Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Использование культур клеток органов поросенка в производстве ветеринарных биопрепаратов и получении трансгенных свиней

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Самуйленко, Светлана Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Использовоание клеток и тканей в производстве ветеринарных биопрепаратов

1.2. Получение трансгенных свиней

1.3. Оценка реактогенности, токсичности и безвредности масляных адъювантов и их компонентов

1.4. Технологические линии для культивирования клеток и вирусов при производстве биопрепаратов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование культур клеток органов поросенка в производстве ветеринарных биопрепаратов и получении трансгенных свиней"

Актуальность темы. Сфера применения культур клеток и тканей необычайно широка. Они используются в вирусологии, микробиологии, протозоологии, микологии, иммунологии, фармакологии, токсикологии, цитогенетике, цитопатологии, изучении болезней животных, промышленном производстве биопрепаратов (вакцин, диагностикумов, гипериммунных сывороток) и других вопросах (14, 21, 22, 23, 24, 25, 38, 39, 54, 75, 87, 88, 89, 90, 93,94,97, 100, 101, 112, 136, 153,211 и многие другие).

Значительный прогресс в области вирусологии, инфекционной патологии и иммунологии был достигнут за последнюю четверть века во многом благодаря гибридомной технологии (7, 11).

Особенно выдающиеся открытия сделаны в области молекулярной биологии, когда была открыта молекулярная структура генома организма. На этой базе быстрыми темпами возникли отрасли молекулярной генетики, клеточной и генной инженерии (128).

В области биотехнологии представляется весьма интересным использовать сперматозоиды в качестве переносчика рекомбинантной ДНК для получения трансгенных животных (56, 122, 123, 124, 205), что является мощным рычагом селекции XXI века (122, 123, 124).

Проведение исследований по изучению токсичности масляных адъювантов и их компонентов в производстве биопрепаратов и получении трансгенных животных с помощью культур клеток органов свиньи представляет не только практический, но и огромный научный интерес.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований является изучение возможности использования культур клеток и тканей органов поросенка при производстве биопрепаратов и получении трансгенных свиней.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- разработать способ оценки токсичности масляных адъювантов и их компонентов, входящих в состав вакцин, с помощью культуры клеток свиной почки в пробирках с монослоем;

- изучить в сравнительном аспекте токсичность масляных адъювантов и их компонентов с помощью белых мышей и разработанного способа с использованием культур клеток свиной почки;

- изучит возможность культивирования клеток сперматогоний свиньи суспензионным способом;

- оптимизировать культивирование клеток ткани семенника поросенка по основным физико-химическим и биофизическим параметрам.

Научная новизна. Впервые разработан способ определения токсичности масляного адъюванта и его компонентов, применяемых при производстве биопрепаратов, с использованием культуры клеток свиной почки в монослое в пробирках. На способ подана заявка на Патент № 2000126125 от 19 октября 2000 г. Впервые для получения трансгенных свиней предложен способ суспензионного культивирования в биореакторе культур клеток семенника поросенка с использованием питательных сред, которые на каждом этапе культивирования имели все более сложный состав, обогащенных фетальной сывороткой и сывороткой от взрослых животных, обогащенных энергетическими, гормональными и ферментативными компонентами, при поддержании основных физико-химических параметров на оптимальном для каждого этапа уровне. Заявка на патент ШшоиШСотЛЛ.Ц 2000 г.

Практическая значимость работы.

Разработан способ определения токсичности масляного адъюванта, масла, эмульгаторов, используемых в производстве биопрепаратов, с использованием культур клеток свиной почки в монослое в пробирках.

Разработан способ по проведению исследований с использованием полимеразной цепной реакции.

Разработан способ суспензионного культивирования культур клеток семенника поросенка, инфицированных ретровирусными генными конструкциями PLU и pLNa, с целью получения трансгенных свиней.

Апробация работы♦

Материалы диссертации и ее отдельные разделы докладывались: на заседаниях Ученого Совета Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности, 1999-2000; на Международной конференции, посвященной 80-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина, Москва, 1999; на Всероссийской научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных препаратов», посвященной 30-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности, Щелково, 2000; на Международной научно-практической конференции «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных» во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии, Покров, 2000; на Всероссийской научно-производственной конференции «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарной практике» в Федеральном государственном унитарном предприятии «Ставропольская биофабрика», Ставрополь, 2000; на II Международной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» во Всероссийском научно-исследовательском институте сельскохозяйственной биотехнологии, Москва, 2000.

Публикация результатов исследованияй

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в т.ч. две заявки на Патент.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

На защиту выносятся исследования по изучению токсичности масляных адъювантов и их компонентов, применяемых в производстве биопрепаратов, на лабораторных животных и с помощью разработанного нового способа с использованием культур клеток свиной почки в монослое и нового направления в получении трансгенных свиней с помощью суспензионного культивирования в биореакторе культур клеток семенника поросенка с использованием питательных сред, которые на каждом этапе культивирования имели все более сложный состав, обогащенных фетальной сывороткой и сывороткой от взрослых животных, обогащенных энергетическими, гормональными и ферментативными компонентами при поддержании основных физико-химических параметров на оптимальном для каждого этапа уровне.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и приложения. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и 15 рисунками, в т.ч. 4 графика. Список литературы содержит 215 источников, в т.ч. 87 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Самуйленко, Светлана Анатольевна

4.ВЫВОДЫ

1. Разработан эффективный, высокочувствительный способ оценки токсичности масляных адъювантов и их компонентов (масло, эмульгатор) с использованием культур ХАегоК СП

2. Окончательный учет результатов и определения количественного показателя токсичности масляных адъювантов и их компонентов, используемых при разработке и промышленном производстве биопрепаратов, при титровании на культуре клеток СП в пробирках с монослоем достаточно 24 часа.

3. При определении токсичности масляных адъювантов и их компонентов установлена коррелятивная связь между показателями, полученными с использованием белых мышей, и количественными титрами, полученными с использованием культуры клеток СП в пробирках с монослоем.

4. Чувствительность культуры клеток СП в пробирках с монослоем в 10-100 раз выше, чем у белых мышей по отношению к маслу, эмульгатору и масляной эмульсии.

5. Установлены условия культивирования клеток ткани семенника поросенка, в том числе зародышевых половых клеток, обеспечивающих поддержание и дифференцировку сперматогониев in vitro.

6. Наиболее сложным и определяющим является четвертый период сперматогенеза в культуральной системе.

С целью создания трансгенных свиней оптимизированные нами параметры культивирования позволяли получать 5-10% живых клеток, включая сперматогонии, несущие дополнительную информацию.

7. Установлено, что эффективными для суспензионного культивирования являются магнитные спиннерные установки, емкостью от 100 до 1000 мл, с коэффициентом заполнения 0,5.

80

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработанный способ оценки токсичности масляного адъюванта и его компонентов с использованием культуры клеток СП в пробирках с монослоем (Заявка на Патент № 2000126125 от 19.10.2000 г.) можно использовать при разработке и производстве вакцин, гипериммунных сывороток, диагностикумов.

Определены параметры культивирования клеток семенника поросенка с подбором эффективных питательных сред с целью использования этих данных при создании трансгенных свиней (Заявка на Патент №£Р00/1$0(?0г.). Разработана и утверждена директором ВНИТИБП методика постановки ПЦР.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Самуйленко, Светлана Анатольевна, Щелково

1. Алексанян Р.Л., Шипилов В.И., Дудников А.И., Михалишин В.В., Мамков Н.С. Иммуногенная активность противоящурных вакцин, изготовленных на основе синтетического и минерального масел.// Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1990, с. 78-79.

2. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. Т.1. - М.: Мир, 1986.

3. Андреева Л.Ф., Десницкий Л.Г., Дондуа Л.К., Букина Н. Клеточное размножение и процессы дифференциации. Л.: Наука, 1983.

4. Байбаков В.И. Биотехнология. 5, №1, 1989.

5. Балышева В.И., Жестерев В.И. Культура клеток ПСГК-С85 для культивирования вирусов сельскохозяйственных животных. // Тез. пленарных и стендовых докл. III Всесоюз. совещ. «Культивирование клеток животных и человека». Москва, 1990. - С. 71.

6. Берзовски Д.А., Берковер А.Дж., Браун Э.Дж., Джойнер К.А., Фрэнк М.М. и др.// Иммунология. Т.З. - М.: Мир, 1987-1989, с.284.

7. Бояджан Г.К., Прохоров В.В., Ефимов Н.И., Гладилин Г.В. Иммунобиологические свойства клонов вируса ящура типа О. В кн.: Актуальныевопросы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1976, ч.1, с. 30-31.

8. Ю.Бояджан Г.К., Сюсюкин A.A. Изыскание иммуногенных клонов вируса ящура типа О. В кн.: Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии.-Владимир, 1976, 4.1, с.30-31.

9. Воробьев A.A. Проблема адъювантов в вакцинно-сывороточном деле. В кн.: Адъюванты в вакцинно-сывороточном деле. - Тез. докл. - М., 1975, с. 19-23.

10. З.Воробьев A.A., Васильев Н.И. Адъюванты (неспецифические стимуляторы иммуногенеза). М.: Медицина, 1969. - 205 с.

11. Герасимов В.Н. Получение и использование постоянных линий клеточных культур в ветеринарной вирусологии. Автореферат дисс. докт. вет. наук. -Владимир, 1998.

12. Голубев Д.В., Соминина A.A., Медведева М.Н. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. Л.: Медицина, 1976.

13. Гусев A.A., Куляшбекова Ш.К., Герасимов В.Н. Развитие биотехнологии культур клеток во ВНИИЗЖ.// Современные аспекты ветеринарной патологии животных. Владимир, 1998.

14. Дудников А.И., Коропов В.Н., Смирнов В.И., Бурдов А.Н., Мамков Н.С., Довгопол В.Ф. Количественная оценка иммуногенности противоящурной эмульсионной вакцины на свиньях.// Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1983, с. 61-62.

15. Дудникова E.K. Разработка и применение иммуноферментного анализа для выявления противоящурных антител в сыворотках крови животных. -Автореферат дисс. канд. вет. наук. Владимир, 1997.

16. Дьяконов Л.П. Основные достижения и перспективы развития клеточной биотехнологии.// Труды ВИЭВ. Т.71. - М., 1998.

17. Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф., Поздняков A.A., Денисенко Г.Ф., Панкова Т.Е., Гололобова М.Т., Калмыкова Т.П. Культура клеток и тканей животных.// Учебно-методическое пособие. Ставрополь, 1980.

18. Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф., Поздняков A.A., Денисенко Г.Ф., Калмыкова Т.П. Культивирование клеток и тканей животных.// Учебно-методическое пособие. Ставрополь, 1986.

19. Дьяконов Л.П., Конюхов А.Ф., Василевич E.H., Костина Ю.И., Расулев О.Ш., Коротеева Л.А. Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов. М., 1986.

20. Еремец В.И. Разработка технологии изготовления референтных ящурных препаратов и стандартизация реакции нейтрализации для оценки иммунного статуса животных. Дисс. канд. биол. наук. - М., 1982.

21. Ефимов Н.И., Мамков Н.С., Шоршнев В.И. Реактогенность культуральной противоящуриой вакцины в зависимости от содержания адъювантов.// Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1987, ч.1, с. 25-26.

22. Зб.Зенгбуш П. Молекулярная и клеточная биология. Т.2. - М.: Мир, 1982.37.3енгбуш П. Молекулярная и клеточная биология. Т.З. - М.: Мир, 1982.

23. Итоги науки и техники. Серия "Вирусология", т.8. Тканевые и клеточные культуры. М.: ВИНИТИ, 1979.

24. Итоги науки и техники. Серия "Микробиология", т. 14. Аппаратура для культурально-технологических процессов в микробиологии. М.: ВИНИТИ, 1984.

25. Каталог фирмы "Bellco Biotechnology", США, 1986.

26. Каталог фирмы "Bioflo Biotechnology", США, 1995.

27. Каталог фирмы "NBS", США, 1980.

28. Колбасова О.Л., Юрков С.Г., Куриннов В.В., Середа А.Д., Кушнир С.Д., Смыслова Н.Ю., Черемашенцева Н.А. Клональная характеристика перевиваемой линии клеток.// Доклады. РАСХН,- Науч.-теор. журнал. (4 июль-август), 2000.

29. Коровин Р.Н., Зеленский В.П. Опухолевые болезни птиц. М.: Колос, 1984.

30. Кузнецов A.B. Молекулярные аспекты транспорта экзогенной ДНК сперматозоидами. Диссертация докт. биол. наук. - Оболенск, 1999.

31. Мамков Н.С. Масляные адъюванты для противоящурных вакцин. Автореф. дисс. докт. вет. наук. - Владимир, 1999.

32. Мамков Н.С. Масляные адъюванты для противоящурных вакцин. Дисс. докт. вет. наук. - Владимир, 1999.

33. Мамков Н.С., Дудников А.И., Цветков О.Н., Косульникова H.A., Ильина Г.П., Коропов Г.В. Подбор эмульгаторов для изготовления масляных противоящурных вакцин.// К новой стратегии борьбы с ящуром: Международная конференция. Владимир, 1991, ч.1, с.54-55.

34. Мамков Н.С., Савельев В.Ю., Дудников А.И. Оценка реактогенности компонентов эмульсионных вакцин на белых мышах.// Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1988, ч.2, с.31-33.

35. Мамков Н.С., Савельев В.Ю., Михалишин В.В., Шипилов В.И., Дудников А.И., Беденко В.Г., Ничикова Т.Н., Чистяков Б.Е. Адъювант для вакцины против ящура.//Патент: SU 1743027 AI, 08.11.1993.

36. Мельник Р.И., Сергеев В.А., Пичугин JT.M. Размножение вируса ящура в культуре переживающих тканей крупного рогатого скота и свиней. Ветеринария, 1964, №8, с. 13-16.

37. Моренков О.С., Манцыгин Ю.А., Лежнев Э.И. Регуляция образования иммуноглобулинов в культуре гибридомных клеток. // Тез. пленарных и стендовых докл. III Всесоюз. совещ. «Культивирование клеток животных и человека». Москва, 1990. - С. 8-9.

38. Панкратов В.П. Проточно-перфузионные методы культивирования клеток. // Тез. пленарных и стендовых докл. III Всесоюз. совещ. «Культивирование клеток животных и человека». Москва, 1990. - С. 9-10.

39. Пинаев Г.П., Полянская Г.Г., Сакута Г.А., Богданова М.С. Каталог.Российская коллекция клеточных культур (РККК). Вып.5. - С.-Петербург, Омск, 1999.

40. Пол Д. Культура клеток и ткани. М.: Медгиз, 1963.

41. Рубан Е.А., Соколова Н.В. Использование турбинной самовсасывающей мешалки для глубинного культивирования на микроносителях.// Экспресс-информация. Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности. М., №5, 1982, с. 12-15.

42. Савельев В.Ю., Мамков Н.С., Беденко В.Г., Михалишин В.В., Шипилов В.И., Дудников А.И. Критерии оценки качества масляных адъювантов и подбор их компонентов.// Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии. -Владимир, 1990, с. 80-81.

43. Савельев В.Ю., Мамков Н.С., Шоршнев В.И. Влияние концентрации белков на вязкость и реактогенность эмульсионных препаратов.// Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1988, ч.2, с. 30-31.

44. Самуйленко А.Я. Разработка промышленной технологии изготовления высокоэффективных моно- и бивалентной противоящурных вакцин. Дисс. докт. вет. наук. - М., 1983.

45. Свенсон К., Уэбстер П. Клетка. M.: Мир, 1980.

46. Сергеев В.А. Размножение вирусов животных в культуре ткани. Автореферат дисс. докт. биол. наук. - М., 1967.

47. Сергеев В.А., Орлянкин Б.Г. Структура и биология вирусов животных. М.: Колос, 1983.

48. Сергеев В.А., Хижанская В.П. Влияние трипсинизации на рост клеток и размножение вируса. В кн.: Актуальные проблемы вирусных инфекций. -М., 1965, с. 432-433.

49. Соболев В.В. Исследование биологических свойств и селекция штаммов вируса ящура в производстве поливалентной вакцины. Дис. докт. биол. наук. - М., 1981.-262 с.

50. Спиер Р.Д., Гриффит Дж.Б. Биотехнология клеток животных. Т.1. - М.: ВО "Агропромиздат", 1989.

51. Спиер Р.Д., Гриффит Дж.Б. Биотехнология клеток животных. Т.2. - М.: ВО "Агропромиздат", 1989.

52. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных. Справочник. - Москва, 1991.

53. Сюсюкин A.A., Кравец И.К., Калугина Т.Е., Жучков М.И. Культивирование вируса ящура в клетках почек ягнят и его иммуногенность. Ветеринария, 1972, №5, с. 36-38.

54. ЮЗ.Сюсюкин A.A., Кравец И.К., Сюсюкина М.С., Цветкова Н.Е., Маслова Н.С.Изучение антигенности вируса ящура, выращенного в клетках ВНК-21 (клон 13). В кн.: Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии. - М., 1976, 4.1, с. 35-36.

55. Сюсюкин A.A., Кравец И.К., Цветкова Н.Е., Завьялова Г.Н. Выращивание вируса ящура комбинированным способом в клетках ВНК-21 и его иммунобиологические свойства. В кн.: Ящур: Мат. науч. конф. Всес. н.-и. ящ. ин-т. - Владимир: ВНИЯИ, 1968, с. 15-17.

56. Ю5.Сюсюкин A.A., Кравец И.К., Цветкова Н.Е., Павлов В.Е. Иммуногенные свойства опытной вакцины против ящура. Ветеринария, 1971, № 5, с. 40-42.

57. Юб.Сюсюкин A.A., Сергеев В.А., Груздев А.И., Рытов В.Н. Аппараты для выращивания вируса ящура во вращающихся сосудах. В кн.: Ящур: Тем. сб. раб./ Всес. науч.-и. ящ. ин-т. - Владимир: ВНИЯМ, 1970, №1, с. 30-33.

58. Сюсюкин A.A., Сероджев А.Т., Малышева K.M. Накопление вируса ящура в культурах первичных, диплоидных и перевиваемых клеток почек ягнят при разных методах выращивания. Сельскохозяйственная биология, 1975, т. 10, № 5, с. 689-693.

59. ПО.Сюсюкин A.A., Сюсюкина М.С., Цветкова Н.Е., Гринева Е.А., Жуков М.И., Захаров В.М., Ефимов Н.И. Некоторые свойства вируса ящура в зависимости от системы культивирования. В кн.: Ящур: : Тем. сб. науч. раб./ Владимир, 1974, №2, с. 62-63.

60. Ш.Тарасов В.Н. Управляемое культивирование и непрерывное культивирование вирусов и клеток позвоночных.// Итоги науки и техники. ВИНИТИ, сер. «Микробиология», 4, 1975, с. 152-207.

61. Токарик Э.Ф. Стабилизация биологической активности живых вирусных вакцин (на модели вакцин против ньюкаслской болезни, болезни Марека и болезни Ауэски). Автореферат дисс. докт. биол. наук. - М., 1989.

62. ПЗ.Толокнов A.C., Кравченко В.М., Гусев A.A., Мамков Н.С. Иммуногенность эмульсионной противоящурной вакцины, изготовленной из сухого антигена А22 № 550.// Актуальные проблемы ветеринарной вирусологии. Владимир, 1983, с. 64-66.

63. Трошин A.C. Биология клетки в культуре. JL: Наука, 1984.

64. Феннер Ф., Мак-Ослен Б., Миме С., Сэмбрук Дж., Уайт Д. Биология вирусов животных, т.1. -М.: Мир, 1977.

65. Пб.Фридлянская И.И., Горюнова Л.Б., Пинаев Г.П. Коллекции клеточных культур: задачи и принципы организации. // Тез. пленарных и стендовых докл. III Всесоюз. совещ. «Культивирование клеток животных и человека». -Москва, 1990.-С. 11.

66. Шипилов В.И., Михалишин В.В., Мамков Н.С., Савельев В.Ю., Дудников А.И., Алексанян Р.Л., Шубин Л.Н. Адъювант для вакцины против ящура.// Патент: RU 1692022 С, 28.06.1993.

67. Эрнст Л.К. Проблемы селекции и биотехнологии сельскохозяйственных животных. М., 1995.

68. Эрнст Л.К., Прокофьев М.И. Биотехнология сельскохозяйственных животных. -М.: Колос, 1995, с. 132-144.

69. Юрков С.Г., Витина С.А., Кушнир С.Д. Модификация перевиваемых клеток почки поросенка РК-15. // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов. Тез. докл. V Всеросс. конф. - Щелково, 1996. - С.30-31.

70. Юткин Е.В. Получение трансгенных коз и изучение фенотипических показателей у трансгенных овец с геном-казеин-химозина. Диссертация канд.биол. наук. - Моск. обл., п. Горки Ленинские, 1999.

71. Babiuk L., Van den Hurk S., Zamb Т., Fitzpatrick D/ Recombinant bovine herpesvirus type 1 polypeptides and immunoassays. Пат. США № 5879895, 1999.

72. Bach B.R. Method and apparatus for growth cell in vitro. Endotronics. Ins. Пат. США, №737515, 1987.

73. Banes A. Biocompatible polyrganosiloxane compasition for cell culture apparatus: Пат. США, №4789601, 1988.

74. Barski G., Sorieul S., Cornefert F. "Hybrid" type cells in combined cultures of two different mammalian cell stains, J. Natl. Cancer Inst., 26, 1269, 1961.

75. Bartal A.H. Apparatus for enhancing cell growth, preservation and transport. Пат. США, №4734313, 1988.13 5.Butter M., Jenkins H.J. of Biotechnology, 12, 1989. pp. 97-110.

76. Capstick P.B., Telling R.C., Chapman W.G., Stowart D.L. Growth of a clonedstrain of hamster kidney cells in suspended culture and thei susceptibility to the virus of FMD.-Nature, 1962, 195, p. 1163.

77. Cohn M. Natural history of the myeloma, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 32,211, 1967.

78. Cotton R.G.H., Milstein C. Fusion of two immunoglobulin producing myeloma cells, Nature, 244, 42, 1973.

79. Coussens P.M., Reilly J.D., Abujoub A. Sustainnable cell line for the production of Marek's disease vaccines. Пат. США № 5874303. - 1999.

80. Daley M.J., Hayes P.W. Method of reversing immunosuppression in vaccines. -Пат. США № 5928649, 1999.

81. De Bruyne N.A. Magnetic stirrer apparatus with quided, floating stirrer. Toche Corp. Пат. США, №4665377, 1984.

82. Doudnikov A.I., Koropov V.N., Smirnov V.I., Mikhalichine V.V., Oufurov N.A., Mamkov N.S. Le vaccin antiaphteux en emulsion a base de virus lapinise. In: O.I.E.XVI-e Conf. Comm. pour 1 etude Fievre Aphteuse/ 14-17 sept. Paris. 1982. P. 89-92.

83. Elsworth R. Multi-layer perfusion tissue culture. Process Biochem., 5, 1970. pp. 21-22.

84. Engvall E., Pesce A.J. Quantitative enzyme immunoassay, Scand. J. Immunol., 8 (Suppl. 7), 23,1978.

85. Evans M.J., M.H. Kaufmann. Establishmentin culture of pluripotential cells from mouse embryos.//Nature, 1981, V.292, P.154-156.

86. Feder J. Meth. Enzymol, vol. 135, Acad. Press, 1987. pp. 383-399.

87. Firket H. Cell division.// In "Cell and Tissues in culture". (E.N. Willmar, ed), vol.1, Academic Press, New York, 1965. p.203.

88. Frenkel H.S. La culture du virus de la fievre aptheuse sur 1 epithelium de la tonque des bovins. Bull. Off. Intern. Epiz., 1947,28, p.155-162.

89. Frenkel H.S. Research of FMD. Ill The cultivation of the virus on a practical scale in explantations of bovine tonque epithelium. Am. J. Vet. Res., 1951, 12, p. 187190.

90. Frenkel H.S. Research of foot-and-mouth disease. I Hystological changes in explantatad bovine epitheliel tonque tissue infected with the virus of foot-and-mouth disease. Am. J. Yet. Res., 1949, 10, p. 142-145.

91. Frenkel H.S. Research of foot-and-mouth disease. Ill Cultivation of the virus on practical scale in explantations of tonque epithelium. Amodification of the culture technique. Am. J. Vet. Res., 1954, 15, №56.

92. Frenkel H.S. Researches sur la fievre aphteuse. La culture du virus sur une echellepratique par explantation d epithelium lingual bovin. Bull. Off. Intern. Epiz., 1953, 38, №1-2, p. 91-97.

93. Frenkel H.S., Karsenberg I.G. La culture "in vitro" du virus vaccin dans le peau foetall bovine et ovine. Rev. Lyon. Med., 1959, 8, p. 73-76.

94. Frenkel H.S., Ribelin W.S. Cultivation of the foot-and-mouth disease virus in explanted epithelium of the bovine tonque. IX Growth characteristics of the virus in large scale tissue cultures. Am. J. Vet. Res., 1956, 17, №62, p. 40-41.

95. Frenkel S., Bekkum J.G. van, . Frenkel H.S. On the cultivation of hog cholera virus in swine spleen tisue explanted in a fluid medium. Bull. Off. Intern.Epiz., 1955/43 p. 327-330.

96. Jona J. Sperm cells as DNA vectors for the preparation of transgenic animals.// Pap. Lst Czech-Swiss Symp. Adv. Biotechn. Prague, Sept. 4-7, 1999. 53, N 11. -P. 540-542.

97. Gandolfi F., M. Lavitrana, A. Camaioni, C. Spadafora, G. Siracusa, A. Lauria. The use of sperm-mediated gene transfer for the generation of transgenic pigs.// J. Reprod. Fert., 1989, V.81, P.23-28.

98. Garner I., Cottingham I.R., Temperley S.M., Foster D.C., Sprecher C.A., Prunkard D.E. Protein С production in non-human transgenic mammals. Пат. США № 5905185, 1999.

99. Gordon J.B., G.A. Scangos, D.J. Plonkin, J.A. Barbosa, F.H. Ruddle. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, V.77, P.7380-7384.

100. Haber E. Antibodies of restricted heterogeneity for structural study, Fed. Proc., 29, 66, 1970.

101. Ham R.G. Clonal growth of mamalin cells in a chemically defined synthetic medium. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 53, 1965. pp. 288-293.

102. Hammerling G.J., Hammerling U., Kearney J.F., eds. Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas, Elsevier/North-Holland, Amsterdam, 1981.

103. Hanni C., Stoppini L. Dispositif de culture de cellules organigues etd etude de leur activité electrophysiologigue et membrane utilisee dans un tel dispositif. Пат. Франция № 9807596, 1999.

104. Harris H., Watkins J.F. Hybrid cells derived from mouse and man: Artificial heterokaryons of mammalian cells from different species, Nature, 205, 640, 1965.

105. Heimindinger P. Milieu et procédé de propagation et de multiplication virales. -Пат. Франция № 9803333, 1999.

106. Horibata К., Harris A.W. Mouse myelomas and lymphomas in culture, Exp. Cell Res., 60, 61, 1970.

107. Howard A., Pelc S.R. Synthesis of NDA in normal and irradiated cells and its relation to Chromosome breakage. Heredity, vol.6, suppl., 1953. p.251.

108. Hurrell J.G.R., ed. Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and applications, CRC Press, Boca Raton, Florida, 1982.

109. Kapil S. Vultivalent bovine coronavirus vaccine and method of treating bovine coronavirus infection.- Пат. США, № 5916570, 1999.

110. Kennett R.H., McKearn T.J., Bechtol K., eds. Monoclonal antibodies, Plenum Press, New York, 1980.

111. Kohler В., Milstein C. Continuous culture of fused cells secreting antibody of predefined specificity, Nature, 256, 495, 1975.

112. Kohler G., Howe S.C., Milstein C. Fusion between immunoglobulin secreting and nonsecreting myeloma cell lines, Eur. J. Immunol., 6, 292, 1976.

113. Kohler G., Milstein C. Derivation of specific antibody producing tisseu culture and tuneor lines by cell fusion, Eur. J. Immunol., 6, 611, 1976.

114. Krause R.M. The search for antibodies with molecular uniformity, Adv. Immunol., 12, 1, 1970.

115. Langlois P. Adenovirus aviare celo recombinant comme vecteur vaccinant. Пат. Франция № 9710386, 1999.

116. Laskov R., Scharff M.D. Synthesis, assembly and secretion of gamma globulin by mouse myeloma cells, J. Exp. Med., 131, 515, 1970.

117. Lin T.P. Microinjection of Mouse Eggs.// Science, 1966, V.151, P.333-337.

118. Littlefield J.W. Selection of hybrids from matings of fibroblasts in vitro and their presumed recombinants, Science, 145, 709, 1964.

119. Lubiniecki Anthony S. Historical reffections on cell culture engineering. // Cytotechnology. 1998. - 28, N 1-3. - P. 139-145.

120. Mackowiak C., Dubouclard C., Favre H., Roumiantzeff M., Fontaine J., Terre J., Bornarel P. Etude de la culture du vims de la fievre aphteuse sur epithelium linqual bovin en survie. Perspectives actuelles. -BOIM, 1969, 71, №1-2, p. 3-45.

121. Maggro E.T., ed. Enzyme Immunoassay, CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980.

122. Majak R.A.J.Cell. Biol, 105, №1,1987. pp. 465-471.

123. Margulies D.H, Cieplinski W, Dharmgrongartama B, Gefter M.L, Morrison S.L, Kelly T, Scharff M.D. Regulation of immunoglobulin expression in mouse myeloma cells, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol, 41, 781, 1977.

124. Margulies D.H., Kueht W.M., Scharff M.D. Somatic cell hybridization of mouse myeloma cells, Cell, 8, 405, 1976.

125. Melchers F., Potter M., Warner N., eds. Current Topics in Microbiology and Immunobiology, Vol. 81, Lymphocyte Hybridomas, Springer-Verlag, Berlin, 1978.

126. Milstein C., Adetugbo K., Cowan N.J., Kohler G., Secher D.S., Wilde C.D. Somatic cell genetics of antibody secreting cells: Studies of clonal diversification and analysis by cell fusion, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 41, 793, 1977.

127. Milstein C., Kohler G. Cell fusion and the derivation of cell lines producing specific antibody. In: Antibodies in Human Diagnosis and Therapy, ed. By E. Haber and R.M. Krause, p. 271, Raven Press, New York, 1977.

128. Morris K. US anthrax-vaccine producer saved for now. // Lancet. 1998. - 351, N 9103.-P. 657.

129. Mu Y., Li G., Ruan X., Gong Y., Zhoa N., Zhang X. Interaction of protein and cell with different chitosan membranes.// Tsinghua Sci. And Technol. 1999. - 4, № 3. - P. 1578-1582.

130. Muller L., Wolfgang G.K., Belter A. Anordnung fur das dreidimensionole Machstrum ferlscher und menschicher Zellen. Muller Lierheim K.G. Biol. Laboratorium 8033 Planneg. Заявка № P.3530440, ФРГ, 1987.

131. Parrish Colin R., Carmichael Leland E., Gruenberg A. Attenuated canine parvovirus vaccine. Пат. США, № 5885585, 1999.

132. Petermann H.G. Eine Schelladaptations methode des Maul-und-Klauenseuche-Virus an das Kulturverfahren nach Frenkel. Zbl. Bakt. I., 1959, 175, s.63-66.

133. Pettengill G.S, Sorensen G.D. Murine myeloma cells in suspension culture, Exp. Cell Res., 47, 608, 1967.

134. Piedrahita J.A., G.B. Anderson, G.R. Matrin, R.H. Bondurant, R.L. Pashen. Isolation of embryonic stem cele-like colonies from porcine embryos.// Theriogenology. 1988, V.29, P.286.

135. Pontevorco C. Production of indefinitely multiplying mammaliam somatic cell hybrids by polyethylene glycol (PEG) treatment, Somatic Cell Genet., 1, 397, 1976.

136. Poole A.R., Howell J.I., Lucy J.A. Lysolecithin in cell fusion, Nature, 227, 810, 1970.

137. Potter M. Antigen-binding myeloma proteins of mice, Adv. Immunol., 25, 141, 1978.

138. Potter M. Immunoglobulin-producing tumors and myeloma proteins of mice, Physiol. Rev., 5, 631, 1972.

139. Pursel V.G., R.G. Campbell, K.F. Miller, R.R. Behringer, R.D. Palmiter, R.I. Brinster. Growth potential of transgenic pigs expressing a bovine growth hormone gene.// J. Anim. Sci., 1988, V.66, P.267.

140. Reed M.L., C.A. Roessner, J.E. Womack, C.G. Dorn, D.C. Kraemer. Microinjection of liposome-encapsulated DNA into murine and bovine blastocysts.// Theriogenology. 1988, V.29, P.293.

141. Restifo N.P., Ying H., Hwang L., Leitner W.W. The promise of nucleic acid vaccines.// Gene Ther. 2000. - 7, № 2. - P. 89-92.

142. Ringertz N.R., Savage R.E. Cell Hybrids, Academic Press, New York, 1976.

143. Rottmann O.J., Ch. Stratowa, M. Hornstein, J. Hughes. Tissue specific expression of hepatitis b surface antigenin mice following liposome-mediated gene transfer into blastocysts.// Zbl. Vet. Med. A. 1985, V.32, P.676-682.

144. Saha S.N, Sen A.K. Indian. Vet. J, 64, №6, 1987. pp. 541-545.

145. Salter S.W., E.J. Smith, S.H. Hughes, S.E. Wright, A.M. Fadly, R.L. Witter, L.B. Crittenden. Gene insertion into the chicken germ line by retroviruses.// Poultry Sci. 1986, V.65, P.1445.

146. Salter S.W., E.J. Smith, S.H. Hughes, S.E. Wright, L.B. Crittenden. Transgenic chickens: insertion of retroviral genes into the chicken germ line.//Virology, 1987, V.157, P.236.

147. Salter S.W., L.B. Crittenden. Artificial in sertion of a dominant gene for resistance to avian leukosis virus into the germ line of the chicken.// Theor. Appl. Genet.-1989, V.77, P.457-461.

148. Scher A., Cohn M. Inheritance of an idiotype associated with the immune response of inbred mice to phosphorylcholine, Eur J. Immunol., 2, 319, 1972.211 .Telling R.G. Foot-and-mouth disease vaccine. Process Biochemistry, 1969, 4, №6, p. 49-52.

149. Ubertini В., Nardelli L., Panina G., Lodetti E. Some notes on techniques of foot-and-mouth disease virus production used in Brescia. Europ. Control FMD, Long Island, 26-29 sept. 1967, Rome FAO, 1968, p. 29-40.

150. Varmus H.E. Form and function of retroviral proviruses.// Science, 1982, Y.216, P.812-820.

151. Wall R.J., V.G. Pursel, R.E. Hammer, R.L. Brinster. Development of porcine ova that were centrifuged to permit visualization of pronuclei and nuclei.// Biol. Reprod., 1985, V.32, P.645-651.

152. Webster R. DNA transcription unit vaccines that protect against avian influenza viruses and methods of use thereof. Пат. США № 5916879. - 1999.

153. УТВЕРЖДАЮ ИО директора Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности доктор биологичес1. СПОСОБопределения токсичности и реактогенности масляных адъювантов и их компонентов.1. Разработчики:

154. Самуйленко С.А. с соавторами.1. Щелково 2000

155. УТВЕРЖДАЮ ИО директора Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности доктор биологических наук1. СПОСОБкультивирования сперматогониев для получения трансгенных животных.1. Разработчики:

156. Самуйленко С.А. с соавторами.1. Щелково 2000юг

157. УТВЕРЖДАЮ ИО директора Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности доктор биологических наук

158. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ по выявлению ДНК вируса болезни Марека с помощью полимеразной цепной реакции1. Разработчики:

159. Самуйленко С.А. (ВНИТИБП) Бовровская И.В. (ВНИТИБП) Ярыгина Е.М. (ВНИТИБП) Цыбанова Л.Я. (СВНИИВВиМ)1. Щёлково 2000г.