт. св. СССР. № 827543, С12, №1/20,1981, Бюлл. №17.

3. Аверкиева, Р.С. Селезеночная среда для культивирования бруцелл / Р.С. Аверкиева, М.М. Ременцева // Здравоохранение Казахстана. 1968. - № 6. - С. 67.

4. Акимов, Е.К. Изучение роста бруцелл штамма 82 на питательных средах ПМБХ и ГПЭМ при периодическом режиме культивирования / Е.К. Акимов // Материалы Республ. научно-произв. конф. «Актуальн. пробл. жив-ва и вет-рии». Казань, 1999. - С. 3-4.

5. Акимов, Е.К. Применение гидролизата молока при суспензионном выращивании бруцелл вакцинного штамма 82 / Е.К. Акимов, С.Н. Карлика-нова // Актуальн. вопр. эпизоотологии и меры борьбы с туберкулезом жив-х. -Казань, 1989.-С. 59-62.

6. Аливердиев, А.А. Современные взгляды на природу иммунитета при бруцеллезе сельскохозяйственных животных / А.А. Аливердиев. Махачкала, 1966. 114 с.

7. Алимов, A.M. Оптимизация режимов перемешивания и аэрации при культивировании сальмонелл с использованием ФМГТГ / А.М.Алимов, Н.И. Галиакберова, Х.Н. Макаев // Ученые зап. Казанск. гос. вет. ин-та. -2003.-т. 174.-С. 27.

8. Алинов, В.И. Особенности эндокринной системы женщин после физиологических родов / В.И. Алинов, Г.П. Мясникова, В.В. Потин и др. // Акушерство и гинекология. 1979. - №4. - С.29-31.

9. Алтунян, Н.М. Новый гомобелковый гидролизат из плаценты (получение, биохимическая и экспериментальная характеристика): Автореф. дис. канд. вет. наук/Алтунян Н.М. Баку, 1972. - 18с.

10. Альтон, Дж. Методы лабораторных исследований по бруцеллезу / Дж. Альтон, Л. Джонс. ВОЗ, - Женева, 1968. - с. 80.

11. Амитров, В.К. Выращивание бруцелл на полужидком агаре / В.К. Амитров // Ветеринария. 1962. - №4. - С. 86-87.

12. Антане, В.В. Зависимость суперовуляции и качества эмбрионов коров доноров от состояния их гормонального статуса, эндометрия и показателей обмена веществ: Автореф. дис. канд. вет. наук / Антане В.В - Баку, 1972.- 19с.

13. Бабушкин, И.Н. Использование отходов плацентарной и абортной крови для приготовления питательных сред / И.Н. Бабушкин // Лаб. дело. -1964.-№12.-С. 741-743.

14. Баграмян, Э.Р. Гормональные функции плаценты / Э.Р. Баграмян // Советская медицина. 1972. - №12. - С. 66-71.

15. Базиков, И.А. Ультраструктурная организация L-форм бруцелл и культур ревертантов / И.А. Базиков, А.И. Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1991. - №1. - С. 17-20.

16. Базиков, И.А. Подбор условий для L-трансформации бруцелл / И.А. Базиков, И.Ф. Таран //Деп. в ВИНИТИ 10.07.89. №4514-В89. - 12с.

17. Бакл, Дж. Гормоны животных / Дж. Бакл. // Пер. с англ. М. Морозовой. М.: Мир, 1986, - С. 83-86.

18. Башмакова, М.А. О методике выделения микоплазм из полового тракта женщин / М.А. Башмакова, В.М. Солдатова // Лаб. дело. 1969. -№12.-С. 741-743.

19. Башмакова, М.А. Использование плацентарных сред для выделения Mycoplasma hominis / М.А. Башмакова, В.М. Солдатова // Лаб. дело. -1971.-№9.-С. 561-563.

20. Бедарева, З.М. Рост культур видов В. ovis на различных питательных средах // З.М. Бедарева, В.И. Белобаб, К.П. Студенцов // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1974. - №5. - С . 75-76.

21. Бедарева, З.М. Питательная среда для выращивания бруцелл вида овис / З.М. Бедарева, В.И. Белобаб, К.П. Ивершина // Авт. св. СССР. № 523932,1976, Бюлл.№28.

22. Белкин, К.К. Плацента как основа питательных сред / К.К. Белкин //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1933. - №6. - С. 30.

23. Белобаб, В.И. Установление фермента серингидролиазы (серинде-заминазы) у бруцелл / В.И. Белобаб, К.П. Студенцов, В.М. Красов // Вестник с.-х. науки Казахстана. 1969. - №8. - С. 53-58.

24. Белобаб, В.И. Биохимические свойства и антигенная активность L-форм бруцелл, выделенных от животных / В.И. Белобаб, М.С Сарсенов, Х.Н. Мукаева // Сб. науч. работ Казах. НИВИ. Алма-Ата. - 1983. - С. 33-39.

25. Бендас, Л.Г. Кормовые дрожжи как исходное сырье питательных сред для культивирования микробов / Л.Г. Бендас, И.В. Сидорчук // Лаб. дело.- 1971.-№1.-С. 43-45.

26. Бендас, Л.Г. Сравнительное изучение однонаправленных питательных сред для бруцелл / Л.Г. Бендас, Т.М. Дробышева, Р.Г. Шепилова И.В. Кутырева // В кн.: Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов.- М. 1980, С. 165-167.

27. Бийчанова, A.JI. Плацентарная гиалуронидаза активность и свойства / А.Л. Бийчанова // Труды Томск. НИИ вакцин и сывороток «Вирусные и бактерийные препараты». 1983. - т. 31. - С. 212-220.

28. Биргер, М.О. Методы идентификации бактерий / М.О. Биргер // В кн.: Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.: Медицина, 1980. С. 69-70 и С. 114-118.

29. Биргер, М.О. Приготовление солевых растворов и питательных сред для культивирования клеток / М.О. Биргер // В кн.: Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.: Медицина, 1982.-90 с.

30. Бланков, Б.И. О заменителях питательных сред / Б.И. Бланков, Н.И. Грязнов. М.: Медгиз, 1942.-232 с.

31. Блинкова, Д.Л. Изучение свойств культур В. abortus при хранении их на питательных средах / Д.Л. Блинкова // Науч. обеспечение мероприятий по профилактике и ликвидации туберкулеза и бруцеллеза с.-х. жив-х. Новосибирск, 1991.-с. 132-136.

32. Бодяжина, В.И. О структуре и функциях амниона и гладкого хориона / В.И. Бодяжина // Акушерство и гинекология. 1982. - №19. - С. 8-12.

33. Борисов, Л.Б. Микробиология / Л.Б. Борисов, В.Д. Тимаков. М.: Медицина, 1983.-375с.

34. Боровикова, Т.П. Питательная среда для культивирования микроорганизмов / Т.П. Боровикова, Т.М. Негирева, Л.С. Вейнблат // Патент РФ, №1586180,- 1994, Бюлл. №17.

35. Бродова, Н.В. Приготовление питательных сред из альбумина / Н.В. Бродова // Лаб. практика. 1937. - №8. - С. 1.

36. Бродова, Н.В. Плацента для приготовления питательных сред / Н.В. Бродова // Лаб. практика. 1938. - № 1. - С. 8.

37. Быкова, К.М. Материалы к получению белковых гидролизатов для парентерального питания из плацентарной и абортной крови и белковживотного происхождения: Автореф. дис. канд. биол. наук / Быкова К.М. -Хабаровск, 1977.-24 с.

38. Буссол, В.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / В.А. Буссол, А.Ф. Бабкин, ГШ. Жованик. Киев: Урожай, 1991. -176 с.

39. Варгина, А.К. Проблемы клинической микробиологии и неинфекционной клиники / А.К. Варгина, З.И. Ершова, В.В.Мохов и др. М.: Медицина, 1983.-С. 173.

40. Васильева, З.И. Дрожжевая питательная среда для бактериологической диагностики В. ovis / З.И. Васильева, Л.П. Репина, А.А. Мохрякова // В кн.: Актуальные проблемы туберкулеза и бруцеллеза с.-х. животных. Новосибирск. 1989. - С. 102-106.

41. Васюренко, З.П. Состав жирных кислот бруцелл различных видов и его связь со средой выращивания / З.П. Васюренко, К.М. Синяк, А.С. Ко-ротич, Л.А. Антонова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1977.-№8.-С.53-59.

42. Вершилова, П.А. (ред.) Бруцеллез (рук-во для врачей) / П.А. Вер-шилова.-М.: Медгиз, 1961.-414 с.

43. Вершилова, П.А. Бруцеллез / П.А. Вершилова. М.: Медицина, изд-е 2-е, перераб. и доп., 1972. - 439 с.

44. Винник, А.Л. Способ получения гидролизата, используемого в питательных средах для культивирования бактерий / А.Л. Винник, А.К. Варгина, A.M. Белоусов, З.И. Ершова // Авт. св. СССР. №1426083,1986.

45. Высоцкий, В.В. Ультраструктура бруцелл. Сообщ. 5. Процесс диссоциации. / В.В. Высоцкий // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1968. №8. - С.42-44.

46. Вышелесский, С.Н. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / С.Н. Вышелесский. М.: Медицина, 1955. - 320с.

47. Галиакберова Н.И. Изыскание питательной среды и оптимизация условий культивирования: дисс. канд. биол. наук / Галиакберова Н.И. Казань, 2001.- 115с.

48. Галиакберова, Н.И. Питательная среда на основе ГПЭМ для культивирования сальмонелл / Н.И. Галиакберова, Х.Н. Макаев, A.M. Алимов // Материалы Республ. научно-произв. конф. «Актуальн. пробл. жив-ва и вет-рии». Казань, 1999. - С. 22.

49. Галиакберова. Н.И. Оптимизация условий культивирования сальмонелл на питательной среде из ферментативного маточного-плацентарного гидролизата / Н.И. Галиакберова, A.M. Алимов, Х.Н. Макаев // Вет. патология. -2003. -№1. С. 147.

50. Геслаидзе, К.Д. Триптические гидролизаты из тунгового жмыха для выращивания бруцелл: Автореф. дис. канд. вет. наук / Геслаидзе К.Д. -Тбилиси, 1968.-22 с.

51. Гиповнер, Ф.Е. О приготовлении питательных сред на кровяных сгустках / Ф.Е. Гиповнер // Лаб. практика. 1935. - №5. - С. 1.

52. Голуб, Н.Ф. Кровяные сгустки для питательных сред / Н.Ф. Голуб // Лаб. практика. 1933. - №8. - С. 6.

53. Голубев, В.А. Гормональные исследования в диагностике фетоп-лацентарной недостаточности; плацентарный лактоген, хорионический гона-дотропин, пролангин / В.А. Голубев, З.П. Соколова // Медицинский реферативный журнал. 1983. - №4. - С. 1-5.

54. Гончаров, В.П. Физиология беременности / В.П. Гончаров, В.А. Карпов // Справочник по акушерству и гинекологии животных. М.: Рос-сельхозиздат, 1985. - 255с.

55. Гороховский, Н.Л. Микроструктура плаценты овцы / Н.Л. Гороховский // Труды 7-го Всес. съезда анатомов, гистологов, эмбриологов. -Тбилиси.- 1969.-С. 726-727.

56. Горфункель, Д.И. Получение пептонов из фибрина и кровяных сгустков / Д.И. Горфункель, Г.П. Надарм // Бюлл. №12 по обмену опытом работы институтов микробиологии и эпидемиологии. 1945.

57. Грудинская, С.Г. Рационализация приготовления питательных сред из сгустков крови / С.Г. Грудинская, М.В. Безлюдная, М.М. Шиврова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1943. - №3. - С. 82.

58. Грушина, Т.А. К изысканию оптимальных питательных сред для выращивания бруцелл / Т.А. Грушина // Материалы 1-ой конф. молодых ученых г. Алма-Аты. Алма-Ата. - 1974. - С.28-30.

59. Грушина, Т.А. Использование бета глобулиновых сред для выращивания бруцелл / Т.А. Грушина, М.М. Ременцева, Л.Ф. Меньшиков, Р.Ж. Ишанова // Труды ин-та эпидемиол. и инфекц. болезней МЗ Казах. ССР. -1978.-т.15.-С. 59-65.

60. Губина, Е.А. Испытание различных питательных сред при изучении антибиотикочувствительности бруцелл / Е.А. Губина, Т.А. Толмачева // Антибиотики и мед. биотехнология. 1985. - № 11. - С. 834-842.

61. Дерябина, Л.А. Плацента человека как перспективный источник для получения белковых гиролизатов. Автореф. дис. канд. мед. наук/Дерябина Л. А. Рига, 1971.-22с.

62. Донской, Д.Н. Минимальная синтетическая питательная среда для Brucella / Д.Н. Донской, А.Ф. Пинигин, Е.П. Голубинский, С.П. Меринов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1983. - №11. - С. 112.

63. Драновская, Е.А. Изучение антигенной структуры и химическогосостава бруцелл в процессе их L-трансформации и реверсии / Е.А. Дранов-ская, Т.А. Толмачева, И.А. Ростовцева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1981. - №7. - С. 31-35.

64. Драновская, Е.А. Изучение билогических и физико-химических свойств бруцелл, выделенных от мышевидных грызунов / Е.А. Драновская, B.C. Малихова, Н.А. Грекова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1983.-№ 1.-С. 47-53.

65. Дрожевкина, М.С. Свойства культур и бактериофага, выделенных при бруцеллезной инфекции и их связь с тяжестью заболевания / М.С. Дрожевкина// Труды Ростовск. гос. научно-исслед. противочум. ин-та. 1960. -Т.17.-С. 184-189.

66. Дубровская, И.И. Ферментные системы и некоторые биохимические факторы типоспецифичности и вирулентности бруцелл / И.И. Дубровская, Е.А. Драновская // Вопр. мед. химии. 1964. - т.29. - №5. - С. 846.

67. Дьяконов, Л.П. Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов / Л.П. Дьяконов, А.Ф. Конюхов, Е.Н. Василевич. М: - 1986. - 69 с.

68. Ермишина, И.Г. Культивирование клеток тканей животных на средах с гидролизатами обрата молока и мышечной тканей эмбрионов / И.Г. Ермишина, Т.Л. Федорова // Труды ВГНКИ. 1971. - т. 17. - С. 91-99.

69. Зайцева, А.И. Изучение эффективности лечебной бруцеллезной вакцины, приготовленной на среде с дрожжевым автолизатом (эксперим. ис-след.) / А.И. Зайцева //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1961. -№1. С. 107-110.

70. Замурий, И.Р. О самовыздоровлении овец, пораженных бруцеллезом / И.Р. Замурий // Ветеринария. 1949. - №5. - С. 34-36.

71. Здродовский, П.Ф. Бруцеллез. Современное учение применительно к патологии человека / П.Ф. Здродовский. М.: Медгиз, изд-е 4-е, доп.,1953.-243 с.

72. Здродовский, П.Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии / П.Ф. Здродовский. М.: Медгиз, 1969. - 224 с.

73. Идрисов, Г.З. Иммуноморфологические изменения органов и тканей крупного рогатого скота, привитого бруцеллезными вакцинами из штамма 82 и 19// Г.З. Идрисов, К.М. Салмаков // Ученые записки Казанск. вет. инта. 1975. - т. 119.-С. 134-142.

74. Иерусалимский, Н.Д. Азотное и витаминное питание микробов / Н.Д. Иерусалимский. М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1949.

75. Илиджев, А.К. Утилизация биологических отходов для изготовления микробиологических питательных сред / А.К. Илиджев, Г.И. Рожнов, В.К. Голшмид // Гигиена и санитария. 1988. - №12. - С. 78.

76. Инструкция по изготовлению и контролю сухого гидролизата пла-центарно-эмбрионально-маточного // В кн.: Новые бактериальные питательные среды для культивирования микроорганизмов. Казань. 1980. С. 3-5.

77. Инструкция по изготовлению вакцины из штамма 82. М.6. 1985.

78. Ишанова, Р.Ж. Свойства Л культур бруцелл / Р.Ж. Ишанова, В.М. Семенцова, В.М. Нифантьев, Н.Х. Хасанов // Ветеринария. - 1986. - №9. - С. 30-32.

79. Калашникова, Е.Л. Содержание нуклеиновых кислот и полисахаридов в плаценте / Е.Л. Калашникова // Вопр. охраны материнства и детства. -1968.-т. 13.-№9.-С. 58-63.

80. Калина, З.С. Изменение морфологии и тинкториальных свойств бруцелл в организме животных / З.С. Калина, В.Г. Ощепков // Научно-техн. бюлл. ИЭВС и ДВ. 1978. - т. 12. - С. 11-15.

81. Каплан, A.JI. Роль плаценты в развитии внутриутробного плода. Уч. пособие / Каплан, A.JI. // Фельдшер и акушерка. 1979. - № 1. - С. 20-25.

82. Калмыкова, А.А. Гидролизатные среды / А.А. Калмыкова, И.Л За-кина, А.Л. Цукерман // Лаб. практика. 1932. - №10. - С. 9.

83. Кейлин, С.Л. Обмен веществ в биологической системе мать плацента - плод / С.Л. Кейлин // Сб. науч. работ Сиб. отд. - Новосибирск. - 1970, -т. 54.

84. Клебанова, А.А. Плацентарные среды / А.А. Клебанова, И.М. По-добедов // Лаб. практика. 1932. - № 1. - С. 9.

85. Коваленко, И.В. Экспресс индикация и идентификация L-форм микобактерий методом иммунофлуоресценции / И.В. Коваленко // Метод, рекомендации. - 1981. - 9 с.

86. Коваленко, Я.Р. Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты / Я.Р. Коваленко. М.: Сельхозгиз, 1948.

87. Козлов, Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии / Ю.А. Козлов. М.: Медгиз, 1950. - 112 с.

88. Колесникова, Н.С. Новая среда для выделения и сохранения якутских штаммов бруцеллеза крупного рогатого скота / Н.С. Колесникова // Науч. сообщ. Якутск, филиала Сибирского отделения АН СССР. 1961. - вып.5. -С.113-116.

89. Кондратьева, О.В. Общая характеристика и питательная потребность бруцелл, выделенных в Казахстане: Автореф. дис. канд. вет. наук / Кондратьева О.В. Алма-Ата, 1968.-20 с.

90. Кондратьева, О.В. К изучению питательных потребностей бруцелл. Сообщ. 1 / О.В. Кондратьева, В.М. Степанов // В кн.: Микробиол. и иммунол. особо опасных инфекций. Саратов. - 1968. - №3. - С. 335-336.

91. Кононский, А.И. Биология животных / А.И. Кононский // Уч. пособие. изд-е 2-е, перераб. и доп. Киев: Вища школа, 1984. - 415 с.

92. Констатинова, М.А. Методические рекомендации по идентификации бруцелл на питательной среде с кальцием / М.А. Констатинова, А.Д. Гармазова. Иркутск, 1982. - 4с.

93. Копалейшвили, Б.И. Об активности гиалуронидазы в плаценте женщин при физиологически и патологически протекающей беременности / Б.И. Копалейшвили, М.М. Фридман // Акушерство и гинекология. 1967. -№10.-С. 55-57.

94. Коробкова, Е.И. Основные методы бактериологической диагностики инфекционных болезней / Е.И. Коробкова, Н.С. Солун. Саратов, 1948.

95. Корунов, В.П. Аминокислотный обмен и некоторые кульурально-биохимические свойства бруцелл различной вирулентности: Автореф. дис. канд. вет. наук / Корунов В.П. Казань, - 1973. - 19с.

96. Корунов, В.П. Аминокислотный обмен у бруцелл / В.П. Корунов // Ученые зап. Казанск. гос. вет. ин-та. 1974. - т. 115. - С. 183-190.

97. Корунов, В.П. Изучение физико-химических свойств питательных сред при суспензионном выращивании бруцелл / В.П. Корунов, М.Х. Лут-фуллин, Р.Г. Габидуллина // Ученые записки Казанск. гос. вет. ин-та. 1975. -Т.119.-С. 143-147.

98. Корунов, В.П. Полусинтетическая питательная среда для культивирования бруцелл / В.П. Корунов // Науч. труды Казанск. гос. вет. ин-та. -1980.-т. 135.-С. 110-114.

99. Кускова, З.Р. Ферменты плаценты человека / З.Р. Кускова // Труды Томск. НИИ вакцин и сывороток «Вирусные и бактерийные препараты». -1983.-т.31.-С. 207-211.

100. Кускова, З.Р. Биохимическая характеристика бруцелл штамма 82в процессе суспензионного культивирования / З.Р. Кускова // Науч. труды Казанск. гос. вет. ин-та. 1980. - т. 135. - С. 139-142.

101. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований / А.С. Лабинская. М.: Медицина, 1978. - 370 е.

102. Лурье, Ю.Ю. Справочник по аналитической химии / Ю.Ю. Лурье. -М.: Химия, 1965.-390 с.

103. Лурье, Ю.Ю. Сравнительная оценка питательных сред, используемых для выделения гемокультур бруцелл / Ю.Ю. Лурье // Тез. докл. науч. конф. «Соврем, аспекты профилактики зоонозных инфекций», Ставрополь. -1991.-С. 39.

104. Маликова, М.В. Активность каталазы у бруцелл / М.В. Маликова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1960. - №11. - С. 93-99.

105. Маликова, М.В. Материалы о ферментном спектре бруцелл: Ав-тореф. дис. канд. мед. наук / Маликова М.В. Одесса, - 1969.-22с.

106. Маловастый, К.С. Сравнительное изучение питательных сред при бактериологической диагностике бруцеллеза / К.С. Маловастый // Информ. бюл. Укр. акад. аграр. наук: ин-т экспер. клин. вет. медицины. 1994. С. 4041.

107. Маловастый, К.С. Использование сухой дрожжевой элективной питательной среды для выделения бруцелл / К.С. Маловастый, З.И. Васильева // Тез. докл. 3-ей Всес. конф. по эпизоотол. Новосибирск, - 1991, - С. 171-172.

108. Мамлеева, Н.К. Питательная среда для диагностики бруцеллеза / Н.К. Мамлеева, М.П. Торбина, Г.А. Белозерова // Патент СССР. №1806186, МКИ 5, С12, №1/20, опубл. 30.03.93. Бюлл. №12.

109. Меринов С.П. Сравнительная характеристика метаболизма у бруцелл / С.П. Меринов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1967. -№1.-С. 22-26.

110. Меринов, С.П. Синтетическая питательная среда для выращивания бруцелл / СЛ. Меринов, В.А. Широков, Е.П. Голубинский и др. // Авт. св. СССР. №933702, М. кл.З, С 12, № 1/20, Опубл. 07.06.82. Бюлл. № 21.

111. Меринов, С.П. Иммуноферментный метод обнаружения антигенов бруцелл и антител к ним / С.П. Меринов, Т.Ю. Загоскина // Тез. докл. Всес. конф. Иркутск, - 1984. - ч. 2. - С. 111-113.

112. Меринов, С.П. Синтетическая питательная среда для выращивания бруцелл / С.П. Меринов, В.А. Широков, Е.П. Голубинский и др. // Авт. св. СССР. №933702, М. кл.З, С 12, № 1/20, Опубл. 07.06.82. Бюлл. № 21.

113. Методические рекомендации по изготовлению питательной среды из плацентарно-эмбриональной массы крупного рогатого скота для культивирования бруцелл. Казань, 2001.

114. Молчанова, А.И. Изучение свойств тифопаратифозных штаммов при культивировании на агаре с плацентой человека / А.И. Молчанова, А.П. Балабанова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1940. - № 2-3. -С. 99.

115. Наугольных, Э.З. Плацента и ее гормоны / Э.З. Наугольных // Науч. труды Свердлов, мед. института. 1966. - №51. - С. 167-169.

116. Никаноров, Б.А. Планирование эксперимента для оптимизации глубинного культивирования бруцелл / Б.А. Никаноров, Ю.И. Тараканов, Г.Б. Раушенбах, В.П. Шитов // Ветеринария. 1972. - №2. - С. 25.

117. Никитина, В.А. Использование непищевых белков для приготовления бактериологических питательных сред / В.А. Никитина, С.Х. Хаерты-нов, К.М. Салмаков // Ученые зап. Казанск. гос. вет. ин-та. 1976. -т.122. -С. 166-169.

118. Никитина, В.А. Использование питательных сред из гидролизата лактальбумина для культивирования бруцелл / В.А. Никитина, С.Х. Хаерты-нов, В.Р. Матросова // Науч. труды Казанск. гос. вет. ин-та. 1980. - т. 135. -С. 142 - 145.

119. Орлов, Е.С. К вопросу о самовыздоровлении бруцеллезных овец / Е.С. Орлов // Ветеринария. 1942, - №10. - С. 19-22.

120. Островская, Н.Н. К вопросу об образовании у бруцелл L-вариантов бруцелл в культуре клеток куриных фибробластов / Н.Н. Островская, П.А. Вершилова, Т.А. Толмачева // Бюлл. научно-техн. инф. ИЭВС и ДВ. 1976. - т.4. - С.8-12.

121. Ощепков, В.Г. Образование L-вариантов бруцелл в культуре клеток куриных фибробластов / В.Г. Ощепков, З.С. Калина // Бюлл. научно-техн. инф. ИЭВС и ДВ. 1976. - т.4. - С. 8-12.

122. Ощепков, В.Г. Культурально-биохимические и агглютинабельные свойства L-вариантов В. ovis, выделенных от естественно инфицированных овцематок / В.Г. Ощепков, Ю.Н. Петров // Сб. науч. работ Сиб. отд., Новосибирск.-- 1983.- С. 13-15.

123. Ощепков, В.Г. L2- трансформация В. ovis на искусственных питательных средах и в организме овец / В.Г. Ощепков, Е.М. Степанов, К.Е. Степанова и др. // Диагностика и патогенез инфекц. и инвазив. заболеваний с.-х. жив-х. СПб., 1986.-С. 21-28.

124. Панкова, Г.Е. Культивирование некоторых тканей животных на средах из мышечных гидролизатов / Г.Е. Панкова, Д.А. Цуверкалов // В кн: Вопросы ветеринарной вирусологии. М., - 1964. - С 9-12.

125. Пасхина, Т.С. Количественное определение аминокислот нингид-рином/Т.С. Пасхина. М., 1959.

126. Первушин, Б.П. Вопросы микробиологической и иммунологической диагностики бруцеллеза у человека / Б.П. Первушин. М.: Медгиз, 1962. -С. 247.

127. Передереев, Н.И. Аминокислотный состав CI. perfringens типов В и Д / Н.И. Передереев, Е.Ш. Журавель // Бюлл. ВИЭВ. 1968. - №4. - С. 7577.

128. Петрова, М.И. Сравнительная характеристика различных питательных сред для культивирования бруцелл и иерсиний / М.И. Петрова // Пробл. стабилизации и развития с.-х. пр-ва Сибири, Монголии и Казахстана в XXI в. Новосибирск. 1999, - ч. 2. - С. 242-243.

129. Пешков, И. Върху някой аспекта, свързани с антигенната структура и серологична специфичност на филогенетично сложили се S- и R- видове и диссоциирали в R-варианти бруцели / И. Пешков // Вет. мед. науки. -1978.-т.15.-№9.-С. 34-39.

130. Пешков, И. Серологични исследования на L-форми при бруцелл / И. Пешков // Първа национальна конференция по зоонозите. Резюиете по докладыте. София. 1979.

131. Пешков, И. Върху антигената структура на L-форми на В. abortus 544 // И. Пешков // Вет. мед. науки. -1979. - т. 16. - №2. - С. 52-59.

132. Пинигин, А.Ф. К таксономическому положению бруцелл, выделенных от северных оленей / А.Ф. Пинигин, О.С. Петухова, С.П. Меринов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1979. - №11. - С.103-104.

133. Плоскирев, Н.В Питательные среды из отходов пищевой промышленности / Н.В. Плоскирев, K.JI. Иванов, А.Н. Биткова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1944. - №1. - С. 75.

134. Погорелова, Т.Н. Аминокислотный состав плаценты / Т.Н. Пого-релова / Вопр. охраны материнства и детства. 1973. - т. 18. - №10. - С. 72-75.

135. Прозоровский, С.В. Иммунологические механизмы персистенции микоплазм / С.В.Прозоровский // Вестник АМН СССР. 1985. - №10. - С. 4351.

136. Простяков, А.П. Способ получения пептона. / А.П. Простяков, А.В. Зинченко, А.Ф. Ткачев, В.Г. Волощук // Авт. св. СССР. № 1386654.1988, Бюл. №13.

137. Пяткин, К.Д. Микробиология / К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. -М: Медицина, 1981.-296с.

138. Равилов, А.З. Микробиологические среды / А.З Равилов, Р.Я. Гильмутдинов, М.Ш. Хусаинов. Казань: Фэн, 1999. - 397с.

139. Рапопорт, С.М. Медицинская биохимия / С.М. Рапопорт. М.: Медицина, 1966.

140. Раскин, Б.М. Проблема питательных сред на современном этапе / Б.М. Раскин, Г.П. Калина // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1988.-№6.-С. 84-88.

141. Резников, Б.Ф. Питательная среда для выращивания первичных культур бруцелл / Б.Ф. Резников // Авт. св. СССР. №540913,1976, Бюлл. № 47-48.

142. Ременцева, М.М. Методические указания по профилактике и лабораторной диагностике бруцеллеза людей / М.М. Ременцева, Р.Ж. Ишанова, Т.А. Грушина // М.: МЗ СССР, 1980. С. 53-54.

143. Ременцева, М.М. Применение транспортной среды для бактериологического исследования крови на бруцеллез / М.М. Ременцева, Т.А. Грушина, Т.Н. Толстова, Е.В. Москвина // Здравоохр. Казахстана. 1985. - № 8.1. С. 70-71.

144. Ременцева, М.М. Питательная среда для выращивания бруцелл / М.М. Ременцева, Р.Ж. Ишанова, Т.А. Грушина // Авт. св. СССР. №1370138, А1; МКИ С 12 0 1/04,1988, Бюлл. №4.

145. Рубинштейн, Е.В. Использование костей для изготовления питательных сред / Е.В. Рубинштейн // Лаб. практика. 1935. - №4. - С. 34.

146. Рыкова, В.И. Липолитическая активность некоторых патогенных микробов / В.И. Рыкова, И.В. Домарадский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1963.-T.5.-С. 14-17.

147. Рэфф, Р. Эмбрионы, гены и эволюция / Р. Рэфф, Г. Кофмен. Пер. с англ., М.: Мир, 1986. - 404 с.

148. Салмаков, К.М. Результаты изучения вакцинного штамма бруцелл / К.М. Салмаков //Ученые, зап. Казанск. гос. вет. ин-та. 1972. - т. 112. - С. 81-89.

149. Саяпина, Л.В. Новые питательные среды и иммунобиологические препараты для диагностики возбудителей особо опасных инфекций / Л.В. Саяпина, Т.Н. Анисимова, Г.М. Сергеева и др. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2002. - №3. - С. 115.

150. Смирнова, В.И. Культивирование бруцелл на питательных средах из китовой муки / В.И. Смирнова // Труды Одесс. НИИ эпидемиол. и микробиол. 1960. - т.4. - С.57.

151. Смирнова, В.И. Питательные среды из китовой муки и их применение для культивирования возбудителей дифтерии и бруцеллеза: Автореф. дис. канд. биол. наук / Смирнова В.И. Львов, 1962. - 19 с.

152. Смирнова, Г.А. Изучение пептидного и аминокислотного состава различных белковых основ питательных сред / Г.А. Смирнова, Б.М. Раскин, В.А. Мельникова, Е.Л. Целигорова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1985. - №12. - С. 22-27.

153. Старкова, Т.Г. Вопросы бактериологического патогенеза и бактериологической диагностики туберкулеза / Т.Г. Старкова. -JI: 1958.-С. 15.

154. Студенцов, А.П. Ветеринарное акушерство и гинекология / А.П. Студенцов, B.C. Шипилов, А.Г. Субботина, О.Н. Преображенский. М: Аг-ропромиздат, 1986. - 480 с.

155. Студенцов, К.П. Бруцеллез животных / К.П. Студенцов. Алма-Ата: Кайнар, 1975.-239 с.

156. Тарасова, Т.А. Ультраструктура R и S вариантов Brucella ovis / Т.А. Тарасова, Л.П. Репина, А.И. Щербакова и др. // Журн. микробиол., эпи-демиол. и иммунобиол. 1983. - №11. - С. 102.

157. Телишевская, Л.Я. Белковые гидролизаты / Л.Я. Телишевская. -М, 2000. 295 с.

158. Телишевская, Л.Я. Разработка методов гидролиза, способов применения и контроля качества белковых гидролизатов / Л.Я. Телишевская, С.П. Сергеева // Сб. науч. трудов ВГНКИ. 2000. - С. 62.

159. Тимаков, В.Д. Основы экспериментальной медицинской бактериологии / В.Д. Тимаков, ДМ. Гольдфарб. М: Медгиз, 1958. - 348 с.

160. Тимаков, В.Д, Каган Г.Я. Семейство Mycoplasmataceae и L-формы бактерий / В.Д. Тимаков, Г.Я. Каган. М.: Медицина, 1967. - 335 с.

161. Тимаков В.Д. Микробиология / В.Д. Тимаков. М.: Медицина, 1973.-432с.

162. Тимаков, В.Д. Каган Г.Я. L-формы бактерий и семейства Mycoplasmataceae в патологии / В.Д. Тимаков, Г.Я. Каган. М.: Медицина, 1973. -392 с.

163. Толмачева, Т.А. Реверсия L-форм бруцелл in vivo и in vitro исвойства полученных ревертантов / Т.А. Толмачева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1975. - №1. - С. 145-146.

164. Толмачева, Т.А. Изучение L- трансформирующего действия на клетки бруцелл тетрациклина, стрептомицина, рифампицина и их комбинации с пенициллином в опытах in vitro / Т.А. Толмачева // Антибиотики. -1976.-№9.-С. 771-774.

165. Толмачева, Т.А. Биологические свойства и ультраструктура бруцелл в процессе L- трансформации и реверсии / Т.А. Толмачева, JI.H. Кац // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1977. - №1. - С. 90-93.

166. Толмачева, Т.А. Структура клетки и патогенность бруцелл на разных этапах L-трансформации / Т.А. Толмачева, JI.H. Кац, Н.А. Грекова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1979. - № 8. - С. 63-67.

167. Торбина, М.П. Видовые различия протеолитической активности панкреатической железы, используемой в производстве бактериологических питательных сред / М.П. Торбина // Вопр. инфекц. патологии животных. Межвузов, сб. науч. работ. Казань, 1994. - С. 66.

168. Триленко, П.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / П.А. Триленко. JL: Колос, 1976. - 280 с.

169. Тюменцева, И.С. Влияние условий культивирования на синтез бруцеллацина / И.С. Тюменцева, Е.Н. Афанасьева, Л.П. Свешникова // Антибиотики и мед. биотехнология. 1985. - №10. - С. 754-756.

170. Фомин, A.M. Активность антигенов, полученных из разных штаммов бруцелл / A.M. Фомин // Науч. труды Казанск. гос. вет. ин-та. 1980. -Т.135.-С. 101-110.

171. Хаджидимова, Д.Д. Плацентарный агар в системе упрощенных методов исследования кала / Д.Д. Хаджидимова // Лаб. практика. 1937. -№5. - С. 9.

172. Хаертынов, С.Х. Новые бактериологические препараты и питательные среды из гидролизатов белок содержащих отходов мясокомбинатов / С.Х. Хаертынов, В.А. Никитина // Ветеринария. 1991. - №4. - С. 63.

173. Хазипов, Н.З. Синтетическая среда для определения сахаролити-ческой активности бруцелл / Н.З. Хазипов, К.М. Салмаков, A.M. Алимов, Н.Ш. Зайнеев // Авт. св. СССР. №1210453, МКИЗ С 12 № 1/20, С 12 01/00, 1988, Бюлл. №11.

174. Хазипов, Н.З. Обмен аминокислот у бруцелл при их культивировании / Н.З. Хазипов, К.М. Салмаков, В.П. Корунов // Ветеринария. 1973. -№4. - С. 42-44.

175. Хватов, Б.П. Строение и физиологические изменения половой системы самок домашних животных. Симферополь, 1955. - 53 с.

176. Хейфец, М.А. Питательная среда из мясо-костной муки для кишечной группы / М.А. Хейфец // Лаб. практика. 1939. - №4. - С. 3.

177. Херц, П.Р. Гормональные взаимоотношения в системе мать плацента - плод при преждевременных родах: Автореф. дис. канд. мед. наук / Херц П. Р.-М.,- 1982.- 19с.

178. Хейфец, М.А. Питательная среда из крови / М.А. Хейфец // Лаб. практика. 1944. - №3. - С. 20.

179. Цыбин, Б.П. Сравнительная оценка методов индукции L-форм бруцелл и изучение их приживаемости в организме животных / Б.П. Цыбин, И.Ф. Таран, Н.А. Крылова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1979.-№4. -С. 66-70.

180. Шептун, Н.Г. Биохимические обоснования к получению и использованию гидролизатов фибрина и отходов производства препаратов и иммуноглобулинов: Автореф. дисс. канд. биол. наук / Шептун Н.Г. Воронеж, -1989.-22с.

181. Шин, Н.Г. Качественная характеристика аминокислотного состава бруцелл методом хроматографии на бумаге / Н.Г. Шин, О.В. Кондратьева // В кн.: Антропозоонозы в Казахстане. Алма-Ата: Наука, 1975. - 247 с.

182. Широков, В.А. Серин- и треониндегидратазы бруцелл / В.А. Широков, С.П. Меринов // Журн. микробиол., эпидемиол, и иммунобиол. -1976.-№5.-С. 135-136.

183. Шувалов, Л.П. Изучение взаимодействия Z трансформированных бруцелл с культурой перитонеальных макрофагов / Л.П. Шувалов, Т.А. Толмачева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1974. - №6. - С. 15-19.

184. Шувалов, Л.П. Характеристика иммунологического ответа у морских свинок при выделении L-форм бруцелл / Л.П. Шувалов, Т.А. Толмачева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1976. - № 7. - С. 135-136.

185. Юсупов, О.Ю. Питательная среда для изготовления вакцины из штамма В. melitensis Rev-1 / О.Ю. Юсупов // Материалы Международ, научной конференции. Махачкала, - 1998. - С. 116.

186. Alton, G. Laboratory techniques in Brucellosis / G. Alton, L. Jones // -WHO, Geneva. 1967.

187. Braun, W. Bacterial dissociation / W. Braun // Bacteriol. rev. 1947. -v. 11.-p. 75-87.

188. Brown, G. Selective media for the isolation of Brucella ovis / G. Brown, C. Ranger, D. Keliey // Cornell Vet. 1971. - v. 61. - p. 265-280.

189. Cazzere, L. et. Quatre fages, H: Apropos de lactionde certaines peptones. Triptose surles Brucella / L. Cazzere, G. Renouh // Ann. Inst. Pasteur. -1951.-v. 80.-p. 321-322.

190. Cruickshank, J. A simple method for testing dye sensitivity of Brucella species / J. Cruickshank // J. Path. Bact. 1948. - v. 60. - p. 328-329.

191. Guirard, B. Microbial nutrition / B. Guirard // Ann. Rev. #f Microbiol.- 1958. v. 12.-p. 247-278.

192. Ewalt, D. A new selective medium for the isolation Brucella spp. from bovine milk / D. Ewalt // Master of science Thesy's. Lowa State University, Atems, IA.

193. Farell, I. The development of a new selective medium for the isolation of Brucella abortus from contaminated sources /1. Farell // Res.Vet.Sci. 1974.v. 16.-p. 280-286.

194. Farell, I. A comparison of various selective media, including a new selective medium for the isolation of brucella from milk /1. Farell, I. Robertson // J. Appl. Bacterial. 1972 - v. 35. - № 4. - p. 625 - 630.

195. Gerhardt, P. The nutrition of brucellae: growth in simple chemically defined media / P. Gerhardt, J. Wilson // J. Bacterid. 1948. - v. 56. - p. 17-24.

196. Hausler, W. Brucellosis in: Diagnostic Procedures for Bacterial Mycotic and Parasitic infections / W. Hausler, F. Koonitz. 5th ed., Apha, New York, 1970.

197. Hornsby, R. Selective media for isolation of Brucella abortus strain RB 51 / R. Hornsby, A. Jensen, S. Olsen, C. Thoen // Vet. Microbiol. 2000. - v. 73. -p. 51-60.

198. Huddleson, I. Brucellosis in man and animals /1. Huddleson. Commonwealth Fund, New York., 1943.

199. Jones, L. International Committe of Nomenclature of bacteria, sub-commitee on the taxonomy of brucella / L. Jones, W. Wundt // Int. J. Syst. Bacterial. 1971. - v. 21. - p. 126-128.

200. Keness, I., Brucella melitensis grouth of lovenstein Iensen egg medium from a case of Brucella meningitis /1. Keness, I. Freiderich, M. Banai, S. Schonfeld // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 1993. - v.17. - p. 271-273.

201. Koser, S. Accessory growth factor requirements of some representatives of the Brucella group / S. Koser, B. Breslove, A. Dorfman // J. Infectious Diseases. 1941. - v. 69. - p. 114-124.

202. Koser, S. Studies on bacterial nutrition. The utilization of nitrogenous compounds of definite chemical composition / S. Koser, L. Rettger // J. Infectious Diseases. 1919. - v. 24. - p. 301-321.

203. Kuzdas, C. A selective medium for the isolation of brucellae from contaminated materiales / C. Kuzdas, E. Morse // J. Bacterial. 1953. - v. 66. - p. 502504.

204. Le Guilloux M. L'isolment de Brucella abortus sur la gelose a la dacoction de Courge ( Cucurbia maxima) et an Tween 40 / Le Guilloux M. // Rev. Med. veter. 1974. -1.125. - № 3. - p. 369 - 375.

205. Porter, J. Bacterial chemistry and phisiology / J. Porter. New York, London. - 1947.-p. 1073.

206. Rao, A. Certain biohemical profiles of the uterus of ewe (ovis aries) during estrous cycle 2. Total lipids, proteines, nucleic acids and phosphatase / A. Rao, P. Rao, S. Govindappa, S. Ramachandraiah // Indian vet. 1988, - v. 65, - № 12,-p. 1096-1099.

207. Renoux, G. Sur un milieu selectif pour lisolement de Brucella melitensis. / G. Renoux // Ann. Inst. Pasteur. 1954. - v. 87. - p. 325-333.

208. Rode, L. The cultivation of brucellae on chemically defined media / L. Rode, G. Oglesby, V. Schuhardt // J. Bacteriol. 1950. - v. 60. - p. 661 - 668.

209. Sanders, T. The nutrition of Brucella melitensis / T. Sanders, K. Higu-chi, C. Brewer // J. Bacteriol. 1953. - v. 66. - p. 294-299.

210. Schuhardt, K. The development of peptone toxicity for brucellae ith aging and the correlation of this toxicity with the probable oxidation of cystine. / K. Schuhardt, L. Rode, G. Oglesby, C. Lankford // J. Bacteriol. 1950. - v. 60. - p. 655-660.

211. Silk, D. Absorption of amino acids from an amino acids mixture simulating casein and a tryptic hydroisates of casein in man / D. Silk, T. Marre, J. Addison // Clin. Sci. Molecular med. 1973. - v. 45. - № 5. - p. 715-719.

212. Spink, W. The laboratory in diagnosis of brucellosis. / W. Spink // Amer. J. Clin. Path. 1952. - v. 22. - p. 201-210.

213. Spink, W. The nature of brucellosis / W. Spink // Univ. Minnessota

214. Press, Minneapolis, USA. -1956.

215. Stadtman, E. Metabolism of microorganisms / E. Stadtman, T. Stadtman // Ann. Rev. of Microorganisms. 1953. - v. 7. - p. 143-178.

216. Sussman, A.J. Peptide transport and metabolism in bacteria / A. Suss-man, C. Gilvard // Ann. Rev. Biochem. -1971. v. 93. - p. 397-408.

217. Weed, L. The use of a selective medium for isolation of Brucella from contaminated surgical specimens. / L. Weed // Amer. J. Clin. Path, 1957. - v.27. -p. 482-485.

218. Zobell, C. Metabolism studies on the brucella group.8. / in: Nutrient requirements in synthetic mediums / C. Zobell, K. Meyer // J. Infect. Dis. 1932. -v. 51.-p. 344-360.I

Информация о работе

Галиуллина, Эльвира Равиловна
кандидата биологических наук
Казань, 2006
ВАК 03.00.07

Диссертация

Использование плацентарно-эмбрионально-маточного гидролизата для культивирования различных микроорганизмов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы