Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика свойств и функций белков-участников эндосомального транспорта рабаптина-5, его изоформ и VARP

ВАК РФ 03.00.26, Молекулярная генетика

Автореферат диссертации по теме "Характеристика свойств и функций белков-участников эндосомального транспорта рабаптина-5, его изоформ и VARP"

На правах рукописи УДК 577 2, 576 314, 576 342

Пальгова Ирина Викторовна

003166Б46

ХАРАКТЕРИСТИКА СВОЙСТВ И ФУНКЦИЙ БЕЛКОВ-УЧАСТНИКОВ ЭНДОСОМАЛЬНОГО ТРАНСПОРТА РАБАПТИНА-5, ЕГО ИЗОФОРМ И УАЮ»

Специальность 03 00 26 - "молекулярная генетика"

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2007

Работа выполнена в лаборатории молекулярной онкогенетики Института биологии гена РАН

Научный руководитель

кандидат биологических наук Коробко Игорь Викторович Официальные оппоненты

доктор биологических наук Набирочкина Елена Николаевна кандидат биологических наук Зиновкин Роман Алексеевич

Ведущая организация

Центр "Биоинженерия" Российской академии наук

Защита диссертации состоится «_20_» декабря 2007 года в _11_ часов на заседании Диссертационного совета Д 002 037 01 при Институте биологии гена РАН

по адресу 119334, г Москва, ул Вавилова 34/5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института молекулярной биологии им В А Энгельгардта РАН по адресу 119991, г Москва, ул Вавилова 32

Автореферат разослан «_19_» ноября 2007 года

Ученый секретарь Диссертационного совета

канд фарм наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Одним из фундаментальных процессов, протекающих во всех эукариотических клетках, является транспорт мембран Он затрагивает и влияет на различные аспекты жизнедеятельности клетки, такие как обмен веществ с окружающей средой, поддержание клеточного гомеостаза, секрецию, передачу сигналов и тд Тесная взаимосвязь мембранного транспорта с различными клеточными процессами определяет актуальность исследования его молекулярных основ Для полноценной и нормальной работы клеток необходимо, чтобы процессы внутриклеточного мембранного транспорта были четко и тонко сбалансированы Молекулярные основы везикулярного транспорта являются предметом исследования на протяжении длительного времени, однако расшифровка и характеристика всех участников этого многостороннего и сложного процесса еще далека от завершения

Представления о молекулярных механизмах внутриклеточного мембранного транспорта необходимы не только для понимания этого фундаментального процесса самого по себе, но и сопряженных с ним событий Это, в свою очередь, создает основу для практического использования фундаментальных знаний в различных приложениях

ЯаЬ ГТФазы являются одним из основных классов молекул, регулирующих внутриклеточный мембранный транспорт Регуляторные функции ЯаЬ ГТФаз осуществляются посредством их специфического взаимодействия с различными белками, называемыми эффекторами Эффекторные молекулы -очень обширная и во многом еще неизученная группа белков

ГТФаза ЯаЬ5 играет ключевую роль в регуляции ранних этапов эндоцитоза - мембранного транспорта от поверхности клетки К настоящему времени охарактеризовано большое количество эффекторов ГТФазы ЯаЬ5, однако, молекулярные механизмы их действия исследованы не полностью или

остаются до сих пор неизвестными Кроме того, спектр этих молекул значительно шире, чем известно в настоящее время

Цели и задачи исследования

Целью настоящей работы являлось исследование новых свойств и функций эффекторых молекул ГТФазы ЯаЬ5 - белка Рабаптина-5, его изоформ и белка Уагр Для достижения указанной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи

1 Исследовать новые функции Рабаптина-5 и его изоформ в процессе слияния ранних эндосом

2 Исследовать способность белка Уагр, нового потенциального фактора обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФазы 11аЬ5, взаимодействовать с ГТФазой ЯаЬ5

3 Провести поиск белков, взаимодействующих с белком Уагр

Научная новизна и практическая ценность работы

В ходе выполнения работы были проведены исследования новых свойств белка Рабаптина-5, который является эффекторной молекулой ГТФаз ЯаЬ5 и ЛаЬ4 В результате проведенных исследований был обнаружен и картирован новый дополнительный сайт связывания ГТФазы ЯаЬ5, присутствующий в белке Рабаптин-5 Этот результат имеет фундаментальное значение для понимания молекулярных процессов слияния ранних эндосом, в котором Рабаптин-5 играет одну из ключевых ролей Полученные результаты позволили предложить абсолютно новую дополнительную роль белка Рабаптина-5 в процессе слияния ранних эндосом как гомобифункциональной ЯаЬ5-связывающей молекулы В рамках новой модели слияния ранних эндосом, предложенной на основании полученных нами результатов, становится возможным объяснение ряда известных и ранее необъяснимых экспериментальных фактов В работе также было впервые показано, что обнаруженный новый сайт связывания ГТФазы 11аЬ5 присутствует и в изоформах Рабаптина-5, Рабаптине-55 и Рабаптине-5у

Факторы обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФаз ЯаЬ семейства играют ключевую роль в их активации, что определяет важность исследования молекулярных механизмов их действия для понимания регуляции мембранного транспорта, осуществляемого ЯаЬ ГТФазами

В результате изучения свойств потенциального фактора обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФазы ЯаЬ5, белка Уагр, было установлено, что Уагр способен взаимодействовать с ГТФазой ЯаЬ5, и это взаимодействие происходит преимущественно с ЯаЬ5 в неактивном, ГДФ-связанном состоянии Также было показано, что Уагр ко-локализуется с ГТФазой 11аЬ5 в клетках Эти данные подтверждают участие Уагр в процессе раннего эндоцитоза С использованием метода двугибридного клонирования в дрожжах были выявлены возможные партнеры по взаимодействию с Уагр — белки семейства 4 1 и Лап9ВР, и проведено картирование сайта взаимодействия Уагр с белком 4 Ш

Результаты работы имеют существенное значение для решения фундаментальной проблемы - понимания молекулярных механизмов внутриклеточного мембранного транспорта, и могут быть использованы в этой области молекулярной и клеточной биологии Кроме того, прогресс в исследованиях в последнее время показал, что процессы раннего эндоцитоза влияют на передачу сигналов от клеточной поверхности, адгезивные свойства клеток и их подвижность, которые нарушаются при различных патологиях человека, в частности, в опухолевых клетках Поэтому детальное понимание механизмов раннего эндоцитоза и его регуляции может привести к идентификации новых мишеней для терапии опухолей, а также других патологий, например, нейродегенеративных заболеваний, при которых процессы раннего эндоцитоза претерпевают существенные изменения

Апробация работы

Работа была апробирована на совместном семинаре лаборатории генной терапии и лаборатории молекулярной онкогенетики ИБГ РАН Данные,

представленные в работе, докладывались на конференциях "Intracellular transport and signal transduction in cancer biomedicme" (Stalheim, Norway, 2007), "XII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2005»" (Москва, 2005), "VI международная конференция Молекулярная генетика соматических клеток" (Звенигород, 2005)

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на _110_ страницах машинописного

текста и состоит из следующих разделов введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы Библиография включает в себя _144_ источника Работа иллюстрирована _22_ рисунками и _3_ таблицами

Публикации

Основные положения диссертации изложены в 4 печатных работах, из которых - две статьи в ведущих рецензируемых журналах и двое тезисов материалов конференций

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Взаимодействие Рабаптина-5 с малой ГТФазой Rab5.

Несмотря на успехи в функциональной характеристики Рабаптина-5, достигнутые к настоящему времени, исчерпывающая модель его действия остается до конца неясной В частности, это относится к процессу слияния ранних эндосом, в котором функция Рабаптина-5 состоит в образовании комплекса с Rabex-5 и доставке Rabex-5 к Rab5-позитивным мембранам ранних эндосом Однако существуют экспериментальные факты, которые не могут быть объяснены в рамках этой модели, что указывает на ее неполноту Так, ранее было продемонстрировано, что в клетках, претерпевающих апоптотическую гибель, происходит ингибирование слияния ранних эндосом,

обусловленное протеолитическим расщеплением Рабаптина-5 При этом С-концевой апоптотический фрагмент Рабаптина-5 сохраняет способность взаимодействовать с ЯаЬ5 и образовывать комплекс с ЯаЬех-5, что в соответствии с существующей моделью функционирования Рабатина-5, является достаточным для подержания слияния ранних эндосом Подобное несоответствие предполагает, что для функционирования в процессе гомотипического слияния ранних эндосом необходимо наличие интактного Рабаптина-5, содержащего как С-концевой, так и М-концевой домены Эти наблюдения позволяют предположить, что существует неизвестный молекулярный механизм, лежащий в основе функционирования Рабаптина-5 в процессе гомотипического слияния ранних эндосом, требующий присутствия его И-концевого домена

Г4-концевой домен Рабаптина-5 способен образовывать гомодимеры.

Гомодимериация С-концевых участков со11ес!-со11 Рабаптина-5 является существенным для формирования интерфейса взаимодействия с белками, в частности с ГТФазой ЯаЬ5 Ы-концевой и С-концевой апоптотические фрагменты Рабаптина-5 имеют схожее строение, и каждый из этих фрагментов содержит по два участка со11е(1-со11 Ввиду потенциальной важности димеризации Рабаптина-5 для его функций была исследована способность Ы-концевого фрагмента Рабаптина-5, по размеру соответствующего Ы-концевому апоптотическому фрагменту Рабаптина-5, образовывать гомодимеры В результате анализа в двугибридной системе в дрожжах было установлено, что Ы-концевой фрагмент Рабаптина-5 (аминокислоты с 1 по 388) действительно способен образовывать гомодимеры (Рис 1)

Идентификация и картирование нового сайта связывания ГТФазы КаЬ5 в 1Ч-концевых доменах Рабаптина-5, Рабаптина-55 и Рабаптина-5у.

М-концевой фрагмент Рабаптина-5, имеющий, как и С-концевой фрагмент, 2 участка со)1ес1-со11 и способный к образованию гомодимера, также

потенциально может служить платформой для взаимодействия с молекулами, существенными для функционирования Рабаптина-5.

Рис. 1.1Ч-концевой фрагмент Рабаптина-5 способен образовать гомодимеры.

Анализ димеризации Ы-концевого фрагмента Рабаптина-5 (Ы-Яп-б) в двугибридной дрожжевой системе. Взаимодействие белков оценивали по способности дрожжей к росту на селективной среде, содержащей 25мМ 3-амино-(1,2,4)-триазол (+ЗАТ). Контролем служил рост дрожжей на среде, не содержащей ЗАТ (-ЗАТ).

В работе Денека с соавторами было отмечено, что Ы-концевой фрагмент родственного Рабаптину-5 белка, Рабаптина-4/5а, также способен связываться с ГТФазой КаЬ5 в ее активном, ГТФ-связанном состоянии. Этот факт послужил основанием для того, чтобы провести исследование взаимодействия ГТФазы ЯаЬ5 с Ы-концевым фрагментом Рабаптина-5. Для этого был использован анализ взаимодействия белков в двугибридной системе в дрожжах. В результате проведенного анализа было установлено, что И-концевой фрагмент Рабаптина-5, лишенный С-концевого сайта связывания ГТФазы ЯаЬ5, способен взаимодействовать с дефицитным по ГТФазной активности мутантом ГТФазы 11аЬ5, 11аЬ5<379Ь (Рис. 2). При этом взаимодействие с Рабаптином-5 является специфичным для ГТФ-связанной формы ЯаЬ5, так как при экспрессии Ы-концевого фрагмента Рабаптина-5 и ГДФ-связанного мутанта ЯаЬ5, [^аЬ5834М, взаимодействие отсутствовало. Полученные результаты указывают на присутствие в Ы-концевой области белка Рабаптина-5 ранее неизвестного сайта связывания с ГТФазой ЯаЬ5.

Далее было проведено картирование обнаруженного нами нового, >1-концевого сайта связывания ГТФазы ЯаЬ5 в белке Рабаптин-5. Для этого были использованы как искусственно полученные К'-концевые делеционные мутанты

Рабаптина-5, так и фрагменты Рабаптин-5-подобных белков (изоформ Рабаптина-5), Рабаптина-55 и Рабаптина-5у, содержащие эндогенные делеции с 176 по 216 и с 21 по 64 аминокислоту, соответственно. В результате анализа взаимодействия Ы-концевых фрагментов Рабаптина-55 и Рабаптина-5у с ГТФазой ЯаЬ5, проведенного с использованием двугибридной дрожжевой системы, было установлено, что ^концевые фрагменты Рабаптина-55 и Рабаптина-5у, как и Рабаптина-5, способны специфически взаимодействовать с мутантом ГТФазы ЯаЬ5, дефецитным по ГТФазной активности (Рис. 2).

862

+ЗАТ -ЗАТ

(0791.) (534ГЧ)(079Ь) (S34N)

217____318

ИМЯ

2М3

3 Рабаптии-5 (1-862) Рабаптин-5 (1-383) >'-Рабаптин-55 (1-343) К-Рабаптин-5т (1-340) 1Ч-Рабаптии-5 (1-292) 1Ч-Ра6аптин-5 (217-383) 1Ч-Рабаптин-5 (236-383) 1Ч-Рабапти»-5 (217-318) К-Рабаптин-5 (217-303)

М-Рабаптин-5 (217-351, Д262-282)

■ ■ □ □

■ □□

□ н □

■ ■ □ □

■ ■ □ □

кш ■ П □

■ ■ п □

в ■ □□

■ п □

■ ■ □ □

Рис. 2. Картирование нового ]Ч-концевого сайта связывания ГТфазы ИаЬ5 в белках Рабаптин-5, Рабаптин-55 и Рабаптин-5у. Слева схематически представлены различные Ы-концевые делеционные мутанты Рабаптина-5, его б и у изоформ. Справа показаны результаты анализа взаимодействия соответствующих белков с ГТФ-связанным (<279Ь) и ГДФ-связанным (534№) мутантами ЯаЬ5 в двугибридной дрожжевой системе. Взаимодействие белков оценивали по росту дрожжей на селективной среде, содержащей 25мМ ЗАТ (+ЗАТ). Контролем служил рост дрожжей на среде, не содержащей ЗАТ (-ЗАТ). Минимальный фрагмент Рабаптина-5, способный взаимодействовать с ЯаЬ5-ГТФ (ЯаЬ5-связывающий домен, Я5ВО), обозначен серым цветом. С-концевой ЯаЬ5-связывающий сайт обозначен черным цветом. Приведены размеры используемых фрагментов в аминокислотных остатках, а также положения и размеры делеций.

Полученные нами данные о способности И-концевых фрагментов Рабаптина-58 и Рабаптина-5у взаимодействовать с ГТФазой 11аЬ5, предполагают, что обнаруженный нами новый сайт связывания Рабаптина-5 с ГТФазой ЯаЬ5 в Н-концевой части белка находится вне областей, делетировнных в белках Рабаптина-55 и Рабаптина-5у

Дальнейшее картирование положения нового Ы-концевого сайта связывания ГТФазы ЯаЬ5 проводилось с использованием искусственных делеционных мутантов Рабаптина-5 и показало, что минимальный фрагмент Рабаптина-5, сохраняющий способность к взаимодействию с ГТФазой ЯаЬ5, имеет размер около 100 аминокислот и находится между аминокислотами 217 и 318 белка Рабаптина-5 (Рис 2)

Таким образом, полученные результаты позволяют сделать вывод, что Рабаптин-5 и его 6 и у изоформы, в дополнение к ранее обнаруженному сайту связывания ЯаЬ5 на С-конце, имеют второй сайт связывания для этой ГТФазы, расположенный в И-концевой области и обеспечивающий специфическое взаимодействие с ЯаЬ5 в ГТФ-связанной форме

Несмотря на выявленную специфичность взаимодействия ЯаЬ5 с Ы-концевым фрагментом Рабаптина-5 и его 5 и у изоформ, были предприняты попытки продемонстрировать существование этого взаимодействия с помощью других методов Для этого был проведен анализ ко-локализации Ы-концевого фрагмента Рабаптина-5 с дефектным по гидролизу ГТФ мутантом ГТФазы ЯаЬ5 (11аЬ5С)79Ь) в клетках НеЬа В Известно, что экспрессия 11аЬ5(379Ь в клетках приводит к образованию увеличенных ранних эндосом, на которых локализуется Рабаптин-5 Для анализа ко-локализации с 11аЬ5С)79Ь был использован делеционный мутант Рабаптина-5, лишенный С-концевого сайта связывания с ЯаЬ5 (фрагмент Рабаптина-5 с 1 по 784 аминокислоту) При этом сайт связывания с ЯаЬех-5, образование комплекса с которым может быть существенно для взаимодействия с ЯаЬ5, присутствует в этом делеционном мутанте В качестве положительного контроля использовали полноразмерный Рабаптин-5 Плазмидные конструкции, экспрессирующие либо

10

полноразмерный Рабаптин-5, либо фрагмент Рабаптина 5 (1-784), несущие Ы-концевые РЬАС-эпитопы, были ко-трансфецированы с плазмидами для экспрессии Rab5Q79L с М-концевым /лус-эпитопом в клетки линии НеЬа В. Продуцируемые белки в клетке визуализовались с помощью анти-отус и анти-РЬАС антител.

В результате проведенного анализа было установлено, что фрагмент Рабаптина-5, лишенный С-концевого сайта связывания с ГТФазой ЯаЬ5, частично ко-локализуется с К.аЬ5-позитивными мембранными структурами (Рис. 3). Ко-локализация с ГТФазой ЯаЬ5 в отсутствие С-концевого сайта связывания с КаЬ5 в белке Рабаптин-5 подтверждает наличие альтернативного сайта связывания ЯаЬ5. При этом, в отличие от полноразмерного Рабаптина-5, экспрессия его делеционного мутанта приводила к значительной супрессии образования увеличенных ранних эндосом (Рис. 3), что может быть следствием отсутствия необходимого для слияния ранних эндосом С-концевого сайта связывания с ЯаЬ5.

Капота. % ■ в„51 784

Рис. 3. Иммунофлуоресцентный анализ клеток линии НеЬа В, ко-экспрессирующих КЬАС-Рабаитин-5 (Кп5), или его фрагмент с 1 по 784 аминокислоту, (Кп51_784) с IV-концевыми РЬАС-пшгопами и т('с-КаЬ5079Ь. Стрелками в увеличенных вставках отмечены примеры структур, позитивных по обоим белкам.

Суммируя, с помощью двугибридной дрожжевой системы был обнаружен новый сайт связывания Рабаптина-5 с ГТФазой ЯаЬ5, расположенный в ТМ-концевой области белка, и его существование подтверждается ко-локализацией ЯаЬ5 с фрагментом Рабаптина-5, лишенного С-концевого ЯаЬ5-связывающего сайта

Новая функциональная роль Рабаптина-5 в процессе слияния ранних эндосом.

Обнаруженный нами новый Ы-концевой сайт связывания ЯаЬ5 в белке Рабаптин-5 позволяет пересмотреть механизм взаимодействия этих белков, а также предложить новую модель участия Рабаптина-5 в процессе слияния ранних эндосом, в которой Рабаптин-5 выступает в новом качестве - как стыковочная молекула, удерживающая две ранние эндосомы перед их слиянием благодаря бивалентному взаимодействию с двумя молекулами ЯаЬ5 в ГТФ-связанной конформации на различных эндосомах (Рис 4 А)

До настоящего времени функция удерживающей молекулы при слиянии ранних эндосом приписывалась исключительно белку ЕЕА1 Однако известно, что в определенных случаях ЕЕА1 не является необходимым для слияния ранних эндосом, причем процесс слияния зависит от присутствия ЯаЬ5 и Рабаптина-5 Такой ранее необъяснимый факт находит свое объяснение в рамках предложенной модели, где Рабаптин-5 может выступать в качестве удерживающей молекулы Также предложенная модель дает механистическое объяснение функциональной инактивациии Рабаптина-5 при его апоптотическом расщеплении, приводящему к ингибированию слияния ранних эндосом (Рис 4 Б)

Суммируя, в результате проведенных исследований было показано, что К-концевой апоптотический фрагмент Рабаптина-5 способен образовывать гомодимеры Гомодимеризация №концевой области Рабаптина-5 может быть необходима для ее взаимодействия с белками-партнерам Было показано, что одним из таких белков является ГТФаза ЯаЬ5, которая специфически

А

СЛИЯНИЕ

ОТСУТСТВИИ

слияния

¡и РАНИМ* с. оч и р кжкгт» кф швяд*

»хигу.л .....>А1АПППЫ

> сгшосцошхиксвжэымкшвкшктш

% иоя девой даывшиащийсядмввнышвяде

% С ОКОШУВЫННДШ СВХЗЬвЫЩШН САЙГОН

V

МШЩВСД АД0ДТОШЧ1 НОЙ МЮаШТГЛЫГГИНЛ! гдонда ой дп «от аптаспй импост ыдатки-;

Рис. 4. Модель участия Рабаптина-5 в слиянии ранних эндосом как удерживающей эндосомы молекулы (А) и инактивация Рабаптина-5 в результате его протеолитического расщепления (Б). (А) Комплекс Рабаптин-5/КаЬсх-5 сначала доставляется к мембранам ранних эндосом за счет взаимодействия С-концевого сайта связывания Рабаптина-5 с ГТФазой ЯаЬ5. После этого ЯаЬех-5 индуцирует нуклеотидный обмен ГДФ на ГТФ молекулы ЯаЬ5 на соседней мембране ранних эндосом (а). Затем активированная ЯаЬ5-ГТФ на соседней мембране связывается с Рабаптином-5 через его И-концевой сайт, в результате чего ранние эндосомы оказываются связанными с помощью гомодимера Рабаптина-5, благодаря чему становятся возможными дальнейшие процессы, приводящие к слиянию мембран ранних эндосом (б). (Б) После протеолитического расщепления Рабаптина-5 его С-концевой фрагмент остается в комплексе с ЯаЬех-5 и может быть доставлен к мембранам ранних эндосом за счет взаимодействия с КаЬ5-ГТФ. КаЬех-5 может индуцировать нуклеотидный обмен ГДФ на ГТФ молекулы ЯаЬ5 на соседней мембране ранних эндосом (а). Однако Ы-концевой фрагмент Рабаптина-5 отделен от С-концевого фрагмента, поэтому необходимого для слияния взаимодействия Ы-концевого фрагмента со второй молекулой 11аЬ5-ГТФ не происходит (б).

взаимодействует в ГТФ-связанной форме с Ы-концевой областью Рабаптина-5. Дальнейший анализ выявил, что новый Ы-концевой сайт связывания ЛаЬ5 находится между аминокислотами 217 и 318 Рабаптина-5, и также присутствует в его 5 и у изоформах. На основании полученных результатов была предложена новая роль Рабаптина-5 в слиянии ранних эндосом как удерживающей молекулы и новая модель слияния ранних эндосом, в рамках которой объясняется существование ЕЕА1-независимого слияния ранних эндосом и функциональная инактивация Рабаптина-5 в результате его апоптотического расщепления.

2. Изучение свойств белка Уагр

Взаимодействие Уагр с малой ГТФазой ЯаЬ5.

Белок Уагр содержит в своем составе Урз9-домен, который обладает специфичной гуанин-нуклеотидной активностью для ГТФазы ЯаЬ5. Кроме того, в С-концевой части Уагр расположены 2 кластера анкириновых повторов, которые часто опосредуют белок-белковые взаимодействия (Рис. 5).

Varp

Vps9 Ank

265-362 458-585 682 -807 Ank Ank

Рис. 5. Схема строения белка Varp и использованных в работе делеционных мутантов AVarp, Warp и NVarp. Показаны границы Vps9-aoMCHa и кластеров анкириновых повторов (Ank). Ниже схематически представлены делеционные мутанты Varp (AVarp, Warp и NVarp) с указанием мест делеций в аминокислотных остатках.

N-концевая часть белка Varp, содержащая Урв9-домен, связывается с ГТФазой Rab5 в ее неактивном, ГДФ-связанном состоянии.

Наличие Урв9-домена делает Varp потенциальным фактором обмена гуаниновых нуклеотидов для ГТФазы Rab5 Поэтому бьш проведен анализ способности Varp непосредственно взаимодействовать с Rab5 Так как прямое взаимодействие других факторов обмена нуклеотидов (RIN1, Rap6, Алсин) с Rab5 обусловлено их Урз9-доменами, была исследована способность N-концевой части белка Varp, содержащей УрБ9-домен (Warp, Рис 5), взаимодействовать с Rab5 В результате анализа, проведенного в двугибридной дрожжевой системе, было установлено, что Warp способен непосредственно взаимодействовать с Rab5 в ее неактивном ГДФ-связанном состоянии (мутант Rab5S34N) (Рис 6) Полученные результаты полностью совпали с появившимися во время выполнения работы данными о взаимодействии N-концевой части белкового продукта альтернативного сплайсинга пре-мРНК Varp с ГДФ-связанными формами ГТФазы Rab5 и родственной ей ГТФазы Rab21, выявленными в GST pull-down анализе Таким образом, Varp относится к группе УрвЭ-содержащих белков, взаимодействующих с ГТФазой Rab5 в ее ГДФ-связанном состоянии, то есть, принимая во внимание показанную гуанин-нуклеотидную активность УрБ9-домена Varp для Rab5, взаимодействующих с неактивным белком Rab5 с его последующей активацией

Для подтверждения результатов по взаимодействию Varp с Rab5, полученных в двугибридной дрожжевой системе, был проведен анализ ко-локализации полноразмерного белка Varp и его N-концевого фрагмента с ГТФазой Rab5 в клетках Проведенный флуоресцентный иммуноцитохимический анализ показал, что оба белка, ко-продуцируемые в клетках линии HeLa В с ГТФазой Rab5, ко-локализуются с Rab5 на характерных везикулярных структурах (Рис 7) При этом С-концевая часть белка Varp, содержащая анкириновые повторы и лишенная Урз9-домена (AVarp, Рис 5), не обладала способностью ко-локализоваться с ГТФазой Rab5 на мембранных структурах (данные не приведены) Полученные результаты

GAL4BD с: fl AIJAnX Wa:

(Q79L)

Рис. 6. Взаимодействие N-концевой части белка Varp (Warp) с ГТФазой Rab5 в двугибридной дрожжевой системе. Взаимодействие белков Warp с негидролизующим ГТФ мутантом Rab5 (Q79L), или с Rab5 ГДФ-связанным мутантом (S34N) или диким типом белка Rab5 (WT) оценивали по росту дрожжей на селективной среде, содержащей 25мМ ЗАТ (+ЗАТ). Контролем служил рост дрожжей на среде, не содержащей ЗАТ (-ЗАТ).

иммунофлуоресцентного анализа подтверждают существование взаимодействия Уагр с ГТФазой КаЬ5, опосредованное М-концевой частью белка, содержащей Урз9-домен, и предполагают непосредственное участие белка Уагр в ЯаЬ5-регулируемых процессах.

V • :

Рис. 7. Иммунофлуоресцентный анализ клеток линии НеЬа В, ко-экспрессирующих белки РЬЛО-Уагр или КЬЛО-УУагр и т>ч>КаЬ5. Стрелками в увеличенных вставках отмечены примеры структур, позитивных по обоим белкам.

Поиск белков, взаимодействующих с Уагр.

В настоящее время известно 8 различных факторов обмена гуаниновых нуклеотидов (СЕР-факторы) для ГТФазы ЯаЬ5, действующих в разнообразных цепях молекулярных событий и приводящих к активации ЛаЬ5. Специфические взаимодействия различных вЕР-факторов обуславливают их корректную временную и пространственную локализацию и, как следствие, корректную активацию КаЬ5. Это определяет важность идентификации молекул, которые специфически взаимодействуют с СЕБ-факторами. В качестве первого шага по выявлению белков, которые могут обуславливать специфическую локализацию Уагр внутри клетки, был проведен поиск белков, взаимодействующих с Уагр, с помощью двугибридной дрожжевой системы.

Уагр 6 Уагр -

#1 (4.1С) «цр •я.#1 итш

#2 (4.1 и) шт щ 2

#3 (4ЛС) Ш» ю <*■»

-

#5(КШ1ВР9)

Рис. 8. Взаимодействие белка Уагр с белками, кодируемыми изолированными в результате скрининга кДНК, в двугибридной системе в дрожжах. Анализ активации репортерного гена Ьас2 в дрожжах при трансформации: а — изолированными кДНК в векторе рРС86 (клоны #1-3) или вектором рРС86(—, указаны слева) и плазмидой рРС97-Уагр (Уагр) или рРС97 (-, указаны сверху); б - изолированными кДНК в векторе рАСТ2 (клоны #1-6) (указаны слева) и плазмидой рА8-Уагр (Уагр) или рА52-1 (-, указаны сверху). Обозначены клоны, кодирующие химеры САЬ4АЭ с фрагментами белков 4.Ш, 4.111 (а) и ЯапВР9 (б).

Был проведен скрининг 13.5-14.5-дневной эмбриональной кДНК-библиотеки мыши в системе на основе векторов рРС86, рРС97 и дрожжей У153 с белком Уагр в качестве "приманки". В результате скрининга и дальнейшего анализа было выявлено три клона, в которых наблюдалось специфическое взаимодействие белков (Рис. 8 а). Определение нуклеотидных последовательностей изолированных кДНК показало, что клоны #1 и #3

содержат фрагменты кДНК белка 4.1G (GeneBank Асс. No. NM_013511) с 2430 нуклеотида, что приводит к экспрессии в дрожжах химерного белка, содержащего С-концевой фрагмент белка 4.1G начиная с 811 аминокислоты (Рис. 9). Клон #2 содержал фрагмент кДНК другого представителя семейства белков 4.1, 4.1R (GeneBank Асс. No. NM_183428), начиная с нуклеотида 3487, экспрессирующего фрагмент белка 4.1R с 673 аминокислоты (Рис. 9).

1 1

1

Рис. 9. Доменная структура белков семейства 4.1G и 4.1R. Показаны границы FERM_C- (FERM_C), спектрин/актин-связывающего (SAB) и С-концевого (CTD) доменов белков 4.1G и 4.1R. Фрагменты белков 4.1G и 4.1R, взаимодействующие с Varp в двугибридной системе в дрожжах, показаны на сером фоне.

Белки семейства 4.1, включающего 4 представителя, каждый из которых имеет несколько изоформ благодаря альтернативному сплайсингу, характеризуются общей доменной структурой, и содержат FERM_C-flOMeH, спектрин/актин-связывающий SAB-домен и С-концевой CTD-домены (Рис.9). Эти белки в клетке выполняют функции платформы для сборки различных комплексов, локализованных в примембранном пространстве. Анализ изолированных фрагментов белков 4.1R и 4.1G указывает на то, что Varp взаимодействует именно с CTD-доменом, который опосредует мембранную локализацию и многочисленные белок-белковые взаимодействия белков семейства 4.1 (Рис. 9).

Далее нами было проведено картирование фрагмента белка Varp, ответственного за взаимодействие с CTD-доменами белков 4.1. В результате анализа было установлено, что N-концевая часть сохраняет способность взаимодействовать с CTD-доменом белка 4.1G и дальнейшая делеция Vps9

FERM С SAB «'ID

ВН

396-489 594-661 869.9*2

FERM ( s\ц { If!

396-4S'i 642-Ш 74М

4.1G

988

4.1R

S 858

домена не оказала влияния на это взаимодействие (Рис. 10). Это позволяет сделать вывод о том, что взаимодействие белка Уагр с СТО-доменом белка 4. ] С определяется детерминантами в ]М-концевой части белка Уагр, предшествующей Урз9-домену.

Каковы могут быть функциональные следствия взаимодействия Уагр и белков 4.1? Так как белки 4.1 ассоциированы с мембранами и различными рецепторами, взаимодействие с белками 4.1 может являться фактором для корректной пространственной и временной активации мишеней Уагр - ГТФаз ЯаЬ5 и ЯаЬ21, и являться существенным для функционирования Уагр в мембранном транспорте от клеточной поверхности.

+ЗАТ -ЗАТ

САГАМ) с:

Рис. 10. Картирование области белка Уагр, взаимодействующей с СГО-доменом белка 4.Ю. Взаимодействие экспрессирующихся белков Уагр, АУагр, УУагр, ЫУагр с СГО-доменом белка 4.Ш (С 4.Щ) выявлялась по способности дрожжей расти на среде, содержащей 25 мМ (+ЗАТ). Контролем служил рост дрожжей на среде, не содержащей ЗАТ (-ЗАТ)

Известно, что из-за возможных стерических препятствий использование различных двугибридных систем с одним и тем же белком-"приманкой" часто позволяет обнаружить более полный спектр потенциальных партнеров по взаимодействию. Поэтому был проведен аналогичный поиск белков,

взаимодействующих с Varp, в двугибридной дрожжевой системе Matchmaker (Clontech) с использованием кДНК-библиотеки головного мозга человека В результате скрининга был изолирован один клон, кодирующий белок, специфически взаимодействующий с Varp Анализ последовательности изолированной кДНК клона #5 (Рис 8 б) показал, что он содержит фрагмент кДНК белка RanBP9 (GenaBank Асс No NM 005493) начиная с нуклеотида 465, что приводит к продукции белка RanBP9, лишенного 134 N-концевых аминокислот

RanBP9, как и белки семейства 41, служит платформой для взаимодействия с различными белками, многие из которых были обнаружены в двугибридной дрожжевой системе В частности, партнерами по взаимодействию с RanBP9 являются рецепторные тирозиновые киназы, а также молекулы клеточной адгезии Обнаруженное нами взаимодействие RanBP9 с Varp потенциально связывает активацию ГТФаз - регуляторов раннего эндоцитоза, Rab5 и Rab21, с процессами передачи сигналов от рецепторных тирозиновых киназ и молекул адгезии, в котором существенную роль играет их корректная интернализация и дальнейший внутриклеточный транспорт

Суммируя, нами обнаружены в двугибридной дрожжевой системе взаимодействия Varp с белками семейства 4 1 и RanBP9 Взаимодействия Varp с адапторными мультифункциональными белками, которыми являются белки семейства 4 1 и RanBP9, представляют механистическую основу для локализации Varp в примембранном пространстве, что потенциально делает возможным координацию эндоцитоза мембранных рецепторов и молекул адгезии, с которыми взаимодействуют белки семейства 4 1 и RanBP9, и активацию ГТФаз Rab21 и Rab5, регулирующих этот процесс Дальнейшие исследования, направленные на подтверждение существования обнаруженных нами межбелковых взаимодействий in vivo и выявление их функциональной значимости, позволят установить существенность обнаруженных нами взаимодействий в процессе раннего эндоцитоза

выводы

1 Впервые продемонстрировано взаимодействие И-концевой части белка Рабаптин-5, а также его 5 и у изоформ, с ГТФазой ЛаЬ5 в активном, ГТФ-связанном состоянии

2 Новый Ы-концевой сайт связывания ГТФазы И.аЬ5 был картирован между аминокислотными остатками 217 и 318 Рабаптина-5

3 Предложена новая модель слияния ранних эндосом, в которой белок Рабаптин-5, благодаря взаимодействию с двумя молекулами ГТФазы ЯаЬ5, выступает в роли молекулы, удерживающей КаЬ5-позитивные мембраны перед их слиянием

4 Показано, что белок Уагр взаимодействует с ГТФазой ЯаЬ5 в неактивном, ГДФ-связанном состоянии, и ко-локализуется с ЯаЬ5 на ранних эндосомах в клетке

5 Мультиадапторные белки семейства 4 1 и ИапВР9 впервые выявлены как потенциальные партнеры по взаимодействию с белком Уагр

6 Показано, что взаимодействие Уагр и белков семейства 4 1 обусловлено И-концевой областью Уагр, предшествующей Урз9-домену, и С-концевым доменом белков 4 1

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1 И В Пальгова. ЕВ Коробко, ИВ Коробко Мультиадапторные белки семейства 4 1 и RanBP9 как потенциальные партнеры по взаимодействию с Varp, фактором обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФазы Rab21 Молекулярная биология, 2007, том 41, №6, с 1009-1013

2 Korobko EV, Palgova IV. Kiselev SL, Korobko IV Apoptotic cleavage of Rabaptin-5-hke proteins and a model for Rabaptm-5 inactivation in apoptosis Cell Cycle, 2006,15, 5(16), p 1854-1858

3 И В Пальгова. E В Коробко, С J1 Киселев Идентификация нового сайта связывания малой ГТФазы Rab5 в белке Рабаптин-5 XII международная конференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2005» Московский Государственный Университет им М В Ломоносова, Москва, Россия, апрель 12-15,2005, с 170

4 И В Пальгова. И В Коробко, С Л Киселев, Е В Коробко Рабаптин-5 как гомобифункциональный эффектор малой ГТФазы Rab5 VI международная конференция «Молекулярная генетика соматических клеток» Звенигород, Россия, декабрь 12-16, 2005, с 47

Подписано в печать 15 11 2007 г Исполнено 26 11 2007 г Печать трафаретная

Заказ №1000 Тираж 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш, 36 (495) 975-78-56, (499) 788-78-56 www autoreferat ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пальгова, Ирина Викторовна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Внутриклеточный мембранный транспорт.

1.2. Эндоцитоз.

1.3. SNARE - зависимое слияние мембран.

1.4. Семейство Rab ГТФаз.1В

1.5. Молекулы, участвующие в ранних этапах везикулярного транспорта.

1.5.1. Малая ГТФаза Rab5.

1.5.2. Малая ГТФаза Rab4.

1.5.3. Другие Rab ГТФазы, участвующие в регуляции раннего эндоцитоза.

1.6. Факторы обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФазы Rab5.

1.7. Рабаптин-5-подобные белки.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Ферменты.

2.1.2. Используемые реактивы.

2.1.3. Антибиотики.

2.1.4. Антитела.

2.1.5. Растворы и буферы для электрофоретического разделения белков и ДНК.

2.1.6. Клетки и плазмиды.

2.1.7. Растворы и буферы для выделения и плазмид.

2.1.8. Растворы и буферы для приготовления компетентных клеток.

2.1.10. Z-буфер.

2.1.11. Культуральные среды.

2.2. Оборудование.

2.3. Методы исследований.

2.3.1. Выделение плазмидной ДНК из Е. coli протокол № 1.

2.3.2. Выделение плазмидной ДНК из Е. coli протокол № 2 (высокой очистки).

2.3.3. Выделение плазмидной ДНК из клеток дрожжей.

2.3.4. Приготовление компетентных клеток Е. coli.

2.3.5. Приготовление компетентных клеток Е. coli для электоропорации.

2.3.6. Трансформация клеток E.coli.

2.3.7. Электропорация клеток E.coli.

2.3.8. Трансформация клеток дрожжей.

2.3.9. Манипуляции с клетками дрожжей CG-1945 и Y187.

2.3.10. Трансфекция клеток линий HeLa В и НЕК

2.3.11 Анализ активации репортерного генаLacZ в дрожжах.

2.3.12. Анализ активации репортерного гена His3 в дрожжах.

2.3.13. Иммуноцитохимический анализ.

2.3.14. Рестрикция.

2.3.15. Обработка фрагментов ДНК фрагментом Кленова.

2.3.16. Выделение фрагментов ДНК из геля.

2.3.17. Лигирование.

2.3.18. Определение нуклеотидных последовательностей.

2.3.19. Электрофоретическое разделение белков в ДСН-ПААГ.

2.3.20. Иммуно-блот анализ.

2.3. 21. Агарозный гель-электрофорез.

2.3.22. Полимеразная цепная реакция.

2.3.23. Получение плазмидных констукций.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ.

3.1. Взаимодействие Рабаптина-5 с малой ГТФазой Rab5.

3.1.1. N-концевой домен Рабаптина-5 способен образовывать гомодимеры.

3.1.2. Идентификация и картирование нового сайта связывания ГТФазы Rab5 в N-концевых доменах Рабаптина-5, Рабаптина-55 и Рабаптина-5у.

3.1.3. Новая функциональная роль Рабаптина-5 в процессе слияния ранних эндосом.

3.1.4. Резюме.

3.2. Изучение свойств белка Varp.

3.2.1. Взаимодействие Varp с малой ГТФазой Rab5.

3.2.1.1. N-концевая часть белка Varp, содержащая Vps9-flOMeH, связывается с ГТФазой Rab5 в ее неактивном, ГДФ-связанном состоянии.

3.2.1.2. Локализация белка Varp на мембранах ранних эндосом опосредуетя его N-концевой частью.

3.2.1.3. Локализация полноразмерного белка Varp на плазматической мембране определяется его С- концевым доменом.

3.2.2. Поиск белков-партнеров по взаимодействию с Varp.

3.2.2.1. Взаимодействие VARP с белками семейства 4.1.

3.2.2.2. Взаимодействие Varp с белком RanBP9.

3.3.3. Резюме.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика свойств и функций белков-участников эндосомального транспорта рабаптина-5, его изоформ и VARP"

Одним из фундаментальных процессов, протекающих во всех эукариотических клетках, является транспорт мембран. Он затрагивает и влияет на самые различные аспекты жизнедеятельности клетки, такие как обмен веществ с окружающей средой, поддержание клеточного гомеостаза, секрецию, передачу сигналов и т.д. Тесная взаимосвязь мембранного транспорта с различными клеточными процессами определяет актуальность исследования его молекулярных основ. Для полноценной и нормальной работы клеток необходимо, чтобы процессы внутриклеточного мембранного транспорта были четко и тонко сбалансированы. Молекулярные основы везикулярного транспорта являются предметом исследования на протяжении длительного времени, однако расшифровка и характеристика всех участников этого многостороннего и сложного процесса еще далека от завершения.

Представления о молекулярных механизмах внутриклеточного мембранного транспорта является необходимым не только для понимания этого фундаментального процесса самого по себе, но и сопряженных с ним событий. Это, в свою очередь, создает основу для практического использования фундаментальных знаний в различных приложениях.

Rab ГТФазы являются одним из основных классов молекул, регулирующих внутриклеточный мембранный транспорт. Регуляторные функции Rab ГТФаз осуществляются посредством их специфического взаимодействия с различными белками, называемыми эффекторами. Эффекторные молекулы - очень обширная и во многом еще неизученная группа белков.

ГТФаза Rab5 играет ключевую роль в регуляции ранних этапов эндоцитоза -мембранного транспорта от поверхности клетки. К настоящему времени описано большое количество эффекторов ГТФазы Rab5, однако точные молекулярные механизмы действия их описаны не полностью или остаются до сих пор неизвестными. Кроме того, спектр этих молекул значительно шире, чем известно в настоящее время.

Целью настоящей работы являлось исследование новых свойств и функций эффекторых молекул ГТФазы Rab5 - белков Рабаптин-5, его изоформ и белка Varp. Для достижения указанной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Исследовать новые функции Рабаптина-5 и его изоформ в процессе слияния ранних эндосом.

2. Исследовать способность белка Varp, нового потенциального фактора обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФазы Rab5, взаимодействовать с ГТФазой Rab5.

3. Провести поиск белков, взаимодействующих с белком Varp.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная генетика", Пальгова, Ирина Викторовна

5. ВЫВОДЫ

1. Впервые продемонстрировано взаимодействие N-концевой части белка Рабаптин-5, а также его 5 и у изоформ, с ГТФазой Rab5 в активном, ГТФ-связанном состоянии.

2. Новый N-концевой сайт связывания ГТФазы Rab5 был картирован между аминокислотными остатками 217 и 318 Рабаптина-5.

3. Предложена новая модель слияния ранних эндосом, в которой белок Рабаптин-5, благодаря взаимодействию с двумя молекулами ГТФазы Rab5, выступает в роли молекулы, удерживающей Rab5-позитивные мембраны перед их слиянием.

4. Показано, что белок Varp взаимодействует с ГТФазой Rab5 в неактивном, ГДФ-связанном состоянии, и ко-локализуется с Rab5 на ранних эндосомах в клетке.

5. Мультиадапторные белки семейства 4.1 и RanBP9 впервые выявлены как потенциальные партнеры по взаимодействию с белком Varp.

6. Показано, что взаимодействие Varp и белков семейства 4.1 обусловлено N-концевой областью Varp, предшествующей Урэ9-домену, и С-концевым доменом белков 4.1.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В ходе выполнения работы были проведены исследования новых свойств белка Рабаптина-5, который является эффекторной молекулой ГТФаз Rab5 и Rab4. В результате проведенных исследований был обнаружен и картирован новый дополнительный сайт связывания ГТФазы Rab5, присутствующий в белке Рабаптин-5. Этот результат имеет фундаментальное значение для понимания молекулярных процессов слияния ранних эндосом, в котором Рабаптин-5 играет одну из ключевых ролей. Полученные результаты позволили предложить абсолютно новую дополнительную роль белка Рабаптина-5 в процессе слияния ранних эндосом как гомобифункциональной Rab5-CBfl3biBaioi4efi молекулы. В рамках новой модели слияния ранних эндосом, предложенной на основании полученных нами результатов, становиться возможным объяснение ряда известных ранее и необъяснимых экспериментальных фактов. В работе также было впервые показано, что обнаруженный новый сайт связывания ГТФазы Rab5 присутствует и в изоформах Рабаптина-5, Рабаптине-55 и Рабаптине-5у.

Факторы обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФаз Rab семейства играют ключевую роль в их активации, что определяет важность исследования молекулярных механизмов их действия для понимания регуляции мембранного транспорта, осуществляемого Rab ГТФазами.

В результате изучения свойств потенциального фактора обмена гуаниновых нуклеотидов ГТФазы Rab5, белка Varp, было установлено, что Varp способен взаимодействовать с ГТФазой Rab5, и это взаимодействие происходит преимущественно с Rab5 в неактивном, ГДФ-связанном состоянии. Также было показано, что Varp ко-локализуется с ГТФазой Rab5 в клетках. Эти данные подтверждают участие Varp в процессе раннего эндоцитоза. С использованием метода двугибридного клонирования в дрожжах были выявлены возможные партнеры по взаимодействию с Varp - белки семейства 4.1 и

Ran9BP, и проведено картирование сайтов взаимодействия Varp с белком 4.1G. Взаимодействие белка Varp с этими мультиадапторными белками может являться механистической основой для обеспечения корректной локализации Varp внутри клетки.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пальгова, Ирина Викторовна, Москва

1. Alexandrov К, Horiuchi Н, Steele-Mortimer О, Seabra М. С, Zerial М. Rab escort protein-1 is a multifunctional protein that accompanies newly prenylated rab proteins to their target membranes. // EMBO J. 1994. Vol. 13, p.5262-5273.

2. Anant J.S., Desnoyers L., Machius M., Demeler В., Hansen J. C., Westover K. D., Deisenhofer J., Seabra M. C. Mechanism of Rab geranylgeranylation: formation of the catalic ternary complex. //Biochemistry. 1998. Vol. 37, p.12559-12568.

3. Bajjalieh S. M. and Scheller R. H. The biochemistry of neurotransmitter secretion. // J Biol Chem. 1995. Vol. 270, p. 1971-1974.

4. Banfield DK. SNARE complexes-is there sufficient complexity for vesicle targeting specificity? // Trends Biochem Sci. 2001. Vol. 26, p. 67-68.

5. Barbieri M.A., Kong C, Chen PI, Horazdovsky BF, Stahl PD. The Src Homology 2 Domain of Rin 1 mediates its binding to thr EGFR and regulates receptor endocytosis. // JBC. 2003. Vol. 34, p. 32027-32036.

6. Barbieri MA, Fernandez-Pol S, Hunker C, Horazdovsky BH, Stahl PD. Role of Rab5 in EGF receptor-mediated signal transduction. // Eur J Cell Biol. 2004. Vol. 83, p. 305-314.

7. Bock J. В., Matern H. Т., Peden A. A., Scheller R. H. A genomic perspective on membrane compartment organization. // Nature. 2001. Vol. 409, p. 839-841.

8. Bonifacino Juan S., and Benjamin S. Glick The Mechanisms of Vesicle Budding and Fusion//Cell. 2004. Vol. 116, p. 153-166.

9. Bucci С, Parton RG, Mather IH, Stunnenberg H, Simons K, Hoflack B, Zerial M. The small GTPase rab5 functions as a regulatory factor in the early endocytic pathway. // Cell. 1992. Vol. 70, p. 715-728.

10. Burd, C.G. et al. A yeast protein related to a mammalian Rasbinding protein, Vps9p, is required for localization of vacuolar proteins. // Mol. Cell. Biol. 1996. Vol. 16, p. 2369-2377.

11. Carney DS, Davies BA, Horazdovsky BF. Vps9 domain-containing proteins: activators of Rab5 GTPases from yeast to neurons. // Trends Cell Biol. 2006. Vol. 16, p. 27-35.

12. Chen T, Han Y, Yang M, Zhang W, Li N, Wan T, Guo J, Cao X. Rab39, a novel Golgi-associated Rab GTPase from human dendritic cells involved in cellular endocytosis. // Biochem Biophys Res Commun. 2003. Vol. 303, p. 1114-1120.

13. Chen X, Wang X. Regulation of intracellular trafficking of the EGF receptor by Rab5 in the absence of phosphatidylinositol 3-kinase activity. // EMBO. 2001. Vol. 2, p. 68-74.

14. Chen YA, Scheller RH. SNARE-mediated membrane fusion. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2001/Vol. 2, p. 98-106.

15. Cheng L., Lemmon S., Lemmon V. RanBPM is an LI-interacting protein that regulates LI-mediated mitogen-activated protein kinase activation. // J Neurochem. 2005. Vol. 94, p. 1102-1110.

16. Chevray PM, Nathans D. Protein interaction cloning in yeast: identification of mammalian proteins that react with the leucine zipper of Jun. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. Vol. 89, p. 5789-5793.

17. Christoforidis S, Miaczynska M, Ashman K, Wilm M, Zhao L, Yip SC, Waterfield MD, Backer JM, Zerial M Phosphatidylinositol-3-OH kinases are Rab5 effectors. // Nat Cell Biol. 1999. Vol. l,p. 249-52.

18. Christoforidis S., McBride H.M., Burgoyne R. D., Zerial M. The Rab5 effector EEA-1 is a core component of endosome docking. // Nature. 1999. Vol. 397, p. 621-626.

19. Clague Michael J. and Urbe Sylvie. The interface of receptor trafficking and signaling. // Journal of Cell Science. 2001. Vol. 114, p. 3075-3081.

20. Coppola T, Hirling H, Perret-Menoud V, Gattesco S, Catsicas S, Joberty G, Macara IG, Regazzi R. Rabphilin dissociated from Rab3 promotes endocytosis through interaction with Rabaptin-5. // J Cell Sci. 2001. Vol. 114, p. 1757-1764.

21. Cosulish S. C., Horiuchi H., Zerial M., Clarke P. R., Woodman P. G. Cleavage of Rabaptin5 blocks endosome fusion during apoptosis. // EMBO. 1997. Vol. 16, p. 6182-6191.

22. Deitcher D. Exocytosis, endocytosis, and development. // Semin Cell Dev Biol. 2002. Vol. 13, p. 71-76.

23. Delprato A., Merithew E., Lambright DG. Structure, exchange determinants, and family-wide rab specificity of the tandem helical bundle and Vps9domains of Rabex-5. // Cell. 2004.Vol. 118, p. 607-617.

24. Denti S, Sirri A, Cheli A, Rogge L, Innamorati G, Putignano S, Fabbri M, Pardi R, Bianchi E. RanBPM is a phosphoprotein that associates with the plasma membrane and interacts with the integrin LFA-1. // J Biol Chem. 2004. Vol. 26, p. 13027-13034.

25. Diakowski W, Grzybek M, Sikorski AF. Protein 4.1, a component of the erythrocyte membrane skeleton and its related homologue proteins forming the protein 4.1/FERM superfamily. // Folia Histochem Cytobiol. 2006. Vol. 44, p. 231-248.

26. Dirac-Svejstrup А. В., Sumizawa Т., Pfeffer S. R. Identification of a GDI displacement factor that releases endosomal Rab GTPases from Rab-GDI. // EMBO J. 1997. Vol. 16, p. 465-472.

27. Durrbach A, Raposo G, Tenza D, Louvard D, Coudrier E. Truncated brush border myosin I affects membrane traffic in polarized epithelial cells. // Traffic. 2000. Vol. 1, p. 411-24.

28. Fasshauer, D, Sutton RB, Briinger AT, Jahn R. Conserved structural features of the synaptic fusion complex: SNARE proteins reclassified as Q- and RSNAREs. // Proc. Natl Acad. Sci. США. 1998. Vol. 95, p. 15781 15786.

29. Foti M, Moukil MA, Dudognon P, Carpentier JL Insulin and IGF-1 receptor trafficking and signalling. // Novartis Found Symp. 2004. Vol. 262, p. 125-141.

30. Frederick R. Endocytic recycling. // Nature reviews. 2004. Vol. 5, p. 121-132.

31. Gagescu R. SNARE hypothesis 2000. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2000. Vol. 1, p. 1-5.

32. Giannino DS, Manfioletti G, Schneider C. A one-tube plasmid DNA mini-preparation suitable for sequencing. // Nucleic Acids Res. 1988. Vol. 16, p. 9878.

33. Gonzalez-Gaitan M, Stenmark H.Endocytosis and signaling: a relationship under development. // Cell. 2003. Vol. 115, p. 513-521.

34. Gorvel JP, Chavrier P, Zerial M, Gruenberg J. Rab5 controls early endosome fusion in vitro. // Cell. 1991. Vol. 64, p. 915-25.

35. Gournier H., Stenmark H., Rubin V., Lippe R., Zerial M. Two distinct effectors of the small GTPase Rab5 cooperate in endocytic membrane fusion. // EMBO J. 1998. Vol. 17, p. 1930-1940.

36. Gruenberg J, Griffiths G, Howell к. E. Characterization of the early endosome and putative endocytic carrier vesicles in vivo and with an assay of vesicle fusion in vitro. // J Cell Biol. 1989. Vol. 108, p. 1301-1316.

37. Gruenberg J. The endocytic pathway: a mosaic of domains. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2001. Vol. 2, p. 721-730.

38. Gundelfmger ED, Kessels MM, Qualmann B. Temporal and spatial coordination of exocytosis and endocytosis. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2003. Vol. 4, p. 127-39.

39. Gurkan C, Lapp H, Alory C, Su AI, Hogenesch JB, Balch WE. Large-scale profiling of Rab GTPase trafficking networks: the membrome. // Mol Biol Cell. 2005. Vol. 16, p. 3847-3864.

40. Hafizi S., Gustafsson A., Stenhoff J., Dahlback B. The Ran binding protein RanBPM interacts with Axl and Sky receptor tyrosine kinases. // Int J Biochem Cell Biol. 2005. Vol. 37, p. 2344-2356.

41. Haglund K, Di Fiore PP, Dikic I Distinct monoubiquitin signals in receptor endocytosis. // Trends Biochem Sci. 2003. Vol. 28, p. 598-603.

42. Hanson, PI, Heuser JE, and Jahn R. Neurotransmitter release four years of SNARE complexes. // Curr Opin Neurobiol. 1997. Vol. 7, p. 310-315.

43. Harbury PA. Springs and zippers: coiled coils in SNARE-mediated membrane fusion. // Structure. 1998. Vol. 6, p. 1487-1491.

44. Hicke L, Dunn R. Regulation of membrane protein transport by ubiquitin and ubiquitin-binding proteins. // Annu Rev Cell Dev Biol. 2003. Vol. 19, p. 141-172.

45. Hoang E, Bost-usinger L, and Burnside B. Characterization of a novel C-kinesin (KIFC3) abundantly expressed in vertebrate retina and RPE. // Exp. Eye Res. 1999. Vol. 69, p. 5768.

46. Horiuchi H, Giner A, Hoflack B, Zerial M. A GDP/GTP exchange-stimulatory activity for the Rab5-RabGDI complex on clathrin-coated vesicles from bovine brain. // J Biol Chem. 1995. Vol. 270, p. 11257-11262.

47. Huang J, Imamura T, Olefsky JM. Insulin can regulate GLUT4 internalization by signaling to Rab5 and the motor protein dynein. // Proc Natl Acad Sci USA. 2001. Vol. 98, p. 13084-18089.

48. Hunker CM, Galvis A, Kruk I, Giambini H, Veisaga ML, Barbieri MA. Rab5-activating protein 6, a novel endosomal protein with a role in endocytosis. // Biochem Biophys Res Commun. 2006. Vol. 340, p. 967-75.

49. Hunker CM, Kruk I, Hall J, Giambini H, Veisaga ML, Barbieri MA. Role of Rab5 in insulin receptor-mediated endocytosis and signaling. // Arch Biochem Biophys. 2006. Vol. 449, p. 130-142.

50. Ikonen E, Parton RG. Caveolins and cellular cholesterol balance. // Traffic 2000. Vol. 1, p. 212-217.

51. Imamura T, Huang J, Usui I, Satoh H, Bever J, Olefsky JM. Insulin-induced GLUT4 translocation involves protein kinase C-lambda-mediated functional coupling between Rab4 and the motor protein kinesin. // Mol Cell Biol. 2003. Vol. 23, p. 4892-4900.

52. Jordens I, Marsman M, Kuijl C, Neefjes J. Rab proteins, connecting transport and vesicle fusion. // Traffic. 2005. Vol. 6, p.1070-1077.

53. Kajiho H, Saito K, Tsujita K, Kontani K, Araki Y, Kurosu H, Katada T. RIN3: a novel Rab5 GEF interacting with amphiphysin II involved in the early endocytic pathway. // J Cell Sci. 2003. Vol. 116, p. 4159-4168.

54. Kato M, Sasaki T, Ohya T, Nakenishi H, Nishioke H. Physical and functional interaction ofrabphilin-3A with alpha-actinin. // J. Biol. Chem. 1996. Vol. 271, p. 31775-31778.

55. Kauppi M, Simonsen A, Bremnes B, Vieira A, Callaghan J, Stenmark H and. Olkkonen VM. The small GTPase Rab22 interacts with EEA1 and controls endosomal membrane trafficking. //Journal of Cell Science. 2002. Vol. 115, p. 899-911.

56. Khurana T, Brzostowski JA, Kimmel AR. A Rab21/LIM-only/CH-LIM complex regulates phagocytosis via both activating and inhibitory mechanisms. // EMBO J. 2005. Vol. 6, p. 2254-2264.

57. Kirkham M, Parton RG. Clathrin-independent endocytosis: new insights into caveolae and non-caveolar lipid raft carriers. // Biochim Biophys Acta. 2005. Vol. 1746, p. 349363.

58. Koch T, Widera A, Bartzsch K, Schulz S, Brandenburg LO, Wundrack N, Beyer A, Grecksch G, Hollt V. Receptor endocytosis counteracts the development of opioid tolerance. // Mol Pharmacol. 2005. Vol. 67, p. 280-287.

59. Korobko E, Kiselev S, Olsnes S, Stenmark H, Korobko I. The Rab5 effector Rabaptin-5 and its isoform Rabaptin-5delta differ in their ability to interact with the small GTPase Rab4. // FEBS J. 2005. Vol. 272, p. 37-46.

60. Korobko EV, Kiselev SL, Korobko IV. Multiple Rabaptin5-like transcripts. // Gene. 2002. Vol. 202, p. 191-197.

61. Kurzchalia TV, Gorvel JP, Dupree P, Parton R, Kellner R, Houthaeve T, Gruenberg J, Simons K. Interactions of rab5 with cytosolic proteins. // J Biol Chem. 1992. Vol. 267, p. 1841918423.

62. Lanzetti L, Palamidessi A, Areces L, Scita G, Di Fiore PP. Rab5 is a signalling GTPase involved in actin remodelling by receptor tyrosine kinases. // Nature. 2004. Vol. 20, p. 309314

63. Lanzetti L, Rybin V, Malabarba MG, Christoforidis S, Scita G, Zerial M, Di Fiore PP.The Eps8 protein coordinates EGF receptor signalling through Rac and traffcking through Rab5. // Nature. 2000. Vol. 408, p. 374-379.

64. Lee S, Tsai YC, Mattera R, Smith WJ, Kostelansky MS, Weissman AM, Bonifacino JS, Hurley JH. Structural basis for ubiquitin recognition and autoubiquitination by Rabex-5. // Nat Struct Mol Biol. 2006. Vol. 13, p. 264-271

65. Lee SY, Rasheed S. A simple procedure for maximum yield of high-quality plasmid DNA. // Biotechniques. 1990. Vol. 9, p. 676-679.

66. Lemmon SK, Traub LM. Sorting in the endosomal system in yeast and animal cells. // Curr Opin Cell Biol. 2000. Vol. 12, p. 457-466.

67. Linial M. SNARE proteins-why so many, why so few? // J Neurochem. 1997. Vol. 69, p. 1781-1792.

68. Lippe R, Miaczynska M, Rybin V, Runge A, Zerial M. Functional synergy between Rab5 effector Rabaptin-5 and exchange factor Rabex-5 when physically associated in a complex. // Mol Biol Cell. 2001. Vol. 12, p. 2219-2228.

69. Mattera R, Arighi CN, Lodge R, Zerial M, Bonifacino JS.Divalent interaction of the GGAs with the Rabaptin-5-Rabex-5 complex. // EMBO J. 2003. Vol. 22, p. 78-88.

70. McLauchlan H, Newell J, Morrice N, Osborne A, West M, Smythe E. A novel role for Rab5-GDI in ligand sequestration into clathrin-coated pits. // Curr Biol. 1998. Vol. 8, p. 34-45.

71. Melman I. Endocytosis and molecular sorting. // Annu Rev Cell Dev Biol. 1996. Vol. 12, p. 575-625.

72. Mohrmann К and van der Sluijs P. Regulation of membrane transport through the endocytic pathway by rabGTPases. // Mol. Membr. Biol. 1999. Vol. 16, p. 81-87.

73. Mohrmann K, Gerez L, Oorschot V, Klumperman J, van der Sluijs P. Rab4 function in membrane recycling from early endosomes depends on a membrane to cytoplasm cycle. // J Biol Chem. 2002. Vol. 277, p. 32029-32035.

74. Monier S, Parton RG, Vogel F, Behlke J, Henske A, Kurzchalia TV.E. VIP21-caveolin, a membrane protein constituent of the caveolar coat, oligomerizes in vivo and in vitro. // Mol Biol Cell. 1995. Vol. 6, p. 911-927.

75. Morgan A. Burgoyne RD. Analysis of regulated exocytosis in adrenal chromaffin cells: insights into NSF/SNAP/SNARE function. //Bioessays. 1998. Vol. 20, p. 328-335.

76. Mukheijee S, Maxfield FR. Role of membrane organization and membrane domains in endocytic lipid trafficking. // Traffic. 2000. Vol.1, p. 203-211.

77. Murray JT, Panaretou C, Stenmark H, Miaczynska M, Backer JM Role of Rab5 in the Recruitment of hVps34/pl50 to the Early Endosome. // Traffic. 2002 Vol. 3, p. 416-427.

78. Nabi IR, Le PU. Caveolae/raft-dependent endocytosis. // J Cell Biol. 2003. Vol. 161, p. 673-677.

79. Nichols B.J, Ungermann C, Pelham HR, Wickner WT, Haas A. Homotypic vacuolar fusion mediated by t- and v-SNAREs. // Nature 1997. Vol. 387, p. 199-202.

80. Nielsen E, Severin F, Backer JM, Hyman AA, Zerial M. Rab5 regulates motility of early endosomes on microtubules. // Nat Cell Biol. 1999. Vol. 1, p. 376-382.

81. Ohya T, Sasaki T, Kato M, Takai Y. Involvement of Rabphilin3 in endocytosis through interaction with Rabaptin5. // J Biol Chem. 1998. Vol. 273, p. 613-617.

82. Pagano A, Crottet P, Prescianotto-Baschong C, Spiess M In vitro formation of recycling vesicles from endosomes requires adaptor protein-1/clathrin and is regulated by rab4 and the connector rabaptin-5. // Mol Biol Cell. 2004. Vol. 15, p. 4990-5000.

83. Parton RG, Schrotz P, Bucci C, Gruenberg J. Plasticity of early endosomes. // J Cell Sci. 1992. Vol. 103, p. 335-348.

84. Patki V, Virbasius J, Lane WS, Toh BH, Shpetner HS, Corvera S. Identification of an early endosomal protein regulated by phosphatidylinositol 3-kinase. // Proc Natl Acad Sci U S A. 1997. Vol. 94, p. 7326-7333.

85. Pellinen T, Arjonen A, Vuoriluoto K, Kallio K, Fransen JA, Ivaska J. Small GTPase Rab21 regulates cell adhesion and controls endosomal traffic of betal-integrins. // J Cell Biol. 2006. Vol 173, p. 767-780.

86. Pfeffer S, Aivazian D. Targeting Rab GTPases to distinct membrane compartments. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2004. Vol 11, p. 886-896.

87. Pfeffer S. Membrane domains in the secretory and endocytic pathways. // Cell. 2003. Vol 21, p. 507-517.

88. Pfeffer S. R. Transport-vesicle targeting: tethers before SNAREs. // Nat. Cell Biol. 1999. Vol 1, 17-22.

89. Pfeffer SR. Transport vesicle docking: SNAREs and associates. // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1996. Vol 12, p. 441-461.

90. Rink J, Ghigo E, Kalaidzidis Y, Zerial M. Rab conversion as a mechanism of progression from early to late endosomes. // Cell. 2005. Vol 122, p. 735-749.

91. Rohn WM, Rouille Y, Waguri S, Hoflack B.J Cell Sci. Bi-directional trafficking between the trans-Golgi network and the endosomal/lysosomal system. J. Cell Sci. 2000. Vol 113, p. 2093-2101.

92. Rothman JE. Mechanism of intracellular protein transport. // Nature. 1994. Vol 372, p. 55-63.

93. Rubino M, Miaczynska M, Lippe R, Zerial M. Selective membrane recruitment of EEA-1 suggests a role in directional transport of clathrin-coated vesicles to early endosomes. // JBC. 2000. Vol 275, p. 3745-3748.

94. Rybin V, Ullrich O, Rubino M, Alexandrov K, Simon I, Seabra MC, Goody R, Zerial M. GTPase activity of Rab5 acts as a timer for endocytic membrane fusion. // Nature. 1996. Vol. 383, p. 266-269.

95. Sah VP, Seasholtz TM, Sagi SA, and Brown JH. // Annu. Rev.Pharmacol. Toxicol. 2000. Vol 40, p. 459-489.

96. Saito N, Okada Y, Noda Y, Kinoshita Y, Kondo S, Hirokawa N. KIFC2 is a novel neuron-specific C-terminal type kinesin superfamily motor for dendritic transport of multivesicular body-like organelles. // Neuron. 1997. Vol 18, p.425-438.

97. Sato M, Sato K, Fonarev P, Huang CJ, Liou W, Grant BD. Caenorhabditis elegans RME-6 is a novel regulator of RAB-5 at the clathrin-coated pit. // Nat Cell Biol. 2005. Vol 7, p. 559-569.

98. Schimmoller F, Simon I, Pfeffer SR. Rab GTPases, directors of vesicle docking. // J Biol Chem. 2000. Vol 273, p. 22161-22164.

99. Schnatwinkel С, Christoforidis S, Lindsay MR, Uttenweiler-Joseph S, Wilm M, Parton RG, Zerial M. The Rab5 effector Rabankyrin-5 regulates and coordinates different endocytic mechanisms. // PLoS Biol. 2004. Vol 9, p. 261-265.

100. Seabra MC, Wasmeier C. Controlling the location and activation of Rab GTPases. // Curr Opin Cell Biol. 2004. Vol 16, p. 451-457.

101. Shiba Y, Takatsu H, Shin HW, Nakayama K. Gamma-adaptin interacts directly with Rabaptin-5 through its ear domain. // J Biochem (Tokyo). 2002. Vol 131, p. 327-336.

102. Sigismund S, Woelk T, Puri C, Maspero E, Tacchetti C, Transidico P, Di Fiore PP, Polo S. Clathrin-independent endocytosis of ubiquitinated cargos. // Proc Natl Acad Sci USA. 2005. Vol 102, p. 2760-2765.

103. Simonsen A, Lippe R, Christoforidis S, Gaullier JM, Brech A, Callaghan J, Toh BH, Murphy C, Zerial M, Stenmark H. EEA1 links PI(3)K function to Rab5 regulation of endosome fusion. //Nature. 1998. Vol 30, p. 494-498.

104. Simpson JC, Griffiths G, Wessling-Resnick M, Fransen JA, Bennett H, Jones AT. A role for the small GTPase Rab21 in the early endocytic pathway. //J Cell Sci. 2004. Vol 117, p. 6297-6311.

105. Sollner T, Bennett MK, Whiteheart SW, Scheller RH, Rothman JE. A protein assembly-disassembly pathway in vitro that may correspond to sequential steps of synaptic vesicle docking, activation, and fusion. // Cell. 1993. Vol 75, p. 409-418.

106. Sonnichsen В, De Renzis S, Nielsen E, Rietdorf J, Zerial M Distinct membrane domains on endosomes in the recycling pathway visualized by multicolor imaging of Rab4, Rab5, and Rabll. // J Cell Biol. 2000. Vol 149, p. 901-914.

107. Stenmark H, Olkkonen VM. The Rab GTPase family. // Genome Biology. 2001. Vol 2, p. 3007.1-3007.7.

108. Stenmark H, Parton RG, Steele-Mortimer O, Lutcke A, Gruenberg J, Zerial M. Inhibition of Rab GTPase activity stimulates membrane fusion in endocytosis. // EMBO J. 1994. Vol 13, p. 1287-1296.

109. Stenmark H, Vitale G, Ullrich O, Zerial M. Rabaptin-5 is a direct effector of the small GTPase Rab5 in endocytic membrane fusion. // Cell. 1995. Vol 83(3), p. 423-432.

110. Stenmark H, Zerial M. Modulation of receptor recycling and degradation by the endosomal kinesin KIF16B. // Cell. 2005. Vol 121, p. 437-450.

111. Strick DJ, Elferink LA. Rab 15 effector protein: a novel protein for receptor recycling from the endocytic recycling compartment. // Mol Biol Cell. 2005. Vol 16, p. 5699-5709.

112. Swanton E, Bishop N, Woodman P. Human rabaptin-5 is selectively cleaved by caspase-3 during apoptosis. // J Biol Chem. 1999. Vol 274, p. 37583-37590.

113. Tall GG, Barbieri MA, Stahl PD, Horazdovsky BF. Ras-activated endocytosis is mediated by the Rab5 guanine nucleotide exchange activity of RIN1. // Dev Cell. 2001. Vol 1, p. 73-82.

114. Tellam JT, James DE, Stevens TH, and Piper RC. Identification of a mammalian Golgi Seclp-like protein, mVps45. // J. Biol. Chem. 1997. Vol 272, p. 6187-6193.

115. Topp JD, Gray NW, Gerard RD, Horazdovsky BF Alsin is a Rab5 and Racl guanine nucleotide exchange factor. // J Biol Chem. 2004. Vol 279, p. 24612-24623.

116. Vieira AV, Lamaze C, Schmid SL., Control of EGF receptor signaling by clathrin-mediated endocytosis. // Science. 1996. Vol 274, p. 2086-2089.

117. Vitale G, Rybin V, Christoforidis S, Thornquist P. E, McCaffrey M, Stenmark H, Zerial M. Distinct Rab-binding domains mediate the interaction of Rabaptin5 with GTP-bound Rab5 and Rab5.//EMBO J. 1998. Vol 17, p. 1941-1951.

118. Wang D., Li Z., Messing E.M., Wu G. Activation of Ras/Erk pathway by a novel MET-interacting protein RanBPM. // J Biol Chem. 2002. Vol 27, p. 36216-36222.

119. Woodman Ph. Rab GTPases, directors of vesicle docking. // J. Biol. Chem. 2000. Vol 273, p. 22161-22164.

120. Yamashiro DJ, Maxfield FR. Acidification of endocytic compartments and the intracellular pathways of ligands and receptors. // J Cell Biochem. 1984. Vol 26, p. 231-246.

121. Zerial M, McBride H. Rab proteins as membrane organizers. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2001. Vol 2, p. 216-222.

122. Zhai P, He X, Liu J, Wakeham N, Zhu G, Li G, Tang J, Zhang XC. The interaction of the human GGA1 GAT domain with rabaptin-5 is mediated by residues on its three-helix bundle. // Biochemistry. 2003. Vol 42, p. 13901-13908.

123. Zhang X, He X, Fu XY, Chang Z. Varp is a Rab21 guanine nucleotide exchange factor and regulates endosome dynamics. // J Cell Sci. 2006. Vol 119, p. 1053-1062.

124. Zhu G, Zhai P, Liu J, Terzyan S, Li G, Zhang XC. Structural basis of Rab5-Rabaptin5 interaction in endocytosis. // Nat Struct Mol Biol. 2004. Vol 11, p. 975-983.

125. Zuk Patricia A. and Elferink Lisa A. Rabl 5 Differentially Regulates Early Endocytic Trafficking. // The Journal of Biological Chemistry. 2000. Vol. 275, p. 26754-26764.

126. Zuk Patricia A. and Elferink Lisa A. Rab 15 Mediates an Early Endocytic Event in Chinese Hamster Ovary Cells. The Journal of Biological Chemistry. 1999. Vol. 274, p. 2230322312.

127. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж, Рефф М., Роберте К., Уотсон Дж. Д. Молекулярная биология клетки: В 3-х т. 2-е изд. перераб. Т. 1.: Пер. с англ. М.: Мир, 1994.

128. Коробко Е.В, Коробо И.В, Киселев C.JI. Димеризационные свойства Рабаптина-5 и его изоформ. // Биохимия (Москва). 2006. Том 71, с. 1307-1311.