Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристики рецепторных систем нейромедиаторов при паренхиматозных заболеваниях легких и печени человека

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Характеристики рецепторных систем нейромедиаторов при паренхиматозных заболеваниях легких и печени человека"

РГб од

I 6 СЕН 1*35

всероссийский научный центр

молекулярной диагностики и лечения

На правах рукописи УДК 577.17:519.240,577.156

катуков валерий юрьевич

характеристики рецепторных систем нейромециаторов при паренхиматозных заболеваниях легких и печени человека

03.00.04 - "биохимия"

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

!

Москва - 1993

Работа выполнена в отделе молекулярной фармакологии ВНЦ молекулярной диагностики и лечения

Научные руководители: доктор химических наук

Н.В.Породенко

кандидат биологических наук Т.Я.Кондратенко

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В.И. Киселев кандидат химических наук О.А.Склянкина

Ведущая организация: Институт физиологически активных веществ РАН, г. Черноголовка

в /0^°часов на заседании Специализированного Совета Д 074.51.01 при ВИЦ молекулярной диагностики и лечения по адресу: ПЗГ49, Москва, Симферопольский бульвар,8'

С диссертацией молено ознакомиться в библиотеке ВНЦ молекулярной диагностики и лечения

Авторефзрат разослан /<Р г.

Ученый секретарь Специализированного Совета

кандидат биологических наук В.В'.Отраднова

Защита состоится

<Г - октл-Щ-Р 19дз г.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Многие нейромедиаторьг и

нейромодуляторы играют ключевую роль в патогенезе большинства заболеваний внутренних органов человека . Свою функцию эти вещества опосредуют через взаимодействие со специфическими образованиями белковой природы - рецепторами. К числу наиболее значимых и интересных по механизму возникновения и протекания являются заболевания паренхимы (совокупности основных функционирующих элементов) легких и печени человека. В этой связи сведения о рецепторах компонентов этих тканей в норме и при патологии важны для медицины в плане диагностики, изучения патогенеза той или иной патологии, для создания в конечном итоге направленно действующих лекарственных средств. Методы прижизненного изучения рецепторных систем низкомолекулярных нейромедиаторов и нейромодуляторов в настоящее время практически не разработаны. Все вышеуказанное определяет актуальность работы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы явилось изучение рецепции ряда важнейших нейромедиаторов и нейромодуляторов на препаратах легких и Оиоптатах печени человека в " норме" и при ряде патологических состояний человека.

В задачи исследования входило:

1. Изучение (определение ряда физико-химических параметров) адренергических, холинергических, серогонинергических рецепторных систем, а также рецепторов фактора активации тромбоцитов (ФАТ) модельных объектов легких человека при хронических неспецифических заболеваниях дыхательных путей.

2. Физико-химическое исследование рецепторов на модельных циркулирующих, возобновляемых элементах бронхо-легочного аппарата - клетках лаважных смывов в "норме" и при патологии.

3. Изучение в сравнительном аспекте рецепторного спектра Оиоптатов ткани печени при хроническом гепатите.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые изучены характеристики широкого спектра рецепторных систем нейромедиаторов , нейромодуляторов на препаратах легких и печени человека в "норме" и патологических состояниях, а также на модельных обЪектах-макрофагах Оронхоальвеолярных лаважных смывов.

Показаны отличия физико-химических параметров вышеуказанных типов рецепторных систем у условно здоровых пациентов -и* при злокачественных новообразованиях, хронических неспецифических заболеваниях легких (ХНЗЛ), а также хроническом гепатите.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Разработаны модели для изучения молекулярных механизмов патогенеза паренхиматозных заболеваний легких и печени человека. Полученные данные могут быть в дальнейшем использованы в медицине при диагностике, исследовании и терапии < том числе фармакотерапии) ряда патологических состояний легких и печени человека.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты, описанные в диссертации , были представлены на Международной конференции по фактору активации тромбоцитов (Париж, Франция, 1990), на ХУ Конгрессе Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии ( Париж, Франция, Май 1992 ), на 12-м ежегодном семинаре Регионального медицинского центра г.Орландо ( г.Орландо, США, Март 1991 г.)

ПУБЛИКАЦИИ: По теме диссертации опубликовано 4 научных работы в зарубежной печати.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ . Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, глав, в которых излагаются результаты исследований и их

обсуадение, выводов и списка литературы. Работа изложена на _

страницах машинописного текста и включает 5 таблиц, _4_

рисунка.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Препараты легочной и печеночной ткани получали у пациентов при торектомии и пункциях печени; пациенты - от 35 до 60 лет с гистологически подтвержденным диагнозом. Контрольные образцы получали при сегментальной резекции легких у (Зольных с туберкуломой и пункциях ткани печени у пациентов с хроническим гепатитом в ремиссии соответственно в пределах нормальной ткани (п =10). Ткань замораживали в жидком азоте и далее хранили при -70°С.

Гомогенаты ткани получали по стандартной методике с использованием иссечения, гомогенизации и центрифугирования.

Бронхоальвеолярные клетки получали с помощью бронхоскопа "Olympus bf-b2" (Япония) путем заливки физиологического раствора при 37°С с последующим отсасыванием жидкости из бронхов, центрифугированием в течение 10 мин при 150 g и прикреплением к пластиковым чашкам Петри.

Подсчет числа клеток осуществляли в камере Горяева, концентрацию мембраносвязанного белка определяли по методу Lowry.

Процессы комплексообразования ( связывания) меченых лигандов: Н3-имипрамина (Н3-ИМИ), Н3-дигидроальпренолола (H3-dha> Н3-празозина (H3-prz), Н3-хинуклидинилбензилзта (H3-qnb) с изучаемыми рецепторами на клетках и мембранных препаратах исследовали методом вакуумного фильтрования через фильтры gf/b (Whatman, Англия), обработанные 0,5$ раствором полиэтиленимина. Эксперименты по связыванию ФА'Г проводили с использованием центрифугирования.

Неспецифическое связывание оценивали в присутствии избытка соответствующих немеченых лигандов.

Измерение активных форм кислорода проводили, используя хемилюминисценцию люминола(5-амшо-2,3-дагидро- I,4-фталазине-диона). Эмиссия регистрировалась на люмннометре lkb-1250 (lkb,Швеция) при 37°С и чувствительности Imv/CM.

з

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Эксперименты были начаты с исследования широкого спектра рецепторных систем на клетках из бронхоальвеолярных смывов, главным образом представляющих из себя бронхоальвеолярные макрофаги (БАМ). Ранее нами было показано, что эти клетки обогащены различными рецепторами и могут являться моделью легочной ткани. В результате серии экспериментов с использованием меченых лигандов нами были выявлены центры специфического связывания лигандов на БАМ человека и определены параметры их рецепции.

Кинетические закономерности связывания нейромедиаторов с БАМ

Кинетические кривые взаимодействия нейромедиаторов с БАМ, представленные на рис. I., указывают на обратимый и насыщаемый характер связывания меченого лиганда, а также на отсутствие в системе кооперативных эффектов и диффузионных затруднений.

Рис.1. Кинетика связывания нейромедиаторов на БАМ

^Кривая I- кинетика общего связывания

Кривая 2- кинетика неспецифического

связывания в присутствии ЮмкМ.неме

ченых лигандов. Кривая 3-кинетика

диссоциации после добавления 10 мкМ

немеченых лигандов. Кривая 4- то

же после 20-ти кратного разбавлени

>буфером инкубации.( )- ИМИ,

омв, (■) - риг, (О) -ОНА.

Время установления равновесия общего связывания при 4° С составляет 60 мин, а неспецифического - 5 мин. В течение времени

инкубации ( 3 часа) не происходит заметного снижения связывания.

Исследование кинетики взаимодействия нейромедиаторов с БАМ при различной температуре показало, что время установления равновесия сильно зависит от температуры (15 мин при 37°С, 30 мин при 20°С и 2' часа при 0°С), причем уровень специфического связывания лигандов максимален при 4°С, а неспецифическое связывание линейно возрастает с увеличением температуры. Максимальное число центров связывания лигандов (вт=„) имеет

—. ШаХ

наибольшее значение при 4 С, в то время как сродство лигандов (1/ка) практически одинаково в диапазоне температур от 4°С до 37°С.

Физико-химические харатеристики взаимодействия нейромедиаторов с БАМ человека в "норме"

Эксперименты проводились с БАМ, полученными в ходе бронхоскопии практически здоровых доноров. Определение параметров рецепторного связывания проводили с .использованием координат Скэтчарда. В используемом диапазоне концентраций преобразованные изотермы связывания имели линейный характер, что свидетельствует о том, что процессы комплексообраэования описываются моделью с участием одного типа центров связывания. Параметры рецепторного связывания исследуемых нейромедиаторов и нейромодуляторов приведены в таблице I.

Таблица I. Параметры ключевых рецепторных систем 'БАМ контрольных ("нормальных") образцов (п = 15).

Лиганд Ка,нМ Вмах,$ыоль/мг белка

3н-юиа (р-адрено) 1,4+0,2 460+54

Зн-ркг (а1-адрено) 0,9 + 0,1 1100 + 150

3Н-ИМИ 1,9 + 0,2 3040 + 450

3н-от 0,40 + 0,05 396 + 60

ИЗМЕНЕНИЯ ХАРАКТЕРИСТИК РЕЦЕПТОРОВ БРОНХОАЛЬВЕОЛЯРНЫХ МАКРОФАГОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ ПНЕВМОНИИ И ТУБЕРКУЛЕЗЕ

В ходе бронхоскопии у 25 пациентов, страдающих хронической пневмонией, и 18 пациентов, страдающих туберкулезом легких , были получены лаважные смывы, из которых были выделены БАМ. Результаты анализа параметров рецепторного связывания исследуемых нейромедиаторов представлены в таблице 2.

Таблица 2. Параметры рецепторных систем БАМ при хронической пневмонии и туберкулезе. Вмах~ $моль/мг белка.

Лиганд

Хроническая пневмония

Туберкулез

Кй,нМ

В,

мах

кй.нм

В,

мах

3Н-РНА 1,1 + 0,1 1000 + 190 1,0 + 0,1 844 + 95

(р-адрено)

3Н-РЕ2 2,0 + 0,3 1390 + 150 1,9 + 0,2 1100 + 200

(а1-адрено)

3н-ИМИ 1,40 + 0,08 3120 + 410 1,80 + 0,06 3000 + 425

3н-оив 0,10 + 0,01 210 + 30 0,30 + 0,02 175 + 26

Из данных, представленных в таблице 2, видно, что сродство соответствующего лиганда к мускариновым рецепторам, определяемое значением Ка, претерпевает значительные изменения (снижается в 4 раза) в случае хронической пневмонии. Для остальных исследованных рецепторных систем значения Ка изменяются статистически незначимо. При хронической пневмонии В„„„ для

Мал

/з-адренорецепгоров снижается в 2 раза, для с^-адренорецепторов, рецепторов имипрамина - практически не изменяется, а для мускариновых рецепторов возрастает в 1,9 раза. При туберкулезе для всех исследованных рецепторов сродство соответствующих

лигандов практически не отличается от контрольного. Значение Вмах для р-адренорецепторов возрастает в среднем в 2 раза, а для мускариновых рецепторов снижается в 2,3 раза. В случае других исследованных рецепторных систем Вмах не изменяется.

Таким образом, БАМ являются удобным модельным объектом, обогащенным рецепторами основных типов, характерных для нейронов, .принимающих участие в иннервации легочной ткани. В дальнейшем представляет интерес сравнение параметров рецепторов на БАМ с соответствующими параметрами, полученными при анализе непосредственно паренхимы легкого.

Особое место в биохимических механизмах регуляции функционирования легочной ткани занимают рецепторы универсального клеточного медиатора - ФАТ. Представляло интерес исследовать физико-химические параметры этих рецепторов на БАМ. а также на таких клетках, как нейтрофилы.

РЕЦЕПТОРЫ ФАТ НА БАМ И НЕйТРОФИЛАХ ЧЕЛОВЕКА

Серия экспериментов с использованием меченого ФАТ выявила наличие высокоаффишых центров специфического связывания лиганда на мембранах клеток и на интаютшх клетках, .участвующих в воспалительных реакциях: бронхоальвеолярных нейтрофилов и БАМ.

Физико-химические характеристики связывания н3-ФАТ с БАМ и бронхоальвеолярными нейтрофилами

Связывание н3-ФАТ с БАМ носит обратимый насыщаемый характер (время установления равновесия 20 мин при 37°С)и его анализ в координатах Скэтчарда (рис. 2). выявил линейный вид зависимости, что свидетельствует о наличии одного типа центров связывания (к^=о.8-о.1 нМ) . Максимальное число центров связывания н3-ФАТ на БАМ : в =4зо фдаль/млн клеток.

В/Т-Ю"1

Рис. 2. Преобразование изотерм специфического связывания 3н~ФАГ с БАМ в коородинатах Скэтчарда Условия: инкубация 15 мин при 37°С. ( О )-БАМ, ( ф )-нейтрофилы

О 1,0 2,0В-10~?нМ

Индукция дыхательного взрыва, опосредованная рецепторным связыванием ФАТ с БАМ и нейтрофилзми

Выброс 02~и Н202 происходит при активации нейтрофилов и макрофагов под воздействием различных агонистов,таких как л-формило-вые олигопептида, зимозан, форболовые эфиры.ФАТ. Молекулярным базисом индукции дыхательного взрыва в макрофагах является активация ыаорн-оксидэзы - фермента, локализованного на плазматической мембране и катализирующего одноэлектронное восстановление 02 до и его выброс.

ФАГ стимулирует заметное и быстрое образование активных,форм кислорода в нейтрофилах (кривая I на рис. 3) и БАМ (кривая 2. на рис. 3), причем максимальный ответ наблюдается через 20 - 25 с в опытах с нейтрофилами и через 60 с - с БАМ, что указывает'на большую реактивность нейтрофилов, чем БАМ. мV

Рис.3 . Кинетика образования активных форм кислорода под воздействием ФАТ н; БАМ. Условия: концентрация ФАТ-2 мкМ, концентрация БАМ-1млн/мл^=37°с

( О )-ЬЛМ, ( О )-нейтрофилы.

■1— время, о 100

Кривые дозовой зависимости от концентрации ФАТ на нейтрофилах и макрофагах в координатах Мди-Хофсти, представление на рис. 4, имеют нелинейный характер, свидетельствующий о

наличии двух значений константы Михаэлнса высокоаффинной и низкоаф$инной ветвям.

< V'

Для

к_, =1.3^0.14 hm и к_,=94-30 нм,- ДЛЯ ной'грофилов:

ml

Ки2=110-2 5НМ

т2

соогветстущих макрофагов:

~10-2HM И

к

ml

S.iim

Рис. 4. Преобразование кривых дозовых зависимостей от концентрации ФАТ на БАМ (кривая I) и нейтрофилах (кривая 2) в координатах Иди-Хофсти. Условия.- инкубация 2 мин при 37°С, буфер pbs.

Низкоаффинный участок кривых может отражать неспецифические процессы, происходящие с клетками и не связанные со специфической рецепцией ФАТ на соответствующих центрах связывания. Значение к для макрофагов удовлетворительно совпадает со значением ка на этих клетках; а кт1 для нейтрофилов значительно ниже, чем величина Значение константы Михаэлиса (к характеризующей процесс индукции супероксидных радикалов для нейтрофилов, снижается, а амплитуда ответа увеличивается при преинкубации клеток с форболовым эфиром и азидом натрия. Полученные данные указывают на отличие в лимитирующей стадии процесса активации

на изученных клетках крови*, у макрофагов это- связывание ФАТ с рецептором, а у нейтрофилов- передача сигнала внутри клетки,

Значительные различия изученных типов клеток наблюдаются в составе фиксируемых радикальных продуктов дыхательного взрыва: у БАМ ФАТ стимулирует выброс только- супероксидного аниона (добавление супероксиддисмутазы в количестве ЗбОед. снимает ответ ФАТ), а у нейтрофилов- продукте,в миелопероксидазной реакции (синглетного кислорода, ось" радикала).

ИЗМЕНЕНИЯ ХАРАКТЕРИСТИК РЕЦЕПТОРОВ ЕИОПТАТОВ ТКАНИ ЛЕГКИХ

ЧЕЛОВЕКА ПРИ ОПУХОЛЕВОМ ПЕРЕРОЖДЕНИИ ТКАНИ, ХРОНИЧЕСКОЙ ПНЕВМОНИИ И ТУБЕРКУЛЕЗЕ

В работе исследовались изменения рецепторных систем. при следующих'патологиях легких человека: онкологические заболевания, хроническая пневмония и туберкулез. В качестве контроля ("нормы") рассматривали образцы ткани, полученные в результате сегментальной резекции туберкуломы. Параметры, характеризующие рецепторные системы контрольных образцов ткани, представлены в таблице 3 .

Таблица 3 Параметры рецепторных систем контрольных ("нормальных") образцов ткани (п = 10).

Лиганд Кй,нМ В_,фшль/мг белка Л1ал

т Н-РНА (р-адрено) 1,0 + о.1 120 + 20

Зн-Р1*г (о^-адрено) 1,о + 0,2 270 + 85

3Н-ИМИ 2,0 + 0,1 895 + 79

■а 0,20 + 0,03 46 + 6

Зн-ФАТ 0,9 + 0,1 900 + 83

В таблице 4 представлены данные, полученные при исследовании связывания лигандов с образцами легочной ткани, полученными при онкологических операциях , операциях при туберкулезе легких, а гакясз биопгатами ткани легкого при хронической пневмонии.

Таблица 4. Параметры ключевых рецепторшх систем биоптатов ткани лекгих человека при опухолевом перерождении, хронической пневмонии и туберкулезе (п = 21).

Лиганд Патология Ка,нМ Ваах.Фюль/мг белка

3Н-ЭНА (р-адрено) Рак 0,50 ± 0,08 84 + 14

Хрониче екая пневмония 0,9 + 0,1 270 + 45

Туберкулез 0,8 + 0,1 244 + 39

з н-риг (<*1-адрено) Рак 1,40 + 0,27 1049 ± 117

Хроническая пневмония 0,9 + 0,2 250 + 48

Туберкулез 0,70 + 0,05 220 + 43

3н-ИМИ Рак 2,3 + 0,2 2115 ± 200

Хроническая 2,20 ± 0,09 1125 + 90

пневмония

Туберкулез 1,80 + 0,04 938 + 50

Таблица 4 . (продолжение)

Лиганд Патология Кй,нМ Вмах,фмоль/мг белка

3Н-0МВ Рак 0,100 + 0,009 114 + 12

Хроническая 0,090 + 0,009 75+6 пневмония

Туберкулез 0,20 + 0,01 52 + 6

Зн-ФАТ Рак 0,7 + 0,1 949 + 100

2119 + 129

814 + 63

Из данных, представленных в таблицах 3 и 4 , следует, что значения Ка при исследуемых патологиях легких по сравнению с контролем изменяются незначительно. Наибольшие изменения Кй наблюдаются в случае мускариновых рецепторов ( при раке легкого и хронической пневмонии). В то же время втах для всех рецепторных систем, за исключением ФАТ и з-адренорецепторов , при раке легкого значительно возрастает ( для с^-адренорецепторов и рецепторов имипрамина практически на порядок); 'для <з~адронорецепторов вмах при раке снижается в 5,4 раза, при хронической пневмонии в среднем в 2 раза. При туберкулезе значение вмах для (З-адренорецепторов изменяется в 2 раза.

Выявленные закономерности могут быть использованы при. диагностике соответствующих заболеваний.

Сравнение параметров рецепторных систем, полученных для БАМ и биоптатов паренхимы легкого при хронической пневмонии и туберкулезе, показывает, что изменения параметров для БАМ при рассматриваемых патологиях полностью идентичны изменениям,

Хроническая 0,9 + 0,1 пневмония

Туберкулез 0,80 + 0,08

характерным для легочной ткани. Таким образом, БАМ можно считать идеальной моделью, отражающей состояние рецепторов, определяющих основные характеристкк иннервации легочной ткани.

ИЗМЕНЕНИЯ ХАРАКТЕРИСТИК РЕЦЕПТОРОВ БИОПТАТОВ ТКАНИ ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ

В ходе экспериментов по изучению связывания лигандов с биоптатами, полученными при пункции печени пациентов, страдающих хроническим гепатитом, и пациентов, находящихся в стадии ремиссии (контроль - "норма"), получены параметры ключевых рецепторных систем. Данные приведены в таблице 5.

Таблица 5. Параметры ключевых рецепторных систем биоптатов ткани печени человека в норме (усредненные данные по 10 пациентам) и при хроническом гепатите (усредненные данные по 21 пациенту). В яу - в $моль/мг белка.

Лиганд Контроль Хронический гепатит

Ка,нМ ТЗ мах Ка,нМ вмах

(0- 3Н~ОНА адрено) 3,2 ± 0,4 15 + 2 2,9 + 0,4 17 + 2

н-ряг - адрено) 2,0 ± 0,3 124 + 21 1,8 + 0,3 159 + 18

Зн-ими Г,4 + 0,2 Г020 £ 200 2,0 + 0,3 2450 + 340

3Н-<ЗНВ 0,30 + 0,04 980 + 120 0,50 + 0,06 2100 + 330 V

Анализ полученных данных показывает, что значения Ка при

хроническом гепатите изменяются по сравнению с контролем

незначительно. Наблюдается тенденция к снижению значения для

мах

адренорецепторов. Значения вмах для мускариновых рецепторов и рецепторов имипрамина возрастают в среднем в 2 раза, что свидетельствует о возможном участии серотонинергических и холинергических систем в патогенезе рассматриваемого заболевания, выраженном в гиперэкспрессии белков - рецепторов соответствующего типа.

вывода

1. Впервые выявлены адренергические, холинергические, серотонинергические рецепторные системы на бронхоальвеолярных макрофагах человека и изучены их физико-химические параметры в "норме" и при хронической пневмонии и туберкулезе.

2. Показано, что при исследованных патологических состояниях легких изменения происходят в значениях максимальных концентрациях центров связывания нейромедиаторов; сродство лиганда изменяется лишь для мускариновых рецепторов.

3. Получены значения физико-химических параметров рецепторов фактора активации тромбоцитов на бронхоальвеолярных макрофагах и бронхоальвеолярных нейтрофилах человека. Определены характеристики воздействия фактора активации тромбоцитов на индукцию дыхательного взрыва в бронхоальвеолярных макрофагах и нейтрофилах. Выявлены различия в реактивности этих клеток и в составе фиксируемых радикальных продуктов дыхательного взрыва.

4. Впервые определены характеристики широкого спектра рецепторных систем нэ биоптатах паренхимы легких человека в "норме", при раке легкого, хронической пневмонии и туберкулезе.

5. Установлено, что изменения параметров рецепторных систем для бронхоальвеолярных макрофагов при хронической пневмонии и туберкулезе полностью идентичны изменениям, характерным для легочной ткани. Такими образом, показано, что макрофаги являются адекватной моделью, определяющей основные характеристики иннервации легочной ткани в "норме" и при патологии.

6. Впервые выявлены различия в параметрах а- и £-адренергических, холинергических и , серотонинергических

рецепторных систем в биоптатах тканей печени человека в "норме" и при хроническом гепатите. Сродство соответствующих лигандов изменяется незначительно, в среднем в 2 раза возрастает концентрация центов связывания серотонинергических (имипраминовых) и холинергических рецепторов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. T.Y.Kondratenko, I.V. Zacharova, N.V.Kuzina, V.Yu.Katukov, E.S.Severin, Z.Ch.Kornilova, M.I.Perelman. Alterations in Human lung adrenergic receptors in cancer. Biochemistry and molecular biology international, v.29, Ho 1, pp. 123-130, 1993.

2. N.V.Porodenko, A.V.Karaulov, V.Yu.Katukov. Platelet-activating factor stimulates receptor-mediated formation of reactive oxygen intermediates in human monocytes. in: Proceedings of IUPHAR Satellite Meeting "Advances in platelet-activating factor research", Paris, p. 49, 1990.

3. N.V.Porodenko, A.V.Karaulov, V.Yu.Katukov. The role of the platelet-activating factor in the induction of the oxidative burst in human neutrophils, in: Proceedings of XV-th Congress of the European Academy of allergology and clinical immunology., Paris, p. 123, 1992.

4. V.G.Shumilov, V.Yu.Katukov, N.V.Porodenko. Estimation of disturbances in the system of human neurotransmitter receptors using circulating cells as a model., in: Proceedings of XH-th Regional Meeting of Medical Center of Orlando, Orlando, USA, p. 12, 1991.