Ультраструктурный и иммуногистохимический анализ звездчатых клеток печени в онтогенезе и при ремоделировании пространств Диссе

Капустина, Валентина Ильинична

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Ультраструктурный и иммуногистохимический анализ звездчатых клеток печени в онтогенезе и при ремоделировании пространств Диссе
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Ультраструктурный и иммуногистохимический анализ звездчатых клеток печени в онтогенезе и при ремоделировании пространств Диссе"

На правах рукописи

Капустина Валентина Ильинична

УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЙ И ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

ЗВЕЗДЧАТЫХ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ В ОНТОГЕНЕЗЕ И ПРИ РЕМОДЕЛИРОВАНИИ ПРОСТРАНСТВ ДИССЕ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск - 2010

003493818

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии Сибирского отделения РАМН (Новосибирск)

Научный руководитель:

доктор биологических наук,

профессор Айдагулова Светлана Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Клинникова Марина Геннадьевна доктор биологических наук,

профессор Селятицкая Вера Георгиевна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Новосибирский университет Росздрава

государственный медицинский

Защита диссертации состоится «_»_2010 г.

в_час. на заседании диссертационного совета Д 001.037.01 в

Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии СО РАМН по адресу: 630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2, тел. 334-84-38.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-исследовательского института региональной патологии и патоморфологии СО РАМН.

Автореферат диссертации разослан «_»_2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.037.01

доктор биологических наук Молодых Ольга Павловна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Звездчатые клетки печени (жиронакапли-вающие клетки, липоциты печени, или клетки Ито), локализующиеся в пространствах Диссе и содержащие ретиноиды, привлекают внимание исследователей - гистологов, физиологов, гепатологов на протяжении более 130 лет, но лишь в последние годы, после значительного прогресса методов структурного исследования, появились четкие доказательства их роли в фиброгенных реакциях печени (Gabele Е. et al., 2003; Sato М. et al., 2003; Balabaud С. et al., 2004; Friedman S.L., 2008).

Фиброз - результат нарушения баланса между процессами синтеза и распада экстрацеллюлярного матрикса с преобладанием процессов образования внеклеточных матриксных компонентов. Это универсальная реакция клеточных популяций печени на хроническое повреждение, обусловленное различными неблагоприятными факторами, среди которых наибольший удельный вес имеют алкоголь и другие токсические воздействия, инфекционные агенты, а также наследственные нарушения обмена меди и железа (Хазанов А.И., Некрасова H.H., 2002; McCaughan G.W., George J., 2004; Ryder S.D., 2004).

Достижения в изучении фиброза печени привели к пониманию клеточных основ фиброгенеза при хроническом поражении печени, и в настоящее время звездчатые клетки печени идентифицированы как основной источник внутридольковых, или перисинусоидаль-ных, компонентов внеклеточного матрикса, в частности, коллагена (Eng F.J., Friedman S.L., 2000; Sato M. et al., 2003; Senoo H., 2004). Другими «точками роста» соединительной ткани при фиброзных изменениях печени являются портальные тракты и перицентраль-ные зоны долек, в соответствии с этим, с участием фибробластов печени формируются портальный и центральный фиброз (Ramadori G., Saile В., 2004).

Тканевый микрорайон печени «просвет синусоида с протекающей в нем кровью - эндотелиоцит - пространство Диссе - гепато-цит» является зоной наибольшей функциональной ответственности, структура которого обеспечивает оптимизацию выполнения метаболической функции гепатоцитами, поэтому именно перисинусои-дальный, или перигепатоцеллюлярный, фиброз относят к прогностически наиболее неблагоприятным вариантам в связи с нарушением

при этом транссинусоидального обмена и метаболической функции гепатоцитов (Непомнящих Д.Л. и др., 2006).

В связи с большой значимостью вопроса реверсии фиброза в различных органах проводится множество исследований по выяснению тонких механизмов фиброгенеза и фибролизиса с поиском значимых маркеров и вероятных мишеней для разработки адекватной терапии (Desmet V.J., Roskams Т., 2004; Kisseleva Т., Brenner D.A., 2007; Moreira R.K., 2007). В этом плане нами выбрана экспериментальная модель - линия преждевременно стареющих крыс OXYS (первоначально зарегистрированная как W/SSM), которая создана в Институте цитологии и генетики СО РАН селекцией и инбридингом крыс Вистар, чувствительных к катарактогенному эффекту больших доз галактозы (Соловьева H.A. и др., 1975).

Наряду со 100%-м развитием катаракты в возрасте 6 мес, этих животных характеризуют снижение продолжительности жизни, повышение артериального давления, сенильный остеопороз, ранние инволютавные изменения внутренних органов, в том числе карди-омиопатия, миопатия, а также нарушения когнитивных функций мозга (Непомнящих J1.M. и др., 1995; Лоскутова Л.В., Колосова Н.Г., 2000; Колосова Н.Г. и др., 2003; Непомнящих Л.М., Бакарев М.А., 2005). В основе патогенеза этих проявлений - наследуемая повышенная продукция активных кислородных метаболитов, обнаруженная в печени и миокарде животных (Синицына О.И. и др., 2006; Salganik R.I. et al., 1994). Таким образом, линия крыс OXYS может быть перспективной моделью исследования структурно-функциональных изменений звездчатых клеток печени в условиях генетически программированного окислительного стресса, являющегося одним из ведущих индукторов фиброгенеза.

Кроме того, в настоящее время чрезвычайно актуальны исследования, касающиеся фиброгенеза в печени, связанного с инфицированием вирусами гепатита В и С и развитием хронической HBV- и/или HCV-инфекции в связи с высокой степенью заболеваемости во всех странах (Russo M.W. et al., 2005). Следует отметить, что несмотря на предпринимаемые усилия, экспериментальной модели, воспроизводящей инфекционный процесс гепатита С с последующей трансформацией в цирроз печени, не существует. HCV-подобная инфекция у макак-резусов, возникающая спонтанно, протекает без структурных повреждений печени в течение нескольких лет (Корзая Л.И. и др., 2002). В связи с этим морфологическое исследование

звездчатых клеток печени в динамике хронической НСУ-инфекции является актуальным.

Цель работы - исследование ультраструктурных изменений звездчатых клеток печени крыс ОХУБ в онтогенезе, а также изучение ультраструктурных количественно-качественных характеристик популяции звездчатых клеток в динамике фиброза печени инфек-ционно-вирусного генеза.

Задачи исследования:

1. Изучить структурно-функциональные особенности звездчатых клеток печени крыс ОХУБ (модель генетически детерминированного окислительного стресса) в возрастном аспекте.

2. Изучить ультраструктурные и иммуногистохимические особенности звездчатых клеток печени при действии РНК- и ДНК-вирусов гепатита С и В в динамике фиброгенеза.

3. Провести количественно-качественный анализ звездчатых клеток печени в динамике онтогенеза и фиброгенеза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У преждевременно стареющих крыс линии ОХУ8 и при хроническим воздействии вирусов гепатита С и В ремоделированы пространства Диссе в связи с индукцией фиброгенного потенциала звездчатых клеток печени, что является неблагоприятным структурно-функциональным маркером прогрессии фиброза и цирроза печени.

2. С помощью морфометрического анализа установлено, что степень выраженности перигепатоцеллюлярного фиброза имеет достоверную обратную корреляцию с численной плотностью ли-пидосодержащих звездчатых клеток.

3. Ведущим маркером фиброгенной активации звездчатых клеток является экспрессия гладкомышечного а-акгина, выявляемая с помощью двухшагового непрямого иммунопероксидазного метода.

Научная новизна. Исследован морфогенез фиброза печени инфекционно-вирусного генеза (хронические НСУ- и НСУ+НВУ-ин-фекции) и фиброзные изменения печени в онтогенезе преждевременно стареющих крыс линии ОХУ8 с генетически детерминированным развитием окислительного стресса. В морфогенезе фиброза печени ведущую роль играют альтерация гепатоцитов, ремоделирование пространств Диссе и фиброгенная активация звездчатых клеток.

Впервые показано, что в онтогенезе у крыс ОХУБ и при инфицировании вирусом гепатита С звездчатые клетки печени в со-

стоянии фиброгенной активации экспрессируют переходный, или смешанный, фенотип: уменьшение числа и последующее исчезновение липидных капель с синхронной сменой звездчатой формы на фибробластоподобную полигональную и увеличением размеров клетки, индукция белоксинтезирующей функции с гиперплазией элементов гранулярной цитоплазматической сети, увеличение числа митохондрий. Структурные изменения сопровождаются экспрессией гладкомышечного а-актина - иммуногистохимического маркера фибробластоподобных клеток, продуцирующих компоненты экстра-целлюлярного матрикса. Синхронно перицеллюлярно формируются коллагеновые фибриллы как ведущий фактор ремоделирования пространств Диссе.

Впервые установлено, что часть внутридольковой популяции звездчатых клеток печени сохраняет липидонакапливающий фенотип даже на стадии цирроза печени для депонирования ретиноидов, при этом в фиброзных септах выявлена очаговая пролиферация липоцитов, что отражает пластичность звездчатых клеток.

Впервые в динамике онтогенеза у преждевременно стареющих крыс линии ОХУБ в звездчатых клетках выявлены ультраструктурные стереологические маркеры индукции белоксинтезирующей функции, обратно коррелирующие с выраженностью функции депонирования ретиноидов, оцениваемой по поверхностной плотности липидных капель. Прогрессирующие и более значительные по сравнению с Вистар дисфункции митохондрий гепатоцитов, ассоциированные с окислительным стрессом, и более выраженная фиброгенная активность звездчатых клеток являются ключевыми факторами фиброза печени у крыс линии ОХУБ.

Практическая значимость. Полученные результаты раскрывают закономерности тканевых и ультраструюурных реакций в условиях альтерации и компенсаторно-приспособительных реакций клеточных популяций печени. Важен аспект индукции фиброгеннош потенциала звездчатых клеток печени, являющийся неблагоприятным структурно-функциональным маркером прогрессии фиброза и цирроза печени. Результаты исследования целесообразно внести в курс преподавания соответствующих разделов общей и частной гистологии, а также использовать для дальнейшего углубления представлений о структурной модификации печени.

Апробация работы. Материалы исследования представлены на Тринадцатой и Четырнадцатой Российской научно-практичес-

кой конференции «Достижения современной гастроэнтерологии» (Томск, 2005, 2006); XV-й городской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2005); Одиннадцатой Российской конференции «Гепато-логия сегодня» (Москва, 2006); II-м съезде Российского общества патологоанатомов (Москва, 2006); 8-м Международном СлавяноБалтийском научном форуме «Санкт-Петербург - Гастро-2006» (Санкт-Петербург, 2006); Ученом совете Научно-исследовательского института региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (Новосибирск, 2009).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 12 научных работ, из них 2 в рецензируемых журналах, рекомендуемых ВАК для опубликования результатов кандидатских диссертаций.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), результатов собственных исследований (3 главы), заключения, выводов и списка литературы (237 отечественных и иностранных источников). Текст иллюстрирован таблицами и рисунками (диаграммы, микрофото- и электронограммы).

ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследованы образцы печени 86 экспериментальных животных (крысы OXYS и Вистар) и препараты пункционных биоптатов печени 104 клинических наблюдений из архива Научно-исследовательского института региональной патологии и патоморфологии СО РАМН. Экспериментальные исследования выполнены в соответствии с Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных (Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1977); клинический материал изучали с соблюдением положений последней редакции Этических принципов Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (2000).

Исследование клеточных популяций печени у крыс линии OXYS (модель генетически программированного окислительного стресса). Линия, ведущим фенотипическим признаком которой является преждевременное старение животных, создана путем инб-

ридинга крыс Вистар, отбираемых по признаку чувствительности к катарактогенному действию больших доз галактозы (Соловьева Н. А. и др., 1975; Колосова Н.Г. и др., 2003). Ключевую роль в патогенезе преждевременного старения крыс OXYS играют нарастающие с возрастом структурно-функциональные нарушения митохондрий: изменение соотношения цитохромов внутренней мембраны, снижение активности одной из АТФ-синтетаз, дыхательного контроля и скорости фосфорилирования (Непомнящих Л.М., Бакарев М.А., 2006; Dikalova A. et al., 1999). Косвенным признаком оксидативного стресса является накопление окислительных повреждений белков и липидов (Колосова Н.Г. и др., 2004); активация перекисного окисления липидов приводит к предмутационным повреждениям тотальной ДНК-усиленному формированию этено-аддуктов в мозге и печени крыс (Ishchenko A. et al., 2003).

Использовали 48 крыс-самцов линии OXYS массой тела от 130 до 420 г, контролем для них служили 38 крыс-самцов Вистар массой тела от 110 до 480 г аналогичного возраста. Животные получены из вивария Института цитологии и генетики СО РАН. Проведен сравнительный анализ структурной организации печени у животных 4-х возрастных групп: 4, 9, 12 и 24 мес.

Исследование клеточных популяций печени в динамике фиброза при HCV- и HCV+HBV-инфекции. Выполнено комплексное морфологическое исследование 150 биоптатов печени 104 наблюдений при верифицированных вирусных поражениях, обусловленных персистенцией РНК- и ДНК-вирусов гепатита С и В на различных стадиях фиброза и цирроза печени, из них 59 случаев с гепатитом С и 45 - с микст-гепатитом С+В. Стадия фиброза печени была установлена патоморфологом по 4-балльной системе, начиная от портального фиброза (I стадия) до цирроза с образованием порто-центральных васкуляризированных септ и нодулярной трансформацией паренхимы печени (Desmet V.J. et al., 1994).

Методы морфологического анализа. Важно отметить, что в образцах печени человека и экспериментальных животных обнаруживается достаточно большое количество звездчатых клеток, но они хорошо видны лишь на полутонких и ультратонких срезах и дифференцируются в пространствах Диссе по наличию в цитоплазме крупных липидных капель. Трансформация звездчатых клеток из «пассивных», накапливающих липидосодержащий материал,

в фиброгенные, продуцирующие компоненты экстрацеллюляр-ного матрикса, сопровождается исчезновением этого основного морфологического маркера. В связи с этим истинное количество гетерогенной популяции звездчатых клеток можно определить, используя комплексное ультраструктурное и иммуногистохимическое исследование.

Методы световой микроскопии. Ткань печени фиксировали в охлажденном до 4°С 4%-м растворе параформальдегида, приготовленном на фосфатном буфере Миллонига (pH 7,2 — 7,4); парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином в комбинации с реакцией Перлса, по ван Гизону с докраской эластических волокон резорцин-фуксином Вейгерта, ставили ШИК-реакцию (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996). Исследование парафиновых и полутонких срезов проводили в универсальном микроскопе Leica DM 4000В (Германия). Микрофотографии получали с использованием цифровой фотокамеры Leica DFC 320 (Германия) и компьютерной программы Leica QWin.

Методы электронной микроскопии. Образцы, предназначенные для заливки в эпоксидные смолы, дофиксировали в 1% растворе OSO4, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, проводили через ацетон и помещали в смесь эпона и аралдита. Полутонкие срезы (1 мкм) готовили на микротоме Tesla, окрашивали реактивом Шиффа и азуром II. Ультратонкие срезы (300—500 нм) получали на ультрамикротоме LKB III, контрастировали насыщенным спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца в парах щелочи натрия по Рейнольдсу (Уикли Б., 1975) и исследовали в электронном микроскопе «JEM 1010» при ускоряющем напряжении 80 кВт.

Иммуногистохимическое исследование. Звездчатые клетки и другие матрикс-продуцирующие клеточные популяции печени выявляли в динамике развития фиброза по экспрессии гладкомы-шечного а-актина. Иммунодетекцию проводили на парафиновых срезах по адаптированной методике иммуногистохимических реакций с использованием моноклональных антител (Петров C.B., Райхлин Н.Т., 2000). Для тестирования экспрессии гладко-мышечного а-актина в матрикс-продуцирующих клетках печени использовали двухшаговый непрямой иммунопероксидазный метод со стрептавидин-биотиновой системой визуализации продуктов реакции. В качестве первичных антител использовали мышиные моноклональные антитела к гладкомышечному а-актину

(NovoCastra Laboratories Ltd, Великобритания) в разведении 1:25; в качестве вторичных антител—универсальные биотинилированные антитела. Инкубацию с первичными и вторичными антителами и реакцию со стрептавидин-пероксидазным комплексом проводили в термостате 37°С. Демаскировку антигенов осуществляли кипячением в рабочем растворе ретривагена А (рН 6,5); эндогенную пероксидазную активность гепатоцитов ингибировали 0,3%-ным раствором Н2О2 в фосфатно-солевом буфере. После визуализации продуктов иммунной реакции хромогеном (диаминобензидином) срезы докрашивали в течение 20 мин гематоксилином Майера. Негативным контролем служили препараты без инкубирования с первичными антителами.

Методы морфометрического и стереологического исследования. На полутонких срезах оценивали численную плотность липидосодержащих звездчатых клеток в единице поля зрения, равной 38000 мкм2. Стереологический анализ образцов печени проводили на двух уровнях структурной организации -тканевом (на полутонких срезах) и ультраструктурном (на электронограм-мах) с использованием методов, основанных на подсчете числа точек тестовой системы, попавших на профиль исследуемой структуры, и числа пересечений тестовой линии с ее границами (Непомнящих JI.M. и др., 1984; Непомнящих JI.M., Бакарев М.А., 2005).

Стереологический анализ проводили с применением окулярной многоцелевой тестовой системы коротких отрезков (п = 36, Р = 72) на полутонких срезах в динамике фиброза органа. Оценивали относительную численную плотность основных структурных компонентов паренхимы и стромы центролобулярных зон - гепатоцитов, просветов синусоидов и звездчатых клеток печени. Затем оценивали вторичные параметры, отражающие паренхиматозно-стромальные и межклеточные взаимоотношения. Ультраструктурный стереологический анализ включал определение структурной плотности цитоплазматических органелл гепатоцитов и звездчатых клеток. Тестовая система состояла из циклоидов суммарной длиной 45 мкм и 70 тестовых точек (Gundersen Н. et al., 1988).

При статистической обработке данных применяли критерий Стьюдента; различия сравниваемых параметров считали значимыми, если вероятность ошибки Р была меньше 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование звездчатых и паренхиматозных клеток печени у крыс линии ОХУ8 в возрастном аспекте. Морфология печени 4-месячных крыс ОХУБ и Вистар не имела существенных различий; у крыс линии ОХУБ отмечено лишь более значительное содержание гликогена в гепатоцитах центролобулярных зон и умеренный периполез (миграция лимфоцитов в интергепатоцеллюлярные пространства).

Ультраструктурная организация звездчатых клеток печени у крыс ОХУБ и Вистар не имела различий: обе популяции клеток характерной звездчатой формы, с немногочисленными крупными электронно-прозрачными липидными каплями, вместе с округлым эухромным ядром занимающими почти всю цитоплазму. Перинук-леарно, между липидных капель, локализовалось минимальное количество мембранных органелл-одиночные мелкие митохондрии с плотным матриксом и редкими кристами и короткие профили гранулярной цитоплазматической сети.

При сравнительном электронно-микроскопическом исследовании ультраструктурной организации гепатоцитов у крыс ОХУБ обращало на себя внимание огромное количество розеток гликогена, диффузно распределенного по всей цитоплазме. Среди цитоп-лазматических органелл наиболее многочисленны митохондрии, компактно группирующиеся в различных участках цитоплазмы. По сравнению с гепатоцитами крыс Вистар, эти органеллы характеризовались большим числом, мелкими размерами и более осмиофильным матриксом при сходстве строения и плотности крист, что свидетельствовало в пользу пролиферации митохондрий и увеличения их площади поверхности.

У крыс ОХУБ в гепатоцитах слабо представлены элементы гранулярной цитоплазматической сети, встречались свободные рибосомы и полисомы, значительно гиперплазированы микроворсинки синусоидального полюса, формировались одиночные резидуальные тельца. В целом, комплекс ультраструктурных особенностей соответствовал ювенильному фенотипу; накопление гликогена также могло быть отражением эмбрионального фенотипа гепатоцитов либо определенного метаболического статуса, свойственного этой линии экспериментальных животных.

Печень крыс ОХУБ в возрасте 9 и 12 мес светооптически отличалась от печени крыс Вистар большим содержанием гликогена, нарастающим в порто-центральном направлении, умеренной мо-нонуклеарной инфильтрацией портальных трактов, в различной степени выраженной эозинофилией цитоплазмы части гепатоцитов. На полутонких срезах при окраске азуром II обнаружена очаговая метахромазия межклеточного матрикса, что может свидетельствовать об изменении компонентов ее основного вещества - гликоза-миногликанов.

У ОХУБ и Вистар в возрасте 9 мес звездчатые клетки, эндоте-диоциты синусоидов и клетки Купфера не имели существенных ультраструктурных различий. Важно отметить, что именно в этой возрастной группе наиболее четко выявлялся зональный полиморфизм звездчатых клеток. Он выражался в наибольшей численной плотности липоцитов в перипортальной зоне печеночной дольки с постепенным ее уменьшением и почти полным отсутствием в перицентральных зонах. При электронно-микроскопическом исследовании центролобулярные и перицентральные звездчатые клетки содержали очень мелкие немногочисленные липидные включения, иногда с признаками деградации. Вокруг центральных вен выявлялись лишь фибробластоподобные клетки, своим ультраструктурным фенотипом не отличающиеся от клеток, продуцирующих компоненты внеклеточного матрикса непосредственно в стенке центральных вен. Признаков интралобулярного фиброза не прослеживалось.

В возрасте 12 мес у крыс ОХУБ приблизительно четверть цен-тролобулярной популяции звездчатых клеток печени приобретала переходный фенотип с одновременным присутствием в цитоплазме и крупных липидных включений, и более развитого белоксинтези-рующего компартмента. Перинуклеарно локализовались канальцы гранулярной цитоплазматической сети и приуроченные к ним мелкие митохондрии, в ядрах формировались крупные ядрышки. Это свидетельствовало об индукции синтеза компонентов экстра-целлюлярного матрикса, способных ремоделировать пространства Диссе.

При электронно-микроскопическом исследовании установлено нарастание дегенеративно-дистрофических процессов в паренхиматозных клетках печени крыс ОХУБ, значительно опережающее аналогичные явления у крыс Вистар. В цитоплазме гепатоцитов обнаружены многочисленные гранулы липофусцина (маркер гипоксии

и/или старения клеток), полиморфные резидуальные тельца, единичные липидные капли. Митохондрии были также многочисленны, но приобретали более крупные размеры и полиморфизм; матрикс митохондрий более гомогенен и менее осмиофилен; кристы редкие, очень тонкие, хаотично ориентированные.

У крыс ОХУЭ отмечалась гетерогенность гепатоцитов по наличию фокусов внутриклеточной регенерации (скоплений параллельных профилей гранулярной цитоплазматической сети в ассоциации с митохондриями); в целом, они менее многочисленны по сравнению с крысами Вистар аналогичного возраста. Интергепатоцеллюлярно обнаружено достаточно большое количество лимфоцитов, а также единичные плазмоциты и эозинофилы. .

Печень крыс ОХУБ в возрасте 24 мес характеризовалась умеренно выраженной дискомплексацией печеночных трабекул и полиморфизмом паренхиматозных клеток: неравномерным включением гликогена в пределах долек, ацидофильной и липидной дегенерацией перипортальных и перицентральных гепатоцитов, опустошенностью цитоплазмы части гепатоцитов. В портальных трактах отмечена умеренная пролиферация эпителия желчных протоков и очаговая выраженная мононуклеарная инфильтрация; обнаружены также лимфоидные агрегаты. Наблюдались фиброз центральных вен и неравномерное расширение преимущественно перицентральных синусоидов. Отмечены единичные периваскулярные сидерофаги. Печень крыс Вистар имела те же, но значительно менее выраженные изменения.

При ультраструктурном исследовании выявлено ремоделирова-ние пространств Диссе с развитием перигепатоцеллюлярного фиброза—с большим количеством коллагеновых фибрилл, локализованных также вдоль латеральных полюсов гепатоцитов. Возрастающее количество фибриллярных структур обусловливало формирование базальной мембраны эндотелиоцитов («капилляризацию» синусоидов) и изменение фенотипа микрососудистой выстилки. Эндоте-лиальные клетки утрачивали фенестры и подвергались атрофии с резким истончением цитоплазматических отростков, в которых определялись лишь единичные пиноцитозные везикулы.

Звездчатые клетки печени у крыс ОХУБ в возрасте 24 мес характеризовались значительной гетерогенностью ультраструктурной организации: среди них липидосодержащие и фиброгенные клетки, но большинство популяции звездчатых клеток имело переходный

фенотип. Наряду с крупными липидными каплями видны свободные рибосомы и мембранные органеллы - митохондрии, элементы гранулярной и гладкой цитоплазматической сети, везикулы комплекса Гольджи, а также резидуальные структуры, отражающие процесс фокальной внутриклеточной деградации.

Электронно-микроскопически обнаружена выраженная полиморфная липидная инфильтрация гепатоцитов крыс OXYS, сниженное, но значительное по сравнению с крысами Вистар, содержание гликогена, формирование аутофагосом и многочисленных резидуальных телец. Митохондрии уменьшены в количестве, крупные, с единичными кристами и гомогенным, умеренно электронно-плотным матриксом, с мелкими осмиофильными гранулами (патогномоничными для гипоксии, интоксикаций и т.д.). В группе сравнения митохондрии имели электронно-плотный матрикс и были приурочены к профилям гранулярной цитоплазматической сети.

В динамике онтогенеза у преждевременно стареющих крыс линии OXYS в звездчатых клетках выявлены ультраструктурные сте-реологические маркеры индукции белоксинтезирующей функции, обратно коррелирующие с выраженностью функции депонирования ретиноидов, оцениваемой по поверхностной плотности липидных капель (рис. 1).

В целом, при снижении энергетического потенциала гепато-цитов у крыс OXYS в возрасте 12 и 24 мес синхронно индуцирована фиброгенная трансформация звездчатых клеток печени, что значительно опережало фенотипически инволютивные изменения и фиброзную трансформацию печени у крыс Вистар соответствующего возраста.

Нарушения функций митохондрий играют ключевую роль в старении клеток (Cadenas Е., Davies K.J.A., 2000). В процессе онтогенеза в клетках изменяется как относительное количество митохондрий, так и их качество, определяемое, прежде всего, их способностью продуцировать АТФ (Nohl Н. et al., 1997). Следствием окислительного стресса являются угнетение дыхания, имеющее структурное выражение в набухании митохондрий (Kang С.-М. et al., 1998). Окислительный стресс является причиной структурно-функциональных изменений митохондрий. В 4-месячном возрасте в гепатоцитах крыс OXYS в сравнении с Вистар — гиперплазия митохондрий с увеличением площади их «рабочей» поверхности, что является адаптивной реакцией производящих АТФ органелл. От-

4 мее 9 мес 12 мес 24 мес

a OXYS липиды Ш Вистар липиды

■ OXYS белоксинт. □ Вистар белоксинт.

Рис. 1. Поверхностная плотность ультраструктурных маркеров баланса липидонакапливающей и белоксинтезирующей функций звездчатых клеток крыс OXYS в динамике онтогенеза (м2/см3).

сутствие нарушений в дыхательной цепи митохондрий 4-месячных животных (Салганик Р.И. и др., 1995) может быть следствием активных компенсаторных процессов, свидетельством которых служит выявленное электронно-микроскопически увеличение количества мелких митохондрий у крыс OXYS. С 12-месячного возраста регистрировались признаки дегенеративно-дистрофических изменений гепатоцитов и структурная «декомпенсация» митохондрий, более выраженная у крыс OXYS по сравнению с Вистар.

У крыс OXYS в 12-месячном возрасте обнаружены увеличение размеров митохондрий и их нарушения ультраструктуры. Повреждение митохондриальных крист, характерное для «старых» митохондрий, может быть ответственным за снижение трансмембранного потенциала (Sastre J. etal., 1998). Нарастающее нарушение функций митохондрий ведет к развитию дефицита энергии, в условиях которого баланс в «системе про- и антиоксиданты» в тканях крыс OXYS сдвигается в пользу первых, и развивается окислительный стресс, являющийся индуктором фиброгенной активности звездчатых клеток печени. В целом, альтерация гепатоцитов в связи с нарастающим в онтогенезе и опережающим группу сравнения развитием

окислительного стресса является фактором индукции фиброгенной активации звездчатых клеток печени.

Количественно-качественные характеристики популяции звездчатых клеток в динамике фиброза печени при хронических гепатитах С и С+В. На начальных стадиях фиброза (О, I) при хронической HCV-инфекции и микст-инфекции HCV+HBV на полутонких срезах популяция звездчатых клеток печени отличалась выраженным полиморфизмом по размерам, форме, количеству липидных капель и их тинкториальным свойствам (различия в ос-миофильности липидосодержащего материала в разных клетках). Численная плотность звездчатых клеток печени, визуализируемых по наличию цитоплазматических липидных капель, составляла 4,98 ± 0,17 на единицу поля зрения, при этом численная плотность клеток Ито достоверно (р < 0,05) больше при HCV-моноинфекции и меньше при микст-инфекции HCV+HBV (2,45 ± 0,06).

При электронно-микроскопическом исследовании популяция звездчатых клеток еще более гетерогенна - отмечены неравномерность в электронной плотности липидных капель не только в пределах одной клетки, но и между разными липоцитами, иногда на фоне светлого липидного субстрата формировался более осмиофиль-ный маргинальный ободок; кроме того, резко полиморфны ядра, варьировала длина цитоплазматических отростков. Характерной ультраструиурной особенностью липидосодержащих звездчатых клеток, наряду с присутствием липидных капель, можно считать очень малое количество цитоплазматического матрикса, бедного мембранными органеллами, в том числе митохондриями, в связи с чем, по-видимому, данный фенотип липоцитов называют «покоящимся», или «пассивным».

При прогрессировании фиброза печени (стадии И и III) ультраструктура большинства звездчатых клеток приобретала так называемый смешанный, или переходный, фенотип - одновременное присутствие морфологических признаков и липидосодержащей, и фибробластоподобной клетки. В таких липоцитах ядра имели глубокие инвагинации нуклеолеммы, более крупное ядрышко, увеличенный объем цитоплазмы, сохраняющей липидные капли. Одновременно резко возрастало количество митохондрий, свободных рибосом, полисом и канальцев гранулярной цитоплазматической сети. Как правило, имелся мембранный контакт липидных капель и митохондрий, свидетельствующий об «утилизации» липидов. Во

многих клетках деградация липидных капель осуществлялась путем формирования аутофагосом, затем элиминирующихся путем экзо-цитоза. В некоторых случаях отмечалась пролиферация липоцитов смешанного фенотипа.

Фиброгенные звездчатые клетки, наиболее многочисленные на стадии цирроза печени, отличались отсутствием липидных гранул, вытянутой фибробластоподобной формой, выраженным белоксинтезирующим компартментом и формированием в цитоплазме контрактильных фибриллярных структур; перицеллюлярно в пространствах Диссе локализовались многочисленные пучки коллагеновых фибрилл.

При циррозе печени ультраструктурная организация паренхиматозных клеток печени во многом определялась степенью ремоде-лирования пространств Диссе и капилляризации синусоида, принадлежащего соответствующему тканевому микрорайону печени. При слабой выраженности капилляризации синусоидов и небольшом количестве коллагеновых фибрилл в пространствах Диссе пери-портальные и центролобулярные гепатоциты имели полиморфные признаки цитопатического воздействия вирусов гепатита.

В случаях значительной коллагенизации синусоидов гепатоциты приобретали фетальный фенотип- клетки несколько уменьшены в размерах, все полюсы цитолеммы с многочисленными длинными микроворсинками (что направлено на увеличение площади контакта с экстрацеллюлярным матриксом для обеспечения пластических ресурсов), в цитоплазме множество зерен гликогена. Наряду с многочисленными беспорядочно расположенными цистернами гранулярной цитоплазматической сети и мелкими митохондриями с плотным матриксом, в цитоплазме определялись свободные рибосомы и полисомы, что свидетельствовало об определенной «автономизации» гепатоцитов с производством белков «для внутреннего употребления».

Таким образом, при формировании внутридолькового перисину-соидального фиброза при прогрессировании хронического гепатита С выявлены морфологические признаки активации звездчатых клеток печени, превращение их из липоцитов, депонирующих витамин А, в клетки контрактильные, пролиферирующие и фиброгенные.

На стадии трансформации в цирроз печени происходило значительное уменьшение численной плотности липидосодержащих звездчатых клеток, свидетельствующее об их фиброгенной транс-

М2/СМ3

Р 0-1

Цирроз

Рис. 2. Поверхностно-объемное отношение гепатоцитов к синусоидам (О) и численная плотность липидосодержащих звездчатых клеток (®) в динамике фиброза печени инфекционно-вирусного генеза.

формации (рис. 2). Однако при сформированном циррозе печени встречались участки паренхимы печени с перисинусоидальны-ми липидосодержащими звездчатыми клетками. Кроме того, в фиброзных септах обнаружены очаговые скопления многочисленных липоцитов, что, вероятно, отражает реверсию фенотипа и свидетельствует о важной роли звездчатых клеток в метаболизме ретиноидов в организме даже на стадии цирроза органа. Наиболее вероятно, звездчатые клетки печени представляют собой не статичную, а динамичную популяцию в меняющейся в зависимости от функциональной активности трехмерной структуре тканевого микрорайона печени.

По данным морфометрического анализа, степень выраженности перигепатоцеллюлярного фиброза при хронической НС У-инфекции имела достоверную обратную корреляцию с численной плотностью липидосодержащих звездчатых клеток - их численная плотность на стадии фиброза III и при циррозе органа составляла 0,20 ± 0,03 в единице поля зрения, что достоверно меньше (р<0,05), чем на стадиях фиброза 0 -1 (4,98 ± 0,17) и II (2,02 ± 0,04).

Фиброгенная активность матрикс-продуцирующих клеток печени тестирована нами с помощью иммуногистохимического

исследования по экспрессии гладкомышечного альфа-актина. Продукты иммуногистохимической реакции различной интенсивности обнаруживались в цитоплазме активированных звездчатых клеток, локализующихся внутри печеночных долек. Особенно значительная экспрессия гладкомышечного а-акгина отмечалась в цитоплазме фибробластов и миофибробластов портальных зон, гладкомышеч-ных клетках сосудов и миофибробластах вокруг центральных вен.

Несмотря на то, что большинство данных о клеточных механизмах фиброгенеза получены в исследованиях, выполненных на звездчатых клетках печени, в настоящее время очевидно, что различные матрикс-продуцирующие клетки (каждая с определенной локализацией, иммуногистохимическим и ультраструктурным фенотипом) вносят свой вклад в развитие фиброза печени (Gabele Е. et al., 2003; Desmet V.J., Roskams Т., 2004). Они включают в себя фибробласты и миофибробласты портальных трактов, гладкомы-шечные клетки сосудов и миофибробласты вокруг центральных вен. Вероятно, все матрикс-продуцирующие клетки активизируются в условиях хронического повреждения печени.

Наиболее вероятно, звездчатые клетки имеют ряд других функций, поскольку они обнаружены и во внепеченочных органах, таких как поджелудочная железа, легкие, почки и кишечник, и предполагается, что печеночные и внепеченочные звездчатые клетки формируют диссеминированную систему звездчатых клеток организма аналогично APUD-системе (Geerts А., 2004). М. Pinzani и соавт. (1998) высказали оригинальное мнение о том, что несмотря на ассоциацию звездчатых клеток с циррозом печени, их фиброгенная активация может играть благоприятную роль в случаях острого повреждения печени, потому что в результате формируется соответствующий стромальный контур для регенерации с поддержанием печеночной архитектуры.

Важно отметить, что звездчатые клетки и другие клетки, вовлеченные в фиброгенез, секретируют набор энзимов - матриксные металлопротеиназы, деградирующие компоненты экстрацелпюляр-ного матрикса, в том числе коллаген и другие молекулы, и секреция протеиназ подчеркивает потенциально динамичную природу фиброзных процессов в печени. Исследование экспрессии мРНК этих энзимов показало, что они экспрессируются в печени даже при циррозе, но их активность ограничивается тканевыми ингибиторами металлопротеиназ (Eng F.J., Friedman S.L., 2000).

При хроническом гепатите С нами обнаружена значительная гетерогенность гепатоцитов: от фокальной редукции внутриклеточных органелл и отложений гликогена до почти тотальной «опустошенности» цитоплазматического матрикса и/или наличия мелковезикулярной липидной инфильтрации. Дегенерирующие мембранные органеллы объединялись с лизосомами, формируя вторичные лизосомы с последующим превращением их в гетерогенные резидуальные тельца. В качестве компенсаторной реакции в части преимущественно перипортальных гепатоцитов перинуклеарно локализованы «островки» внутриклеточной регенерации, содержащие элементы гранулярной цитоплазматической сети и мелкие митохондрии с плотным матриксом.

При микст-инфекции HCV+HB V, т.е. при воздействии ДНК-вируса гепатита В наибольшую роль играла ацидофильная дегенерация перипортальных гепатоцитов с развитием некробиотических изменений. В центролобулярных и перицентральныхгепатоцитах часто локализовались полиморфные липидные включения; встречались клетки с признаками ацидофильной дегенерации - с гомогенной, резко эозинофильной цитоплазмой и пикнотичными ядрами. В большинстве биоптатов наблюдали заметное расширение и деформацию портальных трактов за счет клеточной инфильтрации и склероза, обычно с сохранением четких паренхиматозно-стро-мальных границ.

Фиброзные изменения печени значительно варьировали, стадии фиброза II и III и трансформация в цирроз печени ассоциировались с микст-гепатитом или значительными токсическими воздействиями. В этих случаях ремоделированы пространства Диссе с многочисленными коллагеновыми фибриллами. Популяция эндотелиальных клеток синусоидов характеризовалась полиморфизмом ультраструктурной организации с варьированием электронной плотности цитоплазмы и в разной степени выраженными альтерацией и редукцией органелл биосинтеза и пиноцитозных везикул. Клетки Купфера имели признаки высокой функциональной активности: хорошо развитую цитоплазматическую сеть и обилие полиморфных лизосом.

Тканевый стереологический анализ образцов печени при хронических гепатитах С и С+В обнаружил, что наличие вируса гепатита В приводило к тенденции роста относительного объема синусоидов, однако поверхностно-объемное отношение синусоидов не разли-

чалось. В динамике фиброза печени поверхностно-объемное отношение гепатоцитов к синусоидам постепенно нарастало, отражая опережающую убыль гепатоцитов и редукцию микрососудистой компоненты печеночных долек (см. рис. 2).

В целом, нами продемонстрирована роль звездчатых клеток печени в развитии фиброза органа при хроническом гепатите С. При прогрессировании фиброза значимо уменьшается численная плотность липидосодержащих звездчатых клеток, при этом часть популяции сохраняет жиронакапливающий фенотип для осуществления метаболической функции. Миофибробластоподобные звездчатые клетки печени в состоянии фиброгенной активации характеризуются следующими морфологическими признаками: уменьшение числа и последующее исчезновение липидных капель, очаговая пролиферация липоцитов, гиперплазия гранулярной цитоплазма-тической сети и митохондрий, иммуногистохимическая экспрессия фибробластоподобных характеристик, в том числе гладкомышечного а-актина, и формирование перицеллюлярных коллагеновых фибрилл в пространствах Диссе.

Фиброз на уровне центральных вен, синусоидов или портальных сосудов лимитирует нормальную гемодинамику печени, что приводит к сокращению метаболически эффективной паренхимы. Ремоделирование пространств Диссе нарушает нормальный метаболизм между кровью и гепатоцитами, препятствуя клиренсу циркулирующих макромолекул, изменяя межклеточные взаимодействия и приводя к дисфункции клеток печени (Вгапс1ао О.Р. ег а1., 2006).

Большинство современных исследований по циррозу печени сфокусировано на роли звездчатых клеток, однако необходимо отметить, что инициирующим фактором фиброгенной трансформации звездчатых клеток является повреждение паренхиматозных клеток печени - гепатоцитов (Непомнящих Д.Л. и др., 2006). Различные цитопатические воздействия приводят к уменьшению численности популяции гепатоцитов и дисфункции микроокружения паренхиматозных клеток с развитием фиброза и цирроза органа.

необходимое звено в пространстве Диссе, участвующее в тонкой регуляции аутокринных и паракринных стимулов, в быстром ответе на изменения компонентов экстрацеллюлярного матрикса и адекватном реагировании на метаболические потребности, возникающие в процессе развития и регенерации печени. Более того, жизненно важная функция поддержания системного гомеостаза связана с депонированием и мобилизацией ретиноидов, их способностью презентации антигенов и индукции толерантности, так же как с определенными взаимоотношениями с потомками костномозговых клеток (Friedman S.L., 2008). Интерес к этому типу клеток неуклонно возрастает, с ними связаны определенные надеяеды понимания физиологии печени, а также диагностики и лечения патологических процессов. Необходимо подчеркнуть значительную структурно-функциональную пластичность звездчатых клеток.

ВЫВОДЫ

1. Центральное событие ремоделирования пространств Диссе у крыс OXYS и при воздействии вирусов гепатита С и В - активация звездчатых клеток печени, превращение их из липоцитов, накапливающих витамин А, в фиброгенные клетки. Липидонакапливающие звездчатые клетки характеризуются выраженным полиморфизмом по размерам, форме, количеству липидных капель и их тинктори-альным свойствам.

2. В онтогенезе у крыс OXYS и при воздействии вирусов гепатита, характеризующихся прогрессированием фиброза, ультраструктура звездчатых клеток печени приобретала смешанный, или переходный, фенотип - одновременное присутствие морфологических признаков и липидосодержащей, и фибробластоподобной клетки; отмечены очаговая пролиферация и появление двуядерных клеток. В переходных звездчатых клетках при сохранении одиночных липидных капель увеличивался объем цитоплазмы и активизировалась белоксинтезирующая функция с увеличением количества свободных рибосом, полисом и канальцев гранулярной цитоплазматической сети. Деградация липидных капель осуществлялась путем формирования аутофагосом с последующей элиминацией экзоцитозом.

3. На стадии трансформации в цирроз печени численная плотность липидосодержащих звездчатых клеток достоверно снижена,

но в пространствах Диссе увеличено число клеток с ультраструктурными признаками матрикс-продуцирующих клеточных элементов, свидетельствующее об их фиброгенной трансформации. Фиброген-ная звездчатая клетка отличалась отсутствием липидных гранул, фибробластоподобной формой, выраженным белоксинтезирующим компартментом и формированием в цитоплазме контрактильных фибриллярных структур. Синхронно с фибробластоподобной трансформацией звездчатых клеток экстрацеллюлярно в пространствах Диссе формировались многочисленные пучки коллагеновых фибрилл.

4. Степень выраженности перигепатоцеллюлярного фиброза при хронической НСУ-инфекции имела достоверную обратную корреляцию с численной плотностью липидосодержащих звездчатых клеток - их численная плотность на стадии фиброза III и при циррозе органа составляла 0,20 ± 0,03 в единице поля зрения, что достоверно меньше (р < 0,05), чем на стадиях фиброза 0-1 (4,98 ± 0,17) и II (2,02 ±0,04).

5. Фиброгенная активность матрикс-продуцирующих клеток различной интенсивности, тестированная с помощью иммуногистохи-мического исследования по экспрессии гладкомышечного а-актина, обнаруживалась в цитоплазме активированных внутридольковых звездчатых клеток. Особенно значительна экспрессия гладкомышечного а-акгина в цитоплазме фибробластов и миофибробластов портальных зон, гладкомышечных клетках сосудов и миофиброб-ластах стенки центральных вен.

6. В обеих моделях фиброгенная активация звездчатых клеток включает в себя следующие признаки: уменьшение числа и последующее исчезновение липидных капель, очаговую пролиферацию липоцитов, гиперплазию гранулярной цитоплазматической сети, экспрессию фибробластоподобных характеристик, в том числе гладкомышечного а-актина, и формирование экстрацеллюлярных коллагеновых фибрилл.

7. В динамике онтогенеза у преждевременно стареющих крыс линии ОХУБ в звездчатых клетках вьивлены ультраструктурные сте-реологические маркеры индукции белоксинтезирующей функции, обратно коррелирующие с выраженностью функции депонирования ретиноидов, оцениваемой по поверхностной плотности липидных капель. Прогрессирующие и более значительные по сравнению с Вистар дисфункции митохондрий гепатоцитов, ассоциированные с

окислительным стрессом, и более выраженная фиброгенная активность звездчатых клеток являются ключевыми факторами фиброза печени у крыс линии OXYS.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Айдагулова C.B., Непомнящих Г.И., Капустина В.И. Звездчатые клетки печени в динамике развития фиброза при хронической HCV-инфекции // Сиб. журн. гастроэнтерол. гепатол. - 2005. - № 19. - С. 17-18.

2. Капустина В.И., Айдагулова C.B. Светооптическая и ультраструктурная характеристика печени при действии вибрационного фактора // Сиб. журн. гастроэнтерол. гепатол. - 2005. - № 19. - С. 149-150.

3. Нохрина Ж.В., Капустина В.И., Непомнящих Д.Л., Айдагулова C.B. Клинико-патогистологическое исследование хронической HCV+HBV-инфекции при трансформации в цирроз печени // Актуальные вопросы современной медицины: Сборник материалов XV науч.-практ. конф. врачей. - Новосибирск, 2005. - С. 220.

4. Айдагулова C.B., Непомнящих Д.Л., Капустина В.И. Ультраструктурное и иммуногистохимическое исследование звездчатых клеток печени в динамике фиброгенеза // Рос. журн. гастроэнтерол.

- Приложение № 27. Материалы Одиннадцатой Российской конференции «Гепатология сегодня». -М., 2006. — С. 50. № 172.

5. Айдагулова C.B., Колосова Н.Г., Капустина В.И. Ультраструктура митохондрий гепатоцитов преждевременно стареющих крыс OXYS // Сиб. науч. вестник. - 2006. - Вып. IX. - С. 31 - 34.

6. Капустина В.И., Непомнящих Г.И., Айдагулова C.B. Клетки Ито в динамике развития цирроза печени // Сиб. науч. вестник.

- 2006. - Вып. IX. - С. 52 - 54.

7. Непомнящих Д.Л., Виноградова Е.В., Постникова О.А., Капустина В.И. Клинические и патоморфологические особенности цирроза печени инфекционно-вирусного генеза // Сиб. журн. гастроэнтерол. - 2006. - № 20. - С. 28 - 31.

8. Айдагулова C.B., Капустина В.И., Кладова Т.И. Комплексное морфологическое исследование звездчатых клеток печени в динамике фиброза инфекционно-вирусного генеза // Труды II Съезда Рос.

общества патологоанатомов. - М., 2006. - Т. 1. - С. 70.

9. Непомнящих Д.Л., Капустина В.И., Айдагулова С.В. Звездчатые клетки печени в динамике фиброгенеза / Материалы 8-го Международного Славяно-Балтийского научного форума «Санкт-Петербург - Гастро-2006» // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. -2006. —№ 1 -2.— С. М107.

10. Непомнящих Г.И., Айдагулова С.В., Непомнящих Д.Л., Капустина В.И., Постникова О.А. Ультраструктурное и иммуногис-тохимическое исследование звездчатых клеток печени в динамике фиброза и цирроза печени инфекционно-вирусного генеза // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - Т. 142,№12.-С. 681-686.

11. Nepomnyashchikh G.I., Aidagulova S.V., Nepomnyashchikh D.L., Kapustina V.I., Postnikova O.A. Ultrastructural and immunohistochemical study of hepatic stellate cells over the course of infectious viral fibrosis and cirrhosis of the liver // Bull. Exper. Biol. Med. - 2006. - Vol. 142, №6.-P. 723-728.

12. Айдагулова C.B., Капустина В.И. Полиморфизм звездчатых клеток и их роль в фиброгенезе // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - 2008. - № 6- - С. 93 - 97.

Соискатель

В.И. Капустина

Подписано в печать 18.01.2010. Формат 60x84/16. Гарнитура Тайме. Бумага Zoom plus. Усл. печ. л. 1,0.

Тираж 100 экз. Заказ № 12._

Отпечатано в типографии ОАО "НИИ систем" Новосибирск-58, ул. Русская, 39. Т. 333-37-39

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Капустина, Валентина Ильинична

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. СОВРЕМЕННЫЕ КОНЦЕПЦИИ ПАРЕНХИМАТОЗНО-СТРОМАЛЬНЫХ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ

И ИХ РОЛЬ В ГИСТОГЕНЕЗЕ ФИБРОЗА ПЕЧЕНИ.

1.1. Стереотипность реакций паренхиматозных клеток печени в условиях альтерации и регенерации.

1.2. Современные представления о фиброгенезе печени.

1.3. Структура и функции звездчатых клеток печени в норме и патологии.

1.4. Резюме.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛА

И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика экспериментальной модели.

2.2. Характеристика клинической модели.

2.3. Методы светооптического, электронно-микроскопического и иммуногистохимического исследования.

2.4. Методы морфометрии, стереологии и статистики.

Глава 3. СВЕТООПТИЧЕСКАЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕЧЕНИ КРЫС С ГЕНЕТИЧЕСКИ ДЕТЕРМИНИРОВАННЫМИ ДИСМЕТ АБ О JIИЧЕ СКИ- И Н В О ЛЮТИВНЫМИ ИЗМЕНЕНИЯМИ.

3.1. Светооптическая и ультраструктурная характеристика гепатоцитов и звездчатых клеток печени крыс OXYS в возрастном аспекте.

3.2. Стереологическое исследование и динамика численной плотности звездчатых клеток в онтогенезе.

3.3. Резюме

Глава 4. СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ ПЕЧЕНИ В ДИНАМИКЕ ФИБРОЗА ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ HCV

И НСУ+НВУ-ИНФЕКЦИИ.

4.1. Светооптическая и ультраструктурная характеристика гепатоцитов и звездчатых клеток печени в динамике фиброза

4.2. Иммуногистохимическое, морфометрическое и стереологическое исследование печени в динамике фиброза.

4.3. Резюме.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ультраструктурный и иммуногистохимический анализ звездчатых клеток печени в онтогенезе и при ремоделировании пространств Диссе"

Актуальность темы. Звездчатые клетки печени (жиронакапливаю-щие клетки, липоциты печени, или клетки Ито), локализующиеся в пространствах Диссе и содержащие ретиноиды, привлекают внимание исследователей - гистологов, физиологов, гепатологов на протяжении более 130 лет, но лишь в последние годы, после значительного прогресса методов структурного исследования, появились четкие доказательства их роли в фиброгенных реакциях печени (Gabele Е. et al., 2003; Sato М. et al., 2003; Balabaud С. et al., 2004; Friedman S.L., 2008).

Фиброз - результат нарушения баланса между процессами синтеза и распада экстрацеллюлярного матрикса с преобладанием процессов образования внеклеточных матриксных компонентов. Это универсальная реакция клеточных популяций печени на хроническое повреждение, обусловленное различными неблагоприятными факторами, среди которых наибольший удельный вес имеют алкоголь и другие токсические воздействия, инфекционные агенты, а также наследственные нарушения обмена меди и железа (Хазанов А.И., Некрасова Н.Н., 2002; McCaughan G.W., George J., 2004; Ryder S.D., 2004).

Достижения в изучении фиброза печени привели к пониманию клеточных основ фиброгенеза при хроническом поражении печени, и в настоящее время звездчатые клетки печени идентифицированы как основной источник внутридольковых, или перисинусоидальных, компонентов внеклеточного матрикса, в частности, коллагена (Eng F.J., Friedman S.L., 2000; Sato М. et al., 2003; Senoo H., 2004). Другими «точками роста» соединительной ткани при фиброзных изменениях печени являются портальные тракты и перицентральные зоны долек, в соответствии с этим, с участием фибробластов печени формируются портальный и центральный фиброз (Ramadori G., Saile В., 2004).

Тканевый микрорайон печени «просвет синусоида с протекающей в нем кровью - эндотелиоцит - пространство Диссе - гепатоцит» является зоной наибольшей функциональной ответственности, структура которого обеспечивает оптимизацию выполнения метаболической функции гепато-цитами, поэтому именно перисинусоидальный, или перигепатоцеллюляр-ный, фиброз относят к прогностически наиболее неблагоприятным вариантам в связи с нарушением при этом транссинусоидального обмена и метаболической функции гепатоцитов (Непомнящих Д.Л. и др., 2006).

В связи с большой значимостью вопроса реверсии фиброза в различных органах проводится множество исследований по выяснению тонких механизмов фиброгенеза и фибролизиса с поиском значимых маркеров и вероятных мишеней для разработки адекватной терапии (Desmet V.J., Ros-kams Т., 2004; Kisseleva Т., Brenner D.A., 2007; Moreira R.K., 2007). В этом плане нами выбрана экспериментальная модель - линия преждевременно стареющих крыс OXYS (первоначально зарегистрированная как W/SSM), которая создана в Институте цитологии и генетики СО РАН селекцией и инбридингом крыс Вистар, чувствительных к катарактогенному эффекту больших доз галактозы (Соловьева Н.А. и др., 1975).

Наряду со 100%-м развитием катаракты в возрасте 6 мес, этих животных характеризуют снижение продолжительности жизни, повышение артериального давления, сенильный остеопороз, ранние инволютивные изменения внутренних органов, в том числе кардиомиопатия, миопатия, а также нарушения когнитивных функций мозга (Непомнящих JLM. и др., 1995; Лоскутова Л.В., Колосова Н.Г., 2000; Колосова Н.Г. и др., 2003; Непомнящих Л.М., Бакарев М.А., 2005). В основе патогенеза этих проявлений - наследуемая повышенная продукция активных кислородных метаболитов, обнаруженная в печени и миокарде животных (Синицына О.И. и др., 2006; Salganik R.I. et al., 1994). Таким образом, линия крыс OXYS может быть перспективной моделью исследования структурно-функциональных изменений звездчатых клеток печени в условиях генетически программированного окислительного стресса, являющегося одним из ведущих индукторов фиброгенеза.

Кроме того, в настоящее время чрезвычайно актуальны исследования, касающиеся фиброгенеза в печени, связанного с инфицированием вирусами гепатита В и С и развитием хронической HBV- и/или HCV-инфекции в связи с высокой степенью заболеваемости во всех странах (Russo M.W. et al., 2005). Следует отметить, что несмотря на предпринимаемые усилия, экспериментальной модели, воспроизводящей инфекционный процесс гепатита С с последующей трансформацией в цирроз печени, не существует. HCV-подобная инфекция у макак-резусов, возникающая спонтанно, протекает без структурных повреждений печени в течение нескольких лет (Кор-зая Л.И. и др., 2002). В связи с этим морфологическое исследование звездчатых клеток печени в динамике хронической HCV-инфекции является актуальным.

Цель работы - исследование ультраструктурных изменений звездчатых клеток печени крыс OXYS в онтогенезе, а также изучение ультраструктурных количественно-качественных характеристик популяции звездчатых клеток в динамике фиброза печени инфекционно-вирусного генеза.

Задачи исследования:

1. Изучить структурно-функциональные особенности звездчатых клеток печени крыс OXYS (модель генетически детерминированного окислительного стресса) в возрастном аспекте.

3. Провести количественно-качественный анализ звездчатых клеток печени в динамике онтогенеза и фиброгенеза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У преждевременно стареющих крыс линии OXYS и при хроническим воздействии вирусов гепатита С и В ремоделированы пространства Диссе в связи с индукцией фиброгенного потенциала звездчатых клеток печени, что является неблагоприятным структурно-функциональным маркером прогрессии фиброза и цирроза печени.

2. С помощью морфометрического анализа установлено, что степень выраженности перигепатоцеллюлярного фиброза имеет достоверную обратную корреляцию с численной плотностью липидосодержащих звездчатых клеток.

3. Ведущим маркером фиброгенной активации звездчатых клеток является экспрессия гладкомышечного а-актина, выявляемая с помощью двухшагового непрямого иммунопероксидазного метода.

Научная новизна. Исследован морфогенез фиброза печени инфекци-онно-вирусного генеза (хронические HCV- и HCV+HBV-инфекции) и фиброзные изменения печени в онтогенезе преждевременно стареющих крыс линии OXYS с генетически детерминированным развитием окислительного стресса. В морфогенезе фиброза печени ведущую роль играют альтерация гепатоцитов, ремоделирование пространств Диссе и фиброген-ная активация звездчатых клеток.

Впервые показано, что в онтогенезе у крыс OXYS и при инфицировании вирусом гепатита С звездчатые клетки печени в состоянии фиброгенной активации экспрессируют переходный, или смешанный, фенотип: уменьшение числа и последующее исчезновение липидных капель с синхронной сменой звездчатой формы на фибробластоподобную полигональную и увеличением размеров клетки, индукция белоксинтезирующей функции с гиперплазией элементов гранулярной цитоплазматической сети, увеличение числа митохондрий. Структурные изменения сопровождаются экспрессией гладкомышечного а-актина - иммуногистохимического маркера фибробластоподобных клеток, продуцирующих компоненты экстра-целлюлярного матрикса. Синхронно перицеллюлярно формируются колла-геновые фибриллы как ведущий фактор ремоделирования пространств Диссе.

Впервые в динамике онтогенеза у преждевременно стареющих крыс линии OXYS в звездчатых клетках выявлены ультраструктурные стереоло-гические маркеры индукции белоксинтезирующей функции, обратно коррелирующие с выраженностью функции депонирования ретиноидов, оцениваемой по поверхностной плотности липидных капель. Прогрессирующие и более значительные по сравнению с Вистар дисфункции митохондрий гепатоцитов, ассоциированные с окислительным стрессом, и более выраженная фиброгенная активность звездчатых клеток являются ключевыми факторами фиброза печени у крыс линии OXYS.

Практическая значимость. Полученные результаты раскрывают закономерности тканевых и ультраструктурных реакций в условиях альтерации и компенсаторно-приспособительных реакций клеточных популяций печени. Важен аспект индукции фиброгенного потенциала звездчатых клеток печени, являющийся неблагоприятным структурно-функциональным маркером прогрессии фиброза и цирроза печени. Результаты исследования целесообразно внести в курс преподавания соответствующих разделов общей и частной гистологии, а также использовать для дальнейшего углубления представлений о структурной модификации печени.

Апробация работы. Материалы исследования представлены на Тринадцатой и Четырнадцатой Российской научно-практической конференции

Достижения современной гастроэнтерологии» (Томск, 2005, 2006); XV-й городской научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2005); Одиннадцатой Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2006); П-м съезде Российского общества патологоанатомов (Москва, 2006); 8-м Международном Славяно-Балтийском научном форуме «Санкт-Петербург - Гастро-2006» (Санкт-Петербург, 2006); межлабораторной конференции Научно-исследовательского института региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (Новосибирск, 2009).

1. Айдагулова С.В., Непомнящих Г.И., Капустина В.И. Звездчатые клетки печени в динамике развития фиброза при хронической HCV-инфекции // Сиб. журн. гастроэнтерол. гепатол. - 2005. - № 19. - С. 17 - 18.

2. Капустина В.И., Айдагулова С.В. Светооптическая и ультраструктурная характеристика печени при действии вибрационного фактора // Сиб. журн. гастроэнтерол. гепатол. - 2005. - № 19. - С. 149 - 150.

3. Нохрина Ж.В., Капустина В.И., Непомнящих Д.Л., Айдагулова С.В. Клинико-патогистологическое исследование хронической HCV+HBV-инфекции при трансформации в цирроз печени // Актуальные вопросы современной медицины: Сборник материалов XV науч.-практ. конф. врачей. - Новосибирск, 2005. - С. 220.

4. Айдагулова С.В., Непомнящих Д.Л., Капустина В.И. Ультраструктурное и иммуногистохимическое исследование звездчатых клеток печени в динамике фиброгенеза // Рос. журн. гастроэнтерол. - Приложение № 27. Материалы Одиннадцатой Российской конференции «Гепатология сегодня». - М., 2006. - С. 50. № 172.

5. Айдагулова С.В., Колосова Н.Г., Капустина В.И. Ультраструктура митохондрий гепатоцитов преждевременно стареющих крыс OXYS // Сиб. науч. вестник. - 2006. - Вып. IX. - С. 31 - 34.

6. Капустина В.И., Непомнящих Г.И., Айдагулова С.В. Клетки Ито в динамике развития цирроза печени // Сиб. науч. вестник. - 2006. - Вып. IX. - С. 52 - 54.

8. Айдагулова С.В., Капустина В.И., Кладова Т.И. Комплексное морфологическое исследование звездчатых клеток печени в динамике фиброза инфекционно-вирусного генеза // Труды II Съезда Рос. общества патологоанатомов. - М., 2006. - Т. 1. - С. 70.

10. Непомнящих Г.И., Айдагулова С.В., Непомнящих Д.Л., Капустина В.И., Постникова О.А. Ультраструктурное и иммуногистохимическое исследование звездчатых клеток печени в динамике фиброза и цирроза печени инфекционно-вирусного генеза // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - Т. 142, № 12. - С. 681 - 686.

11. Nepomnyashchikh G.I., Aidagulova S.V., Nepomnyashchikh D.L., Ка-pustina V.I., Postnikova O.A. Ultrastructural and immunohistochemical study of hepatic stellate cells over the course of infectious viral fibrosis and cirrhosis of the liver // Bull. Exper. Biol. Med. - 2006. - Vol. 142, № 6. - P. 723 - 728.

12. Айдагулова C.B., Капустина В.И. Полиморфизм звездчатых клеток и их роль в фиброгенезе // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. -2008. - № 6. - С. 93 - 97.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Капустина, Валентина Ильинична

ВЫВОДЫ

2. В онтогенезе у крыс OXYS и при воздействии вирусов гепатита, характеризующихся прогрессированием фиброза, ультраструктура звездчатых клеток печени приобретала смешанный, или переходный, фенотип -одновременное присутствие морфологических признаков и липидосодер-жащей, и фибробластоподобной клетки; отмечены очаговая пролиферация и появление двуядерных клеток. В переходных звездчатых клетках при сохранении одиночных липидных капель увеличивался объем цитоплазмы и активизировалась белоксинтезирующая функция с увеличением количества свободных рибосом, полисом и канальцев гранулярной цитоплазматической сети. Деградация липидных капель осуществлялась путем формирования аутофагосом с последующей элиминацией экзоцитозом.

3. На стадии трансформации в цирроз печени численная плотность липидосодержащих звездчатых клеток достоверно снижена, но в пространствах Диссе увеличено число клеток с ультраструктурными признаками матрикс-продуцирующих клеточных элементов, свидетельствующее об их фиброгенной трансформации. Фиброгенная звездчатая клетка отличалась отсутствием липидных гранул, фибробластоподобной формой, выраженным белоксинтезирующим компартментом и формированием в цитоплазме контрактильных фибриллярных структур. Синхронно с фибробластоподобной трансформацией звездчатых клеток экстрацеллюлярно в пространствах Диссе формировались многочисленные пучки коллагеновых фибрилл.

4. Степень выраженности перигепатоцеллюлярного фиброза при хронической HCV-инфекции имела достоверную обратную корреляцию с численной плотностью липидосодержащих звездчатых клеток - их численная плотность на стадии фиброза III и при циррозе органа составляла 0,20 ± 0,03 в единице поля зрения, что достоверно меньше (р<0,05), чем на стадиях фиброза 0 -1 (4,98+0,17) и II (2,02 ± 0,04).

5. Фиброгенная активность матрикс-продуцирующих клеток различной интенсивности, тестированная с помощью иммуногистохимического исследования по экспрессии гладкомышечного а-актина, обнаруживалась в цитоплазме активированных внутридольковых звездчатых клеток. Особенно значительна экспрессия гладкомышечного а-актина в цитоплазме фибробластов и миофибробластов портальных зон, гладкомышечных клетках сосудов и миофибробластах стенки центральных вен.

6. В обеих моделях фиброгенная активация звездчатых клеток включает в себя следующие признаки: уменьшение числа и последующее исчезновение липидных капель, очаговую пролиферацию липоцитов, гиперплазию гранулярной цитоплазматической сети, экспрессию фибробласто-подобных характеристик, в том числе гладкомышечного а-актина, и формирование экстрацеллюлярных коллагеновых фибрилл.

7. В динамике онтогенеза у преждевременно стареющих крыс линии OXYS в звездчатых клетках выявлены ультраструктурные стереологиче-ские маркеры индукции белоксинтезирующей функции, обратно коррелирующие с выраженностью функции депонирования ретиноидов, оцениваемой по поверхностной плотности липидных капель. Прогрессирующие и более значительные по сравнению с Вистар дисфункции митохондрий гепатоцитов, ассоциированные с окислительным стрессом, и более выраженная фиброгенная активность звездчатых клеток являются ключевыми факторами фиброза печени у крыс линии OXYS.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В целом, нами продемонстрирована роль звездчатых клеток печени в развитии фиброза органа при хроническом гепатите С. При прогрессиро-вании фиброза значимо уменьшается численная плотность липидосодер-жащих звездчатых клеток, при этом часть популяции сохраняет жиронака-пливающий фенотип для осуществления метаболической функции.

Миофибробластоподобные звездчатые клетки печени в состоянии фиброгенной активации характеризуются следующими морфологическими признаками: уменьшение числа и последующее исчезновение липидных капель, очаговая пролиферация липоцитов, гиперплазия гранулярной ци-топлазматической сети и митохондрий, иммуногистохимическая экспрессия фибробластоподобных характеристик, в том числе гладкомышечного а-актина, и формирование перицеллюлярных коллагеновых фибрилл в пространствах Диссе.

М. Pinzani и соавт. (1998) высказали оригинальное мнение о том, что несмотря на ассоциацию звездчатых клеток с циррозом печени, их фиброгенная активация может играть благоприятную роль в случаях острого повреждения печени, потому что в результате формируется соответствующий стромальный контур для регенерации с поддержанием печеночной архитектуры.

Важно отметить, что звездчатые клетки и другие клетки, вовлеченные в фиброгенез, секретируют набор энзимов - матриксные металлопротеина-зы, деградирующие компоненты экстрацеллюлярного матрикса, в том числе коллаген и другие молекулы, и секреция протеиназ подчеркивает потенциально динамичную природу фиброзных процессов в печени. Исследование экспрессии мРНК этих энзимов показало, что они экспрессируют-ся в печени даже при циррозе, но их активность ограничивается тканевыми ингибиторами металлопротеиназ (Eng F.J., Friedman S.L., 2000).

Звездчатые клетки печени, составляющие приблизительно 15% всего числа клеток печени, являются главными клетками, накапливающими витамин А (ретиноиды) (Friedman, 2003). Все звездчатые клетки в печеночной паренхиме имеют одинаковую функцию, но гетерогенны по экспрессии десмина, накоплению витамина А, пролиферативной активности, продукции цитокинов и продукции экстрацеллюлярного матрикса (Senoo, 2004).

Активированные звездчатые клетки печени в культуре имеют миофибробластоподобную форму и хорошо развитый цитоскелет из толстых волокон актина. Однако, при культивировании на геле из интерстициаль-ного коллагена у звездчатых клеток печени индуцируется удлинение длинных цитоплазматических отростков путем реорганизации микротрубочек (Sato et al., 1998). В дополнение к цитоскелету из актина и микротрубочек, звездчатые клетки печени экспрессируют несколько типов промежуточных филаментов, включая глиальный фибриллярный кислый протеин (Niki et al., 1996, 1999), виментин и десмин (Burt et al., 1986), и их экспрессия изменяется в процессе активации.

Поскольку звездчатые клетки печени экспрессируют глиальный фибриллярный кислый протеин и нестин (Niki et al., 1999), это дало основание предполагать, что они происходят из нервного гребня. Кроме того, стволовые клетки нервного гребня могут дифференцироваться в миофибробласты, экспрессирующие гладкомышечный а-актин, который является маркером активированных звездчатых клеток печени. Хорошо известно, что звездчатые клетки печени реактивны к Гольджи-окрашиванию (Wake, 1980), которое обычно используется для выявления нейрофиламентов.

Звездчатые клетки печени также демонстрируют уникальные характеристики экспрессии генов, похожей на таковую у нервных клеток, например, экспрессия молекул адгезии нервных клеток (N-CAM), синаптофизи-на (Cassiman et al., 1999), нестина, нейротропинов и нейротропиновых рецепторов (Cassiman et al., 2001), глиального фибриллярного кислого протеина или ассоциированного с микротрубочками протеина-2 (Sato et al., 2001). Эти результаты также предполагают происхождение звездчатых клеток печени из нервного гребня. Активированные звездчатые клетки печени демонстрируют общие фенотипические характеристики с гладкомы-шечными клетками и миофибробластами, которые происходят из нервного гребня и экспрессируют виментин, десмин и гладкомышечный а-актин.

Считалось, что звездчатые клетки печени локализуются только в перисинусоидальном пространстве Диссе, которое определяется как пространство между пластинками паренхиматозных клеток и синусоидальной стенкой, состоящей из эндотелиальных клеток. Однако, звездчатые клетки печени имеют тесный контакт с эндотелиоцитами через компоненты неполной базальной мембраны, и интерстициальные коллагеновые волокна и нервные окончания проникают сквозь пространство между звездчатыми клетками печени и паренхиматозными клетками, и, следовательно, резонно определять перисинусоидальное пространство Диссе как пространство между пластинками паренхиматозных клеток и комплексом звездчатых клеток печени и эндотелиальных клеток (Wake, 1995).

Локализация и длинные цитоплазматические отростки звездчатых клеток печени способствуют их взаимодействиям с соседними клетками. Они имеют прямой контакт с эндотелиоцитами и взаимодействуют с гепа-тоцитами через микровезикулы, распространяющиеся от цитоплазматиче-ских отростков.

Взаимодействия клеток с компонентами экстрацеллюлярного матрикса изменяют разнообразные клеточные функции, включая клеточную диф-ференцировку, миграцию, пролиферацию и выживание (Hynes, 1992), и сигналы от экстрацеллюлярного матрикса могут влиять на процессы эмбрионального роста и дифференцировки, тканевое ремоделирование и регенерацию (Davis et al., 1987; Jones et al., 1993; Senoo et al., 1996). В нормальной печени пространство между гепатоцитами и комплексом звездчатых клеток и эндотелиоцитов содержит фибриллярные компоненты экстрацеллюлярного матрикса, такие как коллагены I и III типов, и базальную мембрану, которая обычно не имеет электронно-плотных структур, как в типичной базальной мембране в других тканях. Поэтому ни эпителиальные клетки печени (паренхиматозные клетки), ни синусоидальные эндотели-альные клетки не имеют типичной базальной мембраны несмотря на присутствие компонентов базальной мембраны под эндотелиальными клетками (между звездчатыми клетками печени и эндотелиальными клетками).

В норме компоненты экстрацеллюлярного матрикса необходимы для поддержания различных функций и морфологии резидентных клеток печени, то есть паренхиматозных клеток, эндотелиальных клеток и звездчатых клеток. При фиброзе печени композиция экстрацеллюлярного матрикса и качественно, и количественно изменена; общее содержание коллагеновых и неколлагеновых компонентов увеличено, и компоненты экстрацеллюлярного матрикса между эндотелиальными и звездчатыми клетками изменяются от нормального мембраноподобного до фиброзного, богатого коллагенами матрикса (Friedman, 2000).

В настоящее время функции звездчатых клеток печени связаны не только с поражением печени, но и с развитием, регенерацией печени, реакцией на воздействия ксенобиотиков и иммунорегуляцией. Разрабатываются аспекты необходимого участия звездчатых клеток печени в пролиферации и дифференцировке стволовых клеток печени. Звездчатые клетки должны рассматриваться как необходимое звено в пространстве Диссе, участвующее в тонкой регуляции аутокринных и паракринных стимулов, в быстром ответе на изменения компонентов экстрацеллюлярного матрикса и адекватном реагировании на метаболические потребности, возникающие в процессе развития и регенерации печени.

Более того, жизненно важная функция поддержания системного го-меостаза связана с депонированием и мобилизацией ретиноидов, их способностью презентации антигенов и индукции толерантности, так же как с определенными взаимоотношениями с потомками костномозговых клеток (Friedman S.L., 2008). Интерес к этому типу клеток неуклонно возрастает, с ними связаны определенные надежды понимания физиологии печени, а также диагностики и лечения патологических процессов. Необходимо подчеркнуть значительную структурно-функциональную пластичность звездчатых клеток печени.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Капустина, Валентина Ильинична, Новосибирск

1. Аруин Л.И. Морфологическая классификация хронического гепатита // Арх. патол. 1995. - Т. 57. - № 3. - С. 3 - 6.

2. Аруин Л.И. Апоптоз и патология печени // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 1998. - № 2. - С. 6 - 11.

3. Блюгер А.Ф., Крупникова Э.З., Симонова Г.И. и др. Хронический лобулярный гепатит // Успехи гепатологии. Рига, 1981. - Вып. 9. - С. 113 - 125.

4. Блюм Х.Е. Гепатит С: Современное состояние проблемы // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2005. - № 1. - С. 20 - 25.

5. Вайль С.С. Практическое руководство по патогистологической технике.-Л., 1944.-264 с.

6. Горбаков В.В., Хазанов А.И., Блохина Н.П. и др. Естественное течение сочетанных вирусных гепатитов В и С // Клин, микробиол. 2001. - Т. 3. - № 3. - С. 209 - 214.

7. Ивашкин В.Т. (ред.) Болезни печени и желчевыводящих путей: Руководство для врачей. М.: М-Вести, 2005. - 536 с.

8. Игнатова Т.М. Естественное течение хронической HCV-инфекции // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2002. - № 2. - С. 20 - 30.

9. Калашникова М.М. Ультраструктурная характеристика процесса резорбции коллагена в цирротически измененной печени // Бюл. экспер. биол. 2000. - Т. 129. - № 1. - С. 4 - 11.

10. Коненков В.И., Непомнящих Г.И., Нетесов С.В., Толоконская Н.П. Молекулярно-генетические и морфологические маркеры в условиях перси-стенции в организме РНК-вируса гепатита С // Сиб. науч. вестник. 2000. -Вып. IV.-С. 12-15.

11. Логинов А.С., Аруин Л.И. Клиническая морфология печени. М.: Медицина, 1985.-239 с.

12. Логинов A.C., Блок Ю.Е. Хронические гепатиты и циррозы печени.- М.: Медицина, 1987. 272 с.

13. Лопаткина Т.Н., Танащук Е.Л. Алкоголь и хроническая HCV-инфекция // Вирусные гепатиты. 2000. - № 1. - С. 11 - 14.

14. Маевская М.В. Клинические особенности алкогольно-вирусных поражений печени // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2004.- № 2. С. 17-21.

15. Майер К.-П. Гепатит и последствия гепатита. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 720 с.

16. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. Л.: Медицина, 1969. - 423 с.

17. Непомнящих Г.И. Пограничные ткани (слизистые оболочки и кожа) в морфогенезе общепатологических процессов. Актовая речь. - Новосибирск: НИИ РППМ СО РАМН, 1996. - 39 с.

18. Непомнящих Г.И. Биопсия бронхов: Морфогенез общепатологических процессов в легких. М.: Изд-во РАМН, 2005. - 384 с.

19. Непомнящих Г.И., Айдагулова С.В., Непомнящих Д.Л. и др. Имму-ногистохимическое, молекулярно-биологическое и патоморфологическое исследование биоптатов печени при хроническом гепатите С // Бюл. экс-пер. биол. 2002. - Т. 134. - № 9. - С. 356 - 360.

20. Непомнящих Г.И., Толоконская Н.П. Биомолекулярные маркеры прогрессии персистирующих вирусных инфекций // Бюл. СО РАМН. -2002. № 2. - С. 25 - 30.

21. Непомнящих Г.И., Толоконская Н.П., Айдагулова С.В. и др. Ультраструктурные реакции клеточных популяций печени при действии РНК- и

22. ДНК-геномных вирусов гепатита С+В // Бюл. экспер. биол. 1999. - Т. 128.-№7.-С. 101-105.

23. Непомнящих Г.И., Толоконская Н.П., Непомнящих JI.M. и др. Альтерация и внутриклеточная регенерация гепатоцитов при действии РНК-геномного вируса гепатита С // Бюл. экспер. биол. 1999. - Т. 127. - № 5. -С. 588-592.

24. Непомнящих Г.И., Толоконская Н.П., Сахарова Е.Г. и др. Гистопатология и ультраструктура печени при действии наркотических веществ в сочетании с вирусами гепатита С и В // Бюл. экспер. биол. 1999. - Т. 128. - № 9. - С. 351 -355.

25. Непомнящих Д.Л. Ультраструктурный анализ биоптатов печени при хронических гепатитах и гепатопатиях // Бюл. экспер. биол. 1994. -Т. 118.-№9.-С. 306-310.

26. Павлов Ч.С., Золотаревский В.Б., Томкевич М.С. и др. Возможность обратимости цирроза печени (клинические и патогенетические предпосылки) // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2006. - № 1. -С. 20 - 29.

27. Павлов Ч.С., Ивашкин В.Т. Биопсия печени: Методология и практика сегодня // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2006. -№4.-С. 65-78.

28. Павлов Ч.С., Шульпекова Ю.О., Золотаревский В.Б., Ивашкин В.Т. Современные представления о патогенезе, диагностике и лечении фиброза печени // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2005. - № 2. — С. 13-20.

29. Пальцев А.И., Непомнящих Д.Л. Хронический гепатит: Эпидемиология, этиология, патогенез, патоморфология, классификация, клиника, диагностика, лечение. Метод, реком. - Новосибирск, 1997. — 75 с.

30. Панин Л.Е. Явление стимуляции резидентными макрофагами биосинтеза белка в паренхимных клетках органов и тканей // Бюл. СО РАМН. 1998. -№ 3. - С. 11-23.

31. Петров С.В., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. Казань, 2000. - 287 с.

32. Подымова С.Д. Болезни печени: Руководство для врачей. М.: Медицина, 1998. - 544 с.

33. Покровский В.И., Непомнящих Г.И., Толоконская Н.П. Хронический гепатит С: Современные представления о пато- и морфогенезе. Концепция антивирусной стратегии гепатоцитов // Бюл. экспер. биол. 2003. -Т. 135.-№4.-С. 364-376.

34. Радаева С.А., Фактор В.М. Динамика развития популяции овальных клеток, индуцированных в печени мыши дипином и частичной гепатэкто-мией //Бюл. экспер. биол. 1990. - № 5. - С. 514 - 517.

35. Рис Э., Стернберг М. От клеток к атомам: Иллюстрированное введение в молекулярную биологию. М.: Мир, 1988. - 144 с.

36. Саркисов Д.С. (ред.) Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. Руководство. М.: Медицина, 1987. - 448 с.

37. Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника. М.: Медицина, 1996. - 544 с.

38. Серов В.В., Апросина З.Г. Хронический вирусный гепатит. М.: Медицина, 2002. - 384 с.

39. Толоконская Н.П., Непомнящих Г.И., Коненков В.И., Нетесов С.В. Молекулярно-генетические и морфологические маркеры в условиях перси-стенции в организме РНК-вируса гепатита С // Бюл. экспер. биол. 2001. -Т. 131. -№ 2. - С. 178- 183.

40. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. - 324 с.

41. Урываева И.В. Репликативный потенциал гепатоцитов и стволовые клетки печени // Известия АН. (Серия «биология».) 2001. - № 6. - С. 728 -737.

42. Фактор В.М., Радаева С.А. Стволовой резерв печени // Онтогенез. -1991.-Т. 22,-№2.-С. 181-189.

43. Хазанов А.И. Итоги длительного изучения (1946 2005) этиологии циррозов печени у стационарных больных // Рос. журн. гастроэнтерол. ге-патол. колопроктол. - 2006. - № 2. - С. 11-18.

44. Целлариус Ю.Г. Взаимоотношения паренхимы и стромы в развитии склеротических процессов // Механизмы склеротических процессов и рубцевания: Материалы симпозиума. Новосибирск, 1964. - С. 35 - 48.

45. Шерлок Ш., Дули Дж. Заболевания печени и желчных путей. М.: Гэотар Медицина, 1999. - 864 с.

46. Ющук Н.Д., Знойко О.О., Сафиуллина Н.Х., Келли Е.И. Пункцион-ная биопсия печени и возможности неинвазивного мониторинга фиброза при хроническом вирусном гепатите С // Клин, персп. гастроэнтерол. гепа-тол. 2002. - № 1. - С. 9 - 16.

47. Agnello V., Abel G., Elfahal M. et al. Hepatitis С virus and other Flavi-viridae viruses enter cells via low density lipoprotein receptor // Proc. Natl. Acad. Sci. 1999. - Vol. 96. - № 22. - P. 12766 - 12771.

48. Alison M.R. Liver stem cells: A two compartment system // Curr. Opin. Cell. Biol. 1998. - Vol. 10. - P. 710-715.

49. Altiparmak E., Saritas U., Altinas E. et al. Relationship between histological damage, viral load and serum transaminase levels in patients with chronic hepatitis С // Turk. J. Gastroenterol. 2001. - Vol. 12. - № 3. - P. 185 - 188.

50. Arthur M.J.P. Fibrogenesis. II. Metalloproteinases and their inhibitors in liver fibrosis // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2000. - Vol. 279. -P. G245 - G249.

51. Balabaud C., Bioulac-Sage P., Desmouliere A. The role of hepatic stellate cells in liver regeneration // J. Hepatol. 2004. - Vol. 40. - P. 1023 - 1026.

52. Benyon R.C., Iredale J.P. Is liver fibrosis reversible? // Gut. 2000. -Vol. 46. - P. 443 - 446.

53. Bonis P.A.L., Friedman S.L., Kaplan M.M. Is liver fibrosis reversible? // N. Engl. J. Med. 2001. - Vol. 344. - № 6. - P. 452 - 454.

54. Castillo I., Rodriguez-Inigo E., Bartolome J. et al. Hepatitis С virus replicates in peripherial blood mononuclear cells of patients with occult hepatitis С virus infection // Gut. 2005. - Vol. 54. - № 5. - P. 682 - 685.

55. Chang M., Marquardt A.P., Wood B.L. et al. In situ distribution of hepatitis С virus replicative-intermediate RNA in hepatic tissue and its correlation with liver disease // J. Virol. 2000. - Vol. 74. - № 2. - P. 944 - 955.

56. Court F.G., Wemyss-Holden S.A., Dennison A.R., Maddern G.J. The mystery of liver regeneration // Br. J. Surg. 2002. - Vol. 89. - P. 1089 - 1095.

57. Dalekos G.N., Obermayer-Straub P., Bartels M. et al. Cytochrom P450 2A6: a new hepatic autoantigen in patients with chronic hepatitis С virus infection // Hepatology. 2003. - Vol. 39. - № 5. - P. 800 - 807.

58. Dearaujo M.S.T., Gerard F., Chossegros P. et al. Cellular and matrix changes in drug abuser liver sinusoids a semiquantitative and morphometric ultrastructural study // Virchows Arch (A). - 1993. - Vol. 422. - P. 145 - 152.

59. Dearaujo M.S.Т., Guerret S., Gerard F. et al. Quantitative studies on liver fibrosis and alpha-smooth muscle actin expression in heroin abusers // Cell. Mol. Biol. 1997. - Vol. 43 - P. 589 - 596.

60. Desmet VJ. Liver tissue examination // J. Hepatol. 2003. - Vol. 39. -P. S43 - S49.

61. Desmet V.J., Gerber M., Hoofnagle J.H. et al. Classification of chronic hepatitis: Diagnosis, grading and staging // Hepatology. 1994. - Vol. 19. - № 6.-P. 1513- 1520.

62. Desmet V.J., Roskams T. Cirrhosis reversal: A duel between dogma and myth // J. Hepatol. 2004. - Vol. 40. - P. 860 - 867.

63. Diehl A.M., Rai R.M. Review: regulation of liver regeneration by proinflammatory cytokines // J. Gastroenterol. Hepatol. 1996. - Vol. 11. - P. 466 -470.

64. Ebrahimkhani M.R., Payabvash S., Mani A.R. et al. Cholestasis and systemic oxidative stress: role of endogenous opioids // J. Hepatol. 2004. - Vol. 40 (Suppl. 1).-P. 91-94.

65. Eng F.J., Friedman S.L. Fibrogenesis. I. New insights into hepatic stellate cell activation: the simple becomes complex // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2000. - Vol. 279. - P. G7 - G11.

66. Falkowski O., West A.B., Chiriboga L. et al. Intraseptal hepatocytes in cirrhosis: evidence for regeneration from stem cells // Mol. Pathol. 2001. -Vol. 14.-P. 195A.

67. Farinati F., Cardin R., Fiorentino M. et al. Imbalance between cytopro-liferation and apoptosis in hepatitis С virus related chronic liver diseases // J. Viral Hep. 2001. - Vol. 8. - P. 34 - 40.

68. Fishman S., Lurie Y., Peretz H. et al. Role of CYP2D6 polymorphism in predicting liver fibrosis progression rate in Caucasian patients with chronic hepatitis С // Liver Int. 2006. - Vol. 26. - P. 279 - 284.

69. Francavilla A., Hagiya M., Porter K.A. et al. Augmenter of liver regeneration: its place in the universe of hepatic growth factors // Hepatology. 1994. -Vol. 20.-P. 747-757.

70. Friedman S.L. The cellular basis of hepatic fibrosis Mechanisms and treatment strategies // N. Engl. J. Med. - 1993. - Vol. 328. - № 25. - P. 1828 -1835.

71. Friedman S.L. Liver fibrosis from bench to bedside // J. Hepatol. -2003. - Vol. 38. - P. S38 - S53.

72. Gabele E., Brenner D.A., Rippe R.A. Liver fibrosis: Signals leading to the amplification of the fibrogenic hepatic stellate cell // Front. Biosc. 2003. — Vol. 8.-P. 69-77.

73. Gahem D., Prince A.M. Hepatitis В virus infection Natural history and clinical consequences // N. Engl. J. Med. - 2004. - Vol. 350. - P. 1118 - 1129.

74. Galle P.R. Apoptosis and liver pathology // J. Hepatol. 1997. - Vol. 27. -P. 405-412.

75. Geerts A. On the origin of stellate cells: mesodermal, endodermal or neuroectodermal? // J. Hepatol. 2004. - Vol. 40. - P. 331 - 334.

76. Guo J.-T., Zhou H., Liu C. et al. Apoptosis and regeneration of hepato-cytes during recovery from transient hepadnavirus infections // J. Virol. 2000. - Vol. 74. - № 3. - P. 1495 - 1505.

77. Guidotti L.G., Rochford R., Chung J. et al. Viral clearance without destruction of infected cells during acute HBV infection // Science. 1999. - Vol. 284. - P. 825 - 829.

78. Hammel P., Couvelard A., O'Toole D. et al. Regression of liver fibrosis after biliary drainage in patients with chronic pancreatitis and stenosis of the common bile duct // N. Engl. J. Med. 2001. - Vol. 344. - № 6. - P. 418 - 423.

79. Haque S., Haruna Y., Saito K. et al. Identification of bipotential progenitor cells in human liver regeneration // Lab. Invest. 1996. - Vol. 75. - P. 699 -705.

80. Iredale J.P. Cirrhosis: new research provides a basis for rational and targeted treatments // BMJ. 2003. - Vol. 327. - P. 143 - 147.

81. Ishak K.G. Pathologic features of chronic hepatitis: A review and update // Amer. J. Clin. Pathol. 2000. - Vol. 113. - № 1. - P. 40 - 55.

82. Ishak K.G., Baptista A., Bianchi L. et al. Histological grading and staging of chronic hepatitis // J. Hepatol. 1995. - Vol. 22. - P. 696 - 699.

83. Jungermann K., Kietzmann T. Zonation of parenchymal and nonpar-enchimal metabolism in liver // Ann. Rev. Nutr. 1996. - Vol. 16. - P. 179 -203.

84. Kmiec Z. Cooperation of liver cells in health and disease // Adv. Anat. Embriol. Cell. Biol. 2001. - Vol. 161: III - XIII. - P. 1 - 151.

85. Larkin J., Clayton M.M., Liu J., Feitelson M.A. Chronic ethanol consumption stimulates hepatitis В virus gene expression and replication in transgenic mice // Hepatology. 2001. - Vol. 34 (Suppl. 1). - P. 792 - 797.

86. Lauer G.M., Walker B.D. Hepatitis С virus infection // N. Engl. J. Med. -2001.-Vol. 345.-№ 1.-P. 41-52.

87. Leevy C.B. Abnormalities of liver regeneration: a review // Dig. Dis. -1998.-Vol. 16.-P. 88-98.

88. Lemire J.M., Shiojiri N., Fausto N. Oval cell proliferation and the origin of small hepatocytes in liver injury induced by D-galactosamine // Am. J. Pathol. 1991. - Vol. 139. - P. 535 - 552.

89. Li Y., Zhang Т., Douglas S.D. et al. Morphine enhances hepatitis С virus (HCV) replicon expression // Amer. J. Pathol. 2003. - Vol. 163. - P. 1167 -1175.

90. Libbrecht L., Roskams T. Hepatic progenitor cells in human liver diseases // Cell Develop. Biol. 2002. - Vol. 13. - P. 389 - 396.

91. Lindquist J.N., Marzluff W.F., Stefanovic B. Fibrogenesis. III. Post-transcriptional regulation of type I collagen // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2000. - Vol. 279. - P. G471 - G476.

92. Lowes K.N., Brennan B.A., Yeoh G.C., Olynyk J.K. Oval cell numbers in human chronic liver diseases are directly related to disease severity // Am. J. Pathol. 1999. - Vol. 154. - P. 537 - 541.

93. Nagasue N., Yukaya H., Ogawa Y. et al. Human liver regeneration after major hepatic resection. A study of normal liver and livers with chronic hepatitis and cirrhosis // Ann. Surg. 1987. - Vol. 206. - P. 30 - 39.

94. Minuk G.Y. The influence of host factors on the natural history of chronic hepatitis С viral infections // J. Viral Hepat. 1999. - Vol. 6. - P. 271 -276.

95. Moore K., Dusheiko G. Opiate abuse and viral replication in hepatitis С // Amer. J. Pathol. 2005. - Vol. 167. - № 5. - С. 1189 - 1191.

96. Moriya K., Yotsuyanagi H., Shintani Y. et al. Hepatitis С virus core protein induces hepatic steatosis in transgenic mice // J. Gen. Virol. 1997. -Vol. 78.-P. 1527- 1531.

97. Oh S.-H., Hatch H.M., Petersen B.E. Hepatic oval «stem» cell in liver regeneration // Sem. Cell Develop. Biol. 2002. - Vol. 13. - P. 405 - 409.

98. Ozawa K., Yamada Т., Ukikusa M. et al. Mitochondrial phosphoryla-tive activity and DNA synthesis in regenerating liver of diabetic rats // J. Surg.

99. Res. 1981. - Vol. 31. - P. 38 - 45.

100. Pasquinelli C., Shoenberer J.M., Chung J. et al. Hepatitis С virus core and E2 protein expression in transgenic mice // Hepatology. 1997. - Vol. 25. -№3.-P. 719-728.

101. Peterson P.K., Sharp В., Gekker G. et al. Opioid-mediated supression of interferon-gamma production by cultured peripheral blood mononuclear cells // J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 80. - P. 824 - 831.

102. Pinzani M., Rombouts K., Colagrande S. Fibrosis in chronic liver diseases: Diagnosis and management // J. Hepatol. 2005. - Vol. 42. - P. S22 -S36.

103. Popper H., Lieber C.S. Histogenesis of alcoholic fibrosis and cirrhosis in the baboon // Am. J. Pathol. 1980. - Vol. 98. - P. 695 - 716.

104. Pucilowska J.В., Williams K.L., Lund P.K. Fibrogenesis. IV. Fibrosis and inflammatory bowel disease: cellular mediators and animal models // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2000. - Vol. 279. - P. G653 - G659.

105. Ramadori G., Saile B. Portal tract fibrogenesis in the liver // Lab. Invest. 2004. - Vol. 84. - P. 153 - 159.

106. Rodriguez-Inigo E., Bartolome J., de Lucas S. et al. Histological damage in chronic hepatitis С is not related to the extent of infection in the liver // Amer. J. Pathol. 1999. - Vol. 154. - № 6. - P. 1877 - 1881.

107. Rodriguez-Inigo E., Casqueiro M., Bartolome J. et al. Hepatitis С virus RNA in kidney biopsies from infected patients with renal diseases // J. Viral. Hepat. 2000. - Vol. 7. - P. 23 - 29.

108. Rosenberg W.M.C. Rating fibrosis progression in chronic liver diseases

109. J. Hepatol. 2003. - Vol. 38. - № 3. - P. 357 - 360.

110. Rubbia-Brandt L., Leandro G., Spahr L. et al. Liver steatosis in chronic hepatitis C: a morphological sign suggesting infection with HCV genotype 3 // Histopathology. 2001. - Vol. 39. - P. 119 - 124.

111. Ryder S.D. Progression of hepatic fibrosis in patients with hepatitis C: a prospective repeat liver biopsy study // Gut. 2004. - Vol. 53. - P. 451 - 455.

112. Saadeh S., Cammell G., Carey W.D. et al. The role of liver biopsy in chronic hepatitis С // Hepatology. 2001. - Vol. 33. - № 1. - P. 196 - 200.

113. Sato M., Suzuki S., Senoo H. Hepatic stellate cells: Unique characteristics in cell biology and phenotype // Cell Struct. Funct. 2003. - Vol. 28. -P.105-112.

114. Sell S., Dunsford H.A. Evidence for the stem cell origin of hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma // Am. J. Pathol. 1989. - Vol. 134. - P. 1347- 1363.

115. Senoo H. Structure and function of hepatic stellate cells // Med. Electron. Microsc. 2004. - Vol. 37. - P. 3 - 15.

116. Shafritz D.A., Dabeva M.D. Liver stem cells and model systems for liver repopulation // J. Hepatol. 2002. - Vol. 36. - P. 552 - 564.

117. Shimizu Y.K., Feinstone S.M., Kohara M. et al. Hepatitis С virus: Detection of intracellular virus particles by electron microscopy // Hepatology. -1996. Vol. 23. - P. 205 - 209.

118. Simmonds P. Variability of hepatitis С virus // Hepatology. 1995. -Vol. 21.-P. 570-583.

119. Steer C.J. Liver regeneration // FASEB J. 1995. - Vol. 9. - P. 1396 -1400.

120. Tahara H., Nakanishi Т., Kitamoto M. et al. Telomerase activity in human liver tissues: comparison between chronic liver disease and hepatocellular carcinomas // Cancer Res. 1995. - Vol. 55. - P. 2734 - 2736.

121. Theise N.D., Badve S., Saxena R. et al. Derivation of hepatocytes frombone marrow cells in mice after radiation-induced myeloablation // Hepatology. 2000. - Vol. 31. - № 1. - P. 235 - 240.

122. Van Thiel D.H., Stauber R., Gavaler J.S., Francavilla A. Hepatic regeneration: effects of age, sex, hormone status, prolactin and cyclosporine // Dig. Dis. Sci. 1991. - Vol. 36. - P. 1309 - 1312.

123. Wang C.Q., Li Y., Douglas S.D. et al. Morphine withdrawal enhances С virus replicon expression // Amer. J. Pathol. 2005. - Vol. 167. - № 5. - P. 1333- 1340.

124. Wells R.G. Fibrogenesis. V. TGF-b signaling pathways // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2000. - Vol. 279. - P. G845 - G850.

125. Xu L., Hui A.Y., Albanis E. et al. Human hepatic stellate cell lines, LX-1 and LX-2: new tools for analysis of hepatic fibrosis // Gut. 2005. - Vol. 54. - № 1. - P. 142-151.

126. Yang J., Liu Y. Blockage of tubular epithelial to myofibroblast transition by hepatocyte growth factor prevents renal interstitial fibrosis // J. Am. Soc. Nephrol. 2002. - Vol. 13. - P. 96 - 107.

127. Yang S.Q., Lin H.Z., Yin M. et al. Effects of chronic ethanol consumption on cytokine regulation of liver regeneration // Am. J. Physiol. 1998. -Vol. 275. - G696 - G704.

128. Zein N.N. Clinical significance of hepatitis С virus genotypes // Clin. Microbiol. Rev. 2000. - Vol. 13. - № 2. - P. 223 - 235.

129. Zhang Т., Li Y., Lai J.P. et al. Alcohol potentiates hepatitis С virus replicon expression // Hepatology. 2003. - Vol. 38. - № 1. - P. 57 - 65.

Информация о работе

Капустина, Валентина Ильинична
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2010
ВАК 03.03.04

Диссертация

Ультраструктурный и иммуногистохимический анализ звездчатых клеток печени в онтогенезе и при ремоделировании пространств Диссе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Ультраструктурный и иммуногистохимический анализ звездчатых клеток печени в онтогенезе и при ремоделировании пространств Диссе - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы