Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях кишечника

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, , Перунова, Наталья Борисовна

Введение.

Глава 1: Бактериально-грибковые ассоциации кишечника человека (Обзор литературы).

1.1. Видовая характеристика бактерий и грибов микрофлоры толстого кишечника человека.

1.2. Характеристика факторов вирулентности дрожжеподобных грибов рода Candida.

1.3. Ассоциации грибов рода Candida с другими микроорганизмами при патологических состояниях.

Глава 2: Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика культур микроорганизмов, используемых в работе.

2.2. Методы выделения и идентификации микроорганизмов.

2.3. Определение факторов вирулентности микроорганизмов.

2.3.1. Определение гемолитической активности бактерий.

2.3.2. Методика определения липолитической активности микроорганизмов.

2.3.3. Выявление ДНК-азной активности микроорганизмов.

2.4; Определение факторов персистенции микроорганизмов.

2.4.1. Методики определения антилизоцимной активности микроорганизмов.

2.4.1.1. Чашечный метод.

2.4.1.2. Кинетический метод.

2.4.2. Методика определения "антиинтерфероновой" активности микроорганизмов.

2.4.3. Методика определения антикомплементарной активности микроорганизмов.

2.4.3.1. Кинетический метод.

2.5. Метод определения антагонистической и бактериоциногенной активности микроорганизмов.

2.6. Методика определения антибиотикочувствительности исследуемых культур

2.7. Статистическаяобработка результатов.

Глава 3: Характеристика бактериально-грибковых ассоциаций кишечника человека.

Глава 4: Изменение биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях.

4.1. Методические подходы к сокультивированию микроорганизмов.

4.2. Изменение факторов персистенции аэробных бактерий при сокультивировании с грибами.

4.3. Изменение факторов персистенции анаэробных бактерий при сокульти-вировании с грибами.

4.4. Изменение факторов персистенции грибов при сокультивировании с аэробными бактериями.

4.5. Изменение факторов персистенции грибов при сокультивировании с анаэробными бактериями.

4.6. Изменение факторов вирулентности аэробных бактерий при сокультивировании с грибами.

4.7. Изменение бактериоциногенной активности кишечных палочек при сокультивировании с грибами.

4.8. Изменение липолитической активности грибов при сокультивировании с бактериями.

Глава 5: Влияние производственного штамма Saccaromyces boulardii на биологические свойства энтеробактерий.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях кишечника"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Организм человека - экологическая ниша для разнообразных микроорганизмов, заселяющих его биотопы. Микробиоценозы тела человека представляют собой сложные системы, которые отличаются не только чрезвычайной многокомпонентностью, но и разнообразным содержанием входящих в него представителей микрофлоры. Естественно, что при заселении биотопов макроорганизма между микробами складываются определенные взаимоотношения, которые отражаются на качественной и количественной характеристике того или иного микробного пейзажа (Ю.В. Несвижский, 1997). В этой связи весьма интересна концепция L.C. Hoskins, предложившего в 1993 году термин "базовая симбиотическая единица", которую он определил как наименьшее количество штаммов, способных совместно жить в конкретных условиях, в которых ни одна из составляющих эту ассоциацию культур микроорганизмов выжить не смогла бы.

Известно, что к наиболее сложному по составу микробиоценозу по праву относят микрофлору толстой кишки, где в 1 г содержимого определяется 17 различных семейств, 45 родов, свыше 400 видов микроорганизмов (Б.А.Шендеров, 1998, 1999).

Дрожжеподобные грибы входят в состав постоянной микрофлоры пищеварительного тракта, при этом наибольший процент колонизации (до 70%) наблюдается в толстой кишке (А.Ю. Сергеев, 2001, 2003). Инфекции, вызываемые грибами рода Candida, относятся к эндогенным, источником которых являются микроорганизмы на слизистых оболочках организма человека (А.Н. Маянский, 2000). С внедрением в клиническую практику лучевой терапии, стероидных гормонов, иммунодепрессантов, цитостатиков, парентерального питания возникла проблема оппортунистических микозов, которые вышли на "почетное место" среди госпитальных инфекций. Положение заметно ухудшилось в связи с эпидемией СПИДа, когда стало очевидно, что системные микозы принадлежат к числу наиболее тяжелых осложнений у иммунокомпрометированных больных (А.З. Смолянская, 1999). За последние 20 лет частота кандидозов выросла на 20%, а при инфекционно-воспалительных заболеваниях новорожденных в 7 раз (Г.А. Самсыгина, 1998). В большинстве случаев возбудитель высевался из очага инфекции не в монокультуре, а в комбинации с другими микроорганизмами. Известны ассоциации грибов рода Candida с Н. pylori при язвенной болезни желудка (Л.Г. Баженов, 1997), со стафилококками при аллергическом дерматите и хроническом тонзиллите (В.Г. Арзуманян, 1998, Р.Н. Реброва, 1979), стрептококками при бронхиальной астме (С.А. Корвяков, 2002) и т.д. Авторами данных работ проводились исследования по определению влияния грибов на факторы вирулентности бактерий, изменению их чувствительности к антибиотикам и динамику ростовых характеристик культур. Оказалось, что способность к заселению различных экологических ниш зависит от наличия у микроорганизмов определенного набора факторов персистенции (антилизоцимной, антикомплементарной, анти-бета-лизиновой активностей и других признаков), которые способствуют адаптации микроорганизма к защитно-регуляторным системам хозяина (О.В. Бухарин, 1996, 1999).

К сожалению, в настоящее время вопрос об изменении персистентных свойств бактерий и грибов в условиях их ассоциации остается открытым. Решение же его могло бы позволить раскрыть один из механизмов межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание микробиоценозов человека.

ЦЕЛЬ ИЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Цель настоящего исследования - определить видовой состав бактериально-грибковых ассоциаций кишечника человека и изучить изменение патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в условиях бактериально-грибковых ассоциаций.

Для достижения данной цели были поставлены и решены следующие задачи:

1: Изучить видовой состав и биологические свойства бактерий в условиях избыточной колонизации кишечника грибами рода Candida.

2. Разработать методические приемы для оценки взаимного влияния микроорганизмов-симбионтов в условиях бактериально-грибковых ассоциаций.

3. Оценить факторы персистенции у бактерий и грибов при их совместном культивировании in vitro.

4. Исследовать действие экзометаболитов производственного штамма S.boulardii ("Энтерол") на биологические свойства условно-патогенных эн-теробактерий.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Грибы рода Candida и определенные таксоны условно-патогенных могут образовывать ассоциации, в которых происходит изменение факторов персистенции микроорганизмов-симбионтов.

2) Инактивация факторов естественной резистентности макроорганизма, широко распространенная среди дрожжеподобных грибов и отражает их высокий адаптационный потенциал к местным защитным системам хозяина.

3) Применение S.boulardii для коррекции дисбиотических состояний основано на способности экзометаболитов дрожжевого грибка оказывать модифицирующее влияние на факторы персистенции, продукцию колицинов и антибиотикочувствительность условно-патогенных энтеробактерий.

Научная новизна

Охарактеризован видовой состав бактериально-грибковых : ассоциаций кишечника человека и выделены наиболее часто встречающиеся таксоны бактерий и грибов рода Candida в кишечнике у лиц с различной степенью дисбиотических изменений.

Обнаружено, что увеличение пролиферации грибов происходит при снижении колонизационной резистентности биотопа: уменьшении численности бифидобактерий и лактобацилл и при наличии в биоценозе определенных групп условно-патогенных бактерий (лактозонегативных, гемолитических кишечных палочек, клебсиелл, золотистых стафилококков).

Определена частота встречаемости и выраженности факторов персистенции у грибов и бактерий в зависимости от степени дисбактериоза. Установлено, что увеличение значения персистентных характеристик грибов и бактерий происходит с нарастанием глубины микроэкологических нарушений в кишечнике. Впервые представлены данные об инактивации факторов естественной резистентности макроорганизма различных видов грибов рода Candida и Rhodotorula.

Предложен метод сокультивирования бактерий и грибов, основанный на воздействии стерильных фильтратов ассоциантов на микроорганизмы-симбионты. Показано изменение факторов персистенции, вирулентности и колонизации микробов на модельных экспериментах изучения бактериально-грибковых ассоциаций in vitro. При совместном культивировании бактерий и грибов установлено, что эффект взаимного воздействия симбионтов на изменения их персистентных свойств и вирулентности, зависит от таксономической принадлежности микроорганизмов-ассоциантов. Представители инди-генной анаэробной микрофлоры снижали факторы персистенции грибов, но сами были устойчивы к их действию, что вероятно, можно рассматривать в качестве одного из механизмов обеспечения колонизационной резистентности биотопа.

Бактерии и грибы, находясь в ассоциации, обоюдно изменяют факторы патогенности: у бактерий происходит увеличение гемолитической и ДНК-азной активности, а у грибов - снижение липолитической активности.

Установлено модифицирующее действие экзометаболитов дрожжевого грибка S.boulardii на биологические свойства энтеробактерий, что объясняет корригирующее действие «Энтерола» при дисбиозах.

Практическая значимость работы

Полученные в работе данные расширяют теоретические представления о характере межмикробных: взаимодействий, определяющих формирование и поддержание микробиоценозов кишечника человека.

С целью выявления изменений факторов персистенции, вирулентности и колонизации в условиях бактериально-грибковых ассоциций разработан метод сокультивирования микроорганизмов in vitro. Данный способ может быть использован в работе научно-исследовательских учереждений и практических лабораторий при изучении межмикробных взаимодействий для отбора и тестирования штаммов пробиотиков.

Выявленный защитный механизм действия S.boulardii («Энтерол»), основанный на модифицирующем действии экзометаболитов сахарамицета на антилизоцимную, колициногенную активность и изменение чувствительности к антибиотикам условно-патогенных энтеробактерий. Полученные данные можно использовать для подбора эффективных схем коррекции дисбак-териоза кишечника.

Апробация работы

Основные результаты работы были доложены и обсуждены на:

- Ш-й и IV-й Всероссийских конференциях "Персистеция микроорганизмов" (Оренбург, 2000,2003)

- I Съезде микологов России (Москва, 2002)

-1 Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (Москва, 2003).

- X российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2003).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Объем и структура диссертационной работы

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Перунова, Наталья Борисовна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

В настоящее время проблема взаимодействия микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях актуальна, по крайней мере, в трех аспектах. Во-первых, при изучении изменения свойств микроорганизмов в патобиоце-нозах особенно при оппортунистических инфекциях, источником которых является собственная микрофлора человека. Во-вторых, всвязи с изучением механизмов и разработкой методов коррекции дисбиотических нарушений, что обусловлено широким применением препаратов пробиотиков, действие которых осуществляется при взаимодействии с другими микроорганизмами. И в-третьих, в общебиологическом аспекте. Это связано со стремительным развитием микроэкологии и изучением функциональных связей в микробиоценозах различных экониш: организма человека и животных, водных и почвенных экосистем.

В последние годы отмечается неуклонный рост оппортунистических инфекций, в том числе кандидозов, которые занимают лидирующее положение среди госпитальных инфекций (А.Н. Маянский, 2000). Источником оппортунистических микозов, как правило, является собственная микрофлора тела человека, основное количество которой сосредоточено в толстом кишечнике (В.Г. Кубась, 1997; В.И. Коноплев, 2002; АЛО. Сергеев, 2003; M.J. Kennedy, 1983). При кандидозных поражениях слизистых оболочек и бактериальных, инфекциях грибы часто выделяются в ассоциациях с бактериями, усугубляя инфекционный процесс (Р.Н. Реброва, 1979; Л.Г. Баженов, 1997; В.Г. Арзу-манян, 1998; С. А. Корвяков, 2002).

К сожалению, вопрос об изменении персистентных свойств бактерий и грибов в условиях ассоциаций остается открытым. В тоже время, его решение могло бы раскрыть механизмы межмикробных взаимодействий, определяющие формирование и поддержание микробиоценозов организма человека в норме и при различных патологических состояниях.

В настоящей работе предпринята попытка определить видовой состав бактериально-грибковых ассоциаций кишечника человека и изучить изменение патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в условиях бактериально-грибковых ассоциаций.

Для достижения данной цели мы изучили видовой состав бактерий в условиях колонизации кишечника грибами рода Candida, а также распространенность и выраженность факторов патогенности микроорганизмов при различной степени дисбиотических нарушений.

При бактериологическом обследовании кишечной микрофлоры было выявлено, что выделение грибов всегда сопровождалось обнаружением других видов условно-патогенных бактерий, и не обнаруживались в монокультуре. Известно, что увеличение глубины микроэкологических нарушений при дис-бактериозе кишечника сопровождается расширением видового состава и повышением показателя микробной обсемененности условно-патогенных микроорганизмов (Б.В. Пинегин, 1984; В.Н Красноголовец, 1989; В.М. Бонда-ренко, 1998). В основном, данные изменения касаются грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae и патогенных кокков. Но наряду с бактериальной флорой обычно происходит увеличение численности грибов рода Candida (В.Н. Красноголовец, 1989; В.Г. Кубась, 1997; Б.А. Шендеров, 1998; Л. А. Леванова, 2001).

Нам удалось выделить основные таксоны условно-патогенных факультативно-анаэробных бактерий, являющихся ассоциантами грибов рода Candida у лиц с различной степенью дисбиотических изменений в кишечнике. Основными ассоциантами грибов рода Candida при 1-2 степени дисбактериоза были: гемолитические кишечные палочки, клебсиеллы, золотистые стафилококки, неферм ентирующие грамотрицательные бактерии. При 3-4 степени дисбактериоза с Candida sp. чаще изолировали гемолитические и лактозоне-гативные кишечные палочки. Важно отметить, что гемолитические кишечные палочки обнаруживались в ассоциации с грибами как при легких, так и при более тяжелых степенях дисбактериоза кишечника. Возможно, это связано с особенностями трофических взаимодействий между этими микроорганизмами. Например, обладая гемолитическими свойствами, кишечная палочка способствует высвобождению железа из гема, который необходим для нормального роста и размножения грибов (R.A. Fratti, 1998).

Полученные данные позволяют предположить, что условия способствующие чрезмерному размножению дрожжеподобных грибов в кишечнике, связаны с развитием определенных видов бактерий-ассоциантов. Очевидно предшествующие дисбиотические нарушения в кишечнике, связанные с появлением и размножением подобных бактерий, приводят к изменениям микроэкологии биотопа, способствующим развитию грибов.

Вероятно, существование некоторых ассоциаций бактерий и грибов имеет "универсальный" характер и не зависит от конкретного биотопа. Так, обнаруженные нами при дисбактериозе кишечника ассоциации: грибов рода Candida с золотистыми стафилококками, кишечными палочками и нефер-ментирующими грамотрицательными бактериями ранее уже упоминались различными авторами, которые выявляли подобные ассоциации при инфекции? дыхательных путей и поражении кожных покровов (Н.Г. Васильева, 1967; Р.Н. Реброва, 1979; В.Г. Арзуманян, 1998; В.В. Вельский, 1999; А.З. Смолянская, 1999; Т.В. Соколова, 2002).

Дрожжеподобные грибы фекальной флоры были в основном представлены культурами С. albicans, которые преобладали над другими видами грибов рода Candida что согласуется с данными литературы (В.Г. Кубась, 1997, А.Ю. Сергеев 2ООО., В. Knatib, 1999). Выявленное нами наличие в составе кишечной микрофлоры дрожжевых грибов рода Rhodotorula подтверждает исследования В. Knatib (1999) и M.J. Kennedy (1983).

При различных степенях дисбиоза видовой состав грибов несколько различался. При более тяжелой степени дисбактериоза видовой состав грибов более разнообразен. Это может быть связано по мнению А.Е. Учеваткина (1998) с наличием дефицита неспецифицеских и специфических факторов защиты макроорганизма и снижением колонизационной резистентности в биотопе.

Дальнейшие исследования позволили определить частоту встречаемости и выраженность факторов персистенции у грибов и бактерий в зависимости от степени дисбиоза и впервые дать комплексную характеристику перси-стентных свойств грибов в зависимости от их видовой принадлежности. Установлено, что все грибы рода Candida проявляли антилизоцимную активность, а антикомплементарная активность выявлялась у 83,7±5,5% исследуемых культур. "Антиинтерфероновая" активность микроорганизмов отсутствовала у кишечных изолятов Candida spp. Оценивая полученные результаты следует отметить, что штаммы С. albicans проявляли более высокий уровень инактивации факторов естественной резистентности макроорганизма, чем другие виды. Известно, что С .albicans является наиболее патогенным видом среди дрожжеподобных грибов рода Candida, что проявляется в наличии у них широкого набора факторов вирулентности: адгезинов, протеолитических ферментов, липаз, фосфолипаз, морфологической изменчивости (I.A. Crithley, 1987; G.J. Merkel, 1988; R.A. Calderone, 1993; A.S. Ibrahim, 1995; H. Kaminishi, 1995; S.D. Kobayashi, 1998).

Из данных литературы известно, что С. albicans является ведущим возбудителем кандидозов (В.Г. Кубась, 1997; А.Н. Маянский; В.А. Горбунов, 2003; А.Ю. Сергеев, 2003). При кандидоносительстве данный вид в составе биотопа обнаруживается чаще, чем другие представители грибов рода Candida. Это может быть связано с обнаруженным нами высокой, по сравнению с другими видами грибов, способностью к инактивации факторов естественной защиты хозяина.

В последние годы возрастающий интерес к дрожжевым грибам Rhodotorula обусловлен увеличением частоты их выделения при различных патологических состояниях, особенно у пациентов с иммунодефицитами. Описаны случаи, когда грибы данного рода вызывали фунгемию (N. Kiraz, 2000; G. Simonis, 2001), менингит (О.Н. Gyaurgieva, 1996), эндофтальмит (А.В. Merkur, 2002), послеоперационного вентрикулит (F.E. Donald, 1988) и перитонит (J.R. de Zoysa, 2001). Однако в литературе отсутствуют данные о наличии каких-либо факторов патогенности у этих грибов. В условиях in vitro нами было обнаружено наличие липолитической активности у штаммов R. mucilaginosa и способности инактивировать лизоцим, комплемент, бактерицидный компонент препарата человеческого лейкоцитарного интерферона. Полученные результаты показали, что штаммы грибов рода Rhodotorula обладают набором свойств, позволяющих им инактивировать некоторые факторы естественной резистентности макроорганизма: лизоцим, комплемент, интерферон. Данные свойства, возможно, могут позволить грибам выжить в условиях антимикробного прессинга со стороны хозяина. Обладая липолитической активностью, Rhodotorula sp. приобретают способность адгезировать-ся к поверхности эпителия и эндотелия и распространяться по органам и тканям макроорганизма, как это было показана при исследовании адгезивной способности дрожжеподобных грибов рода Candida (A S. Ibrahim, 1995; N. Mago, 1990; M. Niewerth, 2001).

Было установлено увеличение персистентных характеристик грибов и бактерий с нарастанием глубины микроэкологических нарушений в кишечнике. Подобные изменения факторов персистенции бактерий при различных стадиях дисбактериоза были выявлены также в работах А.В. Валышева (1997). Полученные нами результаты подтверждают роль факторов персистенции условно-патогенных бактерий в обеспечении селективных преимуществ при колонизации различных биотопов организма человека. Таким образом, персистирующая условно-патогенная микрофлора при дисбактериозе кишечника, по-видимому, может являться источником эндогенного инфицирования внутренних органов и способствовать развитию кандидозов.

Вместе с тем, не отмечено различий в распространенности и выраженности факторов вирулентности бактерий и грибов при различной степени дисбиоза. Вероятно, это связано с относительно однородным составом изучаемых микробиоценозов. Грибы рода Candida чаще проявляли липолитическую активность, чем гемолитическую, лизоцимную и ДНК-азную активности. У условно-патогенных бактерий были изучены липолитическая, гемолитическая и ДНК-азная активности.

По сравнению с факторами персистенции, которые изменялись в зависимости от степени дисбактериоза, уровень факторов вирулентности был постоянным; Не исключено, что это обусловлено тем, что экспрессия факторов персистенции, в отличии от факторов вирулентности, позволяет микроорганизмам стабилизировать свое состояние в избранной экологической нише при различной степени дисбиоза (А.В. Валышев, 1997; С.В. Черкасов, 1998; О.В: Бухарин, 1999).

Одной из задач данной работы было изучение факторов персистенции и некоторых факторов вирулентности у бактерий и грибов при модельном сокультивировании in vitro. В настоящем исследовании была разработана методика сокультивирования бактерий и грибов, основанная на воздействии фильтратов штаммов-симбионтов на исследуемые культуры микроорганизмов.

Подобный способ имеет аналоги в литературных источниках. Авторами данных работ проводилось сокультивирование бактерий с последующим выделением внеклеточных продуктов метаболизма, влияющих на биологические свойства симбионтных штаммов (Черкасов, 2001; H.G. Klaerner, 1997; V. Pybus, 1998).

На наш взгляд эта методика является перспективной так как, во-первых, для ее осуществления не требуется специального оборудования, дорогостоящих материалов и метод технически прост в исполнении, что позволяет его широко использовать в практических лабораториях. Во-вторых, данный подход дает возможность определить механизм взаимовлияния микроорганизмов-симбионтов. Это связано с возможностью выделения сигнальных метаболитов, способствующих межмикробному взаимодействию, что может найти практическое применение для лечения и профилактики дисбиозов. На основании экспериментальных данных нами было выявлено изменение факторов персистенции бактерий и грибов при их сокультивировании. Так, при действии фильтратов грибов на факультативно-анаэробные бактерии отмечалось увеличение АЛА гемолитических, лактозонегативных кишечных палочек, клебсиелл и стафилококков. Способность к инактивации комплемента увеличивлась только у гемолитических Е. coli, а у других изучаемых групп факультативно-анаэробных бактерий оставалась без изменений. Среди облигатно-анаэробных бактерий увеличение персистентных свойств (АЛА, АКА) под действием грибов выявлено у анаэробных кокков, а снижение - у бактероидов. Бифидобактерии и превотеллы не изменяли изучаемых свойств под влиянием С. albicans.

Воздействующие фильтраты Klebsiella sp. и S. aureus снижали АЛА и АКА грибов рода Candida. Экзометаболиты гемолитических кишечных палочек - повышали АКА исследуемых штаммов грибов. Снижение факторов персистенции (АЛА, АКА) у Candida sp. наблюдалось при соинкубировании с экзометаболитами бифидобактерий, превотелл и бактероидов. Напротив, анаэробные кокки - увеличивали способность грибов к инактивации лизоцима и комплемента.

Изменение факторов вирулентости бактерий при сокультивировании с грибами, в основном, выражалось в увеличении гемолитической активности E.coli и ДНК-азной активности S.aureus. Бактериоциногения кишечных палочек увеличивалась под действием грибов у атипичных Е.соИ и снижалась у лактозопозитивных негемолитических эшерихий. Большинство факультативно-анаэробных грамотрицательных и грамположительных бактерий проявляли способность к снижению липолитической активности грибов.

Обобщая данные, полученные в результате модельного сокультивирования, следует отметить, что внутри бактериально-грибковых ассоциаций можно выделить несколько основных типов связей по направленности действия: • отсутствие изменений биологических свойств одного участника, но при этом изменение признака другого (С. albicans / Bifidobacterium sp.; C.albicans / Prevotella sp.; C.albicans / Klebsiella; C. albicans / лактозоне-гативные эшерихии),

• взаимное увеличение экспрессии признака у микроорганизмов-симбионтов (С. albicans / гемолитические кишечные палочки; С. albicans / анаэробные кокки),

• обоюдное снижение факторов персистенции у участников ассоциации (С. albicans / Bacteroides sp.),

• повышении экспрессии признака одного участника ассоциации, но при этом снижение свойств другого (С. albicans / S. aureus).

Существуют сведения о механизмах взаимодействия микроорганизмов, в бактериально-грибковых ассоциациях. Установлено, что в присутствии грибов бактерии интенсивнее продуцируют токсины (стафилококки, сальмонеллы, коринебакгерии) (Р.Н. Реброва, 1965; Л.В.Серебренникова, 1973; И.Л. Михно, 1976). Как известно, вирулентность наряду с другими признаками бактерий, генетически детерминирована (В.Г. Петровская, 1967). Доказано, что умеренные фаги способны приносить в бактериальные клетки генетическую информацию, кодирующую образование экзотоксинов у дифтерийных бактерий, стрептококков, стафилококков, кишечных палочек. Предполагается, что умеренные фаги, несущие фактор токсигенности, попадают и в клетки грибов рода Candida, а затем в условиях микробной ассоциации передают генетическую информацию о синтезе экзотоксина бактериям. Генетическими исследованиями многих авторов установлена связь вирулентности с изменением ряда биохимических процессов. Например, утрата некоторых ферментов, участвующих в синтезе необходимых для роста микробов метаболитов, приводит к снижению вирулентности на фоне отсутствия метаболитов. Так, стимулирующее действие грибов рода Candida на рост бактерий объясняется влиянием продуктов метаболизма грибов на бактерии (Н.П. Блинов, 1964; П.Н. Кашкин, 1968). Бактерии, в свою очередь, могут влиять на ростовые свойства грибов за счет продукции вещества белковой природы и витаминов группы В. Гибель микробов, наступающая вследствии антибиотикотерапии, активирует биологические процессы грибов рода Candida: усвоение питательных веществ, размножение, вирулентность (Е.Н. Заглухинская, 1965).

Способность грибов рода Candida снижать чувствительность к антибиотикам закономерно выявляется в отношении патогенных бактерий. Известно, что Candida sp. могут использовать стрептомицин, левомицетин и другие антибиотики как источники питания (Р.Н. Реброва, 1976). Таким образом, они могут снижать концентрацию антибиотика в питательной среде. Вместе с тем многие антибиотики являются антиметаболитами ферментов, витаминов, аминокислот и нарушают определенные звенья обмена веществ (З.В. Ермольева, 1964). Грибы рода Candida, напротив, являются источниками многих аминокислот и витаминов (Н.П. Блинов, 1964). Попадая в питательную среду или в организм человека, грибы действуют как метаболиты, вступая в конкурентные взаимоотношения с антибиотиками (Л.С. Панкратова, 1966). Существуют данные о том, что грибы рода Candida (возможно их метаболиты) влияют на шигеллы как мутагены, что и приводит к повышению антибиотикорезистентности за счет селекции наиболее устойчивых к антибиотикам клонов бактерий (Р.Н. Реброва, 1979).

В нашей работе раскрыт еще один возможный механизм взаимодействия бактерий и грибов в ассоциации. Так, бактерии и грибы, находясь в одном биоценозе, могут изменять биологические свойства друг друга. Эти взаимодействия, в конечном счете, могут приводить к увеличению либо к снижению вирулентных свойств или факторов персистенции микроорганизмов-симбионтов. Данные взаимодействия можно рассматривать как механизм формирования, с одной стороны, колонизационной резистентности нормального биоценоза, с другой стороны - как один из механизмов, способствующих образованию патобиоценозов, на фоне которых возникают эндогенные инфекции и бактерионосительство.

Изменение факторов персистенции микроорганизмов-симбионтов может быть связано с присутствием "сигнальных" метаболитов, влияющих на экспрессию факторов персистенции микробной клетки. Возможно, изменение персистентных свойств бактерий может быть связано с наличием протеаз у грибов, разрушающих эти факторы. Безусловно, полученные данные, открывают перспективу для дальнейших исследований, которые позволяют выделить медиаторы грибково-бактериальных взаимодействий и уточнить механизмы модифицирующего действия микроорганизмов-симбионтов на их биологические свойства.

С целью коррекции дисбиотических состояний в настоящее время наибольшее распространение получили эубиотики - препараты содержащие живые микроорганизмы, представители нормальной микрофлоры: "Бифи-думбактерин", "Бифилиз", "Колибактерин" и другие. Но на ряду с этим существуют также пробиотики, содержащие штаммы, в норме не входящие в состав постоянной микрофлоры, но тем не менее оказывающие положительный корригирующий эффект биоценоза, оказывая влияние на условно- патогенную и патогенную флору. В последние годы для восстановления нормального гомеостаза экосистемы ободочной кишки предлагается использовать "Энтерол", содержащий штаммы дрожжевого грибка Saccharomyces boulardii. Ранее установленные противомикробное, антитоксическое, имму-номодулирующее действие сахаромицета, отсутствие способности к длительной колонизации кишечника, определяют важную роль этого дрожжевого грибка в поддержании нормальной микрофлоры кишечника человека (J.P. Buts, 1986, 1990; D. Czerucka, 1991; R. Berg, 1993; M. Farland, 1999; A. Zaouche, 2000). Однако, открытым остается вопрос о влиянии Saccharomyces boulardii на основных представителей индигенной и транзиторной микрофлоры кишечника. В связи с этим, наши исследования были направлены на изучение влияния экзометаболитов культуры дрожжевого грибка, выделенного из пробиотика "Энтерол", на способность энтеробактерий к продукции колицинов, гемолизинов, ингибиторов лизоцима и антибиотикочувстви-тельность. В результате проведенных исследований выявлены новые данные о модифицирующем действии Saccharomyces boulardii на биологические свойства энтеробактерий. Установлено, что фильтраты производственной культуры сахаромицета понижали антилизоцимную активность у ряда штаммов лактозонегативных кишечных палочек, клебсиелл, увеличивали АЛА у лактозопозитивных эшерихий индигенной микрофлоры и не оказывали влияния на способность к инактивации лизоцима у сальмонелл. Экзометаболиты Saccharomyces boulardii стимулировали продукцию колицинов у лактозопозитивных E.coli и подавляли - лактозонегативных эшерихий. В условиях in vitro фильтрат дрожжевого грибка увеличивал чувствительность лактезоне-гативных кишечных палочек к цефазолину и цефотаксиму. Обнаруженное нами снижение антилизоцимной активности, повышение способности к продукции колицинов лактозопозитивных кишечных палочек и в тоже время подавление колициногении лактозонегативных эшерихий под влиянием экзометаболитов дрожжевого грибка может способствовать восстановлению нормального микробиоценоза кишечника. Отсутствие чувствительности Saccharomyces boulardii к антибактериальным препаратам позволяет его широко использовать для коррекции дисбиоза кишечника, назначая вместе с антибактериальными препаратами. Выявленное повышение чувствительности энтеробактерий к цефалоспоринам г под действием экзометаболитов сахаромицета, возможно, следует учитывать при выборе рациональной комбинации пробиотиков с антибиотиками при лечении дисбиотических состояний. Полученные данные можно использовать для подбора эффективных схем коррекции дисбиотических состояний кишечника.

Оценивая фактический материал в целом, следует выделить три главных момента:

Во-первых, грибы рода Candida взаимодействовуют с определеными таксонами условно-патогенных бактерий, в ассоциации с которыми происходит изменение факторов персистенции и вирулентности симбионтных штаммов.

Во-вторых, инактивация факторов естественной резистентности макроорганизма широко распространена среди дрожжеподобных грибов и может характеризовать их высокий адаптационный потенциал к местным защитно-регуляторным системам макроорганизма.

В-третьих, применение S.boulardii для коррекции дисбиотических состояний основано на способности экзометаболитов дрожжевого грибка оказывать модифицирующее влияние на факторы персистенции, продукцию ко-лицинов и антибиотикочувствительность условно-патогенных энтеро бактерий.

112

Библиография Диссертация по биологии, , Перунова, Наталья Борисовна, Москва

1. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека/ Несвижский Ю.В., Воробьев А.А., Велоносов С. и другие // Вестник РАМН.-1997.- №3.- 23-26

2. Вельский В.В. Взаимное влияние возбудителей при смешанной инфекцииожоговой травмы/ В.В. Вельский, Е.В. Шаталова// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1999.- №4- 3-7

3. Вельский В.В. Структура популяций синегной палочки при ассоциации состафилококками и эшерихиями/ В.В. Вельский, Е.В. Шаталова Прадиуман Кумар Сингх// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.1994.-№6.-С.37-38

4. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическимметодам исследования/ М.О. Биргер.-М.: Медицина.- 1982.-464 с.

5. Бухарин О.В. Бактерионосительство (медико-экологический аспект)/ О.В.Бухарин, В.Я. Усвяцов.- Екатеринбург: УрО РАН, 1996.- 206 с.

6. Бухарин О.В. Персистенция бактерий/ О.В. Бухарин.-М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН.-1999.- 365 с.

7. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий и влияние на нихпробиотиков при дисбиозекишечника: Автореф. дис. .. канд. мед. наук. Оренбург, 1997.-22 с.

8. Возрастные особенности микробиоценоза кишечника у жителей г. Кемерова/ Леванов Л.А., АлеппсинВ.А., Воробьев А.А. и др>тие// Жури, микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 2001.- №3.-С.72-75.

9. Воронин Е.В. Микозы у детей с ВИЧ-инфекцией/ Е.В. Воронин, Ю.А.Фомин, И.М. Улюкин// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002- 380.

10. Грачева Н.М. Применение бактерийных биологических препаратов впрактике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника: Методические рекомендации/ Н.М. Грачева, Г.И; Гончарова, А.А. Аваков и другие.- М.-1986.- 23 с.

11. Грибковая инфекция в онкологической клинике/ Смолянская А.З., Дмитриева Н.В., Кулага Е.В., Петухов ИМ.// Антибиотики и химиотерапия.- 1999Т.44,№4:-С.25-30

12. Диагностика генитального кандидоза/ Богуш П.Г., Редченко Е.Б., Чулкова Г.В., Шатрова А.Э.// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002- 334.

13. Бондаренко В.М. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта/ В.М.Бондаренко, Б.В. Боев, Е.А. Лыкова// Росс. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопрокгол.- 1998.- №8 (1).- 66-70.

14. Дрожжеподобные грибы на коже больных атоническим дерматитом/ Арзуманян В.Г., Мокронова М.А., Самуилова:Т.Л., Гервазиева В.Б. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1998- №3 .-С. 10-13

15. Елагина Н.Н. Факторы; персистенции неспорообразующей анаэробноймикрофлоры кишечника человека: Автореф. дис. .. канд. мед. наук. Оренбург, 2000.-18 с.

16. Корнишева В.Г. К вопросу о микст-инфекции, обусловленномTrichophyton rubrum/ В.Г. Корнишева, З.К. Колб// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002.-С.324-325.

17. Красноголовец В.Н. Дисбактериозы кишечника/ В.Н, Красноголовец.- М.:Медищ1на, 1989.-208 с.

18. Кубась В.Г. Кандидоз/ В.Г Кубась, О.П. Данилова, Н.А. Чайка.- Спб: Петербург, мед. акад. последршлом.образования, 1997-51 с.

19. Лакин Г. Ф. Биометрия/ Г.Ф. Лакин.- М.: Высш. шк.- 1990.- 352 с.

20. Леванова Л.А. Дисбактериозы кршхечника у населения разных возрастныхгрупп г. Кемерова/ Л.А. Леванова, Сурикова Е.В.// Жури, микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 2001.- №1- 69-71.

21. Лесняк Е.В. Оценка значимости цитоморфологического исследования вкомплексной диагностике генитального кандидоза/ Е.В. Лесняк, А.К. Мирзабалаева// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002.- 327.

22. Микрофлора кишечника у детей Монголии, России, Швейцарии / Коршунов В.М., Поташник Л.В., Ефимов Б.А. и другие// Журн. мшфобиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 2001.- №2- 61-64.

23. Мисетов И. А. Кинетический метод определения антикомплементарнойактивности бактерий / И.А. Мисетов// Сб. научн. работ I обл. конф. молодых ученых.-Оренбург.- 1993-С. 73-74.

24. Наумкина Е.В, Микроэкология женских половых путей при урогенитальном кандидозе/ Е.В.^ Наумкина, Н.В. Рудакова, Л.В. Белкина, В.М. Иванова// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002.- 329.

25. Облигатный симбиоз микрофлоры пищеварительного тракта и организма/Лубянскене В., Вирбицкас Ю.Днкавичюс К. и другие// Институт зоологии и паразитологии АН Литовской ССР.- 1989- 183с

26. Оппортунистическая инфекпдя у онкологических больных/ СмолянскаяА.З., Дмитриева Н.В., Нуммаев Б.Г., Короткой А.М: // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002- 375-376.

27. Петрова Н.А. Этиологическая структура кандидоза у иммуноскомпрометированных больных/ Н.А, Петрова, Г.А. Клясова,Т.В: Толкачева// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002.С.371.

28. Пинегин Б.Г. Дисбактериозы кишечника/ Б.Г. Пинегин, В.Н. Мальцева,В.М. Коршунов.- М.: Медицина, 1984.- 142 с.

29. Ракита Д.Р. Грибы как фактор этиопатогенеза обострений бронхиальнойастмы/ Д.Р. Ракита, А. Корвяков, Л.В. Коршунова// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002- 372-373.

30. Реброва Р.Н. Грибы рода Candida при бактериальных инфекциях/ Р.Н.Реброва.-М.г Медицина.- 1979.- 256 с

31. Роль грибковой микрофлоры в развитии полштозного риносинусита/ Заболотный Д.И., Волосевич Л.И.^ Карась А.Ф. и другие// Современная микология в России: Тез. докл ,1 съезда микологов России.- М., 2002.-С.381-382.

32. Руденко А.В. Микстинфекция при онихомикозе/ А.В. Руденко, Э.З. Коваль, Е.А. Заплавская// Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда: микологов России.- М., 2002- 335-336.

33. Самсыгина ГА. Эпидемиология инфекционно-воспалительных заболеваний и роль грибов рода Candida у новорожденных детей/ Г.А. Самсыгина, Г.Н. Буслаева // Антибиотики и химиотерапия.-1998.-Т.43, №8.-С. 23-27.

34. Саттон Д. Определитель патогенных и условно патогенных грибов: Пер. сангл./ Д. Саттон, А. Фотергилл, М. Ринальди.- М.: Мир, 2001.-468 с.

35. Сергеев А.Ю. Грибковые инфекции. Руководство для врачей/ А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев.- М.-Бином-пресс, 2003.- 440 с.

36. Сергеев А.Ю. Кандидоз.Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение/ А.Ю. Сергеев, Ю.В^ Сергеев.- М.: Триада-Х.- 2001.- 472 с

37. Сергеева Е.Л. Диагностика и лечение аллергических респираторных микозов/ Е.Л. Сергеева, А.В. Караулов// // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России- М., 2002- 374.

38. Смирнова Т.В. Применение диагностического теста "трубок прорастания"у Candida albicans/ Т.В. Смирнова// Лабораторное дело.- 1979.- №7.- 424425.

39. Соколова Т.В. Атонический дерматит, хронические, вирусные инфекции,дисбактериоз кишечника у детей в условиях микст-патологии/ Т.В. Соколова, Л.А. Айзикович// // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.- М., 2002.- 377.

40. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни/ Леванова Л.А., Алешкин В.А., Воробьев А.А. и другие//Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 2001- №4,- 47-50.

41. Характеристика микроорганизмов,, колонизир^тошдх кишечник человека /Ефимов Б.А., Володин Н.Н., Кафарская Л.И., Коршунов В.М.// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-2002.- №5- 98-104.

42. Хмельницкий O.K. Концепция просветочного преинвазивного кандидозапищеварительного тракта/ O.K. Хмельницкий, М.А. Шевяков// Современная микология в России: Тез. доки. 1 съезда микологов России.- М., 2002- 357358.

43. Черкасов СВ. Персистентные характеристики микрофлоры репродуктивного тракта у женщин в норме и при патологии: Автореф. дне. .. канд. мед. наук. Оренбург, 1998.

44. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание/Б.А. Шендеров.- М.: Издательство ГРАНТЪ.- 1998.- Т.1.- 288с

45. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и фз^кциональное питание/ Б.А. Шендеров.- М.: Издательство ГРАНТЪ.-1998.- Т.2.- 416 с

46. А Candida albicans metallopeptidase degrades constitutive proteins of extracellular matrix/ Rodier M.H., el Moudni В., Kaufi&nann-Lacroix C. et. al.// FEMS Microbiol Lett. -1999.- V.15.- 477(2).- P.205-210.

47. A comparison of phospholipase activity, cellular adherence and pathogenicity ofyeasts / Barret-Bee K., Hayes Y., Wilson R.G., Ryley J.F.// J.Gen. Microbiol.1985-V.131,^ 5:12.-P. 17-21.

48. A phosphatidylinositol 3-kinase of Candida albicans influences adgesion, filamentous growth and virulence/ Bruckmann A., Kunken W., Hartl A. et. al. // Microbiology.- 2000.- V.146.- P. 2755-2764:

49. Akashi T. The role of the cytoskeleton in the polarized growth of the germ tubein Candida albicans/ T. Akashi, T. Kanbe, K.Tanaka// Microbiology.- 1994.- V.140, »2-P. 71-80.

50. Analysis of secreted aspartic proteinases from Candida albicans: purificationand characterization of individual Sapl, Sap2 and Sap3 isoenzymes/ Smolenski G., Sulhvan P.A., Cutfield S.M., Cutfield J.F.// Microbiology.- 1997.- V.143,» 2 - P.4956.

51. Anderson J.M. Differences in actin localization during bud and hypha formation:in the yeast Candida albicans/ J.M. Anderson, D.R. Soil// J. Gen. Microbiol.- 1986.УЛ32/7.-Р.35-47.

52. Bacterial and Candida adhesion to intact and denatured collagen in vitro/ Makihira S., Nicawa H., Tamagami Mi et.al.// Mycoses.- 2002.- V. 45.- P.389-392.

53. Bailey A, Adherence of Candida albicans to Human Buccal EpitheUal Cells:Host-hiduced Protein Synthesis and Signaling Events/ A. Bailey, E. Wadsworth, R. Calderone// Infect, and Immun.- Feb. 1995.- P.569-572.

54. Bannet D.E. Genetic characterization of a phospholipase С gene from Candidaalbicans: presence of homologous sequences in Candida species other than Candida albicans/ D.E. Bannet, C.E. McCreary, D.S. Coleman // Microbiology.- 1998.V.144,4.-P.55-72.

55. Benno Y. The intestinal microflora of infants: composition of faecal flora inbreast-fed and bottie-fed infants/ Y. Benno, K. Sawada, T. Mitsuoka// Microbiol. 1.munol.-1984.- V. 28.- P. 975 - 986.

56. Bernhardt H. Recent studies on the microbial ecology of the upper gastrointestinal tract/ H. Bemhard, M. Knoke // Infection.- 1989.- V. 17, №4.-P. 259-263.

57. Biotherapeutic effects of probiotic bacteria on candidiasis in immunodeficientmice/ Wagner R.D., PiersonC, Warner T. et. al.// Infect. Immun.- 1997- V. 65(10).-P. 4165-72.

58. Calderone R.A. Recognition between Candida albicans and host cells./ R.A.Calderone // Trends Microbiol- 1993.- V.l, »2.- P. 55-8.

59. Candida albicans and Escherichia coU are synergistic pathogens during experimental microbial peritonitis/ Klaemer H.G., Uknis M.E., Acton R.D. et. al. // J. Surg. Res.- 1997- V.l, >70(2).-P.161-165.

60. Candida albicans: adherence, signaling and virulence/ Calderone R:, Suzuki S.,Cannon R. et. al: // Med. Mycol.- 2000.- V.38.- P.125-137.

61. Candida and Torulopsis: a blinded evaluation of use pseudohypha formation asbasis for identification of medically important yeasts/ Odds F.C., Rinaldi M.G., Cooper C.R. et. al.// Jom. of Chn. Microbiol.- Jan. 1997.- P. 313-316.

62. Carlson E, Effect of strain of Staphylococcus aureus on synergism with Candidaalbicans resulting in mouse mortality and morbidity // Infect, bnmun.- 1983.- V. 42(1).-P. 285-292.

63. Carlson E. Enhancement by Candida albicans of Staphylococcus aureus, Serratia marcescens // bfect. Immun.- 1983.- V. 39(1).- P. 193-197.

64. Characterization of binding of Candida albicans to small intestinal mucin and itsrole in adherence to mucosal epithehal cells/ de Repentigny L., Aumont F., Bernard K.,BelhumeurP. //hifect. Immun-2000.- V.68.-P. 3172-3179.

65. Chitinase activities fi^om yeasts and hyphal cells of Candida albicans/ JacksonD.J., Saunders V.A., Gooday G.W., Humphreys A.M.// MycoL Res.- 1996.- V.IOO, >3:-P. 321-327.

66. Coaggre^tion of oral Candida isolates with bacterial fi-om bone marrow transplant recipients/ Hsu L.J., G.E. Minah, D.E. Peterson et. al.// J. Clin. Microbiol.1990.-V. 28.-P. 2621-2626.

67. Cotter G. Adherence mechanisms of Candida albicans/ G. Cotter, K. Kavanagh//Br. Jj Biomed: Sci.- 2000.-V.57, »3.- P.241-249.

68. Degradation of human subendotheUal extracellular matrix by proteinasesecreting Candida albicans/ Morschhauser J., Virkola R:, Korhonen Т.К., Hacker J.// FEMS Microbiol. Lett.- 1997.- V.15, 453(2).-P.349-355.

69. De-Miranda CM; Growth interaction between Candida albicans and Streptococcus sahvarius/ De-Miranda СМ., van-Wyk CW., Basson N.J.// J. Dent. Assoc. S. Afi-.- 1992.- V. 47(6).- P. 253-256.

70. Different isoforms of secreted aspartyl proteinases (Sap) are expressed byCandida albicans during oral and cutaneous candidosis in vivo/ Schaller M, Januschke E, Schackert C, Woerle В et. al.// J Med Microbiol.- 2001.- V.50, ' 8 P.743-747.

71. Dongari-Bagtzoglou A, Candida albicans triggers interleukin-6 and interleukin-8responses by oral fibroblasts in vitro/ A. Dongari-Bagtzoglou, K. Wen, I.B^ Lamster// Oral. Microbiol. Immunol.- 1999.- V.14, »6.- P.364-370.

72. Duration of incubation of fimgal cultures/Morris A.J., Byrne T.C., Madden J.F.,Reller L.B.// Jom. of Clin. Microbiol- June 1996.- P. 1583-1585.

73. Effects of oral Saccharomyces boulardii on bacterial overgrowth, translocation,and intestinal adaptation after small-bowel resection in rats/ Zaouche A, Loukil C, De Lagausie P et. al.// Scand J Gastroenterol.- 2000- V.35, »2.- P.160-165.

74. EndotheUal cell injury caused by Candida albicans is dependent on iron/ FrattiR.A., Belanger P.H., Ghannoum M.A. et. al.// Infect. Immun.-1998- V.66, 4 P.191-196.

75. Ener В., Douglas L.J. Correlatoin between cell-surface hydrophobicity of Candida albicans and adhesion to buccal epithehal cells/ B: Ener, Douglas L.J.// FEMS Microbiol Lett.-1992.-V.15,' 78:1-P. 37-42:

76. Evidence for the presence of collagenous domains in Candida albicans cell surface proteins / Sepulveda P., Murgui A., Lopez-Ribot J.L. et. al. // Infect, hnmun.1995-V.63,»6.-P. 2173-2179.

77. Evidence ImpUcating Phospholipase as Virulence factor of Candida albicans/1.rahim A.S., Mirbod F., Filler S.G. et. al. // Infect, and Immun.- May 1995- P. 1993-1998.

78. Evidence that members of the secretory aspartyl proteinase gene family, in particular SAP2, are virulence factors for Candida vaginitis/ De Bemardis F., Arancia S., МогеШ L. et. al. // J. Infect. Dis.-1999.- V. 179, 4.- P.201-208.

79. Faecal ftmgal flora in healthy volunteers and inpatients/ Knatib R., RiedererK.M., Ramanathan J., Baran J.// Mycoses.- 2001.-V.44.- P. 151-156.

80. Fidel P.L. Candida glabrata: review of epidemiology, pathogenesis, and clinicaldesease with comparison to C.albicans/ P.L. Fidel, J.A. Vazques, J.D. Sobel// Clin. Microbiol. Rev.- Jan. 1999.- P. 80-96.

81. Finegold S.M. Normal indigenous intestinal flora/ S.M. Finegold, V.L. Sutter,G.E. Mathisen// Henthes DJ (ed) Human intestinal microflora in health and disease. Academic Press, London.-1983.- P. 3-31.

82. Franzke S. Isolation of avirulent clones of Candida albicans with reduced abilityto recognize the CR2 Ugand C3D/ S. Franzke, R.A. Calderone, K. Schaller// Infect. 1.mun.- 1993- V. 61, »6.- 2662-2669.

83. Fungal moфhogenesis and virulence/ San-Blas G., Travassos LR., Fries ВС. et.al.// Med. Mycol.- 2000.- V.38.- P.79-86.

84. Germ tube formation changes surface hydrophobicity of Candida cells/ Rodrigues A.G., Mardh P.A., Pina-Vaz C. et. al.// Infect. Dis. Obstet. Gynecol- 1999V.7,'5. P. 222-226.

85. Growth of Candida albicans in normal and altered faecal flora in the model ofcontinuous flow culture/ Bernhardt H., Wellmer A., Zimmermann K. et. al.// Mycoses.- 1995.-V.38 (7-8).- P. 265-270.

86. Hazen K.C. New and emerging yeast pathogens./ K.C. Hazen // Clin. Microbiol. Rew.- Oct.1995.- P. 462-478.

87. Hoskins L.S. The basic symbiotic unit: a concept of community organisation inenteric microbial ecosystems/ L.S. Hoskins// Microb. Ecol. in Heals and Disease.1994.-V. 7.-1 35-55-P.41.

88. Hostetter M. Cloning and expression of a gene encoding an integrin-like protein of Candida albicans/ Gale C, Finkel D., Tao N. et. al.// Proc. Nati. Acad. Sci. USA.- 1996.- V. 9, > 93.-P. 1357- 1361.

89. Hostetter М.К. Integrin-like proteins in Candida spp. and other microorganisms/ M.K. Hostetter M.K// Fungal Genet. Biol.- 1999.- V. 28, '3.- P.135-145.

90. Hube B. Extracellular proteinases of human pathogenic fimgi/ B. Hube// Contrib. Microbiol-2000.- V.5.-P.126-137.

91. Identification of sahvary basic proline-rich proteins as receptors for Candidaalbicans adhesion/ O'Sullivan J.M., Cannon R.D., Sulhvan P.A., Jenkinson H.F.// Microbiology.- 1997- V.143,' 2.- P.341-348.

92. In vitro effect of fibrinogen on Candida albicans germ tube formation/ Rodrigues A., Vaz СР., Mardh P.A., da Fonseca A.F. et. al. // APMIS- 1999- V.107, 41.-P.1020-1022.

93. Inhibition of Candida albicans translocation from the gastrointestinal tract ofmice by oral administration of Saccharomyces boulardii/ Berg R, Bemasconi P, Fowler D, Gautreaux M.// J Infect Dis.- 1993.- V.168, '5.-P. 1314-1318.

94. Isolation and biochemical characterization of the iC3b receptor of Candida albicans / Alaie S., C. Larcher., С Ebenbichler. et. al.// Infectlmmun.- 1993.- V. 61.P.1395-1399.

95. Jack M. Evidence for the involvement of thiocyonate in the inhibition of Candida albicans by Lactobacillus acidophilus/ Jack M., Wood B.J, Berry D.R.// Microbios.- 1990-62(250).-P. 37-46.

96. KaczmarskiW. Isolation and identification of the products of StreptococcusFaecalis inhibiting myceUal transformation of Candida albicans/ Kaczmarski W., Jakoniuk P., Borowski J. // Med. Dosw. Mikrobiol- 1989.- V. 41(3-4).- P. 192201.

97. Kaczmarski W, Effect of selected bacteria on mycehal transformation of cellsCandida albicans/ Kaczmarski W., Jakoniuk P., Borowski J.// Med. Dosw. Mikrobiol.- 1989.- V. 41(3-4).- P.184-191.

98. Kantarcioglu A.S. Phospholipase and protease activities in clinical Candidaisolates with reference to the sources of strains/ A.S. Kantarcioglu, A. Yucel // Mycoses.- 2002.- V. 45.- P. 160-165.

99. Kennedy M.J. Inhibition of Candida albicans by the anaerobic oral flora ofmice in vitro // Sabouraudia.- 1981 - 19(3).- P. 205-208.

100. KozelT.R. Activation of the complement system by pathogenic fungi/ T.R.Kozel// Chn. Microbiol Rev.- Jan. 1996.- P.34-46.

101. Kwon-Chung K.J. Gene discruption to evaluate the role of candidate virulencegenes/ K.J. Kv^on-Chung.// Curr. Opin. in Microbiol.- 1998.- V.l- P. 381-389.

102. Lemer C.G. Stimuli that induce production of Candida albicans extracellularaspartyl proteinase/ C.G. Lemer, R.C. Goldman// J. Gen. Microbiol.- 1993.V.139,»7.-43-51.

103. Mago N. Subcellular localization of enzymes of phosphohpid metaboHsm inCandida albicans/N. Mago, G.K. Khuller // J. Med. Vet. Mycol- 1990.- V. 28, ^5.P. 55-62.

104. Masuoka J. Cell wall protein mannosylation determines Candida albicans cellsurface hydrophobicity/ J. Masuoka, K.C. Hazen// Microbiology.- 1997.- V.143, * 9.-P. 3015-3021.

105. Mechanisms by which Candida albicans induces endotheUal cell prostaglandin'synthesis/ Filler S.G., Ibe B.O., Ibrahim A.S. et. al. // Infect. Immun.- 1994.- V.62, *3.-P.4-9.

106. Mitchell А.Р. Dimoфhism and virulence in Candida albicans/ A.P. Mitchell //Сшг. Opin. Microbiol- 1998.- V.l, »6.- P.687-692.

107. Molecular mimicry in Candida albicans. Role of an integrin analogue in adhesion of the yeast to human endotheUum/ Gustafson K.S., G.M. Vercellotti, CM. Bendel, M.K. Hostetter//J. CUn. Invest.-1991-V.87.-P.1896-1902.

108. Nair R.G. The effect of oral commensal bacteria on candidal adhesion to denture acryKc surfaces/Nair R.G., Samaranayake L.P.//APMIS- 1996.- V. 104(5).P. 339-349.

109. Nair R.G. The effect of oral commensal bacteria on candidal adhesion to human buccal epitheUal cells in vitro / Nair R.G., Samaranayake L.P.// J. Med. Mikrobiol.- 1996- V. 45(3).- P. 179-185.

110. Niewerth M. Phospholipases of Candida albicans/ M. Niewerth, H.C. KortingH.C. // Mycoses .- 2001.- V. 44.- P. 361-367.

111. O' Salhvan J.M. Adhesion of Candida albicans to oral streptococci is promotedby selective absorption of salivary proteins to the streptococcal cell surface/ J.M. O' SaUivan, H.F. Jenkinson, R.D. Cannon// Microbiology.- 2000.- V. 146.- P. 41-48.

112. Paranjape V. Involvement of calcium, calmodulin and protein phosphorylationin morphogenesis of Candida albicans/ V. Paranjape, B.G. Roy, A. Datta// J.Gen.Microbiol.-1990.- V.136, 4 1 - P. 49-54.

113. Phan Q.T. Role of hyphal formation in interactions of Candida albicans withendothelial cells/ Q.T. Phan, P.H. Belanger, S.G. Filler // Infect, and Immun.- 2000.V.68.-P. 3485-3490.

114. Power D.A. Manual of BBL products and laboratory procedures/ D.A.Power, P.J. McCuen.- Becton Dickinson Microbiology System, Cockeysville, Maryland.- sixth edition, cat. № 52000.- P. 147-148.

115. Ray T.L. Degradation of basement membrane matrix proteins laminin, fibronectin and type IV collagen by Candida acid proteinase/ T.L. Ray, CD. Payne // 1.fect. Immun.- 1988- V.56, ' 8 - P. 2-9.

116. Regulation of chitin synthesis during dimoфhic growth of Candida albicans/Munro CA., Schofield D.A., Gooday G.W., Gow N.A.// Microbiology.- 1998.V.144,'2.-P.391-401.

117. Response of human and rat small intestinal mucosa to oral administration ofSaccharomyces boulardii/ Buts JP, Bemasconi P, Van Craynest MP, Maldague P et. al.//PediatrRes.- 1986.- V.20, »2.-P.192-196.

118. Response of the IRD intestinal epithehal cell line to Clostridium difficile toxinsA and В in rats. Effect of Saccharomyces boulardii/ Czemcka D, Nano JL, Bemasconi P, Rampal P.// Gastroenterol CUn Biol - 1991- V.15, 4 - P.22-27.

119. Runeman B. Experimental Candida albicans lesions in healthy humans: dependence on skin pH/ B.Runeman, J. Faergemann, O. Larko// Acta Derm, Venereol.- 2000.- V.80, '6.- P. 421-424.

120. Sabie F.T. Involvement of a Ca 2+ - calmodulin interaction in the yeastmycehal (Y-M) transition of Candida albicans / F.T. Sabie, G.M. Gadd// Mycopathologia.-1989.-V.108, Ч.-P. 47-54.

121. Saeed F.A. Production of pyruvate by Candida albicans: proposed role in virulence / F. A. Saeed//FEMS Microbiol. Lett.-2000.-V.l, 490(1).-P.3 5-3 8.

122. Secreted aspartic proteinase (Sap) activity contributes to tissue damage in amodel of human oral candidosis/ Schaller M,, Korting H.C., Schafer W. et. al.// Mol. Microbiol-1999.- V.34, Ч.-Р.169-180.

123. Secreted Aspartic Proteinase of Candida tropicahs/ Zaugg C, Borg-von Zepelin M., Reichard U. et. al.// Infect, and Immun.- Jan. 2001.- P. 405-412.

124. Secreted aspartyl proteinases and interactions of Candida albicans with humanendothelial cells/ Ibrahim A.S., Filler S.G., Sanglard D. et al.// Infect. Immun.1998- V.66, ^ 6.-P.3003-3005.

125. Silva T.M. Influence of cell surface hydrophobicity on attachment of Candidaalbicans to extracellular matrix proteins/ T.M. Silva, P.M. Glee, K.C. Hazen // J. Med. Vet.Mycol.- 1995- V.33, »2.-P. 117-122.

126. Staib F., Chlamydospore formation on Staib agar. Observation made beforeCandida dubliniensis was described/ F. Staib, K. Arasteh// Mycoses.- 2001.- V. 44;-P. 23-27.

127. Stimulation of secretory IgA and secretory component of immunoglobulins insmall intestine of rats treated with Saccharomyces boulardii/ Buts JP, Bemascom' P, Vaerman JP, Dive C.// Dig Dis Sci.- 1990.- V.35, >2.- 251-256.

128. Vardar-Unlu G. Fucose-specific adhesins on germ tubes of Candida albicans/G. Vardar-Unlu, C. McSharry, L.J. Douglas// FEMS Immunol Med. Microbiol1998.-V.20,4.-P.55-67.

129. Whiteway M. Transcriptional control of cell type and moфhogenesis in Candida albicans/ M. Whiteway // Curr. Opin. Microbiol- 2000.- V.3, '6.- P.582-588.