Характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации в период массовой вакцинопрофилактики

Журавлева, Юлия Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации в период массовой вакцинопрофилактики
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации в период массовой вакцинопрофилактики"

На краюх рукописи

ЖУРАВЛЕВА ЮЛИЯ НИКОЛАЕВНА

ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММОВ ВИРУСА КОРИ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ В ПЕРИОД МАССОВОЙ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ

(03.00.06- вирусология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в ГУ «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Научныв руководитель: доктор биологических наук

профессор Тихоном Нина Тимофеевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

профессор Народицкнй Борис Савельевич

доктор медицинских наук Маркушнн Станислав Георгиевич

Ведущая организация: Государственный научный центр вирусологии

и биотехнологии «Вектор»

оО

Защита диссертации состоится «ЛЗ» 2004 г, в ^

час. на заседании диссертационного совета Д 001.026.01 при Институте полиомиелита в вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова Российской Академии Медицинских Наук по адресу: 142782 Московская обл., Ленинский р-н, и.о. Институт полиомиелита.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита в вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН

Автореферат разослан «

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук О. А. Медведки и»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. До настоящего времени среди инфекционных болезней человека значительное место занимает корь. Повсеместное распространение этой инфекции с периодическими эпидемическими подъемами, высокая восприимчивость к ней человека, ставят корь в ряд болезней, наносящих значительный урон здоровью населения.

Впервые вопрос о ликвидации корн встал в 1975 го^, когда специалистами ВОЗ была разработана Расширенная Программа Иммунизации (РПИ), результатом которой, в частности, стало сокращение числа случаев кори на территориях, включившихся в выполнение РПИ. Позднее в 1991 году Панамериканская конференция выдвинула задачу элиминации кори яа американском континенте х 2000 году. Результатом усилий, предпринимаемых для достижения поставленной задачи, явилось искоренение кори в США, где с 2000 года не было зарегистрировано ни одного случая этого заболевания, вызванного эндемичными штаммами вируса кори.

Та же стратегия намечена г программе Всемирной Организации Здравоохранения «Здоровье для всех», провозгласившей в 1998 году в качестве одной из основных задач XXI века — глобальную ликвидацию корн к 2ОЮ-2О20гг. При этом Восточно-Средиземноморский и Европейский регионы должны сертифицировать элиминацию кори в 2007-2010 гг. Наличие в Россия высокоэффективной живой коревой вакцины позволило разработать Нацаоаальную программу ликвидации кори, которая была утверждена Приказом Минздрава России № 270 19.08.2002 года.

Один из важных пунктов программы ликвидации кора - подробная молекулярно-генетическая характеристика штаммов коревого вируса, которая помогает решить многие важные проблемы практической эпидемиологии и оценивать правильность стратегии вакцинации.

Анализ нуклеотидвой и аминокислотной последовательности наиболее изменчивых участков вирусного генома — СООН-концевого участка Ы-гена и полноразмерного Н-гена - лежит в основе генотишрования вируса кори, позволяющего разделять все штаммы вируса кори на группы и генотипы к осуществлять наблюдение за изменчивостью коревого вируса. В результате генотипирования становится возможным разделение местных и завозных случаев кори, слежение за циркуляцией штаммов вируса кори среди населения и сертификация прерывания трансмиссии местных штаммов коревого вируса на данной территории, что необходимо для контроля за выполнением программы

Анализ данных литературы показал, что число работ, посвященных изучению нуклеотидных последовательностей диких штаммов вируса кори, циркулирующих а России, с целью генотипирования ограничено и если за рубежом такие исследования уже вошли в повседневную практику, то в России имеются только разрозненные сведения о диких штаммах вируса кори, циркулирующих на территории Российское Федерации, что и послужило основанием для проведении исследований.

Цель исследовании: Молекулярно-генетическая характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих среди населения на территории Российской Федерации.

Задачи исследования:

1. Подбор праймеров и отработка условий проведения реакция обратной транскрипции и полимеразиой цепной реакции.

2. Определение нухлесгидной и аминокислотной последовательности СООН-концевого участка N-гена и полноразмерного Н-гена разных штаммов вируса кори.

3. Определение генотипов штаммов вируса кори, циркулирующих на территории России в разные годы вакцинопрофнлажтики.

Многоплановость исследований потребовала при выполнении работы комплекса с различными специалистами. В этой связи в диссертация нашли отражения результаты работ, проведенных совместно с вирусологами к эпидемиологами ГУ «МНЙИЭМ им Г.Н. Габричевского» МЗ РФ; сотрудниками лаборатории молекулярной диагностики и генно-инженерных конструкций Всероссийского Научно-исследовательского института сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН; сотрудниками Measles Virus Section, Center for Disease Control and Prevention (CDC), Atlanta.

Научная новизна работы: Впервые проведен анализ нуклеотидной и аминокислотной последовательности С ООН — концевого участка N-гена 21 штамма вируса кори и полноразмерного Н-гена 5 штаммов вируса кори, выделенных на территории Российской Федерации в период с 1988 по 2003 годы. Установлено, что в настоящее время наблюдается изменение генотипической картины штаммов вируса корн, циркулирующих в России. Если в 80-е годы на данной территории циркулировали штаммы генотипа А, который являлся эндемичным для России в довахшшальный период, то в последнее время циркуляция данного генотипа не зафиксирована. В настоящее время на территории Российское Федерации наиболее постоянной циркуляцией отличается вирус кори, принадлежащий к генотипу D4, который и является эндемичным для России в данный момент.

Выявлено, что для вируса кори, циркулирующего на территории России, характерно ежегодное увеличение количества мутаций, как на нуклеотидком, так и на

аминокислотном уровне, что свидетельствует о необходимости постоянного слежения за изменчивостью вируса корн.

Практическая значимость работы заключается в создания на основе разработанных специфических праймеров для СООН-концевого участка N-гена вируса кори к определении оптимальных условий проведения реакции обратной транскрипции и полнмеразной цепной реакции "Набора реагентов для выделения РНК и диагностики вируса корн методом обратной транскрипции и полнмеразной цепной реакции в одной пробирке" (ДВК-ПЦР) в соответствии с п.З.б. ГОСТ Р 15.013-94. Проект технических условий данного набора был рассмотрев на заседании комиссии по РИА • и ИФА-наборам Комитета по новой медицинской технике МЗ РФ 29.10,2002 года; получено разрешение на клинические испытания.

Материалы диссертации нашли отражение:

1. В депонировании одного из изученных штаммов вируса корн MVi/Moscow.Rus/05.99[D4j в Государственную коллекцию вирусов (ГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН», Москва, Россия). Данному штамму присвоен номер ПКВ Ks 2360.

2. В депонировании П-тн изученных штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации, в Международную коллекцию штаммов (CDC, Atlanta, США) и передачи нуклеотидных последовательностей данных штаммов в OenBank (NCBt, Bethesda, США).

На защиту диссертации выносятся следующие положения;

1. С помощью реакции обратной транскрщщии, полнмеразной цепной реакции и секвенирования установлено, что на территории России в период с 1988 по 2003 годы циркулировали штаммы вируса кори четырех генотипов: A, D4, D6 » HI.

2. В течение последних 15 лет на территории России произошли изменения в генотипическом пейзаже штаммов вируса кори. Циркуляция штаммов генотипа А, эндемичного для России в довакциналъкый период, в последние годы не зафиксирована. Наиболее постоянной циркуляцией отличается вирус кори, принадлежащий к генотипу D4, который и является эндемичным для России в настоящее время.

3. Для штаммов вируса кори генотипа D4, выделенных на территории Российской Федерации, характерно интенсивное ежегодное накопление мутаций на нуклеотядном и аминокислотном уровне, что свидетельствует о важности постоянвого слежения за дикими штаммами вируса кори с помощью методов молекулярной эпидемиологии.

Апробация работы. Апробация работы проведена на объединенном заседании лаборатории прикладной иммунохимии и лаборатории кори «МНИИ эпидемиологии я эпидемиологии им. Г,Н. Габричевского МЗ РФ».

Материалы диссертации доложены на совещании ЕРБ ВОЗ по вопросам специфической профилактики (февраль, 2002, Новосибирск), на совещании ЕРБ ВОЗ по ликвидации полиомиелита и кори (май, 2002г, Москва), на 8-ом съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (июнь, 2002г, Москва), на конференции, посвященной 80-летию госсанэпидслужбы (октябрь, 2002, Москва), на совещания Московского регионального центра по ликвидации полиомиелита и кори (октябрь, 2002, Москва), на 1-м конгрессе педиатров - инфекционистов (декабрь, 2002, Москва), на конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс я проблемы» (сентябрь, 2003, Санкт-Петербург), на заседании московского общества врачей педиатров и инфекционистов (сентябрь, 2003, Москва).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 5 -в центральной печати.

Объем н структура диссертации. Работа изложена на 159 машинописных страницах, включая 13 таблиц и 19 рисунков. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, содержащего 27 отечественных н 129 зарубежных источников, н приложения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выделение изолятов вируса кори из инфекционного материала проводили на базе лаборатории прикладной иммунохимии Московского научно-исследовательского института эпидемиологии н микробиологии имени Г.Н. Габричевского (табл.1).

Материалом для выделения вируса служили: взвесь мононуклеарных клеток, полученная из гепарвнизироваяной венозной крови больных корью, плазма и сыворотка крови.

Изоляты вируса кори культивировали на перевиваемых культурах клеток В-95а и Vero. Культуры клеток выращивали в среде RPMM640 с 5%-ми эмбриональной телячьей сыворотка при температуре 37°С. Инфицирование клеточных культур вирусом корн осуществляли путем внесения вируса непосредственно в питательную среду. Все манипуляции по получению вируссодержащей жидкости проводили в строго стерильных условиях.

При выделении вирусной РНК на базе лаборатории ВНИИ биотехнологии растений использовали набор препаратов для выделения РНК из плазмы н сыворотки крови «RNA-ExtraPhen», разработанный сотрудниками данной лаборатории на основе метода

Chomczynski P., 1987. Работа проводилась в соответствия с инструкцией, прилагаемой к набору.

Таблигш 1.

Описание проанализированных штаммов вируса кори.

Названия штаммов Лаборат Дата взятия Возраст Клеточная

орное клинического больного линия,

назв. материала, день использован

сыпи каядля

изоляции

вируса.

MVi/Moscow.RUS/9.88 "ГАГ" 26.02.88r, 1-й день 7лет L41

MVi/Moscow.RUS/14.88 "ИЛ" 1.04.88г. 6-й день 15 лег L41

MVi/Moscov.RUS/24.88 "БУК" ll.06.88r, 1-й день 18 лет Vero

MVi/Moscow.RUS/22,99/1 28.05.99т, 2-3 день 21 год В-95а

MV ¡/Moscow,RUS/22.99/2 "99-3" 28.05.99r, 2-3 день - В-95а

MVi/Moscow.RUS/23.99 "99-7" 9.06.99т, 2-3 день 18 лет В-95а

MVi/Moscow.RUS/9.00/1 "00-12" ЗО.ОЗ.ООг, 2-3 день 18 лет В-95а

MVi/Moscow.RUS/9.00/2 "00-13" 30.03.00т, 2-3 день / 19 лет В-95а

MVs/Moscow.RUS/12.01 "01-14" 19,03.01,2-3 ден* 20лег . Не адапт.

MVs/Moscow.RUS/27.01 "01-15" 6.06.01,2-3 день 17 лег В-95а

MVi/Moscow.RUS/29.01/2 "01-17' 19.06.01,2-3 день 23 года В-95а

MVi/Mosco w.RUS/13.03 "03-27" 24,03.03, 1-й день 14 лет В-95а

MVi/Astrakhan.RUS/12.03/1 "03-28" 21.03.03,1-й день 23 года В-95а

MVi/Astrakhan.RUS/12.03/2 "03-29" 22.03.03, 1-й день 26 лет В-95а

MVi/Moscow.RUS/13.03 "03-30" 28.03.03,4-й день 9 лет В-95а

MVi/Moscow.RUS/15.03 "03-35" 07.04.03,3-Й день 2 года В-95а

MVi/Moscow.RUS/17.03/1 "03-40" 23,04.03,1-й день 3 года В-95а

MVi/MoscowJUJS/I7.03/2 "03-4Г* 23.04.03,1-й день 17лет В-95а

MVi/Moscow.RUS/J 9.03 "03-43" 08.05.03,3-й день 14мес. В-95а

MVi/MoscowJtUS/20.03 "03-44" 14.05.03,3-й день 7 лет В-95а

MVt/Dagestan. RUS/20.03 "03-45" 14.05.03,3-й день 12 лет В-95а

На базе Measles Virus Section, Centers for Disease Control and Prevention (CDC), Atlanta выделение РНК проводалось методом одноступенчатой изоляции РНК кислотной

экстракцией с гуаящшнтиоционатом/фенолом/хлороформом.

Подученные в результате реакции обратной транскрипции хДНК использовали в полимеразной цепной реакции для амплификации СООН-конца N-гена и полноразмерного Н-гела.

Амплификацию СООН-конца N-гена проводили с оригинальными прайм ерами, разработанными в рамках данной работы, а также со стандартными праймерамя, предоставленными лабораторией CDC.

Амплификацию полноразмерного Н-гена вируса кори проводили по методике одяопробирочного варианта RT-PCR с праймерамя, разработанными и предоставленными сотрудниками лаборатории CDC.

Определение нуклеотидной последовательности ДНК на базе лаборатории ВНИИ биотехнологии растений осуществляли с использованием Су5 Dye Terminator Cycle Sequeosy Kit с последующим электрофоретическим анализом на приборе ALFexpress I. Ооределенис нуклеотидной последовательности ДНК на базе лаборатории CDC проводили с помощью прибора для сеизенированкя 3100 Genetic Anajyzer.

Полученные па базе лаборатории ВНИИ биотехнологии растений результаты обрабатывали с использованием программ ClustalW, DNasis. На базе лаборатории CDC результаты обрабатывали при помощи программы Genetics Computer Group Sequence Analysis Software Package, версии 10.1 (Accelrys Inc., Madison, WI). Филогенетический анализ был проведен с помощью программы PAUP, версии 4.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение генотипов вируса кори, проводимое в рамках данной работы, потребовало, прежде всего, адаптации известных методов анализа нуклеотидных последовательностей для использования их в России.

Подбор оригинальных праймеров для С ООН-концевого участка N-гена вируса кори проводили на базе лаборатории молекулярной диагностики и генно-инженерных конструкции Всероссийского Научно-исследовательского института

сельскохозяйственной биотехнологии, РАСХН. Участок был выбран в соответствии с рекомендациями Всемирной Организации Здравоохранения для молекулярное генетической характеристики штаммов вируса кори и их генотшшровамяя.

Для получения необходимого фрагмента были разработаны оригинальные праймеры MV-R1 и MV-F2; Me-N-Rl и Me-N-Fl, фланкирующие 685 и 54S нукяеотидов, соответственно, С-концевого участка гена нуклеопротенна. Для подбора праймеров использовали нуклеотидную последовательность С-кокцевого участка N-гена сдравочно-эталонного штамма вируса кори "Эдмонсток" (MEV, stram Edmonston, genotype А), полученную из GeoBank (accessio« number AF266288).

Специфичность созданных праймеров MV-R1 и MV-F2 проверяли экспериментально, при анализе панели гетерологнчвых вирусов. Для проверки спецнфичностн праймеров были использованы вирусы, имеющие близкое антигенное и генетическое родство с вирусом корн - вирус чумы собак (штаммы "ВНИИВВиМ-88" и "Snayder НШ"), чумы крупного рогатого скота (штамм "ЛГ") и чумы мелких жвачных (штамм "45g35"). Кроме того, были использованы вирус полиомиелита (штамм "Sabin") и вирус краснухи (штамм "Rubella"). Следует подчеркнуть, что РНК использованных вирусов были выделены из действующих вакцин н показали положительные результаты в реакциях со специфичными х данным вирусам нрайм ерами.

Специфичная амплификация с разработанными праймерамя MV-R1 и MV-P2 отмечалась только при наличии в пробе РНК вируса кори. РНК других вирусов не реагировали с коревыми праймерамн и давали отрицательный результат в предложенном тесте.

Для повышения специфичности метода, а также для увеличения концентрация продукга были разработаны внутренние праймеры Me-N-Rl и Me-N-Fl, в реакции с которыми получали фрагмент длиной 545 нуклеотидов. Использование праймеров Me-N-R1 и Me-N-Fl позволило также несколько сократить длину фрагмента, получаемого в реакции с основными праймерамн, что связано с особенностями технического оснащения, используемого для секвеннровашм.

Отработку условий и режимов проведения реакции с разработанными праймерамн осуществляли на лмэатах клеток, инфицированных штаммом "Эдмонстсн", с титром иифевдионности 104ТЦЦм.

Метод ПЦР зарекомендовал себя как высоко чувствительный и специфичный. Его применение позволяет проводить широкие скрнивнговые исследования в кратчайшие сроки. Предложенная нами схема проведения реакции обратной транскрипции н полкмеразной цепной реакции обладает высокой чувствительностью и специфичностью, а получаемые продукты реакции могут быть использованы для изучения яуклеотидной Последовательности вирусных кзолятов.

На базе лаборатория CDC проводили одиопробирочный вариант RT-PCR по стандартизированному протоколу.

Для целей генотипироваши был выбран и проанализирован участок длиной 456 пи, который располагается в геноме варусз кори с 1230 по 1685 нт и совпадает по расположению и длине с соответствующими участками справочно-эталоняых штаммов, имеющимися в GenBaak.

Ma аминокислотном уровне протяженность исследуемою участка составляет ]51 аминокислоту - с 380ам по ЗЗЗам и располагается непосредственно на СООН-конце N-белка (рис.1).

/iranslation="MATLLRSLALFKRNKDKPPITSCSGOAIRG]KHlIIVP]PGDSS31TRSRLL DRt.VRLIONPDVSGPKLTGAHGILSLFVESPGQLIQRITDDPDVSlRLLEVVQSDQSQSGL TFASRGTNMEDEADOYFSHDDPISSDQSRFGWFENKEISDIEVQDPEGFNMILGTILAQI WVU.AKAVTAPDTAADSEI,RRWIKYTQQRRVVGEFRLERKWLDVVRNRIACDLSLRRF M V AL1LD1KRTPGN KP Rl AEM 1С D IDT Y1V EAGLA SF S LT1KF G1ETM Y P ALGLH EFAGELS TLESLMN L Y QQMGET AP YM VILENSIQN KFS AGS YPLLWS YAMG VG V ELFIN SMGGLN F

ЩшШШШШ^

Рнс.1. Аминокислотная последовательность N-белка (MEV, strain Edmonston, genotype A, GenBank accession number AAF85675.1): ЦДУ^М - проанализированный участок.

Для секвенирования продуктов амплификации при выполнении данной работы использовали прибор для секвенирования A.L.F. швейцарской фирмы «Pharmacia» (автомагический секвенэтор ДНК с последующим электрофорезом в стандартных пластинах полиакриламидного геля) и прибор 3100 Genetic Analyzer {автоматический секвенатор ДНК с капиллярным гель-электрофорезом). Полученные при использовании обоих приборов нуклеотидные последовательности кДНК одного и того же штамма при сравнении между собой практически совпадали.

При проведении реакции с использованием разработанных в рамках данной работы праймеров MV-R1/MV-F2 и MV-N-R1 /MV-N-F1, фланкирующих 685 и 545 нуклеотмдов, соответственно, С-концевого участка гена нуклео протеи на вируса кори, было проанализировано П диких штаммов вируса кори, изолированных в 1988, 1999-2001 годах в Москве (рис. 2). По полученным данным, три штамма были отнесены к генотипу А, остальные 7 штаммов представляли обособленную группу, близкую к генотипу D4. Результаты проведенною филогенетического анализа последовательностей показали, что штаммы, отнесенные к генотипу А, изолировались ка территории западноевропейской части России в 1988-89 гг. (рис.2). Данные штаммы с лабораторными названиями Бук, Гаг и Ил практически идентичны штамму Эдмонетой, выделенному в 1954г и являющемуся слравочно-зталонным штаммом генотипа Л, Средний процент отличий штаммов от cttpaeoHuo-irrajюнного штамма на нуклеотидном уровне составляет 0.8%.

С- МУУМо»со\лКи»/24.88{Л} "ВиК" . . MVHItoMow.RuaA.a8tA] "ОАО"

I-МУ]/Мо»со*.Нив/14.6В{А) "Н-"

Е<1аояХа1к-М.и$Л/54[А]

- Уаоикк.С АЕЛ 2 ) ' К«* ¥йгк.Ц$А/94|В31

иЬг*уи!е.САШ»4[В21

Мопг«а1.САМЯ9р41

МШММСОЧГЛ(П/12.01 "01-14" MVVMoaGaw.Rusf9.0af2 "00-13"

HVIfMoscow.RiMfZ7.01 "01-16"

_I I

| I-

I-Н№ИИ

Г1_и

_I—

MWMoccow.Ruftf2i.0112 "(И-17"

-МУ1Л*0»с0*.Йи«/22.99/1 "99-3"

- НЫтониунЯишШМ "99-7"

-ШвоЬЛ15Л/89/1[[>31

-ЕиПвЬ«к.ТНА/93/1 [05] -Ра1аи.ВЬА/9Э[Ш]

-1ШпоЬ.ША/50.»1вт)

-ВгЫоИ1КК/74[В I {

- ^Ьапи«Ьигв.50 АЛ8/ЦМ |

- \'1сИ>г)*.Ли5Л<5.85[В71 - МаасЬм1ег/№ТШ0.94|(«)

"Вегке(еу.1>5А*ЧС1| - ЕТ/49.»7[С11

-ТоЬуО, ЛРК/84/К(С1) -£

-МУУУк4ог1а-ЛУ5/34.»1кЗ| -Нипап.СКШЗ/7[ Н11

СМШП£ЫШЕШ71 [Е] -МУа/Мя(1гИ.5РА/94 55РЕ [Г[

• М«гу!вп4ША/77|С1|

Рис. 2. Филогенетический анализ штаммов вируса корн, изолированных на территории России с 1988 ло 2001 годы (СЬияТА!, \У)

При анализе группы изолятов, отнесенных к генетической линии О, следует отметить, что все 7 штаммов объединяло 8 общих нуклеотидных замен (в позициях 1272 (С-Т); 1344 (С-Т); 1468 (А-б); 1479 (Т-С); 1591 (Т-С); 1641 (Т-С); 1662 (С-Т); 1670 (А-О); 1680 (А-О)) и 2 аминокислотные замены (455А и 52211). Отличия между штаммами внутри группы на нуклеотидном уровне составили 1,0 %, тогда как от наиболее близкого штамма МоШеа1.САМ/89, который является прототипом для генотипа Ш-, они отличались в среднем на 2,8 % по нуклеотидяому составу и на 2,6% по аминокислотному. Исхода из действующих критериев ВОЗ, такой высокий процент отличий позволял выделять их в отдельную группу, близкую к генотипу ЕМ.

Анализ нуклеотидных и аминокислотных последовательностей каждого штамма вируса кори, изолированного на территории России в 1999-2001 годах, отдельно показал ежегодное увеличение количества отличий штаммов, циркулирующих на территория России, от справочно-этаяонного штамма генотипа 04 (табл. 2,3).

Таблица 2.

Отличия диких штаммов, изолированных на территории России от справочно-эталонного штамма генотипа 04 - Мо1йгеа1-САМУ89 на нуклеотидном уровне.

Штамм Отличия проанализированных диких штаммов вируса кори от справочно- эталонного штамма генотипа ЕМ (МоШгеа1.СА№89) на нуклеотидном уровне

Количество замен %

М V ¡/Мо5соиг.Киз/22.99/1 "99-2" 11 2,4

МУШок:6\*.Яш!/22.99/2 "99-3" 13 2,9

МТОМозсоиг. КД1£/23.99 "99-7" 10 2,2

Ш|/Можо«.11д1$/9.<Ш "00-13" 1« 3,5

МУ5/Моэоош.Я«з/12.01 "01-14" 15 33

МтаМо5СО№.К<в/27.0) "01-15" 15 3,3

МУ^/МоэашЛизДО.01 /2 "01-1Г 14 зл

Таблица 3.

Отличия диких штаммов, изолированны»; на территории России от справочво-эталонного штамма генотипа D4 * Montreal .CAN/89 на аминокислотном уровне.

Штамм Отличия проанализированных диких штаммов вируса кори от справочно-эталонного штамма генотипа D4 (Montreal.СAN/89) на аминокислотном уровне

Количество замея %

М V i/Moscow. Rus/22.99/1 "99-2" 3 2,0

MVi/Moscow .Rus/22.99/2 "99-3" 4 2,6

MVi/Moscow.Rus/23,99 "99-7" 2 1.3

MVi/Moscow.Rus/9.00/2 "00-! 3" 5 3,2

MVs/Moscow.Rus/J 2.01 "01-14" 5 3,2

MVi/Moscow.Rus/27.01 "01-15" 6 3,9

MVi/Moscow.R.us/29.01 ti "01-17" 4 2,6

Так, если штаммы, изолированные на территории России в 1999 году отличались от справочно-эталонного штамма в среднем на 2,5% на нуклеошсном н на 1,96% на аминокислотном уровнях, то штаммы, изолированные в 2000-2001 годах отличались уже в среднем ва 3,3% на иуклеотндном н на 3 Д % на аминокислотном уровнях.

Таким образом, результаты анализа штаммов, изолированных на территории Российской Федерации в период с 1988 по 2001 год, при секвенировштя их на базе лаборатории ВНИИ биотехнологии растений, показали, что ранее на территории России циркулировал вирус кори, относящийся к генотипу А. В настоящее время вирус кори данного генотипа на территории России Re выделяется, а большинство изолированных за последние годы штаммов объединяются в группу, близкую к генотипу D4. В тоже время дм российских штаммов вируса кори характерно интенсивное ежегодное накопление мутаций.

Эти данные были практически полностью подтверждены результатами секвенирования штаммов, изолированных на территория России в 1999-2001 годах, на базе лаборатории CDC. При этом количество российских штаммов было расширено за счет добавления штаммов 2003 года {рис. 3),

Montreal.CAN 89 D4 MVi /Mo*cow.RUS/21.99

MV) /Moacow.RUS/25.01 MVi /MO*COW.RUS/23.01 MVi /Moscow.RUS/1 5.03 MVI /Moscow.RUS/17.03/1 MVi JMosccw.RUS/17.03/2 Щ MVi /Hhwcow.RUSJ19.03 MV) /Mo»eow.RUSf20.03 r- MVi /Aetrakhan.RUS/03 MVt /Moscew.RliS/03 MVI /Astrakhan. RUS/03 MVI /Moscew.RUS/19.99 Victoria AUS 99 d9 Patau. BLA 93 d5 ^angkok.THA 93 d5

Cfticago.USA 89 d3

Mancbes.UK 94 Vic. AU S 85 d7

14 minois. USA 99 d7

JohannesburaSOA 88 1 Mgw Jersey.USA 94 06

__3 m*«- di

i- new л

\ 2_ i—-— MVi/Dageetan.RUS/20.03 I MVt/Moscaw. RUS/13.03

MVP.UK 74

ED-WTA

— Yaourxte.CAE 33 M „New York USA 94 ЬЗ ï-Ibadan, NIE 97

Libreville. GAB 84 Ь2

__1-2- JM.USA 77

-1-WTF.DEU 90 c2

Tokyo. JPN 84k

-Braxator.DEU 71

-Madrid. SPA 94

Hunan.CHN 93 HI

_« MVI /Moscow.RUS/13.00/1

' MVi/Mo«cow.RUS/13.00/2 — Beijing.CHN 94 h2

-Berkeley.USA 63

Vtctoria.AUS 99 g3 -Amsterdam.NET 97

Рис. 3. Филогенетический аявлнз штаммов вируса кори, изолированны! иа территории Россия с 1999 по 2003 годы

Анализ результатов секвенирования игтаммов с лабораторными названиями 99-7, 99-3 и ОI -15 (MVÍ/Moscow.Ruí/22.99 fD4], MV i/Mosco w.Rus/19.99 [D4], MVi/Moscow, Rus/23.01 [D4], соответственно), показал, что процент отличив данных штаммов от сиравочно-этало иного штамма несколько снизился (табл.4,5).

В среднем, отличие всей группы штаммов, изолированных на территории России в период с 1999 по 2003 год, проанализированной на базе лаборатории CDC и отнесенной к генотипу D4, от справочио-эталонного штамма генотипа D4 составляет 2,5%, что полностью подтвердило принадлежность всех штаммов к генотипу D4 (рис.3).

Все пггаммы, изолированные на территории России и отнесенные к генотипу D4, как уже отмечалось ранее, имеют общее нуклеотидные замены (а позициях 1272 (С-Т); 1344 (С-Т); 1468 (A-G); 1479 (Т-С); 1591 (Т-С); 1641 (Т-С); 1662 (С-Т); 1670 (A-G)), что объединяет штаммы, изолированные на территории Росши, в одну группу.

Если рассматривать процент отличия каждого штамма отдельно, то видно, что штаммы, изолированные на территории России в 1999г и проанализированные на базе лаборатории CDC, отличаются от справочио-эталонного штамма генотипа D4 на 1,97%.

Штаммы, циркулировавшие на территории в 2001-2003гг, отличаются от сиравочно-эталонного штамма в среднем на 2,25%.

Сравнительный анализ количества иуклеотидкых замен для штаммов, изолированных на территория России в 1999, 200) и 2003 годах (табл.4) показывает ежегодное увеличение отличий диких штаммов, циркулирующих из территории России, от справочко-эталонного штамма. Данный факт свидетельствует о продолжении накоплений изменений в геноме вируса кори, циркулирующего на территории Российской Федерации,

Таблица 4.

Отличия диких ¡шаммов, изолированных на территории России от справочио-эталонного штамма генотипа D4 - Montreal.С AN/89 на нуклеотидном уровне.

Штамм Отличия проанализированных диких штаммов вируса кори от спрявочно- этаяонного штамма генотипа D4 (Montreal.CAN/89) на нуклеотидном уровне

Количество замен %

MV ¡/Moscow.Rus/22.99 [D4] 9 1.97

MVi/Moscow.Rus/19.99 [D4J 9 1,97

MVi/Moscow.Rus/23.01 [D4] 10 2,19

MVi/Moscow.Rus/13.03 /1 [D4] 11 2,41

MVi/Astrakhan.Rus/12.03/1 [D4] 12 2,63

MVi/ Astrakhan.Rus/12,03/2 [D4} 12 2,63

MVi/Moscow.Rus/1 5.03 [D4] 12 2,63

MVi/Moscow.Rus/17.03/1 [D4] 11 2,41

MVi/Moscow.Rus/17.03/2 [D4] 11 2,41

MVi/Moscow.Rus/19.03 [D4] 12 2,63

MVi/Moscow.Rus/20.03 [D4] 12 2,63

При анализе аминокислотной последовательности исследуемого участка СООН-конца Ы-белка С помощью программы ГОЫЬ, для всех штаммов, отнесенных к генотипу 04 и изолированных в разные годы (1999, 2001 н 2003) были выявлены общие аминокислотные замены (455А и 522Л) (табл.5).

Таблица 5.

Аминокислотные замены в геномах штаммов вируса кори генотипа D4, изолированных на территории России (CDC, 2003).

Генотип Jfe изм нуклеотида Позиция изм ам остатка Названия штаммов

D4 1468 (A-G) 455 (Т-А) Все штаммы

1496 (G-C) 464 (R-T) MVi/Mosco w.Rus/l9.03 [D4]; MVi/Moscow.Rws/20.03 [D4]; MVi/Moscow.Rus/ 17.03/2 fD4]; MV i/Moscow.Rusf 17.03/1 [WJ; MVi/Moscow.Rus/15.03 [D4]; MVi/ Astrakhan.Rus/12.03/2 tD4); MVi/Astrakhan.Rus/l2.03/1 [D4]; MVi/Moscow.Rus/I3.03 П [D4]; M Vs/Moscow.Rus/23.01 [D4]

1648 (T-C) 518 (V-A) MVi/Moscow.Rus/19,03 [D4]; MVi/Moscow.Rus/20.03 [D4]; MVi/MoscowJUis/17.03/i [D4J; MWMoscow.Rus/17.03/2 ID4); MVi/Moscow.Rus/15.03 [D4]; MVi/Moscow.Rus/13.03/1 [D4]; MVi/Astrakhaa.Rus/12.03/1 fD4]; MVi/ Astrakhan Л usf 12.03/2[D4]

1670 (A-G) 522 (K-R) Все штаммы

Если рассматривать количество аминокислотных замен для каждого российского штамма генотипа Е>4 в процентном соотношении, то наблюдается совершенно четкое

ежегодное увеличение количества мутаций у российских штаммов вируса кори генотипа 04 (табл.6).

Таблица б.

Отличия диких штаммов, изолированных на территории России от снравочно-эталокного штамма генотипа D4 - MontreaI.CAN/89 на аминокислотном уровне.

Штамм Отличия проанализированных диких штаммов вируса кори от енравочно-эталонного штамма генотипа D4 (Montteal .CAN/89) на аминокислотном уровне

Количество замен %

MVi/Moscow.Rus/22.99 [D4] 2 0,65

MVi/Mosccw.Rus/19,99 [D4] 2 0,65

MVi/Moscow, Rus/23.01 [D4] 3 1,97

MVi/Moscow.Rus/13,03/1 [D4] 4 2,63

MVi/Astrakhan.Rus/12.03/1 [D4] 4 2,63

MVi/ Astrakhan.Rus/12.03/2 [D4] 4 2,63

MVi/Moscow.Rus/15.03 [D4] 4 2,63

MVi/Moscow.Ras/l 7.03/1 [D4] 4 2,63

MVi/Moscow.Rus/17.03/2 [D4] 4 2,63

MVi/Moscow.Rus/t 9.03 [D4] 4 2,63

MVi/Moscow. Rus/20.03 [D4] 4 2,63

Таким образом, анализ нуклеотндных к аминокислотных замен у штаммов вируса кори, изолированных на территории России и отнесенных к генопшу 04, показал наличие общих иуклеотидных и аминокислотных замен, которые сохраняются на протяжении длительного времени, а так же постоянное накопление новых мутаций. И даже, несмотря иа то, что при анализе нуклеотндных замен с использованием капиллярного гель-электрофореза, процент отличия штаммов генотипа Е>4, Изолированных на территории России, от справочно-эталонного штамма, несколько снизился, данный процент остается очень высоким. Анализируя четкое ежегодное нарастание нуклеотндных замен у вируса кори, циркулирующего на территории России, нельзя исключить, что в будущем это может привести к выделению российских штаммов коревого вируса в отдельный генотип.

Два штамма, М1/¡/МозсолуЛШЗ/ 13,03 [Об] и МтаОаце81ап.|Щ$/20.03 {Об], изолированные в 2003 году ва территории Москвы и Дагестана, являются представителями генотипа Ш (ряс. 3).

Несмотря ва различные мест изоляции, анализ нухлеотидиых н аминокислотных последовательностей двух штаммов генотипа М выявил общие иуклеотндные замены (в позициях 1335 (<5-А); 1455 (Т-О); 1538 (С-А); ¡677 (ТС); 1679 <С-Т» и общие аминокислотные замены (в позициях 450Е и 578 N5, отличающие их от сиравочно-эталонного штамма генотипа ЕЙ. Среднее отлнчне данных штаммов от справочно-эгалоиного штамма генотипа Г>б составляет 1,42% на нуклеотидном уровне я 2,62% на аминокислотном.

Штаммы МУь<Мо$соуу.лив/13,00/1 н МУШокотйгЛиЗЛЗ.ОО/г, изолированные на территории Москвы в 2001 году, относятся к генотипу №.

Представители генотипа Ш никогда ранее не регистрировались на территории России. Штаммы МТОМоза^.ШБЛ 3.00/1 н МУШози^.ЯиЗ/! 3.00/2 бьши изолированы от больных постудивших в 14 отделение 2-й Клинической инфекционной больницы г. Москвы в один день. В связи с тем, что данные случаи кори вызваны представителями одного генотипа, нехарактерного для России, и зарегистрированы в один и тог же день в одном районе, можно говорить об общем источнике инфекции для этих двух случаев,

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что в РФ в последние годы интенсивно циркулируют штаммы вируса мри ветви Р. Генотип А, который являлся представителем довакиннального периода, более не встречается на территории западноевропейской частя России, тогда как штаммы, относящиеся к генотипу Ш имеют в настоящее время широкое распространение, н, скорее всего, данный генотмн является эндемичным для России.

Для подтверждения принадлежности проанализированных в работе штаммов к определенным генотипам было проведено секвенироваиие полноразмерного Н-геяа пяти штаммов, принадлежащих по результатам секвенироваиия С-концевого участка К-гена к разным генотипам: МУШо8Сои'.1ШЗ/13.03/1 [1)4]; МУУАгЛгакЬап.ЙШЛг.ОЗ/] [ЕМ); МУ1/А51ткЫш,1Ш8/12.03/2 [ЕМ]; мтаМозсоиг.ЛШ!3.00/2 [Н1]; МУУМозсо*,Ки5/20.03 рб].

Нуклеощдные последовательности Н-генов изученных штаммов сравнивали с нуклеотндной последовательностью Н-генов справочно-эталошшх штаммов всех известных на сегодняшний день генотипов.

Результаты генотипирования штаммов, изолированных на территории Россия в 2000 и 2003 годах, по Н-гену полностью подтвердили результаты генотипирования, полученные при анализе нуклеотндных и аминокислотных последовательностей ССЮН-конда N-гена данных штаммов (рис.4).

Мировой опыт показал, что изучение изменений вируса корн на нуклеотидном уровне с применением таких методов молекулярной биологии, как реакция обратной транскрипции, полимеразная цепная реакция, секвенированне, является важнейшей составной частью программ по надзору за корью с целью ее элиминаций. Использование методов молекулярной биологии для характеристики коревого вируса позволило значительно расширить наши знания об изменчивости вируса кори, а также о его эпидемиологии. Сравнительный анализ полученных данных лежит в основе генотипирования вируса кори и помогает устанавливать источники коревой инфекции и прослеживать связь между различными случаями или вспышками корн.

Постоянное наблюдение за всеми изменениями вирусного генома на определенной территории в течение длительного времени позволяет документировать прерывание трансмиссии эндемичного генотипа вируса кори на данной территории и является одним из основных методов оценки эффективности программ элиминации кори. К настоящему времени благодаря эффективному взаимодействию методов молекулярной биологин и стандартных методов эпидемиологии в некоторых странах мира циркуляция эндемичного коревого вируса полностью прекращена.

Изучение молекулярно-генетической характеристики 21 штамма вируса кори, изолированных на территории России в период с 1988 по 2003 годы, позволило сопоставить их со штаммами, циркулирующими в других странах.

Генотипы D4 и D6, распространенные на территории России в настоящее время, относятся к группе D - одной из наиболее разнообразных группа, которая насчитывает на сегодняшний день 9 генотипов.

Представители генотипа D4 наиболее часто встречаются в Австралия, Азии и Южной Африке. Необходимо обратить внимание, что на территории России вирус, относящиеся к группе D, был впервые обнаружен только в 90-х годах, о чем свидетельствуют результаты данной работы и анализ данных литературы.

Для выяснения источника генотипа D4 для России было проведено сравнение нуклеотидных последовательностей штаммов, изученных в данной работе, с нуклеотидаыми последовательностями всех представителей генотипа D4, имеющихся в базе данных CDC.

I MVí/Astrakhan. RUS/12.03/1 I MWAstrakhan. R US/12.03/2 MVI/Moeccw.RUS/13.03/1

Montreal, CAN 89 04 - Manches. UNK 95 D8 ~ (lln.USA99D7

• Vic.AUS 85 D7

Bankok.THA 93 D5

Palau.BLA 93 D5 — Chicago.USA 89 D3

Vic.AUS 99 D9

Bristol.UNK 74 MVP D1

< Johann.SOA 88 D2 1

I New Jersey .US A 94 D6 19

MVl/D*g»«t»n.RUS/20.03

NY. USA 94 B3

Ibadan.NtE 97 83

Yaounde.CAM 93 B1

Ubrevllte.GAB 84 B2

Ed-WlA

Leningrad-16

Madrid.SPA 94 SSPE F

rJh

_12

JM.USA 77 C2

■ WTF.DEU 92 C2

Braxator.Deu 71E

Tokyo. JW 84K C1

— VreAus 9&-g3 ■ Am8twdam.NET 97 G2

Berkeley. USA 83 G1 10

Hunan.CHN 93 HI

MVUMotcow.RUS/13.00/2

Beijing.CHN 94 H2

10 changes

Pec. 4. Филогенетический анализ штяммои вирусж кори, изолированных на территории Poetan в 200ft я 2003 годи (Н-кя).

Сравнение показало, что наиболее близкими к российским штаммам являются штаммы, вызвавшие вспышку в Пенсильвании (США) и Массачусетсе (США) и импортированные на территорию США из Пакистана, что говорит о том, что источником генотипа D4 для России являются страны Азии. В целом, из-за политической и экономической ситуации на данной территории, страны Азии до сих пор остаются полностью не изученными в плане генотипирования вируса кори. Пакистан не имеет границы с Россией, но, например, имеет границы с Афганистаном, с которым Россия очень длительное время находилась в состоянии войны.

Учитывая взаимоотношения стран Азии между собой, отсутствие условий для вакцинации людей, проживающих в данных странах, а также потоки беженцев из стран Азии в Россию, которые не прекращаются и в настоящее время, можно утверждать, что именно Азия была и остается главным источником генотипа D4 д ля России (рис.5).

Молекулярво-генеткческая характеристика большого числа штаммов, выделенных в 2003 году, позволила сделать заключение о том, что вирусы генотипа D4 в последнее время постоянно циркулируют на территории России и их трансмиссия не прерывается в течение длительного времени. Как показывают исследования, для штаммов генотипа D4, циркулирующих на территории России, характерно наличие определенных изменений в геноме, которые сохраняются на протяжении всего щученного периода (с 1999 ло 2003 годы) и объединяют российские штаммы генотипа D4 в одну группу, Таким образом, можно говорить о том, что данный генотшг, в настоящий момент является для Российской Федерации эндемичным.

Генотип D6 является доминирующим западноевропейским вариантом. Вирусы генотипа D6 являлись и являются причиной единичных случаев и вспышек на территории России. Постоянная циркуляция вирусов данного генотипа на территории России не зафиксирована. Вирусы генотипа D6 были зафиксированы на территории России лишь однажды, в Новосибирске в 1997 году. Другие сведения о вспышках кори, вызванной вирусом генотипа D6, в литературе не встречались.

Анализ полученных в работе данных и сопоставление их С данными литературы показывают, что генотип D6 нельзя назвать эндемичным для Российской Федерации. Наиболее распространенным ареалом данного генотипа являются Западная Европа и Турция (рис.5). Сравнение результатов секвенирования штаммов MVi/Moscow.RUS/13.03 [Dfj] и MVi/Dagestan.RUS/20.03 [D6] с результатами секвенирования всех представителей генотипа D6, имеющимися в базе данных С DC, показало, что наиболее близкими к российским штаммам являются штаммы, вызвавшие вспышку в Буэнос-Айресе (США)

в1998 голу и которые были импортированы, по предположению авторов, из Европы или Бразилии.

Вирусы, принадлежите к генотипу Н1, доминируют на территории Юго-Восточной Азии. По нашим данным, а также по данным, полученным при анализе литературы, представители генотипа Н1 были изолированы на территории России лишь однажды. Изоляты МУ|/Мозооуу.1Ш8А3.00/1 и МУШсйсош.КШ/! 3.00/2 полностью идентичны между собой, а при сравнении с представителями генотипа Н! базы данных С1)С показывают наибольшее сходство со штаммами, изолированными на территории Монголии и Китая.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что циркуляция вируса кори генотипа А, изолировавшегося на территории России до 90-х годов, в настоящее время прервана. В последние годы на территории России циркулирует вирус коря, принадлежащий к генотипу 04. Анализ С ООН-концевой части И-гена показал, что для представителей данного генотипа, изолированных на территории России, характерно наличие общих нуклеотндных в аминокислотных замен, которые сохраняются на протяжении длительного времени, а также постоянное интенсивное накопление новых мутаций. Анализ полворазмерного Н-гена представителей данного генотипа, изолированных на территории России в ,2003 году, также выявил наличие общих нуклеотидных и аминокислотных замен.

Помимо штаммов вируса кори генотипа А и ЕМ, в 2003 году на территории России были зарегистрированы случаи корн, вызванные представителями других генотипов - М и Щ. Анализ полноразмерного Н-гена штаммов, отнесенных к генотипам ЕМ> и Н1, подтвердил их принадлежность к данным генотипам,

Важно отметить, что штаммы, циркулирующие на территории России и принадлежащие к одному генотипу, имеют характерные изменения в геноме, отличающие их от справочно-зталонвых штаммов и в то же время объединяющие их между собой. При этом число мутаций с годами накапливается.

Полученные данные свидетельствуют о важности проведенных исследований прежде всего потому, что генотапироваыие штаммов вируса корн, изолируемых на определенной территории в течение длительного времени, является одним из основных методов оценки эффективности программ элиминации кори, так как позволяет документировать прерывание трансмиссии эндемичного генотвпа вируса кори на данной территории и разграничивать местные и завозные случаи кори.

Спс.5, Циркуляции штаммол вируса (сори.

'"'*•..- границы Гасеийской Федерации г границы прилежащих государст

выводы.

1. Разработаны оригинальные праймерьп МУ-К1/МУ-Р2 и МУ-К-РЛ/МУ-К-П, фланкирующие 685 и 545 нуклеотидов, соответственно, С-концевого участка гена иуклеолротеина вируса корн, используемого при генотщшрованни, а также отработаны условия для проведения реакции обратной транскрипции и полимеразиой цепной реакции ори использовании данных прайм еров. Предложена схема проведения реакций, продемонстрирована ее высокая чувствительность н специфичность. Показано, что получаемые продукты реакции могут быть использованы для изучения иуклеотидной и аминокислотной последовательностей вирусных изолятов.

2. Впервые проведен анализ нуклеотндвой и аминокислотной последовательности СООН-концевой части №гена с целью геиотипярования 21 штамма вируса корн, циркулировавших на территории России в период с 1988 по 2003 годы. Установлено, что в 1988 году на территории России циркулировали штаммы вируса корн, относящиеся к генотипу А и близкие по молекулярно-генетическим характеристикам к штамму Эдмонстан. В период с 1999 года по 2003 год на территории России выделен вирус корт трех генотипов 1)4, ЕК> н Н1.

3. Анализ иуклеотидной и аминокислотной последовательности полноразмерного Н-гена штаммов вируса корт, изолированных на территории России в период с 1999 по 2003 подтвердил принадлежность вируса корн к генотипам 1)4,1)6 и Н1, установленным при секвеняровании ССЮН-конца И-гена.

4. Результаты генотипнровання штаммов вируса кори, изолированных на территории Российской Федерации в разные годы вакцинопрофялаетяхи, выявили изменения генотщгической картины вируса кори, циркулирующего на данной территории. Циркулировавший ранее на территории России вирус, принадлежащий к генотипу А, в последнее время не регистрируется, а его место занял вирус генотипа 1)4. Анализ частоты обнаружения штаммов вируса корт разных генотипов позволяет предположить, что в настоящий момент генотип Р4 является эндемичным для России. Вирусы других генотипов, вызывающие на территории России локальные случаи кори, по-видимому, являются импортированными из других стран.

5. Определение иуклеотидной и аминокислотной последовательности двух наиболее вариабельных участков генома вируса кори (СООН-конца »-гена и полноразмерного Н-гена) свидетельствует об усилившейся в последнее десятилетие изменчивости вируса корн. Полученные данные говорят о важности изучения

молехулярно - генетической и биологической характеристики штаммов вируса кори в период реализации программ элиминации кори в мире.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Луговиев В.Ю., Журавлева Ю.Н., Воронина О.Л., Лунин В.Г., Наумова МА, Мамаева Т.А., Тихонова Н.Т. Разработка однопробарочного варианта RT-PCR для идентификации генома вируса кори И Материалы VIII съезда всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 2002, стр.296-297.

2. Тихонова Н.Т., Герасимова АХ., Чава 0,0., Мамаева ТА., Наумова М.А., Журавлева ГО.Н. Совершенствование системы эпидвадаора за корью на этапе ее элиминации// «Эпидемиология и Вакдинонрофилактяка» М, 2003, № 2, стр.5.

3. Журавлева Ю.Н. Генетический анализ диких иггаммов вируса корн, изолированных в европейской части РФ // Материалы Ш молодежной научной конференции ((Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии»; Москва, 10 апреля 2003год, стр. 28-29.

4. Журавлева Ю.Н., Мамаева Т.М., Наумова М.А., Тихонова Н.Т. Молекулярно-генетическая характеристика штаммов вируса кори И «Эпидемиология и инфекционные болезни». 2003, №3, стр. 42 - 45.

5. Журавлева Ю.Н, Луговцев В.Ю., Воронина О.Л., Шилов И.А., Ванюшева О.В., Лунин В.Г., Наумова М.А., Мамаева Т.А., Тихонова Н.Т. Генетический анализ диких штаммов вируса кори, изолированных и Европейской части РФ // «Вопросы вирусологии»; 48(4); июль-август 2003 г.; стр. 29-35.

6. Тихонова Н.Т., Журавлева Ю.Н., Мамаева ТЛ., Наумова М.А., Нестерина Л.Ф., Бурчик М.А., Герасимова А.Г., Савина A.B. Генотипирование штаммов вируса кори, циркулирующих в России // Материалы международного конгресса «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы», 4-5 сентября 2003 г., стр. 13.

7. Журавлева Ю.Н., Луговцев В.Ю., Воронина О.Л., Лунин В.Г., Наумова М.А., Мамаева Т.А., Тихонова Н.Т. Тест-система на основе однопробврочного варианта ОТ-ПЦР для идентификации генома вируса корн // «ЖМЭИ», 2003, № б, стр. 53-56.

За помощь в выполнении работы автор выражает глубокую благодарность сотруднику Института им. Баха РАН, кандидату биологических наук Ворониной Ольге Львовне.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник*» ПД № 1-00007 от 23.06.2000 г. Подписано в печать 18,11.2003 Тираж 100 экз» Усл. печ. л. 1,6

Печать авторефератов 730-47-74

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Журавлева, Юлия Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.3.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Структура вируса кори и функциональная активность вирусных белков.10.

ГЛАВА 2. Геном вируса кори и генотипирование диких штаммов коревого вируса.

ГЛАВА 3. Географическое распространение штаммов вируса кори разных генотипов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 4. Материалы и методы исследования.46.

ГЛАВА 5. Подбор праймеров и условий для проведения реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции.

ГЛАВА 6. Анализ нуклеотидной последовательности СООН-концевого участка N-гена штаммов вируса кори, изолированных на территории России.66.

ГЛАВА 7. Анализ нуклеотидной последовательности полноразмерного

Н-гена штаммов вируса кори, изолированных на территории России.89.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.НО

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации в период массовой вакцинопрофилактики"

До настоящего времени среди инфекционных болезней человека значительное место занимает корь. Это заболевание имеет огромное социально-экономическое значение на протяжении всей истории цивилизации. Повсеместное распространение этой инфекции с периодическими эпидемическими подъемами, высокая восприимчивость к ней человека ставят корь в ряд тех болезней, которые наносят значительный урон здоровью населения.

Реальная возможность борьбы с корью появилась в 1954 году, когда J. Enders и Т. Peebls (75) получили первый штамм вируса кори, ставший родоначальником многих вакцинных и диагностических препаратов. Со времени создания эффективных вакцин против кори, это заболевание стало контролируемым в некоторых странах мира (43,125), но, тем не менее, несмотря на явные успехи в борьбе с корью, достигнутые с помощью вакцинации, корь остается серьезной проблемой для многих стран.

Впервые вопрос о ликвидации кори встал в 1975 году, когда специалистами ВОЗ была разработана Расширенная Программа Иммунизации (РПИ), результатом которой, в частности, стало сокращение числа случаев кори на территориях, включившихся в выполнение РПИ. Позднее в 1991 году Панамериканская конференция выдвинула задачу элиминации кори на американском континенте к 2000 году. Результатом усилий, предпринимаемых для достижения поставленной задачи, явилось искоренение кори в Америке, где с 2000 года не было зарегистрировано ни одного случая этого заболевания, вызванного эндемичными штаммами вируса кори (19, 43).

Та же стратегия намечена в программе Всемирной Организации Здравоохранения «Здоровье для всех», провозгласившей в 1998 году в качестве одной из основных задач XXI века - глобальную ликвидацию кори к 2010 - 2020 гг. При этом Восточно-Средиземноморский и Европейский регионы должны сертифицировать элиминацию кори в 2007-2010 гг. (8).

Наличие в России высокоэффективной живой коревой вакцины позволило разработать Национальную программу ликвидации кори, утвержденную Приказом Минздрава России от 19.08.2002 года № 270. Одним из важных пунктов программы является подробная молекулярно-генетическая характеристика штаммов вируса кори с целью слежения за их циркуляцией среди населения на более современном уровне, так как молекулярно-генетические методы позволяют проводить оценку эпидемиологических связей между выделяемыми штаммами вируса кори и изучать пути их трансмиссии.

В мировом плане, изучение вируса кори на молекулярно - генетическом уровне позволило выявить существование различных генетических групп коревого вируса и соотнести эти группы с ареалами распространения, что дало возможность классифицировать все получаемые изоляты вируса кори. Это явилось предпосылкой для создания стандартной номенклатуры описания генетической характеристики диких штаммов вируса кори и его генотипирования. В 1998 г. все известные штаммы вируса кори были подразделены на 15 генотипов, которые объединены в 8 групп:А, В, С, D, Е, F, G, Н (151). Генотипы различаются по количеству нуклеотидных замен на участке генома коревого вируса, состоящего из 450 нуклеотидов, кодирующих СООН - конец N-белка.

К 2001 году, с момента первой публикации стандартной номенклатуры, применяемой для классификации диких штаммов вируса кори (1998), количество охарактеризованных и изученных генотипов возросло с 15 до 22, что свидетельствует не только о расширении регионов изучения, но и о постоянном накоплении мутаций в геноме коревого вируса (152, 153).

Анализ данных литературы демонстрирует усилившееся в последние годы внимание исследователей к характеристике диких штаммов вируса кори, циркулирующих в настоящее время в разных географических регионах. При этом авторы преследуют несколько целей: во-первых, осуществление наблюдения за изменчивостью вируса кори и определение ее эпидемиологической значимости; во-вторых, генотипирование вируса кори, определение местных и завозных случаев кори и прерывание трансмиссии эндемичных штаммов коревого вируса для контроля выполнения программы элиминации кори на данных территориях.

Необходимо заметить, что если за рубежом такие исследования уже вошли в повседневную практику, то в России имеются только разрозненные данные о генотипах диких штаммах вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации, тогда как только постоянное наблюдение за всеми изменениями вирусного генома на определенной территории в течение длительного времени позволяет документировать прерывание трансмиссии эндемичного генотипа вируса кори на данной территории и является одним из основных методов оценки эффективности выполнения программы элиминации кори.

В связи с изложенным ЦЕЛЬЮ настоящей работы явилась молекулярно-генетическая характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих среди населения на территории Российской Федерации.

В соответствии с поставленной целью в ЗАДАЧИ исследования входило:

1. Подбор праймеров и отработка условий проведения реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции.

2. Определение нуклеотидной и аминокислотной последовательности СООН-концевого участка N-гена и полноразмерного Н-гена разных штаммов вируса кори.

3. Определение генотипов штаммов вируса кори, циркулирующих на территории России в разные годы вакцинопрофиоактики.

Многоплановость исследований потребовала при выполнении работы комплекса с различными специалистами. В этой связи в диссертации нашли отражения результаты работ, проведенных совместно с вирусологами и эпидемиологами ГУ «МНИИЭМ им Г.Н. Габричевского» МЗ РФ; с сотрудниками лаборатории молекулярной диагностики и генно-инженерных конструкций Всероссийского Научно-исследовательского института сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН; с сотрудниками Measles Virus Section, Centers for Disease Control and Prevention (CDC), Atlanta.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ:

Впервые проведен анализ нуклеотидной и аминокислотной последовательности СООН - концевого участка N-гена 21 штамма вируса кори и полноразмерного Н-гена 5 штаммов вируса кори, выделенных на территории Российской Федерации в период с 1988 по 2003 годы. Установлено, что в настоящее время наблюдается изменение генотипической картины штаммов вируса кори, циркулирующих на территории России. Если в 80-е годы на данной территории циркулировали штаммы генотипа А, который являлся эндемичным для России в довакцинальный период, то в последнее время циркуляция данного генотипа не зафиксирована. В настоящее время на территории Российской Федерации наиболее постоянной циркуляцией отличается вирус кори, принадлежащий к генотипу D4, который и является эндемичным для России в данный момент.

Выявлено, что для вируса кори, циркулирующего на территории России характерно ежегодное увеличение количества мутаций, как на нуклеотидном, так и на аминокислотном уровне, что свидетельствует о необходимости постоянного слежения за изменчивостью вируса кори.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ заключается в создании на основе разработанных специфических праймеров для СООН-концевого участка N-гена вируса кори и определении оптимальных условий проведения реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции "Набора реагентов для выделения РНК и диагностики вируса кори методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в одной пробирке" (ДВК-ПЦР) в соответствии с п.3.6. ГОСТ Р15.013-94. Проект технических условий данного набора был представлен и рассмотрен на заседании комиссии по РИА - и ИФА-наборам Комитета по новой медицинской технике МЗ РФ 20.10.2002 года.

МАТЕРИАЛЫ ДИССЕРТАЦИИ НАШЛИ ОТРАЖЕНИЕ:

1. В депонировании одного из изученных штаммов вируса кори MVi/Moscow.Rus/05.99[D4] в Государственную коллекцию вирусов (ГУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН», Москва, Россия). Данному штамму присвоен номер ГКВ № 2360.

2. В депонировании 11-ти изученных штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации, в Международную коллекцию штаммов (CDC, Atlanta, США) и передачи нуклеотидных последовательностей данных штаммов в Genebank (NCBI, Bethesda, США).

НА ЗАЩИТУ ДИССЕРТАЦИИ ВЫНОСЯТСЯ СЛЕДУЮЩИЕ

ПОЛОЖЕНИЯ:

1. С помощью реакции обратной транскрипции, полимеразной цепной реакции и секвенирования установлено, что на территории России в период с 1988 по 2003 годы циркулировали штаммы вируса кори четырех генотипов: A, D4, D6 и HI.

2. В течение последних 15 лет на территории России произошли изменения в генотипическом пейзаже штаммов вируса кори. Циркуляция штаммов генотипа А, эндемичного для России в довакцинальный период, в последние годы не зафиксирована. Наиболее постоянной циркуляцией отличается вирус кори, принадлежащий к генотипу D4, который и является эндемичным для России в настоящее время.

Для штаммов вируса кори генотипа D4, выделенных на территории Российской Федерации характерно интенсивное ежегодное накопление мутаций на нуклеотидном и аминокислотном уровне, что свидетельствует о важности постоянного слежения за дикими штаммами вируса кори с помощью методов молекулярной эпидемиологии.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Журавлева, Юлия Николаевна

110 выводы.

1. Разработаны оригинальные праймеры: MV-R1/MV-F2 и MV-N-R1/MV-N-F1, фланкирующие 685 и 545 нуклеотидов (соответственно) С-концевого участка гена нуклеопротеина вируса кори, используемого при генотипировании, а также отработаны условия для проведения реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции при использовании данных праймеров. Предложена схема проведения реакций, продемонстрирована ее высокая чувствительность и специфичность. Показано, что получаемые продукты реакции могут быть использованы для изучения нуклеотидной и аминокислотной последовательностей вирусных изолятов.

2. Впервые проведен анализ нуклеотидной и аминокислотной последовательности СООН-концевой части N-гена с целью генотипирования 21 штамма вируса кори, циркулировавших на территории России в период с 1988 по 2003 годы. Установлено, что в 1988 году на территории России циркулировали штаммы вируса кори, относящиеся к генотипу А и близкие по молекулярно-генетическим характеристикам к штамму Эдмонстон. В период с 1999 года по 2003 год на территории России выделен вирус кори трех генотипов D4, D6 и Н1.

3. Анализ нуклеотидной и аминокислотной последовательности полноразмерного Н-гена штаммов вируса кори, изолированных на территории России в период с 1999 по 2003, подтвердил принадлежность вируса кори к генотипам D4, D6 и HI, установленным при секвенировании СООН-конца N-гена.

4. Результаты генотипирования штаммов вируса кори, изолированных на территории Российской Федерации в разные годы вакцинопрофилактики, выявили изменения генотипической картины вируса кори, циркулирующего на данной территории. Циркулировавший ранее на территории России вирус, принадлежащий к генотипу А, в последнее время не регистрируется, а его место занял вирус генотипа D4. Анализ частоты обнаружения штаммов вируса кори разных генотипов позволяет предположить, что в настоящий момент генотип D4 является эндемичным для России. Вирусы других генотипов, вызывающие на территории России локальные случаи кори, по-видимому, являются импортированными из других стран.

5. Определение нуклеотидной и аминокислотной последовательности двух наиболее вариабельных участков генома вируса кори (СООН-конца N-гена и полноразмерного Н-гена) свидетельствует об усилившейся в последнее десятилетие изменчивости вируса кори. Полученные данные говорят о важности изучения молекулярно - генетической и биологической характеристики штаммов вируса кори в период реализации программ элиминации кори в мире.

113

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ данных литературы показал, что геном вируса кори кодирует информацию о 8 структурных белках, три из которых (Н, F и М) связаны с оболочкой вириона коревого вируса, а три (L, Р и N) связаны с нуклеокапсидом. Детальное изучение строения и функций вирусных белков показало существование у вируса кори выраженных антигенно-генетических мутаций, особенно в N и Н -белках. Это диктует необходимость дальнейшего наблюдения за изменчивостью вируса кори.

Анализ данных литературы свидетельствует об усилившемся в последние годы внимании исследователей к характеристике диких штаммов вируса кори, циркулирующих в настоящее время в разных географических регионах. При этом авторы преследуют несколько целей: во-первых, осуществление наблюдения за изменчивостью вируса кори и определения ее эпидемиологической значимости; во-вторых, генотипирование вируса кори, определение местных и завозных случаев кори и прерывание трансмиссии местных штаммов коревого вируса для контроля за выполнением программы элиминации кори на данных территориях.

Нетрудно заметить, что если за рубежом такие исследования уже вошли в повседневную практику, то в России имеются только разрозненные данные о диких штаммах вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации. Принятая Всемирной организацией здравоохранения программа глобальной элиминации кори и Национальная программа ликвидации кори к 2010 году на территории Российской Федерации (Приказ Минздрава России от 19.08.2002 года № 270), требуют подробной молекулярно-генетической характеристики штаммов вируса кори, циркулирующих на территории России, с целью слежения за их циркуляцией среди населения.

Таким образом, анализ данных литературы дал возможность сформулировать основную задачу данной работы: изучить и генотипировать штаммы вируса кори, изолированные на территории России в разные годы массовой вакцинопрофилактики.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 4. Материалы и методы исследования.

4Л. Выделение изолятов от больных корью

Выделение изолятов вируса кори из инфекционного материала проводили на базе лаборатории прикладной иммунохимии Московского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского.

Материалом для выделения вируса служили: взвесь мононуклеарных клеток, полученная из гепаринизированной венозной крови больных корью, плазма и сыворотка крови.

Венозную кровь собирали в стерильных условиях в пробирки с гепарином (5 мл + 0,2 мл гепарина). Взятые образцы доставлялись в лабораторию для выделения вируса. При выделении фракции моноцитов из гепаринизированной крови в пробирку с кровью добавляли желатин из расчета 1 мл 10% желатина на 5 мл крови. Полученную смесь тщательно перемешивали. Затем пробирку помещали в термостат фирмы Jouan (Франция) на 40 минут при температуре 37°С. По истечении данного времени жидкость, образовавшуюся над осадком, отсасывали в центрифужную пробирку, добавляли 5 мл среды RPMI-1640 и центрифугировали в центрифуге с качающимся ротором фирмы Jouan (Франция) при 1000 об/мин. в течение 10 минут. Затем аккуратно отсасывали среду и клеточную взвесь суспендировали в небольшом объеме питательной среды.

Изоляты вируса кори культивировали на перевиваемых культурах клеток В-95а и Vero. Культуры клеток выращивали в среде RPMI-1640 с 5% эмбриональной телячьей сыворотки (BioClot (Pty)Ltd, Германия) при температуре 37°С.

Инфицирование клеточных культур вирусом кори осуществляли путем внесения вируса непосредственно в питательную среду. Все манипуляции по получению вируссодержащей жидкости проводили в строго стерильных условиях, в ламинаре II степени защиты SterilCARD III фирмы The Baker Company (США).

Всего исследованы 21 штамм вируса кори, полученные от больных в период с 1988 по 2003 годы (табл.4). Определение генотипов данных штаммов проводили на базе двух лабораторий - на базе лаборатории молекулярной диагностики и генно-инженерных конструкций Всероссийского Научно-исследовательского института сельскохозяйственной биотехнологии, РАСХН и на базе Measles Virus Section, Centers for Disease Control and Prevention (CDC), Атланта, США.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Журавлева, Юлия Николаевна, Москва

1. Анджапаридзе О.Г. Вакцинопрофилактика кори.// В кн. «Медицинская вирусология».-М., 1977.-С.З-6.

2. Букринская А.Г., Зайдес В.М. Молекулярная биология парамиксовирусов// М., «Медицина», 1978, 184с., ил.

3. Вирусология// В 3-х томах.: Пер.с англ./ Под ред. Б.Филдса, Д.Найпа, при участии Р.Ченока, Б.Ройзмана, Дж.Мелника, Р.Шоупа.-М.: Мир, 1989.

4. Гендон Ю.З. // Вопр. вирусологии. 1996. - Т.41. - №2. - С.88-92.

5. Гипермутация генома вируса кори и персистентная инфекция: К вопросам о целесообразности вакцинации детей в раннем возрасте: Ред.ст.// Вопр. вирусол,-1990.-Т.З5, №5.- С.438-439.

6. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение// Пер. с англ. М.: Мир, 2002. - 589 е., ил.

7. Zhdanov V.M. The measles virus. // Molec. and cell biochem.- I980.-Vol.29.-№1.-P.59-66.

8. Здоровье-21: основы политики достижения здоровья для всех в Европейском регионе ВОЗ. Предупреждение болезней и травм и борьба сними. // Европейская серия по достижению здоровья для всех, №6.

9. Коптяева И.Б. Персистенция вируса кори // Вопросы вирусологии.- 1996.-t.41.-№2.-С.74-76.

10. Ю.Ляшенко В.А. Коревая иммунодепрессия в условиях инфекции и вакцинации // Иммунология.- 1996.-№ 1 .-С. 10-12.

11. Мамаева Т.А. Противокоревые антигемолизины и методы их выявления: Автореф. дис. канд. биол. наук: 14.00.36 // Моск. НИИ эпидемиолог, и микробиол. им. Г.Н. Габричевского,- М., 1987.- 21с.

12. Маркушин С.Г., Рота П., Тихонова Н.Т., Мамаева Т.А., Беллини В. Сравнительное изучение нуклеотидной последовательности Р/С гена дикого штамма ИЛ и вакцинного штамма Л-16 вируса кори// Вопр. вирусол.-1995.-№4.-С.151-155.

13. Маркушин С.Г. Генетика вируса кори// Вопросы вирусологии,- 1996.- т.41.-№2.-С.70-72.

14. Marcushin S, Bellini W, Rota P. 1994. Genetic analysis of the M-F intercistronic region of measles vaccine and wild-type strains. In: Abstracts of 9th //International Conference on Negative Strand Viruses.- Estoril.- 1994. p 126

15. Москалева Т.Н. Клинико-иммунологическая характеристика и дифференциальная диагностика современной кори// Автореф. дис. канд. мед. наук: 14.00.10/ЦНИИЭ.- 1996.-20с.

16. Наумова М.А. Характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих среди населения в период массовой вакцинопрофилактики// Автореф. дис. канд. биолог, наук: 14.00.36 / Моск. НИИ эпидемиолог, и микробиол. им. Г.Н. Габричевского.- М., 1998.-21с.

17. Носивец Г.В. Критерий оценки эпидемической ситуации по кори на современном этапе// Эпидемиология инфекционных болезней,- 1999.-№5.-С.14-17.

18. Патогенетические аспекты коревой инфекции: меморандум совещания ВОЗ// Бюллетень ВОЗ,-1994.-т.72.-№2.-С. 16-21.

19. Руководство по лабораторной диагностике кори// ВОЗ, отдел вакцин и биологических препаратов.- Декабрь.- 1999.

20. Свежина Ю.А. Состав и некоторые свойства антигена вируса кори// В кн.: "Актуальные проблемы вирусных инфекций".-М. -1965.-С.344-345.

21. Сингер М., Берг П. Гены и геномы: В 2-х т. Пер. с англ. М: Мир - 1998 - 373 е., ил.

22. Тарос Л.Ю. Опыт непосредственного выделения вируса кори на однослойных культурах почечной ткани морских свинок и фибробластов куриных эмбрионов//Вопросы вирусологии.- 1963.-№3.-С.316-322.

23. Тихонова Н.Т., Герасимова А.Г., Чава О.О. и др. Совершенствование системы эпиднадзора за корью на этапе ее элиминации.// Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. М. - 2003.- №2.- стр.5

24. Хозинский В.И. Материалы по этиологии и профилактике некоторых вирусных инфекций и по биологии вируса кори// Доклад, обобщающий опубликованные работы, представленные к защите на соискание ученой степени доктора биол. наук.- М.- 1969.-С.67-92.

25. Чернеску К., Шородок Й., Кажал Н. Корь. Патогенез и профилактика// Перев. с румыне,- 1981,- 242с.

26. Alkhatib G, Briedis DJ. The predicted primary structure of the measles virus hemagglutinin//Virology.- 1986.-Vol.150.-P. 479-490.

27. Baczko K., Carter M.J,, Billeter M. and ter Meulen V. Measles virus gene expression in subacute sclerosing panencephalitis// Virus Research.- 1984.-Vol.l.-P. 585-595.

28. Baczko K., Liebert V.G., Billeter M., Cattaneo R., Budka H. and ter Meulen V. Expression of defective measles virus gene in brain tissues of patients with subacute sclerosing panencephalitis // Journal of Virology.- 1986.-Vol.59.-P. 472-478.

29. Baczko K., Brinckmann U., Pardowitz I., Rima K. Bert and ter Meulen V. Nucleotide sequence of genes encoding the matrix protein of two measles virus wild-type strains.//J. Gen. Virol.-1991.-Vol.72.- P. 2279-2282.

30. Baczko K., Carstens C., Kreth H.W. et al. // Abstracts of IX International Conference on Negative Strand Viruses.- Estoril, Portugal, October 2-7.- 1994.- P. 152.

31. Barrero OR, de Wolff CD, Passegi CA, and Mistchenko AS. Sequence analysis of measles virus hemagglutinin isolated in Argentina during the 1997-1998 outbrea//. J Med Virol.- 2000.-Vol.60.-P. 91-96

32. Ваггего OR, Zandomeni RO, and Mistchenko AS. Measles virus circulation in Argentina: 1991-1999//Arch Virol.-2001.-Vol.146.-P. 815-823

33. Barrett T, Underwood B. Comparison of meassenger RNAs induced in cells infected with each member of the morbillivirus group// Virology.- 1985.-Vol.l45.-P.195-199

34. Bartz R., Brinckmann U., Dunster L.M., Rima В., ter Meulen V. and Schneider-Schaulies J. Mapping Amio Acid of the measles Virus Hemagglutinin Responsible for Receptor (CD46) Downregulation.//Virology.- 1996.-Vol.224.-P. 334-337.

35. Baumeister E, Siqueira MM, Savy V, Friedrich F. Genetic characterization of wild-type measles viruses isolated during the 1998 measles epidemic in Argentina// Acta Virol.- 2000.- Jun-Aug.-Vol.44(3).-P. 169-74

36. Bellini WJ, Englund G, Richardson CD, Rozenblatt S. Positive identification of a measles virus cDNA clone encoding a region of the phosphoprotein// J. Virol.- 1984.-Vol.50.- P.939-942.

37. I.Bellini W.J, Englund G.,Rozenblatt S et al. //J.Virol. 1985. - Vol. 53. - P. 908-919.

38. Bellini W.J, Englund G., Richardson CD ,Rozenblatt S, Lazzarini RA. Matrix genes of measles virus and canine distemper virus: cloning, nucleotide sequence, and deduced amino acid sequences//L Virol.- 1986.-Vol.58.-P.408-416.

39. Bellini WJ, Rota PA. Genetic diversity of wild-type measles viruses: implications for global measles elimination programs// Emerg Infect Dis.- 1998.- Jan-Mar.-Vol.4(l).-P.29-35

40. Bilkis MD, Barrero PR, and Mistchenko AS. Measles resurgence in Argentina: 19978 outbreak// Epidemiol Infect.- 2000.-Vol.124.-P. 289-293.

41. Birrer MJ, BloomBR, Udem S. Characterization of measles polypeptide by monoclonal antibodies// Virology.-1981.-Vol.2.-p.381-390

42. Blmberg BM, Crowley JC, Silverman JI, Menonna J, Cook SD, Dowling PC. Measles virus L protein evidences elements of ancestral RNA polymerase// Virology.- 1988.-Vol.l64.-P.487-497

43. Bolt Gert and Pedersent lb Rode. The Role of Subtilisin-Iike Proprotein Convertases for Cleavage of the Measles Virus Fusion Glikoprotein in Different Cell Types.//Virology.-1998.-Vol.252.-P.3 87-398.

44. Brown D, Cohen B, Hujan R, Jin L, Ramsay M, and White. Molecular epidemiology of measles in the UK 1992 to 2001// In 5th Annual Meeting of the European Society for Clinical Virology.-2001.- Vol.22.

45. Buckland R., Gerald C., Barker R. and Wild T.F. Fusion Glicoprotein of Measles Virus Nucleotide Sequence of the Gene and Comparison with Other Paramyxoviruses.//J. Gen. Virol.-1987.-Vol.68.-P. 1695-1703.

46. Buckland R. and Wild T.F. Is CD46 the cellular receptor for measles virus? // Virus Res.-1997.-Vol.48.-P. 1-9.

47. Buchholz CJ, Koller D, Devaux P, Mumenthaler C, Schneider-Schaulies J, Braun W, Gerlier D, Cattaneo R. Mapping of the primary binding site of measles virus to its receptor CD46//J Biol Chem.- 1997.-Vol.272.-P. 22072-22079.

48. Byass P, Adedeji MD, Mongdem JG, Zwandor AC, Brew-Graves SH, and Clements CJ. Assessment and genetic approaches// Acta Virol.- 1995.-Vol.-44.-P. 35-39

49. Сапера Е, Siqueira М, Hortal М, and Friedrich. Recent measles viral activity in Uruguai: serological and genetic approaches// Acta Virol.- 2000.-Vol.44.-P.35-39

50. Casasnovas JM, Larvie M, Stehle T. Crystal structure of two CD46 domains reveals an extended measles virus-binding surface// EMBO J.- 1999.-Vol.18.-P. 29911-2922.

51. Cattaneo R., Rebmann G., Baczko K., ter Meulen V. and Billeter M.A. Altered ratios of measles virus transcripts in diseased human brains.// Virology.- 1987.-Vol.160.-P. 523-526.

52. Cattaneo R.,Rose JK Cell fusion by the envelope glycoproteins of persistent measles viruses which caused lethal human brain disease.// J Virol.- 1993.-Vol.-67.-P. 14931502.

53. Cattaneo R., Kaelin., Baczko K., Billeter M.A. // Cell. 1989. - Vol. 58 - P. 759764.

54. CDC Center for Disease Control and Prevention. Progress toward interrupting indigenous measles transmission - Region of the Americas, January 1999 -September 2000.// MMWR Morb Mortal Wkly Rep.- 2000.-N49.-P. 986-990.

55. Chadwick N, Bruce I, Davies M, van Gemen B, Schukkink R, Khan K, Pounder R, Wakefield A. A sensitive and robust method for measles RNA detection.//J of Virol Method.-1998.-Vol.70.- P.59-70.

56. Chibo D., Birch CJ., Rota PA., Catton MG. Molecular characterization of measles viruses isolated in Victoria, Australia, between 1973 and 1998.// J Gen Virol.- 2000.-Vol.81.- P.2511-2518.

57. Chibo D, Riddell M, Catton M, Birch C. Novel measles virus genotype, East Timor and Australia.// Emerg Infect Dis.- 2002.- Jul.-Vol.8(7).-P. 735-737.

58. Chomczynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.// Anal Biochem.- 1987.- Apr.- Vol. 162.-Nl.-P.156-9.

59. Cocks BG, Chang C-CJ, Carballido JM, Yssel H, de Vries JE, Aversa G. A novel receptor involved in T-cell activation.// Nature.- 1995.-Vol.376.-P.260-263.

60. Crowley J, Dowling PC, Menonna J, Schazer B, Young E, Cook SD, Blumberg BM. Molecular cloning of 99% of measles virus genome, positive identification of 5'end clones, and mapping of the L gene region.// Intervirology.- 1987.-Vol.28.-P.65-77

61. Crowley J, Dowling PC, Menonna J, Silverman JI, Schuback D, Cook SD, Blumberg BM. Sequence variability and function of measles virus 3'and 5'ends and intercistronic regions.// Virology.- 1988.-Vol.164.-P. 498-506.

62. Curran J, Boeck R, Kolakofsky D. The Sendai virus P gene expresses both an essential protein and an inhibitor of RNA synthesis by shuffling modules via nRNA editing.//EMBO J.-1991.-Vol. 10.-P. 3079-3085

63. Doring R., Marcel A., Chopra A. and Richardson C.D. The human CD46 molecule is a receptor for measles virus (Edmonston strain). // Cell.-1993.-Vol.75.-P. 295-305.

64. Dowling PC, Blumberg BM, Menonna J, Adamus JE, Cook PJ, Crowley JC, Kolakofsky D, Cook SD. Transcriptional map of the measles virus genome.// J Gen Virol.- 1986.-Vol.67.-P. 1987-1992.

65. Emerson SU, Yu YH. Both NS and L proteins are required for in vitro RNA synthesis by vesicular stomatitis virus.//J. Virol.- 1975.-Vol.l5.-P.1348-1356.

66. Enders J.F., Peebles T.C. Propagation in tissue cultures of cytopathogenic agents from patients with measles. // Proc.Soc.Exp.Biol.Med.-1954.-Vol.86.-P.277-286.

67. FirschingR, Buchholz C, Schneider U, Cattaneo R, ter Meulen V, Schneider-Schaulies J. Measles virus spread by cell-cell contacts: Uncoupling of contactmediated receptor (CD46) downregulation from virus uptake.// J.Virol.- 1999.-Vol.73.-P.5265-5273

68. Fujinami R.S. and Oldstone M.B.A. Failure to cleave measles virus fusion protein in lymphoid cell.//J.Exp.Med.- 1981.-Vol. 154.-P. 1489-1499.

69. Fujinami R.S. and Oldstone M.B.A. Alterations in Expression of Measles Virus Polipeptides by Antibody: Molecular Events in Antibody Induced Antigenic Modylation. // J.Immunol.- 1980.-Vol. 125.-N1.-P. 78-85.

70. Gerald C, Buckland R, Barker R, Freeman G, Wild TF. Measles virus haemoagglutinin gene: cloning, complete sequence analysis and expression in Cos cell.//J Gen Virol.- 1986.-Vol.67.-P. 2695-2703

71. Giraudon P, Jacquier MF, Wild TF. Antigenic analysis of African measles virus field isolates: identification and localization of one conserved and two variable epitope sites on the NP protein.// Virus Res.- 1988.-Vol.18.-P. 137-152

72. Gombart AF, Hirano A, Wong TC. Expression and properties of the V protein in acute measles vius and subacute sclerosing panencephalitis virus strains.// Virus Res.-1992.-Vol.25.-P.63-78.

73. Graves M.C., Silver S.M., Choppin P.W. Measles virus polipeptide synthesis in infected cell. //Virology.- 1978.-Vol.88.-P. 254-263.

74. Greer PA, Hasel KW, Millward S. Cloning and in vitro expression of the measles virus matrix gene.// Biochem Cell Biol.- 1986.-Vol.65.-P.1038-1043.

75. Hamaguchi M, Yoshida T, Nishikawa K, Naruse H, Nagai Y. Transcriptive complex of Newcastle disease virus I. Both L and P proteins are required to reconstitute an active complex.//Virology.- 1983.-Vol.l28.-P.105-117.

76. Hamaguchi M, Nishikawa К, Toyoda T, Yoshida T, Hanaichi T, Nagai Y. Transcriptive complex of Newcastle disease virus II. Structural and functional assembly associated with the cytoskeletal framework.// Virology.- 1985.-Vol.147,-P.295-308

77. Hanses F, Binnendijk R, Ammerlaan W, Truong AT, de Rond L, Schneider F, and Muller CP, Genetic variability of measles viruses circulating in the Benelux.// Arch Virol.- 2000.-Vol.145.-P. 541-551.

78. Hasel KW, Day S, Millward S, Richardson CD, Bellini WJ, Greer PA. Characterization of cloned measles virus mRNAs by in vitro transcription, translation and immuno-precipitation.// Intervirology.- 1987.-Vol.28.-P.26-39.

79. Heggeness MH, Scheid A, Choppin PW. The relationship of conformational chages in the Sendai virus nucleocapsid to proteolytic cleavage in the NP polypeptide.// Virology.- 1981.-Vol.114.-P.555-562

80. Hirano A, Wang AH, Gombart AF, Wong TC. The matrix proteins of neurovirulent subacute sclerosing panencephalitis virus and its acute measles virus progenitor are functionally different.// Proc Natl Acad Sci USA.- 1992.-Vol.89.-P.8745-8749

81. Horikami SM, Moyer SA. Structure, transcription, and replication of measles virus.// Curr Top Microbiol Immunol.- 1995.-Vol. 191.-P.35-50

82. Hsu EC, Iorio C, Sarangi F, Khine AA, Richardson CD. CDwl50 (SLAM) is a receptor for a lymphotropic strain of measles virus and may account for the immunosuppressive properties of this virus.// Virology.- 2001.-Vol.279.-P.9-21.

83. Jin L, Brown DW, Ramsay ME, Rota PA, and Bellini WJ. The diversity of measles virus in the United Kindom, 1992-1995.//J Gen Virol.- 1997,-Vol.78.-P.1287-1294

84. Jin L, Knowles WA, Rota PA, Bellini WJ, and Brown DW. Genetic and antigenetic characterization of the haemagglutinin protein of measles virus strain recently circulating in the UK.// Virus Res.- 1998.-Vol.55.-P.107-113.

85. Jin L, Sun YJ, Ge L, and Brown DW. Characterization of new genotype of measles virus detected in China and England.// Epidemiol Infect.- 1998.-Vol.l21.-P.691-697

86. Katayama Y, Shibahara K, Kohama T, Homma M, and Hotta. Molecular epidemiology and changing distribution of genotypes of measles virus field strains in Japan.//J Clin Microbiol.- 1997.-Vol.35.-P. 2651-2653

87. Kouomou DW, Nerrienet E, Mfoupouendoun J, Tene G, Whittle H, Wild TF. Measles virus strains circulating in Central and West Africa: Geographical distribution of two B3 genotypes.// J Med Virol.- 2002.- Nov.-Vol.68.-N3.-P.433-40.

88. Kreis S., Vardas E and Whistler T. Sequence analysis of the nucleocapsid gene of measles virus isolates from South Africa identifies a new genotype. // J. of General Virology 1997.-Vol.78.-P. 1581-1587.

89. Kreis S, and Schoub BD. Partial amplification of the measles virus nucleocapsid gene from stored sera and cerebrospinal fluids for molecular epidemiological studies.// J Med Virol.- 1998.-Vol.56.-P. 174-177.

90. Lecouturier V., Fayolle J., Caballero M., Carabana J., Celma M.L., Fernandez-Munoz R., Wild T.F. and Bucland R. // J. of Virology.- 1996.- July .-P. 4200-4202.

91. Mori Т., Sasaki К., Hashimoto H. and Makino S. Molecurlar cloning and complete nucleotide sequence of genomic RNA of the AIC-C strain of attenuated measles virus.//Genes.- 1993.-Vol.7.-P. 67-81.

92. Morrison T.G., Portner A Structure, function and intracellular processing of paramyxovirus membrane proteins. // Virus Research.- 1988.-Vol.10.-P. 113-136.

93. Ono N, Tatsuno H, Hidaka Y, Aoki T, Minagawa H, Yanagi Y. Measles virus on throat swabs from measles patients use signaling lymphocytic activation molecule (CDwl50) but not CD46 as a cellular receptor.// J.Vrol.- 2001.-Vol.75.-P.4399-4401.

94. Osterhaus AD, Groen J, De Vries P, UytdeHaag FG, Klingeborn B, and Zarnke R.• Canine distemper virus in seals.// Nature.- 1988.-Vol.335.-P.403-404

95. Peebles ME. Paramyxovirus M proteins: Pulling it all together and taking it on the road. In: Kingsbury DW (ed)// The paramyxoviruses.- Plenum.- New York.- 1991.-P.427-456

96. PHLS CDSC Communicable Disease Surveillance Centre. Outbreaks of measles in communities with low vaccine coverage.// Commun Dis Rep Wkly.- 2000.-N10.-P.29-32.

97. Polacino PS, Pinchuk LM, Sidorenko SP, . Clark EA. Immunodeficiency virus cDNA synthesis in resting T lymphocytes is regulated by T cell activation signals and dendritic cells.// J Med Primatol.- 1996.-Vol.25.-P.201-209

98. Pringle CR. Phabdovirus genetics. In:Wagner RR (ed).// The rhabdoviruses.-Plenum.- New York.- 1987.-P.167-243.

99. Radecke F., Spielhofer P., Schneider H., Kaelin K., Huber M., Dotch C., Christiansen G. and Billeter M.A. Rescue of measles viruses from cloned DNA.// EMBO J.- 1995.-Vol .14.-P.5773-5784.

100. Rayn KW, Morgan EM, Portner A. Two noncontiguous regions of Sendai virus P protein combine to form a single nucleocapsid binding domain.// Virology.-1991.-Vol.180.-P. 126-134.

101. Richardson C., Berkovich A, Rozenblatt S, Bellini W. Use of antibodies directed against synthetic peptides for identifying cDNA clones, establishing reading frames and deduction the gene order of measles virus.//J.Virol.- 1985.-Vol.54.-P.186-193.

102. Richardson C., Hull D., Greer P., Hasel K., Berkovich A., Englund G., Bellini W., Rima B. and Lazzarini R. The Nucleotide Sequence of the mRNA Encoding The Fusion Protein of Measles Virus (Edmonston Strain): A Comparison of Fusion

103. Protein from Several Different Paramyxoviruses. // Virology.- 1986.- Vol. 155.1. P.508-523.

104. Riddell MA, Chibo D, Kelly H, Catton MG, and Birch CJ. Investigation of optimal specimen type and sampling time for detection of measles virus RNA during a measles epidemic.//J of Clin Microb.- 2001.- Vol.39.- N.I.- P.375-376.

105. Rima BK, Baczko K, Clarke DK, Curran MD, Marten SJ, Billeter MA, ter Meulen V. Characterization of clones for the sixth (L) gene and a transcriptional map for morbilliviruses.// J Gen Virol.- 1986.-Vol.67.-P.1971-1978

106. Rima B.K., Earle J.A.P., Yeo R.P., Herlihy L., Baczko K., ter Meulen V., Carabana J., Caballero M., Cema M.L. and Fernandez-Munoz R. Temporal and geographical of measles virus genotypes. // J. of General Virology.-1995.- Vol.76.-P.l 173-1180.

107. Rota J.S., Hummel K.B., Rota P.A., and Bellini W.J. Genetic Variability of the

108. Glicoprotein Genes of Current Wild-type Measles Isolates. // Virology.- 1992.1. Vol.188.- P.135-142.

109. Rota P.A., Bloom A.E., Vanchieri J.A. and Bellini W.J. Evolution of the nucleoprotein and matrix genes wild-type strains of measles virus isolated from recent epidemics.//Virology.- 1994.-Vol.l98.-P.724-730.

110. Rota J.S., Wang Z., Rota P.A. and Bellini W.J. Cmparison of sequences of the H, F and N coding genes of measles virus vaccine strains. // Virus Res.-1994.-Vol.31.-P.317-330.

111. Rota P.A., Rota J.S., Newton B.R. et al. // Abstracts of IX International Conference on Negative Strand Viruses.- Estoril, Portugal.- October 2-7.- 1994.-P.153.

112. Rota PA, Liffick S, Rosenthal S, Heriyanto B, Chua KB. Measles genotype G2 in Indonesia and Malaysia.// Lancet.- 2000,- Apr 29.-Vol.355.-N9214.- P.1557-1558.

113. Rota JS, Heath JL, Rota PA, King GE, Ceima ML, Carabana J, et al. Molecular epidemiology of measles virus: identification of pathways of transmission and implications of measles elimination.// J Infect Dis.- 1996.-Vol.173.-P.32-7

114. Rota PA, Liffick SL, Rota JS, Katz RS, Redd S, Papania M, Bellini WJ. Molecular epidemiology of measles viruses in the United States, 1997-2001.// Emerg Infect Dis.-2002.- Sep.-Vol.8(9).-P.902-8.

115. Rozenblatt S, Eizenberg O, Ben-Levy R, Lavie V, Bellini WJ. Sequence homology with the morbilliviruses.//J Virol.- 1985.-Vol.53.-P. 684-690.

116. Sato T.A., Kohama Т. and Sugiura A. Intracellular processing of measles virus fusion protein. // Arch. Virol.- 1988.- Vol.98.-P.39-50.

117. Santibanez S, Heider A, Gerike E, Agafonov A, and Schreier E. Genotyping of measles virus isolates from central Europe and Russia.// J Med Virol.- 1999.- Vol.58.-P.313-320

118. Schmid A., Cattaneo R. and Billeter M.A. A procedure for selective full length cDNA cloning of specific RNA species. // Nucleic Acids Research.- 1987.-Vol.15.-P.3987-3996.

119. Schneider-Schaulies S, Liebert UG, Baczko K, Cattaneo R, Billeter M, ter Meulen V. Restriction of measles virus gene expression in acute and subacute encephalitis of Lewis rats.// Virology.- 1989.- Vol.171.- P.525-534.

120. Schneider-Schaulies J., ter Meulen V., Schneider-Schaulies S. Measles virus interactions with cellular receptors: consequences for viral pathogenesis//JournaI of NeuroVirology.- 2001.-Vol.7.-P. 391-399.

121. Sheshberadaran H, Chen SN, Norrby E. Monoclonal antibodies against five structural components of measles virus. // Virology ,-1983.-Vol.l28.-N2.-p.341-353.

122. Stallcup КС, Raine CS, Fields BN. Cytochalasin В inhibits the maturation of measles virus.//Virology.- 1983.-Vol. 124.-P.59-74

123. Takahashi M, Nakayama T, Kashiwagi Y, Takami T, Sonoda S, Yamanaka T, Ochiai H, Ihara T, and Tajima T. Single genotype of measles virus is domainantwhereas several genotypes of mumps vrus are co-circulating.// J.Med Virol.- 2000.-Vol.62.-P.278-285.

124. Takeda M., Sakaguchi Т., Li Yan, Kobune F., Kato A., and Nagai Y. The Genome Nucleotide Sequence of a Contemporary Wild Strain of Measles Viruses and its Comparison with the Classical Edmonston Strain Genom. // Virology.- 1999.-Vol.256.-P. 340-350.

125. Tatsuo H, Ono N, Yanagi Y. SLAM (CDwl50) is a cellular receptor for measles virus.// Nature.- 2000.-Vol.406.-P.893-897.

126. Taylor M.J., Godfrey E., Baczko K., ter Meulen V., Wild T.F. and Rima B.K. Identification of several different lineages of measles virus. // J. of General Virology.-1991.-Vol.72.-P.83-88.

127. Truong AI, Mulders MN, Gautam DC, Ammerlaam W, de Swart RL, King CC, Osterhaus AD, and Muller CP. Genetic analysis of Asian measles virus strains new endemic genotype in Nepal.// Virus Res.- 2001.-Vol. 76.-P.71-78.

128. Tyrrell D.L.J, and Norhby E. Structural polypeptides of measles virus. // Journal of General Virology.- 1978.- Vol.39.-P.219-229.

129. Van den Hof S, Meffre CM, Conyn-van Spaendonck MA, Woonink F, de Melker HE, and van Binnendijk RS. Measles outbreak in a community with very low vaccine coverage, the Netherland.// Emerg Infect Dis.- 2001.-Vol.7.-P.S593-597

130. Varsani T.M., Utter G., Norrby E. Purification, morphology and antigenic characterization of measles virus envelope components.//J Gen Virol.-1984.-Vol.65.-N2.-P.355-366.

131. Visser LK, Kumarev VP, Orvell C, de Vries P, Broeders HW, van de Bildt MW, Groen J, et al. Comparison of two morbilliviruses isolated from seals during outbreaks of distemper in north west Europe and Siberia.// Arch Virol.- 1990.-Vol.l 11.-P. 149-164/

132. Wardrop EA, BriedisDJ. Characterization of V protein in measles virus-infected cells.//J. Virol.-1991.- Vol.65.-P.3421-3428.

133. Weissbrich B, Shneider-Schaulies J, and ter Meulen V. Measles and its neurological complications. // Clinical Neurovirology.- 2002.- Apr.-P.2-46

134. WHO World Health Organization. Expanded Programme on Immunization (EPI). // Weekly Epidemiological Record.- 1998.-N73.-P.265-272.

135. WHO World Health Organization. Nomenclature for describing the genetic characteristics of wild-type measles viruses (update). Part 1 // Weekly Epidemiological Record.- 2001.-Vol. 76.-N 32-33.-P.241-256.

136. WHO World Health Organization. Nomenclature for describing the genetic characteristics of wild-type measles viruses (update). Part 2 // Weekly Epidemiological Record.- 2001.- Vol.76.-N 32-33.-P.241-256.

137. Wild TF, Malvoisin E, Buckland R. Measles virus: both the haemagglutinin and the fusion glycoprotein are required for fusion.// J Gen Virol. 1991- Vol.72. P.439-442

138. Xu W, Tamin A, Rota JS, Zhang L, Bellini WJ, Rota PA. New genetic group of measles virus isolated in the People's Republic of China.// Virus Res.- 1998.- Apr.-Vol.54.-N2.-P. 147-56

139. Yoshikawa Y, Mizumoto K, Yamanouchi K. Characterization of meassenger RNAs of measles virus.// J Gen Virol.-1986.-Vol.67.-P.2807-2812.

Информация о работе

Журавлева, Юлия Николаевна
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.06

Диссертация

Характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации в период массовой вакцинопрофилактики - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Характеристика штаммов вируса кори, циркулирующих на территории Российской Федерации в период массовой вакцинопрофилактики - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы