Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика популяций Phytophthora Infestans на картофеле в некоторых регионах Северного Кавказа

ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика популяций Phytophthora Infestans на картофеле в некоторых регионах Северного Кавказа"



На правах рукописи

Аматнов« Фатима Хазировна

характеристика популяций РНУТОРНТНОЯА 1\ТЕЯТА№ на картофкле в некоторых

регионах Северного кавказа

Специальность 03,00,24 - Микология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2004

Работа выполнена на кафедре микологии и апыологии биологического факультета Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова в 2000-2003 годах.

Научный руководитель: д.б.н., профессор Дьяков Ю. Т.

Официальные оппоненты:

Д.б.н., профессор В. А. Шкаликов (С.б.н. М. К. Деревягииа

^душя организация:

Научно-исследовательский институт селекции и семеноводства овощных культур

Зашита диссертации состоится 20 февраля 2004 года в 15 часов 30 мин. на заседании диссертационного совета Д.053.05.65 на биологическом факультете Московского rocv ^ственного унивег .та им. М. В. Ломоносова по адресу*: 1198-Л . чква Воробьевы. МГУ.

Биатогичсский факультет, аудитория Ml

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологическою (факультета МГУ имени М. В. Ломоносова.

Автореферат разослан января 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета дб.н. Лекомиева С, Н,

, . -л.

Актуальность темы

Фнтофтороз на Северном Кавказе одно из самых опасных заболеваний картофеля. Известны случаи, когда потери урожая достигали 100%. В последние годы отмечены вспышки болезни в районах, где значение заболевание картофеля фитофторозом было невелико, а именно в Республике Ингушетия, Кабардино-Балкарии, Дагестане и Оевернойг Осетии.

Основная стратегия защиты картофеля включает в себя сочетание применения устойчивых сортов и химический метод. Однако эффективность этих средств имеет временный характер. Уровень резистентности возбудителя к системным, а иногда и к контактным фунгицидам может возрастать. Поэтому популяционные исследования возбудителя фитофтороза не утрачивают своей актуальности. Благодаря им практики во всех регионах России получают точную информацию о структуре популяций !\ т/саш* и се потенциальных возможностях. Работы в этой области признаны мировым сообществом.

Цель настоящего исследования - определение популяционной структуры Л ¡п/ехшпх на территории Ингушетии, Северной Осетии и Оавропольского края и сравнение ее с популяционной структурой в других регионах.

Задачи исследования: в популяциях /'. ш/схют в исследуемом регионе

1) изучение встречаемости типов спаривания и о ос пор;

2) изучение устойчивости к системному фунгициду металаксилу;

3) определение расового состава изолятов;

4) определение изоферментпого сне>пра на основе аллелей локусов фосфоглюшизомеразы н пептидазы;

5) определение гаплотипов митохондриальной ДНК;

Г '■■"■ ■'■■

6) сравнение некоторых кавказских штаммов со штаммами из других регионов но линейному росту при разных температурах.

Научная новизна и практическое значение работы

Получены достаточно полные данные, характеризующие по пуля цио иную структуру /■*. иф$1ат на Северном Кавказе. Они оригинально и в то же время существенно дополняют результаты, полученные ранее в НИИ горного и предгорного сельского хозяйства (НЛО «Горное»), что позволяет совершенствовать прогноз и защитные мероприятия в рамках интегрированной зашиты картофеля против фитофтороэа к других болезней в регионе.

Продемонстрирован низкий уровень устойчивости к фенилам иди ы.м препаратам в Северной Осетии и Ингушетии н высокий -в Ставропольском крае, что должно учитываться при планировании мероприятий по химической защите.

Сделано сравнение кавказских популяций Р. Ьфхкт.ч и популяций возбудителя фитофтороза картофеля из других регионов РФ и высокогорных регионов мира.

1зыли обнаружены ооспоры в популяциях !'. т[схШт на Северном Кавказе и доказано соответствие частот молекулярных аллелей правилу Ха рди - Вайнбер га.

Обнаружен высокий процент расы томатной расы Т1 в популяциях ]'. на Северном Кавказе, что свидетельствует о роли томатов в

распространении инфекции на картофеле.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на первой всероссийской конференции ло иммунитету растений к болезням и вредителям (Санкт-Петербург, 2002), первом съезде микологов России (Москва, 2002), на ежегодной декабрьской научной конференции в Московской сельскохозяйственной академии (Москва, 2002), а также на

заседании кафедры микологии н альгологии биофака МГУ (Москва, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы. ! работа сдана в печать.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 1)9 страницах машинописного текста. Она построена но традиционной схеме и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, экспериментальной части, заключения и выводов. Список литературы состоит из 88 источников, из них 53 - зарубежных. Диссертация таюке содержи ]' 22 таблицы, 12 рисунков и 1 приложение.

Содержание работы

). Обзор литературы. Эта глава содержит сведения о систематическом положении и биологии возбудителя фитофтороза. а также об исследованиях его популяций в Северном Кавказе и других регионах. Привидится краткий анализ маркеров, применяемых для популяционпых исследований }'. т$е$1ат.

2. Материалы и методы исследований. Основная часть исследований Смла проведена в МГУ имени М, В. Ломоносова, Определение картофельных рас проводилось в институте фитопатологии РЛСХ1!, встречаемости ооспор - в МСХА имени К. Л, Тимирязева,

Количества проанализированных изолятов приводится в таблице I.

Таблица I

Чисто изолятов, протестированных но разным маркерным признакам.

Регион Год Тин Расы Гаплотнп ll! «ферменты Устойчивость

сбора спаривания rntDNA пептидя>ы к метя л а кс илу

Северная Осетия 2001 23 21 13 27 26

Ставрополь- 2001 27 11 22 22 27

ский край

Ингушетия 2002 20 37 10 L_______12 ■5

Изучение этих маркеров у изолятов Р. т/с'.шт проводили по традиционным схемам. Типы спаривания определяли при попарном росте исследуемых изолятов с тестерами на агарщованной среде и последующим выявлением наличия ооспор. Устойчивость к ридомилу (метал аксилу) определяли при инокуляции овсяного агара с ридомилом в концентрациях О, I, 10 и 100 мкг/мл. Картофельные и томатные расы определяли посредством шокуляции листьев сортов-дифференциаторов картофеля и томатов суспензиями зооспорамгнев исследуемых изолятов с последующей инкубацией во влажных камерах. Изофсрмеитные локусы выявляли в целлюлозоацетатиык гелях ло стандартной методике. Для определения гаплотинов митохондрналыгой ДНК проводили выделение ДНК, делали ПЦР с использованием специальных прайм еров, рестрикцию и электрофорез.

Кроме выделения северо-кавказских штаммов, я принимала участие в определении популяционных маркеров из других регионов России - Московской, Брянской, Тульской, Ленинградской, Мурманской и других областей. Это позволило провести сравнение нопуляционной структуры /', в разных регионах Российской Федерации.

Для сравнения изолятов по линейному росэу на овсяном агаре использовали изоляты Р. ¡п}$хшж с различными характеристиками, собранные в различных регионах России (табл. 2). Линейный рост изучали в трех повторностях.

Далее на основе дисперсионного анализа делали выводы о достоверности различий между изолятами при различных температурах по линейному росту.

Характеристика штаммов Р. т/етат

Штамм Характеристики

Тип с пар. Ре/>-1 Рер-2 С/я Отношение к метала кс ил у Вирулентность к картофелю

1ИКЗ

1ИК4 А2 100/100 100/100 100/100 1а 5 1234731011

1СОСК22 А2 100/100 112/112 100/100 На Б 1234781011

1СОСК36 А! 100/100 100/100 100/100 Па"1 К 123471011

1СОСКЗ 1 А1 100/100 100/100 100/100 1а 5 1234671011

1МЙОСК11 А1 100/100 112/112 100/100 1а

'Г 14 А1 100/100 100/112 100/100 1а 5 123458101!

Т 16 А1 100/100 [00/112 86/100 ¡а Б

[ МУР 3-3-01 А1 100/100 100/100 100/100 К 13411

1 МУС 8-1-01 А1 100/100 100/100 100/100 Па К 123456710

1 МУР 10-19-01 А1 100/100 100/100 100/100 Я

8 НрК 5 А1 100/100 100/100 [00/100 Па 123456811

8 ИрК 40 А1 100/100 100/100 100/100 ГТТа 1235671011

7 Ж 50 А2 100/100 100/1)2 100/100 Па 5 1234678101 1

Примечание; идаляты 1ИК собраны в Ингушетии в 2001 г, 1СОСК - в Северной Осе) ни в 2001 г. 1МВосК11 - в Московской области в 2001 г, Т - в Тульской области а 2000 г, 1Мур - в Мурманской области в 2001 г, ЩрК - в Иркутской оо.засти в г, 7ХК - в Хабаровском крас в 19У7 I .

3. Полученные результаты

3.1. Характеристики популяции Р. м/юШпа на Северном Кавказ

3.1.1. Типы спаривания, В популяциях /'. щреШпх встречались оба тина спаривания (табл. Г>). Самофертильные изоляты были встречены в Ставропольском крае к в Ингушетии, В других регионах России наблюдали различную встречаемость А1 и А2. Так, в одних регионах было зарегистрировано полное преобладание А1, в других регионах преобладал А2. Самофертильные изоляты не были обнаружены. Высокая частота самофертнпьных изолятов в Ставропольском крае

свидетельствует о большой роли не гибридных ооспор, способных сохраняться в почве и быть источником первичного заражения всходов картофеля.

Таблица 3.

Доли штаммов с типами спаривания Л) и А2 в популяциях Р. щ/емшк на

■ ■ По пулядни Доли штаммов, %

Л1 А2 СФ

Регионы Юга Российской Федерации

Ставропольский край 25.9 55,6 18,5

Северная Осетия 56,5 43.5 0

Ингушетия 50 45 5

Другие регионы Российской Федерации

Одинцовский район (МО*) 78 22 0

Шаховской район (МО) 31 69 0

Воскресенский район (МО) 50 50 0

Дубна (МО) 100 0 0

Тульская область 100 0 0

Ленинградская область 79 21 0

Ленинградская область (2002) 56 44 0

Брянская область 69 31 0

Мурманская область 79 21 0

* МО - Московская область

3.1,2. Встречаемость ооспор. Наибольшая встречаемость образцов с ооспорами отмечена в Ставропольском крае, возможно, вследствие высокого процента самофертнльных изолятов. В остальных регионах образны с оослорами встречались реже (табл. 4).

Таблииа 4,

Встречаемость ооспор к Аооспорзнгиен в образцах !'■ («Дл/сим, собранных в южных регионах России.____ _

Место сбора Число образцов Число просмотренных образцов С ооспорами, % ■ : :.' ■ ^ ■ Число просмотренных образцов с зооспорангиями, > %

.редко умеренно часто редко умеренно часто

Ставропольски Г! край 69 12 2 3 32 29 39

Ингушская республика 58 2 0 0 47 29 24

Кабардино-Балкария 69 12 0 0 48 26 26

В Ингушских образцах были обнаружены шарообразные структуры е тонкой или средней по толщине стенкой диаметром 12-19 мкм (средний диаметр - около 16 мкм) (рис. 1). Они были сходны по форме и консистенции с ооспорами Р. чфзшт, но по размерам были меньше. Также они отличались по форме от зооспорангмев Р. т/е-Шт, но с некоторыми из них были сходны по размеру (рис. 1). Это свидетельствует о том, что обнаруженные структуры можно илеIггифнцировать как хламидоспоры Р. ш/Ыйга.

Ооспири '^щегюрипгин ^¿пяттые ^Лйчидосрюри

Рис 1 Ооспоры. зооспора нпш, и предполагаемые хламидоспоры, обнаруженные в популяциях Р. ¡пахших на территории Северного Каекаче

Очень похожие по размерам и морфологии хдамидосноры были выявлены у Р. kai.suпк- (12-19 мкм), Р. тес/к-а^м/л (6-15 мкм) и Р. (12-21 мкм): а таюке у отдельных идалятов Р. тсопапас (1Г>-70 мкм), Р. /ад/шгпги (12-70 мкм) и /'. ¡спшснкПа (10-45 мкм) ( Ьпут. К|Ьаго, 1996) Ре1уляриое образование хламндоспор в предшествующих исследованиях Р. не отмечалось.

Оценка морфологии ооепор выявила, что наиболее часто встречались ооспоры, диаметр которых был в районе 20-25 мкм, со средней толшиной стенш, без антеридия. Все аналогичные типы ооепор ранее были обнаружены в Московской области.

3.1,3. Устойчивость к металакенлу. Устойчивость к мета лаке илу популяций Л т/ся/ат из Южных регионов Российской Федерации различна (табл. 5). В Северной Осетин зарегистрирован очень низкий

уровень устойчивости. В популяциях из Ставропольского края и в Ингушетии мы обнаружили устойчивые изо ляг ы, причем в Ставропольском крае оии преобладали.

В других регионах'' России в эти же годы преобладали чувствительные изоляты Р. 'щ[ешп.ч. Исключение составила мурманская популяция Р. т/ехшт, где наблюдалось полное преобладание устойчивых штаммов.

Таблица 5

Встречаемость устойчивых, сред неустойчивых и чувствительных к металаксилу штаммов Р. собранных на Северном Кавказе и в других регионах РФ.

" Популяция Доли штаммов, %

Я | 5 1

Регионы Юга Российской Федерации

Ставропольский край 14,8 51,8 33,4

Республика Северная Осетия 0 7,7 92,3

Республика Ингушетия 13,3 13,3 73,4

Другие регионы Российской Федерации

Рязанская обл. 0 0 100

Мурманская обл 92,7 8,3 0

Костромская обл 0 0 100

Московская обл. 0 18,8 81,2

Владимирская обл. (2002) 0 | 0 100

Ленинградская обл, (2002) 0 | 0 100

К высокая устойчивость (к 100 м к г/мл), средняя устойчивость (к 10 ммУмл), 5 - чувствительность

3,1.4. Вирулентность к картофелю и томатам, В исследованных популяциях преобладали сложные картофельные расы с числом генов вирулентности, близким к максимальному (табл. б). Средняя вирулентность была высокой. Во всех и с следован ньгс популяциях преобладали гены вирулентности 1-4, 7, 10, II. Значительно реже встречались гены 5 и 6 (табл. 7), Ген 9, изученный только в популяциях Северной Осетии и Ставропольского края, также встречался очень редко.

Встречаемость «сложных» картофельных рас, а также томатных рас ТО и Т1 в популяциях Р. /«/¡;.шш.

Раса Северная Осетия Ставропольский край Ингушетии

1.4.7 8.10.11 5,4

1 2,14.8.10 П 2,7

1.2.3 4 6 7.10 2,7

1 2.3 4 11 2.7

1 2.3.4.7.8.10 9,1 2,7

1.3.4.6.7.8.10.11 5,4

1.2 3.4 5 6.7.10 2,7

1.3.4.5.7.8.10.11 5,4

1.4.5.6.7.8.10.11 5,4

1.2.3 4.6.7.8. <5,5

1 2.48.10.11 9,1

1.2,3.4.7.8 11 4,8

1 2.47.8.10.11 9,1

1,2.3.4.6.10.11, 5,4

1 23.47.10.11 23,8

1,23,57.8.10,11. 2,7

1.3.4.7.8.10,11, 4,8 8.1

1.2.3 4.7 8 10.11, 33,3 36,4 21.6

1.2.3 4.7.9.10.11 4,8

1.2.3.4.6.7,10.11, 9.5

1.2,3 6 7,8,10.11. 9,1

1.2.3.4.6.7.8 10 И. 4,8 18.1 8,1

1.2.3.4.5.7.8.10 11. 9,1 8,1

1 2.3 4.5.6 7.10 N. 4,8

123 4 56 7.8,10 И. 10,8

Средняя вирулентность 7,7 7,9 8,0

ТО 80,0 100 46.0

Т1 20,0 0 54.0

Индекс Шеннона 2,72 2.55 3,69

По вирулентности к картофелю северокавказские популяции были сходными с популяциями из других регионов России (табл. 8). Значения средней вирулентности были высокими. На территории Северного Кавказа, как и везде, реализуется тенденция увеличения патогенности штаммов !'. и/йиш. Расчеты индекса разнообразия Шеннона показали, что наиболее разнообразна по расовому составу популяция из Ингушетии (табл. 6),

Распределение томатных рас сильно варьировало. Все исследованные штаммы в Ставропольской крае относились к расе ТО, в Республике Северная Осетия она также преобладала, хотя штаммы расы Т) составляли значительную часть популяции, В Республике Ингушетии штаммы с расами ТО и Т1 встречались в сравнимом соотношении (табл. 6).

Таблица 7.

Часто™ генов вирулентности в региональных популяциях Р. т/емаж на Северном Кавказе.

Ген Северная Осетия Ставро по льский край Ингушетия

а! 100 100 100

а2 90 100 70

аЗ 85 81 89

а4 95 91 97

а5 5 9 35

аб 25 27 41

а7 100 91 89

а8 55 73 86

а 10 90 100 97

аП 95 91 92

В других регионах России (Московская и Ленинградская области) также преобладали комплексные расы с 7-10 генами вирулентности. При анализе расового состава из различных регионов России было установлено, что расы 1.3.5.7.8.10.11 и 1.2.3.4.6.(0.11 были обнаружены только в Ингушетии. Другие расы встречались как в Северокавказских популяциях, так и в других Российских популяциях. Значительных различий между Северокавказскими популяциями и популяциями т]Ъшп\ нз других регионов России выявлено не было.

К)

Частота генов вирулентности в популяции Р. Ьфхктч на картофеле на территории Российской Федерации в 2001 г.

Регион Число штаммов Среднее число генов вирулентности на 1 штамм

Юг Российской Федерации

Северная Осетия 21 7,7

Ставропольский край 11 7,9

Ингушетия 37 8,0

69 7,9

Средняя полоса Российской Федерации

Московская область 17 6,9

Тульская область 7 10,7

Вря некая область 4 10,0

Рязанская область 6 6,2

34 7,9

Север Российской Федерации

-Чснишрадская область 9 8,4

Вологодская область 7 6,7

; 16 7,7

3,1,5. Характеристика популяций по шофер м ситным л о кусам. Спектры изоферментов пептидазы и глюкозо-б-фосфаг изомеразы Рср-К Рср-2 и (!р!-1 в исследованных популяциях были сходными. Отмечен мономорфизм (100/100) локуса (¡[>1-1 во всех исследованных популяциях

По локусу Рср-1 преобладал генотип 100/100, также отмечена небольшая (4-14%) доля гетерозигот 92/100. По локусу Рср-2 также преобладал геногип 100/100, но было отменено значительное число гетерозигот 100/112. Гомозигота 112/112 была выявлена в популяциях Северного Кавказа (табл. 9),

Распределение аллелей локуса Рер-2 в популяциях P. mjestans на Северном Кавказе соответствует уравнению Харди-Вайнберга (табл. 10). Таким образом, в отличие от других региоиов России в Северокавказских популяциях отмечен вклад аутбридинга в популяционпую структуру. О возможности полового размножения свидетельствует также наличие ооспор и высокий процент расы ТI у изолятов, выделенных из картофеля.

В других регионах РФ по локусам Gpi и Иер~! доминировали аллел ьные сочетания 100/100, По локусу Рер-2 также наблюдался полиморфизм. В одних популяциях преобладал вариант 100/100 (Ленинградская и Мурманская области), в других - 100/112 (Тульская область). Аллельное сочетание 112/112 нигде, кроме Северного Кавказа, не было зарегистрировано.

Популяции in/ex lam из различных горных регионов мира (Мексика, Шотландия, Перу) демонстрировали структуру, отличающуюся от популяций P. mfestam на Кавказе. Видимо, помимо высоты над уровнем моря, на популярноннуго структуру могут оказывать большее влияние другие экологические факторы, а также сорторазмещение. Се всро кавказские популяции /'. infestam оказались ближе к некоторым равнинным популяциям из других регионов Росссийской Федерации,

Спектр проферментов локусов 1 и 2 петггидазы.

Популяция Орган Число Игоферменты локуся 1 пептидя1ы И »ферменты локуса 2 пептимзы

имя шаля 92/92 92 100 100 100 112

тов /100 /100 /100 /112 /112

Северный Кавказ, 2001

Северная Осетия Листья 27 0 4 96 63 26 11

Ста вропольский край Листья 22 _ 0 13 87 77 5

Прочие регионы, 2001

Московская область Листья 8 0 0 100 43 57 0

Брянская обл. Листья 6 0 0 100 25 75 0

Ленинградская обл.. Луга Листья 9 0 0 100 100 0 0

Мурманская обл. Листья 5 0 0 100 100 0 0

Тульская обл. Листья 12 0 0 100 0 100 0

Северный Кавказ, 2002

респ. Ингушетия Листья 12 0 92 73 18

Прочие регионы, 2002

Ленинградская обл., Луга Листья 6 0 0 100 50 50 0

Таблица 10

Расчеты соответствия аллелей локуса Рср-2 уравнению Харди-Вайнберга.

100/100 100/1)2 112/112 Суммарное значение

100/100 100/112 112/112 Суммарное значение

Ставропольский край

0,7? 0.1К 0,05

0,65 0,31 0,04

Республика Северная Осетия

0,63 -Т-*- 050

0,26 0,41

0,11 0.09

Республика

Ингушетии

I Генотипы Наблюдаемые | Расчетные частоты х"

! частоты !

0,510 1.166 0,016 1,692

0.937 1.575 0,780 3,292

1 100/100 0,73 0,74 0.001

1 100/112 0,18 0,24 0,181

112/112 0,09 0,02 3.200

: Суммарное значение 3,382

X для I степени свободы и уровне значимости 0,05 = 3.81

3.1.6. Характеристика популяций по гаплотннам митохондриальной ДНК. В популяциях Р. inßsians на Северном Кавказе встречались два гаплотипа митохондриальной ДНК - 1а и IIa при небольшом преобладании Па. В Ленинградской области гаплотип Па также преобладал. Напротив, в других регионах РФ (Московская и Тульская области) было обнаружено доминирование гаплотип а 1а. Гаилотнлы Ib и IIb обнаружены не были (табл. 11).

Таблица 11.

Встречаемость штаммов с определенным» типами митохондриальной ДНК в популяциях t'h, (»fcslans на Северном Кавказе (в %).

Популяция Орган Число протестированных изолятов Гаплотнпы м нто ион др налыюй ДНК

растения )а На

Северный Кавказ, 2001

Северная Осетия Листья 13 46 54

Ставропольский край Листья 23 31 69

Прочие регионы, 2001

Московская обл. Листья 40 81 19

Тульская обл. Листья S 100 0

Северный Кавказ, 2002

Peen Ингушетия Листья N 18 82

Прочие регионы, 2002

Л ен и н градская обл , г. Луга Листья 4 0 100

3,2. Сравнение штаммов Л м/»1м из Кавказа и других регионов РФ по скорости линейного роста при разных температурах. После 10 дней инкубации (табл. 12) при температуре 5"С наибольшая скорость роста наблюдалась у «южных» штаммов ИК-4. СОСК-36 и СОСК-22, а наименьшая - у «северного« МУ Р-3.3,01. При 10" быстрее других роелн штаммы из Сибири (ИРК-40), севера (МУР-8.1.01) и юга (ИК-4), несколько отставали в росте от них штаммы из центральных регионов (МВОСК-11, Т-14 и Т-16), а у остальных штаммов разница в росте была незначительной. При 15" наибольший рост наблюдался у

штаммов го Сибири (7ХК-50 и ИРК-40), а наименьший у «Московского» штамма МВОСК-11. Остальные штаммы из разных регионов характеризовались незначительной разницей в скорости роста. При 20° максимальный рост имел штамм Б-5. При 25° ни один штамм не тронулся в рост. Интересно отметить, что при 5й вариация скорости роста между самым медленней и быстрорастущим штаммами была наименьшей и составила 10,8 мм (12,5 - 23,3), при 10° вариация была выше - 11,7 мм (22,3 - 34,0), при 15° еще выше - 21 мм (50,5 - 29,5) и при 20й - наиболее высокой - 27,3 (65,5 - 38,2). Эти данные свидетельствуют о том, что низкие температуры почти в одинаковой степени тормозят начало роста штаммов, независимо от их географического происхождения, а при оптимальных для роста температурах выявляются штаммов различия по этому показателю. Вместе с тем, эти данные нельзя, по-видимому, трактовать, как показатели разной чувствительности штаммов к повышенной температуре, ибо при 25° не отмечено начала роста пи у одного штамма, а температура 20я оптимальна для роста мицелия вида.

После 20 дней (табл. 13) времени инкубации при низких температурах лучше росли штаммы из Сибири, а скорость роста штаммов из Северного Кавказа замедлилась. При температурах 15 и 20" существенных различий между штаммами отмечено не было, В вариабельности скорости роста разных штаммов наблюдали картину, противоположную той, что отмечена после 10 дней роста.

Наибольшие различия - 45,8 мм (77,3 - 31,5) были в условиях роста при 5°, при 10° они составили 13,7 мм (85,0- 73,3), при 15° - 11,3 (89,8 -78,5) и при 20° - 10,3 (89,8 - 79,5), Эти данные показывают, что при длительной экспозиции в условиях оптимальных температур (15 - 20й) скорость роста разных штаммов нивелируется, в то время как при низких температурах (5 - 10°) штаммовые различия растут. Огсюда следует, что мы может наблюдать различия между штаммами по толерантности к низким, но не к высоким температурам. Этот вывод подтверждается отсутствием роста всех штаммов при температуре 25°.

Диаметры колоний (мм) у изолятов Р. т/емат после инкубации в течение 10 дней при разных температурах. Измерения проводились в трех ловторностях. Приводятся средние значения и сташиртные отклонения.

Штамм Темпе ратура

5 "С [ 10°С 15 "С 20 "С

1ИКЗ 23,0*2,2 29,0.1:1.0 40,5*1,3 53,5*3,1

1НК4 29,5*2,1 32,5*2Л 41,8*2,1 51,8±4,1

1СОСК22 24.8*2,1 31,8*3,0 40,0*1,4 47,5*3,0

1СОСК36 25,0*3,0 29,5±1,3 39,0*2,2 42,3*6,3

1СОСК31 21,0*2.0 28,5*3,0 40,5±1,3 53,5±5,1

1Меос11 17,8*2,2 22,5*2,4 29,5±1,3 39,0*2,2

1Мвос12 19,3*5,1 24,5*1,2 33,5*1,3 40,5*1,3

8Ирк40 23,341,25 34,0*2,0 54,5*4.1 41,5*3,0

8Ирк5 21,5*1,3 31,5±1,3 36,0*2,0 44,5±2,4

7ХК50 20,5-11,3 31,5±2,0 50,5*2,1 44,5*4,0

Т16 22,3*2,2 22,3*2,2 36,8*3,0 43,3±2,5

Т14 17,8=3,0 22,8*2,0 33,3*4,1 42,5*2,1

МурЗ.1,01 12,5±3,1 29.5*1,3 37,3*2,0 38,3*2,2

Мур 1019-01 21,5*3,0 30,5*1,3 36,8*1,25 41.3±2,2

Мур8.1.01 21,5*1,3 33,0*2,0 38,0*2,2 42,8*1,5

Таблица 13,

Диаметры колоний (мм) у изолятов Р. т/с.чшт после инкубации в течение 20 дней при разньк температурах. Измерения проводились в трех ловторностях. Приводятся средние значения и стандартные отклонения.

Штамм Темпе ратура

5Х 10°С 15 "С 20 "С

1ИКЗ 39,3± 2,5 77,3*2,5 84,3*1,0 87,8*2,6

1ИК4 39,0± 3,0 76,3*2.0 83,0*2,2 89,3*1,5

1СОСК22 31,5* 1,3 75,0*4,0 86,3*2,1 86,8*2,0

1СОСК36 36.8* 2,5 77,3*2,6 65.5*4,2 88.0*2,0

1СОСК31 40.0* 3,6 76,3±3,0 84,5*3,4 87,3*2,2

1Мвос11 45,0* 1,0 78,0*2,6 84,0*3,0 88.5±!,3

1М»ос12 39,0*2,2 82,5*2,4 88,5*1,3 87,5*1,3

8Ирк40 72,5* 2,0 80,5*1,3 89,8*0,5 88,8*1,2

8Ирк5 61,5* 3,1 85,0*3,2 88,8*1,5 88,5*1,3

7ХК50 77,3*2,8 83,0*2.0 87,3*2,0 88,5*2,0

Т16 35,8* 3,1 82.3*3,3 85.5*2,6 85,8*2,2

Т14 40,0± 2,2 81,8*2,2 87,0*2,0 87,8*2,2

МурЗ 3.0! 36,8* 2,0 81,0*2,2 83,8*2,6 89,75*0,5

МурЮ19-01 35,0* 3,0 71,3*4,6 78,5*2,6 79,5*7,0

Мур8.1 01 37,3± 3,1 80,8*3,3 85,5*2,6 88,5*2,4

Табл. 14

Сравнение изолятов Р. ¡п/еШпх из различных регионов России по линейному росту на овсяном агаре при различных температурах. Данные (значения НСР, указывающие на наличие достоверного различия) получены посредством программы БТЯАХ,

По температуре по штаммам по температуре и штаммам

наличие различия HCPooi Наличие различия НСРо.о) наличие различия НСР»,,,

сравнение по всем штаммам после роста через 10 дней + | ~1,79 | + | 0,89 | + \ <Х80

сравнение по группам штаммов из регионов после роста через 10 дней + | 1,88 | + | 1.53 \ + | 1,53 сравнение по всем штаммам после роста через 20 дней

+ Т 2,01 | + | 1,00 | + j 1.00

сравнение по группам штаммов из регионов после роста через 20 дней + | 1,86 | + | 1,52 | + 1 1.52

Дисперсионный анализ показал, что все изучаемые факторы штаммы, температура и географическое происхождение - оказывают достоверное влияние на линейный рост (табл. 14). Это позволяет объединить группы штаммов из отдельных регионов (Юг, Центр, Сибирь и Север) и сравнить средние их показатели между собой (рис. 2, 3).

Анализ рис, 2 свидетельствует, что штаммы из Сибири лучше других штаммов адаптированы к росту при низких температурах (10 и особенно 5"С). Скорость роста при 15 и 20"С у них почти одинакова в отличие от штаммов из других регионов, которые при 20°С растут интенсивнее, чем при I5UC.

На рис. 3 показана динамика скорости роста прн разных температурах. Как видно, штаммы из Сибири по скорости роста значительно превышали штаммы из других местностей в условиях роста

Рис. 2. Скорость роста штаммов Р. «у/сл/ат при разныч температурах

прм ГС

ао ■

го

Врем* лряникубацни, дн^и

При 10°С

эо

эа

70

5 60 £

£ 50

; ■ ¿-ГЙ: ■' Ч «у ■ ^ -«- ™

: А'.;' ■Л,',:'.-: Ч5Л.'-Д''I..1:. В г ~

Юг

Центр ' Сибирь :

*** - Север .

^ : Г^г'

Время првннкубац**, гс^и

Рис. 2 (продолжение)

При 15"С

90

60

Е *> и

I во 8

| И &

| 40 Ч 30 20 10

- — ЮГ

--Цви-Ф

-Сиби№ |

° т 20

врем» пре инкубации, дигй

При 10°С

100 90 «О 70

и I I ".........."

> Г!;":.;-Л

_

. .Х-!

"■Г.

ж,-мЯР-'■¿^С^ЗД'&'Ч; —*г— тоирь 4 ¡.¡г .- вьй к.? .ЙГ.^,-"'"; к... ^.-■.■.^-'г-:

^Сибирь Каг

»п. ы- -и , .

- >• ■ 'Ус -¿„«¡Л ¡й,м; ^'Л.!'«.1. '-"•г5!""

______ . ;.......- —...........

' " """ '

10 20 Вреиа преинкубацни, дней

И

Рис. 3. Влияние температуры на скорость линейного роста Р. щ(Ыат различных регионов Российской Федерации.

при температуре 5°С, незначительно превышали другие штаммы при температуре 10 н 15"С и практически не отличаются при температуре 20Т.

Таким образом, по показателю линейной скорости роста мопс но выделить штаммы из Сибири (Иркутска и Хабаровска), Они удовлетворительно растут при низких температурах (5 и ЮТ), а оптимальная для других штаммов температура 20°С не имеет для их роста существенных преимуществ по сравнению с температурой 15"С. Штаммы из других регионов значительно не различались по скорости линейного роста. Более низкая скорость роста штаммов из Мурманской области при всех исследованных температурных режимах, возможно, объясняется тем. что фнтофтороз картофеля появился там совсем недавно, по-видимому, вследствие глобального потепления, и находится в состоянии некоторого угнетения. Отсутствие существенных различий между штаммами из таких удаленных регионов, как Кольский полуостров н Северный Кавказ, отчасти можно объяснить завозным происхождением картофеля (а, следовательно, и Р. infestans) в этих регионах, вследствие чего штаммы не успевают адаптироваться к условиям жизни в данном регионе. В Сибири, как показали проведенные ранее исследования в нашей лаборатории, вследствие выращивания картофеля собственным посевным материалом, распространены стабильные, адаптированные к местным условиям (поздне весенний и раннеосенний возврат холодов) клоны возбудителя фитофтороза.

Автор глубоко признательна Профессору Ю, Т. Дьякову (МГУ) за общее руководство работой, С. Н, Еланскому и И. Н. Козловской (ВНИИФ) за существенную помощь в работе с молекулярными маркерами и расами, а также А. Н. Смирнову (МСХА) за существенную помощь в работе с ооспорамн. Работа выполнена при частичном финансировании грантами МНТЦ 1640 и РФФИ 0200481031,

Выводы

1. Тины спаривания Л1 и А2 встречались в популяциях в сравнимых соотношениях. Ооспоры встречались лишь в некоторых образцах, как правило, редко. Можно полагать, что в популяциям присутствует нерегулярное половое размножение. Об этом свидетельствует соостветствис частот аллелей пептидазы уравнению Харди-Вайнберга.

2. В популяциях из Ставропольского края обнаружен высокий процент самофсргильных изодятов и наибольшая встречаемость ооспор.

3. В популяциях был выявлен различный уровень устойчивости к феннламиду металакенлу. Большинство проверенных изолятов )'. ixfestons из Ингушетии и Северной Осетин были чувствительны к этому фунгициду. В популяции из Ставропольского края преобладали устойчивые и среднеустойчивые изолягы.

4. В популяциях преобладали «сложные» картофельные расы с 7-10 генами вирулентности. Простые расы встречались редко. Также былн обнаружены томатные расы ТО и Т1. Во всех популяциях преобладала раса то, ц Ииушетии расы ТО и Т1 встречались в сравнимом соотношении, что свидетельствует о роли томатов в инфекции картофеля.

5. В популяциях были обнаружены 2 аллельных состояния локуса f'ep-I и Л генотипа по локусу i'ep-2. Все исследованные нзоляты были мономорфныпо локусу (!рК они имели генотип 100/100.

6. Мы обнаружили в популяциях 2 галлотипа митохопдриальной ДНК -1а и На. Гаплотип lb обнаружен не был.

7. Между штаммами /', infi'Mcms из Кавказа и других регионов России были обнаружены различия в частотах аллелей нейтральных локусов и по скорости линейного роста при различных температурах.

Список работ, «публикованиых по теме диссертации

1. Еланский С,Н, Смирнов А.Н .Кравцов А С, Дьяков Ю Т.. Козловская И.Н., Козловский Б.Е,, Морозова Е В., Аматханова Ф.Х. Популяции РНу!орЫЬога т/еъШт п Европейской части России // Первая Всероссийская конференция по иммунитету растений к болезням и вредителям. Научные материалы, Санкт-Петербург, 2002. -С.81-82.

2. Аматханова Ф. X., Кузнецов С. А., Смирнов А. Н. Особенности образования оослор РЬуЮ/ЯШюга т/емат в Южных регионах России I! Доклады ТСХА. -2003 - Выпуск 275, -С, 138-143.

3 Аматханова Ф. Х„ Дьяков Ю, Т., Петрунина Я. В , Победннская М.А, Еланский С Н, Козловская И. Н, Козловский Б. Е., Морозова Е.В., Смирнов А. Н, Популяции РЬутрЫЫ/га т/еьшт на Северном Кавказе // Микология и фитопатология. - 2004. - Т. 38. № 3.

4. Аматханова Ф. X., Дьяков Ю. Т., Еланский С. Н Сравнение штаммов 1'Иу1ор1>1!юга т/ея1а».\ из разных регионов России по способности к линейному росту при разных температурах Л Сборник материалов Юбилейной конференции «Микология и альгология» М МГУ, 2004.

5, Аматханова Ф. X., Дьяков 10. Т., Еланский С Н. Сравнительный анализ Севсрокавказких популяций 1'ку1орЪ1к<>га ¡и/мшпм Н Сборник материалов Юбилейной конференции «Миколстмя и альгология», М„ МГУ, 2004.

Отпечатано в отделе оперативной печати Геологического ф-та МГУ Тираж (£(? экз. Заказ Ха 8

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Аматханова, Фатима Хазировна

Введение.

Цели и задачи работы.

1. Обзор литературы.

1.1. Таксономический статус P. infestans. Историческое значение этого патогена.

1.2. Рост мицелия. Образование и прорастание спорангиев Р. ф infestans

1.3. Образование ооспор P. infestans.

1.4. Популяционные исследования P. infestans.

1.5. Исследования фитофтороза на Северном Кавказе.

2. Материалы и методы.

2.1. Сбор фитофторозных образцов и выделение из них изолятов Р. infestans.

2.2. Определение типов спаривания изолятов P. infestans.

2.3. Выявление ооспор P. infestans.

2.4. Определение отношения к металаксилу изолятов

P. infestans.

2.5. Определение генов вирулентности к картофелю изолятов Р. infestans.

2.6. Определение томатных рас для изолятов P. infestans.

2.7. Изоферментный анализ.

2.8. Определение гаплотипов митохондриальной ДНК.

Щ 2.9. Изучение линейного роста изолятов P. infestans.

2.10. Статистический анализ.

3. Полученные результаты.

3.1. Характеристики популяций P. infestans на Северном Кавказе.

3.2. Сравнение штаммов P. infestans со штаммами из других регионов Российской Федерации по способности к линейному росту.

4. Обсуждение результатов.

4.1. Статус исследованных популяций P. infestans на Северном Кавказе. Сравнение с популяциями из других регионов Российской Федерации.

4.2. Сравнение популяций P. infestans на Северном Кавказе с популяциями из других высокогорных регионов мира.

4.3. Сравнение кавказских штаммов P. infestans по способности к линейному росту при различных температурах.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика популяций Phytophthora Infestans на картофеле в некоторых регионах Северного Кавказа"

На территории Северного Кавказа картофель имеет большое значение. Для населения он представляет собой важнейший стратегический пищевой ресурс в регионе, особенно учитывая сложную экономическую ситуацию.

Фитофтороз на Северном Кавказе по-прежнему остается одним из самых опасных заболеваний картофеля. Известны случаи, когда потери урожая достигали 100%. Последние годы отмечены вспышки болезни в районах, где значение заболевание картофеля фитофторозом было невелико, а именно в Республике Ингушетия, Кабардино-Балкарии, Дагестане и Северной Осетии.

Поэтому защита картофеля от фитофтороза остается одним из приоритетных направлений развития сельского хозяйства в регионе.

Основная стратегия защиты картофеля включает в себя сочетание выращивания устойчивых сортов и химического метода. Однако сейчас можно сказать, что эффективность этих средств имеет временный характер. P. infestans преодолевает резистентность картофеля, уровень устойчивости возбудителя к системным, а иногда и к контактным фунгицидам может возрастать. Поэтому популяционные исследования возбудителя фитофтороза не утрачивают своей актуальности. Благодаря им практики во всех регионах России получают точную информацию о структуре популяций P. infestans и ее потенциальных возможностях. Работы в этой области признаны мировым сообществом.

Представляемая диссертационная работа включает в себя результаты популяционных исследований P. infestans в Ингушетии, Северной Осетии и Ставропольском крае, которые можно сравнивать с результатами из других регионов России и мира. Мы надеемся, что наш вклад в изучение возбудителя фитофтороза позволит усовершенствовать меры защиты картофеля от этого опасного заболевания на территории Северного Кавказа.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Цель настоящего исследования - определение популяционной структуры P. infestans на территории Ингушетии, Северной Осетии и Ставропольского края.

Задачи исследования:

1. Изучение встречаемости типов спаривания в исследуемом регионе.

2. Изучение устойчивости к системному фунгициду металаксил у изолятов P. infestans, собранных на территории Северного Кавказа.

3. Определение гаплотипов митохондриальной ДНК изолятов Р. infestans, собранных на территории Северного Кавказа.

4. Определение изоферментного спектра на основе аллелей локусов фосфоглюкоизомеразы (Gpi) и пептидазы (Рер-1 и Рер-2).

5. Изучение встречаемости ооспор в природных образцах картофеля, представляющих исследуемые полевые популяции Р. infestans на Северном Кавказе.

Определение расового состава для изолятов P. infestans, собранных на Северном Кавказе.

Сравнение некоторых кавказских штаммов со штаммами из других регионов по линейному росту при разных температурах.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Микология", Аматханова, Фатима Хазировна

выводы

Исследования популяций на Северном Кавказе позволили сделать следующие выводы.

1. Типы спаривания А1 и А2 встречались в популяциях в сравнимых соотношениях. Ооспоры встречались лишь в некоторых образцах, как правило, редко. Можно полагать, что в популяциях присутствует нерегулярное половое размножение. Об этом свидетельствует соостветствие частот аллелей пептидазы уравнению Харди-Вайнберга.

2. В популяциях из Ставропольского края обнаружен высокий процент самофертильных изолятов и наибольшая встречаемость ооспор.

3. В популяциях был выявлен различный уровень устойчивости к фениламиду металаксилу. Большинство проверенных изолятов Р. infestans из Ингушетии и Северной Осетии были чувствительны к этому фунгициду. В популяции из Ставропольского края преобладали устойчивые и среднеустойчивые изоляты.

4. В популяциях преобладали «сложные» картофельные расы с 7-10 генами вирулентности. Простые расы встречались редко. Также были обнаружены томатные расы ТО и Т1. Во всех популяциях преобладала раса ТО, в Инушетии расы ТО и Т1 встречались в сравнимом соотношении, что свидетельствует о роли томатов в инфекции картофеля.

5. В популяциях были обнаружены 2 аллельных состояния локуса Рер-1 и 3 генотипа по локусу Рер-2. Все исследованные изоляты были мономорфны по локусу Gpi, они имели генотип 100/100.

6. Мы обнаружили в популяциях 2 гаплотипа митохондриальной ДНК - 1а и Па. Гаплотип lb обнаружен не был.

7. Между штаммами P. infestans из Кавказа и других регионов России были обнаружены различия в частотах аллелей нейтральных локусов и по скорости линейного роста при различных температурах.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор глубоко признательна профессору Ю. Т. Дьякову (МГУ) за общее руководство работой, С. Н. Еланскому и И. Н. Козловской (ВНИИФ) за существенную помощь в работе с молекулярными маркерами и расами, а также А. Н. Смирнову (МСХА) за существенную помощь в работе с ооспорами. Работа выполнена при частичном финансировании грантами МНТЦ 1640 и РФФИ 0200481031.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные данные позволили достаточно полно охарактеризовать популяционную структуру P. infestans на Северном Кавказе. Они оригинально и в то же время существенно дополняют результаты, полученные ранее в НИИ горного и предгорного сельского хозяйства (НПО «Горное»).

Наши результаты можно использовать для совершенствования прогноза фитофтороза на Северном Кавказе, а также совершенствования мероприятий по интегрированной защите растений в регионе. В этом аспекте представляет интерес довольно низкий уровень устойчивости к фениламидам в Северной Осетии и Ингушетии.

Представляет интерес и сравнение кавказских популяций Р. infestans и популяций возбудителя фитофтороза картофеля из других регионов. Нам не удалось обнаружить идентичные популяции в других горных регионах мира (Мексика, Перу, Шотландия). Однако мы полагаем, что этот вопрос представляет большой интерес для последующих исследований. Уже сейчас обращает на себя внимание тот факт, что и в Мексике, и на Кавказе типы спаривания А1 и А2 встречались в сравнимом соотношении. По исследуемым молекулярным маркерам кавказские популяции P. infestans были сходны с отдельными популяциями из других регионов России. Это может свидетельствовать о значительных миграционных процессах возбудителя фитофтороза картофеля на территории страны.

Нам удалось обнаружить свидетельства регулярного полового размножения P. infestans в исследуемом регионе (соответствие частот молекулярных маркеров уравнению Харди-Вайнберга. Подтвердилось и присутствие ооспор, обнаруженных в предшествующих исследованиях (Политыко, 1994).

Наше исследование поставило и много вопросов. Среди них следует особо указать роль томатов в поражении фитофторозом, для того, чтобы сравнить ее с ситуацией, сложившейся в Подмосковье и других регионов РФ.

В условиях Северного Кавказа фитофтороз до сих пор остается серьезной и нерешенной проблемой. Ее практическое решение связывали с усилением применения химического метода защиты картофеля. Однако обратная связь защиты с данными по популяционной структурой возбудителя была недостаточной, а в ряде регионов отсутствовала. Мы полагаем, что наше исследование - один из первых шагов в устранении этих пробелов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Аматханова, Фатима Хазировна, Москва

1. Алтухов Ю.ГТ. Генетические процессы в популяциях // М.: Наука, 1983.-279 с.

2. Аматханова Ф. X., Кузнецов С. А., Смирнов А. Н. Особенности образования ооспор Phytophthora infestans в Южных регионах России // Доклады ТСХА. 2003. - Вып. 276. - С. 138-143.

3. Аматханова Ф. X., Петрунина Я. В., Побединская М. А., Еланский С. Н., Козловская И. Н., Козловский Б. Е., Морозова Е. В., Смирнов А. Н. Популяции Phytophthora infestans на Северном Кавказе // Микология и фитопатология. 2004. - Т. 38. № 3. В печати.

4. Багирова С. Ф. Картирование Sl-локуса хромосомного гетероморфизма у фитопатогенного гриба Phytophthora infestans (Mont) de Вагу // Генетика. 1999. - Т. 35. - № 7. - С. 873-877.

5. Багирова С. Ф., Дьяков Ю. Т. Об участии ооспор Phytophthora infestans в весеннем возобновлении инфекции фитофтороза томата // С.х. биология. 1998. - №3.- С.69-71.

6. Борисенок А. Б. Расовый состав Phytophthora infestans (Mont.) de Вагу, в годы, различающиеся по метеорологическим условиям //

7. V Всезоюзн. совещ. по иммунитету растений. Киев.- 1969.- Т. 4, № 6. С.292-295.

8. Бордукова М.В. Зимовка P. infestans в условиях Московской области // Вестник с.-х. наук. 1940. - Вып. 3. - С. 20-26.

9. Букасов С.М., Камераз А.Я. Селекция и семеноводство картофеля //Ленинград, Колос. 1972. С. 358.

10. Вершинин Б. М. Особенности технологии получения оздоровленного от патогенов семенного материала картофеля в условиях предгорной зоны Северного Кавказа // Автореферат диссертации на соискание ученой степени к.с.х.н. Кисловодск, 2001.

11. Виноградова Н.В., Катаева О.Е. Картофель в Северной Осетии. Дзауджикау. 1953. - С. 65.

12. Воробьева Ю.В., Кваснюк Н.Я., Гриднев В.В. и др. Защита картофеля от фитофтороза в системе семеноводства // Защита растений. Москва -1991. - №5. - С. 17-20.

13. Деревягина М. К. Резистентность Phytophthora infestans (Mont.) de Вагу к фунгицидам и пути ее преодоления // Диссертация на соискание ученой степени к. б. н. МГУ: М.,-1991.

14. Дорожкин Н.А., Вельская С.И. Перезимовка, источники инфекции и цикл развития Ph. infestans (Mont) de Вагу // Микология и фитопотология. 1975. - Т. 9. - Вып. 5. - С. 405 - 408.

15. Дорожкин Н. А., Ремнева 3. И. Вельская С. И., Псарева В. В. Фитофтороз картофеля и томатов // Минск. Ураджай. 1976. - 222 с.

16. Дорохова Н. А. Сравнительное изучение физиологии питания грибов Phytophthora infestans de Вагу и Pythium de Barianum Hesse // Тр. Инст. Физ. Раст. 1940 - Т. III. - Вып. 1. - С. 213-236.

17. Дьяков Ю. Т. Жизненные стратегии фитопатогенных грибов и их эволюция // Микология и фитопатология. 1992 - Т. 26. - С. 309318.

18. Дьяков Ю.Т. Популяционная биология фитопатогенных грибов // М. Изд. Дом «Муравей»,- 1998,- 381 с.

19. Дьяков Ю. Т., Ашайе А., Вайнштейн В. М. О статусе "томатных" рас Phytophthora infestans (Mont) de Вагу // Микология и фитопатология. 1975. - Т. 9. - С. 272-282.

20. Дьяков Ю. Т., Виштынецкая Т. А. О мутантах Phytophthora infestans (Mont.) de Вагу, устойчивых к лекарственным веществам // Вестник Московского Университета.-1973.- №5.- С. 57-60.

21. Дьяков Ю. Т., Долгова А. В. Вегетативная несовместимость у фитопатогенных грибов // МГУ. Москва. 1995. - 160 с.

22. Дьяков Ю. Т., Долгова А. В., Рыбакова И. Н. Оценка резистентности возбудителя фитофтороза картофеля к фунгициду металаксилу// С-х. биология.-1988Ю-№ 1,- С.-135-139.

23. Дьяков Ю. Т., Долгова А. В., Рыбакова И. Н., Багирова С. Ф. Дивергенция популяций фитопатогенного гриба Phytophthora infestans (Mont.) de Вагу в связи со специализацией к растениям-хозяевам // Журнал общей фитопатологии. 1994 - Т. 55. - С. 179188.

24. Дьяков Ю. Т., Кулиш В. Б. Генетическое исследование штаммов Phytophthora infestans (Mont.) de Вагу, полученных в результате попарного выращивания мутантных культур // Генетика. 1979 - Т. XV. С. 49-55.

25. Еланский С.Н., Смирнов А. Н., Долгова А.В., Дьяков Ю.Т. Популяции Phytophthora infestans в Московской области I. Системы размножения // Микология и фитопатология. 1999а. - Т.ЗЗ, вып.5,-С. 343-352.

26. Еланский С.Н., Смирнов А. Н., Багирова С.Ф., Дьяков Ю.Т. Популяции Phytophthora infestans в Московской области И. Сравнительная структура популяций, паразитирующих на картофеле и томатах // Микология и фитопатология. 1999b. Т.ЗЗ, вып.5.- С. 353359.

27. Кайданов JI.3. Генетика популяций. М. Высшая школа. 1996.

28. Лаврова О. Л., Еланский С. Н. Транспозоны P. infestans. В печати. 2003.

29. Мэгарран Э. Экологическое разнообразие и его изменение. М. Мир. 1992.

30. Новотельнова Н. С. Фитофторовые грибы // Ленинград. Наука. -1974.-205 с.

31. Патрикеева М. В. Образование хламидоспор у Phytophthora infestans (Mont.) de By // Микол. и фитопатол. 1979. - Т. 13. - С. 333337.

32. Политыко В. А. Биологические основы развития возбудителя фитофтороза картофеля Phytophthora infestans (Mont.) de Вагу в Северной Осетии и обоснование мер борьбы // Автореферат кандидатской диссертации / М., 1994.

33. Смирнов А. Н. Популяционная структура фитопатогенного гриба Phytophthora infestans (Mont.) de Вагу в Московской области в 19911051996 годах // Диссертация на соискание ученой степени к.б.н. / М., МГУ, 1996.

34. Смирнов А.Н. Ооспоры Phytophthora infestans II Микол. и фитопатол. 2003. - Т 76, вып. 1. - С. 3-21.

35. Смирнов А.Н., Кузнецов С.А. Встречаемость и морфология ооспор в природных популяциях Phytophthora infestans в Московской области // Известия ТСХА. 2001. - Вып. 4. - С. 116133.

36. Bohnen К. Ein Verfahren zur Anzucht in vitro von Phytophthora infestans und die Verwendung des Pilzes im Sporenkeimtest zur Mittelprufung // Phytopathologishe Zeichshrift. V. 46. - P. 199-206.

37. Carter D. A., Archer S. A., Buck K. W., Shaw D. S., Shattock R. C. Restriction fragment length polymorphisms of mitochondrial DNAof Phytophthora infestans// Mycological Research.- 1990.- Vol. 94.-P. 1123-1128.

38. Clinton G. P. Oospores of potato blight, Phytophthora infestans // Connecticut Agricultural Experimental Station Report of the Botanist 1909-1910. -P. 753-774.

39. Cohen Y., Farkash S., Reshit Z., Baider A. Oospore production of Phytophthora infestans in potato and tomato leaves // Phytopathology. -1997.-V. 87.-P. 191-196.

40. Cooke D. E. L., Young V., Birch P. R. J., Toth R., Gourlay F, Day J. P., Carnegie S. F., Duncan J. M. Phenotypic and genotypic diversity of Phytophthora infestans populations in Scotland (1995-1997) // Plant pathology. 2003. - Vol. 52. - P. 181-192.

41. Crosier W. Studies in the biology of Phytophthora infestans (Mont.) de Bary // Cornell University Agricultural Experimental Station Memoir. -1934.- № 155.-40 p.

42. Davidse L. C. Resistance to acilalanines in Phytophthora infestans in the Netherlands // Bulletin OEPP/EPPO bulletin. 1985. - V. 15. - P. 403-409.

43. Davidse L. С., Danial D. L., van Westen C. J. Resistance to metalaxyl in Phytophthora infestans in the Netherlands // Bulletin OEPP/EPPO Bulletin 1985 - V. 15. - P. 403-409.

44. Drenth A., Tas I. C. Q., Govers F. DNA fingerprinting uncovers a new sexually reproducing population of Phytophthora infestans population in the Netherlands // European Journal of Plant Pathol. 1994. - V. 100.-P. 97-107.

45. Elansky S. N., Smirnov A. N. Second locus of Peptidase as a new marker for genetic investigation of Phytophthora infestans II Botanika Lithuanika. 2003. В печати.

46. Erwin D. C., Ribeiro О. K. Phytophthora diseases worldwide. APS Press. 1996.-562 p.

47. FRAC methods for monitoring fungicide resistence. Bull.OEPP. Oxford etc. 1991.- V.21,№2. P.291-354.

48. Galindo J., Gallegly M. E. The nature of sexuality of Phythophthora infestans II Phytopathology.- I960.- Vol.50.- P. 123-128.

49. Gallegly M. E., Galindo G. Mating types and oospores of Phytophthora infestans in nature in Mexico // Phytopathology. 1958. -Vol. 48. - P. 274 -277.

50. Goodwin S. B. DNA polymorphism in Phytophthora infestans: the Cornell experience // Phytophthora/ Ed.: J. A. Lucas,

51. R. C. Shattock, D. S. Shaw, L. C. Cooke.- Cambridge: Univ. Press.- 1990.-P. 234 -241.

52. Goodwin S. В., Spielman L. J., Matuszak J. M., Bergeron S. N., Fry

53. W. E. Clonal diversity and genetic differentiation of Phytophthora %infestans populations in Northern and Central Mexico // Phytopathology. 1992.-Vol. 82.- P. 955-961.

54. Goodwin S. В., Cohen B. A., Fry W. E. Panglobal distribution of a single clonal linage of the Irish potato famine fungus // Proc. Nat. Acad. Sci. United States. 1994. - Vol. 91. - P. 11591-11595.

55. Goodwin S. В., Cohen В. A., Deahl K. L., Fry W. E. Migration from northern Mexico as the probable cause of recent genetic changes in populations of Phytophthora infestans in the United States and Canada // Phytopathology. 1994. - Vol. 84. - P. 553-558.

56. Griffith G.W., Shaw D.S. Polymorfism in Phytophthora infestans: four mitochondrial haplotypes are detected after PCR amplification of DNA from pure culture or from host lesion // Applied and Env. Microbiol.- 1998.- Vol.64. -№ 10.- P.4007-4014.

57. Harrison J. G., Lowe R. Nature of quantitative resistance of potatoes to Phytophthora infestans. Scottish Crop Research Institute // Annual Report for 1989. P. 60.

58. Hebert P. D. N., Beaton M. J. Methodologies for allozyme analysis using cellulose acetate electrophoresis. A practical handbook // Guelph, Ontario, An educational service of Helena laboratories. 1993.

59. Judelson H. S. Chromosomal heteromorphism linked to the mating type locus of yhe oomycete, Phytophthora infestans II Mol. Gen. Genet. -1996.-Vol. 252.-P. 155-161.

60. Judelson H.S., Spielman L.J., Shattock R.C. Genetic mapping and non-mendelian segregation of mating type loci in the Oomycete, Phytophthora infestans II Genetics.-1995. V.141.- P.503-512.

61. Kessel G.J.T., Turkensteen L.J., Schepers H.T.A.M., Van Bekkum P.J., Flier W.G. P. infestans oospores in the Netherlands: occurence and effects of cultivars and fungicides. PPO-Special Report. - 2002. - № 8. -P. 203-209.

62. Ко W. H. Hormonal regulation of sexual reproduction in Phytophthora II J. Gen. Microb., 1980.- V. 116.- P. 459 463.

63. Levin A., Baider A., Rubin E., Gisi U., Cohen Y. Oospore formation by Phytophthora infestans in potato tubers // Phytopathology. 2001. -Vol. 91.-P. 579-585.

64. Melhus I. E. Hibernation of Phytophthora infestans in the Irish potato //Journ. ofagric. res. 1915. - V. 5. - P. 71-102.

65. Melhus I. E. Germination and infection with the fungus of the late blight of potato (Phytophthora infestans) // Wisconsin Agricultural Experimental Research Bulletin. 1915 - №37. - 64 p.

66. Minogue К. P., Fry W. E. Models for the spread of plant disease; some experimental results // 1983. Phytopathology. - V. 73. P. 11731176.

67. Mizibuti E. S. G., Fry W. E. Temperature effects on developmental stages of isolates from three clonal lineages of Phytophthora infestans II Phytopathology. V. 88. - 1998. - P. 837-843.

68. Murphy P. A. The binomics of the conidia of Phytophthora infestans (Mont.) de Bary // Scientiphic proceedings of the Royal Dublin Society (Series 2). -1922-V. 16.

69. Niederhauser J. S. Phytophthora infestans: the Mexican connection // In: Phytophthora. Eds J. A. Lucas, R. C. Shattock, D. S. Shaw, L. R. Cooke. Cambridge University Press, Cambridge. 1991. - P. 25-45.

70. Reuveny J., Eyal H., Cohen Y. Development of resistance to metalaxyl in Pseudoperonospora cubensis II Plant. Dis. 1983. - V. 64. P. 1108-1109.

71. Rottem J, Cohen Y., Putter J. Relativity of limiting and optimum inoculum loads, wetting duration, and temperatures for infection by Phytophthora infestans II Phytopathology. 1961. - V. 61. - P. 275-278.

72. Rubin E., Baider A., Cohen Y. Phytophthora infestans produces oospores in fruits and seeds of tomato I I Phytopathology. 2001. - Vol. 91.-P. 1074-1080.

73. Sansome E. . Reciprocal translocation, heterozygosity in heterothallic species of Phytophthora and its significance // Trans. Brit. Mycol. Soc. -1980.-V. 84. P. 87-93.

74. Shattock R. C. Studies on the inheritance of resistance to metalaxyl in Phytophthora infestans II Plant Pathology. 1988. - V. 37. - P 4 - 11.

75. Schoeber В., Ulrich J. Keimung der Sporangien von Phytophthora infestans (Mont.) de Bary auf Kartoffelblatt- und Knollengevebe // Pot. Res. 1985. - Vol. 28. - P. 527-530.

76. Spielman L. J. Isozymes and the population genetics of Phytophthora infestans II Phytophthora/ Ed.: J. A. Lucas, R. C. Shattock,

77. D. S. Shaw, L. C. Cooke.- Cambridge: Camridge Univ. Press.-1991.1. P. 234 -241.

78. Sujkovski L. S. Seasonal variation in sporulation of Phytophthora infestans//J. Phytopathology. 1986. - V. 117. - P. 160-172.

79. Sujkovski L. S. The influence of temperature on Phytophthora infestans (Mont.) de Bary//J. Phytopathology. 1987. - V. 120. - P. 271275.

80. Tooley P. W., Fry W. E., Villareal-Gonzalez M. J. Isozyme characterization of sexual and asexual Phytophthora infestans populations // J. Hered. 1985. - Vol. 76. - P. 431-435.

81. Tooley P. W., Therrien C. D, Ritch D. L. Mating type, race composition, nuclear DNA content and allozyme analysis of Peruvianisolates of Phytophthora infestans II Phytopathology. 1989. - V. 79. - P. 478-481.

82. Urech P. A., Shwinn F., Staub T. CGA 48988, a novel fungicide for the control of late blight, downy mildews, and related soil born diseases // Proc. Br. Crop. Prot Conf. Pests & Dis. 1977 - P. 623 - 632.

83. Whittaker S. L., Assinder S. J., Shaw D. S. Inheritance of mitochondrial DNA in Phytophthora infestans II Mycol. Res.- 1994.- V. 98 (5).1. P. 569 575.

84. Yamamoto M., Aoki S., Suzuki K. Induction of secondary zoosporangial formation in Phytophthora infestans II Translations of the Mycological Society of Japan. 1982. - V. 23. - P. 211-215.

85. Yamamoto M., Tanino J. Physiological studies on the formation and germination of sporangia of Phytophthora infestans (Mont.) de Bary // Forschungen auf dem Gebiet der Phlanzenankheiten (Kyoto). 1961 - V. 7 (2).-P. 7-32.