Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммуногенность субъединичных липосомальных и эмульсионно-масляных вакцин против ньюкаслской болезни птиц

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Седых, Олег Геннадьевич

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Цель и задачи исследования.

1.2. Научная новизна.

1.3. Практическая значимость.

1.4. Апробация результатов работы.

1.5. Публикации.

1.6. Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:.

1.7. Объем и структура диссертации.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Актуальность НБ.

2.2. Морфология и химический состав ВНБ.

2.3. Эпизоотология.

2.4. Вакцинопрофилактика НБ.

2.5. Живые вакцины.

2.5.1. Преимущества и недостатки живых вакцин.

2.6. Инактивированные вакцины.

2.6.1. Преимущества и недостатки инактивированных вакцин.

2.7. Субъединичные вакцины.

2.7.1. Преимущества и недостатки субъединичных вакцин.

2.7.2. Использование липосом для конструирования вакцин.

2.7.3. Масляные адъюванты.

2.7.4. Методы выделения антигенов с помощью детергентов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммуногенность субъединичных липосомальных и эмульсионно-масляных вакцин против ньюкаслской болезни птиц"

Ньюкаслская болезнь (НБ) - высококонтагиозная болезнь в основном кур и индеек. НБ протекает в виде эпизоотий, энзоотий и скрытого вирусоносительства, сопровождается поражением респираторного и желудочно-кишечного трактов. При острой форме заболеваемость достигает 100 %, а яйценоскость снижается до 45 % - 60 %. Эта болезнь - одна из самых массовых инфекций, трудно поддающихся контролю. Даже тотальная вакцинация против НБ не позволяет избавиться от нее.

По данным Международного эпизоотического бюро в 1998 году в мире было зарегистрировано 2385 неблагополучных по НБ пунктов. Причем, на некоторых континентах вновь начала прослеживаться тенденция их увеличения. Так, в Европе после крупной эпизоотии НБ в 1993-1994 гг. (390 неблагополучных пунктов только в Германии) в 1996 году было зафиксировано 69 случаев возникновения НБ, а в 1997 уже 79. В РФ в 1996-1998 гг. было установлено всего лишь 190 пунктов, где заболевание проявлялось клинически. Однако, заметно увеличилось количество хозяйств, где НБ протекала на привитом поголовье без каких-либо симптомов и характеризовалась только появлением чрезвычайно высоких титров специфических антител, снижением сохранности и продуктивности птицы.

По мнению ряда отечественных и зарубежных исследователей профилактику НБ целесообразно осуществлять с помощью сочетанного применения живых и инактивированных, субъединичных вакцин, чем достигается создание более напряженного иммунитета.

Анализируя современные тенденции в разработке противовирусных вакцин, можно говорить о перспективности применения в качестве V антигенного носителя гибридизированных вирусных частиц, также отмечаются успехи в разработке вакцин с применением отдельных пептидов, несущих антигенные участки, ответственные за развитие протективного иммунитета [61].

В настоящее время многие исследователи также говорят о эффективности применения антигенных субъединичных вакцин в защите против НБ [65], [67]. Готовят данные вакцины из поверхностных протективных белков (иммуногенов) путем разрушения вируса или из белков, синтезированных в прокариотических или эукариотических системах генно-инженерными методами [23].

Преимуществом химических вакцин является их потенциальная J нереактогенность и безвредность в отличие от живых или убитых вакцин, у которых сохраняется носитель генетической информации -РНК или ДНК - и имеется опасность реверсии к дикому типу в случае использования.

В последнее время большое внимание уделяется использованию в качестве иммуноадъювантов нетоксичных биодеградируемых липидных ^ везикул - липосом, которые потенцируют активность включенных в их состав антигенов. Таким путем получены вакцины против синдрома снижения яйценоскости, болезни Марека, субъединичная вакцина ^ против герпес-симплекс. Использование липосом позволяет реализовать такое присущее им свойство, как способность предохранять инкапсулированные антигены от разрушения в средах различного ионного состава, а близкое сходство с плазматическими мембранами позволяет посредством их осуществлять транспорт антигенов к соответствующим иммунокомпетентным клеткам. В нашей стране и за рубежом имеется ряд патентных работ в этой области. Однако имеются сообщения о низкой иммуногенности вакцинных препаратов, полученных на основе липосом [22].

В доступной литературе встречаются также сведения о конструировании субъединичных вакцин против гриппа птиц на основе масляного адъюванта. Вышеизложенное, явилось основанием для

Общая характеристика работы8 проведения исследований по конструированию субъединичных вакцин с применением липосом и масляных адъювантов.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Седых, Олег Геннадьевич

5. ВЫВОДЫ

1. Разработаны методы конструирования и изготовления субъединичных вакцин против НБ на основе липосом и в виде водно-масляной эмульсии, включающие очистку вирионов дифференциальным центрифугированием, у^солюбилизацию облочечных бежов октил-/!Ш-глюкопиранозидом, их включение в состав липосом или эмульгирование с адъювантом на основе масла МЦ и эмульгатора 139.

2. Получены пероксидазные конъюгаты иммуноглобулинов кроликов против IgG и IgA кур. Чувствительность ИФА на основе полученных конъюгатов в два раза превышала чувствительность РЗГА при детекции специфических антител к ВНБ в сыворотке крови кур.

3. Двукратная внутримышечная иммунизация эмульсионной субъединичной вакциной против НБ в дозе 30-60 мкг/голову индуцирует синтез вирусоспецифических антител (IgG, IgA) в сыворотках крови и носоглоточных смывах, а также антигемагглютининов в титрах, сопоставимых с таковыми после иммунизации живой вакциной и обеспечивала 100 %-ную защиту от вирулентного ВНБ.

4. Двукратная внутримышечная иммунизация препаратом белков ВНБ в составе липосом в дозе 120 мкг бежа/гол обеспечивала защиту 71.4 % цыплят, а интраназальное двукратное введение оболочечных бежов ВНБ в составе липосом в дозах 30-120 мкг бежа/голову не индуцировало достаточного титра вирусоспецифических антител способных обеспечить защиту от НБ.

5. Иммуный ответ на прививку субъединичной вакциной на основе водно-масляной эмульсии против ньюкаслской болезни вырабатывался к оболочечным бежам HN, F0 и составляющим его полипептидам Fj и F2 вируса НБ, а также к М -белку.

6. Преимущество субъединичной вакцины перед цельновирионной (живой или инактивированной) заключается в отсутствии реактогенности за счет исключения балластных белков.

Практические предложения И5

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны и утверждены директором ВНИИВВиМ методические указания по изготовлению и контролю лабораторных образцов субьединичной масляно-эмульгированной вакцины против ньюкаслской болезни.

Указанная вакцина не обладает реактогенностью и может быть использована для первичной иммунизации цыплят против ньюкаслской болезни и создания более высокого и равномерного гуморального иммуннитета, и последующей прививки живой вакциной.

Получены пероксидазные конъюгаты иммуноглобулинов кроликов против IgG и IgA кур и на их основе изучен иммунный ответ цыплят на введение препаратов субъединичных вакцин.

Проведенная работа по получению субъединичных вакцин против НБ и исследованию их иммуногенности может служить основой для создания субъединичной вакцины против гриппа А птиц.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Седых, Олег Геннадьевич, Покров

1. Анджапаридзе О.Г., Торчилин В.П., Мажуль JI.A. Защитное действие виросом, содержащих антигены вируса гриппа, при интраназальном способе введения // Вопр. вирусол.- 1987.- №1. С. 112-114.

2. Барсуков JI. И. Липосомы // Соросовский образовательный журн.- 1998. -№ 10.-С. 2-9.

3. Барханов С.А., Мажуль JI.A., Торчилин В.П. Протективное действие включенных в липосомы поверхностных антигенов вируса гриппа при различных способах иммунизации // Вопр. вирусол.- 1998. № 2/4.- С. 151-153.

4. Белезин С.Н., Парфёнов Г.С. Эмульсии и пены /Основы физической и коллоидной химии.-2-изд. М., 1959.- 204 с.

5. Березин В.Э., Исаева Е. С., Артамонов А.Ф. Получение очищенных гликопротеиодов вируса гриппа и исследование их антигенной и иммуногенной активности//Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1983.-Т. 6.- С. 81-88.

6. Болотников И.А. Иммунопрофилактика инфекционных болезней птиц.-М.: Россельхозиздат, 1982.- С. 127-130.

7. Борисович Ю.Ф., Кирилов JT. В. Ветеринарные препараты: Справочник/ Под редакцией Осидзе Д. Ф. М.: Колос, 1981.- С. 127-132.

8. Воробьев А. А. Основные итоги и перспективы разработки химических вакцин//Вестн. АМН СССР.- 1980.- №5.- С. 81-90.

9. Воробьев А.А., Васильев Н.Н. Адъюванты,- М.: Медицина,-1969.- 206 с.

10. Езепчук Ю. В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий.- М.: Наука, 1977.-213 с.

11. Жданов В. М. Проблемы гриппа и генная инженерия//Молекуляр. генетика, микробиология и вирусология.- 1984,- № 7.- С. 3-6.

12. Закстельская И .Я., Иванова В.Т., Молибог Е.В. Электрофоретическая характеристика белков и препаративное получение нейраминидазы штамма А/индюк/Висконсин/66 Hav 6N2 вируса гриппа птиц//Вопр. вирусологии.- 1977.- .№ 5.- с. 551-557.

13. Ишбаева Р.И., Гуляко А.А., Симонов А.Н. Повышение иммуногенности гемагглютинина вируса гриппа при его включении в липосомы// Вопр. вирусол.- 1989. № 2/4.- С. 237-239.

14. Клейтон В. Эмульсии. Их теория и техническое применение.- М., 1950.254 с.

15. Лукьянченко А.В. Эмульгированная вакцина против пастереллеза свиней: Автореф.дисс.канд.вет.наук.- М., 1969.- 20 с.

16. Лященко В.А., Воробьев А.А. Молекулярные основы иммуногенности антигенов. М.: Медицина, 1982.- 269 с.

17. Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. М., 1986.- 231 с.

18. Мертвецов Н.П., Беклемишев А.Б., Савич И.М. Современные подходы к конструированию молекулярных вакцин.- Новосибирск: Наука, 1987.210 с.

19. Методические указания по определению биологической активности вирусвакцины против ньюкаслской болезни птиц», утвержденным ГУВ Минсельхоза СССР 11.07.1980 г., N 115-6.

20. Миллер Г.Г., Березин В.Е., Зайдес В.М. Ультраструктурная организация липосом и изолированных гликопротеидов оболочечных вирусов, полученных с использованием неионного детергента МЭСК // Вопр. вирусол.- 1985.-№ 3. -С. 313-321.

21. Норкина С.Н. Вакцина против инфекционной бурсальной болезни из штамма «Винтерфилд 2512»: Автореф.дисс.канд.биол.наук М., 2002.- 25 с.

22. Орлянкин Б. Г. Противовирусные вакцины третьего поколения// Вестник РАСХН.- 1998.- №5.- с. 74-76.

23. Особо опасные болезни животных: Справочник/ Бакулов И.А., Котляров В.М., Власова Т.А., Терновая С.Ф., Книзе А.В., Хухоров И.Ю., Дмитренко Н.В.- Покров, ВНИИВВиМ.- 2002.- 159 с.

24. Пасынский А.Г. Коллоидная химия.- М.: Высшая школа, 1968.- 268 с.

25. Петрова И.Г., Слепушкин В. А., Букринская А. Г. Стимулирующее действие липосом на экспериментальную гриппозную инфекцию // Вопр. вирусол.- 1988.- № 6.- С. 662-663.

26. Савич И. М., Герасимова Л. М., Мертвецов Н. П. Пептидное картирование мажорных белков 2 штаммов вируса гриппа//Вопр. вирусологии.- 1985.- Т. 30, № 1.- С. 27-32.

27. Сафонов Г. А., Разработка и усовершенствование средств диагностики и специфической профилактики ньюкаслской болезни и гриппа птиц: Дисс.канд.биол.наук.- Покров.- 1984. С. 25-54.

28. Сухинин В.П., Зарубаев В.В., Платонов В.Г. Влияние "липосомального бета-каротина на экспериментальную летальную гриппозную инфекцию// Вопр. вирусол.- 1999.- № 4.- С. 163-167.

29. Сюрин В.Н., Самуйленко А .Я., Соловьев Б. В. Вирусные болезни животных. М.: ВНИТИБП, 1998.- С. 214-233.

30. Сюрин В.Н., Фомина Н.В. Частная ветеринарная вирусология: Справочная книга.-М.: Колос, 1979.- 472 с.

31. Текерлеков П., Николова Е., Колева П. Испытание болгарских масляных адъювантов для противоящурных вакцин//Матер.семинара спец. Стран-чл. СЭВ. Владимир, 1990. - С.39-40.

32. Харитоненков И. Г., Мукажанова Г. Н. Использование препаративного электрофореза для изоляции легкой цепи гемагглютинина вируса гриппа//Вопр. вирусологии.- 1982.- Т. 27, № 2.- С. 181-184.

33. Харитоненков И. Г., Ярославцева Н. Г., Исаева Е. И. Липосомы в биологических системах / Под ред. Г. Грегориадиса, А. Аллисона: Пер. с англ.-М, 1983.- С.10-98.

34. Харитоненков И.Г., Закомырдин Ю.А., Григорьев В.Б. Солюбилизация поверхностных гликопротеидов миксовирусов с помощью неионного де-тергента октилглюкозида//Вопр. вирусологии.- 1982.- Т. 27, № 3 С. 358-362.

35. Шерман Ф. Эмульсии.- Л.: Химия, 1972. 448 с.

36. Якубов Л.А., Савич И.М., Беклемишев А.Б. Очистка нейраминидазы вируса гриппа на иммуносорбенте//Биохимия.- 1984.- Т.49, вып. 10.-С.1588-1593.

37. A comparison of commercially available adjuvants for use in research/ Bennett В., Check I.J., Olsen M.R., Hunter R.L //J. Immun. Meth.- 1992.-V. 153.-P. 31-40.

38. Adam K.H., Strohmaier K. Isolation of the coat protein of foot-and-mouth disease virus and analysis of the composition and N-terminal endgroups//Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1974.- V. 61, №1.- P. 185192.

39. Ahlers C., Huttner K., Pfeiffer D. Comparison between a live and an inactivated vaccine against Newcastle disease in village chickens// Trop. Anim. Health. Prod.- 1999.- V.31,№3.- P. 167-174.

40. Alexander D.J., Newcastle Disease and Other Avian Paramyxoviridae infections/Diseases of Poultry.- 1997.- P.5-21.

41. Allan W.H., Lancaster J.E., Toth B. Newcastle disease vaccines their production and use// FAO Anim.- 1978.-P.30 - 32.

42. Allison A. C., Gregonadis G. Liposomes as immunological adjuvants // Nature.- 1974.- V.252.- P. 252.

43. Almeida J. D., Brand С. M., Edwards D. C. New immunological adjuvants.1.ncet.- 1975.- V.2, Р.899 901.

44. Almeida J.D., Brand C.M., Edwards D. C. Formation of virosomes from influenza subunits and liposomes // Lancet. 1975.- V.2.- P. 899-901.

45. Ambrosch F., Wiedermann G., Jonas S. Immunogenicity and protectivity of a new liposomal hepatitis A vaccine // Vaccine. 1997.- V.15.- P. 1209-1213.

46. Asano Т., Kleinerman E. S. Liposome-encapsulated MTP-PE: a novel biologic agent for cancer therapy // J. Immunother.- 1993.- V. 14.- P.286-292.

47. Bangham A. D., Home R. W. Negative staining of phospholip-idis and their structured modification by surface agents as observed in the electron microscope //J. Mol. Biol.- 1964.- V.8.- P. 660-668.

48. Becht H., Rott B. Purification of influenza virus hemagglutinin by affinity chro-matography// Med. Microbiol. Immunol.- 1972.- V.158, №2.- P. 67-70.

49. Bokhout B.A., van Gaalen C., van der Heijden Ph. J. A selected water-in-oil emulsion: composition and usefulness as an immunological adjuvants// Vet. Immunol. Immunopathol. -1981. V.2. - P. 491 - 500.

50. Borland L.J., Allan W.H. Laboratory tests for comparing live lentogenic Newcastle disease vaccines// Avian. Pathol.- 1980.- V.9.- P.45-59.

51. Bosch F. X., Mayer A., Hang R. Т. C. Simple and rapid separation of ortho-and pa-ramyxovirus glycoproteins//Med. Mikrobiol. and ImmunoL- 1980.-V. 168, №4.-P. 249-259.

52. Bottex C., Bienvenu P., Fontanges B. Isolement des antigenes de surface de My-xovirus influenzae par chromatographic d'affinite// C.R.Acad. Sci.1977.- V.284, ser. D, №20.- P. 2059-2062.

53. Box P.G., Furminger I.G.S., Robertson W.W., Warden D. The effect of Marek's disease vaccination on the immunisation of day-old chicks against Newcastle disease, using B1 and oil emulsion vaccine// Avian. Pathol.-1976.-V.5.- P.299-305.

54. Bradford H.A. A rapid and sensitive method for the quantitaition of microgramme quantity of protein utilizing principle of proein binding //Analit.Biochem.- 1976.- V.72, №2.- P.248-254.

55. Brady J.N., Consiglis R.A. Chromatographic separation of the polyoma virus protein and renaturation of the isolated VPi major capsid protein//J. Virol.1978.- V.27, №2.- P. 436-442.

56. Brown F. Recent progress in antiviral vaccines //Brit. Med. Bull.- 1985,-V.41, № 1.- P.56-58.

57. Brunius G., Holmquist L. Desorption of neuraminidase activity from a-Nacylne-uraminic acid-Sepharose carrying specifically bound influenza virus// FEMS. Microbiol. Lett.- 1980.- V.9, №1.- P. 57-60.

58. Bucher D. J., Li S. S.-L. Chromatographic separation and structural analysis of Heg-1 hemagglutinin//The Influenza Virus Hemagglutinin Symp.: Baden near Vienna, 1977.-Wien; N. Y., 1977.-P. 203-211.V

59. Cajavec S., Pokric В., Nemarnik D. New efficient subunit Newcastle disease virus vaccine//Paraxis veterinaria.- 1994.- V.42, №3.- P.143-155.

60. Cajavec. S., Bidin. Z., Pokric. B. Tween 80-solubilized Newcastle disease virus prepared as water-in-oil-in-water vaccine// Avian Disease.- 1996.-V.40.- P.193-201.

61. Chromatographic isolation of the hemagglutinin polypeptides from influenza virus vaccine and determination of their aminoterminal sequences/ Bucher D.J., Li S.S-L., Kehoe J. M., Kilbourne E. D.//Proc.Nat. Acad. Sci. USA.-1976.-V.73,№l.-P.238-242.

62. Clack R., Aflschler R, Finkel B. Immunogenicity of new virosorne influenza vaccine in elderly people // Lancet.- 1994.- V. 344.- P. 160-163.

63. Copland John W. Newcastle Disease in Poultry: A New Food Pellet Vaccine/ Canberra, ACIAR.- № 5.- P.l 19.

64. Cross G.M. Newcastle disease-vaccine production// D.J. Alexander (ed.). Newcastle Disease.- 1988.- Kluwer Acidemic Publishers, Boston.- P. 333346.

65. Cryt S.J., Que K., Gluck R. Virosome vaccine antigen delivery system docs not stimulate an antiphospholipid antibody response in humans//Vaccine.-1996.-V.14.-P. 1381-1383.

66. Cuatreeasas P., HHano G. Purification of neuraminidases from Vibrio cholerae, Clostridium Perfringens and Influenza virus by affinity chromatography// Bio-chem. Biophys. Res. Communs.- 1971.-V.44, №1.- P. 178-184.

67. Dose-response effects of inactivated Newcastle disease vaccines: influence of serologic assay, time after vaccination, and type of chickens/ Maas R.A., Oei H.L., Venema-Kemper S., Koch G., Bongers J.// Avian. Dis.- 1999.-V.43, №4.- P.670-677.

68. Edison C.S., Kleven S.H., Viitgas P. Efficacy of intra-tracheal administration of ND vaccine in day old chicks// Poult. Sci.- 1976.- V.55.- P. 1252-1267.

69. Effect of Lentinan and Mannan on phagocytosis of fluorescent latex microbeads by mouse peritoneal macrophages: a flow cyto-metric study/ Abel G., Szollosi J., Chihara G., Fachet J// Int. J. Immunopharmac.- 1989.1. V.ll.- Р. 615-621.

70. Eidson C.S., Thayer S.G. Villegas studies with on inactivated oil emylsion Newcastle disease vaccine in broiler breeders// Poultry Sc.- 1982.- V.61, №7.- P.1309-1313.

71. Elder J.T., Spritz R.A., Weissman S.M. Simian virus 40 as a eukaryotic cloning vehicle //Ann. Rev. Genet.- 1981.- V.15.- P. 295 340.

72. Enhancement of the efficacy of a replication defective adenovirus -vectored vaccine by the additional of oil adjuvants /Ganne V., Eloit M., Laval A., Trouve G.//Vaccine. - 1994.- V.l2. - P. 1190 - 1196.

73. Erickson R.J. Industrial applications of the Bacilli: a review and prospectus // D. Schlessinger Microbiology.- 1976.- Washington.- P.406 419.

74. Ffuangr. Т. C., Wans K., Klenc H. D. Fusion between cell membrane and liposomes containing the glycoproteins of influenza vims // Virology.- 1980. V.104.- P. 294-302.

75. Further studies with on inactivated oil emylsion Newcastle disease vaccine in broiler breeders/ Eidson C.S., Thayer S.G., Villegas P., Kleven S.H. //Poultry. Sc.- 1982.- V.61, №7.- P.1309-1313.

76. Garten W., Kohama T. Klenk H.D. Proteolytic Activation of the Haemagglutination-Neuraminidase of Newcastle Disease Virus Involves Loss of a Glycohthtide// The Journal of General Virology.- 1980.- V.51, №1.- P.207-211.

77. Gentry R.F., Braune M.O. Prevention of virus inactivation during drinking water vaccination of poultry// Poult. Sci.- 1972.- V.51.- P.1450-1456.

78. Giambronc J.J. Evaluating Newcastle disease vaccination plans for broilers// Poult. Dig.- 1983.- V.42.- P.280-286.

79. Giambronc J.J. Laboratory evaluation of Newcastle Disease vaccination programs for broiler chickens//Avian Dis.- 1985.- V.29.- P.479-487.

80. Giambronc J.J., Clay R.P. Vaccination of day-old broiler chicks against Newcastle disease and infectious bursal disease using commercial live and /or inactivated vaccines// Avian Dis.- 1986.-V.30, №3.- P.557-561.

81. Gibson R., Leavitt R., Kornfeld S. Synthesis and chimeras of two vesicular stomatits virus glycoprotein genes ezpressed by a vaccinia virus vector// Virology.- 1979.- V.l70.- P.392-407.

82. Gilden R.V., Toni R., Haiison M. Immunochemical studies of the major internal polypeptide of Wooly monkey and Gibbon ape type С viruses//J. Immu-nol.- 1974.-V.l 12, №3.-P. 1250-1254.

83. Gluck R. Adjuvant activity of immunopotentiating reconstituted influenza virosomes (IRIVs)//Vaccine.- 1999.-V.l7.-P. 1782-1787.

84. Gluck R. Immunopotentiating reconstituted influenza virosomes (IRIV) as universal vaccine carriers // Eds L. E. Brown Options for the Control of Influenza III.- 1996,-Beme.- P. 668-676.

85. Goldhaft Т.М. Historical note on tf the La Sota strain of Newcastle disease virus// Anim. J. Yet. Res.- 1980.- V.24.- P.297-301.

86. Good M. F., Pombo D., Lunde M. L. Recombinant human IL-2 overcomes genetic nonresponsiveness to malaria sporozoite peptides: correlation of effect with biologic activity of IL-2// J. Immunol.- 1988.- V. 141, №3,- P. 972-977.

87. Gordon R.F., Jordan F.T. Poultry diseases/ Bailliere Tindall.- 1982.- London

88. Gough R.E., Allan W.H., Nedelciu D. Immune response to monovalent and bivalent Newcastle and infectious bronchitis inactivated vaccines// Avian Disease.- V.6.- P. 131-142.

89. Gregoriades A. Isolation of neuraminidase from the WSN strain of influenza virus//Virology.-1972.-V.49, №l.-P.333-336.

90. Gregoriadis G. Immunological adjuvants: a role for liposomes // Immunol. Today.- 1990.- V.ll.- P. 89-97.

91. Gregoriadis G. The immunological adjuvant and vaccine carrier properties of liposomes//J. Drug Targeting.- 1994.-V. 2- P. 351-356.

92. Gregoriadis G., Davis D., Davies A. Liposomes as immunological adjuvants: antigen incorporation studies // Vaccine. 1987.- V.5.- P. 145-151.

93. Gregoriadis G., Panagiotidi C. Immunoadjuvant action of liposomes: comparison with other adjuvants // Immunol. Lett. 1989.- V.20.- P. 237-240.

94. Gregoriadis G., Wang Z., Barenhoh Y. Liposome-entrapped T-cell peptide provides help for a co-entrapped B-cell peptide to overcome genetic restriction in mice and induce immunological memory // Immunology.-1993.- V.80.-P. 535-540.

95. Hayman M .J., Skehel J .J., Crumpton M.J. Purification of virus glycoproteins by affinity chromatography using Lens culinaris phy to haemagglutinin // FEBS Lett.- 1973.- V.29, №2.- P. 185-188.

96. Heinz F.X., Winker G., Tuma W. Epitope mapping of a flavivirus glycoprotein//J.Cell.Biochem.- 1986.- №10D.- P.267.

97. Higgins D.A. Nine disease outbreaks associated with myxoviruses among ducks in Hons Kong// Trop. Anim. Health. Prod.- 1971.- V.3.- p.232-240

98. Hilleman M.R. Critical appraisal of emulsified oil adjuvants applied to viral vaccines//Prog.Med. Virol.- 1966.- V.8.- P.131-182.

99. Hitchner S.B., Johnson E.P. A vims of low virulence for immunizing fowls against Newcastle disease (avian pneumoencephalitis)// Vet. Med.- 1948.-V.43.- P.525-530.

100. Hofstad M.S. Immunization Of Chickens Against Newcastle Disease By Formalin-Inactivated Vaccine// Anim. J. Vet. Res.- 1953.- V.14.- P.586-589.

101. Holyr B. R., Hats C., Schmidt-Sissolak D. Immunogenicity and adverse effects of inactivated virosome versus alum-adsorbed hepatitis A vaccine: a randomized controlled trial // Vaccine.- 1996.- V.14.- P. 982-986.

102. Iimuma Н., Nerome К., Yoshioka Y. Characteristics ofcytotoxic T lymphocytes directed to influenza viros haemagglutinin elicited by immunization with muramyldipeptide-influenza liposome vaccine // Scand. J. Immunol.- 1995.- V.41.-P. 1-10.

103. Isfort R.J.,Stringer R.A.,Kung H.J. Synthesis,processing and secretion of the Marek's disease herpesvirus A antigen glycoprotein// J.Virol.- 1986-V.57, №2.- P.464-47.4

104. Itamura S., Linuma H., Shida H. Characterisation of antibody and cytotoxic T lymphocite responses of human influenza virus H3 haemagglutinin expressed from the haemagglutinin locus of vaccinia virus// J.Gen.Virol.-1990.- V.71, №12.- P.2859-2865.

105. Ivanic S. Growth, purification and characterization of Semliki Forest virus in Ehrlich Ascites tumor cell suspensions//Arch. Virol.- 1976.- V. 52, №1.- P. 297-306.

106. Ivanic S. Identification of two envelope proteins of Semliki Forest Virus before-and after treatment with triton X-100//Arch. Ges. Virusforsch.- 1974.-V. 44, №2.-P. 164-167.

107. Johnson D.C., Wttels A. F., Spear P. The virosomes containing herpes simplex virus type 1 glycoproteins and evidence for fusion // J. Virol. -,1984. V.52.- P. 238-247.

108. Jolivet M., Sache E., Audibert F. Biological studies of lipophilic MDP-derivatives incorporated in liposomes // Immunol Commun.-1981.- №10.-V.6.- P. 511-522.

109. Kady M.F., Madbouiy H.M. Antigenic vaiation among some local Newcastle disease virus isolates// Alex. J. Vet. Sci.- 1997.- V.13, №7.- P.913.

110. Kanaseki Т., Kawasaki K., Murata M. Structural features of membrane fusion between influenza virus and liposome as revealed by quick-freezing electron microscopy //Cell Biol.- 1997.- V.137.- P. 1041-1056.

111. Kleven S.H. A comparison of various routes of Newcastle disease vaccination at one day of age// Poult. Sci.- 1979.- V.55.- P. 1778-1787.

112. Kolbl S.A. Efficacy of killed vaccines against Newcastle disease. Aluminum hydroxide vaccine// Ticrw-z Mnalssch.- 1981.-V.68, №5.- P.149-154.

113. Konno H., Maruo Y., Matin A. F. Effect of liposomal interleukin-2 on ascites-forming rat hepatoma// J. Surg. Oncol.- 1992.- V.51.- P.33-37.

114. Kouwenhoven B. Newcastle disease// McFerran, McNulty M.S. (eds.). Virus Infections of Birds.- 1993.- Amsterdam.- P. 341-361.

115. Lachman L.B., Oywiat В., Rao X. M. Cytokine containing liposomes as vaccine adjuvants // Eur. Cytokine Netw.- 1996.- V.7.- P. 693-698.

116. Laver W.G. Separation of two polypeptide chains from the hemagglutinin subunits. of influenza vims //Virology.- 1971.- V.45, №2.- P. 275 288.

117. Laver W.G. Structural studies on the protein subunits from three strains of influenza virus//J. Mol. Biol.- 1964.- V.9, № 1.- P. 109 124.

118. Laver W.G., Webster R.G. Preparation and immunogenicity of an influenza vims hemagglutinin and neuraminidase subunit vaccine// Virology.- 1976.-V.69, №2.- P. 511-522.

119. Laver W.G., Webster R.G. Studies on the origin of pandemic influenza. III. Evidence implicating duck and equine influenza viruses as- possible progenitors, of the Hong Kong strain of human influenzen // Virology.-1973.- V.51, №2.- P. 383-391.

120. Loeffler С. M., Piatt J. L., Anderson P. M. Anti-tumor effects of IL-2 liposomes and anti-CD3 stimulated T cells against murine MCA-38 hepatic metastases // Cancer Res.- 1991.- V. 51.- P.2127-2132.

121. Lori W., McGinnes Trudy G. Morrison The Role of the Individual Cysteine Residues in the Formation of the Mature, Antigenic HN Protein of Newcastle Disease Vims // Virology.-1994.-V. 200, № 2.-P. 470-483.

122. Loutan L., Bovier P., Althaus B. Inactivated virosome hepatitis A vaccine // Lancet.- 1994.- V.343.- P.322 324.

123. Manal A. A., Elkady M.F., Gohary A.E. Investigation on recent field outbreaks of Newcastle diseas// Bci.Suef.Vet. Mcci. Res.- 1997.-V.7, №1,-P.191- 193.

124. Manal A. Afifi, Sahara Zou-el-Fakar, A. Elkady Immune response of chickens vaccinated with newcastle disease vaccines using different vaccination programs// Vet.Med.J.- 1998.- V.46, №2,- P.209-222.

125. Martinon F., Krishnan S., Lenten G. Induction of virus-specific-cytotoxic T lymphocytes in vivo by liposome-entrapped mRNA // Eur. J. Immunol. -1993.-V.23.-P. 1719-1722.

126. Mbawuike I. N., Wyde P. R., Anderson P. M. Enhancement of the protective efficacy of inactivated influenza A virus vaccine in aged mice by IL-2 liposomes // Vaccine.- 1990.- V. 8.- P. 347-352.

127. Mengiardi В., Berger R., Just M. Virosomes as carriers for combined vaccines//Ibid.- 1995.- V.13.-P. 1306-1315.

128. Nagai Y., Klenk H.D., Rott R. Proteolytic cleavage of the viral glicoproteins and its significance for the virulence of Newcastle disease virus// Virology.-1976.- V.72.- P.494-508.

129. Nerome K., Yoshioka Y., Ishida M. Development of a new type of influenza subunit vaccine made by muramyldipeptide-liposome: enhancement of humoral and cellular immune responses //Vaccine.- 1990.- V.8.- P. 503-509.

130. Nussbaum 0., Lapidot M., Loyter A. Reconstitution of functional influenza vims envelopes and fusion with membranes and liposomes lacking vims receptors // J. Virol.- 1987.- V.61.- P. 2245-2252.

131. Oxford J. S., Hockley D., Heath T. D. The interaction of influenza vims haemagglutinin with phospholipid vesicles morphological and immunological studies // J. Gen. Virol.- 1981.- V.52.- P. 329-343.

132. Parede L., Young P.L. The pathogenesis of velogenic Newcastle disease vims infection of chickens of different ages and different levels of immunity// Avian. Dis.- 1990.- V.34.- P.803-808.

133. Pokric В., Juros S., Hlavaty H. Determination of size antigenic fragments after treatment of enveloped viruses with non-ionic detergents// Biologicals.-1993.- V.21.- P.157-162.

134. Polakova K., Russ G., Styk B. Glicoproteid antigen HA1 fnd HA3 Hemagglutinin influenza 1 vims. Gelfiltration.//Acta. Virol.- 1978.- V.22.- P. 362-370.

135. Poltl-Frank F., Zurbriggen R., HelgA. Use of reconstituted influenza virus virosomes as an immunopotentiating delivery system for a peptide-based vaccine // Clin. Exp. Immunol.- 1999.- V.117.- P. 496-50.3

136. Powers D. C., Hanscome P. J., Pietrobon P. J. In previously immunised elderly adults inactivated influenza A (H1N1) virus vaccines induce poor antibody responses that are not enhanced by liposome adjuvant // Vaccine.-1995.-V. 13.-P. 1330-1335.

137. Powers D.C. Summary of a clinical trial with liposome-adjuvanted influenza A vims vaccine in elderly adults // Mech. Ageing Develop. -1997.- V.93.- P. 179-188.

138. Proceedings of the Newcastle disease vims infection/ Guittet M., Le Coq H., Morin M., Jest Bennejean V.//Xth World Poultry Association Congress.-1993.-Sydney.-P. 175-178.

139. Purification of influenza vims glycoproteins for the preparation and standardization of immunological potency testing reagents/ Phelan M.A., Mayner R.E., Bucher D F., Ennis F.A. //Biol. Stand.- 1980.- V.8, №3.- P. 233-234.

140. Qureshi A.A., Trent D.W. Group В arbovims structural and nonstmctural antigens//Infec. and Immun.- 1973.- V.8, №6.- P. 993-999.

141. Reeve P., Alexander D.J., Allan W.H. Derivation of an isolate of low virulence from the Essex 70 strain of Newcastle disease vims// Vet. Rec.-1974.-V.94.- P.38 -39.

142. Reynolds D.L., Maraga A.D. The Role of Antibodies Specific to Newcastle Disease Vims Polypeptides// Avian disease.- 2000.- V.44.- P. 138-144.

143. Rock D.L., Reed D.E. Subunit vaccine//Veterinary Microbiology.- 1980.-V.5.- P.291-299.

144. Samson A.C.R., Chambers P., Dickinson J.H. Location of post-translation cleavage events within F and HN glycoproteins of Newcastle Disease Vims // General Virology.-1980.-V. 47.-P. 19-27.

145. Scheid A., Choppin P.W. Isolation and purification of the envelope proteinsof newcastle disease vims//J. Virol.-1973.-V.l 1, №2.- P. 263-271.

146. Seto J.T., Becht H., Rott R. Effect of specific antibodies on biological functions of the envelope components of Newcastle disease virus//Virology.-1974.- V.61, №2.- P. 354-360.

147. Siddique M., Sabri M.A., Khan M.Z. Outbreak of Newcastle disease in vacinaicd chickens flocks in and around Faisaiabad//Vet. J.- 1986.- V.I.-P.41-45.

148. Skehel I., Waterfield M.D. Studies on primary structure of the influenza virus hemagglutinin // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1975.- V.72, № p. 93 97.

149. Stohlman S.A., Eyiar O.R., Wisseman C.L. Isolation of the dengue virus envelope glycoprotein from membranes of infected cells by concanavalin A affinity chromatography//.!. Virol.- 1976.- V. 18, №1.- P. 132-140.

150. Stone H. D. Optimization of hidrophile-lipophile balance for improved efficacy of Newcastle disease and avian influenza oil-emulsion vaccines// Avian Dis.- 1988.- V.32.- P. 68-73.

151. Stone H.D. Influence of formulation of the efficacy of experimental oil-emulsion Newcastle disease vaccines// Avian Dis.- 1983.- V.27.- P.688-697.

152. Stone H.D. Newcastle disease oil emulsion vaccines prepared with animal, vegetable and synthetic oils//Avian Diseases.- 1997.- V.41, №3.- p. 591-597.

153. Stones P.B. Self injection of veterinary oil-emulsion vaccines// BMJ.- 1979 V.l.- P. 1627.

154. Strohmeier K., Adam К. H. Comparison of the tryptic peptides of different types of foot-and-mouth disease virus/Ant. Virol. 3 Abstrs.- 1975.- P. 203.

155. Tan L., Weissig V., Georgiadis G. Comparison of the immune response against polio peptides covalently-surface-linked to and internally-entrapped in liposomes // Asian. Pacific. J. allergy immunol.-1991.- V.9, № 1.- P. 25-30.

156. Taubman M. A., Ebersole J. L., Smith D. J. Adjuvants for secretory immune responses //Ann. NY. Acad. Sci.-1983.- V. 409.- P.637-649.

157. The polypeptides of influenza virus. III. Identification of the hemagglutinin, neuraminidase and nucleocapsid proteins/ Haslam E.A., Hampson A.W., Radiskevics J., White D.O. //Virology.- 1970.- V.42, №3.- P. 566 575.

158. Thibodeau L., Naud P., Boudreault A. Genetic Variation Among Influenza Viruses/ New York.-1981.- P.587 600.

159. Thornton D.H. 1988. Quality control of vaccines// J. Alexander (ed.). Newcastle Disease.- 1988.- Kluwer Acidemic Publishers, Boston.- P. 347365.

160. Utterback W.W., Schwartz J.H. Biology of velogenic viscerotropic Newcastle disease // J. Am. Vet.-1991.- V.163.- P.1080-1090.

161. Van Rooyen N. Van Nieuwmegen R. Liposomal vaccine// Ibid.- 1980.- V.9, P. 243 256.

162. Van Rooyen, Van Nieuwmegen R. Liposomes new in vaccination//1.munol. Commun.- 1977.- V. 6, P. 489 498.

163. Vargin V. IGI to test liposome-based Newcastle vaccine// Biotechnol. News.-1988.- V.8, № 1.-P.239.

164. Velinova M., Read N., Kirby C. Morphological observations on the fate of liposomes in the regional lymph nodes after footpad injection into rats // Biochim. Biophys. Acta.- 1996. V.1299, №2.- P. 207-215.

165. Vestergaard B.P., Norrild B. Crossed immunoelectrophoresis of a herpes simplex virus type 1-specific antigen: Immunological and biochemical characterization // Infec. Diseases.- 1978.-V.138, №5.- P. 639 643.

166. Ward C.W., Dopheide A. A. Completion of the amino acid sequence of Hong Kong influenza hemagglutinin heavy chain: sequence of cyanogen bromine fragment CNl//Virology.- 1980.- V.103, №1.- P. 37-53.

167. Webster R.G. Estimation-of the molecular weights of the polypeptide chains from the isolated hemagglutinin and neuraminidase subunits of influenza viru-ses// Virology.- 1970.- V.40, №3.- P. 643-654.

168. Weinberg A., Merigan T.C. Recombinant interleukin 2 as an adjuvant for vaccine-induced protection: immunization of guinea pigs with herpes simplex virus subunit vaccines // J. Immunol.-1988.- V.140, № 1,.- P. 294 -299.

169. Weiner A. L. Liposomes for protein delivery: selecting manufacture and development processes// Immunometods.-1994.-V.4.-P.201-209.

170. Wiley D.C., Skehel J.J. Crystallization and X-ray diffraction studies on theha-emogglutinin glycoprotein from the membrane of influenza virus//Mol. Biol.- 1977,- V.l 12.- P. 343-347.

171. Woodard L.F., Jasman R.L. Stable oil-in-water emulsions preparation and use as vaccine vehicles for lipophilic adjuvants// Vaccine.- 1985.- V.3.-P.137-144.

172. Zhilinskaya I.N., Hamdi E.S., Ivanova N A. Isolation of A2/Singapore/57influenza virus V and antigens by isoelectric focusing //Acta Virol.- 1972 -V.l6, №5.- P. 436-439.

173. ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ

174. УТВЕЖДАЮ: Директорин^гитута, Кбтляров 2002 г.1. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

175. По изготовлению и контролю лабораторных образцов субьединичной масляно-эмульгированной вакцины против ньюкаслской болезни1. Покров 2002 г.

176. ОБОРУДОВАНИЕ, ПЕРЕЧЕНЬ НЕОБХОДИМЫХ ХИМИЧЕСКИХ РЕАКТИВОВ И БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ31. Оборудование

177. ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ (ВНИИВВиМ) АКТ №1. УТВЕРЖДАЮг. Покров

178. О проведении комиссионных испытаний иммуногенности и защитных свойств экспериментальных образцов субъединичной вакцины против ньюкаслской болезни

179. Целью комиссионных испытаний было определить титры вирусоспецифических антител в сыворотке крови и носоглоточных смывах и устойчивость к контрольному заражению цыплят, привитых лабораторными образцами субъединичной вакцины против ньюкаслской болезни.

180. Работу проводили на базе лабораторий "Биохимии".

181. Опыт ставили на интактных цыплятах 28 дневного возраста. Было сформировано семь групп: по шесть голов в первой, пятой и шестой, по семь голов во второй, третьей и четвертой, три в седьмой. Цыплят иммунизировали по схеме, указанной в таблице 1.