Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммунореактивные консервативные участки оболочечных гликопротеинов вируса гепатита С

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Оленина, Людмила Владимировна

Введение

Обзор литературы

Антигенные детерминанты белков и методы их поиска

Антигенность и иммуногенность белков

Типы В-эпитопов

Теоретические методы поиска В-эпитопов

Экспериментальные методы картирования В-эпитопов

Рентгеноструктурный анализ комплексов антиген-антитело

Фрагментация белкового антигена

Химический синтез олигопептидов

Генно-инженерные методы

Применение комбинаторных библиотек

Пептидное сканирование

Антигенное картирование как этап в исследовании белков и 30 применение антипептидных антител

Оболочечные гликопротеины вируса гепатита С

Классификация и морфология вируса

Структура генома ВГС и краткая характеристика продуктов его 35 экспрессии.

Генетическая гетерогенность ВГС

Фолдинг, ассоциация и внутриклеточная локализация оболочечных 42 гликопротеинов

Гуморальный иммунный ответ к ВГС

Общие характеристики гуморального иммунного ответа

Гуморальный иммунный ответ к оболочечным белкам ВГС

Эпитопное картирование оболочечных белков ВГС

Возможные рецепторы для ВГС

Рецептор липопротеина низкой плотности

Гепарансульфат

Перспективы создания вакцины против ВГС

Материалы и методы

Химические реагенты и биологические препараты

Оборудование

Методы

Синтез пептидов на полиэтиленовых иглах 66 Иммуноферментный сорбционный анализ (ELISA) пептидов на иглах

Иммуноферментный сорбционный анализ с иммобилизованными на 71 планшете пептидами

Конкурентный иммуноферментный анализ (для сыворотки крови 60)

Статистический анализ полученных данных

Определение консервативности пептидных фрагментов из 73 оболочечных гликопротеинов ВГС

Получение конъюгатов пептидов I и II с гемоцианином лимфы улитки

Получение конъюгатов пептидов I и II с овальбумином

Получение конъюгата пептида I с БСА

Приготовление антипептидных мышиных сывороток

Определение титра антипептидных антител в полученных 76 антисыворотках

Проведение конкурентного иммуноферментного анализа для 78 антисывороток к пептиду I

Результаты и обсуждение

Эпитопное картирование высоко консервативных участков 80 оболочечных белков ВГС

Сравнительный анализ аминокислотных 80 последовательностей оболочечных гликопротеинов ВГС

Синтез и характеристика перекрывающихся пептидов

Тестирование сывороток на взаимодействие с пептидами 85 Взаимодействие антител из сывороток крови пациентов в острой фазе ВГС- 89 инфекции с пептидами

4.1.5 Взаимодействие антител из сывороток крови пациентов в хронической фазе 90 ВГС-инфекции с пептидами

4.1.6 Сравнительный анализ исследованных групп сывороток по 97 иммунореактивности с оболочечными белками ВГС

4.1.7 Построение антигенной карты оболочечных белков ВГС

4.2 Получение антипептидных антител

4.2.1 Выбор пептидов для получения антипептидных антител

4.2.2 Получение конъюгатов пептидов I и II с белками

4.2.3 Иммунизация лабораторных животных

4.2.4 Характеристика специфических антител в антисыворотках

4.2.4.1 Титры антипептидных антител к пептиду I

4.2.4.2 Титры антипептидных антител к пептиду II

4.2.5 Определение В-эпитопной специфичности антипептидных антител

4.2.6 Конкурентный иммуноферментный анализ антипептидных антител 119 из антисывороток к пептиду I

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунореактивные консервативные участки оболочечных гликопротеинов вируса гепатита С"

Актуальность проблемы. Вирус гепатита С (ВГС) является основным этиологическим фактором парентерально распространяемых вирусных гепатитов человека. ВГС инфекция отличается высоким уровнем хронизации и риском развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Общее количество количество инфицированных ВГС приближается к 500 млн. человек и составляет около 3% населения земного шара (Rosen and Greth, 1999). В России и других странах число выявленных случаев ВГС инфекции увеличивается с каждым годом в несколько раз (Балаян и Михайлов, 1999). ВГС представляет серьезную угрозу здоровью человечества, тем самым обусловливая насущную необходимость изучения вируса, диагностики и лечения ВГС инфекции, а также вакцинопрофилактики.

Остается актуальной задача улучшения качества серологической диагностики ВГС инфекции, несмотря на то, что ряд диагностических тест-систем последнего поколения достигает высокой специфичности и чувствительности в обнаружении антивирусных антител. Создание противовирусной вакцины также является насущной задачей. Попытки создания эффективной вакцины пока не увенчались успехом, несмотря на интенсивную работу в этом направлении многих лабораторий мира.

Объективным препятствием на пути исследования патогенеза ВГС, создания диагностикумов и вакцин является чрезвычайно высокий генетический полиморфизм вируса. Отсутствие перевиваемых клеточных культур, способных стабильно поддерживать репликацию вируса в рутинной лабораторной практике, а также недоступность для большинства исследователей шимпанзе, единственного вида экспериментальных животных, чувствительного к ВГС инфекции, не способствует быстрому прогрессу в изучении ВГС.

Для успешного решения фундаментальных научных задач по изучению патогенеза ВГС и его взаимодействия с иммунной системой организма-хозяина и для поиска реагентов для лечения, профилактики и диагностики ВГС необходимы детальные знания об антигенной структуре вирусных белков, картирование иммунодоминантных эпитопов и эпитопов, против которых вырабатываются протективные, вирус-нейтрализующие антитела.

Большие успехи достигнуты в антигенном картировании кор-белка и ряда неструктурных белков ВГС. Но эпитопное картирование оболочечных гликопротеинов вируса Е1 и Е2 представляет собой чрезвычайно трудную и в целом нерешенную задачу. Это обусловлено низкой иммуногенностью оболочечных гликопротеинов ВГС в течение натуральной инфекции, высокой вариабельностью их аминокислотного состава и высокой антигенной изменчивостью, а также экспериментальными трудностями при получении высокоочищенных препаратов оболочечных гликопротеинов, обладающих правильным гликозилированием и нативной конформацией. Ряд работ по поиску эпитопов в составе Е1 и Е2 был проведен, но полученные результаты представляют собой фрагментарную и часто противоречивую информацию.

Большинство работ, посвященных эпитопному картированию белков ВГС, проведено с использованием синтетических или рекомбинантных пептидов. Одним из самых технологичных методов эпитопного картирования является метод пептидного сканирования, объединяющий множественный параллельный синтез олигопептидов по пиновой технологии и иммуноферментный анализ (Geysen et al.,1984;1985; 1987). Вследствие высокой вариабельности оболочечных гликопротеинов ВГС сплошное пептидное сканирование, как при изучении белков с консервативной аминокислотной последовательностью, является чрезвычайно трудоемким и дорогостоящим. Наиболее рациональным представляется подход, основанный на предварительном отборе высококонсервативных участков, сохраняющихся неизменными для различных изолятов вируса. Такие участки, по-видимому, обеспечивают жизненно необходимые для вируса функции, такие, как поддержание определенной структуры, взаимодействие с клеточными рецепторами и осуществление процесса слияния мембран при проникновении вируса в клетку-хозяина. Такие участки могут содержать антигенные детерминанты, антитела против которых имеют как диагностическое значение, так и протективные свойства.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является поиск и идентификация непрерывных антигенных детерминант оболочечных гликопротеинов вируса гепатита С методом пептидного сканирования и получение антипептидных антител к участкам оболочечного гликопротеина Е2, взаимодействующих с клеточным маркером CD81.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. -осуществить выбор участков с высокой консервативностью в составе оболочечных гликопротеинов ВГС;

2. -синтезировать на полиэтиленовых иглах отщепляемые биотинилированные октапептиды, перекрывающие выбранные участки;

3. тестировать полученные пептиды на иммунореактивность с группами сывороток крови ВГС-инфицированных пациентов в острой и хронической фазах инфекции;

4. составить антигенную карту оболочечных гликопротеинов ВГС на основании литературных данных;

5. получить антипептидные антитела к пептидам из оболочечного гликопротеина Е2 для тестирования их вирус-нейтрализующей активности;

6. охарактеризовать полученные антитела, определить их титр и специфичность.

Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые проведен направленный поиск антигенных детерминант в участках с высокой консервативностью оболочечных гликопротеинов ВГС. Выявлено два иммунодоминантных участка, один из которых в белке Е1 был картирован ранее с помощью более длинных пептидов. Применение перекрывающихся октапептидов позволило нам провести более точное картирование этого ранее найденного эпитопа. Второй иммунодоминантный участок в составе белка Е2 был обнаружен впервые в настоящей работе. Эксперименты по конкурентному ингибированию позволили нам выявить в нем два частично перекрывающихся непрерывных эпитопа. Картированы также три минорных эпитопа. Один из них содержит участок с наибольшим локальным положительным зарядом среди последовательности Е2 белка и возможно важен для взаимодействия вируса с клеткой.

Проведенный нами сравнительный анализ выявил различия в иммунореактивности пептидов с группами сывороток пациентов в разных фазах заболевания. Так, 70% сывороток пациентов с хронической ВГС инфекцией реагировали хотя бы с одним из 12 иммунореактивных пептидов, тогда как единственная сыворотка пациента в острой фазе заболевания взаимодействовала только с одним пептидом. Полученные данные находятся в соответствии с данными других авторов о невысокой иммуногенности оболочечных белков ВГС, и об отсроченном появлении анти-Е1 и анти-Е2 антител в процессе естественной инфекции.

Составлена антигенная карта Е1 и Е2 при использовании консенсусной аминокислотной последовательности оболочечных гликопротеинов ВГС, что позволило сравнить между собой экспериментальные результаты, полученные разными авторами, и выявить общие закономерности.

Получены антипептидные мышиные антитела к двум пептидам, представляющим участки последовательности Е2, 15 и 19 аминокислотных остатков длиной, обладающим высококонсервативной центральной частью и менее консервативными фланкирующими районами. Полученные сыворотки охарактеризованы непрямым и конкурентным иммуноферментным сорбционным анализом. Определен титр специфических антипептидных антител для каждой сыворотки. Разработаны протоколы иммунизации мышей, позволяющие получить антитептидные антитела данной специфичности.

10

Структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения (5 стр.), обзора литературы (51 стр.), главы «Материалы и методы» (18 стр.), главы «Результаты и обуждение» (53 стр.), выводов и библиографического списка, включающего 246 источников. Работа изложена на 157 страницах машинописного текста, содержит 14 рисунков и 10 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Оленина, Людмила Владимировна

5 Выводы

1. Проведено эпитопное картирование восьми высококонсервативных участков Е1 и Е2 методом пептидного сканирования с использованием технологии множественного параллельного пептидного синтеза и сывороток ВГС-инфицированных индивидуумов. Определены линейные антигенные детерминанты, среди них выявлено два иммунодоминантных участка, один из которых картирован впервые. Картированы также три минорных эпитопа.

2. Показана различная иммунореактивность пептидов с антителами из групп сывороток пациентов в разных фазах заболевания. Антитела из 70% сывороток пациентов с хронической ВГС инфекцией реагировали с пептидами из высококонсервативных участков Е1 и Е2, тогда как антитела из единственной сыворотки пациента в острой фазе заболевания взаимодействовали только с одним пептидом. Полученные данные указывают на слабую иммуногенность оболочечных белков ВГС и отсроченное появление анти-Е1 и анти-Е2 антител в процессе естественной инфекции у человека.

3. Составленная антигенная карта оболочечных белков Е1 и Е2 ВГС позволяет сопоставить экспериментальные данные об антигенных детерминантах, полученные в различных лабораториях.

4. Показана возможность индукции специфических антител к участкам, слабо иммуногенным в процессе естественной инфекции. Получены и охарактеризованы антипептидные мышиные антитела к двум пептидам, представляющим участки последовательности Е2 с высококонсервативными центральными районами.

5. Овальбумин и коллоидное золото оказались значительно более эффективными носителями конъюгированного с ними пептида I для индукции специфических антител по сравнению с гемоцианином.

4.3 Заключение

Высокая генетическая гетерогенность оболочечных гликопротеинов ВГС создает трудности для изучения их антигенной структуры и создания эффективных вакцинных конструкций. Примененный нами подход основан на выявлении участков белков, сохраняющихся неизменными среди различных изолятов вируса, и определении антигенных детерминант внутри таких участков. Выравнивание аминокислотных последовательностей оболочечных белков ВГС Е1 и Е2 из различных изолятов позволило нам оценить относительную вариабельность различных областей этих белков и выявить восемь протяженных высококонсервативных участков в их составе. Часть этих участков вовлечена в связывание вирионов с клеточными рецепторами и в процесс слияния мембран при проникновеннии вируса в клетку. Антитела к таким участкам могут обладать потенциальными вирус-нейтрализующими свойствами. Идентификация эпитопов, к которым такие антитела индуцируются, будет способствовать дальнейшей разработке вакцинных конструкций против ВГС.

Методом множественного параллельного пептидного синтеза на полиэтиленовых иглах были получены отщепляемые октапептиды, перекрывающие найденные участки с шагом перекрывания в семь аминокислотных остатков. Пептиды были использованы в непрямом ELISA для тестирования их взаимодействия с антителами из сывороток крови ВГС-инфицированных пациентов и здоровых доноров. Полученные данные позволили выявить два иммунодоминантных участка в высококонсервативных участках оболочечных белков ВГС CR1 и CR5, с пептидными фрагментами которых взаимодействовали антитела из сывороток ВГС-инфицированных пациентов в хронической фазе, в 53,3% и 33,3% случаев, соответственно. Антигенная активность участка CR1 раньше была показана рядом исследовательских групп, но нами был точно картирован линейный В-эпитоп внутри этого участка. Антигенно-активный регион в составе участка CR5 был обнаружен впервые в настоящей работе. С помощью конкурентного ELISA в нем были картированы два перекрывающихся линейных эпитопа. Идентифицированы также три минорных эпитопа, антитела к которым обнаружены в сыворотках крови только у единичных пациентов в каждом случае.

Полученные нами данные о картировании двух иммунодоминантных эпитопов, экспрессирующихся в хронической фазе ВГС-инфекции, позволяют рекомендовать применение высококонсервативных пептидных фрагментов из Е1 с последовательностью GHRMAWDMMM и из Е2 с последовательностью PALSTGLIH для разработки новых серологических диагностических тест-систем. Их применение одновременно с иммунодоминантными эпитопами из других белков ВГС позволит увеличить специфичность анализа.

Сравнительный анализ взаимодействия антител из различных групп сывороток (пациентов в острой и хронической фазах и группы здоровых доноров) выявил статистически значимые различия в характере индукции антител к найденным эпитопам в процессе естественной инфекции у человека. Проведенное нами эпитопное картирование в целом подтверждает слабую иммуногенность исследованных участков, и свидетельствует об ограниченном наборе экспрессирующихся эпитопов при хроническом гепатите С и о практически полном отсутствии антител против них в острой фазе заболевания. Слабая иммуногенность консервативных участков в составе оболочечных белков ВГС является следствием низкой концентрации этих антигенов в крови инфицированного и недостаточной для индукции специфических IgG антител Т-хелперной поддержке.

Нами построена антигенная карта оболочечных белков ВГС, составленная по ранее опубликованным и полученным в настоящей работе данным. Карта создана путем выравнивания опубликованных аминокислотных последовательностей, содержащих антигенные детерминанты, под консенсусной последовательностью Е1 и Е2. Такая форма представления позволяет сопоставить расположение на карте антигенных участков, найденных разными авторами при изучении различных изолятов ВГС, и легко оценить относительную консервативность эпитопов. Тем самым антигенная карта дает возможность обобщить и систематизировать сведения о характере гуморального иммунного ответа к оболочечным гликопротеинам ВГС. Картирование функционально важных участков и антигенных детерминант в дальнейшем может способствовать построению более точных моделей оболочечных гликопротеинов ВГС и более глубокому пониманию патогенеза ВГС.

Для того, чтобы показать, что неиммуногенные или слабоиммуногенные в составе нативного белка участки могут быть высокоиммуногенными в составе искусственных конструкций, мы получили в беспородных мышах и охарактеризовали антипептидные антитела к двум пептидным фрагментам из последовательности белка Е2 ВГС. Выбранные фрагменты содержали высококонсервативные центральные части и менее консервативные фланкирующие участки. По данным литературы эти участки в составе оболочки вириона взаимодействуют с клеточным маркером CD81. Поскольку короткие пептиды обычно слабо иммуногенны, то они были использованы для иммунизации в виде конъюгатов с различными носителями. Наиболее иммуногенными из использованных нами для получения антипептидных антител были конъюгаты пептида I с овальбумином (наивысший титр специфических антител 1:51 200) и коллоидным золотом (титр 1:9 051), а наименее иммуногенным конъюгат пептида I с гемоцианином из Megathure crenulata (титр 1:200). Применение технологии пептидного сканирования и конкурентного ELISA позволо нам показать, что основная популяция антител к пептиду I высокоспецифична и направлена против конформационного эпитопа. Индукция специфических антител к пептиду I у двух из шести животных при иммунизации конъюгатом пептида I с коллоидным золотом подтверждает наличие Т-хелперного эпитопа в составе самого пептида I. Мы детектировали также антипептидные

131 антитела к пептиду II, индуцированные иммунизацией конъюгатами пептида II с овальбумином и гемоцианином (титр 1:400), и показали, что антитела направлены против линейного эпитопа TWMNST в составе пептида II. Таким образом, мы получили и охарактеризовали антипептидные антитела к синтетическим пептидам, представляющим собой участки белка Е2, обладающие слабой иммуногенностью в процессе естественной инфекции. В дальнейшем планируется тестировать полученные антитела на протективную антивирусную активность в системах, поддерживающих репликацию ВГС in vitro.

Примененный здесь комплексный подход, заключающийся в определении консервативных участков и последующем поиске антигенных детерминант с изолят-независимыми характеристиками, пригоден для изучения и разработки вакцинных конструкций не только для ВГС, но может быть применен и для изучения других патогенов человека, отличающихся высокой генетической гетерогенностью. Получение антипептидных антител к выявленным консервативным участкам, картирование с их помощью функционально-важных участков белков и нейтрализующих эпитопов является следующим этапом такого исследования.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Оленина, Людмила Владимировна, Москва

1. Аммосова Т.Н., Упоров И.В, Рубцова М.Ю, Игнатенко О.В, Егоров А.М, Колесанова Е.Ф, Арчаков А.И. Эпитопное картирование пероксидазы хрена (изофермент С) // Биохимия, 1997,-№62.-с.516-524

2. Балаян М.С., Михайлов М.И. Энциклопедический словарь вирусные гепатиты.-М.:Амипресс, 1999. - 304с.

3. Дельвиг А.А., Семенов Б.Ф., Розенквист Э, Робинсон Д.Г. Neisseria meningitidis: от антигенной структуры к новому поколению вакцин,- М.; Медицина, 2000. -256с.

4. Гланц С. Медико-биологическая статистика,-М.; Практика, 1999. -459с.

5. Колесанова Е.Ф, Козин С.А, Арчаков А.И. Антигенное картирование цитохрома Р450 101(P450cam) II Биоорганическая химия -1998. №24. - с.663-671

6. Ройт А, Бростофф Дж, Мейл Д. Иммунология-М.:Мир, 2000. -592с.

7. Agnello V, Abel G, Elfand M, Knignt G.B, Zhang Q-X. Hepatitis с virus and other Flaviviridae viruses enter cells via low density lipoprotein receptor// Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 1999, v. 96, p. 12766-12771

8. Akula, S. M, Wang, F. Z, Vieira, J, and Chandran, B. Human herpesvirus 8 interaction with target cells involves heparan sulfate // Virology, 2001, v. 282, p. 245-255

9. Alzari, P. M., Lascombe, M. В., and Poljak, R. J. Three-dimensional structure of antibodies // Annu.Rev Immunol, 1988, v. 6, p. 555-580

10. Amit, A. G., Mariuzza, R. A., Phillips, S. E., and Poljak, R. J. Three-dimensional structure of an antigen-antibody complex at 2.8 A resolution // Science, 1986, v. 233, p. 747-753

11. Atassi, M. Z. and Smith, J. A. A proposal for the nomenclature of antigenic sites in peptides and proteins // Immunochemistry, 1978, v. 15, p. 609-610

12. Atassi, M. Z. Antigenic structures of proteins. Their determination has revealed important aspects of immune recognition and generated strategies for synthetic mimicking of protein binding sites // Eur.J Biochem., 1984, v. 145, p. 1-20

13. Atherton E. and Sheppard R.C.(ed) // Solid Phase peptide synthesis -A practical approach. IRL Press/Oxford, UK-1989. -445p.

14. Ausubel F.M., Brent R., Kingston R.E., Moore D.D., Seidman J.G., Smith J.A., Struhl K. (ed.) Short protocols in molecular biology-4th ed. By John Wiley and Sons, Inc. USA 1999.

15. Bartenschlager R., Lohmann V. Novel cellculture systems for the hepatitis С virus // Antiviral Research, 2001, v. 52, p. 1-17

16. Bause E. Structrural requirements of N-glycosylation of proteins // Biochemical Journal, 1983, v. 209, p. 331-336

17. Behrens, S. E., Tomei, L., and De Francesco, R. Identification and properties of the RNA-dependent RNA polymerase of hepatitis С virus // EMBO J, 1996, v. 15, p. 12-22

18. Bendinelli M., Vatteroni M.L., Maggi F., Pistello M. Hepatitis С virus: biology, pathogenesis, epidemiology, clinical description and diagnosis// in Viral hepatitis: diagnosis, therapy, and prevention. Ed. By Specter S.- Humana Press, 1999. - p.65-127.

19. Benjamin, D. С., Berzofsky, J. A., East, I. J., Gurd, F. R., Hannum, C., Leach, S. J., Margoliash, E., Michael, J. G., Miller, A., and Prager, E. M. The antigenic structure of proteins: a reappraisal//Annu.Rev Immunol, 1984, v. 2, p. 67-101

20. Bradbury, L. E., Kansas, G. S., Levy, S„ Evans, R. L., and Tedder, T. F. The CD19/CD21 signal transducing complex of human В lymphocytes includes the target of antiproliferative antibody-1 and Leu-13 molecules//J Immunol, 1992, v. 149, p. 2841-2850

21. Bukh J., Purcell R.H., Miller R.H. Sequence analysis of core gene of 14 hepatitis С virusgenotypes // Proc. Natl. Acad.Sci. USA, 1994, v.91, p. 8239-8243

22. Caponi L. and Migliorini P.(ed) Antibody usage in the lab Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-1999.

23. Cardin, A. D. and Weintraub, H. J. Molecular modeling of protein-glycosaminoglycan interactions//Arteriosclerosis, 1989, v. 9, p. 21-32

24. Chacko, S., Silverton, E., Kam-Morgan, L., Smith-Gill, S., Cohen, G., and Davies, D. Structure of an antibody-lysozyme complex unexpected effect of conservative mutation // J Mol.Biol, 1995, v. 245, p. 261-274

25. Chan, S. W., Bye, J. M., Jackson, P., and Allain, J. P. Human recombinant antibodies specific for hepatitis С virus core and envelope E2 peptides from an immune phage display library // J.Gen.Virol., 1996, v. 77, p. 2531-2539

26. Chen, M., Sonnerborg, A., and Sallberg, M. Levels of hepatitis С virus (HCV) RNA in serum and their relationship to levels of immunoglobulin M and G antibodies against HCV core protein // J.Clin.Microbiol., 1995, v. 33, p. 778-780

27. Chen M.,Sallberg M., Sonnerborg A., Weiland O., Mattisson L., Jin L., Birkett A., Peterson D., Milich D. Limited Humoral immunity in hepatitis С virus infection // Gastroenterology, 1999,v. 116, p. 135-143.

28. Chen, Y., Maguire, Т., Hileman, R. E., Fromm, J. R., Esko, J. D., Linhardt, R. J., and Marks, R. M. Dengue virus infectivity depends on envelope protein binding to target cell heparan sulfate // Nat.Med., 1997, v. 3, p. 866-871

29. Choo, Q. L., Kuo, G., Weiner, A. J., Overby, L. R., Bradley, D. W., and Houghton, M. Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome // Science, 1989, v. 244, p. 359-362

30. Choo, Q. L., Kuo, G., Ralston, R., Weiner, A., Chien, D., Van Nest, G., Han, J., Berger, K., Thudium, K., and Kuo, C. Vaccination of chimpanzees against infection by the hepatitis С virus // Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1994, v. 91, p. 1294-1298

31. Choukhi A., Pillez A., Drobecq H., Sergheraert Ch., Wychowski C., Dubuisson J. characterization of aggregates of hepatitis С virus glycoproteins // J.Virol., 1999, v. 80, p. 3099-3107

32. Choukhi, A., Ung, S., Wychowski, C., and Dubuisson, J. Involvement of endoplasmic reticulum chaperones in the folding of hepatitis С virus glycoproteins // J.Virol., 1998, v. 72, p. 3851-3858

33. Clarke B. Molecular virology of hepatitis С virus //J. Gen. Virol., 1997, v. 78, p. 2397-2410

34. Cramp, M. E., Carucci, P., Rossol, S., Chokshi, S., Maertens, G., Williams, R., and Naoumov, N. V. Hepatitis С virus (HCV) specific immune responses in anti-HCV positive patients without hepatitis С viraemia // Gut, 1999, v. 44, p. 424-429

35. Deleersnyder, V., Pillez, A., Wychowski, C., Blight, K., Xu, J., Hahn, Y. S., Rice, С. M., and Dubuisson, J. Formation of native hepatitis С virus glycoprotein complexes // J.Virol., 1997, v. 71, p. 697-704

36. Deng H., Liu R., Ellmeier W. Identification of a major co-receptor for primary isolates of HIV // Nature, 1996, v.381, p. 661-664

37. Devlin, J. J., Panganiban, L. C., and Devlin, P. E. Random peptide libraries: a source of specific protein binding molecules // Science, 1990, v. 249, p. 404-406

38. Dubuisson, J. and Rice, С. M. Hepatitis С virus glycoprotein folding: disulfide bond formation and association with calnexin // J.Virol., 1996, v. 70, p. 778-786

39. Dykman L.A., Matora L.Yu., Bogatyrev V.A. Use of colloidal gold to obtain antibiotin antibodies // Journal of Microbiological Methods, 1996, v.24, p. 247-248

40. Farci, P, Bukh, J., and Purcell, R. H. The quasispecies of hepatitis С virus and the host immune response // Springer Semin.lmmunopathol, 1997, v. 19, p. 5-26

41. Feldman, S. A, Audet, S, and Beeler, J. A. The fusion glycoprotein of human respiratory syncytial virus facilitates virus attachment and infectivity via an interaction with cellular heparan sulfate II J.Virol., 2000, v. 74, p. 6442-6447

42. Flint, M., Thomas, J. M, Maidens, С. M, Shotton, C., Levy, S., Barclay, W. S, and McKeating, J. A. Functional analysis of cell surface-expressed hepatitis С virus E2 glycoprotein // J.Virol, 1999 b, v. 73, p. 6782-6790

43. Flint, M, Dubuisson, J, Maidens, C, Harrop, R, Guile, G. R, Borrow, P, and McKeating, J. A. Functional characterization of intracellular and secreted forms of a truncated hepatitis С virus E2 glycoprotein // J.Virol, 2000, v. 74, p. 702-709

44. Flint, M. and McKeating, J. A. The role of the hepatitis С virus glycoproteins in infection // Rev Med Virol, 2000, v. 10 , p. 101-117

45. Foms, X, Purcell, R. H, and Bukh, J. Quasispecies in viral persistence and pathogenesis of hepatitis С virus // Trends Microbiol, 1999, v. 7, p. 402-410

46. Foms, X, Allander, T, Rohwer-Nutter, P, and Bukh, J. Characterization of modified hepatitis С virus E2 proteins expressed on the cell surface // Virology, 2000 a, v. 274, p. 75-85

47. Frank, R. and Overwin, H. SPOT synthesis. Epitope analysis with arrays of synthetic peptides prepared on cellulose membranes// Methods Mol.Biol., 1996, v. 66, p. 149-169

48. Frank R. SPOT-synthesis: an easy techique for the positionally addresable, parallel chemical synthesis on a membrane support//Tetrahedron 1992, v. 48,p. 9217-9232

49. Geysen, H. M., Meloen, R. H., and Barteling, S. J. Use of peptide synthesis to probe viral antigens for epitopes to a resolution of a single amino acid // Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1984, v. 81, p. 3998-4002.

50. Geysen, H. M.Antigen-antibody interactions at the molecular levekadventures in peptide synthesis//Immunology Today, v.6, p.364-371

51. Geysen, H. M., Rodda, S. J., Mason, T. J., Tribbick, G., and Schoofs, P. G. Strategies for epitope analysis using peptide synthesis// J.Immunol.Methods, 1987, v. 102, p. 259-274.

52. Geysen, H. M., Mason, T. J., and Rodda, S. J. Cognitive features of continuous antigenic determinants//J.Mol.Recognit., 1988, v. 1, p. 32-41.

53. Grakoui, A., Wychowski, C., Lin, C., Feinstone, S. M., and Rice, С. M. Expression and identification of hepatitis С virus polyprotein cleavage products // J Virol., 1993, v. 67, p. 1385-1395

54. Green, N., Alexander, H., Olson, A., Alexander, S., Shinnick, Т. M., Sutcliffe, J. G., and Lerner, R. A. Immunogenic structure of the influenza virus hemagglutinin // Cell, 1982, v. 28, p. 477-487

55. Groome N.P. Immunoassays of proteins and anti-peptide antibodies // in: Peptide antigen: a practical approach IRL Press/ Oxford, UK-1994, p. 139-179

56. Halimi H., Dumortier H., Briand J.P., Muller S. Comprasion of two different methods using overlapping synthetic peptides for localization linear epitopes in the U1 snRNP-C autoantigen // J. Immunol., 1996, v. 199, p. 77-85

57. Hijikata, M., Kato, N., Ootsuyama, Y., Nakagawa, M., Ohkoshi, S., and Shimotohno, K. Hypervariable regions in the putative glycoprotein of hepatitis С virus // Biochem.Biophys.Res Commun., 1991, v. 175, p. 220-228

58. Hijikata, M„ Shimizu, Y. K., Kato, H„ Iwamoto, A., Shih, J. W., Alter, H. J., Purcell, R. H., and Yoshikura, H. Equilibrium centrifugation studies of hepatitis С virus// evidence for circulating immune complexes//J.Virol., 1993, v. 67, p. 1953-1958

59. Holland, J., Spindler, K., Horodyski, F„ Grabau, E., Nichol, S., and VandePol, S. Rapid evolution of RNA genomes // Science, 1982, v. 215, p. 1577-1585

60. Hopp, T.P. and Woods, K.R. Prediction of protein antigenic determinants from amino acid sequences //Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1981, v. 78, p. 3824-3828

61. Hopp, T. P. Protein antigen conformation// folding patterns and predictive algorithms; selection of antigenic and immunogenic peptides // Ann.Sclavo.Collana.Monogr, 1984, v. 1, p. 47-60

62. Houghten, R. A. General method for the rapid solid-phase synthesis of large numbers of peptides: specificity of antigen-antibody interaction at the level of individual amino acids // Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1985, v. 82, p. 5131-5135

63. Hung S.L., Lee P.L., Chen H.W., Chen L.K., Kao C.L. and King C.C. Analysis of the steps involved in Dengue virus entry into host cells //Virology, 1996, v. 257, p. 156-167

64. Jeme N. Surface and inside volumes in globular proteins // Annu. Rev. Microbiol., 1960, v. 14, p.341-358

65. Jemmerson, R. and Paterson, Y. Mapping epitopes on a protein antigen by the proteolysis of antigen-antibody complexes//Science, 1986, v. 232, p. 1001-1004

66. Jin L. and Well J.A. Mutational analysis of antibody binding sites. In: Van Regenmortel M.H.V. (ed.) Structure of antigens v.3 CRC Press, Boca Raton, 1996, p.31-36

67. Karplus P.A. and Shulz G.E. Prediction of chain flexibility in proteins // Naturwissenschaften, 1985, v.72, p.212-213

68. Kato, N., Ootsuyama, Y., Tanaka, Т., Nakagawa, M., Nakazawa, Т., Muraiso, K., Ohkoshi, S., Hijikata, M., and Shimotohno, K. Marked sequence diversity in the putative envelope proteins of hepatitis С viruses //Virus Res., 1992, v. 22, p. 107-123

69. Kato, N., Ootsuyama, Y., Sekiya, H., Ohkoshi, S., Nakazawa, Т., Hijikata, M., and Shimotohno, K. Genetic drift in hypervariable region 1 of the viral genome in persistent hepatitis С virus infection // J.Virol., 1994, v. 68, p. 4776-4784

70. Kato, N., Lan, К. H., Ono-Nita, S. K., Shiratori, Y., and Omata, M. Hepatitis С virus nonstructural region 5A protein is a potent transcriptional activator// J.Virol., 1997, v. 71, p. 8856-8859

71. Kitadokoro, K., Bordo, D., Galli, G., Petracca, R., Falugi, F., Abrignani, S., Grandi, G., and Bolognesi, M. CD81 extracellular domain 3D structure: insight into the tetraspanin superfamily structural motifs // EMBO J, 2001, v. 20, p. 12-18

72. Koshland, D. E., Nemethy, G., and Filmer, D. Comparison of experimental binding data and theoretical models in proteins containing subunits// Biochemistry, 1966, v. 5, p. 365-385

73. Krchnak, V., Mach, O., and Maly, A. Computer prediction of potential immunogenic determinants from protein amino acid sequence//Anal.Biochem., 1987, v. 165, p. 200-207

74. Kyte, J. and Doolittle, R. F., A simple method for displaying the hydropathic character of a protein //J Mol.Biol, 1982, v. 157, p. 105-132

75. Lai, M. E., Mazzoleni, A. P., Argiolu, F., De Virgilis, S., Balestrieri, A., Purcell, R. H., Cao, A., and Farci, P. Hepatitis С virus in multiple episodes of acute hepatitis in polytransfused thalassaemic children // Lancet, 1994, v. 343, p. 388-390

76. Lam, K. S., Salmon, S. E., Hersh, E. M., Hruby, V. J., Kazmierski, W. M., and Knapp, R. J. A new type of synthetic peptide library for identifying ligand-binding activity И Nature, 1991, v. 354, p. 8284.

77. Lancet D., Horouvitz A. and Katcholski-Katzir E. The state of the art 100 years on. in: The Lock-and-Key principle, John Wiley, Chichester, 1994, p.25-29.

78. Lechner, S., Rispeter, K., Meisel, H., Kraas, W., Jung, G., Roggendorf, M., and Zibert, A. Antibodies directed to envelope proteins of hepatitis С virus outside of hypervariable region 1// Virology, 1998, v. 243, p. 313-321

79. Lee, J. W„ Kim, K., Jung, S. H„ Lee, K. J., Choi, E. C„ Sung, Y. C„ and Kang, C. Y. Identification of a domain containing B-cell epitopes in hepatitis С virus E2 glycoprotein by using mouse monoclonal antibodies//J.Virol., 1999, v. 73, p. 11-18

80. Leonetti, M., Cotton, J., Leroy, S., Mourier, G., and Menez, A. Immunogenicity of T epitope-containing cyclic peptides. Increasing neutralizing antibody responses by introducing fine chemical changes // J Immunol, 1995, v. 155, p. 210-218

81. Lemer, R. A. Antibodies of predetermined specificity in biology and medicine // Adv.lmmunol, 1984, v. 36, p. 1-44

82. Lo, S. Y., Selby, M., Tong, M., and Ou, J. H. Comparative studies of the core gene products of two different hepatitis С virus isolates: two alternative forms determined by a single amino acid substitution//Virology, 1994, v. 199, p. 124-131

83. Lo, S. Y., Masiarz, F., Hwang, S. В., Lai, M. M., and Ou, J. H. Differential subcellular localization of hepatitis С virus core gene products //Virology, 1995, v. 213, p. 455-461

84. Lo, S. Y., Selby, M. J., and Ou, J. H. Interaction between hepatitis С virus core protein and E1 envelope protein//J.Virol., 1996, v. 70, p. 5177-5182

85. Maecker, H. Т., Do, M. S., and Levy, S. CD81 on В cells promotes interleukin 4 secretion and antibody production during T helper type 2 immune responses // Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1998, v. 95, p. 2458-2462

86. Margalit, H, Fischer, N, and Ben Sasson, S. A. Comparative analysis of structurally defined heparin binding sequences reveals a distinct spatial distribution of basic residues // J.Biol.Chem., 1993, v. 268, p. 19228-19231

87. Maruyama T, Mclachlan A, lino S, Koike K, Kurokawa K, Millich D.R. The serology of chronic hepatitis В infection revisited // J Clin Invest, 1993, v. 91, p. 2586-2595

88. Matsumoto, M., Hwang, S. B, Jeng, K. S, Zhu, N, and Lai, M. M. Homotipic interaction and multimerization of hepatitis С virus core protein //Virololgy, 1996, v. 218, p. 43-51

89. Mattioli, S, Imberti, L, Stellini, R, and Primi, D. Mimicry of the immunodominant conformation-dependent antigenic site of hepatitis A virus by motifs selected from synthetic peptide libraries // J Virol, 1995, v. 69, p. 5294-5299

90. McAllister J, Casino C, Davidson F, Power J, Lawlor E, Yap P.L, Simmonds P. and Smith D.B. Long-term evolution of the hypervariable region of hepatitis С virus in a common-sourse-infected cohort // J. Virol, 1998, v. 72, p. 4893-4905

91. McCoy, A. J, Chandana, E, V, and Colman, P. M. Electrostatic complementarity at protein/protein interfaces//J.Mol.Biol, 1997, v. 268, p. 570-584

92. McKeating, J. A, Gow, J, Goudsmit, J, Pearl, L. H, Mulder, C, and Weiss, R. A. Characterization of HIV-1 neutralization escape mutants //AIDS, 1989, v. 3, p. 777-784

93. Michalak, J. P., Wychowski, C., Choukhi, A., Meunier, J. C., Ung, S., Rice, С. M., and Dubuisson, J. Characterization of truncated forms of hepatitis С virus glycoproteins // J.Gen.Virol., 1997, v. 78, p. 2299-2306

94. Mink, M. A., Benichou, S., Madaule, P., Tiollais, P., Prince, A. M., and Inchauspe, G. Characterization and mapping of a B-cell immunogenic domain in hepatitis С virus E2 glycoprotein using a yeast peptide library//Virology, 1994, v. 200, p. 246-255

95. Miyamoto H., Okamoto H., Sato К., Tanaka T. and Mishiro S. Extraordinarily low density of hepatitis С virus estimated by sucrose density gradient centrifugation and the polymerase chain reaction//J.Gen. Virol., 1992, v.73,p.715-718

96. Mizushima, H., Hijikata, M., Asabe, S., Hirota, M., Kimura, K., and Shimotohno, K. Two hepatitis С virus glycoprotein E2 products with different С termini // J Virol., 1994, v. 68, p. 6215-6222

97. Monazahian M., Bohme I., Bonk S., Koch A., Scholz C., Grethe S., Thomssen R. Low density lipoprotein receptor as a candidate receptor for hepatitis С virus // Journal Medical Virology, 1999, v.57, p.223-229

98. Mondelli, M. U., Cerino, A., Segagni, L., Meola, A., Cividini, A., Silini, E., and Nicosia, A. Hypervariable region 1 of hepatitis С virus: immunological decoy or biologically relevant domain? // Antiviral Res, 2001, v. 52, p. 153-159

99. Moola, Z. В., Scawen, M. D., Atkinson, Т., and Nicholls, D. J. Erwinia chrysanthemi L-asparaginase: epitope mapping and production of antigenically modified enzymes // Biochem.J, 1994, v. 302, p. 921-927

100. Muller S. Peptide-carrier conjugation in: Synthetic peptides as antigens II Elsevier Science Amsterdam, Netherlands, 1999, p.79-131

101. Nagayama, R., Miyake, K., Tsuda, F., and Okamoto, H. IgM antibody to a hepatitis С virus core peptide (CP14) for monitoring activity of liver disease in patients with acute or chronic hepatitis С //J.Med.Virol., 1994, v. 42, p. 311-317

102. Nakra, P., Manivel, V., Vishwakarma, R. A., and Rao, К. V. В cell responses to a peptide epitope. X. Epitope selection in a primary response is thermodynamically regulated // J.Immunol., 2000, v. 164, p. 5615-5625

103. Nemchinov, L. G., Liang, T. J., Rifaat, M. M., Mazyad, H. M., Hadidi, A., and Keith, J. M. Development of a plant-derived subunit vaccine candidate against hepatitis С virus // Arch.Virol., 2000, v. 145, p. 2557-2573

104. Nilsson Т., Jaeckson M., Peterson P.A. Short cytoplasmic sequence serve as retention signals for transmembrane proteins in the endoplasmic reticulum // Cell, 1989, v.58, p. 707-718

105. Ogata, N., Alter, H. J., Miller, R. H., and Purcell, R. H. Nucleotide sequence arid mutation rate of the H strain of hepatitis С virus II Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1991, v. 88, p. 3392-3396

106. Panina-Bordington P.A., Termijtelen T.A., Demotz S., Corradin G.P., Lanzavecchia A. Universally immunogenic T cell epitopes.promiscuous binding to human class II and promiscuous recognition by T cells // Eur.Journal of Immunol., 1989, v.19 p.2237-2242

107. Patel J., Patel A.H., McLauchlan J. Covalent interactions are not required to permit or stabilize the non-covalent association of hepatitis С virus glycoproteins E1 and E2 // J.Gen. Virol., 1999, v.80, p. 1681-1690

108. Patel J., Patel A.H., McLauchlan J. The transmembrane domain of the hepatitis С virus E2 glycoprotein is required for correct folding of the E1 glycoprotein and native complex formation // Virology, 2001,v.279, p. 58-68

109. Patel, M., Yanagishita, M., Roderiquez, G., Bou-Habib, D. C., Oravecz, Т., Hascall, V. C., and Norcross, M. A. Cell-surface heparan sulfate proteoglycan mediates HIV-1 infection of T- cell lines // AIDS Res.Hum.Retroviruses, 1993, v. 9, p. 167-174

110. Pellequer J.L., Westhof E., Van Regenmortel M.H.V. Predicting location of continuous epitopes in proteins from their primary structures // Meth. Enzymol., 1991, v. 203, p. 176-201

111. Pellequer J.L., Westhof E. PREDITOP:A program for antigenicity prediction // J.Mol.Graphics, 1993, v. 11, p. 204-210

112. Pileri, P., Uematsu, Y., Campagnoli, S., Galli, G., Falugi, F., Petracca, R., Weiner, A. J., Houghton, M., Rosa, D., Grandi, G., and Abrignani, S. Binding of hepatitis С virus to CD81 // Science, 1998, v. 282, p. 938-941

113. Pereboeva L.A., Pereboev A.V. and Morris G.E. Identification of antigenic sites on three hepatitis С virus proteins using phage-display libraries // J. Med. Virol., 1998, v. 56, p. 1105-111

114. Prezzi, C., Nuzzo, M., Meola, A., Delmastro, P., Galfre, G., Cortese, R., Nicosia, A., and Monaci, P. Selection of antigenic and immunogenic mimics of hepatitis С virus using sera from patients//J. Immunol., 1996, v. 156, p. 4504-4513

115. Prince, A. M., Brotman, В., Huima, Т., Pascual, D., Jaffery, M., and Inchauspe, G. Immunity in hepatitis С infection // J.lnfect.Dis., 1992, v. 165, p. 438-443

116. Prince, A. M., Huima-Byron, Т., Parker, T. S., and Levine, D. M. Visualization of hepatitis С virions and putative defective interfering particles isolated from low-density lipoproteins // J.Viral Hepat., 1996, v. 3, p. 11-17

117. Rao, К. V. Selection in a T-dependent primary humoral response// new insights from polypeptide models //APMIS, 1999, v. 107, p. 807-818

118. Ray, R., Khanna, A., Lagging, L. M., Meyer, K., Choo, Q. L., Ralston, R., Houghton, M., and Becherer, P. R. Peptide immunogen mimicry of putative E1 glycoprotein-specific epitopes in hepatitis С virus // J.Virol., 1994, v. 68, p. 4420-4426

119. Ray R., Lagging L. M., Meyer K., Steele R., Ray R. Transcriptional regulation of cellular and viral promoters by the hepatitis С virus core protein //Virus Res., 1995, v. 37, p. 209-220

120. Ray R., Meyer K., Steele R., Ray R. Transcriptional repression of p53 promotor by hepatitis С virus core protein//J. Biol. Chem., 1997, v. 272, p. 10983-10986

121. Reed K.E. and Rice C.M. Overview of hepattis С virus genome structure, polyprotein processing, and protein properties II Current topics in Microbiology and Immunology, 2000, v. 242, p. 55-83

122. Rispeter K., Mengji L., Behrens S.-E., Fumiko C., YoshidaT. And Roggendorf M. Hepatitis С virus variability: sequence analysis of an isolate after 10 years of chronic infection // Virus Genes, 2000, v. 21, p. 179-188

123. Rodda, S. J. and Tribbick, G. Antibody-Defined Epitope Mapping Using the Multipin Method of Peptide Synthesis // Methods, 1996, v. 9, p. 473-481

124. Rosen H.R. and Gretch D.R. hepatitis С virus: current understanding and prospects for future therapies // Molecular Medicine Today, 1999, v.5, p.393-399

125. Rubinstein E.,Naour F.L., Lagaudriere-Gesbert C., Billard M., Conjeaud H. and Boucheix C. CD9, CD63, CD81 and CD82 are components of a surface tetraspan network connected to HLA-DR and VLA integrins//Eur.J. Immunol., 1996, v.26, p.2657-2665

126. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. (ed) Molecular cloning: a laboratory manual Cold Spring Harbor New York -1989.

127. Santolini, E., Migliaccio, G., and La Monica, N. Biosynthesis and biochemical properties of the hepatitis С virus core protein // J.Virol., 1994, v. 68, p. 3631-3641

128. Santolini, E., Pacini, L., Fipaldini, C., Migliaccio, G., and Monica, N. The NS2 protein of hepatitis С virus is a transmembrane polypeptide // J.Virol., 1995, v. 69, p. 7461-7471

129. Schulze-Gahmen, U., Rini, J. M., and Wilson, I. A. Detailed analysis of the free and bound conformations of an antibody. X- ray structures of Fab 17/9 and three different Fab-peptide complexes //J.Mol.Biol., 1993, v. 234, p. 1098-1118

130. Scott, J. K. and Smith, G. P. Searching for peptide ligands with an epitope library // Science, 1990, v. 249, p. 386-390

131. Sedmark G.G., Grossberg S.E. A rapid, sensitive and versatile assay for protein using Coomassiebrilliant blue G-250//anal. Biochem., 1977, v.79, p. 544-552

132. Sela, M. Antigenicity: some molecular aspects // Science, 1969, v. 166, p. 1365-1374

133. Selby, M.J., Glazer, E., Masiarz, F., and Houghton, M. Complex processing and protein: protein interactions in the E2: NS2 region of HCV//Virology, 1994, v. 204, p. 114-122

134. Selleck S.B. Proteoglycans and pattern formation // Trends in Genetiks, 2000, v.16, p.206-212

135. Sheshberadaran, H. and Payne, L. G. Protein footprinting method for studying antigen-antibody interactions and epitope mapping // Methods Enzymol., 1989, v. 178, p. 746-764

136. Shimizu, Y. K., Hijikata, M., Iwamoto, A., Alter, H. J., Purcell, R. H., and Yoshikura, H. Neutralizing antibodies against hepatitis С virus and the emergence of neutralization escape mutant viruses // J Virol., 1994, v. 68, p. 1494-1500

137. Shukla, D. D., Hoyne, P. A., and Ward, C. W. Evaluation of complete genome sequences and sequences of individual gene products for the classification of hepatitis С viruses // Arch.Virol., 1995, v. 140, p. 1747-1761

138. Simmonds, P., Smith, D. В., McOmish, F., Yap, P. L., Kolberg, J., Urdea, M. S., and Holmes, E. C. Identification of genotypes of hepatitis С virus by sequence comparisons in the core, E1 and NS-5 regions //J.Gen.Virol., 1994, v. 75, p. 1053-1061

139. Stanfield, R.L., Takimoto-Kamimura, M., Rini, J. M., Profy, A.T., and Wilson, I.A. Major antigen-induced domain rearrangements in an antibody//Structure, 1993, v. 1, p. 83-93

140. Stanfield, R.L. and Wilson, I.A. Protein-peptide interactions // Curr.Opin.Struct.Biol., 1995, v. 5, p. 103-113

141. Steward J.T. and Yang J.D. Solid phase peptide synthesis -Pierce Chemical Co., Rockford III. -1984

142. Tai, C.L., Chi, W.K., Chen, D.S., and Hwang, L.H. The helicase activity associated with hepatitis С virus nonstructural protein 3 (NS3) // J.Virol., 1996, v. 70, p. 8477-8484

143. Tainer, J. A., Getzoff, E. D., Alexander, H., Houghten, R. A., Olson, A. J., Lerner, R. A., and Hendrickson, W. A. The reactivity of anti-peptide antibodies is a function of the atomic mobility of sites in a protein // Nature, 1984, v. 312, p. 127-134

144. Takikawa S., Ishii K., Aizaki H., Abrignani S., Matsuura Y. and Miyamura T. Cell fusion activity of hepatitis С virus envelope proteins // J.Virol., 2000, v.74, p. 5066-5074

145. Tarn J.P. Immunization with peptide-carrier complexes: traditional and multiple-antigen peptide systems in Peptide antigen: a practical approach IRL Press/ Oxford, UK-1994, p. 83-115

146. Tanji, Y, Hijikata, M, Satoh, S, Kaneko, T, and Shimotohno, K. Hepatitis С virus-encoded nonstructural protein NS4A has versatile functions in viral protein processing // J Virol., 1995, v. 69, p. 1575-1581

147. Taylor, D. R, Shi, S. T, Romano, P. R, Barber, G. N, and Lai, M. M. Inhibition of the interferon-inducible protein kinase PKR by HCV E2 protein II Science, 1999, v. 285, p. 107-110

148. Tedeschi, V., Akatsuka, T, Shih, J. W, Battegay, M, and Feinstone, S. M. A specific antibody response to HCV E2 elicited in mice by intramuscular inoculation of plasmid DNA containing coding sequences for Е27/ Hepatology, 1997, v. 25, p. 459-462

149. Thomssen R, Bonk S, Propfe C, Heermann KH, Kochel HG, Uy A. Association of hepatitis Сvirus in human sera with beta-lipoprotein // Med. Microbiol. Immunol, 1992; v.181, p. 293-300

150. Tomei, L, Failla, C, Santolini, E, De Francesco, R, and La Monica, N. NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis С virus polyprotein // J.Virol, 1993, v. 67, p. 4017-4026

151. Valero, M. L, Camarero, J. A, Haack, T, Mateu, M. G, Domingo, E, Giralt, E, and Andreu, D. Native-like cyclic peptide models of a viral antigenic site// finding a balance between rigidity and flexibility//J.Mol.Recognit, 2000, v. 13, p. 5-13

152. Van Dam G.J, Verheul A.F, Zigterman G.J, Reuver M.J. and Snippe H. Estimation of the avidity of antibodies in polyclonal antisera against Streptococcus pneumoniae type 3 by inhibition ELISA // Molecular Immunology, 1989, v.26, p.269-274

153. Van Doom L.J. Molecular biology of the hepatitis С virus // Journal of Med. Virol, 1994, v.43, p. 345-356

154. Van Regenmortel M.H. Molecular dissection of protein antigens and the prediction of epitope in Synthetic peptides as antigens. Elsevier Science Amsterdam, Netherlands, 1999, p. 1-78

155. Van Regenmortel M.H. Peptide immunoassays in Synthetic peptides as antigens. Elsevier Science Amsterdam, Netherlands, 1999, p. 175-214

156. Vijayakrishnan, L., Manivel, V., and Rao, К. V. В cell responses to a peptide epitope. VI. The kinetics of antigen recognition modulates В cell-mediated recruitment of T helper subsets // J.Immunol., 1998, v. 161, p. 4661-4670

157. Walter, G. Production and use of antibodies against synthetic peptides // J.Immunol.Methods, 1986, v. 88, p. 149-161

158. Welling, G. W., Weijer, W. J., van Der, Z. R., and Welling-Wester, S. Prediction of sequential antigenic regions in proteins // FEBS Lett., 1985, v. 188, p. 215-218

159. Williams S.C., Badley R.A., Davis P.J., Puijk W.C., Meloen R.H. Identification of epitopes within beta lactoglobulin recognized by polyclonal antibodies using phage display and PEPSCAN II J. Immunol. Meth., 1998, v. 213, p.1-17

160. Worthington J. and Morgan K. Epitope mapping using synthetic peptides in: Peptide antigen: a practical approach IRL Press Oxford, UK-1994, p. 181-217

161. Wright M.D. and Tomlinson M.G. The ins and outs of the transmembrane 4 superfamily // Immunology Today, 1994, v. 15, p.588-594

162. Wunschmann S., Medh L.D., Klinzmann D., Schmidt W. N., Stapleton J.T. Characterization of hepatitis С virus (HCV) and HCV E2 interaction with CD81 and the low-density lipoprotein receptor // J. Virol., 2000, v.74, p. 10055-10062

163. Wyatt, R. and Sodroski, J. The HIV-1 envelope glycoproteins: fusogens, antigens, and immunogens//Science, 1998, v. 280, p. 1884-1888

164. Yagnik A.T., Lahm A., Meola A., Roccasecca R.M., Ercole B.B., Nicosia A and Tramontano A. A model for the hepatitis С virus envelope glycoprotein E2II Proteins, 2000, v.40, p. 355-366

165. Yanagi, M., St Claire, M., Shapiro, M., Emerson, S. U., Purcell, R. H., and Bukh, J. Transcripts of a chimeric cDNA clone of hepatitis С virus genotype 1b are infectious in vivo // Virology, 1998, v. 244, p. 161-172

166. Zhang, Z. X., Sonnerborg, A., and Sallberg, M. Antigenic structure of the hepatitis С virus envelope 2 protein // Clin.Exp.lmmunol., 1994, v. 98, p. 382-387

167. Zibert, A., Schreier, E., and Roggendorf, M. Antibodies in human sera specific to hypervariable region 1 of hepatitis С virus can block viral attachment II Virology, 1995, v. 208, p. 653-661

168. Zibert, A., Kraas, W., Meisel, H., Jung, G., and Roggendorf, M. Epitope mapping of antibodies directed against hypervariable region 1 in acute self-limiting and chronic infections due to hepatitis С virus//J.Virol., 1997, v. 71, p. 4123-4127