Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Химическая и функциональная гетерогенность мест связывания имипрамина на тромбоцитах человека

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Химическая и функциональная гетерогенность мест связывания имипрамина на тромбоцитах человека"

Я Л а * Щ

1йишстерство здравоохранения СССР Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гематологии и переливания

крова

На правах рукописи

ФОМЕНКО Андрей Михайлович

УДК 616.895.&-07

ХИМИЧЕСКАЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ МЕСТ СВЯЗЫВАНИЯ ИШПРАМИНА НА ТРОМБОЦИТАХ ЧЕЛОВЕКА

03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации ка соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 138?

: ^ Министерство здравоохранения СССР Центральной Ьрдеиа Ленива и ордена Трудового Краоного Знамени научно-иосл^дователъокиЯ институт гематологии и переливания т : крови

На правах рукописи

ФОМЕНКО Андрей Михайлович

УДК 616.895.8-07

ХИМИЧЕСКАЯ И «УШЩЛОНШНАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ МЕСТ СВЯЗЫВАНИЯ ИМКПРАМИНА НА ТРОМБОЦИТАХ ЧЕЛОВЕКА

03.00.04 - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой отепени кандидата биологических наук

Москва - 1987

Работа выполнена в Институте клинической психиатрии ВНЦ ПЗ АШ СССР.

Научный руководитель - кандидат биологических наук О.С.Ерусов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор В.А.Шестаков; кандидат биологических наук В.В»Рожанец.

Ведущая организация - МГУ 'им. М.В.Ломоносова

Защата состоится ______________ 198 г. в_часов на заседают Специализированного совета К 074.08.01 в ЦНИИ гематологии и передавания крова по адресу: I25I67, Москва, Новозыбковский пр.. До- 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНИИ гематологии а пермявавзш крови. ,

Автореферат разослав Я> А iss&r.

УчёяиЗ секретарь Специализированного совета кандидат биологических наук

В.Д.Реук

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Выявление биологических основ психически* заболеваний является одной из важнейших задач биологической психиатрии. Эта задача может выть решена на основе детального изучения функционирования различных нейроналышх систем. В настоящее время считается общепризнанным, что нарушения деятельности серотони-новой системы являются ведущими а патогенезе некоторых депрео-сивных состояний. В пользу этого свидетельствуют данные о значительном снижении содержания серотонина ¡г его основного метаболита - 5-окоииндолукоусной кислоты - в тканях'мозга и спинномозговой жидкости депрессивных больных (Post R. М., i960, Й s 6 е т <} М. , I 9 5 Ч •, В е s (г о Г. , i 9 Г6 ) f

а также данные о том, что антиделресййшый эффект различных препаратов коррелирует с их способностью при хроническом применении повышать функциональную активность этой системы.

Важным звеном регуляции активности серотониповой системы является модуляция скорости обратного захвата серотонина, контролируемая местами специфического связывания ишпрамина. До недавнего времени считалось, что трициклические антидепрессйй-ты взаимодействуют с гомогенной популяцией мест связывания, однако в настоящее время показано, что специфическое связывание ишпрамина (ИМИ) с рецепторами имеет сложный бифезный характер. На этом основании было высказано два предположения о том, что имипрамииовые рецепторы либо гетерогенны, либо представляют собой гомогенную популяцию специфических мест, находящихся в разных жшформациошгах состояниях, В связи о этим встал вопрос о детальном изучении их химической природы, как необходимой предпосылке для выявления их функциональной роли. Отсутствие данных но этой теме и определило цели я задачи нашего исследования.

- 2 -

ЦЕЛЬ ,И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ?

Целью настоящей работы является выявление особенностей строения участков узнавания высоко- и низкоа^финных мест связывания ИМИ»

Исходя из цели исследования были поставлены следующие задаче?

I/ разработать метод раздельного определения высоко- и яизкоаффинных мест связывания ИМИ на основе их различной чувствительности к ионам щелочных металлов;

2/ с помощью метода химической модификации выявить амино- . кислотные остатки и функциональные группы, входящие в состав участков узнавания и участвующие во взаимодействии ТО с: а/ высокоаффинными местами связывания, б/ низкоаффанными местами связывания;

3/ выявить структурные особенности соединений, определяющие их способность взаимодействовать с местами связывания ИМИ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА,К ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ,

Разработан метод раздельного экспериментального определения плотности высоко- и нязкоаффинных мест связывания ИМИ на тромбоцитах человека» .

Отработана методика селективной модификации ¿Н, СООН-'в ГРУПП и аминокислотных остатков метионина, гистиди-иа# аргинина в тирозина на мембранных препаратах тромбоцитов в условиях, не вяиотпс на функциональную активность высоко- и кизкоаффинных мест связывания ЮТ, Установлено, что участки узнавания этих мест отличаются во химическому составу входящих в них функциональных групп и аминокислотных остатков»

На основе анализа структур психотропных соединений выявлено существование общзЗ для всех исследованных соединений кой-

формации, которая либо реализуется в процессе взаимодействия молекул о высокоаффинным акцепторным участком, либо является единственно возможной для них; при этом расстояние между центром фенильного ядра и атомом азота составляет 0,56 нм. Для того, чтобы вещество обладало высоким сродством к этим акцепторным участкам, необходимо также, чтобы расстояние между фе-нильными остатками составляло 0,4' юл. и угол между их плоскостями был равен 110°. На основании всей совокупности полученных в данной работе данных предложена модель строения участков узнавания высокоактивных мест евяэывагшя ИМИ»

Разработанные в настоящей работе методйки раздельного определения плотности высоко- и иизкоаЛфияных мест связывания И?.!И и химической модификации мембран тромбоцитов могут быть использованы в лабораторной практике для изучения молекулярных механизмов действия 'иМИ и других трициклических антидеярессен-тов, а также для дальнейших исследований, направленных на определение роли различных мест связывания ИМИ в функционировании серотониновой системы в норме я патологии. Предложенная модель участка узиагонил высокоактивных мест связывания ИМИ может оказаться полезной для первичной предикции антидепрессивной активности различных соединений и подготовки рекомендаций по направленному синтезу новых антидепрессантов«

Апробация диссертации. Материалы диссертации были изложены на 1У Всесоюзном биохимическом съезде (1986г., Киев) и на У1 Съезде Европейских Нейрохимических обществ в г.Праге (1386г^в на межлабораторной конференции НКИ клинической психиатрии и НИИ мозга ВИЦ психического здоровья АМН СССР и конференции молода ученых центра, а также на меалзбораторяой конференции ЦОЛНШ Гематология я переливания крови»

Структура и объем работы» Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения. Материалы изложены на 136 страницах машинописного текста, содержат 5 таблиц и 23 рисунка. Библиографический указатель содержит 206 ссылок.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

I. Объект исследования. Работа была выполнена на мембранах тромбоцитов человека, выделенных по стандартной методике ( langet $.1,1390). Полученные препараты мембран хранили до использования при -70°С не более месяца.

В. Определение специфического связывания истпрамина. Для раздельного определения характеристик взаимодействия ®Н-ИМИ с высоко- и низкоаффинными местами был разработан метод, основанный: на //а-зависимости высокоаффинных мест связывания этого ли-ганда. Замена в среде инкубации ионов /Уа на ионы U приводит к полной инактивации высокоаффинных меот,- в то время как способность КШ взаимодействовать о низкоаффинными местами остается неизменной. На основании этих данных суммарное связывание ®Н -ИМИ (высокоаффанное шшо низкоаффинное) определялось в среде, содержащей 120 ыМ fJ&Ql в присутствии и отсутствии 100 мкМ не-шчекного ИШ, низкоаффинное связывание - в среде, содержащей 120 мМ U Qt в присутствии и отсутствии 100 мкМ немеченного ли-гаяда, е высокоаффннное связывание ИШ вычислялось как разность в связывании ®Н-1йй в Л'а- и Li -содержащих средах.

Объем инкубационной среда составлял 600 мкл. При проведении экспериментов по химической модификации мембран и определена вытесняющей способности различных соединений концентрация аечеиного ЙИ составляла 5 нМ; при определении константы дисоо-циацин к какскмальвого числа игст связывания %-ИМИ использовали

меченный лиганд в: концентрации от 0,5 до 80 вМ. Свободная я связавшаяся о мембранами метка разделялась фильтрацией яа стеклянных фильтрах ÇF/B ("Wbotman", Англия).

3. Химическую модификация» мест специфического связывания имигтрамина на мембранах тромбоцитов человека проводили с помощью реагентов, способных в определенных условиях взаимодействовать о теми или иными аминокислотными остатками белка. Модификации мембран реактивом Зллмана (5мМ J и дитиотреитолом (10 мГЛ) проводили в течение I чаоа в í/а-содержащей среде. При моди-> фикации мембран тромбоцитов йодацетамидом (5 Ш) реакцию проводили в 66 мМ Уа-фосфатном буфере, рН 8,0, в течение I часа. Карбоксильные группы модифицировали карбодаимидом в присутствии или отсутствии амида глицина (10 мМ)в 66' мИ Л/а-фосфатном буфере при рН 5,0 и 7,5 в течение I часа. Обработку мембрая фе-нилглиоксалем (10 мМ) проводили в 50 мМ бсратном буфере, рН 8,5, в течение 30 мин. Модификацию мембран тетранитромотаном (10 мМ) осушествляли в 50 мМ боратном буфере, pli 8,0, а течение I часа. Аминогруппы модифицировали 2,4,6»трИ1штробензолсульфокислотой (5 мМ) в 50 мМ боратном буфере, рН 9,0, в течение получаса. Все реакции модификации проводили при 23°С. После инкубации реагента о мембранами непровзалмодейотвовавший реагент двавда отмывали. Степень химической модификации определяли при указанной предельной концентрации реагента по изменению величины специфического связывания ^-КМИ» Предельной концентрацией реагента считалась такая концентрация, при которой дальнейшее ее увеличение не вызывало изменения величины специфического связывания. При химической модификации в присутствии протектора мембраны тромбоцитов предварительно инкубировали с 0,5 мШ намеченного ИМИ, после чего добавляли модифицирующий реагент» Езда s этой случае ин-гибирувдее действие реагента на специфическое связывание ШЯ

- б -

предотвращалось, то считали, что данный аминокислотный остаток входит в состав учаотка узнавания. При проведении химической модификации йодацетамидом, 2,4,б-тринитробензолсульфокислотой, тетрааитрометаном и фенилглиоксалем для предотвращения взаимодействия модифицирующих реагентов с ЗВ-группами, последние защищали обработкой 5 мМ реактивом Эллмана в течение часа. После инкубации с одним из используемых реагентов защитные группировки снимали восстановлением 10 мМ дитиотреитолом (I час ) .

4. Анализ конформации психотропных соединений проводили с помощью компьютерной программы, разработанной в лаборатории вейрохимии Инотитута мозга ВВД психического здоровья АИ!Н СССР, и моделей Драйдинга. При этом измеряли диапазоны возможных расстояний между центрами фенильных остатков (1-й и 3-й дескрипторы), между центром фенильного остатка и положительно заряженным атомом азота (2-й дескриптор) и углы между плоскостями фенильных остатков.

5. Статистическую обработку данных проводили на персональных компьютерах 1ВМ РС ДТ и 3008. Величину специфического связывания определяли как среднее арифметическое из, по крайней .мере, трех независимых экспериментов, при этом в каждом эксперименте определяли величину общего и неспецифического связывания в трех и более параллелях. Ошибки измерения определяли как стандартные ошибки среднего значения. Построение графиков

в координатах Скетчарда и ецределение параметров связывания проводила по методу наименьших квадратов. При этом средние значения константы диссоциации и максимального числа мест связывания вычисляли, по крайней мере, из двух экспериментов.

Для оценки достоверности различия величин использовали не-зараметрическай ранговый критерий Вилкоксова.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

V.__

1«пФармакологические свойства мест связывания ИМИ. Графическое представление результатов анализа зависимости специфического связывания %»ИМИ от концентрации меченного лиганда в диапазоне 0,5 — 80 нМ » координатах Скетчарда имеет вид бифаз-ной кривой (рис. I и 2, кривые I,1. Разложение этой кривой о помощью графического метода Розенталя привело к выявлению двух компонент связывания с константами диссоциации (Кц) и максимальным числом мест связывания ?Вмакс ) , равными 0,52+0,08 нИ и 101+15 нМ, и 1670+253 фмоль/мг белка и 8000+479 фмоль/мг белка соответственно дяя высоко- и низкоаффикных компонент связывания %-ККИ (рис Л, кривые 2 н 3) . Определение параметров сзязыва-'ния на основе /У а-эависимости высокоаффишшх мест привело также к выявлению двух гомогенных популяций мест связывания ЮлИ- с Кд » 1,00+0,12 и 144+21 нМ и 2196+212 и 7500+840 фмоль/

мг белка соответственно для высоко- я йизкоаффинных мест (рио.2, кривые 2 и 3), что хорошо согласуется о параметрами компонент связывания, полученными при графическом разложении.

Для выявления закономерностей взаимосвязи отруктуры веществ с их способностью ингибировать связывание И.",51 определяли конотан-ты ингибирования (К1) некоторых веществ (табл.1). Из таблицы следует, что существует зависимость между структурой соединений и их способностью взаимодействовать о высокоаффишшки местами связывания. Вещества, обладающие одним Фенильным ядром, практически не взаимодействуют с местами связывания У.Ш 1Н- (п -азидофена-цил)триметиламмоний бромид]. Для сальсолина и оеротонина, имеющих бивдклическув структуру, К1 лежит в шкромолярной области. Соединения трициклического строения с ненасыщенными циклам? [тетрагидро-р-карболины (ТГБК) ] , также обладают пониженным сродством к местам специфического связывания ИМИ, при этом

Ъ/? X 1СГ2, 4иояь/мг«вИ

В х КГ3, фмолв/мг

Рве, I, Высоко- /2/ в низкоаффинные /3/ компонента специфического связывания яюшрамина, определенные методом графического разложения экспериментальной кривой /1/, По оси абсцисс: В- связанная метка; по оса ордаат: отнозепие связанной (Ъ) я свободной (7) иетю

Ъ/? х Ю-2, фмоль/мг.нМ

0 2 4 6

В х КГ3,

Рис. 2. Висок»- /2/ и низкоаффинноо /3/ специфическое связывание тшграмияа, определенное методом экспериментального разделения. I общее ОСИ.

По оси абсписо: В - связанная метка;

по оси ординат: отношение связанной (В} я свободной (?) метая

введение дополнительных заместителей (метиловый эфир глицин-амида ТГБК-З-карбоксилата ) приводит к радикальному снижению сродства лиганда. Аналогично, введение заместителей в аммонийную группировку алифатической цепи ИМИ также приводит к падению сродства лигандов.

Таблица I.

Ингибирование специфического связывания И?Ж о мембранами тромбоцитов человека различными соединениями

Наименование вещества

К1 (нМ)

Имипрамин N-метилимипрамин

Д/- ( п -азидофенацил) имипрамина бромид Серотония.

1-метил-6-метокси ТГБК Е Салхсолкн

1-мстил-б-окси ТГЕК Метиловый эфир глицинамида ТГЕК-З-карбокскла та М-(п -азидофенацил) триметиламмоний бромид Метиловый эфир фенялаланинамида ТГБК-З-карбоксилата

2,5+0,3 45*12

500+97 1090+123 1600+253 2300+212 3300+172

»•10000

>•100000

Г100000

а ТШС - тетрагидро-^-карболия.

2, Химическая модификация мест связывания И'/И. В обобщенном виде полученные результаты представлены на рис, 3. Модифи-

гй

I

л

Т -1-1--

4.5 6

т в

■Ьт Т Т _г Д

Ш'

р

I 2 3 4 5 6 7

[__]- модификация ^ - модификация в присутствии 0,5 мкй ИМИ

Рио. 3. Влияние химической модификации, направленной по аминогруппе - I, £>Н-группе - 2, СООН-группе - 3, аминокислотным остаткам аргинина - 4, гистидина - 5, тирозина - 6, й-£-овязям - 7 на взаимодействие %-ИМИ с высоко- (А) и низкоаффинными (Б) местами специфического связывания. Контроль принят за ЖГОО#

О

I

кадия SH-, WE^- и СООВ- групп приводила к практически полной инактивации высокоаффинных мест связывания ИШ. Низкоаффинные места оставались функционально активными в случае модификации аминогрупп и инактивироволиоь на 30-40% при модификации SH- п карбоксильных групп.

Прединкубация мембран тромбоцитов о избытком намеченного ИШ предотвращала ингибирование выоокоВДинного связывания под действием реагентов, модифицирующих WHg- и SH-грушш, что ука-вывает на локализацию этих групп непосредственно в участке узнавания высокоаффишшх мест. Высокоаффинные места связывания ИШ гомогенны по своей химической природе«

Низкоаффинные места связывания гетерогенны по- овоей химической природе; в состав одной ва субпопуляций входят функционально важные SH- и группы, тогда как другая субпопуляция 8тих групп не содержит.

Химическая модификация по аминокислотным остаткам тирозина, аргинина, гиотидина и метионина практически ие влияла ва специфическое связывание ®Н-ИШ. Следовательно, данные аминокислотные оотатки не принимают участия в процессах взаимодействия ИМИ со своими местами связывания но мембранах тромбоцитов человека.

Результаты, полученные при изучении влияния направленной химической модификации на специфическое связывание ®Н-ИМИ, позволяют сделать вывод о том, что в оонове функциональной гетерогенности мест связывания ИШ лежат различия в химическом отроения их участков узнавания.

3. Анализ конформаиии соединений, взаимодействуют« о вн-сокоа№иными местами связывания ИШ. проведенный о помощью моделей Драйдинга и компьютерной программы, дал оходные значения для диапазонов возможных расстояний и углов между дескрия-

торами (табл.2) . Наибольшим сродством к высокоаффянным участкам связывания мембран тромбоцитов обладает ИМИ, что свидетельствует о том, что расстояние между первым и третьим деафипто-рами и угол между плоскостями фенильных ядер этого лиганда (соответственно 0,44 нм и 110°) наиболее близки а оптимальным для взаимодействия с данным участком связывания.

В молекуле Ю.М диапазон возможных расстояний между первым и вторым дескрипторами максимален - 0,20 -0,74 ни. Появление двойной связи в молекуле амитриптилина приводит к сужению этого диапазона до 0,20 - 0,60 нм, а в жесткой молекуле ЦБК это расстояние фиксировано и равно 0,56 нм, причем оно является общим для всех исследуемых соединений, то есть все эти вещества могут принимать или находятся в такой конформации, при которой расстояние между первым и вторым дескрипторами составляет 0,56 нм (рис.4) .

Таким образом, проведенный анализ показал, что для веществ, обладающих высоким сродством к высокоаффинным местам связывания ИМИ, характерны следующие особенности строения: наличие двух фенилышх остатков, жестко ориентированных друг относительно друга таким образом, что расстояние.меаду их центрами составляет 0,44 нм, а угол между плоскостями'равен 110®и третичной аминогруппы, расположенной на расстоянии 0,56 нм от фенильного остатка.

На основании совокупности полученных данных предложена модель участка узнавания высокоаффинных мест связывания ИМИ, состоящая из двух гидрофобных зон, образованных, по-видимому, аминокислотными оотатками феншшанина или лейцина, для связывания трициюшческой группировки лигавдов и анионного пункта для связывания заряженной "катионной головки" лиганда (рис.5) .

На молекулярном уровне взаимодействие трициклических авти-

?айица 5

К^ в расстояния ь»евду дескриптора*« для некоторых соединения

Наименование К^ Источник Расстояние кехду Расстояние в угод между вещества (нМ) данных X я 2 дескрипторами (вм) I и 3 дескрипторами (пи)

Киапраиин 3,5 106 0,20 - 0,74 0,44 110°

Аматраптилвн 17,5 144 0,56 - 0,74 0,44 110°

0,20 - 0,60 0,44 Т10°

Флуоксетив 13 144 0,20 - 0,63 -' —

б-Ветокея-ТГБК 62,5 98 0,56 0,44 160°

Серотонин 534 106 0,ЗГ - 0,65 — —

Промаэин 200 162 0,20 - 0,74 0,47 125°

ЙПргндоя 2940 98 0,20 - 0,74 0.48* -

ВчПрОПЕЛЯК 9000 106 0,25 - 0,74 0,47 125°

8 » восьмичленное кольцо нпркндола не является, строго говоря, третьим десхриптором и Езоской струх-урой, поэтому расстояние между первым и третьим дескрипторами может быть определено условно.

S. Амятрштшшн

I 11 I . 3 6, Проыазил

л t ........... i t

3 i

4 ,-1—a

5 ¿-—4

6 б--"' ............[..............i

" 111 u и i ц ■ иц ■ I vi "a i ■ ц »a»

0,1 0,3 0,5 0,7 m

Pboo 4o Расстояния меаду первым и вторым дескриатораш для лз-гаидов» взаимодейотвувдмс о внсояоаффивнша УССЯТ

- Г6 -

.Гидрофобные зоны

0,44 нм

Тч

Анионный пункт

Рио. 5. Схема отроения участков узнавания высокоаффинных МССИ

депрессантов с высокоаффинными местами связывания ИМИ может происходить следующим образомг трициклические группировки молекулы образуют тесный контакт с гидрофобными зонами рецептора, а третичная алифатическая аминогруппа образует за счет электростатического взаимодействия связь с карбоксильной группой белка (вероятно, остатком аопарагиновой или глутаминовой кислот) . Данные по химической модификации карбоксильной группы карбодиимидом в отсутствии амида глицина свидетельствуют о том, что вблизи нее расположена некая нуялеофильная группа. Такой группой может являться обнаруженная нами аминогруппа« Модификация этой группы, расположенной э участке узнавания, либо препятвтвует взаимодействию ИШ с карбоксильной группой, либо изменяет конфораацию рецептора, что приводит к потере его способности связывать лиганд.

Таким образом, в результате проведенных исследований разработан метод экспериментального раздельного определения высоко- и низкоаффинных мест специфического связывания ИМЯ} показано, что в основе их фармакологической гетерогенности лежат различия в химическом строении участков узнавания; предложена модель участка узнавания высокоаффинных мест специфического связывания ИШ.

ВЫВОДЫ.

I. На мембранах тромбоцитов человека показано, что в присутствии 120 мМ NaCl или KaCÍ имипрашн взаимодействует как с высоко-, так и с низкоаффинными вестами связывания, тогда кал в среде, содержащей 120 мМ UCÍ этот лиганд связывается только с нвэкоаЗфшными местами связывания. На это» основании предложен метод раздельного экспериментального определения плотности высоко- и низкоаффянных квот связывания нмипраыина.

2. Высокоаффинные места связывания имипрамина на тромбоцитах человека представляют собой гомогенную в химическом отношении популяцию. СН-, WHg- и СООВ-группы, но не аминокислотные остатки гистидина, аргинина в тирозина, являются функционально важными для взаимодействия %-имипрамипа с этими местами связывания. При атом $В» в N {^-группы входят непосредственно в состав участков узнавания высокоаффшшых мест связывания.

3. Методом химичеокой модификации показано, что низкоаффинвые места связывания кмпрамина на мембранах тромбоцитов человека гете-рогенны в химическом отношении. Часть из них (SO - 40%) содержит $Н- и СООН-грушш, но не аминогруппы и аминокислотные остатки гис-тидана, аргинина и тирозина, участвующие с процессе взаимодействия %-имипрамина с данными местами связывания. Только SH-группы входят в состав участков узнавания это!? субпопудтши низкоаффинных

i

мест связывания. Другая субпопуляция не оодерхит функциональных групп и аминокислотных остатков, модификация которых приводит к сна-женио связывания %-имипрамина с этими местами.

4. На основании изучения влияния химической модификации на специфическое связывание %-имипрашна показано, что в основе фармакологической гетерогенности меот связывания имипрамина летит различие химического строения их участков узнавания.

б. Соединения, взаимодействующие о высокоаффинкыми местами специфического связывания имипрамина на тромбоцитах человека» имеют ряд общих структурных элементов:

а/ наличие липофильного участка, образуемого остатками бензола или иядола;

б/ присутствие положительно заряженной вторичной или трагичной аминогруппы}

в/ существование общей для всех соединений конформалии, которая формируется либо в процессе взаимодействия молекул о акцепторным

участком высокоаффинных мест связывания, либо является дяя них единственно возможной; при этом расстояние между центром фениль-ного остатка и атомом азота составляет 0,56 нм;

6. Предложена структурная модель строения участков узнавания высокоаффинных мест связывания имипрамина на тромбоцитах человека.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Брусов О.С., Лидеман P.P., Фоменко А.М., Катасонов А.В. Ингибиторы обратного захвата серотонияа и специфического связывания имипрамина в плазме крови человека. // Бголл. экоп. биол. мед. 1985. Т.50. С.26-28.

2. Brusov 0.5., Fomenko А.Я., Katasonov'A.B. Inhibition of 'н-lml-pramlne binding end JH-5-HT uptake In human platelet* by som natural Indoleamlne and catecholamine aldehyde condensation product». H Ear. J, Йип». 1SM. V. I0J. P. 191-132.

3. Brusov O.S„, Fomenko Д.Н., Katasonov A.8. Hqraan plasma Inhibitor» of platelet serotonin uptake and Imlpraralne receptor bindings extraction and heterogeneity, it Biol. Psychiatry. 1J85- tf.iO.

p. га-гиг.

k, Fomenko A.H., Demushkln V.P., Plyashkevlch Yu.C., Schurln H.R.,

/

Brusov O.S. Investigation of high- and low-affinity binding sites of Imipramlne on human platelet membranes by method of chemical modification. // Abstr. ith General meeting of Eoroplen Soc.Neu-rochem. 1986. Praga. P.30J. 5. Demushkln V.P., Fomenko A.M., Plyashkevlch Vu.6., Schurln И.Й., Brusov d.%. «l9h- and low-affinity JH-Imipramlne binding sites on human plateletst separare determination and Involvement of sulphur-containing bonds. // Eur. J. Phaon. 198;. V.l*0. P.171-178.

fi*U . Ярщемт'З.яог т. 400 ет £/.C/.fs