Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Использование бактериофагов для диагностики иерсиниозов и внутривидовой дифференциации Yersinia enterocolitica

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Использование бактериофагов для диагностики иерсиниозов и внутривидовой дифференциации Yersinia enterocolitica"

ТБИЛИССКИ? ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им.И.А.ДЗАВАХИШЕИЛИ

На правах рукописи

КОЛЕСНИКОВА АЛЛА НИКОЛАЕВНА

УДК 576.351.49 576.858.9 . 616.981.45.1 616.002.71

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ИЕРСИНИОЗОВ И ВНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ТЕазтА ЕНГБНОСОЫТГСА

03.00.07 - микробиология

Автореферат •

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тбилиси - 1990 г.

Работа наполнена на Грузинской противочумной станции Министерства здравоохранения СССР..

Научный руководитель -' член-корреспондент АН ГССР, доктор

медицинских наук, заслуженный деятель паук, профессор ЧАНИШВИЛИ Т.Г.

Официальные оппоненты - доктор медицинских паук, профессор

КАЦИТАДЗЕ Г.К.

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ГАБИССНЙЯ Т.Г.

Ведуны организация - Кафедра микробиологии, вирусологии п иммунологии Тбилисского государственного медицинского института

Защита диссертации состоится и " КИ 1990 г, е часов на заседании специализированного совета К 057.03.17 Тбилисского государственного университета им. И.А.ДжавахишвилЕ (380043, г. Тбилиси, ул. Университетская, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Университета.

Автореферат разослан " . )(\_ 1990 г.

Ученый секретарь специализированного согета кандидат биологических наук, доцент

ЦИНЦАДЗЗ Н.М.

ВВЕДЕНИЕ

Иврсиниоз в большинстве стран мира, по данным ВОЗ, занимает в настоящее время второе место после сальмонеллезов среди инфекционных заболеваний человека. Ввиду широкого распространения, борьба за снижение этой заболеваемости - одна из наиболее острых проблем медицинской науки и практического здравоохранения. Сложность проблемы в разнообразил клинических проявлений этой инфекции и большом количестве спорадических случаев заболеваний.

Актуальность проблемы. Ввиду схожести морфологических и биохимических свойств, идентификация разных видов язрсинпй и внутривидовая дифференциация вида Yersinia enterocolitica приобретает особое значение. Практикой лабораторных исследований доказано, что важным методом в диагностике и противоэпидемической работе является метод фаготшшровзния, который в некоторых случаях является единственным способом выявления эпидемиологических и эпизоотологических СЕЯЗЗЙ.

Б настоящее время в мире нет стандартного наборз изрслниоз-ннх фагов и схемы для титрования вида yersinia enterocolitica, как например в случае брюшного тифа и некоторых других микробов семейства Snterotacteriacae.B некоторых европейских странах пользуются схемами фаготиттровакия, предложенными Николем с соавторами в 1967 году я Нилен с соавторами в 1969 году. Однако по этим схемам не всегда удавалось типировать штаммы Yersinia enterocolitica , выделенные в друггос странах, и учоными США, Канады, Японии предложены свои схемы тишгрозанкя разными наборами фагов, зачастую выделенными авторами схем в тех же стра- . нах, для которых они предлагают использовать.

У вас в стране фаготипирование штаммов Yersinia er.terocoli-tika не проводилось, хотя иерсиниознне фаги выделялись и изучались некоторыми исследователями. Таким образом, в Советском Союзе этот вопрос остается нерешенным, что определяет практическую значимость разработки усовершенствованных методов идентификации этих микроорганизмов и внутривидовой дифференциации вида Керсинил энтероколитика.

ГТель и задачи исследования. Целью данной работы являлась разработка способа ускоренной идентификации и дифференциации ВИДОВ Yersinia entarocolitica И Yersinia pseudotuberculosis и разработка схемы фаготплировапия штаммов Yersinia enterocoii-tica с помощью иерсиниозных. бактериофагов.

Указанная цель потребовала решения следулдих экспериментальных задсч:

1. Изучение литического спектра опытных вирулентных кишеч-но-иерсиниозных бактериофагов, селекционированных в Тбилисском научно-производственном объединении "Бактериофаг", с целью отбора их для идентификации и внутривидовой дифференциации Yersinia entnrocolitica.

2. Изучение лизотипических реакций итакмоз Yersinia entero-pocoli^iüa " Yersinia pseudotuberculosis.выделенных ОТ различных объектов в разных регионах СССР и за рубежом, к поливалентным иерсиниознш фагам с целью выяснения возможности их применения для идентификации к дифференциации зтих видов.

., '3. Изучение лизотипяческих реакций Yersinia enterocolitica, выделенных в Грузии и Средней Азии, к отобрапшл.; иерспниозным фагам .с йелъи использования данных для выявлена! закономерностей распространения штаг/ллов, относящихся к различным фаготи-П£а., и построения cxc;.at (¿аготипирозэши.

Нагоняя новизна, 3 результате решения вышеперечисленных задач были разработаны и предложены: способ ускоренной идентификации И дифференциации ВИДОВ Yersinia enterocoiitica а Тег-• cinia pseudotuberculosis с помощью вирулентных поливалентных иерсиниозных фагов и схема фаготипирования штатов вида Иерсиния энтероколитика наборе»« поливалентных и клонированных иерсиниозных фагов. Это определило конечную задачу данной работа.

рпактичвекая деннорть п реализация -результатов работы. Впервые в наией стране проведено фаготипнрованип штаммов вида Yersinia enterocoiitica . Установлено территориальное распространение фаготипов и их динамика по годам в Грузки о момента выделения первых штаммов до 1989 года включительно и в Средней Азии за период о 1974 по 1988 годы.

С помощьв предложенной схемы фаготипирования установлен фаготип у 88,87$ исследованных штаммов. Результаты тяпированпя подтверждает расшифровку эпидсвязей в случае заболеваний ладей в г.Алма-Ата в 1984 году и эпизоотия среди мелкого рогатого скота в Киргизии'в 1984 году, среди полевых грызунов в разные годы на территории Грузии.

Разработанный метод ускоренной идентификации и дифференциации ВИДОВ Yersinia enterocoiitica ц Yersinia pseudotuberculosis с помощью вирулентных иерсиниозных бактериофагов положительно оценен при апробации в ШГНИ Кавказа и Закавказья в г.Ставрополе, НШШ г.Ростова-на-Дону, НИПЧИ Средней Азии и Казахстана в г.Алма-Ата, где были исследованы птакш разных видов ИерСИНИЙ (Yersinia enterocoiitica .Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia pesti3 ), выделенные в СССР И за рубежом.

Составлены методические рекомендации по ускоренной лдента- • фшеации И дифференциации видов Yersinia enterocoiitica и

Yersinia pseudotuberculosis и внутривидовой дифференциации вица Yersinia enterocoiitica с помощью иерсиниозних бактериофагов. Разрабатывается техническая документация по производственному изготовлению диагностических кишечно-иерсиниоэных фагов.

Освоение положения, выносимые на защиту;

1. Изучение лихаческих свойств опытных кишечно-иерсиниоз-иых бактериофагов,

2. Определенно серологического и фаготипового пейзажа штаммов Yersinia enterocoiitica , ввделенных в Грузии, и фаготипового пейэьжа штаммов Yersinia enterocoiitica , выделенных в Средней Азии.

3. Разработка и предложение метода ускоренной идентификации и дифференциации видов иерснний - enterocoiitica и'рсеи-

, iiotuborculoais с помощью поливалентных иерсиниозных бактериофагов.

4. Создание набора фагов, разработка и внедрение схемы фа-готипирования штаммов вида Yersinia enterocoiitica.

/гтобяггия -робота. Основные полевения и результаты работы дояогены и положительно оценены на научных конференциях Грузинской противочумной станции Министерства здравоохранения СССР, на У1 Краевой научной конференвдт яо особо опасшш инфекциям в 1ШТЧИ Кавказа и Закавказья Министерства здравоохранения СССР, на Ш и Ш1 Республиканских конференциях молодых ыэдиков Грузии, на Всесоюзных научных конференцглх по вопросам иерсшшоаов, . проводившихся в г.Владивостоко в 1986 и 1989 годах, на I Республиканской конференции по вопросам региональных комплексных медико-географических атласов ж их роли в улучшении ентропо-эко-

логической обстановки, проводившейся в г.Тбилиси.

Публикации. По теме диссертации опубликовано П статей, утверждены и изданы Методические рекомендации.

Объем -работы. Диссертация "состоит из введения и 4-х разделов (в первом разделе дан обзор специальной литературы, в последующих разделах изложены и обсуждены собственные исследования) и списка использованной литературы. Диссертация изложена на 102 страницах, включая 13 таблиц и приложения (акты апробации метода■идентификации и дифференциации, методические рекомендации).

Список использованной литературы содержит 201 наименование, в том числе 87 отечественных и 114 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В первом -разделе работы представлен обзор специальной литературы. Рассмотрена характеристика штаммов видов иерсиний. Обсуждены данные относительно•расйространенпя иерсшшй, выделение из различных'объектов окружающей среды, от тавотных и человека. Изучены морфологические, ферментативные, серологические и другие свойства. Отмечена роль этих микроорганизмов в этиологии различных заболеваний (ввиду полиморфизма клинических проявлений инфекции). Проанализированы данные о выделении бактериофагов, й том числе и иерсиниозпых, и методы использования этих бактериофагов в лабораторной диагностике различных видов микроорганизмов. Аналитически рассмотрены схемы фаготппирования иерсиний, предложенные разными зарубежными авторами.

Второй раздел. Представлены, материалы и методы исследований. Последовательно описаны использованные бактериологические

з серологические методы исследования, методы определения лизо-типических овойств штаммов иерсиний к вирулентным иерсиниозным бактериофагам. Дана характеристика выделенных и селекционированных в Грузии кишечно-иерсиниозных бактериофагов, предложенных наьга для использования их в лабораторной диагностике иорсинио-зов. Представлен перечень использованных питательных сред.

Третий паятсел. Состоит из 2-х глав, где описаны результаты собственных исследований,

В петеой"главе дана характеристика штаммов разных видов иерсиний и некоторых других видов из семейства энтеробактерий, использованных В работе. Штамш Yersinia enterocolitica выделены с 1981 по 1989 годы в 17 районах Грузии, а также на территории городов Тбилиси, Сухуми, Батуми, Поти, Гори, Бориомл. В Западной Грузии на йерсиниозные инфекции изучены Цагерский, Озургетский, Ланчхутский, Кобулетский, Хелвачаурский районы и города Cyxyi.ni, Батуми,-Поти. Б равнинно-предгорном регионе Восточной Грузии изучены Гардабанский, Цптелцкаройский, Ахыотскей районы и города Тбилиси, Гори, Боржоми. В высокогорном регионе Грузии изучены Астгадзсккй, Ахалкалакский, Ахалцнхский, Адигсн-ский, Еогдановский, Дманвсский, Шуахевскнй, Хулойский районы.

Из ита-ялов Yersinia enterocolitica для серотшшровашш и биотшгарозания на\щ отобраны культуры от ладей, объбхтсв окружающей среды, продуктов шзтация, а таит.е от всех видов отловленных грызунов, с учетом региона! сезона выделения, с целью охвата максимального количества видов..

Данные этих исследований представлены в таблице I.

Таблица Т

Данные биотяпированкя и соротшшрозания 1егз1пха в!гЬогосо1гЫса

Районы Биотипы 05:27 1 ю о Я о о 1—1 о 04:32 1 со о . 1 8 о 8 07:8 1 019:8 06 012:25 011:24 сэ ю ы о Сш 1 ш в § . % <В О | к к Р. «а

Западная Грузия 1 2 3 4 16 I 29 6 I 26 3 3 13 ■I 22 I . 6 7 I 2 5 I 2 I I' 2 I I 78 219 87,3 2 9 3,6 8 20 7,96 I 3 1,2 1

Восточная Грузия 1 2 10 17 3 I 6 5 5 I 2 I I 2 I 74 131 87,3 ю .1 4 2,7

разнинно-продгорный 3 4 2 2 3 2 I 4 12 8,0 » I 3 2,0

Восточная Грузы высокогорный 1 2 3 4 53 7 4 2 27 7. 5 I 25 .6 8 44 . 12 3 10 2 : 2 II I 5 I 5 4 I I I 2 I I 6 152 347 75,8 3 13 51 11,1 29 53 11,6 I 2 7 1,5

К-во шт. 93 97 83 81 43 23 15 10 7 7 4 2 2 I I I 14 365 849

% 11,0 'II, 4 9,8 9,5 5,1 2,7 1,8 1,2 0,8 0,8 0,50,2 0,2 0,1 0,1 0,1.5,1 43,0

Установлено, что большинство штаммов Yersinia enterocolitica, , выделенных в Грузии, относится к 1 биотипу (более 80%), а ведущими сероварами являются: 05 - 11,43%, 05:27 - 10,95%, 034 - 9,78%, 016 - 9,54%.

Дана характеристика штаммов Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia pestis , выделенных на территории Грузии. Приведены данные, полученные при изучении лизотипических реакций штаммов иерсиний из ШК научно-исследовательских противочумных институтов в г.г.Ставрополе, Ростове-на-Дону, Алма-Ата, выделенных в различных регионах СССР и за рубежом.

При сравнении серопейзазд. изученных штаммов Yersinia оп-terocolitica t выделенных в Грузии и Средней Азии, отмечено, что в обоих регионах широко распространен серовар 05,,но наблюдаются большие различия во встречаемости других сероваров: так, например, в Грузии не выявлено наличие штаммов сероваров 01, 04, а в Средней Азии не обнаружено штаммов сероваров 05:27, 016, 034, 04:32, 07:8, 019:8, 01^:25, 02Н, 015. Таким образом, серопей.эаж вида Yersinia enterocolitica в Грузии значительно более разнообразен и должен, повидимому, дополниться за счет почти 50% несеротипировавшихея при наших исследованиях штаммов.

Вс второй главе рассматривается разработка метода фаго-иденгификэции и'дифференциации видов Yersinia enterocolitice и Yersinia pseudotuberculosis и оригинальной cxetai фаготипиро-вания Yersinia enterocolitica.

В процессе разработки были составлены предварительные варианты метода идентификации и дифференциации иерсиний, в кото-рык использовали различные бактериофаги (чумной, псевдотуберкулезный, кишечно-иерсиниозньй, шигеллезнйе, сальмонеллезные). Анализ результатов исследования лизотипических реакций 750 штам-

MOB Yersinia enterocolitica ' и 135 штаммов Yersinia pseudotuberculosis , выделенных в Грузии, а также имевшихся в Ставропольском НИПЧИ Кавказа и Закавказья, позволил предложить для • идентификации и дифференциации этих видов три иерсиниозных фага: поливалентные кишечно-иероиниозный, ;^евдотуберкулезннй и чадуной. В дальнейшем, после исследования 2347 шташов Yersinia enterocolitica jj 5(33 штаммов Yersinia pseudotuberculosis. f выделенных как в Грузии, так и в других регионах СССР и за рубежом, нага составлена упрощенная методика, включающая два поливалентных- фага - кишечно-иерсиниозный и псевдотуберкулезный.

' Таблица 2*

Схема ускоренной идентификации и дифференциации видов Yersinia enterocolitica И Yersinia pseudotuberculosis

Вид микроба

Поливалентные бактериофаги

псевдотубер- кшечно-кулезный иерсиниозннй

Yersinia enterocolitica -(—/+) ' +

Yersinia pseudotuberculosis + -(-/+)

Примечание: + лизис штамма фагом - отсутствие лизиса —/+ редкие реакции

Согласно этой таблице, становится возможным идентифицировать и дифференцировать эти виды. При исследовании нами были выявлены штаммы Yersinia enterocolitica , не лизировав-ииеся кишечно-иерсиниозным фагом, но лизировавшиеся псевдоту-беркулеЗННМ фаГ01л, а такке Штаммы Yersinia pseudotuberculosis не лизировавшиеся гомологичным фагом, но лизировавшиеся кишеч-

но- иерсшшозшш, что, по-видимому, является показателем изменения их рецепторной структуры на молекулярном уровне. Для науки Taime штаммы, маркированные фагом, должны представлять определенный интерес.

Целью данной работы было также определение возможности внутривидовой дифференциации вида Yersinia enterocolitica с ПОМОЩЬЮ поливалентных и клонированных бактериофагов. В процессе разработки был получен предварительный вариант схемы фаготипирова-ния - Ориентировочная схема, по которой фаготипож проводился двумя поливалентными - псевдотуберкулезным и кишечно-иерсиниоз-ным, а также шестью клонированными (различных морфосерологичес-ких групп) кившчно-иврсшшозными бактериофагами. ■

Схема содержит 21 фаготип, которые составляют 8 групп (фа- . готипы обозначены арабскими цифрами, группы - римскими), лаготи-пы расположены по принципу увеличения устойчивости к числу фагов, лизирующих штаммы данного фаготипа.

По этой схеме типировано 1538 штаммов Yersinia enterocolitica , выделенных в Грузии, из них к фаготапу 12 отнесено 43 , 752, фаготипу 13 - 11,45?, фаготвпу 19 - 6,6%, к фаготилам 7, 10, 14 - до 3%, фа г о типу 21 - 1,9%, остальные фаготшш встречаются менее чем в 1%. Не лизировалось 14,755».

С целью уменьшения процента нелизировавшихся штаммов были дополнительно апробированы еще 2 клонированных кивеччо-иерсшш-озных бактериофага, один из которых включен наш в ранее пред-лоаеппый для типировашя набор фагов.

Этим набором (состоящим из 9 фагов: 2-х поливалентных псевдотуберкулезного и кишечно-иерсшиозного и 7 клонированных кишеч-но-керсилиозных) было проведено тапирование 2III штаммов Yersi-

nia enterocolitica , из которых 1874 выделены в Грузии и 237 в Казахстане и Киргизии. В процессе типировапия было зарегистрировано 33 лизотшгаческих реакции, из которых в схему фаготи-пированпя включены 27 фаготипов, представляющих наиболее часто встречающиеся стабильные реакции. Схема фаготипирования составлена по тому же принципу, что и Ориентировочная. Выявлены две дополнительные группы фзготипов - I и III.

При фаготипировании по этой схеме увеличился процент титровавшихся штаммов, уменьшилось количество штаммов, отнесенных к 12 фаготипу по Ориентировочной схеме (в новой схеме эти штаммы распределились между фаготипами II и 18).

Наиболеэ часто встречающимися являются фаготипн 18 - 35,47$, 19 - (соответствует фаготипу 13 Ориентировочной схеш),

фаготип II - 9,14?, фаготип 22 - 6,4$ (16 по Ориентировочной схеме), 16 - 6,21$ (10 по Ориентировочной схеме).

Но удалось установить фаготип у II,13$ штаммов.

Особо следует отметить, что с помощью этой схемы фаготипирования удалось маркировать большинство штаммов Yern.inia enterocolitica - 88,87$.

Таблица 3.

Схема фаготипирования штаммов Уегв1п±а егЛегосо1И;1са

По ориен- По схеме тировочной фаготипи-схеые рования

Поливалентные Клонированные кишечно-

фактериофаги иерсиниозные бактериофаги

псевдо- кише-

груп- фаго- й_ (5аГ0_тубер- чно- т 2 3 4 ' 5 6 7

да тип У«" ^."^пглея- ляп- 1 с ° * ° ° '

па

иер-

сини-

озный

1У

У 71

УП

УШ

I I С1 СЛ - СЛ - СЛ - СЛ

I 2 СЛ СЛ _ СЛ СЛ СЛ _ _

3 П 3 СЛ СЛ — СЛ — СЛ — — —

4 4 СЛ СЛ - СЛ - - - - -

5 — СЛ СЛ СЛ _ СЛ СЛ СЛ СЛ

6 — СЛ СЛ СЛ — СЛ — СЛ СЛ

7 - СЛ СЛ СЛ — СЛ — — СЛ

Ш 8 — СЛ — СЛ СЛ СЛ — СЛ СЛ

9 — ■ СЛ — СЛ СЛ СЛ — СЛ

10 — СЛ — СЛ — СЛ — СЛ СЛ

II . - СЛ - СЛ - СЛ - - СЛ

6 12 - СЛ СЛ СЛ _ СЛ СЛ _ _

7 1У 13 — СЛ СЛ СЛ — СЛ — — —

8 14 - СЛ СЛ СЛ - - - - -

9 15 — СЛ _ СЛ СЛ СЛ СЛ _

10 16 — СЛ — СЛ — СЛ СЛ — " -

II У 17 — СЛ — СЛ — СЛ — СЛ _

12 18 — СЛ — СЛ — СЛ — _

13 19 - СЛ - СЛ - - - - -

14 VI 20 — СЛ _ — _ СЛ _ _ _

15 . о 1 21 - СЛ - - - - СЛ - -

16 22 - СЛ

17 УП 23 - - СЛ - - — - - -

18 ТИП 24 _ _ _ СЛ _ СЛ _

19 .УШ 25 - - - СЛ - - - -

20 ТУ 26 - _ _ _ _ СЛ СЛ _

21 ал 27 - - — - - СЛ - -

Примечаете: СЛ - сливной лизис

- - отсутствие лизиса

I

П

Ш

С помощью схемы определена частота распространения отдельных фаготипов на разных территориях и в разных оочетшшнх.

Таблица 4.

Данные распределения изученных штаммов 1ьгн1и1и enteгooolltica ПО фйГОТИПам

'!" ' 11 .........,■" ' ..........

Фаготип Грузия Средняя Азия

люди овощи синая Г" 1 . дик. др. ' люди синан. ДИК. ДР.

грыз. грыз. об. грыз. гриз. ОЙ.

I 8 о

2 5

' 3 4 .

4 ' 2 I 3 I

5 I 2

6 9 3

7 I I

8 ') А, Т

9 О

10 2 3 4 ■ 4

II 4 2 5 122 16 II 30 I

12 I 17 I

13 I 3 41

14 3 2.

15 8

16 7 3 119 2

17 7

18 53 10 70 605 10 о 4 6

19 13 7 48 124 10 2 5 10 8

20 С II 53 I 5 7 I

21 4

22 5 2 22- 71 13 5 15 2

23 ■ I I I

24 Г> 17

25 9 I 42 63 т Л.

• 26 4

27 I 3 29

но тапир.' 8 16 39 146 4 10 0 4

Всего ПО ' 43 255 1443 23 52 50 102 27

По нашим, доштм, фагопеиэаж горснний, выделенных в Грузии

и Средней Азии, тлеет значительные отличия; так, например, а

с

Грузил ведусим является фаготип 18,'а в Средней Азии - фаготип II. Особенно наглядно это прослеживается на итеммех, выделенных от ладей. В Грузии большинство из них относится к фаготип/- ТВ,

а в Сродней Азии ни один штамм от людей не отнесен к этому фа-готипу. Прямой корреляции между частотой выделения и распространением фаготипов не наблюдалось, хотя штаммы фаготипов 2, 3, 4, 12, 13, 14, 15, 16, 24, 26, 27 выделены только в Грузии, а штаммы фаготипов I, 5, 7, 8 выделены только в Казахстане. Результат типирования штаммов различного происхождения показал сходство в составе фаготипов у штаммов, выделенных от грызунов, продуктов питания, объектов внешней среды и от людей. В Грузии это штаммы фаготипов 18, 19, 25, 16, 22, в Казахстане - фаготи-пи II, 19, 22, в Киргизии - фаготшш 22, 10, II, что свидетель-, ствует об определенной связи внешняя среда - человек. Однако собранный нами материал по фаготипированию Тегзйаа е^егосо-1ихса ' не дает возможности судить о распространении фаготипов в СССР в целом. Следует учесть и неравнозначность количества культур из разных республик и от разных объектов, но исходя из значительного объема использованного материала, ш посчитали возможным проанализировать полученные результаты. Более исчерпывающие данные имеются по штаммам, выделенным в Грузии.

С 1981 по 1989 год выделено 2297 штаммов Хегзл.п1а еггЪего-соИ-^са , из которых нами фаготипировано 1874, что составляет 81,94$. Из них.штаммы от больных 110 - 5,21$, продуктов питания 43 - 2,03$, от разных объектов окружающей среды 23 - 1,09$ . в от грызунов 1698 - 91,27$. Фаготип установлен у 1663 штаммов, выявлен 21 фаготип. Материал этот дает возможность установить формулу фаготипов по Грузии: 18, 19, II, 16, 25, 22,-20, 15,27, 24, 12, ТЗ, 17, 4, 2, 14, 3, 21, 26, 23, 10.

Составлены формулы фаготипов по Казахстану: II, 19, 22, I» ТО, 18, 5, 7, 9, 4 и Киргизки: II, 22, 18, 10, 20, 7,19,25.

Установлена динамика фаготипов Yersinia enterocolitica, выделенных в Грузии и Средней Азии, по года«.

Таблица 5.

Динамика ВЫДеляеМОСТИ фаГОТИПОВ Yersinia enterocolitica по Грузии

Годы выделения

Фаготип 1981 1982 1983 1984 IS85 1986 1987 IS88 Т989

1 2 I 3 I

3 I 2 I

4 3 2 I

5

6

7

8

9

10 I I

II 5 25 16 26 46 I 3 II

12 16 2

13 I 2 8 I 14 14 о 2 I

14 I 3 I

15 3 2 3

16 I 4 10 20 I 9 9 75 2

17 3 3 I

18 7 46 109 96 III ИЗ 39 85 52

19 6 21 21 21 15 69 35 15 TI

20 3 II I 12 18 5 19 I

21 2 I I

22 2 8 16 30 13 7 20 4

23 I 2

24 4 II 2 5 I

25 3 5 29 26 22 19 •10 I •

26 2 I I

27 2 19 I I 8

С увеличением количества выделяемых птакчов, уволтгшвзотоя число фаготапов яерсиний в 1933, 1985, 1986, 1937 годах, в том числе и единичных штатов редко вотрочаюетхся фаготипоэ: 2, 3, 14, 15, 17, 21 ,'23, 2G.

Таблица 6.

Динамика выделяемости фаготипов íersinia entero-.colitica по Средней Азии.

фаготип Годы в ы деле н и я

1974 1977 '1979 '1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988

I 10

2

3

4

5 3

6 2 2 3 4 I

7 I I

8 2 I

9 I I I

10 2 3 I 4 I

II I 8 3 . 12 30 2 2 3

12 I

13

14

15

16

$ 19 I 10 I 2 2

7 6 II 3 6

■20 ■ II I I т

21

•22 10 I 3 6 7 I 2 5

■ 23

24

25 I

26

27

Территориальное распространение фаготипов неравнозначно и

*

отличается как по частоте их встречаемости, так и по числу регистрируемых фаготипов, Так, например, в высокогорном регионе Восточной Грузли состав фаготипов наиболее разнообразен, возможно это следствие того, что количество выделенных штаммов иерсиний рз гтого региона наибольшее.

Несмотря на неравнозначность количества штаммов, выделенных в города; и районах республики, можно отметить, что на разных

территориях Грузии фаготипы 18, 19, Т6, II, 22, 25, 20 встречаются повсеместно и у всех групп исследованных объектов. Они являются наиболее распространенными, что свидетельствует о реализации контактно-бытового пути заражения..

В Средней Азии фаготипы 22, 19, 18, 6, 10 выделялись примерно в одинаковом количестве, а в 1984-1985 годах резко возрастает процент штаммов фаготипа II, единичные штаммы других фа-готипов выделяются в разные годы.

«Заготипирование иерсиний позволило подтвердить эпидемиологические данные о н~большой вспышке иерсиниоза среди людей и эпизоотии среди мелкого рогатого скота в 1984 году в Средней Азии, вшвпть эпизоотии среди разных видов грызунов, как в Грузия, так и в Средней Азии, зараженность овощей в овощехранилище штаммами одного фаготипа иерсиний.

Анализ результатов фаготипировапия и соротипирования Yersinia enterocolitica не позволяет провести корреляцию между соровараш .. фаготипами. Среди штаммов одного серовара встречаются разные фаготипы и наоборот, штаими одного фаготипа могут относиться к различным сероварам (табл.7).

Подученные нами результата свидетельствуют в большинство случаев о постоянстве фаготипов и совпадении с данными эпидемиологического и эпизоотологнческого обследования, чти позволяет пш предложить разработанный метод идентификации и дифференциации иерсиний П фаготипирования Yersinia enteiocoliiica с помощью бактериофагов.для использования в лабораторной практика при диагностике' этих инфекций и эпидемиологическом и аиязоотоло-гическсм обследовании.

Таблица 7.

Результаты фаготапироваиия и серотипирования штаммов Xersinia enterocolitipa , выделенных в Грузии

и

В

о

(н

СП

8 й Я g 7? 8

ю о о о

S

8|

ю р

00 со N CSJ со Ё

8 • • ю

в О! м о С\! 8 W 'S м о 8 tn

ш t

юЕ

I ■ 1 4 1

2 I I I I I

3 I з •

4 I I 2

5 §

7 8

9

10 I I

II 4 I 3 2 I 13

12 I I I I I 9

13 5 2 I I I 15

', 14 I I 3

15 I I 2

16 5 т 4 2 2 9 I Г I 12

17

18 41 48 40 12 10 3 3 4 5 I 2 5 140

19 22 6 10 4 17 3 2 4 2 2 65

20 I 3 4 3 2 2 2 2 15

21 I 2

22 3 2 2 6 3 2. I I II

23 I 2

24 I 3 ■II

25 6 4 4 5 ' 4 I 6 2 2 2 26

26 2 I ♦

27 I 2 4 I' 4

в.т. 9 16 II 56 I 2 I I 4 27

Результаты проведенной нами работы позволяют сделать следующие выводы:

- • 21 -ВЫВОДЫ,

1. Ilo основании изучения штаммов Yersinia enterocolitica определено, что в Грузии распространено 16- сероваров, из которых ведущими являются 05, 05:27, 016, 034, 04:32; и большинство .культур относится к I биотипу (более 80*).

2. Разработан метод ускоренной идентификации и дифференциации ДЛЯ ВИДОВ Yersinia enterocolitica и Yersinia pseudotuberculosis о использованием бактериофагов (диагностического псевдотуберкулезного и опытного кишачно-иерсиниозного).

3. .Разработана оригинальная схема фаготипирования с использованием иерспниозннх бактериофагов, состоящая пз 27 наиболее часто встречаюцихся и стабильных фагоглтов, объединенных в 9 групп. Схема позволила установить фаготип в 88,875» случаев, что показано в материалах исследования штаммов, выдолоншхх в различных регионах.

4. Установлен 21 фаготип тиаммоа Yersinia enterocolitica циркулирует; х з Грузии, зз которых наиболее часто встречается (фаготип 18 (39,913).

Состав iJaroKfflCB а раастпшх регионах Грузли и отдельных рз2опзх' гнезз тшдябидуояьпн-э особенности. В Сродной Азии выявлены 15 фагокшсп, из которых недупдм является II (25,85?). Оообояностьа, отлпчашгой среднеазиатские'пта?™лх, является то, что тй4 от лпдей не выделено вадутдэго для Грузии ¿огоиша 18.

Установлено территориальное распроогракеязэ я дяаалва состава фаготипов по годам во всех исследованных регионах.

5. Корродэдиз кояду овроваршл! и фоготтшми Tersinia. enterocolitica' по нашил данным установить на представляется

возможным.

6. Высокий процент усяазовления фаготипов, стабильность лизотипических реакций и типоспецифичность кишечно-иерсиниозных бактериофагов при строгом совпадении результатов типирования с эпидемиологическими и эпизоотологическими данными, простота и наглядность в исполнении позволяют рекомендовать к использованию разработанную нами Схему фаготипирования в лабораторной диагностике иерсиниозов, эпидемиологической и эпизоотологичес-кой практике.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕПЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Выделение в Грузии штаммов кишечного иерсиниоза, чувствительных к псевдотуберкулезного диагностическому фагу.// Иерсиниозы,- тез.докл.Всесоюзной науч.конф.-Владивосток.-1986.-е.Т25-126.(соавторы В.А.Нерсесов, Д.ИЛ".ирзашвили, М.Г.Гаприндашвили, Т.М.Кричевскоя).

2. Возможность применения вирулентного кипечно-иерсиниозного бактериофага в диагностике иерсиниозов.//ОСИ на Кавказе.-тез.докл.У! паевой науч.конф.-Ставрополь.-1987.-с.265-267. (соавторы М.Г.Гаприндашвили, Л.И.Цинцадзе, Е.С.Капанадзе, • Т.Л.Чолокашвили, Г.Н.Розанова, С.Л.Проценко).

3. Исследование фагочувствительности штаммЪв кишечного иерсинио-за, выделенных на территории Грузии, в отношении вирулентного поливалентного гомологичного бактериофага.//тез.докл.Х7Т Республиканской науч.конф.молодых медиков,посвященной 70-де-тпи Октябрьской Революции.-Бакуриани.-1987.-с.237-238.(соавторы Т.Л.Чолокашвили, 1>'.А.Дарсавелидзе).

4. Р:ти?нтЕровочиая схема фаготипирования штатов кишечного иер-

синиоза.//материалы Юбилейной науч.конф.к 50-легип Грузинской ПЧС.-Тбилиси.-1988.-о.67-72.

5. Сравнительное изучение различных методов лабораторной диагностика иерсиниозов,Материалы Юбилейной науч.козф. к 50-летию Грузинской ПЧС.-Тбилиси.-1988.-с,87-89.(соавторы М.Г.Гаприндашвили, Д.И.Мирзашвгиш, Л.И.Циндедзо).

6. Использование кишечноиерсиниозного и псевдстуберкулсзного бактериофагов в лабораторной диагностике иерсиниозоа.//материалы Юбилейной науч.конф.к 50-летию Грузинской ПЧС.-Тбили-03.-1988.-0.83-^5.(соавторы Г.Г.Гурдева, Я.С.Капанадзэ, Т.ЛЛолокашвшга),

7. Спонтанное заражение блох кишечным иерсиниозом.//ыатериалы Юбилейной науч.конф.к 50-леиго Грузинской ПЧС.-Тбшшси.-1988.-е.72-75. (соавтор- В.А.Нерсесоз).

8. Изучение серологических свойств вирулентных фагов килечных иерсиний,//тез.докл.ХУЦ республиканской конф.нолодых иеди-ков.-й1-./риани.-1938.-с.528, (соавторы Т.Л.Чаяокашвили, М.А. Дарсавелидзе, Д.Д.Гиоргелидзе)*

9. Изучение фаголизабельностя ита',?лов кишечного иореготаозч и ■ псевдотубэркулеза, выдолешшх на территория Сродной Азии. -//Йерсинзозы.-теа.дстал.Всесоюзной науч.копф.-Владивосток,-1989.-ч.1.-о.ЗЗ~34.'(соазторы В.М.Стзпакоа, Л.С.Безрукова).

10. Серологические варианты иерсиний, циркулнруюцих в разных зонах Грузинской ССР./Л1ерсиниозы.-тоз.докл.Вссссззяой науч. конф.-Владнвосток.-1989.-ч.1 .-с.26-27.(соавторы Х.Н.Дялэгст-швгли, М.Г.Раприздашзили, Г.Ю.Мгеладзо).

11. Георгофия фаготипоз кьшечшо: пэропшй в Грузот.//теэ.до:сл,

I Республиканской конф. по вопросам региональных коггплзтетй

медико-географических атласов и их роли в улучшении антропо-экологической обстановки.-Тбилиси.-1990.-с.30-31.(соавторы Т.Г.Чашшшли, Е.С.Капанадзе, Л.И.Щпщадзе).