Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Использование хромосом, несущих терминальные делеции, для изучения генной экспрессии у Drosophila melanogaster

ВАК РФ 03.00.26, Молекулярная генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мельникова, Лариса Сергеевна

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 СТРУКТУРА ТЕЛОМЕР У РАЗЛИЧНЫХ ОРГАНИЗМОВ.

1.2. БЕЛКИ, КОНТРОЛИРУЮЩИЕ ФУНКЦИИ ТЕЛОМЕР У МЛЕКОПИТАЮЩИХ И ДРОЖЖЕЙ.

1.3. АЛЬТЕРНАТИВНЫЕ ПУТИ УДЛИНЕНИЯ ТЕЛОМЕР У МЛЕКОПИТАЮЩИХ И ДРОЖЖЕЙ.

1А НЕОБЫЧНАЯ СТРУКТУРА ТЕЛОМЕР У НЕКОТОРЫХ НАСЕКОМЫХ.

1.5. ГИПОТЕЗЫ ОБ ЭВОЛЮЦИОННОЙ СВЯЗИ МЕЖДУ ТЕЛОМЕРАМИ ДРОЗОФИЛЫ И ТЕЛОМЕРАМИ, ИСПОЛЬЗУЮЩИМИ ТЕЛОМЕРАЗУ.

1.6. ИНСУЛЯТОРЫ,

1.7. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ИНСУЛЯТОРОВ.

1.8. МОДЕЛИ МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ ИНСУЛЯТОРОВ.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 2.1. ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.

2.1.1. Мутации и линии Drosoph.Ha текто£ж1ег использованные в работе.

2.1.2. Генетические скрещивания.

A) Схема скрещивания,использованная для поддержания хромосом с терминальными делециями.

Б) Схема, использованная для выделения и балансировки отдельных хромосом из линии у /ут.

B) Схема, использованная для получения рекомбинантных хромосом между Еп(1с) и 015Ъ Н.

Г) Схема скрещивания, использованная для индукции терминальной генной конверсии. (Д) Схема скрещивания, использованная для индукции высокой частоты терминальных генных конверсий в присутствии мутации Еп^с). 2.2. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.

2.2.1. Трансформация бактериальных клеток плазмидами.

2.2.2. Выделение и очистка ДНК.

A) Выделение ДНК дрозофилы.

Б) Выделение ДНК плазмид методом щелочного лизиса.

B) Выделение фрагментов ДНК из геля и очистка ДНК от продуктов ферментативных реакций.

2.2. 3. Молекулярное клонирование. 2.2. 4. Саузерн-блот -анализ.

А) Рестрикция, электрофорез и мобилизация ДНК на мембрану. (Б) Гибридизация ДНК на мембране с радиоактивными зондами. 2.2.5. Электрофорез в пульсирующем электрическом поле (РРвЕ). 2.2. 6. Амплификация ДНК. 2.2.7. Секвенирование плазмид и продуктов ПЦР. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Линия ум> содержит новую мутацию, которая увеличивает частоту удлинений ДНК посредством терминальной генной конверсии.

3.2 Генетическое картирование мутации Еп(1с).

3.3 Мутация Еп^с) не влияет на частоту рекомбинаций между прямыми повторами, расположенными на конце терминальной делеции.

3.4 Линии ОгозоркПа, несущие мутацию Еп(1с) в течение длительного времени, имеют очень длинные повторы, состоящие из НеТ-А и ТАЯТ элементов.

3.5 Мутация En(tc) не увеличивает частоту НеТ-А и TARТтранспозиций.

3.6 Проксимальные энхансеры гена yellow, окруженные двумя МДГ4 могут активировать проксимальный yellow промотор на конце хромосомы, несущей терминальную делецию

3.7 Дистальный yellow промотор не активирует экспрессию гена yellow при помощи проксимальных yellow энхансеров в аллеле yTD2h4.

3.8 Для нейтрализации энхансер-блокирующего действия проксимального Su(Hw) инсулятора требуется дистальный Su(Hw) инсулятор.

3.9 Только проксимальные yellow энхансеры, расположенные между двумя МДГ4, требуются для активации проксимального промотора гена yellow в yrhl аллеле.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1 Регуляция удлинения теломер и концов хромосом, несущих терминальные делеции у Drosophila melanogaster.

4.2 Роль рекомбинации / генной конверсии в регуляции длины теломер у Drosophila melanogaster.

4.3 Энхансеры yellow, окруженные Su(Hw) инсуляторами, могут активировать изолированный yellow промотор.

4.4 Механизмы блокирования энхансеров определяются Su(Hw) инсулятором.

5. ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование хромосом, несущих терминальные делеции, для изучения генной экспрессии у Drosophila melanogaster"

Теломеры -это специализированые ДНК-белковые комплексы, находящиеся на концах линейных хромосом, которые гарантируют стабильность эукариотического генома (Pardue and DeBaryshe 1999; Zakian 1996). Существуют специальные механизмы, которые добавляют ДНК к концам хромосом эукариот, балансируя потерю терминальной ДНК, возникающую за счет недорепликация (Blasco et. al. 1999; Pardue and DeBaryshe 1999). У большинства эукариот специальная обратная транскриптаза-теломераза, добавляет теломерные ДНК-повторы к концу хромосомы, используя внутреннюю РНК-матрицу (Blasco et.al. 1999; Pardue and DeBaryshe 1999; Greider 1999). Теломеры Drosophila melanogaster имеют особую структуру. Они состоят из множества копий НеТ-А и TART элементов, принадлежащих к семейству ретротранспозонов не содержащих LTR (Biessmann and Mason 1997; Biessmann et.al. 1997; Mason et.al. 2000; Pardue and DeBaryshe 1999; 2000; Mason et.al. 2000). В телом ерах НеТ-А и TART элементы ориентированы "голова к хвосту" (Biessmann and Mason 1997; Levis et.al. 1993; Walter et.al. 1995).

Несколько лет назад были получены линии Drosophila melanogaster, несущие терминальные делеции (Biessmann and Mason 1988; Biessmann et.al. 1990a; Golubovsky et.al. 2001; Levis 1989; Mason et.al. 1984; Traverse and Pardue 1988). Терминально делетированные хромосомы Drosophila демонстрируют свойства хромосом с нормальными теломерами: они устойчиво поддерживаются в течение многих поколений

Biessmann et.al. 1990а; Levis 1989). Было обнаружено, что НеТ-А и TART элементы способны присоединяться к концам терминально делетированных хромосом (Biessmann et.al. 1990b; 1992; Sheen and Levis 1994; Traverse and Pardue 1988). Частота присоединений

НеТ-А элементов к отдельному концу хромосомы варьирует в пределах от 10"' до < 10"4

Biessmann et. al. 1992а; Kahn et.al. 2000; Golubovsky et. al. 2001), хотя ничего не известно относительно механизмов, которые контролируют их транспозиции. Также было показано, что терминальные делеции Drosophila могут быть удлинены генной конверсией, использующей в качестве матрицы для конверсии гомологичные теломерные последовательности, или с помощью рекомбинации между теломерными последовательностями (Kahn et.al. 2000; Mikhailovsky et.al. 1999). Однако относительная важность транспозиции мобильных элементов и конверсии в поддержании длины теломер неизвестна.

Основной целью данного исследования было выделение и характеристика нового гена Enhancer of terminal gene conversion (En(tc))„ мутации в котором приводят к удлинению теломер дрозофилы по механизму генной конверсии. Полученные результаты предполагают, что белок En(tc) контролирует удлинение теломер по механизму репликации ДНК. Таким образом, вопреки сложившемуся мнению, теломеры дрозофилы удлиняются не только в результате транспозиции НеТ-А и TART мобильных элементов.

Одновременно терминальные делеции в регуляторной области гена yellow были использованы для изучения взаимодействия между инсуляторами и энхансерами на больших дистанциях. Инсуляторы - это регуляторные последовательности, которые, находясь перед промоторм, способны предотвратить его активацию или репрессию (Corees and Felsenfeld 2000; Bell et.al. 2001). Лучше всего охарактеризованный инсулятор - это 12 сайтов связывания для белка Su(Hw), которые находятся в регуляторной области ретротранспозона МД1 '4.(Mazo et al. 1989; Geyer 1997). Ранее было показано, что Su(Hw) инсулятор полностью блокирует взаимодействие между энхансерами и промотором гена yellow (Geyer and Corees 1992). Например, у мутант (Рис. 14А) индуцирован инсерцией МДГ4 между энхансерами, контролирующими экспрессию yellow в теле и крыльях, и промотором гена (Geyer et. al 1986). В результате энхансеры гена изолированы от промотора и их взаимодействие блокировано инсулятором. В Gause et al. (1998) была

2 rhl описана производная у мутации у , которая содержала дупликацию регуляторной области гена yellow и МДГ4. Было показано, что дупликация МДГ4 элемента полностью подавляет инсуляцию yellow промотора, отделенного от энхансеров тела и крыльев

Su(Hw) инсулятором (Рис.14Б). Целью данного исследования было выяснение причины подавления инсуляции. Для этого была получена коллекция yellow аллелей, имеющих концы терминальных делеций в разных частях регуляторной области угМ аллеля. В результате было обнаружено, что Su(Hw) может блокировать взаимодействие между yellow энхансерами и промотором, если терминально делетированная хромосома заканчивается дистальнее энханссров yellow . Кроме того, по крайней мере, 5 из 12 сайтов связывания для Su(Hw), содержащихся в Su(Hw) инсуляторе, расположенном за энхансерами yellow, позволяют преодолеть блокирующее энхансеры действие Su(Hw) инсулятора, встроившегося между энхансерами и промотором гена yellow. На основе полученных результатов была предложена модель, по которой два или несколько соседних инсуляторов взаимодействуют друг с другом, блокируя или облегчая энхансер-промоторные взаимодействия, в зависимости от конфигурации других ¿/г/с-регуляторных элементов (энхансеров, сайленсеров и промоторов).

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная генетика", Мельникова, Лариса Сергеевна

5. ВЫВОДЫ.

1. Идентифицирована и картирована новая мутация, En(tc), которая увеличивает частоту терминальной генной конверсии.

2. Показано, что теломеры дрозофилы удлиняются не только в результате транспозиций мобильных элементов, но и по механизму терминальной генной конверсии.

3. Продемонстрировано, что Su(Hw) инсулятор может блокировать энхансеры даже если находится на конце хромосомы, несущей терминальную делецию.

4. Доказано, что два Su(Hw) инсулятора не формируют изолированный транскрипционный домен. Энхансеры гена yellow, окруженные Su(Hw) инсуляторами, могут эффективно активировать изолированный промотор.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мельникова, Лариса Сергеевна, Москва

1. Ashburner, M., 1989 Drosophila: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.

2. Bell, A. C., A. G. West and G. Felsenfeld, 1999 The protein CTCF is required for the enhancer blocking activity of vertebrate insulators. Cell 98:387-396.

3. Bell, A. C., A. G. West and G. Felsenfeld, 2001 Insulators and boundaries: versatile regulatory elements in the eukaryotic genome. Science 291:447-450.

4. Bi, X., and J. R. Broach, 1999 UASrpg can function as a heterochromatin boundary element in yeast. Genes Dev. 13:1089-1101.

5. Bi, X., M. Braunstein, G. J. Shei and J. R. Broach, 1999 The yeast HML I silencer defines a heterochromatin domain boundary by directional establishment of silencing. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:11934-11939.

6. Biessmann, H., and J. M. Mason, 1988 Progressive loss of DNA sequences from terminal chromosome deficiencies m Drosophila melanogaster. EMBO J. 7:1081-1086.

7. Biessmann, H., S. B. Carter and J. M. Mason, 1990a Chromosome ends in Drosophila without telomeric DNA sequences. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1758-1761.

8. Biessmann, H., J. М. Mason, K. Ferry, M. d'Hulst, K. Valgeirsdottir, K. L. Traverse, and M. L. Pardue, 1990b Addition of telomere-associated HeT DNA sequences "heals" broken chromosome ends in Drosophila. Cell 61:663-673.

9. Biessmann, H., L. E. Champion, K. O'Hair, K. Ikenaga, В. Kasravi and J.M. Mason, 1992a Frequent transpositions of Drosophila melanogaster HeT-A transposable elements to receding chromosome ends. EMBO J. 11:4459-4469.

10. Biessmann, H., K. Valgeirsdottir, A. Lofsky, C. Chin, B. Ginther, R. W. Levis, M. L. Pardue, 1992b HeT-A, a transposable element specifically involved in healing broken chromosome ends in Drosophila melanogaster. Mol. Cell. Biol. 12:3910-3918.

11. Biessmann, H., and J. M. Mason, 1997 Telomere maintenance without telomerase. Chromosoma 106:63-69

12. Biessmann, H., M. F. Walter, and J. M. Mason, 1997 Drosophila telomere elongation. Ciba Found Symp. 211:53-67.

13. Biessmann, H., F. Kobeski, M. F. Walter, A. Karsavi, and C. W. Roth, 1998 DNA organization and length polymorphism at the 2L telomeric region of Anopheles gambiae. Insect Mol. Biol. 7:83-93.

14. Biessmann, H., M. Zurovcova, J. G. Yao, E. Lozovskaya and M. F. Walter, 2000 A telomeric satellite in Drosophila virilis and its sibling species. Chromosoma. 109:372-380.

15. Blasco, M. A., S. M. Gasser and J. Lingner, 1999 Telomeres and telomerase. Genes Dev. 13:2353-2359.

16. Bryan, T. M., A. Englezou, J. Gupta, S. Bacchetti and R. R. Reddel, 1995 Telomere elongation in immortal human cells without detectable telomerase activity. EMBO J. 14:4240-4248.

17. Bryan, T. M., L. Marusic, S. Bacchetti, M. Namba, and R. R. Reddel, 1997 The telomere lengthening mechanism in telomerase-negative immortal human cells does not involve the telomerase RNA subunit. Hum. Mol. Genet. 6:921-926.

18. Buchner, K., P. Roth, G. Schotta, V. Krauss, H. Saumweber el al., 2000 Genetic and molecular complexity of the position effect variegation modifier mod(mdg4) in Drosophila. Genetics 155:141-157.

19. Cai, H. N., and P. Shen, 2001 Effects of cis arrangement of chromatin insulators on enhancer-blocking activity. Science 291:493-495.

20. Cai, H. and M. Levine. 1995. Modulation of enhancer-promoter interactions by insulators in the Drosophila embryo. Nature 376:533-536.

21. Chung, J. H., M. Whitely, and G. Felsenfeld, 1993. A 5' element of the chicken □globin domain serves as an insulator in human erythroid cells and protects against position effect in Drosophila. Cell 74:505-514.

22. Cohn, M., and J. E. Edstrom, 1992 Telomere-associated repeats in CHironomus form discrete subfamilies generated by gene conversion. J. Mol. Evol. 35:114-122.

23. Corces, Y. G., and G. Felsenfeld, 2000 Chromatin boundaries. In Elgin, S.C.R. and Workman, J.L. (eds), Chromatin Structure and Gene Expression. Oxford University Press, Oxford, UK, pp. 278-299.

24. Cuvier O., Hart C.M., Laemmli U.K. Identification of a class of chromatin boundary elements. Mol.Cell. Biol. 1998. V. 18. P. 7478-7486.

25. Danilevskaya, 0. N., K. L. Traverse, N. C. Hogan, P. G. DeBaryshe and M.L.Pardue, 1999 The two Drosophila telomeric transposable elements have very different patterns of transcription. Mol. Cell. Biol. 19:873-881.

26. DeLANGE T, JMacks T (1999) For better or worse? Telomere inhibition and cancer. Cell 98:273-275.

27. Donze, D., C. R. Adams, J. Rine and R. T. Kamakaka, 1999 The boundaries of the silenced HMR domain in Saccharomyces cerevisiae. Genes Dev. 13:698-708.

28. Dorsett, D., 1990 Potentiation of a polyadenylation site by a downstream protein DNA interaction. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:4373-4377.

29. Dorsett, D., 1999 Distant liaisons: long-range enhnacer-promoter interactions in Drosophila. Curr. Opin. Genet. Dev. 9:505-514.

30. Dunham, M. A., A. A. Neumann, C. L. Fasching and R. R. Reddel, 2000 Telomere maintenance by recombination in human cells. Nat. Genet. 26:447-450.

31. Fanti L, Giovinazzo G, Berloco M, Pimpinelliî S (1998) The heterochromatin protein 1 prevents telomere fusions in Drosophila. Mol. Cell 2:527-538.

32. Gaszner M., Vazquez J., Schedl P. The Zw5 protein, a component of the seschromatin domain boundary, is able to block enhancer-promoter interaction . Genes Dev. 1999. V. 13. P. 2098-2107.

33. Gause, M., H. Hovhannisyan, T. Kahn, S. Kuhfittig, V. Mogila, and P. Georgiev, 1998 hobo induced rearrangements in the yellow locus influence the insulation effect of the gypsy su(Hw)-binding region in Drosophila melanogaster. Genetics 149:13931405.

34. Gause, M., P. Morcillo and D. Dorsett, 2001 Insulation of enhancer-promoter communication by a gypsy transposon insert in the Drosophila cut gene: cooperation between suppressor of Hairy-wing and modifier of mdg4 proteins. Mol. Cell. Biol. 21:48074817.

35. Gdula, D. A., and V. G. Corces, 1997 Characterization of functional domains of the su(Hw) protein that mediate the silencing effect of mod(mdg4) mutations. Genetics 145:153161.

36. Georgiev, P. G., E. E. Muravyova, A. K. Golovnin, E. M. Gracheva and T. Yu. Belenkaya, 2000 Insulators and long-distance interactions between reulatory elements in higher eukaryotes. Genetika (in Russian) 36:1336-1343.

37. Georgiev, P., and M. Kozycina, 1996 Interaction between mutations in the suppressor of Hairy wing and modifier of mdg4 genes of Drosophila melanogaster affecting the phenotype of g>p,5'>'-induced mutations. Genetics 142:425-436.

38. Gerasimova, T.I., K. Byrd, and Corces V.G. 2000. A chromatin insulator determines the nuclear localization of DNA. Mol. Cell 6:1025-1035.

39. Gerasimova, T. I., and V. G. Corces, 1998 Polycomb and trithorax group proteins mediate the function of a chromatin insulator. Cell 92:511-521.

40. Gerasimova, T. I., D. A. Gdula, D. V. Gerasimov, O. B. Simonova and V. G. Corces, 1995 A Drosophila protein that impacts directionality on a chromatin insulator is an enhancer of position-effect variegation. Cell 82:587-597.

41. Geyer, P. K., C. Spana and V. G. Corces, 1986 On the molecular mechanism of gypsy-induced mutations at the yellow locus of Drosophila melanogaster. EMBO J. 5:26572662.

42. G eyer, P.K., and V. G. Corces, 1987 Separate regulatory elements are responsible for the complex pattern of tissue-specific and developmental transcription of the yellow locus in Drosophila melanogaster. Genes Dev. 1:996-1004.

43. Geyer, P.K., M. M. Green and V. G. Corces, 1990 Tissue-specific transcriptional enhancers may act in trans on the gene located in the homologous chromosome: the molecular basis of transvection in Drosophila. EMBO J. 9:2247-2256.

44. Geyer, P. K., and V. G. Corces, 1992 DNA position-specific repression of transcription by a Drosophila zinc finger protein. Genes Dev. 6:1865-1873.

45. Geyer, P. K., 1997 The role of insulator elements in defining domains of gene expression. Curr. Opin. Genet. Dev. 7:242-248.

46. Ghosh, D., T. I. Gerasimova and V. G. Corces, 2001 Interactions between the Su(Hw) and Mod(mdg4) proteins required for gypsy insulator function. EMBO J. 20:25182527.

47. Golubovsky, M. D., A. Y. Konev, M. F. Walter, H. Biessmann and J. M. Mason, 2001 Terminal Retrotransposons Activate a Subtelomeric white Transgene at the 2L Telomere in Drosophila. Genetics 158:1111-1123.

48. Gorczyca M., Popova E., Jia X.-X., Budnik V. The gene mod(mdg4) affects synapse specicificity and structure in Drosophila . J. Neurobiol.1999. V.39. P.447-460.

49. Greider C.W, 1998. Telomerase activity, cell proliferation, and cancer. Proc Natl Acad SciUSA 95:90-92.

50. Greider, C. W., 1999 Telomeres do D-loop-T-loop. Cell 97:419-22.

51. Hagstrom, K., M. Muller and P. Schedl, 1996 Fab-7 functions as a chromatin domain boundary to ensure proper segment specification by the Drosophila bithorax complex. Genes Dev. 10:3202-3215.

52. Haber JE., 1999. Sir-Ku-itous routes to make ends meet. Cell 97:829-832.

53. Harrison, D. A., D. A. Gdula, R. S. Coyne and V. G. Corces, 1993 A leucine zipper domain of the suppressor of Hairy-wing protein mediates its repressive effect on enhancer function. Genes Dev. 7:1966-1978

54. Holdridge, C., and D. Dorsett, 1991 Repression of hsp70 heat shock gene transcription by the suppressor of Hairy-wing protein of Drosophila melanogaster. Mol. Cell Biol. 11:1894-1900.

55. Kahn, T., M. Savitsky and P. Georgiev, 2000 Attachment of HeT-A sequences to chromosome termini in Drosophila melanogaster may occur by different mechanisms. Mol. Cell. Biol. 20:7634-7642.

56. Kellum, R., and P. schedl, 1991 A position-effect assay for boundaries of higher order chromosomal domains. Cell 64:941-950.

57. Kim, J., B. Shen, C. Rosen and D. Dorsett, 1996 The DNA-binding and enhancer-blocking domains of the Drosophila suppressor of Hairy-wing protein. Mol. Cell. Biol. 16:3381-3392.

58. Kraus, E., W.-Y. Leung and j. E. Haber, 2001 Break-induced replication: a review and an example in budding yeast. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:8255-8262.

59. Krebs J. E., Dunaway M. Insulator elements impart a cis requirement on enhancer-promoter interactions // Mol. Cell. 1998. V. 1. P. 301-308.

60. Levis, R. W., 1989 Viable deletions of a telomere from a Drosophila chromosome. Cell 58:791-801.

61. Levis, R. W., R. Ganesan, K. Houtchens, L. A. Tolar and F.-M. Sheen, 1993 Transposons in place of telomere repeats at a Drosophila telomere. Cell 75:1083-1093.

62. Lindsley, D. L., and G. G. Zimm, 1992 The Genome of Drosophila melanogaster. Academic Press, New York.

63. Lopez, C. C., L. Neilsen and J.-E. Edstrom, 1996 Terminal long tandem repeats in chromosomes from Chironomuspallidivittatus. Mol. Cel. Biol. 16:3285-3290.

64. Lundblad, V., and E. H. Blackburn, 1993 An alternative pathway for yeast telomere maintenance rescues est-1 senescence. Cell 73:347-360.

65. Martin, M., Y. B. Meng and W. Chia, 1989 Regulatory elements involved in the tissue-specific expression of thq yellow gene of Drosophila. Mol. Gen. Genet. 218:118-126.

66. Marlor, R. L., S. M. Parkhurst and V. G. Corces, 1986 The Drosophila melanogaster gypsy transposable element encodes putative gene products homologous to retroviral proteins. Mol. Cell. Biol. 6:1129-1134.

67. Mallin, D. R., J. S. Myung, J. S. Patton and P. K. Geyer, 1998 Polycomb group repression is blocked by the Drosophila suppressor of Hairy-wing su(Hw). insulator. Genetics 148:331-339.

68. Mason, J. M., A. Haoudi, A. Y. Konev, E. Kurenova, M. F. Walter and H. Biessmann, 2000 Control of telomere elongation and telomeric silencing in Drosophila melanogaster. Genetica 109:61-70.

69. Mason, J. M., E. Strobel and M. M. Green, 1984 mu-2: mutator gene in Drosophila that potentiates the induction of terminal deficiencies. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6090

70. McEachern, M. J., and E. H. Blackburn, 1996 Cap-prevented recombination between terminal telomeric repeat arrays (telomere CPR) maintains telomeres in Kluyveromyces lactis lacking telomerase. Genes Dev. 10:1822-1834.

71. McEachern, M. J., and J. B. Hicks, 1993 Unusually large telomeric repeats in the yeast Candida albicans. Mol. Cell. Biol. 13:551-560.

72. Melnikova., L., M. Gause and P. Georgiev, 2002 The gypsy insulators flanking yellow enhancers do not form a separate transcriptional domain in Drosophila melanogaster. the enhancers can activate an isolated yellow promoter. Genetics 160:1549-1560.

73. Mihaly, J., I. Hogga, S. Barges, M. Galloni, R. K. Mishra et al., 1998 Chromatin domain boundaries in the Bithorax complex. Cell Mol Life Sci 54:60-70.

74. Mikhailovsky, S., T. Belenkaya and P. Georgiev, 1999 Broken chromosome ends can be elongated by conversion in Drosophila melanogaster. Chromosoma 108:114-120.

75. Morcillo, P., C. Rosen, M. K. Baylies and D. Dorsett, 1996 Chip, a widely expressed chromosomal protein required for segmentation and activity of a remote wing margin enhancer in Drosophila. Genes Dev. 11:2729-2740.

76. Mongelard, F., and V. G. Corces, 2001 Two insulators are not better than one. Nature structural biology 8:192-194.

77. Morris, J. R., J.-L. Chen, P. K. Geyer and C.-T. Wu, 1998 Two modes of transvection: enhancer action in trans and bypass of a chromatin insulator in cis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:10740-10745.

78. Muravyova, E., A. Golovnin, E. Gracheva, A. Parshikov, T. Belenkaya et al., 2001 Loss of insulator activity by paired Su(Hw) chromatin insulators. Science 291:495497.

79. Nakamura, T. M., G. B. Morin, K. B. Chapman, S. L. Weinrich, W. H. Andrews et al., 1997 Telomerase catalytic subunit homologs from fission yeast and human. Science 277:955-959.

80. Nash, W. G., and R J. Yarkin, 1974 Genetic regulation and pattern formation: a study of \he yellow locus in Drosophila melanogaster. Genet. Res. 24:19-26.

81. Nugent C.I, Lundblad V (1998) The telomerase reserve transcriptase: components and regulation. Genes Dev. 12:1073-1085

82. Pardue, M. L., and P. G. DeBaryshe, 1999 Telomeres and telomerase: more than the end of the line. Chromosoma 108:73-82.

83. Pardue, M.-L., and P. G. DeBaryshe, 2000 Drosophila telomere transposons: genetically active elements in heterochromatin. Genetica 109:45-52.

84. Parkhurst, S., and V. G. Corces, 1986 Interactions among the gypsy element and the yellow and suppressor of Hairy-wing loci in Drosophila melanogaster. Mol. Cell. Biol. 6:47-53.

85. Roseman, R. R., V. Pirrotta and P. K. Geyer, 1993 The su(Hw) protein insulates expression of the Drosophila melanogaster white gene from chromosomal position-effects. EMBO J. 12:435-442.

86. Roseman, R. R., E. A. Johnson, C. K. Rodesch, M. Bjerke, R. N. Nagoshi et al., 1995 A P element containing suppressor of Hairy-wing binding region has novel properties for mutagenesis in Drosophila melanogaster. Genetics 141:1061-1074.

87. Roth, C. W., F. Kobeski, M. F. Walter and H. Biessmann, 1997 Chromosome end elongation by recombination in the mosquito Anopheles gambiae. Mol. Cell. Biol. 17:51765183.

88. Sambrook, J., E. F. Fritsch and T. Maniatis, 1989 Molecular cloning: a Laboratory Manual. Ed2 Cold Spring Harbor Laboratory Cold Spring Harbor NY.

89. Savitsky, M., O. Kravchuk, L. Melnikova and P. Georgiev, 2002 Heterochromatin Protein 1 is Involved in Control of Telomere Elongation in Drosophila melanogaster. Mol. Cell. Biol. 22:3204-3218.

90. Scott, K. S., and P. K. Geyer, 1995 Effects of the su(Hw) insulator protein on the expression of the divergently transcribed Drosophila yolk protein genes. EMBO J. 14:62586279.

91. Scott, K. S., A. D. Taubman and P. K. Geyer, 1999 Enhancer blocking by the Drosophila gypsy insulator depends upon insulator anatomy and enhancer strength. Genetics 153:787-798.

92. Sigrist, C. J. A., and V. Pirrotta, 1997 Chromatin insulator elements block the silencing of a target gene by the Drosophila Polycomb Response Element (PRE) but allow trans interactions between PREs on different chromosomes. Genetics 147:209-221.

93. Siriaco, G. M., G. Cenci, A. Haoudi, L. E. Champion, C. Zhou, M. Gatti, and J. M. Mason, 2002 Telomere elongation (Tel), a new mutation in Drosophila melanogaster that produces long telomeres. Genetics, 160:235-245.

94. Sheen, F. M., and R. W. Levis, 1994 Transposition of the LINE-like retrotransposon TART to Drosophila chromosome termini. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:12510-12514.

95. SMOGORZEWSKA A, VAN StEENSEL B, Bianchi A, Oelmann S, Schaefer MR, SCHNAPP G, deLANGE T (2000) Control of human telomere length by TRF1 and TRF2. Mol. Cell. Biol. 20:1659-1668.

96. Spana, C., and V. G. Corces, 1990 DNA bending is a determinant of binding specificity for a Drosophila zinc finger protein. Genes Dev. 4:1505-1515.

97. Traverse, K. L., and M. L. Pardue, 1988 A spontaneously opened ring chromosome of Drosophila melanogaster has acquired HeT-A DNA sequences at both new telomeres. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:8116-8120.

98. Udvardy, A., 1999 Dividing the empire: boundary chromatin elements delimit the territory of enhancers. EMBO J. 18:1-8.

99. Walter, M. F., C. Jang, B. Kasravi, J. Donath, B. M. Mechler, J. M. Mason, and H. Biessmann, 1995 DNA organization and polymorphism of a wild-type Drosophila telomere region. Chromosoma 104:229-241.

100. Yeager, T. R., A. A. Neumann, A. Englezou, L. I. Huschtscha, J. R. Noble et al., 1999 Telomerase-negative immortalized human cells contain a novel type of promyelocytic leukemia (PML) body. Cancer Res. 59:4175-4179.

101. Zakian, V. A, 1996 Telomere functions: lessons from yeast. Trends Cell Biol. 6:2933.

102. Zhao, K., C. M. Hart and U. K. Laemmli, 1995 Visualization of chromosomal domains with boundary element-associated factor BEAF-32. Cell 81:879-889.

103. Zhou, J., S. Barolo, P. Szymanski and M. Levine, 1996 The Fab-7 element of the bithorax complex attenuates enhancer-promoter interactions in the Drosophila embryo. Genes Dev. 10:3195-3201.

104. Zhou, J., and M. Levine, 1999 A novel cis-regulatory element, the PTS, mediates an anti-insulator activity in the Drosophila embryo. Cell 99:567-575.

105. Zhou J., H. Ashe, C. Burks and M. Levine, 1999 Characterization of the transvection mediating region of the Abdominal-B locus in Drosophila. Development 126:3057-3065.