Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммунобиотехнологические свойства крови и молока у коз

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Иммунобиотехнологические свойства крови и молока у коз"



На правах рукописи

МАРЗ АНОВА ЛИДИЯ КАПЛАНОВНА

ЙЛА!

Иммунобиотехнологические свойства крови и молока у коз

03.00.23 - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических н»ук

Дубровицы - 2002

Работа выполнена в лаборатории генетики животных отдел» сертификации и экологических исследований в животноводстве Всероссийского государственного научно-исследовательского института

животноводства ( ВИЖ)

Научный руководитель: доктор биологических наук

Букаров Нурмагомед Гаджи кулневнч Научный консультант: кандидат сельскохозяйственных наук

Иолчнев Байдар Садраддннович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Гавриков Александр Михайлович;

кандидат биологических наук Шатай л о Вячеслав Николаевич

Ведущее учреждение: Московская государственная академия ветеринарной

мєд;і:!йньі и биотехнологии К.И. Скрябина

Зашита си г с> ■ на заседании дне; і, государственном н; г

.• V. ■

_ 2002 года, в 10 часов,

../13.01 при Всероссийском і и т; гч животноводства

Адрес института: • 12

і 10С..

С диссер,

>■ ' м:л- л".. к :■■■ он,

■ :: "'ї-"7 Пі'. ■ <С ^

? V титута.

. ■ -О

Автореферат разослан * " 2002 года.

Ученый секретарь диссертационного сої кандидат биологически:

Губанова

з

І. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Тема посвящена вопросам иммунной биотехнологии и генетики животных. Одной из главных проблем генетики сельскохозяйственных животных и связанных с ней разделов биотехнологии является установление генов различных биологически важных признаков. В этой связи открытие большого класса молекулярно-генетических маркеров коренным образом изменило общую ситуацию в исследовании генома животных. При создании маркирующих тест-систем использовались различные методические подходы: иммунологические, химические, биохимические и молекулярные. Благодаря им появился мощный инструмент для описания наследственной изменчивости у домашних животных, контроля происхождения, определения генетических расстояний между различными популяциям и,, оценки аллелофонда у различных видов и лород, установления,,, связи с рядом физиологических и биохимических процессов в организме животных.

Классификация современного набора молекулярио-генетических маркеров условна и сложна, включающая 9 различных типов полиморфных систем крови и молока (Roychoudhury Л.К., Nei М„ 1988; COGNOSAG Workshop Report, 1992; Марзанов Н.С., 1994; Lauvergne J.J. et at., 1996). Множественность аллелей и высокая гстерозиготность, кодоминантнос выражение и стабильность наследования, простота и надежность тестирования, привели к широкому их использованию в качестве генетических маркеров крупного рогатого скота, свиней, лошадей и овец. Однако, несмотря на их очевидные преимущества, молекулярио-генетические маркеры до сих пор не получили массового распространения при исследовании генома коз. До настоящего времени существует необходимость исследования н их использования для решения различных задач в области генетик:? и селекции животиыхО^иуеп Т.О., 1990; Vatikan D.M., Bell К., 1993а,b; Bowen J., 1992a,b,e; INRA Science, 1996; Vaiman D. et al., 1997; Serotec product guide, 1998; Marzanov N.S. et at., 2000).

Диссертационная работа выполнялась в соответствии с тематическим планом научных исследований Всероссийского ГНИИ животноводства.

Цель н задачи исследования. Целью работы являлось исследование крови и молока коз с использованием различных генетических маркеров. В связи с этим решали следующие задачи:

1. Разработать технологию получения диагиостикумов групп крови у коз,

2.Создать банк диагностикумов групп крови для исследования различных пород коз.

3.Дагь характеристику породам коз по частотам встречаемости антигенов, аллелей и генотипов групп крови и полиморфных белков.

4. Определить общность- антигенов групп крови у коз, овец, крупного рогатого скота, яков и верблюдов.

5. Провести анализ с целью выявления кластеров групп крови коз и генетических дистанций у оренбургской, зааиенскойг-герноалтайской пород, з также у

; л",; ;дя

ИДУ'-:: '.V , „,- г; ... Мое.;, . ., , ....

а. А:ЩГ1.[1Г<

помесей Б] (1/2 зааненская х 1/2 горноалтайская) и Рг (3/4 зааненская х 1/4 горноалтайская).

6. Провести анализ связи генотипов полиморфных систем белков молока зааненских коз с сыропри годностью.

Научная новизна и практическая значимость работы, реализация результатов исследований. Впервые выполнены исследования по изучению полиморфных локусов белков (НЬ, с^г-Сп, Щт-Са, р - Сп, к * Сп, (5 - а • Ьа, и систем групп крови у коз. Создан банк диагностикумов по группам крови коз. Проведен популяциоино-генетический анализ по 28 аллелям 13 систем белков и групп крови у различных пород коз. Определена общность антигенов, аллелей и генотипов у различных видов жвачных животных. Выполнен статистический анализ для установления кластеров групп крови и генетических дистанций у коз различной продуктивной направленности. Выявлен ЙЕ) генотип а51 - казеина, связанный с сыропригодносщо молока.

Часть полученных материалов вошла в разработанные ТУ 9389-00300498254-00 "Сыворотки иммуноспецифнчсские для определения групп крови овец и коз", ТУ 9389-001-00498254-00 "Сыворотки иммуноспецифическис для определения групп крови крупного рогатого скота", "Инструкцию по изготовлению и контролю сывороток иммувоспенифических для определения групп кровн овец, коз и крупного рогатого скота" и "Наставление по применению сывороток иммуноспецифических для определения групп кровн овец, коз и крупного рогатого скота", которые утверждены Департаментом животноводства и племенного дела МСХ РФ 03.04.2001 г. и являются основными документами для условий приготовления, хранения н реализации сывороток-реагентов.

Положении,„выносимые на защиту. Создание Банка сывороток - реагентов групп крови коз для изучения различных пород. Вскрытие систем групп кровн, их диагностические возможности для оценки аллелофонда различных пород и помесей коз в условиях Российской Федерации, определение общности антигенов у различных видов жвачных. Выявление связи генотипа ВВ а,» - казеина с сыропрнгодностью молока у коз.

Апробация, работы. Результаты исследований доложены и одобрены па ученых советах Всероссийского ГНИИ животноводства (1996-2002); на научной конференции отделов сертификации и экологических исследований, биотехнологии н лаборатории биохимии (2002); научно - практической конференции: "Проблемы отрасли овцеводства и перспективы ее развития в Среднем Поволжье", Пенза, 2001. Материалы диссертации были представлены на 27 - и 28 - Й Международных конференциях по генетике животных (Миннеаполис, США, 2000; Гетгинген, Германия 2002).

Публикация материалов. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.

Объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, трех глав, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы- Материал изложен на 125 страницах машинописного текста,

содержит 29 таблиц и 4 рисунка. Синеок литературы включает 155 источников, в том числе 97 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалом для изучения служили образцы крови от 5 различных пород к помесей кад (п=б28), овец (п=б03), крупного рогатого скота (п=37), верблюдов (42), а также козье молоко (п=18)< Исследования проводили в течение 1995-2002 гг. по схеме представленной нарис. I.

Создание банка дизгностикумов для выявления эрнтроцитарных антигенов, аллелей, генотипов групп крови у коз. Изучение биохимического полиморфизма белков крови и молока

Модификация постановки реакций гемолиза и агглютинации Оценка аллелофонда у различных популяций коз Определение общности антигенов у различных видов жвачных животных

Кластерный анализ для установления систем групп крови у коз Общая характеристика аллелей различных систем групп крови коз на основе определения достоверности происхождения козлят

Генетические расстояния между различными породами и помесями коз Биотехнологические свойства молока с учетом генотипов по а 5| - казеину

Рис. 1. Общая схема исследований

Полиморфные системы белков молока (a S1 а S2 -, Р *, к - казенны; а -лактальбумин, р - лактоглобулин, иммуноглобулин (Ig)) и крови (трансферркн и гемоглобин) определяли методом вертикального электрофореза на 12% полиакриламидиом геле с использованием различных буферных систем (Глазко В .И., 1985; Иолчиев Б. С., 1993). Гелсвые блоки окрашивали стандартными гистохимическими метизами для выявления белков крови и молока.

Определение групп крови проводили по стандартным методикам, изложенным в «Инструкции по изготовлению и контролю сывороток нммукоспецифических для определения групп крови у коз, шеи, крупного рогатого скота» (Москва, 2001).

Подбор пар донор-рецнпиент проводили при разнице 1-2, а у некоторых в 2-3 антигена. Иммунизацию коз - реципиентов проводили внутримышечно 20 мл цельной крови доноров. Для проведения сравнительной характеристики сывороток-реагентов в реакции гемолиза использовали эритроциты коз, крупного рогатого скота и овец. С целью получения моноспецифических сывороток-реагентов, проведения абсорбций, изготовления суспензий эритроцитов кровь брали во флаконы с консервантом в соотношении 4:1. В качестве консерванта для крови использовали следующий состав: натрий лимоннокислый трехзамешенный - 50 г; натрий хлористый - 9 г; глюкоза — 10 г, стрептомицин - 1 г; дистиллированная вода - 1000 мл.

Генотипы и аллели животных по группам крови устанавливали семейным анализом антигенных факторов, выявленных у родителей и их потомков, а по полиморфным системам белков крови и молока - непосредственно по результатам электрофоретических тестов. Частоты эрнтроцитариых антигенов, аллелей и генотипов определяли путем простого подсчета по формуле выведенной из уравнения Харди-ВаЙнберга (Мащуров A.M. и др., 1998). Кластерный анализ полученных козьих сывороток-реагентов и генетические расстояния (D) между изученными породами рассчитывали по компьютерной программе Stalistica for Windows, Version 5.5a. 1999.

В молоке определяли свертываемость под действием сычужного фермента, содержание жира, белка, лактозы, сухого вещества, сухого остатка обезжиренного молока (СОМО) и казеина. Для изучения особенностей биотехнологичсских свойств молока изготавливали 3 раза творог в течение всего лактационного периода (Кугекев П.В., Барабанщиков Н.В., 1988).

Статистическую обработку полученных результатов проводили по описанным ранее методам (Меркурьева Е.К., 1977; Плохинский H.A., 1978), а также с применением компьютерной программы Statislica for Windows, Version 5.5a. 1999.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Отработка режима типирования эритроцитов крови у коз. В проведенных исследованиях гемолитический и агглютинанионные тесты ставили в пластмассовых микропластинах. В процессе постановки серологических тестов была усовершенствована техника проведения иммунологических реакций, благодаря применению 96 луночных пластмассовых микропластин с плоским дном. Подобный подход позволил сэкономить количество сывороток в 2-4 раза и комплемента в 2 раза. Эффективность микрометода позволяет рекомендовать его применение в повседневной практике генетического анализа по группам крови коз.

3.2. Подбор пар доноров и реципиентов при получении сывороток-реагентов у коз. Исследования проводили на оренбургских козах, аттестованных по 10 системам групп крови крупного рогатого скота. Обычно животных подбирали с разницей в 1-2, а у некоторых пар в 2*3 антигена. Аллой ммунизацию проводили на 6? реципиентах с использованием крови от 37 коз - доноров. Анализ полученных данных показал, что иммунологическая реактивность коз - продуцентов изменяется одинаково в процессе цикла имму-ннзаторных воздействий (табл. I).

1. Рост титра антител в процессе внутримышечной аллонммунизацнн коз-реципиентов

Индивидуальный •номер реципиента Титры антител Различие донора и реципиента по числу антигенов

перед 3 иммунизацией перед 4 иммунизацией Перед 5 иммунизацией Прк взятии крови

9432 1 8 1 32 1:128 1:512 і

9462 I 16 1 64 1:128 1:1024 2

9425 1 16 1 32 1:64 1:2048 2

9408 1 4 1 16 1:32 1:128 0

9426 1 8 1 64 1:512 1:512 1

01923 1 4 1 4 1:16 1:32 0

9408 1 4 1 16 1:32 1:128 0

9412 1 16 1 64 1:64 1:512 2

9469 1 8 1 32 1:128 1:16 0

9461 1 8 1 32 1:512 1:512 2

9463 1 16 1 128 1:512 1:1024 3

9425 1 16 1 64 1:128 1:512 2

9455 1 4 1 16 1:32 1:128 1

Введение реципиентам антигена сопровождалось выраженной иммунологической перестройкой после 1-2 инъекинй продуцированием у них иммунных антител титром 1:4-1:16. Перед 3-й иммунизацией нз 68 коз* реципиентов ареакгавных было 8, с титром 1:4-18,1:8-19,1:16 - 21 и 1:64-2 животных. После 5-й иммунизации титры сывороток выглядели следующим образом; ареактивных - 3, с титром 1:16 -9; 1:32 - 11, 1:128 - 23, 1;512 - 15, 1:1024 - 4 и 1:2048 - 3 животных. Рост титра антител у коз отмечался до 5 и ммун изаторных воздействий.

Из табл. 1 видно, что наиболее высокие титры аллоантител получены от продуцентов, которые отличались от доноров 2-3 антигенами и более. При малом различии антигенов обычно к каждому донору прикрепляли несколько реципиентов, поскольку многие из них оказывались иммунологически ареактивными и не образовывали искомых антнтел, Вместе с тем, если донор имел на один антиген больше, то иммунная сыворотка реципиента оказывалась

s

нередко готовым реагентом. Подбирая, таким образом, животных, был составлен план иммунизации. Предусматривалось также, чтобы антитела к одному и тому же антигену вырабатывались несколькими реципиентами, исходя из того, что не у всех одни и те же факторы обладали достаточной иммуногенностью. При наличии реакции на естественные антитела, особенно на ацти - R в сыворотке крови коз-реципиентов, этих животных исключали из плана иммунизации, поскольку высокотитражная анти - R трудно удаляется абсорбцией.

Исследуя особенности получения поливалентных сывороток у коз оренбургской породы, было установлено наличие 95,6% реактивных реципиентов, что намного выше, чем у других видов животных. Возможно, это связано с большей реактивностью коз на иммун и заторные раздражения, чем другие виды животных. Реактивность животных, выработавших антитела, при аллоиммунизацни выглядела следующим образом: большинство особей из группы продуцентов было с высоким титром антител (1:32*1:1024). Ареактивныс особи составили 3 головы, что подтверждает высокую реактивность кш. Анализ антителообразования проводили по титру нативной аллоиммунной сыворотки в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, чтобы избежать «эффекта прозоны». Через неделю после последней инъекции у коз-реципиентов без ущерба для их здоровья брали 0,4-0,5 л, а у более крупных -0,6 - 0,8 л крови для получения сывороток - реагентов.

33, Получение монослецифических сывороток для кзентификанин антигенов генетических систем групп крови. Для выявления соответствующих антигенов необходимо располагать Банком диагноста кумов, то есть сыворотками-реагентами, содержащими определенные антитела. Следует отметить, что работа по созданию антисывороток коз должна иметь непрерывный характер, поскольку необходимо постоянно восполнять их расход для иммунологических исследований. Основные требования к моноспецифической сыворотке у коз следующие: 1. Должна быть аллоиммунной, за исключением овечьих анти-Аа (А - система); анти-Bb, антн-Bd, анти-Ве (Ве() (В - система); анти-Са (С-система). Источником анти-R (R -система) может быть коровья или овечья сыворотка. 2. Обладать: а). Специфичностью, в силу чего реагирует с определенным антигеном, б). Авидностью (сродством), то есть способностью быстро или медленно соединяться с антигеном, в). Температурным оптимумом действия, г). Оптимумом pH среды, д). Титром, ж). Храниться в замороженном состоянии.

Изучение групп крови у коз, как и у других видов животных, начали с поисков естественных антител, с помощью которых можно было бы идентифицировать эритроцитарные антигены. Однако антитела из натуральных сывороток выявляют только фактор R у коз. В дальнейшем для изучения других систем групп крови коз стали использовать иммунные алло -и кссноантитела. Для определения R фактора групп крови использовали естественные аптитела, получаемые из неиммунных сывороток различных видов жвачных животных. Образцы крови были отобраны от 164 коз, 43 овец различных пород, 37 голов крупного рогатого скота, 2-х яков и 41 верблюда

(табл. 2). Сыворотки использовали после предварительного разведения от 1:2 до 1:32, так как многие из них в не разведенном виде часто не участвовали в реакциях по причине "эффекта прозоны". Последнее наблюдалось при использовании свежей цельной сыворотки с анти^ крупного рогатого скота и яка, а также в некоторых случаях и с высокощтражными сыворотками анти-К у овец и коз. Наилучшим источником анти-К являются диагностнкумы представителей семейства полорогих в следующей последовательности: козьи, крупного рогатого скота, ячьи и овечьи антисыворотки. Неиммунные верблюжьи сыворотки не содержали анта- К антител.

2. Характеристик« нормальных (ненммуниых) сывороток на присутствие естественны! анш-К антител у различных видов жвачных

Число

Число ис- животных, у

Порода следованных которых

животных подтверждено наличие анти - К антитела

Козы:

Местные пуховые (Краснодарский край) 38 2

Дагестанские пуховые 24 0

Дальневосточные местные пуховые 23 3

Молдавские места ые пуховые 36 4

Саратовские местные козы 25 2

Зааненскне козы н их помссн (Московская

область) 18 0

Итого: 164 И

Крупный рогатый скот 37 2

Овцы 43 0

Яки 2 2

Верблюды 41 0

ВСЕГО: 277 15

В результате проведения всей работы по изготовлению сывороток-реагентов были получены гетерологичные диагпостикумы из сывороток крови овец, выявляющие антигены 4 систем групп крови (А, В, С, Я) у коз.

А-система. Для характеристики различных пород коз использовали аллоиммунную анти-Аа сыворотку овец. Анги-Аа сыворотка была получена 4-х кратной аллоиммунизацией овец, В процессе анализа сывороток 1,49, 540,542 и 544 на состав антител было установлено, что в них содержится не менее двух известных антител. Анализирующей абсорбцией эритроцитами подобранных животных удалось удалить ненужные антитела. Заключительная абсорбция проведена при соотношении эритроцитов к сыворотке 2:3 (табл 3).

Первоначальные титры "сырых" сывороток были равны 1:128 - 1:256, после 3-х кратной абсорбции титры понизились в два раза. У коз анализ на наличие антигена Ла проводили при разведении сывороток 1:4.

3. Принцип получения мои »специфических сывороток овец н крупного рогатого скота, идентифицирующих антигены систем групп крови коз

Номер Титр Разве- Номера Соотно- Коли- Полу- Источник

сыво- анти- дение овец.от шение чество чена проис-

ротки тела сыворот- которых эритро- и время анта- хождения

ки для исполь- цитов и абсорб- сьгао-

абсорб- зованы сыво- ции в ротка

ции эритро- ротки минутах

циты

1 1:32 1:4 697 2:3 3x45 Аа 8

90018 1:128 1:4 68 1:4 1x45 ВЬ

49 1:128 1:8 456 2:3 2x45 В(1

113 1:64 1:3 161 1:7 2x30 ¿г со Б

133 1:128 1:5 195 2:3 3x45 Ві 8

620 Е:32 1:4 03428 1:3 2x45 Са б

57 1:8 1:2 55 1:10 1x10 К ВШ

Примечание: О - и 8 - аллоиммунные сыворотки коз и овец; ВИЗ -естественные антитела крупного рогатого скота.

В-снстема, Антитела для установления антигенных структур данной системы были получены из аллоиммунных поливалентных сывороток овец. В результате проведения 4-х кратной иммунизации и соответствующей абсорбции эритроцитами, из иммунной сыворотки овцы удалось получить искомое антитело анти-ВЬ. Это позволило использовать данную сыворотку в рабочем титре 1:16 - 1:32. Анти-Вд реагент был приготовлен из "сырой" сыворотки, полученной в результате алл©иммунизации овец породы ромни-марш. Наряду с ожидаемым антителом В<3, в поливалентной сыворотке оказались еще неизвестные иммуноглобулины, которые были абсорбированы специально подобранными эритроцитами овцы N456. Титр сыворотки до абсорбции составлял 1:125, после завершення обработки искомое анти-Всі антитело имело титр 1:32. Эта сыворотка использовалась при аттестации животных в рабочем титре 1:4. У коз частота встречаемости антигена ВІ средняя. Нам не удалось выявить аналог среди исследованных козьих сывороток, поэтому анти - Ві реагент был использован овечий после соответствующей дочистки козьими отмытыми эритроцитами (табл. 3).

Полученные Ве( и Вег антитела у овец показали, что подходящим реагентом для исследования коз является Веь Вс2 - такой специфичностью не обладала (табл. 4).

С-сисгема. Проведенный сравнительный анализ сывороток-реагентов двух видов жвачных показал наличие общности анти-Са овцы и С20 козы. Козий реаге1гг представлял собой аллоиммуиную сыворотку, полученную от одного реципиента оренбургской породы коз.

4. Наследование антигенных факторов Bet, Вс: и Be от козла - производителя его потомству

Козоматки Козлята

Антигенные факторы Анти ген ные факторы

Be Be, Bet Be Be', Ве2

- - - - - -

- - - + + -

- - - - - -

- - - + + -

- - - - - -

- - - + + -

- - - + + -

- - - - - -

Аналогичным образом были получены все 41 моноспецифические сыворотки из поли валетных аллоиммунных сывороток — реагентов у коз и обозначены С1-С41. У коз, как и у других видов животных, рабочий титр реагентов должен быть не ниже 1:4. На флаконы готовых сывороток наклеивали этикетки с указанием места изготовления реагента, наименования реагента (антн - Са, анти - К и.т,д,), титра, номера серии, времени изготовления, условий и срока хранения. Реагенты хранили в полиэтиленовых флаконах емкостью 0,1-0,5 л в морозильных камерах при температуре -18-20°С. Для текущей работы использовали мелкую расфасовку - флаконы по 10-20 мл. Такое количество каждого реагента хватало для исследования 300 голов коз. С использованием 9б-ти луночных пластмассовых пластин аналогичным объемом каждого реагента можно исследовать 600 животных.

3.4. Иммунологическое сходство антигенных структур у коз, овец, крупного рогатого скота и верблюдов. Для идентификации общности групп крови у 105 коз оренбургской породы и 42 верблюдов калмыцких бактрианов нами были проверены 60 моноспецифических сывороток крупного рогатого скота и 42 тестсыворотки коз, а также две ячьи сыворотки. Параллельно эти сьгеороткн были поставлены и с тестированными по группам крови 323 овечьими эритроцитами. Одновременно 12 овечьих тест - сывороток ставили с козьими эритроцитами. По результатам реакций козьих эритроцитов с антисыворотками скота, детально анализировались реагенты, дававшие полные

и специфические реакции в гемолитическом тесте: Ь, Рг, У г, Е3. Проведенные абсорбции и семейный анализ подтвердили, что эти сыворотЩ! содержат антитела одного типа. Однако они оказались не пригодными для последующих исследований эритроцитов коз и овец.

Большинство из 11 овечьих реагентов (акти - Аа, - АЬ, - ВЬ, - Веь - Са, - СЬ, - Б а, - Ма, - к, - О), перекрестно реагировали с эритроцитами коз, исключение составляли ареактивиые анти - АЬ, анти -Ве^, анти - Оа и анти - О. Однако только анти-Аа (А - система); анти-ВЬ, анти-ВсІ, анти-Ві, анти-Ве(Ве|) (В - система); акти-Са (С - система), анти-Я (Я - система), чьи специфичности подтверждены контрольными абсорбциями и семейным анализом, были использованы для типировання крови коз оренбургской и эааненской пород. Частоты встречаемости антигенов, выявленные с помощью овечьих реагентов представлены в табл. 5. Оказалось, что у коз А С Я - системы имеют более простую структуру по сравнению с подобными локусами овец. Наносною семейного анализа установлено, что они составляют идентичную антигенную специфичность, однако отличаются по структуре самих систем. Полностью идентичными оказались і - и К - системы групп крови крупного рогатого скота, яков и коз. Каждая из этих двух систем представлена одним антигенным фактором (} и К), двумя фенотипами (7 и Г; Я и Я0), двумя аллелями (/ к і0; Кк и її0), тремя генотипами (і1!1, іУ, їЛї., іЛї0). Аналогично

представлены антигены, аллели и генотипы А - к С - систем.

5, Частота встречаемости антигенов у коз, установленная с помощью овечьих сывороток — реагентов

Антигены групп крови Частота встречаемости антигенов у различных пород коз

Оренбургская Зааненская Альпийская* Зааненская*

Аа 0.125 0.030 0.000 0.061

ВЬ 0.775 0.020 0.058 0.273

Всі 0.250 О.ИО 0.175 0.283

Ве(Веі) 0.450 0.500 0.573 0.707

ВІ 0.150 0.120 0.437 0.354

Са 0.175 0.480 0.796 0.778

К 0.450 0.430 0.398 0.636

Примечание*. * - данные Т.С. ^иуеп (1990)

Вместе с тем, несмотря на гомологичность антигенов Я и строение локусов у домашних овец н коз сильно различаются. Проявление Я - антигена овец возможно при наличии четырех разных генотипов ( ЯНН, КШ!, Кг11, Мг) и определенного положения 1 гена (локус I), который в гомозиготном состоянии эпистазирует проявление эритроц»тарных факторов Я, Кроме того,! ген у овец аналогичным образом действует и на другой, - О - антиген, расположенный также в Я - локусе, отсутствующий у коз. Я - система, единственный локус у овец, где один антиген (Я) ведет себя доминантно по отношению к другому (О).

Что касается эритроцитов верблюдов, то они не реагировали ни с одними иммумоспециф ическнми сыворотками-реагентами крупного рогатого скота, коз и овец. Очевидно, это указывает на отсутствие каких-либо общих антигенов между 4 видами жвачных животных (крупный рогатый скот, яка, овцы, козы) и верблюдами.

В табл. б представлен антигенный состав эритроцитов отца и его козлят по 4 системам. Полученные данные показывают независимую передачу антигенов отдельных систем групп крови у кш.

6. Наследование эритроцигярных факторов А В -, С - и Я- систем групп крови при генотипе отца А*'", В"4, С*", Нк Я'

Потомки Фенотип отца гетерозиготный по А-, В-, С-, Я- системам групп крови

Аа ВЬ ва Са К

]. Аа вь - Са Я

2. - - Всі - -

3. - вь - - -

4. - . В4 Са к

5. Аа вь . - а

6. - - Всі - к

7. Аа - Всі Са -

8. вь - - -

9. Аа - В<І - -

10. - вь - Са -

11. - - В<9 Са я

12. - вь - - к

3.5. Аллелофоцд и генетическая структура различных пород н помесей ко1. Анализу были подвергнуты три породы коз (горноалтайская, оренбургская, зааненская, а также две группы помесей: 1/2 зааненская х 1/2 горноалтанская и 3/4 зааненская х 1/4 горноалтайская. Подсчитана частота встречаемости каждого из 41 антигена. Полученные результаты показали, что генетический спектр в исследованных популяциях коз, довольно своеобразен. По данным табл. 7 видно, что все исследованные козы различных пород и помссей имеют свои особенности по встречаемости антигенов групп крови. Частота отдельных эрнтроцнтарных антигенов в системах групп крови у представителей пород и помссей варьировала от 0,00 до 1,00. Наибольшее количество редковстречаемых антигенов было выявлено у помесей. За нимн следовали животные горноалтайской породы. Самое меньшее количество редковстречаемых антигенов было установлено соответственно у зааненской и оренбургской пород коз. Исходя из сделанного анализа, можно предположить, что большая вероятность потери редких антигенных структур будет отмечаться у помесных животных и

горноалтайской породы, которая была выведена в свое время на основе использования ограниченного числа козлов - производителей.

7, Общая характеристика пород к помесных коз по некоторым

генетическим крн ге; рням

Породы и помесные животные Средняя частота встречаемости антигенов Редко — встречаемые антигены Средне -встречаемые антигены Часто-встрсчае- мые антигены

Оренбургская (О) 0.5702 0.4634 0.1219 0.4146

Заанелская (3) 0.5401 0.4390 0.0732 0.4878

Горноалтайская (ГА) 0.3947 0.6098 0.1219 0.2683

Помеси I поколения (3 х ГА) 0.2346 0.7805 0.1463 0.0732

Помеси П поколения (3 х ГА) 0.2683 0.7073 0.2195 0.0732

Относительно среди евстрсчаемых антигенов следует отметить, что их больше всего у помесных животных. Одинаковая частота встречаемости отмечалась у оренбургской и горноалтайской породы, наименьшее количество было установлено у зааиенской породы коз. По средней частоте встречаемости и частоте высоковстречаемых антигенов на первом месте была зааненская и оренбургская породы, затем горноалтайская, меньше всего их выявлялось у помесных животных. Зааненские козы были завезены нз разных стран мира (США, Словакия, Новая Зеландия) и очевидно это сказалось на своеобразном составе антигенов. Аналогичные данные получены у завезенных австралийских мериносовых овец с различной тоникой шерсти (строиг, пеппин, файн и др.), которые разводятся по определенной программе на каждой племенной ферме (Магтапоч N. $„ 2002).

По компьютерной программе "Манхетенповских расстояний* была проведена кластеризация пород и помесей коз. Дендрограмма на рис. 2 состоит из 4-х дем: I - помесей 1/2 заанелская х 1/2 торлоалтайская н 3/4 зааиенской и 1/4 горноалтайской пород; II - включает дему I и горноалтайскую породу. Все они образуют отдельный кластер; III - к данному кластеру примыкает зааненская порода коз; IV - включает оренбургскую породу коз. Кластерный анализ различных популяций коз выявил реальные взаимоотношения между породами и помесными животными. Анализ полученных данных показывает, что наибольшая генетическая дистанция среди исследованных пород и помесей выявлена между оренбургской и всеми остальными группами животных. Это отражает происхождение оренбургской популяции, корни которой тянутся к кашмирской породе и монгольским отродьям коз.

_ Оренбургская

Зааненская

IV

III

Горноалтайская

II

1/2 Зааненская х 1/2 горноалтайская

I

3/4 Зааненская х 1/4 горноалтайская

Рис. 2. Дендрограмиа кластеров анализируемых пород я помесей коз

Генетическое расстояние между помесями 1/2 зааненская х 1/2 горноалтайская и 3/4 зааненской х 1/4 горноаятайской пород оказалось наименьшим. Это объясняется тем, что в них кровь от двух исходных пород. Анализ показывает также, что обе помесные группы ближе к горноалтайской популяции. Горноалтайская порода коз, созданная в экстремальных условиях Алтая, белее жизнеспособна в Хабаровском крае, чем импортированное поголовье ззаненской породы из Новой Зеландии, которая прошла более жесткий, селекционный путь и очевидно будет проходить адаптацию более длительный период.

3.6. Характеристика коз оренбургской породы различных генераций по частоте встречаемости антигенов во времени. По 41 сыворотке -реагенту групп крови была проведена аттестация 407 коз 4-х генераций изЗ-х ведущих хозяйств Оренбургской области. Были подсчитаны частоты встречаемости различных антигенов у 4-х генераций во времени, с разрывом в 3-5 лет, У всех поколений коз оренбургской породы значительно варьирует распределение эритроцитарных антигенов. Для всех исследованных групп животных характерна высокая частота одних антигенов, низкая по другим и отсутствие рада антигенов у некоторых особей с учетом времени. По отдельным антигенам отмечается высокая частота встречаемости в начале исследований (1991) и его снижение к 2002 г. Иногда наоборот, низкое в начале изучения и резкое возрастание частоты встречаемости в конце проводимых исследовании. Полагаем, что такое изменение антигенных факторов в популяциях обеспечивается как дрейфом генов, кодирующих группы крови, так и адаптационными способностями животных с

определенным генотипом. Возможно, это является следствием интенсивной ротации используемых в случке потомков одних и тех же козлов -производителей. Выявлены антигены, частота которых не изменялась в процессе 12 — ти летнего периода исследований. Видимо такие антигены являются наиболее постоянно присутствующими и характерными для коз оренбургской породы.

Проведенный популяционпый анализ коз по антигенам групп крови во временной динамике, т.е. в течение 12-ти летнего периода, показал наличие существенной разницы по встречаемости антигенов во времени, что подтверждается расчетами средней частоты встречаемости антигенов (М) с учетом ее ошибки (т) (табл. 8),

8. Динамика частот антигенов у коз различных поколений _оренбургской породы во времени__

№ Частота встречаемости антигенов '

сы 1991г. 1994г. 1997г. 2002г. М±т*

во- (п-105) (п=89) (п=135) (п=78)

рот

Kit

1 2 3 4 5 6

С1 0.4000 0.4157 0.4741 0.4487 0.4324±0.03

С2 0.8750 0.5618 0.6444 0.6282 0.6772±0.14

СЗ 0.5750 0.2921 0.3926 0.2944 0.0387±0.13

С4 0.8500 0.4045 0.4148 0.4744 0.5355±0.21

С5 0.4750 0.3034 0,3333 0.4103 0.3804±0.08

С6 0.9500 0.6067 0.6741 0.8333 0.7660±0.16

С7 0.1250 0.0899 0.0593 0.1282 0.1005±0.03

С8 О.ЗООО 0.1685 0.0741 0.0897 0,1579*0.10

С9 0.9500 0.8539 0.8741 0.9231 0.9002±0.04

СЮ 0.9250 0.5618 0.4889 0.5128 0.6217±0.21

СИ 0.13Ó0 0.1236 0.1111 0,2051 0.1424±0.04

С12 0.3500 0.1124 0.1333 0.1410 0.184U0.11

С13 0.1500 0.3034 0.3630 0.3333 0.2866±0.09

С14 0.4250 0.0225 0.0000 0.0000 0.1068±0.21

С15 0.975Ó 0.4944 0.4963 0.4615 0.6064±0.25

С16 0.9750 0.9775 0.9778 0.9744 0,9749±0.00

С17 0.3750 0.9775 0.9926 0.9231 0.8164±0.30

С18 0.4250 0.5843 0.5852 0.5641 0,5383±0.08

С19 0.8500 0.4157 0.3704 0.4230 0.5147±0.23

С20 0.7500 0.8315 0.7630 0.7564 0.7744±0.04

С21 0.3000 0.6742 0.6222 0.6666 0.5641 ±0.18

С22 0.5000 0.2472 0.2741 0.2051 0.3065±0.13

С23 0.9500 0.5281 0.4593 0.5256 0.6255±0-22

С24 0.9250 0.7865 0.7926 0.8846 0.8453±0.07

С25 0.3750 0.7528 0.7556 0.7179 0.6468±0.18

1 2 3 4 5 б

С2б 0.3750 0.4270 0.4889 0.4744 0.4380*0.05

С27 О.бббб 0.3820 0.4000 0.4103 0.4645±0.14

С28 0.4000 0.3146 0.2667 0.2436 0.3035±0.07

С29 0.7250 0.5393 0.3926 0.5000 0.5385±0.14

СЗО 0.9000 0.6067 0.6444 0.6410 0.б965±0.14

С31 0.4500 0.1011 0.0593 0.0641 0.1653±0.19

С32 0.1000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0250±0.05

СЗЗ 0.1500 0.0337 0.0148 0.0128 0.0533 ±0.07

С34 0.9250 0.3708 0.3926 0.3718 0.5138±0.27

C3S 0.3500 0.4270 0.4444 0.4487 0.4143*0.04

СЗб 0.9500 0.6854 0,6222 0.7308 0,7463±0.14

С37 0.5250 0.0225 0.0074 0.0128 0.1410±0.27

С38 0.3000 0.1798 - 0.1111- 0.6769 0:1667±0.10

С39 0.8250 0.0899 0.0667 0.0513 0.2575±0.38

С40 0.1250 0.0000 0.0000 0.0128 0.0343±0.06

С41 0.8000 0.2921 0.3481 0.2821 0.4275±0.25

Примечание: * М — средняя частота встречаемости антигена; т -ошибка средней частоты встречаемости антигена.

Лучшими хозяйствами по оренбургской породе коз считаются ГПР «Губерлинский» Райского района, СПК - ГПР «Заторный» Кувандыкского района, СПК - ГПР «Заря» Гамбарского района. Все хозяйства расположены на территории Оренбургской области, однако каждый район по-своему специфичен по природно-климатическим условиям. Очевидно, это явилось тем фактором, который отразился на аллелофонде групп крови коз.

Установлено, что популяции коз, разводимые в 3-х хозяйствах совершенно отличаются друг от друга по фонду эритроцитарных антигенов. Особенно это хорошо просматривается между животными СПК - ГПР «Заря» и двумя другими хозяйствами (СПК - ГПР «Загорный» и ГПР «Губерлинский»), Антигенофонд по таким факторам как С5, CIS, С20, С23, СЗО, С34 был высоким у исследованных особей СПК- ГПР «Заря», тогда как в других хозяйствах (СПК- ГПР «Загорный» и ГПР «Губерлинский») превалировали животные с антигенами С4, Сб, С8, СЮ, С12, С15, С22, С24, С27, С28, С31, СЗЗ, С38. Частоты большинства других эритроцитарных антигенов по их встречаемости были практически одинаковыми во всех 3 -х хозяйствах, что возможно связано с однонаправленностью селекционной работы.

3.7. Биохимический полиморфизм белков крови у коз. До настоящего времени не изучен полиморфизм белков крови у большинства отечественных пород коз.

Гемоглобин (НЬ). При электрофоретнческом исследовании гемоглобина 88 коз оренбургской (п=53) и зааненской (п=35) пород было обнаружено 2 варианта - НЪА н НЬВ, которые проявлялись в 3-х различных фено - и генотииических комбинациях: НЬАА, НЬАВ, НЬВВ. Для популяции

оренбургской породы коз была характерна довольно высокая частота встречаемости обоих аллелей НЬА (0,6038) и НЬВ (0,3962). Из генотипов чаще всего выявлялись НЬАА - 0,5660, затем НЬВВ - 0,3585, реже - НЬАВ - 0,0755. Аналогичная картина по генам отмечалась и у горноалтайской породы, у нее встречаемость аллеля НЪА <0.8174) была еще выше, чем у оренбургских коз (Антонова НЛ., Мкртчян Ш.А., 1977). Значительно ниже было количество животных с НЬВ, соответственно она составила у горпоалтайских и оренбургских -0,1826 и 0.3962 (табл. 9),

9. Распределение генотипов гемоглобина у различных пород коз

Российской Федерации

Порода Число исследованных животных Генотипы Частота встречаемости аллелей

АА „ АВ ВВ НЬА НЬВ

Оренбургская 53 0.5660 0.0755 0.3585 0.6030 0,3962

Горноалтайская 667 0.4828 0.4302 0.0870 0.8174 0.1826*

Заапенская 35 0,5714 0.3714 0,0571 0.7571 0.2429

Примечание: * -данные Антоновой Н.Я., Мкртчян Ш.А.(1977).

Зааненские козы занимали промежуточное положение между горноалтайской и оренбургской городами. Частота встречаемости аллелей гемоглобина выглядела следующим образом: превалирование у зазнеиской породы, как и у предыдущих популяций, НЬА (0.7571) над НЬВ (0.2429). Анализ полученных нами данных и различных литературных источников показывает высокую частоту встречаемости аллеля НЬ относительно НЬВ у всех исследованных коз. Возможно, это связано с видовыми особенностями коз и селективным преимуществом НЬА над НЬВ. У оренбургских коз, в отличие от горноалтайской и зааненской пород, отбор благоприятствует в основном гомозиготам ДА и ВВ, хотя и у них превалировали АА. Их отличает от горноалтайской и зааненской пород только то, что у последних наряду с АА фенотипом чаще встречаются животные с АВ типом. У горноалтайских коз гомозиготы с НЬ ВВ, как менее приспособленные к высокогорным условиям, элиминируются более интенсивно, чем у оренбургских особей, у которых они сохраняются, поскольку их разводят в равнинных условиях Оренбургской области. Исследования локуса гемоглобина показали нарушение генетического равновесия у коз оренбургской породы. Из результатов видно, что это связано с избытком гомозиготных генотипов АА и ВВ (и = 49). Причем, количество животных с типом гемоглобина АА почти в 2 раза больше, чем число особей с ВВ и в 7 раз с генотипом АВ. Фактическое число генотипов не соответствовало теоретическому, что свидетельствует о наличии нарушения генного равновесия исследованной популяции оренбургских коз за счет избытка более чем в 12 раз гомозигот АА и ВВ относительно гетерозиготы АВ (х1 " 39; Р < 0.001),

У горноалтайских и зааненских коз нарушения генетического равновесия не было установлено.

Трансферрнн{Т1). При электрофореггической разгонке 70 образцов сыворотки крови от оренбургских (п =35) и зааненских коз (п=35), на геле было установлено соответственно 5 и 3 типов трансферрнна: АА, АВ, АС, ВВ, ВС н АА, АВ, ВВ. У оренбургских коз высоковстречаемым генотипом оказался АА (0.4857), затем ВВ и ВС (0.1714), реже всего были выявлены АС и АВ (0.0857). Относительно зааненских коз высоко встречаемым оказался гетерозиготный генотип АВ (0.5143), затем АА (0.3429) и реже всего выявлялся тип ВВ (0.1400). Сопоставление действительного распределения генотипов с теоретически рассчитанным по Хардк - Вайнбергу, показало соответствие по всей опытной популяции зааненских коз. Достоверное расхождение между ними было выявлено у коз оренбургской породы, что свидетельствовало о нарушении генного равновесия по локусу трансферрнна в группе исследованных животных (к г =17; df= 2; Р < 0.001).

3.8. Полиморфизм белков и технологические свойства молока у коз. В результате электрофореза белков молока коз зааненской породы были выявлены 4 системы казеина: а л -, а s: Р к, a по сывороточным белкам 3 локуса: р - лактоглобулин, а -лактальбумин, иммуноглобулин. Локус, отвечающий за синтез белковых фракций од-казеина отличался от всех других систем своей многоаллельностью. В исследованной популяции наиболее часто выявлялись животные с генотипами aS[ - СпАЕ и asi - Сп60, а с редкой

АС

частотой встречаемости были особи по гетерозиготному генотипому asi - Сп ,

Наиболее чувствительным к сычужному ферменту оказалось молоко животных с генотипом asi - СпВС. Процесс коагуляции начинался сразу после добавления сычужного фермента, продолжительность гелеобраэования составляла 9 минут. При производстве творога полученный сгусток был очень хрупкий, много казеиновых хлопьев в процессе синерезиса уходило в сыворотку. В молоке от животных с генотипом ал - СпАВ створаживание казеина начиналось через 13 минут. Полученный продукт из молока этой группы имел тягучую равномерную консистенцию, а творог в виде кашицеобразной массы и с кислым запахом. Сгусток, полученный из молока животных с генотипом asi - СпВВ, был эластичным, процесс синерезиса происходил интенсивно, а творог зернистой консистенции. Животные с генотипом asi - СпВВ обладали большим содержанием жира в твороге -18.5±2.3 % против 17.0±1.8 % (генотип aSi - СпВС) и 17.0 ± 1,2 %(генотип aSi -Сп АВ). Содержание белка в твороге из молока с генотипом ВВ было также максимальным. Затраты молока на изготовление 1 кг творога оказались самыми низкими от животных с генотипом asi - Сп ВВ, чем от особей с ast - Сп АВ- и asi - Сп ВС- генотипами (табл. 10).

10. Качественные показатели творога в зависимости от генотипа по локусу а$і - казеина

Показатели Генотипы

АВ ВВ ВС

Содержание, в %

Жира 17.0*1.2 18.5±23 17.0±1,8

Белка 15.8±0.9 18.5±0.8 17.0*1.3

Влаги 71.0±2.3 68.0ІІ.5 70,040,8

Сухого вещества 29,0*0.3 32.0±0.4 30.0±0.4

Кислотность 184.0±4.2 160.0±3.8 164.0±3.б

Затраты молока на

I кг творога 4.8±0.1 4.7*0.1 5.О±0,2

Таким образом, генетическую оценку различных популяций коз двух пород проводили с использованием 13 локусов полиморфных систем крови и молока (табл. 11).

11. Характеристика полиморфных систем крови н молока у коз

Локус Обозначение аллелей Число аллелей

Группы крови

А А*, А0 2

В в", в", В" , В', в" 5

С С,С" 2

К 2

Полиморфные системы белков крови

НЬ НЬА,НЬ" 2

тґ\ т^.тг- 3

Полиморфные системы белков молока

С£ЇІ-СП «яі-Сп А, а51-Спв, а51-Спс 3

Р.-Сп 1

ІЬ-СП 1

к-Сп к - СпА, к - Сп" 2

а52-Сп а$ї-Сп I

2

а - 1л а - ЬаА 1

І8 & 1

В итоге представлена характеристика коз по 28 аллелям 4-х групп крови, 2 - х полиморфных локусов белков крови и 7 полиморфных систем

белков молока, а также по 41 вскрытых антигенов, принадлежащих 15 кластером групп крови. Причем 4 системы групп крови овец оказались общими и для всех исследованных пород коз. Возможно, данные локусы в эволюционном плане являются более консервативными не только для вида Ovis, но и Сарга. У коз наиболее гетерогенным из всех изученных систем оказался В — локус. Исследования показали, что 28 аллелей 13 систем групп крови и полиморфных белков могут быть эффективно использованы при оценке у коз генетической изменчивости в породах, при выявлении их родственных связей (мониторинг в пространстве), изучении ряда поколений (мониторинг во времени),

ВЫВОДЫ

1. Для изучения групп крови у коз впервые получены диагностикумы, выявляющие 48 антигенов различных систем групп крови. Из них сыворотки — реагенты 4-х систем групп крови овец: А (Аа); В (ВЬ, Bd, Bi, Bet), С (Ca), R (R) и одна крупного рогатого скота (J - система), соответствующие Международным стандартам, а также 41 нммуноспецифическая сыворотка коз.

2. Установлена полная эквивалентность сывороток-реагентов R - и С - систем групп крови овец и коз. Идентичность показана также между реагентом R овец и коз с J крупного рогатого скота и яка. Доказано наличие различия в структуре систем R и С у овец и коз и общность R(J) локуса - у трех видов жвачных (коз, крупного рогатого скота и яка). Не обнаружена общность антигенов между верблюдами н 4 видами исследованных жвачных животных.

3. Наибольшее генетическое расстояние среди исследованных пород и помесей выявлено между оренбургской породой и другими группами ЖИВОТНЫХ. Это обусловлено происхождением оренбургской популяции, корни которой тянутся к кашмирской породе и монгольским отродьям коз. Генетическое расстояние между помесями 1/2 зааненская х 1/2 горноалтайская к 3/4 зааненской х 1/4 горноалтайской пород оказалось наименьшим. Обе помесные фуппы были ближе к горноалтайской популяции.

4. По 13 полиморфным системам белков и группам крови у коз выявлено 28 аллелей, которые можно использовать в качестве генетических маркеров при исследовании различных пород коз,

5. Подбор пар донор-реципиент с целью получения козьих моноспецифических сывороток целесообразно проводить с разницей 1-2 антигена. Постановка реакции гемолиза микрометодом позволяет расходовать моноспецифические сыворотки и комплемент в 2-4 раза меньше, чем при обычном тестировании.

6. Зааненскне козы с генотипом ВВ обладали большим содержанием жира в твороге -18.5±2.3 % против 17.0±1,8 % (генотип ВС) и 17.0 ± 1,2 % (генотип AB). Содержание белка в твороге коз с генотипом ВВ было также максимальным (18,5±0,8 %), тогда как в двух других группах эти данные имели меньшие значения (AB -15.8±0.9 %} и (ВС -17.0±1.3 %)■

п

7. Процесс коагуляций молока коз с генотипом ВС начинался сразу после добавления сычужного фермента, продолжительность гедсобразования составляла 9 минут. Полученный сгусток был хрупкий, много казеиновых хлопьев в процессе синерезиса уходило в сыворотку- Створаживание казеина молока коз с генотипом АВ начиналось через 13 минут. Полученный продукт имел тягучую равномерную консистенцию, а творог в виде кашицеобразной массы и с кислым запахом. Сгусток из молока животных с генотипом ВВ, был эластичным, процесс синерезиса происходил интенсивно, а творог зернистой консистенции, продолжительность гслеобразования составляла 12 минут.

1. Для изучения адлелофонда, оценки генетических различий между породами рекомендуем использование групп крови, полиморфных систем белков Крови И молока коз.

2. Для изготовления творога рекомендуем использовать молоко зааненских коз с генотипом ВВ по а - казеину.

1. Марзанова J1.K., Иолчисв B.C., Марзанов Н.С, Групп »специфические факторы крови и биохимический полиморфизм белков у коз. Проблемы отрасли овцеводства и перспективы ее развития в Среднем Поволжье И Сборник материалов научно - практической конференции посвященной памяти проф. Г. Г. Зеленского. Пенза. - 2001.-С.94-95.

2. Mamnov N.S., lolchiev B.S., Marzanova L.K., Chalaia E.A. Genetic markers at goats // XXVII Intern. Conf. on Anirn. Genet. Minneapolis. USA. - 2000. - PA

3. Marzanova L.K., Ekimov A.N., Marzanov N.S., Puschkarcv N.N., Marzanov Y.S., Nasibov M.G. Blood groups of goals of the Orenburg breed Н XXVIII Intern. Conf. on Anira. Genet Goettingen. Germany. - 2002. - P.l 18.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

Идогсшспо РУЦ ЭБТЖ 142132. Московски обл., Подольский р-в, п. Дубровнцы Тел, (8 - 27) «-14-24, (в - 27)65-14-07

Сдано в набор 10,10.2002. Подписано в печать 10.10.2002 _Зыаз№2| . Псч.л. 1,1. ТирвжМОмв._

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Марзанова, Лидия Каплановна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Зоологическая, территориальная и производственная классификация коз

1.2. Характеристика полиморфных систем групп крови и белков у коз: история их изучения и номенклатура

1.3. Системы групп крови и полиморфизм белков у коз

1.4. Биохимический полиморфизм белков молока у коз

1.5. Локализация генов белков молока в хромосомах

1.6. Полиморфизм лактопротеинов 3 О

1.7. Гомология различных биологических структур коз и родственных групп

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Отработка режима типирования эритроцитов крови у коз

3.2. Получение и накопление моноспецифических сывороток у

3.3. Подбор пар доноров и реципиентов при получении сывороток-реагентов у коз

3.4. Получение моноспецифических сывороток для идентификации антигенов генетических систем групп крови

3.5. Идентификация и контроль специфичности реагентов

3.6. Иммуногенная активность антигенов и наиболее перепек тивные их комбинации при выработке антител

3.7. Иммунологическое сходство антигенных структур у коз, овец, крупного рогатого скота и верблюдов

3.8. Аллелофонд и генетическая структура различных пород и помесей коз

3.8.1. Характеристика современного состояния изученности аллелофонда у коз

3.8.2. Аллелофонд отечественных пород коз

3.8.3. Характеристика коз оренбургской породы различных

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунобиотехнологические свойства крови и молока у коз"

Актуальность темы. Тема посвящена вопросам иммунной биотехнологии и генетики животных. Одной из главных проблем генетики сельскохозяйственных животных и связанных с ней разделов биотехнологии является установление генов различных биологически важных признаков. В этой связи открытие большого класса молекулярно-генетических маркеров коренным образом изменило общую ситуацию в исследовании генома животных. При создании маркирующих тест-систем использовались различные методические подходы: иммунологические, химические, биохимические и молекулярные. Благодаря им появился мощный инструмент для описания наследственной изменчивости у домашних животных, контроля происхождения, определения генетических расстояний между различными популяциями, оценки аллелофонда у различных видов и пород, установления связи с рядом физиологических и биохимических процессов в организме животных.

Классификация современного набора молекулярно-генетических маркеров условна и сложна, включающая 9 различных типов полиморфных систем крови и молока (Roychoudhury А.К., Nei М., 1988; COGNOSAG Workshop Report, 1992; Марзанов Н.С., 1994; Lauvergne J.J. et al., 1996). Множественность аллелей и высокая гетерозиготность, кодоминантное выражение и стабильность наследования, простота и надежность тестирования, привели к широкому их использованию в качестве генетических маркеров крупного рогатого скота, свиней, лошадей и овец. Однако, несмотря на их очевидные преимущества, молекулярно-генетические маркеры до сих пор не получили массового распространения при исследовании генома коз. До настоящего времени существует необходимость исследования и их использования для решения различных задач в области генетики и селекции животных (Nguyen Т.С., 1990; Vankan D.M., Bell К., 1993a,b; Bowen J., 1992a,b,c; INRA Science, 1996; Vaiman D. et al., 1997; Serotec product guide, 1998; Marzanov N.S. et al., 2000).

Диссертационная работа выполнялась в соответствии с тематическим планом научных исследований Всероссийского ГНИИ животноводства.

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось исследование крови и молока коз с использованием различных генетических маркеров. В связи с этим решали следующие задачи:

1. Разработать технологию получения диагностикумов групп крови у коз.

2.Создать банк диагностикумов групп крови для исследования различных пород коз.

3.Дать характеристику породам коз по частотам встречаемости антигенов, аллелей и генотипов групп крови и полиморфных белков.

4. Определить общность антигенов групп крови у коз, овец, крупного рогатого скота, яков и верблюдов.

5. Провести анализ с целью выявления кластеров групп крови коз и генетических дистанций у оренбургской, зааненской, горноалтайской пород, а также у помесей Fi(1 /2 зааненская х 1/2 горноалтайская) и F2(3/4 зааненская х 1/4 горноалтайская).

6. Провести анализ связи генотипов полиморфных систем белков молока зааненских коз с сыропригодностью.

Научная новизна и практическая значимость работы, реализация результатов исследований. Впервые выполнены исследования по изучению полиморфных локусов белков (Hb, Tf, aSi-Cn, aS2-Cn, (3 - Сп, к - Cn, p - Lg, a -La, Ig) и систем групп крови у коз. Создан банк диагностикумов по группам е крови коз. Проведен популяционно-генетический анализ по 28 аллелям 13 систем белков и групп крови у различных пород коз. Определена общность антигенов, аллелей и генотипов у различных видов жвачных животных. Выполнен статистический анализ для установления кластеров групп крови и генетических дистанций у коз различной продуктивной направленности. Выявлен ВВ генотип asi - казеина, связанный с сыропригодностью молока.

Часть полученных материалов вошла в разработанные ТУ 9389003-00498254-00 "Сыворотки иммуноспецифические для определения групп крови овец и коз", ТУ 9389-001-00498254-00 "Сыворотки иммуноспецифические для определения групп крови крупного рогатого скота", "Инструкцию по изготовлению и контролю сывороток иммуноспецифических для определения групп крови овец, коз и крупного рогатого скота" и "Наставление по применению сывороток иммуноспецифических для определения групп крови овец, коз и крупного рогатого скота", которые утверждены Департаментом животноводства и племенного дела МСХ РФ 03.04.2001 г. и являются основными документами для условий приготовления, хранения и реализации реагентов.

Положения, выносимые на защиту. Создание Банка сывороток - реагентов групп крови коз для изучения различных пород. Вскрытие систем групп крови, их диагностические возможности для оценки аллелофонда различных пород и помесей коз в условиях Российской Федерации, определение общности антигенов у различных видов жвачных. Выявление связи генотипа ВВ asi казеина с сыропригодностью молока у коз.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и одобрены на ученых советах Всероссийского ГНИИ животноводства (1996-2002); на научной конференции отделов сертификации и экологических исследований, биотехнологии и лаборатории биохимии (2002); научно - практической конференции: "Проблемы отрасли овцеводства и перспективы ее развития в Среднем Поволжье", Пенза, 2001). Материалы диссертации были представлены на 27 - и 28 - й Международных конференциях по генетике животных (Миннеаполис, США, 2000; Геттинген, Германия 2002).

Публикация материалов. По материалам диссертации опубликовано 3 научные работы.

Объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, трех глав, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Материал изложен на 125 страницах машинописного текста, содержит 29 таблиц и 4 рисунка. Список литературы включает 155 источников, в том числе 97 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Марзанова, Лидия Каплановна

iw выводы

На основе обобщения собственных исследований и опыта отечественных и зарубежных ученых, впервые показана роль и значение генетических маркеров в решении научных и прикладных задач в козоводстве. Разработаны и предложены новые методы оценки аллелофонда, использования маркирующих систем при характеристике различных пород коз, разводимых в хозяйствах Российской Федерации. Тем самым внесен вклад в дело разработки новых, отвечающих современным требованиям, мероприятий по улучшению племенного поголовья коз.

Исходя из выше изложенного, можно сделать следующие выводы:

1. Для изучения групп крови у коз впервые получены диагностикумы, выявляющие 48 антигенов различных систем групп крови. Из них сыворотки -реагенты 4 систем групп крови овец: А (Аа); В (Bb, Bd, Bi, Bei), С (Ca), R (R) и одна крупного рогатого скота (J- система), соответствующие Международным стандартам, а также 41 иммуноспецифическая сыворотка коз.

2. Установлена полная эквивалентность сывороток-реагентов R - и С - систем групп крови овец и коз. Идентичность показана также между реагентом R овец и коз с J крупного рогатого скота и яка. Доказано наличие различия в структуре систем R и С у овец и коз и общность R(J) локуса - у трех видов жвачных (коз, крупного рогатого скота и яка). Не обнаружено общности антигенов между верблюдами и 4 видами исследованных жвачных животных.

3. Наибольшее генетическое расстояние среди исследованных пород и помесей выявлено между оренбургской породой и другими группами животных. Это обусловлено происхождением оренбургской популяции, корни которой тянутся к кашмирской породе и монгольским отродьям коз. Генетическое расстояние между помесями 1/2 зааненская х 1/2 горноалтайская и 3/4 зааненской х 1/4 горноалтайской пород оказалось наименьшим. Обе помесные группы были ближе к горноалтайской популяции.

4. По 13 полиморфным системам белков и группам крови у коз выявлено 28 аллелей, которые можно использовать в качестве генетических маркеров при исследовании различных пород коз.

5. Подбор пар донор-реципиент с целью получения козьих моноспецифических сывороток целесообразно проводить с разницей 1-2 антигена. Постановка реакции гемолиза микрометодом позволяет расходовать моноспецифические сыворотки и комплемент в 2-4 раза меньше, чем при обычном тестировании.

6. Зааненские козы с генотипом ВВ обладали большим содержанием жира в твороге 18.5±2.3 % против 17.0±1.8 % (генотип ВС) и 17.0 ± 1,2 % (генотип АВ). Содержание белка в твороге коз с генотипом ВВ было также максимальным (18.5±0.8 %), тогда как в двух других группах эти данные имели меньшие значения (АВ - 15.8±0.9 %) и (ВС - 17.0±1.3 %).

7. Процесс коагуляции молока коз с генотипом ВС начинался сразу после добавления сычужного фермента, продолжительность гелеобразования составляла 9 минут. Полученный сгусток был хрупкий, много казеиновых хлопьев в процессе синерезиса уходило в сыворотку. В молоке коз с генотипом АВ створаживание казеина начиналось через 13 минут. Полученный продукт имел тягучую равномерную консистенцию, а творог в виде кашицеобразной массы и с кислым запахом. Сгусток из молока животных с генотипом ВВ, был /г эластичным, процесс синерезиса происходил интенсивно, а творог зернистой консистенции, продолжительность гелеобразования составляла 12 минут.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для изучения аллелофонда, оценки генетических различий между породами рекомендуем использование групп крови, полиморфных систем белков крови и молока коз.

1. Для изготовления творога рекомендуем использовать молоко зааненских коз с генотипом ВВ по a si - казеину.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Марзанова, Лидия Каплановна, Дубровицы

1. Антонова Н.Я., Мкртчян Ш.А. Полиморфизм белков крови и их связь с хозяйственно полезными признаками у коз высокогорной зоны Алтая // Биологические основы селекции овец. М. Колос. 1977. - С. 109 - 111.

2. Амерханов Х.А., Марзанов Н.С. Генетики работают на будущее // Племенное дело. 1999.-N1,-С. 7-9.

3. Баранов А.В. Генетическое маркирование и его использование при совершен-твовании системы разведения молочного скота // Автореф. дисс. докт. биол. наук. Лесные Поляны. 1997. - 34 с.

4. Бельков Г., Панин В. Нужная отрасль козоводство // Молочное и мясное скотоводство. 1996. - N1. - С.30-32.

5. Бодров А. Американский опыт нам полезен // Молочное и мясное скотоводство. 1998. -N3. -С.29-32.

6. Бодров А. Тот плох инженер, который не мечтает стать козоводом // Животновод. 1998. - N4. - С.26-27.

7. Бороздин Э.К. К вопросу о функции аллоантигенов организма // Вопросы генетики сельскохозяйственных животных. М. 1991. - С.3-11.

8. Букаров Н.Г. Использование полиморфизма антигенов эритроцитов и Главного комплекса тканевой совместимости в разведении и совершенствовании крупного рогатого скота // Дис. докт. биол. наук. Дубровицы. 1995. - 300с.

9. Вепринцев Б.Н., Ротт Н.Н. Стратегия сохранения животного и растительного мира земли // Сб. науч. трудов: "Консервация генетических ресурсов. Методы. Проблемы. Перспективы". Пущино. 1991. - С.5-18.

10. ГлазкоВ.И. Биологическая генетика овец. Новосибирск: Наука.-1985.-167с.

11. Горные акробаты // Сторожевая башня. 1997. - N7. - С.24.

12. Гъыщ Н. Пчэным ехьыл1агъэу гущыЬ заул // Газета"Социалистическэ Ады-гей". 17 марта 1984.

13. Давыдов В.Н. Эколого генетическая оценка пород крупного рогатого скота и родственных ему видов //Автореф. дисс. докт. биол. наук. Красноярск. - 1995. -45с.

14. Дубровская P.M. Полиморфизм эритроцитарных антигенов и белков крови лошадей и перспективы его использования в селекционной работе // Автореф. дисс. докт. с.-х. наук. Москва. 1988. - 33с.

15. Ежегодник по племенной работе в овцеводстве и козоводстве в хозяйствах Российской Федерации / под ред. Данкверта С.А. и др./. Издательство ВНИИп-лем.-2001.-С.212-224.

16. Ермаков В.В. Молоко коз как высокоценный продукт питания человека // Сб. науч. труд. Самарской ГСХА "Перспективы развития животноводства". -2000. С.82-83.

17. Ерохин А.И., Ерохин С.А. Современное состояние козоводства в мире // Овцы, козы, шерстяное дело. 1999. - N2. - С.38-40.

18. Иванова З.И. Иммуногенетический мониторинг популяций крупного рогатого скота Якутии // Автореф. дисс. докт. биол. наук. Якутск-1998-48с.

19. Иолчиев Б.С. Эффективность использования быков-производителей черно-пестрой породы разного племенного достоинства // Дисс. канд. с.-х. наук. Дубровицы. 1994. - 125с.

20. Иолчиев Б.С., Стрекозов Н.И., Марзанов Н.С., Зиновьева Н.А. Популяцион-но- генетический анализ белков молока у различных видов сельскохозяйственных животных // Методические рекомендации. Дубровицы. 2001. - 28с.

21. Кестер В. Вступительная статья // Бюллетень Стратегии.-1998. N9. - С Л-8.

22. Кленовицкий П.М., Моисейкина Л.К., Марзанов Н.С. Цитогенетика сельскохозяйственных животных. Научное издание. Элиста. "Джангар" 1999. - 141с.

23. Концепция развития козоводства в Российской Федерации на период 19982005 годы. Ставрополь. 1998. - 22с.

24. Красавцев Ю.Ф. Генетический мониторинг в популяциях домашней свиньи. Нижний Новгород. 2001. - 186с.1. US

25. Крепень Ж. Коза, ея история, разведете, ея благодъяшя. М. Изд-во "Музей птицеводства". 1912. - 248с.

26. Кугенев П.В., Барабанщиков Н.В. Практикум по молочному делу. М. Аг-ропромиздат. - 1988. - 223с.

27. Кэмпбелл Дж. Р., Маршалл Р.Т. Производство молока. Москва. "Колос". -1980.- 670с.

28. Марзанов Н.С., Эрбутаев А.К. Изготовление моноспецифических сывороток для изучения групп крови у коз. Научные достижения молодых ученых сельскохозяйственному производству: Тез. докл. Ставрополь.-1985. - С.66-67.

29. Марзанов Н.С. Иммунология и иммуногенетика овец и коз. Кишинев: Штиинца. 1991. - 238с.

30. Марзанов Н.С., Люцканов П.И., Имбаев С.М. и др. Антигены групп крови у коз оренбургской породы //1 Межд. конф. по частной генетике с-х. ж/х. Аска-ния-Нова. 1993. - 1с.

31. Марзанов Н.С. Физиологические маркеры крови овец и коз: теоретические и прикладные аспекты их применения // Автореф. дис. докт. биол. наук. Дубро-вицы. 1994. - 37с.

32. Марзанов Н.С., Булаева К.Б., Магомадов Т.А. О сохранении генофонда редких исчезающих пород овец и коз // Проблемы сохранения редких пород домашних животных и близкородственнных диких видов. Труды I Росс.- Укр. межд. конф. Пущино. 1996. С.48-49.

33. Марзанов Н.С., Магомадов Т.А. Генетический мониторинг у овец и коз // Овцы, козы, шерстяное дело. 1996. - N1. - С.27-31.

34. Марзанов Н.С., Канатбаев С.Г. Проблемы сохранения биоресурсов домашних животных // Тез. докл. Междун. науч.- практ. конф., посвящ. 10-лет. независ. Республики Казахстан. Уральск. 2001. - С. 173-174.

35. Матоушек Й. Группы крови у крупного рогатого скота. М. Урожай. -1964. -148с.

36. Машуров A.M. Генетические маркеры в селекции животных. М. Наука. -1980.-320с.

37. Машуров A.M. Динамика аллелофонда В и С - систем групп крови у красно-пестрого скота Голландии при кроссбридинге и программа его сохранения // Сельскохозяйственная биология. - 1999. - N2. - С.38-46.

38. Машуров A.M., Сухова Н.О., Царев P.O., Тхань Х.Х. Алгоритмы иммуно-биохимической генетики. Новосибирск. 1998. - 112с.

39. Меркурьева Е.К. Генетические основы селекции в скотоводстве. М. "Колос". 1977. -239с.

40. Оливан М.П. Зоология. Позвоночные. Москва. Росмен. 1999. С.84-85.

41. Охапкин С.К., Захаров В.М., Хрунова А.И. и др. Сохранение генофонда редких и исчезающих пород крупного рогатого скота. Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве. ВНИИ плем. Москва. 1997. - С.98 - 105.

42. Плохинский Н.А. Математические методы в биологии. М.: МГУ.-1978.- 265с.

43. Попов Н.А., Ескин Г.В. Аллелофонд пород крупного рогатого скота по ЕАВ -локусу. -М.-2000.-299с.

44. Саморуков Ю.В. Сохранение и рациональное использование генофонда красной горбатовской породы крупного рогатого скота // Автореф. дисс. канд. с.-х. наук. Дубровицы. 2001. -26с.

45. Серебровский А.С. Генетические основы селекции.- В кн.: Племенное дело в крестьянском хозяйстве. М.: Книгосоюз. 1928.-С.15-2 8.

46. Сороковой П.Ф., Кязымов С.Б. Сравнительные иммуногенетические исследования групповых, эритроцитарных антигенов у крупного рогатого скота и кавказских буйволов // Генетика. 1969. - N4. - С.44.

47. Сороковой П.Ф., Букаров Н.Г., Загдсурен Е. Группы крови у монгольского скота, яков и гибридов//Генетика. 1982. -N2. - С.306-312.

48. Столповский Ю.А. Консервация генетических ресурсов сельскохозяйственных животных: проблемы и принципы их решения. М.-1997.-109с.

49. Сулимова Г.Е. Молекулярно-генетический анализ генома животных и человека с использованием ДНК-маркеров // Автореф. дис. докт. биол. наук. Дуб-ровицы. 1998. - 50с.

50. Сухоруков Е. Породы молочных коз // Молочное и мясное скотоводство. -1995а. -N6. -С.25-26.

51. Сухоруков Е. Как выбрать хорошую молочную козу // Молочное и мясное скотоводство. 19956. - N5. - С.44-47.

52. Тимофеев-Ресовский Н.В., Яблоков А.В., Глотов Н.В. Очерк учения о популяции. М.: Наука. 1973. - С. 164.

53. Тихонов В.Н. Использование групп крови при селекции животных. М. Изд-во "Колос". 1967.- 392с.

54. Урусов С.П. Коза, ее разведение, содержание и хозяйственное значение. М. Изд во "Воскресенье" . - 1992. - 113с.

55. Федеральная программа Российской Федерации по сохранению генофонда малочисленных пород сельскохозяйственных животных. М. 1994. -74с.

56. Фомичев Ю.П., Марзанов Н.С. Некоторые направления генетических исследований в животноводстве Российской Федерации // Тез.докл. Межд.конф. "Экол.-генет. пробл. жив-ва и экологич. без.технол.произ. прод. питания". Дубровицы. 1998. - С.71-74.

57. Эрнст J1.K., Дмитриев Н.Г., Паронян И.А. Генетические ресурсы сельскохозяйственных животных в России и сопредельных странах. Санкт-Петербург. 1994. - 473с.

58. Agriculture and Biodiversity. Questions and Answers. 1997. - N2. - 36p.

59. Alderson L. The categorisation of types and breeds of cattle in Europe // Arch. Zootec. 1992. - Vol.41 (extra). - P.325-334.

60. Alichanidis E., Polychroniadou A. Special features of dairy products from ewe and goat milk from the physicochemical and organoleptic point of view // Production and utilization of ewe and goat milk. Crete. Greece. 1995. - P.21-43.

61. Barker J.S.F., Bradley D.G., Fries R. et al. An integrated global programme to establish the genetic relationships among the breeds of each domestic animal species // Report of a Working Group. FAO. Rome. 1993. - 28s.

62. Bowen J. More on blood typing // Dairy Goat Journal. 1992a. - May. - S.139.

63. Bowen J. The purpose of any random sampling program is to identify errors and protect the integrity of the registration / recordation process // Dairy Goat Journal. -1992b. May. - S.189.

64. Bowen J. Blood typing can also be used to confirm parentage on ofspring resulting from artificial insemination or emryo transfer // Dairy Goat Journal. 1992c. -August. - S.307.

65. Clarke S.W., Tucker E.M., Hall S.J.G. Genetic polymorphisms and their relationships with inbreeding and breed structure in rare British sheep: The Portland, Manx Soghtan and Hebrideant. Conservation Biology 1989. - Vol.3. - N4. - P.381-388.

66. COGNOSAG Workshop Report // Animal Genetics. 1992. - Vol.23. - N2. -P.188-192.

67. Ehrlich P., Morgenroth T. Uber hemolysine. 3. mittelung // Berl. Klin.Wochenschr. 1900. - Bd.37. - S.453-458.

68. Ellory J.C., Tucker E.M. Active potassium transport and the L and M antigens sheep and goat red cells // Biochem. Biophys. Acta.- 1970. Vol. 219 - P. 160-168.

69. Esteban Minoz C., Tejon D. Raza Merina. In : Catalogo de Razas autoctonas Espanolas. I - Especies ovina у caprina ( ed. by Ministerio de Agricultura, Pesca у Alimentacion )//Direccion general de la Produccion Agraria.Madrid.- 1985. - P.79-88.

70. Faure О. Reproducteurs: Le controle defiliation se meten place // La Chevre. -1991.-N182-P. 26-29.

71. Fehilly C.B., Willadsen S.M., Tucker E.M. Interspecific chimaerism between sheep and goat // Nature. 1984. - Vol.307. - N16. - P.634-636.

72. Fesus L., Varkonyi J., Ats A. Biochemical polymorphisms in goats with special reference to the Hungarian native breed // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. -1983.-Vol.14. -P. 1-6.

73. Gall C. Goat production. London etc. 1981. XIX. - 619s.

74. Gasparsky J. Investigations in the blood groups Wisents and hybrids in comparison with the blood groups of cattle // Proc. IX European animal blood groups conference. Prague. 1965. - P.93.

75. Gasparsky J. The futher investigations of the Wisents and hybrids red cell antigens // Polymorphysms biochimiques des animaux. X Congr. european sur les groups sangins. Paris. - 1967. - P. 148.

76. Genetique et lait de chevre // INRA Science. 1996. - S.4.

77. Gray A.P. Mammalian Hybrids. A check-list with bibliogrhaphy. England. Commonwealth Agricultural Bureaux. Farnham Royal. Bucks. 1972.

78. Grosclaude F., Ricordeau G., Martin P., Remeuf F., Vassal L., Bouillon J. Du gene au fromage: le polymorphisme de la caseine asl caprine, ses effets, son evolution. INRA Prod.Anim. 1994. - Vol. 7. - N.l. - P.3-19.

79. Haeringen H.V. Applied genetics in animal husbandry. Vilnius. - 2001. - 18p.

80. Hammond K., Leitch H.W. The FAO global program for the management of farm animal genetik resources. Paper presented at: Biotechnology's Role in the genetic improvement of farm animals. Beltsville. MD. US. 1995.

81. Hayashi Т., Amano Т., Yasuo N., Hayasaka Y. Production and usefullness of the monoclonal antibodies against goat erythrocyte antigens // Jpn. J. Zootech.Sc. -1990. Vol.2-P.139-144.

82. Haenlein G.F.W. Nutritional value of dairy products of ewe and goat milk // Production and utilization of ewe and goat milk. Crete. Greece.-1995.- P. 159-178.

83. Hodges J. Editorial // EAAP News. 1998. - N55. - P.163-165.

84. Israeli scientists develop new farm animal //Sheep Breeder. 1983. - Vol.103. -N12.-P.124-125.

85. Kusakin I., Zakharov L., Marzanov N. Current and prospective situation in sheep and goat breeding in Russia. Sheep and goat production in central and eastern european countries. FAO. Rome. 1998. - Ser.50. - P.244-249.

86. Lauvergne J.J., Renieri C., Audiot A. Estimating erosion of phenotypic variation in a French goat population // Heredity. 1987. - Vol. 78. - N 5. - P.307-314.

87. Lauvergne J.J., Dolling C.H.S., Renieri C. Mendelian inheritance in sheep 1996 (MIS 96). Camerino. Italy. 1996. - 214s.

88. Lee Т.Н., Shimazaki K., Yu S.L. et al. Polymorphic sequence of Korean Native goat lactoferrin exhibiting greater antibacterial activity // Animal Genetics. 1997. -Vol.28. -P.367-369.

89. Luikart G., Biju M-P., Ertugrul O., Zagdsuren Y., Maudet C., Taberlet P. Pawer of 22 microsatellite markers in fluorescent multiplexes for parentage testing in goats (Capra hircus) // Animal Genetics. 1999. - Vol.30. - P.431-438.

90. Martin P. Polymorphisme genetique des lactoproteines caprines // Lait. 1993. -Vol.73. -P.511-532.

91. Martin P., Addeo F. Genetic polymorphism of casein in the milk of goats and sheep // Production and utilization of ewe and goat milk. Crete. Greece. 1995. -P.45-58.

92. Martin P., Grosclaude F. Improvement of milk protein quality by gene technology // Live. Prod. Scie. 1993. - V.35. - P. 95-115.

93. Marzanov N.S., Iolchiev B.S., Marzanova L.K.,Chalaia E.A. Genetic markers at goats // XXVII Intern.Conf. on Animal Genetics. Minneapolis. USA. 2000. - P.4.

94. Marzanov N.S. State and prospects of merino sheep breeding in the Russian Federation // Proceedings of the 6th World Merino Conference "Natural Fibre and Food for the World". Budapest. 2002. - P.44-49.

95. Marzanova L.K., Ekimov A.N., Marzanov N.S., Puschkarev N.N., Marzanov Y.S., Nasibov M.G. The Orenburg breed goats blood groups // XXVIII Intern. Conf. on Anim. Genet. .Goettingen. Germany 2002.

96. Mason I.L. Evolution of domesticated animals. 10. Goat. Longman. London / New York. 1984. - P.85-99.

97. Mitchell M. Inheritance of coat color // Dairy Goat J. 1983. - Vol.67. N 7. -P.494-496; 61.

98. Nesse L.L., Larsen H.J. A practical method for production of antibodies against goat lymphocytes antigens // XXth International conference on animal blood groups and biochemical polymorphism. Helsinki. 1986. - P.37.

99. Nesse L.L. Immunogenetic studies in goats. Oslo. 1989 P.25.

100. Nguyen T.C., Boulanger A., Raynaud C. Les groupes sanguins et le polymor-phisme des proteines du sang en espece caprine // Journess de la Recherche Ovine et caprine. SPEDE. Paris. 1975. - Vol.1. - P. 109-118.

101. Nguyen T.C. Further investigations on the relationships between blood groups of sheep and goats // Anim.Blood Groups Biochem. Genet.- 1977. Vol.8. - N1. -P.11-12.

102. Nguyen T.C. Genetic systems of red cell blood groups in goats // Animal Genetics. 1990. - Vol.21. - P. 133-245.

103. Odermatt K. Blutgruppen und biochemisch polymorphe Systeme bei der Tog-genburger - und Bundner - Strahlenziege // Thesis. University of Bern. Switzerland. -1973.

104. Ollivier L., Bodo I., Simon D.L. Current developments in the conservation of domestic animal diversity in Europe // Proc. 5th World. Congr. Genet. Appl. Livestock Prod. 1994. - Vol.21.-P.455-461.

105. Osterhoff D.R., Schmid D.O., Schoeman S.M. The stability of genetic markers as identified in goat // S. Afr.J.Anim. Sci. 1987. - Vol.17. - N3. - P. 133-137.

106. Osterhoff D.R. Studies on blood groups and biochemical polymorphisms in goats // Arch. Tierz., Dummersdorf. 1995. - Vol.38. - N5. - P.553-561.

107. Park Y.W. Hypo allergenic and therapeutic significance of goat milk // Small Ruminant Research. - 1994. - Vol. 14. - P. 151-159.

108. Pepin L., Nguyen T.C. Blood groups and protein polymorphisms in five goat breeds (Capra hircus) // Animal Genetics. 1994. - Vol.25. - P.333-336.

109. Pingel H. Die Hausziege. A Ziemsen Beolag. DDR 4600 Wittenberg Lufher-stadt. - 1986. - S.9-107.

110. Randi E., Tosi G., Tosos S. et al. Genetic variability and conservation problems in Alpine ibex, domestic and feral goat populations ( genus Capra ) // L. Saugetierkunde. 1990. - Bd.55. - S. 413-420.

111. Paterson G.R., MacGibon A.K.H., Hill J.P. Influence of к casein and (3 -lactoglobulin phenotype on the heat stability of milk // International Dairy Journal. -1999. - Vol.9. -P.375-376.

112. Rasmusen B.A., Hall I.G. An investigation into the association between potassium levels and blood types in sheep and goats // Xth European Conference on Animal Blood Grps and Biochem. Polimorph. Paris. 1966. - P. 453-457.

113. Rasmusen B.A. Goat serum as sorse of anti О antibodies for typing red blood cells of pigs and sheep // XVIth international conference on animal blood groups and biochemical polymorphism. USSR. Leningrad.- 1979.- Vol.3. - P. 104-108.

114. Rasmusen B.A. Blood Groups Polimorphisms // In: Hutt F.B., Rasmusen B.A. Animal Genetics. 2-nd ed. John Wiley and Sons. 1982. - Chapter 21. - P.488-507.

115. Report on the 1986 Goat Comparison Test // Animal Genetics. 1987. -Vol.18. -NI. -P.100-101.

116. Ricordeau G. Genetics: Breeding Plans // In : Gall C. Goat production. London etc. 1981. -P.132.

117. Roychoudhury А.К., Nei M. Human Polymorphic genes. World distribution. Oxford. 1988. - P. 3-20.

118. Serotec product guide. 1998. - 136p.

119. Shand H. Human Nature: agricultural biodiversity and farm based food security. RAFI. - 1997. - 94s.

120. Schmid D.O., Suzuki S. Uber Bluttgruppen bei Ziegen // Zbl.Vet. Med. B. -1971. Bd.18. - S.604-609.1. CS

121. Schmid D.O., Kunz H. J w, eine genetische Variante im Blutgruppensystem der Ziege // Zbl. Vet. Med. B. 1975. -Bd.22. - S.130-137.

122. Schmid D.O., Odermatt K., Kunz H. Vergleichende Analyse der Bluttgruppen und einiger polymorphen Proteinsysteme bei funf versciedenen Ziegenrassen der Schweiz // Schweiz. Arch. Tierheilk. 1975. - Bd.l 17 - S.31-43.

123. Schmid D.O., Suzuki S. Animal blood group research; today and future in West Germani and Japan // J. Agr. Sc. Tokyc, Nogyc Daigaku. 1980. - Vol.25. - N.2. -P.91-112.

124. Schmid D.O., Buschman H.G.Blutgruppen bei Tieren.-Stuttgart. 1985. - Р.ЗОЗ.

125. Simon D.L., Buchenauer D. Genetic diversity of European livestock breeds. EAAP Publication. 1993. - N66. - 58lp.

126. Simos E., Voutsinas L.P., Pappas C.P. Composition of milk native Greek goats in the region of Metsovo // Small Ruminants Research. 1991. - N4. - P.47-60.

127. Smithes O. Zone electrophoresis in starch gel, group variations in serum pro-teine of normal human adults // Biochem.J. 1955. - Vol.61. - P.629-641.

128. Smithes O. Variations in human serum P globulins // Nature. - 1957. - Vol. 180. - N.5600. - P.1482-1483.

129. Storry J.E, Grandison A.S., Millard D., Owen A.J., Frod G.D. Chemical composition and coagulation properties of reneted milks from different breeds and species of ruminant // J. Dairy Res. 1983. - Vol.50. - P.215-229.

130. Stone W., Irwin M. Blood groups in animals other than man // Advances Immunology. 1963. - Vol.3. -P.315.

131. Stormont C., Suzuki Y. The distribution of Forssman blood factors in individuals of various Artiodactyl species // J. Immunol. 1958. - Vol.81. - P.276.

132. Stormont C., Suzuki Y. Blood group comparions of cattle, sheep and goats // Immunogenetics Letter. 1961. - Vol. 2. - P.48-49.

133. Suzuki Y., Tanaka K., Watanabe S. Studies on the goat blood groups and their inheritance mode // Zeitschr. Tierzuchtuhg Zuchtungs Biol. - 1960. - Vol.47. -P.2236-247.

134. Suzuki Y., Stormont C. The I system of goat // Immunogenetics Letters. -1961,-Vol.2.-P.67- 68.

135. Suzuki Y., Stormont C. Additional notes on the J system of goat // Immunogenetics Letter. - 1962. - Vol. 2. - P. 139.

136. Suzuki S. Hematological studies on goats // Memoirs of the Tokyo University of Agriculture. 1963. - Vol. 7. - P. 11 -31.

137. Suzuki S., Watanabe S. Studies on the serological constitution of goats // Proc. XXth Europ. Conf. on Animal Blood Groups Biochem. Polymorphism. Warsaw. -1968. -P.513-515.

138. Tucker E.M. Genetic markers in the plasma and red blood cells // In : The blood of sheep; composition and function, ed. by M.H.Blunt.Springer Verlag. -1975. P.123-153.

139. Tucker E.M., Clarke S.W. Comparative aspects of biochemical polimorphism in the blood of Caprinae and their hybrids // Anim. Blood Groups biochem. Genet. 1980. Vol. II. -N3. -P.163-183.

140. Tucker E.M. Genetic interactions in the phisiology of sheep red cells // In: Papers dedicated to Professor Johannes Moustgaard on the occasion of his seventieth birthday the 26th of September. Copenhagen. 1981. - P. 199-207.

141. Tucker E.M., Clarke S.W., Osterhoff D.R., Groenewald J. An Investigation of five genetic loci controlling variants in the red cells of goat//Anim. Blood Groups and Biochem. Genet. 1983. - Vol.14. - P.269-277.

142. Tunon M.J., Gonzales P., Vallejo M. Erythrocyte potassium polymorphism in 14 Spanish goat breeds // Animal Genetics. 1987. - Vol.18. - N4. - P.371-375.

143. Van Dam R.H., Borst van Wekhoven C., Van Dam Knubben G.J.M.S. et al. The production and evaluation of alloantibodies for tissue typing in goats (GLA typing ) // J. of Immunogenet. - 1976. - Vol.3. - P. 237-244.

144. Van Dam R.H. The major histocompatibility complex of the goat. Definition and some aspects of its biological function. 1981. - 127p.

145. Van Dam R.H., D'Amaro J., Van Kooten P.J.S., Van der Donk, Goudswaard J. The Histocompatibility comlex GLA in the goat // Anim. Blood Groups and Bio-chem. Genet. 1979. - Vol.10. - P. 121-124.

146. Vaiman D., Pailhous E., Schibler L. et al. Genetic mapping of the polled/intersex locus(PIS) in goats // Theriogenology. 1997. - Vol.47. - P.103-109.

147. Vankan D.M., Bell K. Caprine blood groups. 1. The В system // Biochemical Genetics. 1993a. - Vol.31. - N1/2. - P.7-17.

148. Vankan D.M., Bell K. Caprine blood groups. 2. The C, G, H, I, J, K, L, N and Q systems // Biochemical Genetics. 1993b. - Vol.31. - N1/2. - P. 19-28.

149. Wang K. On the new blood groups Z 41 and Z 42 of goats by immune agglutinins // Jap. J. Genet. 1950. - Vol.25. - P.47.

150. Watanabe S., Suzuki S., Nozawa K. Studies on the transferrin of goat. Typing of transferrin of goat serum by starch gel electrophoresis // Proceedings Japan Aca-demiy. 1965. - Vol.41. - P. 326-341.

151. Wymazala S., Roborzynski M., Kowalski Z. Koza cennym producentem mleka. Uzytkowanie mleczne oraz wlasciwosci fizyko-chemiczne i odzywcze mleka koziego // Biul. Inform. 1984. -N4-5. -S.99-118.

152. Zhao S.L., Yang L., Li M. et al. Analysis of genetic variation among five Chinese indigenous goat breeds by using bovine and ovine microsatellites // XXVII In-tern.Conf. on Animal Genetics. Minneapolis. USA. 2000. - P.3.