Использование новых диагностических тест-систем для изучения этиологии и клинических особенностей острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей

Суховецкая, Вера Федотовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Использование новых диагностических тест-систем для изучения этиологии и клинических особенностей острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Использование новых диагностических тест-систем для изучения этиологии и клинических особенностей острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей"

На правахрукописи

СУХОВЕЦКАЯ Вера Федотовна

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НОВЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ЭТИОЛОГИИ И КЛИНИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ ОСТРЫХ СТЕНОЗИРУЮЩИХ ЛАРИНГОТРАХЕИТОВ У ДЕТЕЙ

03.00.06—вирусология 14.00.10—инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2004

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте гриппа Российской академии медицинских наук

Научные руководители: засл. деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор А.А СОМИНИНА

доктор медицинских наук, профессор В.П. ДРИНЕВСКИЙ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Т. В. АНТОНОВА

доктор медицинских наук С.Ф. ПРОТАСОВА

Ведущая организация: ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН

Защита диссертации состоится ££ марта 2004 года в/У часов на заседании диссертационного совета Д 001.043.01 при ГУ Научно-исследовательском институте гриппа РАМН (197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 15/17)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научно-исследовательского института гриппа РАМН

Автореферат разослан «17» февраля 2004 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.043.01 кандидат медицинских наук

Т. Г. ЛОБОВА

Обшая характеристика работы

Актуальность. Проблема острых стенозирующих ларинготрахеитов (ОСЛТ), способных вызывать угрожающие жизни состояния при острых респираторных вирусных инфекциях (ОРВИ), а в части случаев приводить и к летальным исходам за счет развивающейся обструкции верхних дыхательных путей, остается до конца не решенной (Учайкнн В.Ф. и соавт., 2000; Таточенко В.К. и соавт., 2001; Andreoletti L. et al., 2000; Chien J.W. et al.. 2000).

Частота развития ОСЛТ в зависимости от возраста, индивидуальных особенностей макроорганизма и других причин варьирует от 11,0% до 47,9%. Наиболее часто ОСЛТ регистрируются у детей раннего (до 3-х лет) возраста (Орлова С.Н. и соавт., 2000; Германенко И.Г. и соавт., 2001; Тимченко В.Н. и соавт., 2002, Dobrescu О. et al., 1992).

Возбудителями ОРВИ, протекающих с ОСЛТ, могут быть вирусы гриппа, парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) и аденовирусы, а также их ассоциации (Нацина В.К. и соавт., 1998; Marx A. et al., 1997; Rosekrans J.A., 1998). В целом, данные по этиологии ОРВИ, в том числе осложненных ОСЛТ, весьма противоречивы. По-видимому, это зависит от контингента обследуемых детей, эпидемиологической ситуации, использованных методов диагностики, качества препаратов и исследуемых клинических материалов (Иванова РА, 1997; Горбунов С.Г., 2000; Соминина А.А. и соавт., 2003; Van-Bever H.P. et al., 1999). Выраженность клинических проявлений и характер течения ОСЛТ, развивающихся при ОРВИ, отличаются разнообразием (Учайкин В.Ф. и соавт., 1999; Тимченко В.Н. и соавт., 2001; Алферов В.П. и соавт., 2002).

Расширение возможностей в изучении этиологически детерминированной клинической картины ОСЛТ базируется на использовании методов быстрой лабораторной диагностики. В клинической практике для решения этих задач, применяется иммунофлуоресцентный (ИФЛ) метод выявления вирусных антигенов в клетках эпителия нижних носовых ходов с использованием препаратов флуоресцирующих иммуноглобулинов поликлональ-ного типа (Ф-ПКА) к разным респираторным вирусам (Милькинт К. К. и соавт., 2000), получаемых из гипериммунных сывороток лабораторных животных.

(МКА) для конкретного диагностическо г ;ада-

чей, определяющей саму возможность создания нового поколения стандартизованных препаратов, отвечающих требованиям высокой чувствительности и специфичности. При этом клинико-лабораторная апробация является заключительной стадией исследования, определяющей целесообразность внедрения новых диагностических препаратов в практику здравоохранения.

Ранняя расшифровка этиологии ОРВИ, в том числе осложненных ОСЛТ, важна для назначения специфической этиотропной терапии, профилактики внутрибольничных инфекций путем размещения больных в боксированных палатах по этиологическому принципу, а также для прогнозирования тяжести последующего развития патологического процесса.

За последние годы в ГУ НИИ гриппа разработаны панели МКА, биологические свойства которых изучены в лабораторных условиях, однако их широкой клинической апробации до настоящей работы проведено не было.

Сказанное определяет актуальность выбранного направления исследования.

Цель исследования. Изучение диагностических параметров новых тест-систем и этиологии острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей с разработкой клинических дифференциально-диагностических критериев развития заболевания.

Задачи исследования.

1. Определить диагностические параметры новых тест-систем моно-клонального типа при диагностике ОРВИ, в т.ч. осложненных стенозами гортани.

2. Оценить возможности и целесообразность применения новых мо-ноклональных иммунореагентов при этиологической расшифровке ОСЛТ вирусной природы в клинических условиях.

3. Установить удельный вес различных респираторных вирусов (гриппа, парагриппа, РСВ и аденовирусов) в этиологической структуре ОСЛТ у детей с использованием всего спектра разработанных к настоящему времени диагностических препаратов и методов.

4.' Изучить особенности клинического течения ОСЛТ в зависимости от их этиологии в целях прогнозирования тяжести и возможных исходов заболеваний.

Научная новизна. Впервые проведена широкая клинико-лабораторная апробация новых конъюгатов МКА с флуоресцеин нзотио-цианатом (ФИТЦ), разработанных в отделе биотехнологии ГУ НИИ гриппа РАМН, при быстрой дифференциальной диагностике ОРВИ у детей.

В клинических условиях впервые определено, что Ф-МКА, в том числе направленные к Б-белку вируса парагриппа 2 типа, к нуклеопротеи-ну (НП)*вирусов~ гриппа .типа. А, к гемагглютинину (ГА) вирусов гриппа типа В; к Р^бёлку' РСВ'и'К ге'ксону аденовирусов, являются реагентами.

высоко перспективными для использования в диагностических ИФЛ реакциях.

Впервые проведена клинико-лабораторная апробация новых вариантов иммуноферментных тест-систем (ИФТС) моноклонального типа для выявления вирусных антигенов в носоглоточных смывах и аспиратах. Установлено, что результаты детекции респираторных вирусов в аспиратах были значительно выше, чем в смывах.

Разработаны клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ, у детей и установлена их связь с этиологией заболеваний.

Практическая значимость работы. Проведенные исследования эффективности быстрой этиологической диагностики ОСЛТ с использованием ИФЛ метода показали высокую перспективность применения новых препаратов Ф-МКА в клинико-лабораторной практике.

Установлено, что препараты Ф-МКА обеспечивают более яркую специфическую флуоресценцию пораженных вирусом клеток при полном отсутствии фонового свечения, что существенно облегчает интерпретацию результатов анализа.

Быстрая постановка диагноза с помощью ИФЛ метода открывает широкие возможности для назначения ранней этиотропной противовирусной терапии, позволяет исключить применение антибиотиков, а также принять меры по предупреждению развития нозокомиальных микст-инфекций.

Установлено, что частота обнаружения вирусных антигенов с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) зависит от способа получения клинических материалов и может быть существенно повышена при использовании назофарингиальных аспиратов (вместо носоглоточных смывов).

Разработанные клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ, в совокупности с данными лабораторной этиологической диагностики, позволяют оценить тяжесть заболевания и прогнозировать его последующее течение, а также избрать правильную врачебную тактику и тем самым улучшить исход болезни.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Новые препараты Ф-МКА к вирусам парагриппа, гриппа типов А и В, РСВ и аденовирусам, впервые широко апробированные в клинико-лабораторной практике при определении этиологии ОРВИ, в том числе осложненных ОСЛТ, являются высоко перспективными нммунореагентами, которые могут быть использованы для быстрой детекции вирусных антигенов в клинических материалах.

2. Использование Ф-МКА позволило повысить уровень стандартизации и надежность ИФЛ метода, достигаемой, за счет большей яркости спе-

цнфического свечения, отчетливой локализации внутриклеточных вир\с-ных антигенов при отсутствии фоновых реакций, что облегчает интерпретацию результатов анализа (при сравнении с аналоговыми препаратами поликлонального типа).

3. Установлено, что в этиологии ОСЛТ наибольшую значимость имеют вирусы парагриппа (преимчшественно 2 серотипа). Следующими по частоте являются аденовирусы, РСВ, вирусы гриппа типов А и В (с возрастающей ролью последних в период эпидемий).

4. Разработанные клинические дифференциально-диагностические критерии позволяют оценить тяжесть ОРВИ, осложненных ОСЛТ, что в совокупности с результатами лабораторной диагностики служит основанием для прогнозирования характера дальнейшего развития заболевания и разработки новых терапевтических подходов з целях снижения риска развития тяжелых форм стеноза и предупреждения летальных исходов.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 35-летию со дня основания ГУ НИИ гриппа РАМН «Новые препараты в профилактике, терапии и диагностике вирусных инфекций» (Санкт-Петербург, 2002), на Всероссийском научно-практическом обществе эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2002г.), на Межрегиональном Совещании специалистов Опорных баз Федерального Центра по гриппу и ОРЗ «Подготовка к эпидсезону 2003-2004 гг.» (Санкт-Петербург, 2003 г.).

Материалы исследований внедрены в практику работы инфекцион-но-боксового и инфекционно-пульмонологического отделений Детской городской больницы Святой Ольги и инфекционно-боксового отделения Детской инфекционной больницы №5 им. Н.Ф. Филатова. Основные положения работы используются в учебном процессе клинической ординатуры для педиатров на базе отделения гриппа и ОРЗ детей ГУ НИИ гриппа РАМН, а также в учебном процессе для слушателей Медицинской академии последипломного образования (Санкт-Петербург) и студентов Государственной педиатрической медицинской академии.

Публикации. По материалам исследования опубликовано 15 научных работ, в т.ч. методические рекомендации, методическое пособие для врачей, 2 статьи в ведущих отечественных журналах, тезисы в сборниках конференций, съездов и конгрессов РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 4-х глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 164 страницах машинописного текста, включая 31 таблицу и 4 рисунка. Список литературы содержит 230 источников (124 отечественных и 106 зарубежных авторов).

Собственные результаты и нх обсуждение

Материалы и методы исследований

Структура исследования. На первом этапе работы была создана специальная компьютерная база данных с целью накопления и обработки сведений, полученных как в результате ретроспективного анализа истории болезни, так и при проспективном обследовании больных, у которых диагноз был верифицирован совокупностью данных лабораторной диагностики.

На втором этапе исследований проведена разработка дифференциальных признаков отдельных вирусных инфекций с оценкой их информационной значимости при развитии ОСЛТ. Для этого определяли частоту встречаемости различных клинических признаков, отражающих течение ОРВИ, осложненных ОСЛТ. Кроме этого, проводили сравнительный анализ развития проявлений клинической симптоматики ОСЛТ при респира-торно-вирусных моноинфекциях различной природы и характера течения острого периода заболевания. Для обработки данных использовали парный корреляционный анализ различных признаков развития ОСЛТ с определением уровней корреляционной связи. Достоверность различий оценивали по критерию «1» Стыодента.

На следующем этапе исследования, выделенные информативные признаки были использованы для разработки клинических дифференциально-диагностических критериев развития респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ.

Клинические материалы В ходе выполнения работы в совокупности были проанализированы результаты клинического и лабораторного обследования 797 детей в возрасте от I мес. до 14 лет с ОРЗ, в т.ч. осложненных ОСЛТ (643 пациента), госпитализированных в базовые отделения клиники гриппа и ОРЗ детей ГУ НИИ гриппа РАМН г. Санкт-Петербурга. Из них у 525 детей диагностирована респираторно-вирусная моноинфекция (пара-гриппозной, гриппозной, РСВ и аденовирусной этиологии) и проведено изучение клинических особенностей ОСЛТ.

Определение диагностических параметров новых моноклональных ИФЛ тест-систем проведено на клинических материалах от 169 пациентов, ИФТС моноклонального тила - от 369 больных, которые находились на лечении в инфекционно-боксовом отделении ДГБ Св. Ольги в период с 1999 по 2003 гг.

Лаворапюрно-диагностические исследования Клинико-лабораторная апробация новых препаратов Ф-МКА к различным возбудителям ОРВИ выполнялась в сравнении с аналоговыми препаратами Ф-ПКА, а также другими диагностическими тестами, включая новые варианты ИФТС мо-ноклонального типа для выявления вирусных антигенов в носоглоточных материалах, выделение возбудителей и серологические исследования.

ИФЛ обнаружение вирусных антигенов осуществляли в эпителиальных клетках из нижних носовых ходов, взятых у пациентов в первые три дня от начала заболевания. Исследовали диагностические параметры новых препаратов Ф-МКА, включая 1С6 к НП вирусов гриппа типа А, 4Н7 к ГА вирусов гриппа типа В, 2PIV-3/26 к F-белку вирусов парагриппа 2 типа. 9С5 к F-белку РСВ, 7FI к гексонному антигену аденовирусов. Перед проведением диагностических исследований определяли красящие титры ФИТЦ-МКА с использованием тест-объектов - инфицированных клеточных культур и назофарингиальных мазков от больных ОРВИ.

В качестве препаратов сравнения использовали сертифицированные в России «Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие» для индикации антигенов вирусов гриппа A(H1N1), A(H3N2), В, парагриппа 1, 2 и 3 серотипов, РСВ и аденовирусной инфекции, выпускаемые ООО «Предприятие по производству диагностических препаратов» при ГУ НИИ гриппа РАМН.

Помимо ИФЛ метода для выявления вирусных антигенов в смывах из носоглотки, полученных в острой стадии заболевания, использовали прямой твердофазный ИФА. Применяли экспериментальные серии новых моноклональных ИФТС, в т.ч. «Грипп-виротест типа А», «Грипп-виротест типа В», «РС-виротест» и «Адено-виротест». В состав тест-систем на стадии детекции использовали конъюгаты перечисленных выше МКА с пе-роксидазой хрена (ПОХ).

Препараты Ф-МКА и ИФТС были разработаны и изготовлены специалистами лаборатории биотехнологии диагностических препаратов НИИ гриппа РАМН.

Для подтверждения вирусной этиологии заболевания в этой же лаборатории, а также в лаборатории эволюционной изменчивости вирусов гриппа проводили выделение респираторных вирусов в клеточных культурах. Вирусы гриппа типов А и В культивировали в культуре клеток MDCK, вирусы парагриппа 1, 2 и 3 типов - в клеточной культуре МА-104, РСВ -ФЛЭЧ и МА-104, аденовирусы - в клетках НЕр-2, Vero, которые получали из лаборатории клеточных культур ГУ НИИ гриппа РАМН.

Парные сыворотки крови, взятые в острый период и в стадии рекон-валесценции, исследовали с помощью традиционных тестов (РТГА, РСК и РНГА) для определения достоверных сдвигов в содержании специфических антител, а также с использованием новых ИФТС с дифференциацией противовирусных антител по классам иммуноглобулинов. Дополнительно в парных материалах из носовой полости определяли изменения титров антител в РНГА.

Статнстическлчо обработку'репчьпшпюв проводили с помощью IBM PC с использованием прикладных программ Microsoft Excel 7,0 и Sta-tistica 5 для Windows.

Оценку чувствительности и специфичности новых лабораторных тестов проводили по методу Buck and Cart (1966), широко используемому в современных исследованиях (Stout С, et al., 1989; Chomel JJ. et al., 1992).

Этнологическая структура ОРВИ, в т.ч. осложненных стенозами гортани, у госпитализированных детей. Результаты комплексного лабораторного обследования детей в возрасте от 1 мес. до 14 лет с применением новых и традиционных диагностических тест-систем показали, что ОРЗ (как с ОСЛТ, так и без него), требующие госпитализации, в 80,0% случаев имеют вирусную природу. Микст-инфекции регистрировали при осложненных ОСЛТ и не осложненных формах заболевания (в 19,8% и 18,7% случаев, соответственно) в различных сочетаниях (чаще встречались аде-но-РСВ, гриппозно-РСВ и гриппозно-аденовирусные ассоциации). Моно-ннфекции были определены у 41,5% больных (в т.ч. с ОСЛТ - у 26,3%, без стеноза - у 15,2%). Выявленные микст-инфекции не являлись причиной нозокомиальных инфекций, поскольку регистрировались с помощью ИФЛ метода в первые часы поступления больных в стационар. Вероятной причиной микст-инфекций, потребовавших госпитализацию, могло служить инфицирование ребенка на фоне хронической или длительно персисти-рующей вирусной инфекции (Аксенов О.А. и соавт., 1996; Яковлева Н.В., 1994). Нельзя исключить и наслоение одной острой вирусной инфекции на другую (особенно в период развития эпидемий гриппа).

Детальные ИФЛ исследования значимости отдельных респираторных вирусов в структуре ОРЗ (на материалах обследования 369 больных) показали, что наиболее частой причиной ОСЛТ являются вирусы парагриппа (до трети всех случаев), что в целом согласуется с данными других исследователей (Дорогая Л.Д. и соавт., 1995; Вахидов Н.Х., 1995; Миль-кинт К.К. и соавт., 2000; Levy J., 1994; Marx A. et al., 1997; Rosekrans J.A., 1998). Необходимо отметить, что если РСВ и аденовирусы встречались в равной пропорции при ОРВИ со стенозом гортани и без него, то вирусы парагриппа 2 и 3 типов регистрировали, соответственно, в 4,4 и 7,3 раза чаще при ОСЛТ, чем при других клинических формах заболеваний (рис. 1). Участие вирусов гриппа A(H1N1), A(H3N2) и В в развитии ОРЗ носило строго сезонный характер и коррелировало с развитием эпидемий в г. Санкт-Петербурге (январь - февраль месяцы). В другие месяцы грипп регистрировали в небольшом проценте случаев.

25т

хО

ПП ПП 11ГЗ ЛОНЖ) Л(ШМ2) В РСВ АДВ

Этиология заболевания

Обозначения: ПП, ПГ2 и ПГЗ - вирусы парагриппа 1.2 и 3 типов; A(H1N1), A(H3N2) и В - вирусы гриппа; РСВ - респираторно-сшшитиальный вирус; АДВ - аденовирусы.

Рис. 1. Удельный вес возбудителей в этиологии ОРВИ, осложненных (Ц) и не осложненных ( Ц ) ОСЛТ, по результатам комплексного лабораторного обследования детей, госпитализированных в ДГБ Св.Ольги в период с 1999 по 2003 гг.

Результаты клннико-лабораторион апробации современных препаратов флуоресцирующих антител поликлоналмшготнпа (Ф-ПКА).

За последние годы в технологии производства ФИТЦ-ПКА введено ряд усовершенствований, что отразилось на качестве препаратов. В целях определения точности и полноты диагностирования вирусных ОРЗ ИФЛ методом, проведено сопоставление результатов, полученных при использовании Ф-ПКА к разным респираторным вирусам, с совокупными данными других лабораторных тестов, включая выделение возбудителей на клеточных культурах, обнаружение вирусных антигенов моноклональными тест-системами, а также серологические исследования и определение приростов титров антител в секретах слизистых оболочек носовой полости (табл. 1). Анализ диагностических параметров показал, что ФИТЦ-ПКА являются высоко чувствительными (89,3-96,7%) и специфичными (96,599,4%) реагентами, по существу дающими исчерпывающую информацию по расшифровке этиологии ОРЗ, и могут быть использованы в качестве референс-препаратов при оценке диагностических параметров новых тест-систем. О высоких показателях диагностирования ОРВИ ИФЛ методом сообщалось и другими исследователями (Нуая Z. et а1., 1996; Hadziyannis E. el

al., 1999; Irmen K.E. et al., 2000). хотя, по другим данным, чувствительность ИФЛ теста при диагностике, например, аденовирусной инфекции, была значительно ниже, чем выделение возбудителей (Todd SJ. et al. 1995). Очевидно, что результативность теста зависит от целого ряда факторов, важнейшими из которых является качество использованных препаратов и методология самого исследования.

Таблица 1.

Диагностические параметры ИФЛ метода с использованием ФИТЦ-конъюгатов поликлонального типа в сравнении с совокупными результатами диагностики другими лабораторными тестами

Диагностируемая инфекция ИФЛ метод, ФИТЦ -ПКА Совокупные результаты других лабораторных тестов Диагностические параметры (%) *

Чувствительность Специфичность Общее совпадение

+ -

Парагрипп + 60 4 95.2 98,1 97,4

- 3 203

Грипп А + 58 5 96,7 96,5 98,1

- 2 304

Грипп В + 41 2 91,1 99,4 98,4

- 4 322

РС-вирусная + 126 2 94,0 99,1 97,3

- 8 233

Аденовирусная + 136 2 89,3 99,1 95,1

- 16 215

Примечание: (+) - положительный результат диагностики; (-) - отрицательный результат диагностики; * - анализ выполнен по методу Buck and Cart, 1966.

Клинико-лабораторния апробация новых препаратов флуоресцирующих антител моноклоналыюго типа (Ф-МКА). Проведено исследование новых препаратов Ф-МКА в сравнении с аналоговыми конъюга-тами Ф-ПКА при выявлении антигенов респираторных вирусов прямым ИФЛ методом в клинических материалах от 169 больных ОРЗ, в т.ч. осложненных ОСЛТ. Полученные результаты (чувствительность 92,1-97,4%, специфичность 96,2-98,7%, общее совпадение положительных и отрицательных ответов 95.3-98,2%) свидетельствуют о равноценности диагностических параметров препаратов ФИТЦ-ПКА и ФИТЦ-МКА, каждый из ко-

торых может быть рекомендован для быстрой диагностики ОРВИ (табл. 2). Следует отметить, однако, что препараты Ф-МКА обеспечивали более яркую специфическую флуоресценцию пораженных вирусом клеток при полном отсутствии фонового свечения, что существенно облегчало интерпретацию результатов.

Таким образом, в расширенных клинико-лабораторных исследованиях установлены высокие диагностические параметры препаратов ФИТЦ-МКА (в продолжение ранее выполненных ограниченных исследований по отбору наиболее перспективных моноклонов для ИФЛ анализа), что позволяет рекомендовать их для внедрения в практику здравоохранения.

Таблица 2.

Сравнительный анализ результатов выявления антигенов респираторных вирусов ИФЛ методом с использованием ФИТЦ-конъюгатов моноклональных и поликлональных антител

Препараты Диагностические параметры (%)

Диагностируемая инфекция Ф-МКА Ф-ПКА

Наименование Эпитопная направленность Результаты + - Чувствительность Специфичность Общее совпадение

Парагрипп 2Р1У- Р-белок + 35 5 92,1 96,2 95,3

(2 серотипа) 3/26 - 3 126

Грипп А 1С6 НП* + 37 2 97,4 98,5 98,2

- 1 129

Грипп В 4Н7 ГА* + 19 2 95,0 98,7 98,2

- 1 147

РС-вирусная 9С5 Р-белок" + 41 3 93,2 97,6 96,4

- 3 122

Адено- 7Р1 Гексон + 40 4 95,2 96,9 96,4

вирусная - 2 123

Примечание: моноклональные антитела получены совместно со специалистами: * - ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии (г. Покров); **- Ц НИИ рентгено-радиологических исследований (Санкт-Петербург); ВНЦ молекулярной диагностики и лечения (Москва).

Клиипко-лабораторная апробация новых моноклональных им-мунофсрментных тест-систем (ИФТС). Проведены клинико-лабора-торные исследования новых вариантов ИФТС детекции антигенов основных возбудителей ОРЗ (гриппа, парагриппа, РСВ и аденовирусов), в состав

которых введены ПОХ-конъюгаты МКА к перечисленным респираторным вирусам. Совместно со специалистами лаборатории биотехнологии диагностических препаратов исследовали клинические материалы (наэофарин-гиальные смывы) от 369 больных ОРЗ, в т.ч. осложненных ОСЛТ. Проведено сравнение результатов ИФА с совокупными данными, полученными при использовании всего арсенала диагностических средств: выделение вирусов в клеточных культурах, обнаружение вирусных антигенов ИФЛ методом, определение нарастания титров сывороточных антител традиционными методами (РСК, РТГА, РИГА) и в ИФА, а также приростов титров секреторных антител (РИГА). Установлено, что использование ИФА позволяет, в отличие от ИФЛ метода, проводить одномоментно большое число анализов. В одном опыте может быть проанализировано до 300-400 клинических материалов. Показано, что чувствительность (64,5-85,4%) ИФА детекции вирусных антигенов в носоглоточных смывах от больных на ранних стадиях заболевания уступала ИФЛ методу, а при выявлении антигенов аденовирусов (смесь МКА 1Е11 и 7Б1) - и по специфичности (табл. 3).

Таблица 3.

Сравнительный анализ выявления антигенов респираторных вирусов

моноклонапьными ИФТС и совокупных результатов других __лабораторных тестов__

Диагно- Иммуноферментный способ детекции вирусных антигенов Совокупные результаты других лабораторных методов Диагностические параметры (%) *

стируемая МКА Общее совпадение

инфекция Наименование Эпитопная направленность Результаты + - Чувствительность Специфичность

Грипп А 1С6 НП* + 40 3 64,5 99,0 93,2

- 22 304

Грипп В 4Н7 ГА* + 29 2 • 69,0 99,4 95,9

- 13 325

РС- 9С5 Р-белок" + 97 13 72,9 95,3 86,7

вирусная - 36 223

Адено- Смесь Гексон + 134 67 85,4 68,4 75,6

вирусная 1Е11 и 7Р1 - 23 145

Примечание: обозначения те же, что и в табл. I и 2.

Было высказано предположение, что это явление связано с низкой концентрацией вирусных антигенов в смывах. Для его проверки было проведено сопоставление результатов диагностирования РСВ инфекции при параллельном использовании в качестве клинических материалов носоглоточных смывов и аспиратов от 25 больных. Аспираты перед анализом разводили 5 раз с помощью фосфатно-солевого буфера. Действительно, оказалось, что РСВ обнаруживался в 2,4 раза чаще в аспиратах, чем в смывах (у 12 и 5 пациентов, соответственно), причем результаты детекции РСВ в аспиратах были подтверждены другими лабораторными диагностическими тестами. Эти результаты хорошо согласуются с литературными данными о необходимости совершенствования не только самих диагностических препаратов, но и способов получения и хранения клинических образцов от больных (Соминина А.А. и соавт., 1996; Hendry R.M. et al., 1985).

Анализ диагностических параметров традиционных и новых лабораторных тест-снстем. Проведен анализ чувствительности метода изоляции вирусов респираторной группы в клеточных культурах. Вирусы парагриппа были выделены в 10,6% случаев, вирусы гриппа типа А и В - в 28,8% и 13,5%, соответственно, РСВ - в 13,9% и аденовирусы - в 21,7% случаев от числа обследованных детей. Определено, что метод изоляции вирусов нуждается в дальнейшем совершенствовании с повышением чувствительности используемых клеточных культур, так как данный диагностический параметр варьировал в достаточно широких приделах (от 54,8% до 83,3%) при 100% специфичности. Частота выделения вирусов может зависеть от ряда сопутствующих факторов (условия транспортировки, хранения клинических материалов, состояние клеточных культур, качество питательных сред и др.), поэтому в качестве подтверждающего теста при разработке новых диагностических препаратов необходимо использовать и другие лабораторные методы (Соминина А.А и соавт., 2003). Это положение подтверждается последними данными, показавшими, что метод выделения вирусов, ранее расцениваемый как «золотой стандарт», существенно уступает по чувствительности полимеразной цепной реакции (Горбунов С.Г., 2000; Morishita Т. et al., 1992).

При оценке диагностических параметров новых (ИФА) и раннее разработанных (РТГА, РИГА, РСК) серологических методов оказалось, что их результативность зависит от диагностируемой инфекции. Так, при диагностике парагриппа наиболее полная (96,7%) расшифровка этиологии достигается при использовании РТГА для определения типоспецифических се-роконверсий. При использовании ИФТС для определения сероконверсий к 2 и 3 серотипу парагриппа (тип 1 не определяли) показатель чувствительности составил 89.4%, при сходной с РТГА (86,5%) специфичностью.

Достаточно высокие показатели чувствительности (88,2-93,3%) и специфичности (83,3-91,6%) ИФТС были зарегистрированы при детекции

антител к вирусам гриппа А и В. Оошее совпадение положительных и отрицательных результатов с данными других методов составило 86,3-90,8%.

При серодиагностике. РСВ инфекции наиболее точные результаты получали при использовании ИФА, при котором чувствительность метода (88.3%) превышала другие тесты (РИГА, РСК) на 9,8-12,5%. а показатель специфичности достигал 96,1% в отличие от наименее специфичной (79,7%) из исследуемых реакций - РИГА.

При определении теми же методами (РСК, ИФА, РИГА) сероконвер-сий к аденовирусам достоверных отличий по чувствительности выявлено не было, однако наиболее высокая специфичность (98,1%) была выявлена у ИФА, которая превышала на 19,3% аналоговый показатель для РНГА и на 7%-РСК.

Показатели чувствительности и специфичности РНГА при определении местного иммунитета (секреты слизистой оболочки носовой полости) оказались относительно невысокими - 75,5% и 83,9% при РСВ инфекции и 76,7% и 85,5% при заболеваниях аденовирусной этиологии, соответственно. Учитывая щадящий метод получения клинических материалов, что особенно важно при обследовании детей, по-видимому, целесообразно разработать чувствительные варианты ИФА для определения конверсии вирусспецифических иммуноглобулинов класса А в носовых секретах с определением диагностической значимости этого метода.

Клинические особенности ОСЛТ при респираторных вирусных моиоиифекцинх различной этиологии. В целях выявления клинических особенностей ОСЛТ, развивающихся при вирусных моноинфекциях различной этиологии, были изучены проявления этого синдрома у 525 детей в возрасте от 1 мес. до 14 лет. Гриппозная инфекция была документирована лабораторными тестами у 164 больных (31,2%) (в т.ч. типа А в 23,4% и типа В в 7,8% случаев), парагриппозная - у 140 (26,7%), РСВ - у 117 (223%) и аденовирусная инфекция - у 104 больных (19,8%).

Установлено, что при всех инфекциях первичную форму ОСЛТ дети переносили в 72,1-89,0% случаев, а повторную и рецидивирующую формы чаще регистрировали при парагриппе (19,3 и 8,6%, соответственно). Также при парагриппе в большинстве случаев (54,3% ) развивался стеноз II степени, а при других инфекциях - I степени (68,3-71,4%). Наиболее тяжело протекающие стенозы (Ш степени) регистрировали у 0,8-1,4% госпитализированных детей при различной этиологии заболевания (табл. 4).

Анализируя состояние больных с ОСЛТ, следует отметить, что тяжелые формы заболевания, обусловленные выраженностью интоксикационного синдрома, развивались, как правило, при гриппе (21,3% случаев), а с преобладанием выраженности симптомов стеноза гортани - при парагриппе (15,0%).

Анализ частоты развития ОСЛТ в зависимости от пола показал, что стенозы гортани регистрировались чаще у мальчиков (от 59,8% до 77,9%),

вне зависимости от этиологии заболевания. Установлена, что это осложнение развивалось преимущественно у детей в возрасте от двух до трех лет, что нашло свое подтверждение и у других исследователей (Орлова С.Н. и соавт., 2000; Германенко И.Г. и соавт., 2001; Smith F.S. et al., 1994). Показано, что среди детей раннего возраста (до 3-х лет) при ОСЛТ чаше диагностировались парагриппозные (46,7%) и РСВ инфекции (57,3%).

Таблица 4.

Распределение больных ОСЛТ в зависимости от клинических проявлений и этиологии заболевания

Клинические проявления Частота регистрации клинических про при ОСЛТ различной этиологии явлений %)

Гриппозной'" (п=164) Пара-гриппозной'2' (п=140) РС-вирусной (п=117) Аденовирусной (п=104)

Форма стеноза Первичная 89,0"* 72,1"' 85.5" 86,5"J

Повторная 7,3*" 19,3'' 10,2" 9.6"

Рецидивирующая 3,7 8,6 4,3 3,9

^Степень стеноза I 71 A"i 44,3*"' 70, Г' 68.3"J

11 21,А"' 54,3"' 29,1"2 30,8"2

III 1.2 1,4 0,8 0,9

Форма тяжести Средне-тяжелая 78,7 85,0 88,9м 90,4м

Тяжелая 21,3 15,0 1ММ 9,6м

Примечание: п - количество детей; степень достоверности: *-р<0,05, **-р<0,001 в при сравнении с гриппом'" и парагриппом'2'.

Анамнестический фон, на котором развивались стенозы, был различным, однако, в большинстве случаев у детей с ОСЛТ аденовирусной этиологии в анамнезе достоверно чаше отмечались повторные ОРЗ (75,0%), аллергические дерматозы (55,8%) и ЛОР-патология (16,3%), которые при других вирусных инфекциях регистрировались реже. Достоверной зависимости характера развития клинической симптоматики ОСЛТ различной вирусной этиологии от других показателей преморбидного фона (недоношенность, раннее искусственное вскармливание, рахит и перинатальная энцефалопатия) выявлено не было.

При вовлечении в инфекционный процесс нижних дыхательных путей клинические признаки острого бронхита наблюдались в большинстве случаев у детей с РСВ инфекцией (50,5%), чем при других ОРВИ (7,9-17,3%).

У 3,6-9,1% детей с ОСЛТ различном вирусной этнологии диагностировались пневмонии.

Изучение бактериальной микрофлоры слизистой ротоглотки и носовой полости у 233 детей с ОСЛТ показало, что в качестве сопутствующего микроорганизма преобладал Streptococcus pneumonia (выделяли в 20,3% случаев при гриппе и в 7,3-11,3% при других ОРВИ). Staphylococcus aureus чаще встречался при гриппе (8,7%), a Klebsiella pneumonia, E.coli, H.influenza и Enterobacter - при аденовирусной инфекции (в совокупности до 9.1%). Streptococcus pyoqenes и Streptococcus hemolitica при изученных вирусных инфекциях регистрировали в 1,8-5,5% случаев. Необходимо учитывать, что бактериальная инфекция при ОСЛТ выступает, как правило, в роли вторичной, наслаивающейся на вирусную инфекцию, а высев бактериальной флоры не всегда указывает на ее роль в развитии стеноза, что согласуется с литературными сведениями (Марков И.С., 1990; Schumacher R.F.etal.,1993).

Анализ гематологических данных в остром периоде всех вирусных моноинфекций с, ОСЛТ показал преобладание лейкопении (у 65,4-86,6% больных) и нормальной СОЭ (63,4-92,3% случаев). Раннее развитие ней-тропении чаще регистрировали при РСВ и аденовирусной инфекциях (26,5% и 24,0% случаев, соответственно), лимфоцитоза - в 41,0% случаев при РСВ инфекции. Анемия наблюдалась в большинстве у детей с гриппом (20,1%), эозинофилия - при РСВ инфекции (6,0%). В периоде ранней ре-конвалесценции (7-11 день) лейкопения сохранялась при всех вирусных моноинфекциях в 45,0-60,6% случаев, СОЭ нормализовалась у 78,7-98,3% детей, нарастала нейтропения (32,5-44,2% случаев) и лимфоцитоз (35,748,1% случаев) чаще у детей с парагриппозной, РСВ и аденовирусной инфекциями. Анемия отмечалась у детей с ОСЛТ только гриппозной этиологии (6,1%), а эозинофилия - при РСВ инфекции (2,6%). Таким образом, динамика гемограмм отражала стадию инфекционного процесса, характерного для вирусного заболевания, и приобретала диагностическое значение в совокупности с клиническими признаками и лабораторными данными по этиологии заболевания.

Детальное изучение начального периода развития ОСЛТ при парагриппе показало, что у большинства детей стеноз гортани развивался внезапно на фоне полного здоровья (65,7%) (чаще ночью с грубого «лающего» кашля), реже - в первые два дня заболевания при наличии уже имеющихся клинических признаков парагриппозной инфекции в виде триады симптомов - грубый «лаюшцй» кашель, осиплость голоса, шумное стенотическое дыхание. Клиническая симптоматика ОСЛТ парагриппозной этиологии обычно развивалась в сочетании с умеренно или слабо выраженной интоксикацией (87,1% случаев) и умеренно выраженным с 1-го дня болезни катаральным синдромом с экссудативным компонентом (72,9% случаев). ОСЛТ при гриппе в большинстве случаев начинался внезапно на фоне ин-

токсикации (62,2%), с повышением температуры тела до 39°С и выше. Развитие клинических проявлений ОСЛТ гриппозной этиологии наблюдалось в сочетании с сильно выраженным синдромом интоксикации (87,8% случаев) и скудным со 2-3 дня болезни катаральным синдромом со слабыми экссудативными явлениями (91,5%). При РСВ и аденовирусной инфекциях стеноз развивался как в первые два дня заболевания, так и на более поздних сроках (3-5 сутки) в виде указанной выше триады или одного (двух) клинических симптомов ОСЛТ с последующим присоединением других признаков. Клиническая симптоматика ОСЛТ при РСВ инфекции развивалась в сочетании со слабо выраженным синдромом интоксикации (89,7%) и с постепенным нарастанием катарального синдрома (73,5%). При аденовирусной инфекции ОСЛТ, как правило, сочетался с умеренно выраженным синдромом интоксикации (87,5%), но ярким катаральным синдромом с сильно выраженными явлениями экссудативного воспаления, начиная с первого дня болезни (85,6%) (табл. 5).

Таблица. 5.

Клинические признаки при вирусных моноинфекциях, протекающих с ОСЛТ

Клинические признаки Частота встречаемости клинических признаков в зависимости от этиологии заболевания(%)

Гриппозная"» (п=164) Парагрип-позная'2' (п= 140) РС-вирусная (п=117) Аденовирусная (п=Ю4)

Выраженные интоксикация 87,8*'2 12,9"' 10,3"' 12,5"'

катаральный синдром 8,5*"' 27,Г' 73.5"' 85,6"'

Начало стеноза Внезапно на фоне полного здоровья 10,4*" 65,7"' 24,9м"2 9,б"2

интоксикации 62,2'" 6,4"' 8,5"' 8,7"'

Остро на фоне ОРВИ 1 день 15.2"' 20.7 25.6м 22,1

2 день 12,2 7.2 23,9*'"2 19,2"

3-5 день начала ОРВИ остро 0 0 7.7 11.5

постепенно 0 0 9,4"'" 28,9"'"

Примечание: п - количество детей; степень достоверности: *-р<0,05 **-р<0,001 в сравнении с гриппом'" и парагриппом'2'.

Таблица 6.

Клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных _вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ. у детей_

Признаки Грипп п ! рсв Парагрипп , ! инфекция Аденовирусная инфекция

Возрастная категория 1 год и старше От 1г. до 7 лет От 6 мес.до 5 лет От 1 г. до 7 лет

Начало ОСЛТ Внезапно на фоне интоксикации Внезапно на фоне полного здоровья Остро на фоне ОРВИ Остро на фоне ОРВИ

Осиплость голоса Выраженная Выраженная Умеренная Выраженная или умеренная

Кашель Грубый «лаю-щий»сухой Грубый «лающий» сухой «Лающий», приступообразный, спастический «Лающий», мало продуктивный

Одышка Инспиратор-ная Инспиратор-ная Инспиратор-ная (или смешанная) Инспиратор-ная

Степень стеноза 1 I или II I I

Ведущий синдром Интоксикация Катаральные явления Обструкция бронхов Явления экс-су дативного воспаления

Выраженность интоксикации Сильная Умеренная или слабая Слабая Умеренная

Температура тела 39°С и выше 37П-38°С 37,0"-38,0°С 38°-39°С

Катаральный синдром Скудный со 2-3 дня болезни Умеренный с первого дня болезни Слабо выраженный с постепенным нарастанием Сильно выраженный с первого дня бо-• лезни

Экссудатив-ный компонент Слабый Умеренный Необильный Обильный

Гиперемия в ротоглотке Умеренная Слабая Слабая Яркая

Другие проявления Инъекция сосудов склер, носовые кровотечения Отсутствуют Отсутствуют Конъюнктивит; увелич. лимфоузлов печени; синдром энтерита

Интоксикация и катаральный синдром были менее продолжительными при парагриппе (3,66+0,17 дней и 6,61+0.25 дней, соответственно). При других инфекциях интоксикация длилась от 4,67+0,28 до 5,83+0.37 дней. Катаральный синдром дольше сохранялся при РСВ и аденовирусной инфекциях (9,17+0,32 и 8.22+0,35 дней, соответственно).

Установлено, что стенотическое дыхание сохранялось дольше при РСВ инфекции (2,05+0,14 дней) и характеризовалось не только затрудненным вдохом, но нередко и выдохом (смешанная одышка). Шумное дыхание с инспираторной одышкой было более кратковременным при других исследованных инфекциях (1,76+0,16- ] ,97+0,18 дней).

Осиплость голоса была длительнее при парагриппе (3,54+0,19 дней) и более кратковременной при гриппе (2,93+0,19 дней). Переход сухого «лающего» кашля во влажный быстрее происходил при аденовирусной инфекции (2,97+0,15 дней), а при других инфекциях он сохранялся длительнее (3,10+0,17 - 3,22+0,16 дней).

Результаты клинических наблюдений показали, что при парагриппе по мере исчезновения стенотнческих явлений и снижения температуры тела состояние детей быстро становилось удовлетворительным, средняя продолжительность синдрома ОСЛТ парагриппозной этиологии составила 1,45+0,14 дней, тогда как при других вирусных моноинфекцнях - варьировала в пределах от 1,68+0,13 до 1,98+0,13 дней. Продолжительность всего заболевания в целом, при всех ОРВИ. осложненных ОСЛТ, составила от 9,00+0,40 до 10,75+0,52 дней, и достоверной зависимости от этиологического фактора выявлено не было.

Проведенный сравнительный анализ клинического течения ОСЛТ разной этиологии предопределил необходимость разработки дифференциально-диагностических критериев респираторно-вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ, путем определения наиболее значимых клинических признаков (табл. 6).

Выводы

1. Иммуфлуоресцентный метод на основе антител моно- и поликло-нального типа дает исчерпывающую информацию при диагностике ОРВИ на ранних стадиях заболевания, подтверждаемую другими диагностическими методами в 95,1-98,4% случаев, и не имеет себе равных по скорости получения результатов, низкой стоимости и простоте исполнения.

2. Иммуноферментный анализ позволяет в короткие сроки проводить массовое обследование детей по поводу ОРВИ с количественным учетом результатов. Результативность метода повышается при использовании для анализа назофарингиальных аспиратов, где содержание вирусных антигенов значительно выше, чем в носоглоточных смывах.

3. ИФА-детекция противовирусных антител является наиболее чувствительным и специфичным способом серодиагностики гриппа, РСВ и аденовирусной инфекций и позволяет повысить частоту их диагностирования на 9,8-12,5% при сравнении с традиционными тестами (РСК, РНГЛ).

4. Острые стенозирующие ларинготрахеиты у детей развиваются при ОРВИ различной этиологии. Чаше других стенозы гортани провоцируют вирусы парагриппа, следующими по значимости являются аденовирусы и РСВ, тогда как вирусы гриппа обнаруживаются, главным образом, в период эпидемического подъема заболеваемости.

5. Вирусные микст-инфекции, осложненные и не осложненные ОСЛТ, регистрируются у 19,3% и 18,7% госпитализированных детей, со; ответственно, с преобладанием ассоциаций аденовирусной и РСВ этиологии.

6. Определены основные, этиологически детерминированные, клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ, к числу которых отнесены: выраженность интоксикации, катарального синдрома, поражений слизистых оболочек, явления экссудативного воспаления и обструкции бронхов.

7. Установлено, что клинические проявления, тяжесть и исход ОРВИ, осложненных ОСЛТ, зависят с высокой долей вероятности от этиологического фактора, что определяет целесообразность использования результатов быстрой диагностики при прогнозировании дальнейшего развития и исхода заболеваний.

Практические рекомендации

1. В целях профилактики внутрибольничных инфекций и раннего назначения специфической этиотропной терапии необходимо проводить быструю расшифровку этиологии ОРВИ, особенно, осложненных ОСЛТ, с использованием ИФЛ метода.

2. Впервые рекомендованы к использованию в практическом здравоохранении наборы Ф-МКА к основным возбудителям ОРВИ, в т.ч. к вирусам гриппа, парагриппа, РСВ и аденовирусам, которые обеспечивают наиболее .яркую специфическую флуоресценцию пораженных вирусом клеток при полном отсутствии фоновых реакций, что существенно облегчает интерпретацию результатов анализа.

3. По результатам апробации ИФТС впервые рекомендовано использование назофарингиальных аспиратов (вместо носоглоточных смывов), что повышает результативность анализа.

4. ИФТС детекции антител к вирусам гриппа. РСВ и аденовирусам рекомендовано использовать как наиболее чувствительные и специфичные серологические методы.

5. Разработанные клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ, предложено использовать для правильной оценки состояния и вероятностного прогнозирования тяжести и исходов заболеваний, а в совокупности с лабораторными экспресс-тестами - для выбора обоснованной терапевтической тактики.

Список работ, опубликованных ло теме диссертации

1. Диагностика, дифференциальная диагностика и лечение гриппа и других ОРВИ у детей в современных условиях: Метод, рекомендации / Под обшей ред. проф. О.И. Киселева. - СПб., 2001. - 58 с. (соавт. Тимченко В.Н., Колобова Л.В., Павлова Е.Б. и др.).

2. Моноклональные антитела в экспресс-диагностике острых стено-зируюших ларинготрахеитов у детей // Новые препараты в профилактике, терапии и диагностике вирусных инфекций: Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 35-летию со дня основания НИИ гриппа РАМН, 16-18 апр. 2002 г.

- СПб., 2002. - С. 83-84. (соавт. Милькинт К.К., Монаенков А.О., Сомини-на А.А. и др.).

3. Разработка и клиническая апробация новых иммуноферментных тест-систем для диагностики респираторно-синцитиальной и аденовирусной инфекций // Новые препараты в профилактике, терапии и диагностике вирусных инфекций: Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 35-летию со дня основания НИИ гриппа РАМН, 16-18 апр. 2002 г. - СПб., 2002. - С. 91-93. (соавт. Амосова И.В., Монаенков А.О., Милькинт К.К. и др.).

4. Разработка и клинико-лабораторная апробация иммунофермент-ных тест-систем детекции антител различных классов, специфичных к респираторно-синцитиальному вирусу// Новые препараты в профилактике, терапии и диагностике вирусных инфекций: Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 35-летию со дня основания НИИ гриппа РАМН, 16-18 апр. 2002 г.

- СПб., 2002. - С. 108-110. (соавт. Кривицкая В.З., Войцеховская Е.М., Соминина А.А. и др.).

5. Иммуноферментное определение ^М, специфичного к респира-торно-синцитиальному вирусу, у детей с ОРВИ // Актуальные вопросы инфекционной патологии у детей: Первый конгресс педиатров-инфекц. России, Москва, 4-6 дек. 2002 г. - М., 2002. - С. 108. (соавт. Кривицкая В.З., Соминина А.А., Войцеховская Е.М. и др.).

6. Острые стенозы гортани у детей // Актуальные вопросы инфекционной патологии у детей: Первый конгресс педиатров-инфекц. России, Москва, 4-6 дек. 2002 г. - М., 2002. - С. 183. (соавт. Афанасьева О.И., Милькинт К.К., Осидак Л.В. и др.).

7. Ранняя диагностика и клинические особенности острых стенозов гортани у детей // Проблема инфекции в клинической медицине: Науч. конф. и VIII съезд Итало-Рос. о-ва по инфекц. болезням, 5-6 дек. 2002 г. -

СПб., 2002. - С. 345-346. (соавт. Ммлькинт К.К., Монаенков А.О., Соми-нина А.А. и др.).

8. Этиологическая диагностика острых стенозирующих ларинготра-хеитов у детей // 12 Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Москва, 11-15 нояб. 2002 г. - М, 2002. (соавт. Монаенков А.О., Милькинт К.К., Соминина А.А. и др.).

9. Клиническая эффективность препарата Триппферон - капли в нос" в терапии ОРВИ у детей первых 3-х лет жизни // Современные научные и практические проблемы инфекционной патологии у детей: Юбил. Всерос. науч.-практ. конф. (к 75-летию НИИДИ), 28-30 янв. 2003 г. - СПб., 2003. - С. 19. (соавт. Афанасьева О.И., Милькинт К.К., Осидак Л.В.).

10. Моноклональные антитела в диагностике острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей // Современные научные и практические проблемы инфекционной патологии у детей: Юбил. Всерос. науч.-практ. конф. (к 75-летию НИИДИ), 28-30 янв. 2003 г. - СПб., 2003. - С. 101-102. (соавт. Милькинт К.К., Соминина А.А., Монаенков А.О., др.).

11. Роль вирусов гриппа в развитии острого стенозирующего ларин-готрахеита у детей // Повышение готовности к пандемии гриппа на основе военно-гражданского сотрудничества, 9-11 мая 2003 г. Санкт-Петербург, Россия: Материалы симпоз. - СПб., 2003. - С. 60-61. (соавт. Милькинт К.К., Соминина А.А., Кривицкая В.З. и др.).

12. Новые подходы к диагностике острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей // VI Рос. съезд врачей-инфекц., СПб., 29-31 окт. 2003 г. - СПб., 2003. - С. 372-373. (соавт. Милькинт К.К., Соминина А.А., Голованова А.К. и др.)

13. Новые подходы к диагностике и анализу особенностей клинического течения острых стенозирующих ларинготрахеобронхитов у детей в зависимости от этиологии ОРВИ // Детские инфекции. — 2004. (соавт. Соминина А.А., Дриневский В.П., Милькинт К.К. и др.) (в печати).

14. Возрастные особенности образования антител к синтетическим пептидам, имитирующим структуру главных эпитопов Б-белка респира-торно-синцитиального вируса, при естественной инфекции // Вопр. вирусологии. - 2004. (соавт. Кривицкая В.З., Соминина А.А., Корольков В.И. и др.) (в печати).

15. Стандарты диагностики и лечения гриппа и других ОРИ у детей // Метод, пособие для врачей. - СПб., 2004. (соавт. Дриневский В.П., Оси-дак Л.В.) (в печати).

Список сокращений

ГА - гемагглютинин;

ДГБ - детская городская больница;

ИФА - иммуноферментный анализ;

ИФЛ - иммунофлуоресценция;

ИФТС - иммуноферментная тест-система;

МКА - моноклональные антитела;

НП - нуклеопротеин;

ОРВИ - острая респираторная вирусная инфекция;

ОРЗ - острые респираторные заболевания;

ОСЛТ - острый стеознруюший ларинготрахеит;

ПКА - поликлональные антитела;

ПОХ - пероксидаза хрена; •

РНГА - реакция непрямой гемагглютинации;

РСВ - респираторно-синцитиальный вирус;

РСК - реакция связывания комплемента;

Р7ГА - реакция торможения гемагглютинации;

СОЭ - скорость оседания эритроцитов;

ФИТЦ - флуоресцеин изотиоционат;

Ф-МКА - флуоресцирующие моноклональные антитела;

Ф-ПКА - флуоресцирующие поликлональные антитела.

Подписано в печать 4$ 0 >4

Объем СИ. пл._Тираж ¡ее экз..

Формат 60x84 У1 Заказ № 2-&

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6

í-зт

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Суховецкая, Вера Федотовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОСТРЫЕ СТЕНОЗИРУЮЩИЕ ЛАРИНГОТРАХЕИТЫ У ДЕТЕЙ ПРИ ОРВИ, НОВЫЕ МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ

ДИАГНОСТИКИ (обзор литературы).

1. 1. Этиология синдрома ОСЛТ.

1.2. Патогенез ОРВИ, протекающих с синдромом ОСЛТ.

1.3. Клиническая характеристика синдрома ОСЛТ при ОРВИ.

1.4. Основные принципы симптоматической терапии ОСЛТ, развивающегося при ОРВИ.

1.5. Основные тенденции совершенствования методов лабораторной диагностики респираторных вирусных инфекций.

1.5.1. Иммунофлуоресцентный метод обнаружения вирусных антигенов в клинических материалах от больных ОРВИ.

1.5.2. Иммуноферментный анализ и его место среди других лабораторных тестов.

1.6. Моноклональные антитела в дифференциальной диагностике ОРВИ.

1.7. МКА к основным возбудителям ОРВИ и их использование в диагностических реакциях.

1.7.1. МКА к респираторно-синтициальному вирусу.

1.7.2. МКА к вирусам гриппа.

1.7.3. МКА к аденовирусам.

1.7.4. МКА к вирусам парагриппа.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Методическая последовательность проведения исследования.

2.2. Общая характеристика больных.

2.3. Основные материалы исследований.

2.4. Основные методы исследований.

2.5. Иммунодиагностические экспресс-методы.

2.6. Методы статистической обработки.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 3. КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НОВЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ МОНОКЛО-НАЛЬНОГО ТИПА В СРАВНЕНИИ С ТРАДИЦИОННЫМИ ЛАБОРАТОРНЫМИ ТЕСТАМИ.

3.1. Анализ результатов прямого иммунофлуоресцентного метода с использованием усовершенствованных препаратов флуоресцирующих антител поликлонального типа.

3.2. Клинико-лабораторные испытания новых препаратов -ФИТЦ-конъюгатов МКА к вирусам гриппа типов А и В, РСВ, аденовирусам и вирусу парагриппа 2 типа в прямом иммуноф-луоресцентном методе.

3.3. Результаты клинико-лабораторных испытаний новых мо-ноклональных иммуноферментных тест-систем детекции вирусных антигенов в носоглоточных материалах.

3.4. Результативность выделения возбудителей ОРВИ в клеточных культурах.

3.5. Анализ результатов серологической диагностики ОРВИ у детей.

3.6. Анализ результатов определения антител в секретах носовой полости в РНГА.

Глава 4. КЛИНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ОСЛТ ПРИ РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ МОНОИНФЕКЦИЯХ

РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ.

4Л. Общая характеристика больных с ОСЛТ при различных нозологических формах ОРВИ.

4.2. Сравнительная характеристика клинического течения ОСЛТ при ОРВИ у детей.

4.3. Сравнительный анализ результатов лабораторного обследования больных с ОСЛТ различной вирусной этиологии.

4.4. Особенности клинического течения ОСЛТ при респираторных вирусных моноинфекциях (парагриппозной, гриппозной, РСВ и аденовирусной этиологии).

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование новых диагностических тест-систем для изучения этиологии и клинических особенностей острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей"

Актуальность проблемы.

Проблема острых степозирующих ларинготрахеитов (ОСЛТ), способных вызывать угрожающие жизни состояния при острых респираторных вирусных инфекциях (ОРВИ), а в части случаев приводить и к летальным исходам за счет развивающейся обструкции верхних дыхательных путей, остается до конца не решенной [98, 107, 128, 137].

Частота развития ОСЛТ в зависимости от возраста, индивидуальных особенностей макроорганизма и других причин варьирует от 11,0% до 47,9%. Наиболее часто OCJ1T регистрируются у детей раннего (до 3-х лет) возраста [17, 67, 102, 146].

Возбудителями ОРВИ, протекающих с OCJ1T, могут быть вирусы гриппа, парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус (РСВ) и аденовирусы, а также их ассоциации [65, 180, 204]. В целом, данные но этиологии ОРВИ, в том числе осложненных OCJIT, весьма противоречивы. По-видимому, это зависит от контингента обследуемых детей, эпидемиологической ситуации, использованных методов диагностики, качества препаратов и исследуемых клинических материалов [18, 32, 87, 226]. Выраженность клинических проявлений и характер течения OCJIT, развивающихся при ОРВИ, отличаются разнообразием [4, 103, 109].

Расширение возможностей в изучении этиологически детерминированной клинической картины OCJ1T базируется на использовании методов быстрой лабораторной диагностики. В клинической практике для решения этих задач, применяется иммунофлуоресцент-ный (ИФЛ) метод выявления вирусных антигенов в клетках эпителия нижних носовых ходов с использованием препаратов флуоресцирующих иммуноглобулинов поликлонального типа (Ф-ПКА) к разным респираторным вирусам [56], получаемых из гипериммунных сывороток лабораторных животных.

В настоящее время разрабатываются различные подходы к повышению чувствительности и специфичности существующих методов ранней диагностики. Дизайн современных тест-систем базируется на использовании флуоресцирующих моноклональных антител (Ф-МКА) к определенным антигенным детерминантам вируса, направленность которых определяет не только чувствительность, но и диапазон реагирования теста, и его назначение [60, 87, 166]. В этой связи выбор моноклональных антител (МКА) для конкретного диагностического метода является важной задачей, определяющей саму возможность создания нового поколения стандартизованных препаратов, отвечающих требованиям высокой чувствительности и специфичности. При этом клинико-лабораторная апробация является заключительной стадией исследования, определяющей целесообразность внедрения новых диагностических препаратов в практику здравоохранения.

Сказанное определяет актуальность выбранного направления исследования.

Цель исследования.

Изучение диагностических параметров новых тест-систем и этиологии острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей с разработкой клинических дифференциально-диагностических критериев развития заболевания.

Задачи исследования.

1. Определить диагностические параметры новых тест-систем моноклонального типа при диагностике ОРВИ, в т.ч. осложненных стенозами гортани.

2. Оценить возможности и целесообразность применения новых моноклональных иммунореагентов при этиологической расшифровке ОСЛТ вирусной природы в клинических условиях.

4. Изучить особенности клинического течения ОСЛТ в зависимости от их этиологии в целях прогнозирования тяжести и возможных исходов заболеваний.

Научная новизна.

Впервые проведена широкая клинико-лабораторная апробация новых конъюгатов МКА с флуоресцеин изотиоцианатом (ФИТЦ), разработанных в отделе биотехнологии ГУ НИИ гриппа РАМН, при быстрой дифференциальной диагностике ОРВИ у детей.

В клинических условиях впервые определено, что Ф-МКА, в том числе направленные к F-белку вируса парагриппа 2 типа, к нуклеопротеину (НП) вирусов гриппа типа А, к гемагглютинину (ГА) вирусов гриппа типа В, к F-белку РСВ и к гексону аденовирусов, являются реагентами, высоко перспективными для использования в диагностических ИФЛ реакциях.

Разработаны клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с OCJ1T, у детей и установлена их связать с этиологией заболеваний.

Практическая значимость работы.

Проведенные исследования эффективности быстрой этиологической диагностики OCJIT с использованием ИФЛ метода показали высокую перспективность применения новых препаратов Ф-МКА в клииико-лабораторной практике.

Установлено, что частота обнаружения вирусных антигенов с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) зависит от способа получения клинических материалов и может быть существенно повышена при использовании назофарингеальных асгшратов (вместо носоглоточных смывов).

Разработанные клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с OCJIT, в совокупности с данными лабораторной этиологической диагностики, позволяют оценить тяжесть заболевания и прогнозировать его последующее течение, а также избрать правильную врачебную тактику и тем самым улучшить исход болезни.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Новые препараты Ф-МКА к вирусам парагриппа, гриппа типов А и В, РСВ и аденовирусам, впервые широко апробированные в клинико-лабораторной практике при определении этиологии ОРВИ, в том числе осложненных ОСЛТ, являются высоко перспективными иммунореагентами, которые могут быть использованы для быстрой детекции вирусных антигенов в клинических материалах.

2. Использование Ф-МКА позволило повысить уровень стандартизации и надежность ИФЛ метода, достигаемой, за счет большей яркости специфического свечения отчетливой локализации внутриклеточных вирусных антигенов, при отсутствии фоновых реакций, что облегчает интерпретацию результатов анализа (при сравнении с аналоговыми препаратами поликлонального типа).

3. Установлено, что в этиологии ОСЛТ наибольшую значимость имеют вирусы парагриппа (преимущественно 2 серотипа). Следующими по частоте являются аденовирусы, РСВ, вирусы гриппа типов А и В (с возрастающей ролью последних в период эпидемий).

4. Разработанные клинические дифференциально-диагностические критерии позволяют оценить тяжесть ОРВИ, осложненных ОСЛТ, что в совокупности с результатами лабораторной диагностики служит основанием для прогнозирования характера дальнейшего развития заболевания и разработки новых терапевтических подходов в целях снижения риска развития тяжелых форм стеноза и предупреждения летальных исходов.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 35-летию со дня основания ГУ НИИ гриппа РАМН «Новые препараты в профилактике, терапии и диагностике вирусных инфекций» (Санкт-Петербург, 2002), на Всероссийском научно-практическом обществе эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2002 г.), на Межрегиональном Совещании специалистов Опорных баз Федерального Центра по гриппу и ОРЗ «Подготовка к эпидсезону 2003-2004 гг.» (Санкт-Петербург, 2003 г.)

Материалы исследований внедрены в практику работы инфек-ционно-боксового и инфекционно-пульмонологического отделений Детской городской больницы Святой Ольги и инфекционно-боксового отделения Детской инфекционной больницы №5 им. Н.Ф. Филатова. Основные положения работы используются в учебном процессе клинической ординатуры для педиатров на базе отделения гриппа и ОРЗ детей ГУ НИИ гриппа РАМН, а также в учебном процессе для слушателей Медицинской академии последипломного образования (Санкт-Петербург) и студентов Государственной педиатрической медицинской академии.

Публикации.

По материалам исследования опубликовано 15 научных работ, в т. ч. методические рекомендации, методическое пособие для врачей, 2 статьи в ведущих отечественных журналах.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Суховецкая, Вера Федотовна

выводы

1. Иммуфлуоресцентный метод на основе антител моно- и поликлонального типа дает исчерпывающую информацию при диагностике ОРВИ на ранних стадиях заболевания, подтверждаемую другими диагностическими методами в 95,1-98,4% случаев, и не имеет себе равных по скорости получения результатов, низкой стоимости и простоте исполнения.

2. Иммуноферментный анализ позволяет в короткие сроки проводить массовое обследование детей по поводу ОРВИ с количественным учетом результатов. Результативность метода повышается при использовании для анализа назофарингеальных аспиратов, где содержание вирусных антигенов значительно выше, чем в носоглоточных смывах.

3. ИФА-детекция противовирусных антител является наиболее чувствительным и специфичным способом серодиагностики гриппа, РСВ и аденовирусной инфекций и позволяет повысить частоту диагностирования на 9,8-12,5%) при сравнении с традиционными тестами (РСК, РИГА).

4. Острые стенозирующие ларинготрахеиты у детей развиваются при ОРВИ различной этиологии. Чаще других стенозы гортани провоцируют вирусы парагриппа, следующими по значимости являются аденовирусы и РСВ, тогда как вирусы гриппа обнаруживаются, главным образом, в период эпидемического подъема заболеваемости.

5. Вирусные микст-инфекции, осложненные и не осложненные ОСЛТ, регистрируются у 19,8% и 18,7%) госпитализированных детей, соответственно, с преобладанием ассоциаций аденовирусной и РСВ этиологии.

6. Определены основные, этиологически детерминированные, клинические дифференциально-диагностические критерии рес-пираторно-вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ, к числу которых отнесены: выраженность интоксикации, катарального синдрома, поражений слизистых оболочек, явления экссудативного воспаления и обструкции бронхов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В целях профилактики виутрибольничных инфекций и раннего назначения специфической этиотропной терапии необходимо проводить быструю расшифровку этиологии ОРВИ, особенно осложненных ОСЛТ, с использованием ИФЛ метода.

2. Впервые рекомендованы к использованию в практическом здравоохранении панели МКА к основным возбудителям ОРВИ, в т.ч. к вирусам гриппа, парагриппа, РСВ и аденовирусам, которые обеспечивают наиболее яркую специфическую флуоресценцию пораженных вирусом клеток при полном отсутствии фоновых реакций, что существенно облегчает интерпретацию результатов анализа.

3. По результатам апробации ИФТС впервые рекомендовано использование назофарингеальных аспиратов (вместо носоглоточных смывов), что повышает результативность анализа.

4. ИФТС детекции антител к вирусам гриппа, РСВ и аденовирусам рекомендованы, в качестве подтверждающего теста, использовать как наиболее чувствительные и специфичные серологические методы.

5. Разработанные клинические дифференциально-диагностические критерии респираторных вирусных моноинфекций, протекающих с ОСЛТ, предложено использовать для правильной оценки состояния и вероятностного прогнозирования тяжести и исходов заболеваний, а в совокупности с лабораторными экспресс-тестами — осуществлять выбор врачебной терапевтической тактики.

134

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Суховецкая, Вера Федотовна, Санкт-Петербург

1. Абабий И.И. Прогнозирование возникновения рецидивирующего острого стенозирующего ларинготрахеита у детей раннего возраста / И.И. Абабий, И.Д. Новиков, Л.Ф. Нестерина и др. // Журн. ушных, носовых и горловых болезней. 1988. - №1. — С. 23-27.

2. Аксенов О.А. Сочетанные вирусно-вирусные и вирусно-бактериальные инфекции у детей / О.А. Аксенов, З.А. Осипова, Е.А. Мозрина и др. // Актуальные вопросы клиники, лечения и профилактики инфекционных заболеваний у детей. СПб., 1996. — С. 30-34.

3. Алферов В.П. Клиника и лечение стенозирующих ларин-готрахеитов у детей / В.П. Алферов, С.Ф. Джумук, С.Б. Липногор-ский и др // Актуальные проблемы педиатрии / Под ред. В.П. Алферова, Ф.П. Романюка. СПб.: Изд. дом СПбМАПО, 2002. - С. 89-94.

4. Антитела. Методы: Кн. 1: Пер. с англ. / Под ред. Д. Кэтти.- М.: Мир, 1991. 287 с.

5. Афанасьева О.И. Высокотитражные иммуноглобулины направленного действия в терапии острых респираторных вирусныхинфекций у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1999. -21 с.

6. Бакова А.А. Использование моноклональных антител для выявления вируса гриппа / А.А. Бакова, Б.Д. Брондз, О.А. Федорки-на и др. // Вопр. вирусологии. 1994. - Т. 39, №4. - С. 187-189.

7. Блохин Б.М. Тактика и неотложные мероприятия при острой дыхательной недостаточности у детей с респираторной инфекцией / Б.М. Блохин // Детские инфекции. 2002. - №1. - С. 55-58.

8. Бойкова Н.Э. Острые воспалительные заболевания глотки и гортани / Н.Э. Бойкова // Consilium medicum. 2000. - Т. 2, №8. -С. 332-337.

9. Ботвиньева В.В. Респираторные заболевания: этиопатоге-нез, клиника, лечение, профилактика / В.В. Ботвиньева, Н.А. Арефьева, Л.Ф. Азнабаева и др.: Рук-во для врачей / Под ред. М.Г. Роман-цова. СПб., 2002. - 80 с.

10. Буссе Т.Д. Получение и характеристика моноклональных антител к вирусам гриппа А и В / Т.Д. Буссе, М.Л. Христова, М.В. Соколова и др. // Вопр. вирусологии. 1988. - Т. 33, №5. - С. 543547.

11. Вахидов Н.Х. Клиническая характеристика и лечебная тактика острых ларинготрахеитов у детей в условиях резко континентального климата Бухары: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Ташкент, 1995. 19 с.

12. Вишнякова JI.А. Микробиологические методы исследования/ Л.А. Вишнякова // Болезни органов дыхания: Рук-во для врачей. М.: Медицина, 1989. - Т. 1. - С. 364-374.

13. Галустян А.Н. Выявление аллергического варианта острых стенозирующих ларинготрахеобронхитов при острых респираторных вирусных инфекциях у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1996. - 22 с.

14. Германенко И.Г. Клинико-диагностические особенности острых ларинготрахеитов у детей // И.Г. Германенко, A.M. Кашкан, П.С. Горегляд // Клинические перспективы в инфектологии: Всерос. науч. конф., 17-18 окт. 2001 г. СПб., 2001. - С. 51-52.

15. Горбунов С.Г. Методы лабораторной диагностики респираторных инфекций у детей (сравнительный анализ) / С.Г. Горбунов // Эпидемиология и инфекц. болезни. — 2000. №4. - С. 53-54.

16. Дорогая Л.Д. Применение микроволновой резонансной терапии в комплексном лечении ларинготрахеита у детей / Л.Д. Дорогая, Г.Ф. Учайкин // Педиатрия. 1995. - №1. - С. 55-57.

17. Дриневский В.П. Оценка безвредности и эффективности новых препаратов для этиотропного лечения и специфической профилактики гриппа у детей: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. СПб., 1999. - 44 с.

18. Дриневский В.П. Специфическая химио- и иммунотерапия при гриппе и других острых респираторных инфекциях у детей / В.П. Дриневский, Л.В. Осидак, О.И., Афанасьева и др.: Метод, рекомендации. СПб., 1998. - 33 с.

19. Егоров A.M. Теория и практика иммуноферментного анализа. / A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова -М.: Высш. шк., 1991. 288 с.

20. Жданов В.М. Эволюция вирусов / В.М. Жданов. М.: Медицина, 1990. - 376 с.

21. Иванников Ю.Г. Смертность от гриппа, ОРЗ и острой пневмонии как один из факторов, определяющих здоровье населения / Ю.Г. Иванников, А.О. Жуков, Е.З. Парсагашвили // Вестн. Рос. АМН. 1994. - №9. - С. 44-48.

22. Иванова В.В. Диагностика и особенности терапии стено-зирующих ларинготрахеитов при острых респираторных инфекциях у детей / В.В. Иванова, Г.М. Ушакова, С.Ф. Джумук и др.: Метод, пособие. СПб.,1996. - 6 с.

23. Иванова В.Т. Исследование вирусов гриппа методом флюоресцентного иммуноанализа с временным разрешением / В.Т. Иванова, И.В. Пономарева, К.Л. Шаханина и др. // Вопр. вирусологии. 1990. - Т. 35, №2. - С. 1 15 (27)-117 (29).

24. Иванова В.Т. Изменчивость гемагглютинина штаммов вируса гриппа A(H3N2), изолированных в России с 1989 по 1999 г. / В.Т. Иванова, Е.И. Бурцева, А.II. Слепушкин и др. // Вопр. вирусологии. 2000. - Т. 45, №3. - С. 28-3 1.

25. Иванова И.А. Персистенция белков вируса гриппа А характерная черта экспериментальной инфекции: Автореф. дис. . канд. биол. наук. - СПб., 1994. - 20 с.

26. Исаева Е.И. Функциональная активность моноклональных и моноспецифических антител при взаимодействии с антигенными сайтами гемагглютинина вируса гриппа / Е.И. Исаева, З.И. Ровнова, Р.Я. Подчерняева // Вопр. вирусологии. 1995. - Т. 40, №1. - С. 2730.

27. Исаков В.А. Тяжелые формы гриппа (клиника и система этапного лечения): Автореф. дис. . д-ра мед. наук. — СПб., 1996. — 46 с.

28. Квартовкин К.К. Лечение синдрома крупа у детей на реанимационном этапе / К.К. Квартовкин, Н.А. Петрухина, В.В. Андреев и др. // Анестезиология и реанимация. -1986. — №5. С. 60-62.

29. Киселев О.И. Антивирусные препараты для лечения гриппа и ОРЗ. Дизайн препаратов на основе полимерных носителей /О.И. Киселев, Э.Г Деева, А.В. Слита, В.Г Платонов. СПб.: ИАЦ «Время», 2000. - 132 с.

30. Киселев О.И. Грипп: состояние проблемы и текущая эпидемиологическая ситуация / О.И. Киселев, А.А. Соминина, Е.Б. Гринбаум // Вестн. Рос. АМН. 1994. -№9. с. 3-7.

31. Кладова О.В. Первый опыт интраназального применения гепона у детей с респираторными инфекциями / О.В. Кладова, Ф.С.

32. Харламова, А.А. Щербакова и др. // Педиатрия. 2002. - №2. - С. 86-88.

33. Козловская JI.B. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования (с элементами программирования) / J1.B. Козловская, М.А. Мартынова; Под ред. Е.М. Тареева, А.В. Сумарокова. М.: Медицина, 1975. - 352 с.

34. Колобухина J1.B. Вирусные инфекции дыхательных путей / Л.В. Колобухина // Рус. мед. журн. 2000. - Т. 8, №№13-14 (114115). - С. 559-564.

35. Колобухина Л.В. Клиника и лечение гриппа / Л.В. Колобухина // Рус. мед. журн. 2001. - Т. 9, №№>16-17 (135-136). - С. 710-713.

36. Корнеева Э.П. Лабораторная диагностика гриппа / Э.П. Корнеева // Грипп: Рук-во для врачей. 2-е изд., испр. и доп.; Под ред. Г.И. Карпухина. - СПб.: Гиппократ, 2001. - С. 81-117.

37. Корюкина И.П. Острые стенозы верхних дыхательных путей у детей (клиника, диагностика, лечение): Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1992. - 35 с.

38. Львов Д.К. Грипп остается непредсказуемой инфекцией / Д.К. Львов, А.Н. Слепушкин, С.С. Ямникова, Е.И. Бурцева // Вопр. вирусологии. 1998. - Т. 43, №3. - С. 141-144.

39. Львов Д.К. Моноклональные антитела к NP-белку и их использование для изучения вирусов гриппа А / Д.К. Львов, А.Г. Букринская, С.С. Ямникова. и др. // Вопр. вирусологии. 1986. Т. 31, №6. - С. 655-657.

40. Маринич И.Г. Характеристика эпидемии гриппа в мире, России и странах СНГ в сезон 1997-1998 гг. / И.Г. Маринич, В.К. Болдасов, Г.С. Игнатьева и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1999. - №6. — С. 38-42.

41. Марков И.С. Острый стенозирующий ларинготрахеит у больного с иерсиниозно-вирусной инфекцией / И.С. Марков // Педиатрия. 1990. - №3. - С. 91-93.

42. Мартынкин А.С. Острые стенозы гортани, трахеи и бронхов при острых респираторных вирусных инфекциях у детей / А.С. Мартынкин, И.А. Морецкая, М.Н. Самойло, Б.М Тайц: Метод, рекомендации ЛПМИ. Л.,1991. - 28 с.

43. Методические рекомендации по изучению гуморального, секреторного и клеточного иммунитета при гриппе / Под ред. Я.С. Шварцмана, Г.М. Денисова. Л., 1984. - 19 с.

44. Методические указания по лабораторным методам диагностики гриппа и других ОРЗ / Приложение 4 к Приказу Минздравмедпрома России, Госкомсанэпиднадзора и РАМН, №101/46 от 19.04.95. М., 1995. - С. 28-43.

45. Методические указания по работе опорным баз Всесоюзного центра по гриппу и острым респираторным заболеваниям / Под. ред. Г.И. Карпухина. JI., 1986. - 55 с.

46. Милькинт К.К. Возможности иммунофлуоресцентного метода при обнаружении у детей возбудителей острых респираторных заболеваний и анализе вакцинального процесса: Автореф. дис. . канд. мед. наук. JI., 1975. - 26 с.

47. Милькинт К.К. Этиология острых ларинготрахеитов у детей / К.К. Милькинт, В.П. Дриневский, Д.Б. Потапенко и др. //. Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика: VI Российско-Итальянская науч. конф., 14-16 дек. 2000 г. СПб., 2000. -С. 166.

48. Митип Ю.В. Острый ларинготрахеит у детей / Ю.В. Ми-тин. М.: Медицина, 1986. - 208 с.'

49. Михайлова A.M. Особенности кардиодинамики при стено-зирующих ларинготрахеитах у детей раннего возраста в сравнительном аспекте / A.M. Михайлова, А.А. Мациевская // Материнство и детство. 1992. - Т. 37, №10-11. - С. 32.

50. Михелашвили Т.Ш. Состояние гипофизарно-надпочечни-ковой и ренин-альдостероновой системы при острых стенозах гортани у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1994. — 21 с.

51. Монаенков А.О. Получение и характеристика монокло-нальных антител к аденовирусу в иммуноферментных и иммуноф-люоресцентных реакциях / А.О. Монаенков, В.К. Сологуб, А.А. Со-минина и др. // Вопр. вирусологии. 2000. - Т. 45, №5. - С. 30-33.

52. Монаенков А.О. Совершенствование иммунологических препаратов ранней этиологической диагностики вирусных ОРЗ на основе гибридомной технологии: Автореф. дис. . канд. мед. паук. -СПб., 1996. 20 с.

53. Моноклональные антитела. Гибридомы: новый уровень биологического анализа: Пер. с англ. / Под ред. Р.Г. Кеннета, Т.Дж. Мак-Керна, К.Б. Бехтол. М.: Медицина, 1983, - 416 с.

54. Нацина В.К. Ремантадинотерапия при гриппе у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1994. - С. 20.

55. Нурмухаметов Р. Лечение фарингитов и ларингитов / Р. Нурмухаметов // Рус. мед. журн. 1999. - Т. 7, №7. — С. 321-324.

56. Осидак Л.В. Острые респираторные микст-инфекции у детей: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. СПб., 2001. - 45 с.

57. Оценка некоторых лабораторных показателей, определяемых при массовых осмотрах детского населения: Метод, рекомендации / Под ред. В.В. Юрьева, А.С. Симаходского. СПб.: СПбГПМА, 1997. - 32 с.

58. Платонова A.JI. Анализ антигенной структуры гемагглю-тининов различных штаммов вируса гриппа В с помощью монокло-нальных антител / A.JI. Платонова, З.И. Ровнова, Р.Я. Подчерняева // Вопр. вирусологии. 1990. - Т. 35, №5. - С. 376 (24) - 379 (27).

59. Попов И.А. Моноклональные антитела к матриксному белку вируса гриппа А, реагирующие с вирусными штаммами различных подтипов / И.А. Попов, А.В. Червонский, Ю.С. Кривошеин и др. // Вопр. вирусологии. 1992. - Т. 37, №3. - С. 141-144.

60. Райните-Аудинене А. Рациональное лечение стенозирую-щего лирингита / А. Райните-Аудинене, А. Гайжаускайте, А. Луко-шявичюс, Д. Блинструбене // Педиатрия. — 1992. №7-9. - С. 49-52.

61. Романюк Ф.П. Часто болеющие дети: / Учеб. Пособие / Ф.П. Романюк, Т.А. Сидорова, В.П. Алферов. СПб.: МАПО, 2000.- 63 с.

62. Савченко Н.А. Клинико-генетические аспекты острых стенозов гортани, трахеи и бронхов при острых респираторных вирусных инфекций у детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1994. - 15 с.

63. Самойло М.Н. Клинико-патогенетическое значение циклических нуклеотидов и показателей функциональной активности лимфоцитов крови у детей с острым стенозирующим ларинготрахе-обронхитом при ОРВИ: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Л., 1992.- 19 с.

64. Самойлович М.П. Получение моноклональных антител к респираторно-синцитиальному вирусу человека / М.П. Самойлович, Л.П. Сухубаевская, В.Б. Климович, А.А. Соминина // Вестн. Рос. АМН. 1994. - №9. - С. 18-21.

65. Свешников П.Г. Новые иммунодиагностические и имму-нотерапевтические препараты на основе моноклональных антител: Автореф. дис. . д-ра. биол. наук. М., 1993. - 44 с.

66. Селькова Е.П. Современные подходы к профилактике и лечению острых респираторных вирусных инфекций / Е.П. Селькова // Рус. мед. журн. 2001. - Т. 9, №21 (140). - С. 960-962.

67. Сергеева С.А. Лечение острых респираторных заболеваний со стенозирующим ларинготрахеобронхитом Анафероном детским / С.А. Сергеева, О.В. Кладова, В.Ф. Учайкин // Детские инфекции. 2002. - №1. - С. 44-46.

68. Смирнов Ю.А. Общий антигенный эпитоп в гемагглюти-нине вирусов гриппа А(Н1,Н2, Н5,Н6) / Ю.А. Смирнов, А.С. Липатов, И. Окуно, А.К. Гительман // Вопр. вирусологии. 1999. - Т. 44, №3. - С. 111-115.

69. Соминина А.А. Выделение вирусов гриппа в клеточной культуре MDCK / А.А. Соминина, А.О. Монаенков, О.М. Литвинова и др.: Метод, рекомендации подготовлены НИИ гриппа РАМН. -Москва; СПб, 1999. 12 с.

70. Соминина А.А. Лабораторная диагностика / А.А. Соминина, Э.П. Корнеева, Е.В. Олейникова. // Острые негриппозные респираторные инфекции / Под ред. Г.И. Карпухина. СПб.: Гиппократ, 1996. - С. 100-153.

71. Соминина А.А. Характеристика моноклональных антител к PC-вирусу в иммуноферментных и иммунофлюоресцентных реакциях / А.А. Соминина, Л.П. Сухубаевская, М.П. Самойлович и др. // Вестн. Рос. АМН. 1995. -№9. - С. 49-54.

72. Соминина А.А. Этиологическая структура заболеваемости гриппом и другими ОРЗ на территории России, сезон 1997-1998 гг. / А.А. Соминина, О.М. Литвинова, В.Б. Родионова и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1999. - №5. — С. 8994.

73. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина, 1982. - 462 с.

74. Старостина Т.Ф. Рентгенологическая характеристика легочных поражений у детей с острыми респираторными заболеваниями вирусной этиологии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1993. - 20 с.

75. Сыромятников Д.Б. Биохимические нормы в педиатрии: Практ. справочник / Д.Б. Сыромятников. СПб.: СОТИС, 1994. - 94 с.

76. Тайц Б.М. Эффективность применения адреналина в ингаляциях при острых стенозирующих ларинготрахеитах у детей (контролируемое рандомизированное исследование) / Б.М. Тайц // Педиатрия. 1995. - №6.- С. 62-64.

77. Таточенко В.К. Практическая пульмонология детского возраста: Справочник. 2-е изд. / В.К. Таточенко, С.В. Рачинский, И.К. Волков и др. - М., 2001. - 269 с.

78. Таточенко В.К. Современные технологии в лечении острых заболеваний органов дыхания у детей / В.К. Таточенко, A.M. Федоров // Педиатрия. 1995. - №4, Спец. вып.: Материалы конгресса педиатров России.- С. 71-74.

79. Таточенко В.К. Этиотропное лечение пневмоний у детей / В.К. Таточенко // Рус. мед. журн. 1999. - Т. 7, №4 (88). - С. 200205.

80. Теория и практика экспресс-диагностики гриппа и острых респираторных вирусных заболеваний методом иммунофлуоресцен-ции: Сб. лаб. и метод, материалов / Под ред. А.А. Смородинцева, Д.Б. Голубева, Г.М. Майбороды. Л., 1969. - 1 1 1 с.

81. Тимченко В.Н. Острые респираторные вирусные инфекции / В.Н. Тимченко, Р.А. Иванова // Инфекционные болезни у детей: Учебник для педиатр, фак. мед. вузов / Под ред. В.Н. Тимченко, Л.В. Быстряковой. СПб.: СпецЛит., 2001. - С. 134-174.

82. Учайкин В.Ф. Арбидол в профилактике и лечении гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций у детей / В.Ф. Учайкин, A.M. Шустер, О.В. Кладова, Б.Л. Медников // Педиатрия. -2002. №6. - С. 61-64.

83. Учайкин В.Ф. Лечение афлубином острых респираторных заболеваний со стенозирующим ларинготрахеитом у детей / В.Ф. Учайкин, Ф.С. Харламова, М.С. Савенкова, А.А. Афанасьева // Журн. эпидемиология и инфекционные болезни. 2000. — №5. - С. 63-67.

84. Учайкин В.Ф. Острые респираторные вирусные инфекции / В.Ф. Учайкин // Рук-во по инфекционным болезням у детей. М.: ГЭОТАР Медицина, 1998.-С. 163-193.

85. Учайкин В.Ф. Синдром крупа как проявление респираторного аллергоза / В.Ф. Учайкин, М.П. Савенков, Е.И. Карасева и др. // Педиатрия. 1999. - №6. - С. 33-37.

86. Ушакова Г.М. Грипп и острые респираторные вирусные инфекции у детей: Учебное пособие для врачей / Г.М. Ушаков, О.В. Родионова, Э.Г. Камальдинова. СПб., 2002. — 28 с.

87. Фейгин Г.А. Острый стенозирующий ларинготрахеоброн-хит у детей / Г.А. Фейгин, Д.И. Тарасов, С.Е. Тайбогаров и др. -Алма-Ата: Казахстан, 1981. 176 с.

88. Феклисова JI.В. Клинические особенности, профилактика и лечение гриппа у детей / Л.В. Феклисова, В.М. Шебекова // Педиатрия. 2002. - №6. - С. 88-92.

89. Филиппова И.Е. Разработка и сравнительное изучение различных вариантов иммуноферментного анализа для детекции антигенов вируса гриппа типа А: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -СПб., 1996. 22 с.

90. Харитоненков И.Г. Экспресс-диагностика гриппа с помощью лантанидного иммунофлюоресцентного анализа / И.Г. Харитоненков, П. Халонен, М.Л. Христова и др. // Вопр. вирусологии. -1989. Т. 34, №5. - С. 533-538.

91. Харламова Ф.С. Новые подходы к этиотропной терапии гриппа и ОРВИ / Ф.С. Харламова, О.В. Кладова // Детские инфекции. 2002. - №1. - С. 38-39.

92. Цинзерлинг А.В. Современные инфекции. Патологическая анатомия и вопросы патогенеза / А.В. Цинзерлинг. СПб.: Сотис, 1993. - 363 с.

93. Черных А.А. Моноклональные антитела к структурным полипептидам орто- и парамиксовирусов птиц: получение, изучение свойств и использование для усовершенствования средств диагностики: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Покров, 1991. - 20 с.

94. Чешик С.Г. Лечение стенозирующих ларингитов и ларин-готрахеобронхитов при острых ресгшраторно-вирусных инфекциях удетей / С.Г. Чешик, В.П. Маркелов // Педиатрия. 1987. - №10. - С. 92-95.

95. Шамшева О.В. Профилактика гриппа и острых респираторных заболеваний сочетанным введением вакцины Инфлювак и бактериального лизата ИРС-19 / О.В. Шамшева, О.В. Кладова, Г.А. Ельшина // Детские инфекции. 2002. - №1. - С. 65-67.

96. Шаханина H.JT. Грипп и острые респираторные заболевания — приоритетная социально-экономическая проблема здравоохранения / И.Л. Шаханина // Журн. эпидемиология и инфекционные болезни. 1998. - №9. - С. 169-172.

97. Щербакова А.А. Клинико-патогенетическое значение системы мононуклеарных фагоцитов при рецидивирующем крупе у детей / А.А. Щербакова, Ф.С. Харламова, О.В. Кладова, В.Ф. Учайкин // Детские инфекции. 2002. - № 1. - С. 17-20.

98. Яковлева Н.В. Особенности респираторных вирусных инфекций и клеточного иммунитета при острой и хронической бронхо-легочной патологии: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. СПб., 1994. -50 с.

99. Adrian T. Molecular epidemiology of human adenoviruses / T. Adrian, P. Pring-Akerblom // Biotest Bulletin. 1997. - N 5. - P. 319-323.

100. Akerling-Stopner В. A subgroup-specific antigenic site in the G protein of respiratory syncytial virus forms a disulfide-bonded loop / B. Akerling-Stopner, G. Utter, M.A. Mufson et al. // J. Virol. 1990. -Vol. 64, N 10. - P. 5143-5148.

101. August M.J. Evaluation of a commercial monoclonal antibody for detection of adenovirus antigen / M.J. August, A.L. Warford // J. Clin. Microbiol. 1987. - Vol. 25, N 1 1. - P. 2233-2235.

102. Avellon A. Rapid and sensitive diagnosis of human adenovirus infections by a generic polymerase chain reaction / A. Avellon, P. Perez, J.C. Aquilar et al. // J. Virol. Methods. 2001. - Vol. 92. - P. 113-120.

103. Bains W. Diseases, DNA and diagnosis / W. Bains // New Sci. 1989. - Vol. 122, N 1663. - P. 48-51.

104. Barenfanger J. Clinical and financial benenfits of rapid detection of respiratory viruses: an outcomes study / J. Barenfanger, C. Drake, N. Leon et al. // J. Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38, N 8. - P. 2824-2828.

105. Beeler J.A. Neutralization epitopes of the F glycoprotein of RSV: Effect of mutation upon Fusion Function / J.A. Beeler, K. van W. Coelingh // J. Virol. 1989. - Vol. 63, N 7. - P. 2941-2950.

106. Buck A.A. Comparison of a screening test and a reference test in a epidemiologic studies. I. Indices of agreement and their relation to prevalence / A.A. Buck, J.J. Cart // Amer. J. Epidemiol., - 1966. -Vol. 83, N 3. - P. 586-592.

107. Burton D.M. Candida laryngotracheitis: a complication of combined steroid and antibiotic usage in croup / D.M. Burton, A.B. Seid, D.B. Kearns, S.M. Pransky // Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol. -1992. Vol.23, N 2. - P. 171-175.

108. Chien J.W. Viral pneumonias. Epidemic respiratory viruses / J.W. Chien, J.L. Johnson // Postgrad. Med. 2000. - Vol. 107. - P. 4142, 45-47, 51-52.

109. Chomel J.J. Rapid diagnosis of influenza A. Comparison with ELISA immunocapture and culture / J.J. Chomel, M.F. Remilleux, P. Marchand, M. Aymard // J. Virol. Methods. 1992. - Vol. 37. - P. 337344.

110. Cirino N.H. Targeting PNA decay with 2',5'-oligoadenylate-antisense in respiratory syncitial virus infected cells / N.H. Cirino, G. Li, W. Xiao et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences, USA. 1997. - Vol. 94. - P. 1937-1942.

111. Cooper R.J. Adenovirus polymerase chain reaction assay for rapid diagnosis of conjunctivitis / R.J. Cooper, A.C. Yeo, A.S. Bailey, A.B. Tullo // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1999. - Vol. 40. - P. 90-95.

112. Corne J.M. A multiplex RT-PCK for the detection of parainfluenza viruses 1-3 in clinical samples / J.M. Corne, S. Green, G. Sanderson, E.O. Caul, S.L. Johnston // J. Virol. Methods. 1999. - Vol. 82, N 1. - P. 9-18.

113. Cressman W.R. Diagnosis and management of croup and epiglottitis / W.R. Cressman, C.M. Myer // Pediatr. Clin. North Amer. -1994. Vol. 41, N 2. - P. 265-276.

114. Denny F.W. Croup an 11-year study in a pediatric practice / F.W. Denny, T.F. Murphy, W.A. Clyde et al. // Pediatrics. 1983. -Vol.71, N 6. - P. 871-876.

115. Dobrescu O. Acute laryngotracheitis in children / O. Do-brescu, L. Geofforoy, E. Rousseau / Pediatrie. 1992. - V.47, N 3. - P. 195-210.

116. Doller G. Stability of respiratory syncytial virus antigen due to buffer treatment for direct detection in nasopharyngeal specimens with enzyme immunoassay / G. Doller, W. Schuy // J. Clin. Lab. Analysis. 1993. - Vol.7, N 1. - P. 5-10.

117. Echavarria M. PCR method for detection of adenovirus in urine of healthy and human immunodeficiency virus — infected individuals / M. Echavarria, M. Forman, J. Ticehurst et al. // J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol. 36. - P. 3323-3326.

118. Englund J.A. Rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infections in immunocompromised adults / J.A. Englund, P.A. Piedra, A. Jewell et al. / J. Clin. Microb. 1996. - Vol. 34, N 7. - P. 1649-1653.

119. Espino Hernandez M. Infecciones por adenovirus en un servi-cio de urgencies / M. Espino Hernandez, A.J. Carbajo Ferreira, A.B. Flo-res et al. // An. Esp. Pediatr. 1992. - Vol.36, N 1. - P. 11-13.

120. Freymuth F. Detection of viral, Chlamydia pneumoniae and Mycoplasma pneumoniae infections in exacerbations of asthma in children / F. Freymuth, A. Vabret, J. Brouard et al. // J. Clin. Virol. 1999. - Vol. 13. - P. 131-139.

121. Glikman G. Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of influenza-B virus infections by ELISA: production and characterization / G. Glikman, S. Chen, C.H. Mordhorst, C. Koch // Clin. Diagn. Virol. -1995. -Vol.4, N 1. P. 27-42.

122. Hadziyannis E. Comparison of VIDAS with direct immunofluorescence for the detection of respiratory syncytial virus in clinical specimens / E. Hadziyannis, W. Sholtis, S. Schindler et al. // J. Clin. Virol. 1999. - Vol. 14. - P. 133-136.

123. Hendry R.M. Quantification of respiratory syncytial virus polypeptides in nasal secretions by monoclonal antibodies / R.M. Hendry, E. Godfrey, L.J. Anderson et al. // J. Gen. Virol. 1985. - Vol. 66, N 8. - P. 1705-1714.

124. Henrickson K.J. Antigenic structure, function, and evolution of the hemagglutinin-neuraminidase protein of human parainfluenza virus type 1 / K.J. Henrickson, L.L. Savatski // J. Infect. Dis. 1997. -Vol. 176, N 4. - P. 867-875.

125. Henrickson K.J. Epidemiology and cost of infection with human parainfluenza virus types 1 and 2 in young children / K.J. Henrickson, S.M. Kuhn, L.L. Savatski // Clin. Infect. Dis. 1994. - Vol. 18, N 5. - P. 770-779.

126. Herrmann J.E. Antigen detection with monoclonal antibodies for diagnosis of adenovirus gastroenteritis / J.E. Herrmann, D.M. Perron-Henry, N.R. Blacklow // J. Inf. Diseases. 1987. - Vol. 155, N 6. -P. 1167-1171.

127. Hijazi Z. Laboratory diagnosis of acute lower respiratory tract viral infections in children / Z. Hijazi, A. Pacsa, S. Eisa et al. // J. Trop. Pediatr. 1996. - Vol. 42. - P. 276-280.

128. Hornsleth A. A rapid test for detection of respiratory syncytial virus in nasopharyngeal secretion / A. Hornsleth / Eur. J. Clin. Microb. and Infect. Diseases. 1990. - Vol. 9, N 5. - P. 356-358.

129. Inglis A.J. Herpes simplex virus infection . A rare cause of prolonged croup / A.J. Inglis // Arch. Otolaryng. Head Neck Surg. -1993. Vol. 119, N 5. - P. 551-552.

130. Irmen K.E. Use of monoclonal antibodies for rapid diagnosis of respiratory viruses in a community hospital / K.E. Irmen, J.J. Kelleher / Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2000. - Vol. 7, N 3. - P. 396-403.

131. Jacobs S. Validation of a croup score and its use in triaging children with croup / S. Jacobs, G. Shortland, J. Warner et al. // Anaesthesia. 1994. - Vol. 49, N 10. - P. 903-906.

132. Kadi Z. Rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infection by antigen immunofluorescence detection with monoclonal antibodies and immunoglobulin M immunofluorescence test / Z. Kadi, S. Dali,

133. Bakouri, A. Bouguermouh // J. Clin. Microbiol. 1986. - Vol.24, N6. P. 1038-1040.

134. Khairullah N.S. Evaluation of WHO monoclonal antibody kit for diagnosis of acute respiratory viral infections / N.S. Khairullah, S.K. Lam // Southeast. Asian. J. Trop. Med. Public. Health. 1995. - Vol. 26, N 2. - P. 263-267.

135. Knott A.M. Parainfluenza viral infections in pediatric outpatients: seasenal patterns and clinical Characteristics / A.M. Knott, C.E. Long, C.B. Hall // Pediatr. Infec. Dis. J. 1994. - Vol. 13, N 4. - P. 269-273.

136. Kohler G. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity / G. Kohler, C. Milstein // Nature (Lond.). 1975. - Vol. 256, N 5517. - P. 495-497.

137. Landry M.L. Rapid and accurate viral diagnosis / M.L. Landry, D.R. Mayo, G.D. Hsiung // Pharmacol. Ther. 1989. - Vol.40, N 2. - P. 287-300, 316-328.

138. Laurichesse H. Epidemiological features of parainfluenza virus infections: laboratory surveillance in England and Wales, 1975-1997 / H. Laurichesse, D. Dedman, J.M. Watson, M.C. Zambon // Eur. J. Epidemiol. 1999. - Vol. 15, N 5. - P. 475-484.

139. Levy B.T. Respiratory syncytial virus infection in infants and young children / B.T. Levy, M.A. Graber // J. Farm. Pract. 1997. — Vol. 45. - P. 473-481.

140. Levy J. Epidemiologie des infections respiratoires basses de 1'enfant / J. Levy // Rev. Med. Brux. 1994. - Vol. 15, N 4. - P. 194197.

141. Lindemann H. Krupp-syndrom (Croup syndrome) / H. Linde-mann // Kinderaerztl. Prax. 1993. - Vol. 61, N 9. - P. 309-315.

142. Litmanovitch M. Relationship between recurrent croup and airway hyperreactivity / M. Litmanovitch, S. Kivity, R. Soferman et al. // Ann. Allergy. 1990. - Vol. 65, N 3. - P. 239-241.

143. MacRae J. Detection of viruses by electron microscopy: an efficient approach / J. MacRae, M. Srivastava // J. Virol. Methods. -1998. Vol. 72. - P. 105-108.

144. Madhavan H.N. Laboratory investigations on viral and Chlamydia trachomatis infections of the eye / H.N. Madhavan // Indian J. Ophthalmol. 1999. - Vol. 47. - P. 241-246.

145. Masters H.B. Detection of respiratory syncytial virus antigen in nasopharyngeal secretions by Abbott diagnostics enzyme immunoassay / H.B. Masters, B.J. Bate, C. Wren, B.A. Lauer // J. Clin. Microbiol. 1988. - Vol.26, N 6. - P. 1 103-1 105.

146. McCullough K.C. Monoclonal antibodies: implications for virology / K.C. McCullough // Arch. Virol. 1986. - Vol.87, N 1-2. - P.l-36.

147. Mitamura К. Rapid diagnosis of influenza by EIA / K. Mita-mura // Nippon. Rinsho. 2000. - Vol. 58, N 11. - P. 2229-2233.

148. Monto A.S. Safety and efficacy of long-term use of rimantadine for prophylaxis of type 1 influenza in nursing homes / A.S. Monto, S.E. Ohmit, K. Hornbuckle, C.L. Pearce // Antimicrob. Agents Chemother. 1995. - Vol. 39. - P. 2224-2228.

149. Monto A.S. Zanamivir in the prevention of influenza among healthy adults: a randomized controlled trial / A.S. Monto, D.P. Robinson, M.L. Herlocher et al. // JAMA. 1999. - Vol. 282. - Suppl.l. - P. S3 1-35.

150. Morishita T. Rapid diagnosis of influenza infection by PCR method detection of influenza virus HA gene in throat swab / T. Morishita, S. Kobayashi, T. Mijake et al. // J. Jap. Assoc. for Infect. Dis. -1992. - Vol.66, N 7. - P. 944-949.

151. Mufson M.A. Two distinct subtypes of human respiratory syncytial virus / M.A. Mufson, C. Orvell, B. Rafnar, E. Norrby // J. Gen. Virol. 1985. - Vol.66, N 10. - P. 2111-2124.

152. Nakagawa N. Characterization of new epidemic strains of influenza В virus by using neutralizing monoclonal antibodies / N. Nakagawa, R. Kubota, S. Morikawa, T. Nakagawa, K. Baba, Y. Okuno // J.Med. Virol. 2001. - Vol. 65, N 4. - P. 745-750.

153. Nakagawa N. Rapid detection and identification of two lineages of influenza В strains with monoclonal antibodies / N. Nakagawa, A. Maeda, T. Kase, R. Kubota, Y. Okuno // J. Virol. Methods. 1999. -Vol. 79, N 1. - P. 113-120.

154. Orvell C. Preparation and characterization of monoclonal antibodies directed against fine structural components of human respiratory syncytial virus subgroup В / С. Orvell, E. Norby, M.A. Mufson // J. Gen. Virol. 1987. - Vol. 68, N 12. - P. 3125-3135.

155. Pachucki C.T. The diagnosis of influenza / C.T. Pachucki // Semin. Resp. Dis. 1992. - Vol .7, N 1. - P. 46-53.

156. Peter O. Serological diagnosis and nasopharyngeal washings in pediatric infections / O. Peter // Rev. Med. Suisse Romande. 2000. -Vol. 120. - P. 635-640.

157. Pfenninger J. Acute respiratory distress / J. Pfenninger // Ther. Umsch. 1994. - Vol.51, N 9. - P. 607-609.

158. Pothier P. Use of monoclonal antibodies for rapid detection of influenza A virus nasopharyngeal secretions / P. Pothier, G.A. Denoyel, S. Ghim et al. // Europ. J. Clin. Microbiol. 1986. - Vol .5, N 3.- P. 336-339.

159. Poumbourios P. The stoichiometry of binding between monoclonal antibody molecules and the haemagglutinin of influenza virus / P. Poumbourios, L.E. Brown, D.O. White, D.C. Jackson // Virology. -1990. Vol. 179, N 2. - P. 768-776.

160. Ray C.G. Efficiency of immunofluorescence for rapid detection of common respiratory viruses / C.G. Ray, L.L. Minnich // J. Clin. Microbiol. 1987. - Vol. 25, N 2. - P. 355-357.

161. Rebmann H. Prospective epidemiologische Einjahreslange-shnitt studie uber Luftschadstoffe und Krupp-Hautigkeit / H. Rebmann, J. Hub, R. Huenges et al. // Mschr. Kinderheilk. 1989. - Vol. 136, N 7.- P. 372-377.

162. Reid A.H. Origin and evolution of the 1918 «spanish» influenza virus hemagglutinin gene / A.H. Reid, T.G. Fanning, J.K. Haltin, J.K. Taubenberg // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 1651-1656.

163. Rosekrans J.A. Viral croup: current diagnosis and treatment / J.A. Rosekrans // Mayo Clin. Proc. 1998. - Vol. 73, N 11. - P. 11021106.

164. Schirm J. Rapid detection of respiratory viruses using mixtures of monoclonal antibodies on shell viral cultures / J. Schirm, D.S. Luijt, G.W. Pastoor, J.M. Mandema, F.P. Schroder // J. Med. Virol. -1992. Vol. 38, N 2. - P. 147-151.

165. Schumacher R.F. Protrahiertes croup-syndrom. Bakteriolo-gische befunde und therapeutische konsequenzen / R.F. Schumacher, J. Forster // Klin. Pediatr. 1993. - Vol. 205, N 3. - P. 153-157.

166. Siani V. Detection of respiratory syncytial virus using immu-nohistochemistry. Report of 53 cases of sudden infants death / V. Siani, J.C. Netter, B. Gorquet et al. // Ann. Pathol. 1999. - Vol. 19. - P. 99102.

167. Skolnik N. Croup / N. Skolnik // J. Fam. Pract. 1993. - Vol. 37, N 2. - P. 165-170.

168. Smith F.S. Agerelated development of human memory T-helper and B-cell responses toward parainfluenza virus type-1 / F.S. Smith, A. Portner, R.I. Leggiadro et al. // Virology. 1994. - Vol. 205, N 2. -P. 453-461.

169. Sollet J.P. Les infections A virus syncytial respiratoire / J.P. Sollet // Lett. Infect. Microbiol. Clin. 1992. - Vol. 7, N 2. - P. 98-99.

170. Sominina A.A. Monoclonal ELISA-kits and Polymerase chain reaction in diagnosis of Influenza / A.A. Sominina, O.I. Kiselev, T.A. Bechtereva et al. // Progress in Clinical Virology 14-18 August 1994. -Joint Meeting, Stockholm. 1994. - P. 159.

171. Sonoda S. Acute lower respiratory infections in hospitalized children over a 6 year period in Tokyo / S. Sonoda, Y. Gotoh, F. Bann, T. Nakayama // Pediatr. Int. 1999. - Vol. 41, N 5. - P. 519-524.

172. Sprem N. Effects of sulfur dioxide and smoke of the incidence of laryngotracheitis (croup) / N. Sprem, S. Branica // Int. J. Pediatr. Otorhinolar. 1993. - Vol. 26, N 3. - P. 245-250.

173. Stout С. Evaluation of a monoclonal antibody pool for rapid diagnosis of respiratory viral infection / C. Stout, M.D. Murphy, S. Lawrence, S. Julian // J. Clin. Microbiol. 1989. - Vol. 27, N 3. - P. 448452.

174. Taubenberg J.K. Initial genetic characterization of the 1918 «spanish» influenza virus / J.K. Taubenberg, A.H. Reid, A.E. Kraff et al. // Science. 1997. - Vol. 275. - P. 1793-1796.

175. Tkacova M. Evalution of monoclonal antibodies for subtyp-ing of currently circulating human type A influenza viruses / M. Tkacova, E. Vareckova, I.C. Baker, J.M. Love, T. Ziegler // J. Clin. Microbiol. 1997. - Vol. 35, N 5. - P. 1 196-1198.

176. Todd S.J. Comparison of rapid immunofluorescence procedure with Test Pack RSV and Directigen FLU-A for diagnosis of RSV and influenza A virus / S.J. Todd, L. Minnich, J.L. Waner // J. Clin. Microbiol. 1995. - Vol. 33, N 6. - P. 1650-1651.

177. Tuteja U. Generation and characterization of monoclonal antibodies to adenovirus / U. Tuteja, H.V. Batra // Indian. J. Exp. Biol. -2000. Vol. 38, N 12. - P. 1259-1262.

178. Van-Bever H.P. Croup and recurred croup: their associabion with astma and allergy / H.P. Van-Bever, M.H. Wierinda, J.J. Weyler, V.J. Neben, M. Fortum, P.A. Vermeire // J. Pediatr. 1999. - Vol. 158, N 3. - P. 253-257.

179. Walls H.H. Characterization and evaluation of monoclonal antibodies developed for typing influenza A and influenza В viruses / H.H. Walls, M.W. Harmon, J.J. Slagle et al. // J. Clin. Microbiol. -1986. Vol. 23, N 2. - P. 240-245.

180. Wood S.R. Development and preliminary evaluation of an EIA for the detection of adenovirus type 8 / S.R. Wood, I.R. Sharp, J.C. Jong, M.W. Verweij-Uijterwaal // J. Med. Virol. 1994. -Vol. 44. - P. 348-352.

181. Wood S.R. Rapid detection and serotyping of adenovirus by direct immunofluorescence / S.R. Wood, I.R. Sharp, E.O. Caul, I. Paul, A.S. Bailey, M. Hawkins, S. Pugh, J. Treharne, S. Stevenson // J. Med. Virol. 1997. - Vol. 51, N 3. - P. 198-201.

Информация о работе

Суховецкая, Вера Федотовна
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург, 2004
ВАК 03.00.06

Диссертация

Использование новых диагностических тест-систем для изучения этиологии и клинических особенностей острых стенозирующих ларинготрахеитов у детей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы