Биологические особенности бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека

Иванова, Елена Валерьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологические особенности бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические особенности бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека"

На правах рукописи

Иванова Елена Валерьевна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БИФИДОБАКТЕРИЙ И ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С МИКРОСИМБИОНТАМИ КИШЕЧНОЙ МИКРОФЛОРЫ ЧЕЛОВЕКА

03.02.03 - «Микробиология»

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

003494491

Оренбург - 2010

003494491

Работа выполнена в ГОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии Росздрава и в ГУ Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза УрОРАН

Научный руководитель:

академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Бухарин Олег Валерьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор ГОУ ВПО Оренбургский государственный

университет Брудастов Юрий Авенирович

кандидат биологических наук, доцент ГОУ ВПО Тюменская государственная

медицинская академия Росздрава Тимохина Татьяна Харитоновна

Ведущая организация: ГОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Росздрава

Защита состоится «г/ » (ХЫЛЯлМХ 2010 г. в и часов на заседании диссертационного совета Д. 208.066.03. при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д. 6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА

Автореферат разослан « Я». ЬрЯ1к 2010г.

Ученый секретарь диссертационного совета

ДОКТОр Медицински* няvк'

профессор

Немцева Наталия Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Основу нормальной микрофлоры пищеварительного тракта здорового человека составляют облигатно-анаэробные микроорганизмы, доминирующими представителями которых являются бифидобактерии (Гончарова Г.И., 1987; Hold G.L., 2002; Reyed М. R., 2007).

В настоящее время охарактеризованы таксономические, морфологические, физиологические особенности бифидобактерии (Новик Г.И., 2005; Bez-korovainy А., 1986; Asano Т., 2005; Hadadji М., 2005), а также изучены вопросы качественного и количественного состава бифидобактерий кишечника в зависимости от возраста, характера питания, климатической зоны проживания человека (Шкопоров А.Н. с соавт., 2006; Амерханова A.M., 2009; Gavini F. et al., 2001; He F. et al., 2001). Определена роль бифидобактерий в реализации колонизационной резистентности толстого кишечника, описано их участие в различных метаболических процессах в организме человека (обмен витаминов, минералов, желчных кислот) (Шендеров Б.А., 2002; Cheik-hyoussefa А., 2008). Имеются отдельные сведения по изучению факторов пер-систенции бифидобактерии (Елагина Н.Н., 2001; Глухова Е.В., 2009).

Вместе с тем, отсутствуют работы по комплексной оценке биологических свойств фекальной бифидофлоры в зависимости от вида бифидобактерий при различных состояниях микробиоценоза кишечника человека. Не выявлена роль и участие персистентного потенциала, антагонистической активности и биоплёнкообразования микросимбионтов (бифидофлоры и УПМ) в качестве одного из возможных механизмов формирования ассоциативного симбиоза, так как в последнее время инфекция рассматривается в качестве модельной системы этого явления (Бухарин О.В., 2009).

Указанные моменты и предопределили тематическую направленность наших исследований, которые могли бы способствовать раскрытию патогенетических механизмов межмикробных взаимоотношений нормофлоры с УПМ кишечника и изысканию новых подходов для дальнейшей работы по отбору эффективных пробиотиков для коррекции дисбиоза кишечника.

Цель и задачи исследования

Цель исследования - изучение видового состава и биологических свойств бифидобактерий и их взаимодействия с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека.

Для реализации этой цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Определить видовой состав и биологические свойства (антилизоцим-ную, антилактоферриновую, антииммуноглобулиновую и биопленкообразующую активности) фекальной бифидофлоры в норме и при дисбиозе кишечника человека.

2. Изучить антагонистическую активность бифидобактерий при эубиозе и дисбиозе кишечника человека и оценить влияние условно-патогенной микрофлоры на антагонизм представителей рода Bifidobacterium.

3. Оценить в условиях in vitro взаимное влияние экзометаболитов бифидобактерий и микроорганизмов-симбионтов на их антшшзоцимную активность и способность к образованию биоплёнок.

Новизна исследования

Выявлены различия в видовом составе бифидофлоры в зависимости от состояния микробиоценоза. При эубиозе в I группе (дети до 1 года) превалировал вид В. bifidum, во И группе (дети после 1 года и взрослые) - В. bi-fidum и В. longum. При дисбиозе отмечено увеличение видового состава бифидофлоры (6 видов) по сравнению с эубиозом (3-4 вида). В I группе при дисбиозе кишечника не удалось выявить доминирующий вид среди бифидобактерий, во II группе превалировал вид В. adolescentis.

Впервые выявлены распространённость и выраженность антилактофер-риновой активности и плёнкообразующей способности культур Bifidobacterium sp. strain CS, которые, также как антилизоцимная активность, положительно коррелировали с показателем микробной обсеменённости бифидобактерий. Изучена пенетрантность и экспрессивность способности бифидобактерий инактивировать секреторный иммуноглобулин А, отрицательно коррелировавший с ПМО бифидобактерий. Определены отличия в распространенности и выраженности персистентных свойств (АЛА, АЛфА, ПО, AsIgA) представителей рода Bifidobacterium в зависимости от вида бифидо-

бактерий и состояния микробиоценоза кишечника человека. При дисбиозе толстого кишечника у штаммов бифидобактерий отмечено снижение антили-зоцимной, антилактоферриновой, плёнкообразующей активностей и усиление способности инактивировать секреторный иммуноглобулин А.

Пенетрантность и экспрессивность антагонистической активности бифидобактерий варьировала у различных видов, и была выше у штаммов, изолированных при эубиозе, чем у культур, выделенных при дисбиозе кишечника. Способность бифидобактерий ингибировать рост УПМ снижалась в ряду В. longum > В. adolescentis > В. bifidum.

Установлено, что клеточные экстракты и экзометаболиты микроорганизмов-симбионтов изменяли антагонистическую активность представителей Bifidobacterium sp. strain CS. Влияние компонентов условно-патогенных микроорганизмов на антагонистическую активность бифидобактерий было различным: усиление антагонизма наблюдалось под действием экзометабо-литов и клеточных экстрактов S. aureus, Kl. pneumoniae и С. albicans; снижение антагонистической активности - при влиянии экзометаболитов Е. faecium и компонентов Е. coli lac-.

Бифидобактерии и условно-патогенные микроорганизмы изменяли ан-тилизоцимную активность и плёнкообразующую способность ассоциантов преимущественно в двух направлениях. Синергидный тип межмикробных взаимоотношений был характерен для ассоциации бифидобактерий с инди-генными представителями микрофлоры толстого кишечника (Е. faecium и Е. coli 1ас+), где в 60-75 % случаев отмечена стимуляция как AJIA, так и плёнкообразования у обоих ассоциантов. Антагонистический тип взаимоотношений нормофлоры (бифидобактерий) имел место с транзиторными представителями УПМ (Е. coli lac-, Kl. pneumoniae, S. aureus, C. albicans), у которых в 67 - 89 % отмечено взаимное снижение антилизоцимной активности и плёнкообразования микросимбионтов.

Практическая значимость Полученные в работе данные расширяют теоретические представления о роли видового состава и биологических свойств бифидобактерий в формировании ассоциативного симбиоза в условиях микробиоценоза кишечника.

Выявленные особенности регулирующего воздействия анаэробных микроорганизмов (бифидобактерий) на факторы персистенции условно-патогенной микрофлоры могут быть использованы в качестве дополнительных критериев отбора эффективных пробиотиков с целью коррекции дисбио-за кишечника. Способность клеточных экстрактов и экзометаболитов условно-патогенной флоры стимулировать антагонистическую активность бифидобактерий открывает перспективу для создания синбиотиков.

Предложенные методические подходы по изучению межмикробных взаимодействий могут быть рекомендованы для работ микроэкологического профиля, а также для использования в учебно-педагогическом процессе (Акт «Роль фекальной бифидофлоры в организме человека»).

Положения, выносимые на защиту:

1. Бифидобактерии, изолированные из кишечной микробиоты, имеют различия в видовом составе и экспрессивности факторов персистенции, антагонистической активности и биоплёнкообразования, зависящие от состояния микробиоценоза кишечника обследуемых лиц.

2. Метаболиты и клеточные экстракты микроорганизмов-симбионтов изменяют их биологические свойства, определяя межмикробные взаимоотношения бифидофлоры и УПМ в условиях ассоциативного симбиоза кишечника человека.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

-1 Междисциплинарном микологическом форуме (Москва, 2009);

- V, VI Всероссийских конференциях «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертационной работы

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, главу с описанием материалов и методов исследования, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы и

указатель литературы, включающий 100 отечественных и 120 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 9 таблицами и 35 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

При проведении исследования было выделено 163 фекальных штамма аэробных и анаэробных микроорганизмов, изолированных от пациентов в возрасте от 1 месяца и до 60 лет при обследовании на дисбиоз кишечника. Деление обследуемых лиц на возрастные группы для оценки состояния микрофлоры проводили в соответствии с приказом Минздрава РФ № 231 "Об утверждении отраслевого стандарта "Протокол ведения больных. Дисбакте-риоз кишечника". Согласно приказа все обследуемые лица были разделены на 2 основные группы: I группа - дети до 1 года, II группа - дети от 1 года и взрослые. У 36 лиц был установлен эубиоз кишечника, у 61 пациента был выявлен дисбиоз кишечника I-III степени.

От обследуемых выделено 97 штаммов бифидобактерий: В. longum - 18 штаммов, В. infantis - 9 культур, В. breve - 11 изолятов, В. adolescentis - 22 штамма, В. bifidum - 26 культур, В. animalis - 7 изолятов, В. dentium - 3 штамма, В. pseudolongum - 1 штамм; 42 штамма энтеробактерий: Е. coli - 18 штаммов, С. freundi, E.cloacae, М. morgami, Kl. pneumoniae по 6 штаммов; 12 культур дрожжевых грибов: С. albicans и R. rubra по 6 штаммов; 6 изолятов S. aureus и 6 культур Е. faecium.

Исследование микробиоценоза кишечника осуществлялось в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника» (М., 1986). Выделение и идентификация анаэробных микроорганизмов проводились в соответствии с руководством «Wadsworth-KTL anaerobic bacteriology manual» (2002). Идентификация выделенных штаммов микроорганизмов-симбионтов проводилась общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных и культуральных свойств (Биргер М.О. и др., 1982). Биохимический профиль

изучаемых культур микроорганизмов оценивали с помощью коммерческих тест-систем фирмы «Lachema» (Чехия).

Антилизоцимная, антилактоферриновая и антииммуноглобулиновая активности определялись по методикам Бухарина О.В. с соавторами (1999, 2005). Образование биоплёнок оценивали по способности штаммов бифидобактерий к адгезии на поверхности 96-луночной полистероловой поверхности стерильного планшета (OToole G., 2000). Антагонистическую активность штаммов бифидобактерий определяли по отношению к условно-патогенным индикаторным бактериям с помощью метода отсроченного антагонизма в агаре по Muriana Р. и Klaenhammer Т. (1987).

Исследование биологических свойств бифидобактерий и условно-патогенных представителей кишечной микрофлоры в условиях межмикробных взаимодействий проводили при добавлении стерильных супернатантов (продуктов жизнедеятельности) микроорганизмов-симбионтов в питательный бульон (Елагина Н.Н., 2001; Перунова Н.Б., 2003).

Данные по видовому составу и биологическим свойствам бифидофлоры кишечника были подвергнуты статистической обработке в компьютерной оболочке Windows с помощью процессора электронных таблиц Microsoft Office Excel 2003 и программы «Биостат» (Гланц С., 1999) путем подсчета средней арифметической (М) и средней ошибки средней величины (ш). Взаимосвязь между ПМО и биологическими свойствами кишечной бифидофлоры анализировали с использованием программы «корреляционный анализ» программы Microsoft Excel 1997, при этом достоверность выявленных связей определяли по достижению коэффициентами "г" пороговых величин, соответствующих размерам анализируемой выборки и заданной значимости достоверности (р<0,05).

Данные по определению регулирующего влияния экзометаболитов бифидобактерий и микроорганизмов-симбионтов на их биологические свойства были подвергнуты статистической обработке непараметрическим методом с применением критерия Манна-Уитни. Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при значении р<0,05.

Результаты исследования и их обсуяедение

Установлено, что при микроэкологических нарушениях в кишечнике наблюдается перестройка качественного и количественного состава фекальной бифидофлоры. При эубиозе показатель микробной обсеменённости (ПМО) представителей рода Bifidobacterium в микробиоценозе кишечника в I группе лиц составлял в среднем 10,7±0,2 lg КОЕ/г, во II группе обследуемых -9±0,05 Ig КОЕ/г. При дисбиозе наблюдалось снижение содержания бифидобактерий у детей первого года жизни до 8,1±0,4 lg КОЕ/г, в старшей возрастной группе - до 7,2 ±0,2 lg КОЕ/г.

При анализе видового состава бифидофлоры (рис. 1) при эубиозе кишечника выявлено, что у обследуемых лиц I группы штаммы принадлежали к трём видам: В. bifidum, В. infantis и В. breve, в то время как бифидофлора II группы характеризовалась присутствием четырёх видов: В. longum, В. bifidum, В. adolescentis и В. breve. Наиболее часто при эубиозе кишечника у обследуемых лиц в I группе встречались культуры бифидобактерий, относящиеся к виду В. bifidum (50 %), во II группе - доминировали В. longum (41 %) и В. bifidum (32 %). При дисбиозе кишечника видовой состав представителей Bifidobacterium sp. strain CS был более разнообразен (6 видов), тогда как при эубиозе выявлено 3-4 вида. У детей до 1 года чаще изолировали В. adolescentis, В. animalis, В. longum, В. bifidum, В. infantis и В. breve, а у лиц после 1 года и взрослых - В. adolescentis, В. longum, В. bifidum, В. animalis, В. dentium и В. pseudolongum. Среди видов бифидобактерий, изолированных при дисбиозе, в I группе не удалось выявить доминирующий вид, во II группе отмечалось превалирование В. adolescentis (44 %).

Сравнительная оценка данных по видовому составу бифидофлоры при эубиозе и дисбиозе кишечника человека показала следующие отличия: при эубиозе кишечника характерно наличие 3-4 видов бифидобактерий, среди которых превалировали В. bifidum и B.longum. При дисбиозе кишечника наблюдалось увеличение количества видов бифидобактерий до 6 и доминирование культур В. adolescentis

Помимо различий в видовом составе, удалось выявить особенности пе-нетрантности и экспрессивности биологических свойств бифидофлоры в

(б

с >»

го с

с >»

о.

О ВШЛш

11 Вл1йп<к

ЕЭ В.ашгпа)»

О Шопдит

рЛ В1*еуе

Ш 8.аск)1е5сег1Й5

Ш1 О.скзггёит

Щ) В-рзеискЯопдит

Рис. 1 - Видовой состав бифидофлоры кишечника у обследуемых разных возрастных групп при эубиозе (А) и дисбиозе

(Б) кишечника

I группа - дети до 1 года; II группа - дети после 1 года и взрослые

зависимости от их видовой принадлежности и состояния микробиоценоза кишечника человека.

Установлено, что способность ингибировать лизоцим регистрировалась у 85 % штаммов B.bifidum, у 70% культур В. longum, у 64 % изолятов В. breve, у 71% культур В. adolescentis и у 57 % изолятов B.animalis. При этом средние значения антилизоцимного признака бифидобактерий составили у В. longum

- 0,89±0,08 мкг/мл*СЮ, у В. bifidum - 0,93±0,07 мкг/мл*СЮ, у В. breve -0,77±0,06 мкг/мл*СЮ, у В. adolescentis - 0,55±0,05 мкг/мл*ОБ и у В. anima-lis- 0,42±0,12 мкг/мл*СЮ.

Сходные результаты были получены Елагиной Н.Н. (2001), установившей наличие антилизоцимной активности у В. longum, В. breve и В. adolescentis в экспериментах in vitro.

Были выявлены распространённость и выраженность антилактоферрино-вой активности бифидофлоры кишечника. Данный признак выявлялся у 77 % изолятов В. bifidum, у 63 % штаммов В. longum, у 54 % культур В. breve, у 62 % штаммов В. adolescentis и у 43 % изолятов B.animalis. Средние значения способности АЛфА у исследуемых штаммов бифидобактерий составили у В.longum - 1,34±0,04 ед., у B.bifidum - 1,45±0,06 ед., у В. breve -1,28±0,03 ед., у В. adolescentis - 1,3±0,06 ед. и у B.animalis- 1,06±0,02ед.

Проведенные исследования показали, что бифидобактерии обладают способностью к инактивации секреторного иммуноглобулина А. Среди бифидобактерий антииммуноглобулиновая активность была выявлена у 42 % штаммов В. bifidum, у 44 % культур В. longum, у 62 % изолятов В. adolescentis, у 27 % штаммов В. breve, у 57 % культур В. animalis. Средние показатели антииммуноглобулиновой активности представителей Bifidobacterium sp. strain CS составили у В. bifidum 1,12±0,03 ед., у В. longum 1,13±0,02 ед., у В. adolescentis - 1,2±0,05 ед., у В. breve - 1,07±0,02 ед., у В. animalis -1,13 ±0,01 ед.

Установлено, что 57 - 92 % фекальных штаммов бифидобактерий были способны к формированию биоплёнок. Распространённость плёнкообразова-ния у В. longum составляла 88 %, у В. bifidum -92%, у В. adolescentis

- 76 %, у В. breve - 82 %, у В. animalis - 57 %. Средние значения био-

пленкообразования у В. bifidum были равны 7,68±0,5 ед., у В. longum -6,8±0,6 ед., у В. adolescentis - 5,7±0,5 ед., у В. breve - 6,5±0,6 ед. и у В. ani-malis - 4,3±1,02 ед.

Корреляционный анализ позволил выявить прямую корреляцию между ПМО и биологическими свойствами представителей рода Bifidobacterium. Показатель микробной обсеменённости бифидобактерий положительно коррелировал с образованием биопленок (г=0,74; р<0,05), антилизоцимной активностью (г=0,64; р<0,05), антилактоферриновой активностью (г=0,43; р<0,05), но отрицательно коррелировал с антииммуноглобулиновой активностью (г= -0,38; р<0,05) штаммов.

При анализе биопрофилей бифидобактерий, выделенных при эубиозе кишечника человека, установлены широкая распространённость и более высокие значения биологических характеристик, чем у культур, изолированных при дисбиозе кишечника (табл. 1). Антилизоцимная активность у эубиотиче-ских штаммов бифидобактерий встречалась в 81±1,9 % случаев и составляла в среднем 0,96±0,02 мкг/мл*СЮ; антилактоферриновая активность регистрировалась у 73±2,1 % штаммов и в среднем была 1,35±0,1 ед.; антиимму-ноглобулиновая активность отмечалась у 27±2,8 % штаммов и соответствовали в среднем 8,75±0,8 ед. Все исследуемые штаммы бифидобактерий (100 %) были способны формировать биоплёнки, экспрессивность признака составляла 8,7±0,3 ед.

При дисбиозе кишечника I степени наблюдались минимальные изменения в биопрофилях бифидобактерий: отмечено снижение биоплёнкообразо-вания (6,1±0,3 ед., 81±3,6 %; р<0,05) и увеличение антииммуноглобулиновой активности (13,6±2,1 ед., 60 ±3,2 %; р<0,05).

При глубоких нарушениях в микробиоценозе кишечника (дисбиоз II - III степени) у штаммов бифидобактерий все изучаемые свойства были ниже, за исключением способности инактивировать секреторный иммуноглобулин А. У бифидобактерий, выделенных от лиц с дисбиозом кишечника, способность ингибировать лизоцим регистрировалась у 57±4,2 % штаммов, а экспрессивность признака составляла в среднем 0,56±0,03 ед.; антилактоферриновая активность - у 59±3,1 % культур, а выраженность - 1,1±0,06ед.; плёнкообразующая способность - у 62±2,3 % изолятов и была в среднем 3,7±0,3 ед.;

Состояние хншгагак микрофлоры ПО (пшаообриуюиая ахтшшть) АЛА (даилгоощшоя актокога) АЛфА (астлшофд»-ркшаяштаность) А<;1?А (акпшгвдушлв-булккст «¡•пакость) АА (тшшкткчккая шга кость)

М±т, ед, М±п\ К МЛт, мкгйал *0д М±т, « М±т,ед. №м, н М^т, ед. М±т, И М±т, ед, Мйп,

Эубмя (п = 36) 8,7*0,3 108 0,9Ш,02 8Щ,9 73±2,1 8,75±8,8 27±2,8 5,б4±0,5 74.5Й

Дисбш (п=31) б,Ш,3* 81±3,б* 1,01±0,05 8М,3 1,5405 74±3,6 13,б±2,1* И«,2* 67,244

Дишоз и-ш«. (п=30) 3,7±0,3* 62±2,3* в,«ад* 1да,об* 59±ЗД* 15,7±1,2* 3,941,3* 57±2,2*

Табл. 1 - Биологическая характеристика культур бифидобактерий, изолированных при эубиозе и

дисбиозе кишечника * - статистически достоверные различия (р<0,05) между эубиозом и дисбиозом Экспрессивность признака (в условных единицах) Распространенность признака (в %)

антииммуноглобулиновая активность - у 65±1,4 % культур, экспрессивность признака в среднем была 15,7±1,2 ед.

Проведенные исследования по изучению антагонистической активности бифидофлоры показали, что большинство исследуемых штаммов бифидобак-терий (33-93 % культур) обладали антагонистической активностью по отношению к представителям условно-патогенной микрофлоры кишечника, за исключением дрожжевых грибов. Отсутствие антагонизма бифидобактерий к микромицетам, возможно, объясняется наличием других механизмов межмикробных взаимоотношений, в частности, снижением персистентных свойств грибов под действием бифидофлоры (Перунова Н.Б., 2003).

Пенетрантность и экспрессивность антагонистической активности варьировала у бифидобактерий в зависимости от состояния микробиоценоза кишечника и была выше при эубиозе (КП - 5,64±0,5 ед.), I степени дисбиоза (КП - 6,4±0,5 ед.), чем при глубоких нарушениях (II - III степень дисбиоза) в биотопе дистального отдела толстого кишечника человека (КП - 3,9±0,3 ед., р<0,05).

Таким образом, выявленные отличия в пенетрантности и экспрессивности биологических свойств бифидофлоры в зависимости от состояния микробиоценоза кишечника, свидетельствовали, что культуры бифидобактерий, выделенные при эубиозе кишечника, обладали выраженной колонизирующей способностью и характеризовались высокими значениями антилизоцимной, антилактоферриновой, биоплёнкообразующей и антагонистической активностями. Снижение биологических свойств представителей Bifidobacterium sp. strain CS при дисбиозе кишечника, возможно, объясняет их элиминацию на фоне гиперколонизации в микробиоценозе кишечника условно-патогенными микроорганизмами, что было отмечено рядом авторов в своих исследованиях (Панчишина М.В., 1977; Rodney D., 1994; Patrick S., 1995; Pares R.W., 1996).

Учитывая, что при взаимодействии микроорганизмов в ассоциации возможны изменения антагонистической активности по отношению друг к другу (Holden et al., 1996; Cha et al., 1998; Pierson et al., 1998), мы предприняли попытку изучить влияние условно-патогенной микрофлоры на антагонизм бифидобактерий. С этой целью было изучено влияние клеточных экстрактов и экзометаболитов условно-патогенных бактерий на антагонистиче-

скую активность представителей бифидофлоры кишечника человека. Среди трех видов бифидобактерий модулирующий эффект АА под влиянием компонентов микросимбионтов оказался различным. Так, вид B.bifidum изменял антагонистическую активность под влиянием 3 видов условно-патогенных микроорганизмов, В. longum - под действием 5 видов УПМ, В. adolescentis -при воздействии 7 видов УПМ, что, вероятно, может быть связано с условиями колонизации вида В. bifidum и В. longum преимущественно при эубио-зе кишечника, а В. adolescentis - при глубоких нарушениях биотопа дисталь-ного отдела толстого кишечника, характеризующихся увеличением антигенной нагрузки условно-патогенных микроорганизмов. Увеличение антагонистической активности у всех трёх видов бифидобактерий наблюдалось под действием компонентов S. aureus, Kl. pneumoniae и С. albicans, часто являющихся причиной выраженных нарушений в микробиоценозе кишечника. Снижение антагонистической активности представителей рода Bifidobacterium было отмечено при влиянии экзометаболитов Е. faecium и компонентов E.coli lac-. Не исключено, что выявленный эффект может быть связан с особенностями формирования ассоциативного симбиоза в условиях биотопа дис-тального отдела толстого кишечника, а влияние экстрактов клеточной стенки УПМ на антагонизм бифидобактерий - с наличием в составе клеточной стенки условно-патогенных микроорганизмов пептидогикана, что согласуется с данными литературы (Семёнов А.В., 2009; Yan L., 2003; Xiao-Li Xu, 2008).

Было также изучено взаимное влияние экзометаболитов доминирующих видов (B.bifidum, B.longum и B.adolescentis) и условно-патогенных микроорганизмов в отношении продукции ингибиторов лизоцима и способности формировать биоплёнку. Характер взаимодействия между доминантом и ассоциан-том зависел от их видовой принадлежности. Экзометаболиты В. bifidum, вида в большинстве случаев встречающегося при эубиозе, в 50-83 % (р<0,05) случаев оказывали ингибирующий эффект в отношении антилизоцимной активности (рис. 2) и в 56 - 81 % (р<0,05) случаев снижали биоплёнкообразование (рис. 3) представителей аллохтонной условно-патогенной микрофлоры. У культур автохтонной кишечной микрофлоры в 66 - 67 % (р<0,05) случаев наблюдался стимулирующий эффект в отношении АЛА и в 33 % (р<0,05) случаев в отношении ПО. Схожая тенденция наблюдалась при воздействии

C.albicans S.aureus Kl. pneumoniae E. coli lacE. coli lac+

E. faecium

0% 20%

□ увеличение

Рис. 2 - Характер влияния В.ЫМит но-патогенных микроорганизмов

40% 60% 80% 100%

Доля штаммов □ индифферентный эффект ■ снижение

на антилизоцимную активность услов-

С. albicans S. aureus Kl. pneumoniae E. coli lacE. coli lac+

E. faecium

0% 20% 40% 60% 80% 100%

Доля штаммов

□ увеличение И индифферентный эффект Мснижение

Рис. 3 - Характер влияния В.ЫМит на биоплёнкообразующую активность условно-патогенных микроорганизмов

экзометаболитов В. longum на экспрессивность антилизоцимной активности и биоплёнкообразования микроорганизмов-симбионтов кишечной микрофлоры. В большинстве случаев отмечался ингибирующий эффект в отношении антилизоцимной активности (у 50-86% штаммов, р<0,05) и плёнкообразующей способности (у 56-81% изолятов, р<0,05) транзиторной условно-патогенной микрофлоры. Напротив, стимулирующий эффект был выявлен у 67% культур (р<0,05) в отношении АЛА и у 33 - 50 % штаммов (р<0,05) в отношении ПО у представителей индигенной кишечной микрофлоры. Культуры В. adolescentis, доминирующие при дисбиозе толстого кишечника человека, у 56 - 61 % изолятов представителей транзиторной условно-патогенной микрофлоры снижали способность ингибировать лизоцим и образовывать биоплёнки, тогда как, у представителей индигенной микрофлоры они вызывали как снижение (у 17 -56 % штаммов, р<0,05), так и усиление изученных свойств (у 20 - 60 % культур, р<0,05).

Таким образом, представители Bifidobacterium sp. strain CS микробиоценоза кишечника человека выполняют роль барьера для аллохтонных микроорганизмов, распознавая и препятствуя их биоплёнкообразованию, снижая анти-лизоцимную активность. Как следствие этого, наблюдается снижение перси-стентного потенциала и колонизации УПМ в условиях микробиоты кишечника. Напротив, бифидобактерии стимулируют биологические свойства автохтонных бактерий, имеющих значение в реализации колонизационной резистентности толстого кишечника человека.

При влиянии условно-патогенных микроорганизмов на биологические свойства бифидобактерий отмечалось следующее: представители автохтонной микрофлоры в 17 - 33 % (р<0,05) случаев оказывали стимулирующее влияние на АЛА (рис. 4) и в 33 - 39 % (р<0,05) на ПО культур В. bifidum (рис. 5), а культуры аллохтонных бактерий и грибов в 67 - 89 % (р<0,05) случаев инги-бировали антилизоцимную активность и в 67 — 75 % (р<0,05) подавляли био-плёнкообразование штаммов В. bifidum. При оценке влияния метаболитов УПМ на биологические свойства представителей В. longum и В. adolescentis были получены сходные результаты.

С. albicans . S. aureus Kl. pneumoniae E. coli lac-

E. coli lac+

E. faecium

0% 20% 40% 60% 80% 100%

Попа штлммоп

□ увеличение В индифферентный эффект Шснижение

Рис. 4 - Характер влияния условно-патогенных микроорганизмов на антилизоцимную активность В. ЫПскнп

я i : i

С. albicans ' fñMHHiHBHHHBI

П I 1 1

S. aureus i шшшшяшшшшяшшшшт

■ i . j, ., . i. , ,i.....

Kl. pneumoniae вшшшшшшшяшшшшшл

а 1 1 1 1

E coli lac- шннннн

i 1 1 1 1

E coli lac+ ir- ЯШШШЯ í

i! 1 1 1 1

E faecium "ШШЯШШШШЯ

р-—......^ ^

0% 20% 40% 60% 80% 100%

Доля штаммов

□ увеличение Ш индифферентный эффект Шснижение

Рис. 5 - Характер влияния условно-патогенных микроорганизмов на биоплёнкообразующую активность В.ЫШит

Полученные материалы, по-видимому, можно рассматривать как доказательство одного из механизмов межбактериальных взаимодействий в условиях симбиоза, определяющего формирование и стабилизацию нормального биоценоза толстого кишечника человека. Кроме того, проведенные исследования позволили оценить характер ассоциативных взаимодействий бифидобактерий с условно-патогенными микроорганизмами, выделив при этом 2 основных типа взаимодействия: синергидный и антагонистический.

Синергидный тип межмикробных взаимоотношений имел место в биоценозе Bifidobacterium sp. strain CS с автохтонными представителями микрофлоры толстого кишечника человека (Е. coli 1ас+; Е. faecium). Данные микроорганизмы наиболее характерны для микрофлоры толстого кишечника при эубио-зе. Взаимно усиливая друг друга, формирование данных симбиоценозов, способствует усилению колонизационной резистентности кишечного микробиоценоза человека.

Антагонистический тип межмикробных взаимоотношений Bifidobacterium sp. strain CS был выявлен с представителями аллохтонных УПМ (Е. coli lac-, Kl. pneumoniae, S. aureus, C. albicans) и характеризовался преимущественным снижением антилизоцимной активности и биоплёнкообразо-вания одного или обоих участников симбиоза.

Изменение антилизоцимной активности и интенсивности пленкообразо-вания УПМ может быть одним из возможным защитных механизмов бифидобактерий в условиях дисбиоза кишечника человека. Однако, УПМ также способны снижать персистентный потенциал бифидобактерий, влияя на их биологические свойства и снижая численность представителей Bifidobacterium sp. strain CS в формирующемся патобиоценозе.

Таким образом, результаты проведённой работы позволили выделить два основных момента:

Во-первых, различия в видовом составе и экспрессивности биологических свойств бифидобактерий зависят от возраста и состояния микробиоценоза кишечника обследуемых лиц.

Во-вторых, межмикробные взаимоотношения бифидофлоры и УПМ в условиях ассоциативного симбиоза кишечника человека определяются изменением их биологических свойств под действием метаболитов и клеточных экстрактов микроорганизмов-симбионтов.

ВЫВОДЫ:

1. Эубиоз кишечника человека характеризовался наличием 3-4 видов бифидобактерий, среди которых превалировали В. bifidum и В.longum, тогда как при дисбиозе кишечника отмечалось увеличение количества видов бифидобактерий (6 видов) и доминирование В. adolescentis.

2. Биологические свойства бифидофлоры варьировали в зависимости от состояния микробиоценоза кишечника человека. Для эубиотических штаммов бифидобактерий было характерно наличие более выраженных значений пе-нетрантности и экспрессивности антилактоферриновой, антилизоцимной, плёнкообразующей и антагонистической активностей по сравнению со штаммами, обнаруживаемыми при дисбиозе кишечника. У культур Bifidobacterium sp. strain CS, изолированных при микроэкологических нарушениях кишечника, чаще выявлялась способность инактивировать секреторный иммуноглобулин А по сравнению с эубиотическими штаммами.

3. Антагонистическая активность бифидофлоры к условно-патогенным микроорганизмам кишечной микрофлоры варьировала в зависимости от вида бифидобактерий и микроэкологического состояния кишечника человека. Би-фидобактерии от лиц с эубиозом кишечника имели более высокие значения коэффициента подавления роста УПМ (5,6±0,5), в сравнении с лицами с дисбиозом кишечника (КП - 3,8±0,4; р<0,05). Антагонистическая активность бифидобактерий снижалась в ряду В. longum > В. adolescentis > В. bifidum.

4. Клеточные экстракты и экзометаболиты микроорганизмов-симбионтов изменяли антагонистическую активность представителей Bifidobacterium spp: под действием компонентов S. aureus, Kl. pneumoniae и С. albicans отмечена стимуляция антагонизма бифидобактерий, тогда как воздействие компонентов Б. faecium и Е. coli lac- способствовало снижению антагонизма.

5. При изучении межмикробных связей доминантной и ассоциативной микрофлоры, основанных на изменении их антилизоцимной активности и плён-кообразования, выявлено 2 основных типа взаимоотношений: синергидный тип (бифидобактерии с автохтонными представителями микрофлоры кишечника - Е. faecium и Е. coli 1ас+) и антагонистический тип (бифидобактерии с аллохтонными условно-патогенными микроорганизмами - Е. coli lac-, Kl. pneumoniae, S. aureus, C. albicans).

Список публикаций:

1. Иванова Е.В. Влияние экзометаболитов бифидобактерий на антилизо-цимную активность некоторых дрожжевых грибов/ Е.В. Иванова, A.B. Ва-лышев, Н.Б. Перунова // Проблемы медицинской микологии, 2007. - Т. 8. №

2.-С. 59.

2. Иванова Е.В. Влияние внеклеточных метаболитов бифидобактерий на липолитическую активность Candida spp. и Rhodotorulla spp./ Е.В. Иванова, Н.Б. Перунова, A.B. Валышев // Проблемы медицинской микологии, 2008. -Т. 10. №2.-С. 44.

3. Иванова Е.В. Влияние экзометаболитов дрожжевых грибов на ростовые свойства бифидобактерий/ Е.В. Иванова, Н.Б. Перунова // Сборник материалов второго съезда микологов России «Современная микология в России». -Москва, 2008. - С. 274-275.

4. Влияние экзометаболитов бифидобактерий на способность формировать биоплёнки штаммами Candida albicans/ Е.В. Иванова, C.B. Гордеева, Н.Б. Перунова, C.B. Андрющенко // Иммунопатология, аллергология, инфектоло-гия, 2009. №1.-С. 21-22.

5. Образование биоплёнок клиническими штаммами Candida albicans при дисбиозе кишечника/ C.B. Гордеева, Е.В. Иванова, Н.Б. Перунова, С.Б. Фадеев//Иммунопатология, аллергология, инфектология, 2009. №1.-С. 20-21.

6. Видовая характеристика и факторы персистенции бифидофлоры кишечника в норме и при дисбиозах/ Е.В. Иванова, Н.Б. Перунова, A.B. Валышев, И.В. Валышева, О.В. Бухарин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2009. № 2. - С. 89-93.

7. Антагонистическая активность бифидофлоры кишечного биотопа в норме и при дисбиозах/ О.В. Бухарин, Е.В. Иванова, Н.Б. Перунова, C.B. Гордеева, C.B. Андрющенко // Медицинская наука и образование Урала, 2009. №3,- С. 35-37.

8. Иванова Е.В. Влияние бифидобактерий на антилизоцимную активность микроорганизмов и их способность к образованию биопленок/ Е.В. Иванова, Н.Б. Перунова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2009. - № 4. - С. 46-49.

Список сокращений:

АА - антагонистическая активность

АЛА - антилизоцимная активность

АЛфА - антилактоферриновая активность

Аб^А - антииммуноглобулиновая активность

КП - коэффициент подавления

ПМО - показатель микробной обсеменённости

ПО - плёнкообразование

УПМ - условно-патогенные микроорганизмы

ИВАНОВА ЕЛЕНА ВАЛЕРЬЕВНА

Биологические свойства бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оригинал макет подготовлен в программе Word for Windows 2003 Подписано в печать 9.03.2010 Формат 60*84/16. Усл.-печ. л. 1,0. Печать оперативная. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Иванова, Елена Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. РОЛЬ ФЕКАЛЬНОЙ БИФИДОФЛОРЫ В ОРГАНИЗМЕ ЧЕЛОВЕКА (обзор литературы).

1.1. Характеристика представителей рода Bifidobacterium кишечной микрофлоры человека.

1.2. Взаимодействие бифидобактерий с факторами врождённого иммунитета и их влияние на метаболизм организма человека.

1.3. Роль бифидофлоры в формировании микробиоценоза кишечника человека.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика микроорганизмов, используемых в работе.

2.2. Определение состояния микробиоценоза кишечника.

2.3. Методы выделения и идентификации микроорганизмов.

2.4. Методы изучения биологических свойств бактерий и грибов

2.4.1. Изучение антилизоцимной активности бифидобактерий

2.4.2. Определение антилактоферриновой активности бифидобактерий.

2.4.3. Исследование антииммуноглобулиновой активности бифидобактерий.

2.4.4. Изучение способности фекальной микрофлоры формировать биоплёнку.

2.4.5. Определение антагонистической активности бифидобактерий.

2.5. Способ получения экзометаболитов микроорганизмов и клеточных экстрактов бактериальных культур.

2.6. Методы изучения взаимного влияния бифидобактерий и микроорганизмов-симбионтов на их биологические свойства.

2.7. Методы статистической обработки полученных результатов

ГЛАВА 3. ВИДОВОЙ СОСТАВ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БИФИДОБАКТЕРИЙ В НОРМЕ И ПРИ ДИСБИОЗЕ КИШЕЧНИКА ЧЕЛОВЕКА.

3.1. Частота встречаемости и видовой состав бифидобактерий при различных состояниях микробиоценоза кишечника.

3.2. Характеристика персистентных свойств бифидофлоры в норме и при дисбиозе кишечника человека.

ГЛАВА 4. АНТАГОНИСТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ БИФИДОБАКТЕРИЙ И ЕЁ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ МИКРООРГАНИЗМОВ-СИМБИОНТОВ.

4.1. Антагонистическая активность Bifidobacterium sp. strain CS в зависимости от состояния микрофлоры кишечника человека.

4.2. Изменение антагонистической активности бифидобактерий под действием компонентов ассоциативных микроорганизмов:.

ГЛАВА 5. ИЗМЕНЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ БИФИДОФЛОРЫ С УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫМИ БАКТЕРИЯМИ И

ГРИБАМИ.

5.1. Влияние экзометаболитов бифидобактерий на антшшзо-цимную активность и интенсивность плёнкообразования условно-патогенной микрофлоры кишечника человека.

5.2. Изменение антилизоцимной активности и интенсивности плёнкообразования бифидобактерий под действием метаболитов условно-патогенных бактерий и грибов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические особенности бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека"

В настоящее время охарактеризованы таксономические, морфологические, физиологические особенности бифидобактерий (Новик Г.И. с соавт., 2005; Bezkorovainy A. et al., 1989; Asano Т. et al., 2005; Hadadji M. et al., 2005), а также изучены вопросы качественного и количественного состава бифидобактерий кишечника в зависимости от возраста, характера питания, климатической зоны проживания человека (Шкопоров А.Н. с соавт., 2006; Амерханова A.M., 2009; Gavini F. et al., 2001; He F. et al., 2001). Определена роль бифидобактерий в реализации колонизационной резистентности толстого кишечника, описано их участие в различных метаболических процессах в организме человека (обмен витаминов, желчных кислот) (Шендеров Б.А., 1996; Cheikhyoussef A. et al., 2008). Имеются отдельные сведения по изучению факторов персистенции бифидобактерий (Елагина Н.Н., 2001; Глухова Е.В., 2009).

Указанные моменты и предопределили тематическую направленность наших исследований, которые могли бы способствовать раскрытию патогенетических механизмов межмикробных взаимоотношений нормоф-лоры с условно-патогенными микроорганизмами кишечника и изысканию новых подходов для дальнейшей работы по отбору эффективных пробио-тиков для коррекции дисбиоза кишечника.

Цель и задачи исследования

Для реализации этой цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Определить видовой состав и биологические свойства (антилизо-цимную, антилактоферриновую, антииммуноглобулиновую и биопленкообразующую активности) фекальной бифидофлоры в норме и при дисбио-зе кишечника человека.

2. Изучить антагонистическую активность бифидобактерий при эу-биозе и дисбиозе кишечника человека и оценить влияние условно-патогенной микрофлоры на антагонизм представителей рода Bifidobacterium.

3. Оценить в условиях in vitro взаимное влияние экзометаболитов бифидобактерий и микроорганизмов-симбионтов на их антилизоцимную активность и способность к образованию биоплёнок.

Новизна исследования

Выявлены различия в видовом составе бифидофлоры в зависимости от состояния микробиоценоза кишечника человека. При эубиозе в I группе обследуемых лиц (дети до 1 года) превалировал вид В. bifidum, во II группе (дети после 1 года и взрослые) - В. bifidum и В. longum. При дисбиозе кишечника отмечено увеличение видового состава бифидофлоры (6 видов) по сравнению с эубиозом (3-4 вида). В I группе при дисбиозе кишечника не удалось выявить доминирующий вид среди бифидобактерий, во II группе превалировал вид В. adolescentis.

Впервые выявлены распространённость и выраженность антилакто-ферриновой активности и плёнкообразующей способности культур Bifidobacterium sp. strain CS, которые, также как антилизоцимная активность, положительно коррелировали с показателем микробной обсеменён-ности бифидобактерий. Изучена пенетрантность и экспрессивность способности бифидобактерий инактивировать секреторный иммуноглобулин А, отрицательно коррелировавший с ПМО бифидобактерий. Определены отличия в распространенности и выраженности персистентных свойств (АЛА, АЛфА, AsIgA) и плёнкообразования представителей рода Bifidobacterium в зависимости от вида бифидобактерий и состояния микробиоценоза кишечника человека. При дисбиозе толстого кишечника у штаммов бифидобактерий отмечено снижение антилизоцимной, антилактоферрино-вой, плёнкообразующей активностей и усиление способности инактивировать секреторный иммуноглобулин А.

Пенетрантность и экспрессивность антагонистической активности бифидобактерий варьировала у различных видов, и была выше у штаммов, изолированных при эубиозе, чем у культур, выделенных при дисбиозе кишечника человека. Способность бифидобактерий ингибировать рост УПМ снижалась в ряду В. longum > В. adolescentis > В. bifidum.

Установлено, что клеточные экстракты и экзометаболиты микроорганизмов-симбионтов изменяли антагонистическую активность представителей Bifidobacterium sp. strain CS. Влияние компонентов условно-патогенных микроорганизмов на антагонистическую активность бифидобактерий было различным: усиление антагонизма наблюдалось под действием экзометаболитов и клеточных экстрактов S. aureus, Kl. pneumoniae и С. albicans; снижение антагонистической активности - при влиянии экзометаболитов Е. faecium и Е. coli.

Бифидобактерии и условно-патогенные микроорганизмы изменяли антилизоцимную активность и плёнкообразующую способность ассоциан-тов преимущественно в двух направлениях. Синергидный тип межмикробных взаимоотношений был характерен для ассоциации бифидобактерий с индигенными представителями микрофлоры толстого кишечника (Е. fae-cium и Е. coli 1ас+), где в 60-75 % случаев отмечена стимуляция как АЛА, так и плёнкообразования у обоих ассоциантов. Антагонистический тип взаимоотношений нормофлоры (бифидобактерий) имел место с транзитор-ными представителями УПМ (Е. coli lac-, Kl. pneumoniae, S. aureus, С. albicans), у которых в 67 - 89 % отмечено взаимное снижение антилизоцимной активности и плёнкообразования микросимбионтов.

Практическая значимость

Полученные в работе данные расширяют теоретические представления о роли видового состава и биологических свойств бифидобактерий в формировании ассоциативного симбиоза в условиях микробиоценоза кишечника человека.

Выявленные особенности регулирующего воздействия анаэробных микроорганизмов (бифидобактерий) на факторы персистенции условно-патогенной микрофлоры могут быть использованы в качестве дополнительных критериев отбора эффективных пробиотиков с целью коррекции дисбиоза кишечника. Способность клеточных экстрактов и экзометаболи-тов условно-патогенной флоры стимулировать антагонистическую активность бифидобактерий открывает перспективу для создания синбиотиков.

Положения, выносимые на защиту:

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

-1 Междисциплинарном микологическом форуме (Москва, 2009);

- V, VI Всероссийских конференциях «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертационной работы

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Иванова, Елена Валерьевна

ВЫВОДЫ:

1. Эубиоз кишечника человека характеризовался наличием 3-4 видов бифидобактерий, среди которых превалировали В. bifidum и В. longum, тогда как при дисбиозе кишечника отмечалось увеличение количества видов бифидобактерий (6 видов) и доминирование В. adolescentis.

2. Биологические свойства бифидофлоры варьировали в зависимости от состояния микробиоценоза кишечника человека. Для эубиотических штаммов бифидобактерий было характерно наличие более выраженных значений пенетрантности и экспрессивности антилактоферриновой, антилизоцимной, плёнкообразующей и антагонистической активностей по сравнению со штаммами, обнаруживаемыми при дисбиозе кишечника. У культур Bifidobacterium spp., изолированных при микроэкологических нарушениях кишечника, чаще выявлялась способность инактивировать секреторный иммуноглобулин А по сравнению с эубиотическими штаммами.

3. Антагонистическая активность бифидофлоры к условно-патогенным микроорганизмам кишечной микрофлоры варьировала в зависимости от вида бифидобактерий и микроэкологического состояния кишечника человека. Бифидобактерии от лиц с эубиозом кишечника имели более высокие значения коэффициента подавления роста УПМ (5,6±0,5 ед.), в сравнении со штаммами от лиц с дисбиозом кишечника (КП - 3,8±0,4 ед.; р<0,05). Антагонистическая активность бифидобактерий снижалась в ряду В. longum > В. adolescentis > В. bifidum.

4. Клеточные экстракты и экзометаболиты микроорганизмов-симбионтов изменяли антагонистическую активность представителей рода Bifidobacterium: под действием компонентов S. aureus, Kl. pneumoniae и С. albicans отмечена стимуляция антагонизма бифидобактерий, тогда как воздействие компонентов Е. faecium и Е. coli способствовало снижению антагонизма.

5. При изучении межмикробных связей доминантной и ассоциативной микрофлоры, основанных на изменении их антилизоцимной активности и плёнкообразования, выявлено 2 основных типа взаимоотношений: синер-гидный тип (бифидобактерии с автохтонными представителями микрофлоры кишечника - Е. faecium и Е. coli 1ас+) и антагонистический тип (бифидобактерии с аллохтонными УПМ - Е. coli lac-, Kl. pneumoniae, S. aureus, C. albicans).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Бифидобактерии являются важнейшими представителями облигат-ной микрофлоры кишечника (Гончарова Г.И., 1987; Roy D., 1992; Vasiljev-ic Т. et al., 2008). Функции бифидофлоры разнообразны, одной из которых является поддержание нормального микроэкологического статуса занимаемого биотопа (Шендеров Б. А., 1996, 1998).

При дисбиотических нарушениях в кишечнике человека происходит изменение количества бифидобактерий и условно-патогенных микроорганизмов. Исследования численности и состава микробиоценоза кишечника являются основным критериями для оценки его функционального состояния (Пинегин Б.Г. с соавт., 1984; Щербаков П.Л. с соавт., 2007; Beno Y. et al., 1991; Favier C.F. et al., 2002). По литературным данным мало изучены вопросы о роли видового состава и биологических характеристик бифидобактерий в формировании эубиоза и дисбиоза кишечника человека. В связи с чем, важным является изучение особенности видового состава и комплекса биологических характеристик бифидобактерий, изолированных при различных состояниях микробиоценоза кишечника человека. Исходя из концепции ассоциативного симбиоза микроорганизмов (Бухарин О.В. с соавт., 2007), важным представляется изучение взаимного влияния микроорганизмов в ассоциации бифидобактерий с УПМ, что может иметь значение в поддержании нормоценоза или формирования патоценозов кишечного биотопа.

Проведение такой работы могло бы способствовать раскрытию механизмов межмикробных взаимоотношений нормофлоры с УПМ кишечника и изысканию новых подходов по отбору эффективных пробиотиков для коррекции дисбиозов кишечного биотопа, что определило цель и задачи нашего исследования.

Целью настоящего исследования явилось изучение видового состава и биологических свойств бифидобактерий и их взаимовлияние с микросимбионтами кишечной микрофлоры. Для достижения данной цели были поставлены и решены следующие задачи: определён видовой состав и биологические свойства (антилизоцимная, антилактоферриновая, антиимму-ноглобулиновая активности, способность формировать биопленку) фекальной бифидофлоры в норме и при дисбиозе кишечника человека; изучены антагонистическая активность различных видов бифидобактерий в зависимости от состояния микробиоценоза толстого кишечника и оценено влияние клеточных экстрактов и экзометаболитов условно-патогенной микрофлоры на антагонизм Bifidobacterium sp. strain CS. В условиях in vitro определено взаимное влияние экзометаболитов бифидобактерий и микроорганизмов-симбионтов на способность образовывать биоплёнки и ан-тилизоцимную активность.

При проведении исследования было выделено 163 фекальных штамма аэробных и анаэробных микроорганизмов, выделенных от пациентов при обследовании на дисбиоз кишечника.

Выделение и идентификацию микроорганизмов осуществляли общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств. Изучение биологических свойств проводили по адаптированным известным методикам (Бухарин О.В. с соавт., 1998, 2000, 2005; Muriana Р., 1987; CTToole G., 2000). Полученные результаты обработаны с помощью статистических методов.

Установлены, особенности видового состава и комплекса биологических свойств микроорганизмов, выделенных при эубиозе и дисбиозе кишечника человека. Для эубиоза кишечника характерно более высокие значения ПМО представителей Bifidobacterium sp. strain CS, по сравнению с данным показателем при дисбиозе кишечника. Доминирующими видами бифидобактерий при эубиозе являлись В. longum (41 %) и В. bifidum

32 %), а при дисбиозе - В. adolescentis (44 %). При дисбиозе отмечено увеличение видового спектра бифидофлоры (6 видов) по сравнению с эу-биозом (3-4 вида).

Снижение количества бифидобактерий при развитии патологических состояний кишечника, описано рядом исследователей (Бондарен-ко В.М. с соавт., 1998; Бухарин О.В. с соавт., 2002,; Барановский А.Ю. с соавт., 2008; Антоненко О.М., 2009) и закономерно. Однако при дисбиозе отмечалось увеличение видового спектра бифидофлоры и появление других доминантов бифидобактерий, что требует обсуждения. Возможно, данные изменения в видовом составе бифидофлоры свидетельствуют о несоответствии биологических характеристик микроорганизмов изменяющимся условиям биотопа при дисбиозе. Так как, в условиях дисбиоза наблюдается повышение рН среды, переключение с сахаралитических на протеолитические процессы брожения в кишечнике человека за счет увеличении количества условно-патогенных микроорганизмов (Краснооголо-вец В.Н., 1989; Бокова А.Г., 1991; Горская Е.М., 1994). Как известно культуры бифидобактерий очень чувствительны к изменению рН среды, не растут при рН<4,5 или рН>8,5. Однако, в литературе отмечено, что штаммы В. longum и В. adolescentis могут расти при рН<4,5 и жизнеспособны при рН>8,5 (Martin J.A. et al., 2008). Дефицит питательных веществ, возникающий при нарушениях процессов пристеночного и полостного пищеварения вследствии дисбиоза или наследственных (целиакия) и приобретённых заболеваний толстого кишечника, также может способствовать качественным и количественным изменениям состава бифидобактерий кишечной микрофлоры человека. В работе Collado М.С. et al. (2008) отмечают, что при различных формах целиакии наблюдается видовая перестройка представителей бифидофлоры кишечника человека. Виды В. longum, В. breve и В. bifidum в микробиоценозе кишечника у таких больных встречались реже, однако чаще регистрировались виды В. adolescentis и В. catenulatum. На изменения видового состава и количественного соотношения представителей нормофлоры - лактобацилл репродуктивного тракта связанного с экологическим состоянием биотопа отмечает в своих исследованиях Забирова Т.М. (2001).

Отмечены возрастные особенности кишечной бифидофлоры: у детей до 1 года превалировал - В. bifidum (30%), в возрастной группе от 1 года до 60 лет - В. longum (26%) и В. adolescentis (32%). Полученные данные согласуются с исследованиями Reuter G. (2001) и Амерхановой A.M. (2009), также изолировавших из кишечной микрофлоры детей первого года жизни и взрослых данные виды бифидобактерий.

В литературе имеются данные о способности бифидобактерий адаптироваться к защитно-регуляторным системам хозяина, позволяющей длительно персистировать в различных биотопах. В работе Елагиной Н.Н. (2001) была охарактеризована антилизоцимная активность В. longum, В. breve, и В. adolescentis кишечной микрофлоры человека. Также в литературе имеются данные по наличию у представителей рода Bifidobacterium, заселяющих репродуктивный тракт женщин, антилактоферриновой активности (Глухова Е.В., 2009).

Однако отсутствуют данные по выраженности и распространенности персистентных свойств (антилизоцимной, антилактоферриновой, а также антииммуноглобулиновой активностей) различных видов бифидобактерий, изолированных при эубиозе и дисбиозе кишечника человека. Кроме того, недостаточно изучена способность бифидофлоры формировать биоплёнки, обеспечивающая устойчивость бактерий к воздействию неблагоприятных факторов, как бактериальной, так и химической природы (Лебедев К.А. с соавт., 2009). Что и послужило предпосылкой для изучения биологических свойств бифидофлоры в норме и при дисбиозе кишечника человека.

При анализе биопрофилей бифидобактерий, выделенных при эубиозе кишечника, установлены высокие значения антилизоцимной и анти-лактоферриновой активностей, способности формировать биоплёнки. У дисбиозных штаммов бифидобактерий изучаемые свойства были не выражены, но отмечалась широкая распространённость свойства инактивиро-вать секреторный иммуноглобулин А. Таким образом, впервые охарактеризованы отличия в пенетрантности и экспрессивности персистентных характеристик в зависимости от вида бифидобактерий и состояния биотопа.

Корреляционный анализ позволил выявить прямую корреляцию между ПМО и биологическими свойствами представителей рода Bifidobacterium. Показатель микробной обсеменённости бифидобактерий положительно коррелировал с образованием биопленок (i^0,74; р<0,05), антилизоцимной активностью (г=0,64; р<0,05), антилактоферриновой активностью (г=0,43; р<0,05), но отрицательно коррелировал с антииммуноглобу-линовой активностью (г= -0,38; р<0,05) штаммов.

Возможно, наличие высоких значений изученных свойств определяет эволюционно-сложившиеся отношения бифидобактерий к факторам неспецифической резистентности хозяина, постоянно воздействующих на индигенных представителей микробиоценоза кишечника человека. Инактивация лизоцима, лактоферрина, секреторного иммуноглобулина А анаэробными обитателями кишечного микробиоценоза приводит к длительной персистенции нормальной микрофлоры в биотопах макроорганизмов. Способность формировать биоплёнку бифидобактериями на поверхности слизистых кишечника, определяет их персистирование в условиях биотопа и устойчивость к воздействующим неблагоприятным факторам, как микробного генеза, так и химического характера. Снижение персистентно-го потенциала бифидобактерий при глубоких дисбиотических нарушениях в кишечнике, за исключением антииммуноглобулиновой активности, возможно связано с одной стороны с влиянием УПМ на экспрессивность свойств нормофлоры (Harasawa R. et al., 1980; Перунова Н.Б., 2003). С другой стороны, может быть связано с дефицитом лизоцима и лактофер-рина в среде, так как синтез лизоцима и лактоферрина в кишечнике многократно увеличивается при острых инфекционных процессах, таких как сальмонеллёзные кишечные инфекции (Чайникова И.Н., 2006). При дисбиозе, как отмечается в работах Валышева А.В. (1997), Черкасова С.В. (1997) и Чубенко Г.И. (2000) наблюдается повышение способности разрушать лизоцим условно-патогенными микроорганизмами, кроме того в исследованиях Валышевой И.В. (2005) показано, что большинство из них обладают выраженной способностью деградировать лактоферрин. Увеличение антииммуноглобулиновой активности у штаммов бифидобактерий, изолированных при дисбиозе кишечника человека может быть связано с тем, самым активным стимулом для синтеза slgA в кишечнике являются микробные антигены (Kelly D. et al., 2005). Как известно, дисбиоз кишечника сопровождается чрезмерным размножением условно-патогенных микроорганизмов (Панчишина М.В. с соавт., 1977; Бокова А.Г., 1991; Бон-даренко И.М., 1998; Savage D.C. et al., 2001). Инактивация секреторного иммуноглобуллина А индигенными анаэробными обитателями кишечного микробиоценоза может рассматриваться как вариант выживания бифидобактерий при дисбиотических изменениях в толстом кишечнике человека.

Проведенные исследования по изучению антагонистической активности бифидофлоры показали, что большинство исследуемых штаммов бифидобактерий (33-93 % культур) обладают антагонистической активностью по отношению к представителям условно-патогенной микрофлоры кишечника, за исключением дрожжевых грибов. Отсутствие АА бифидобактерий к микромицетам возможно объясняется наличием других механизмов межмикробных взаимоотношений, к примеру, снижением перси-стентных свойств грибов под действием бифидофлоры. Полученные данные согласуются с исследованиями Перуновой Н.Б. (2003),

Cheikhyoussef A. (2009), Lee Y.-J. (2003), изучавших влияние бифидобактерий на УПМ. Пенетрантность и экспрессивность антагонистической активности варьировала у бифидобактерий в зависимости от состояния микробиоценоза кишечника, и была выше при эубиозе и I степени дисбиоза, чем при глубоких нарушениях в толстом кишечнике человека. Снижение антагонистического потенциала индигенных микроорганизмов при дисбиозе кишечника возможно и объясняет их элиминацию на фоне гиперколонизации биотопа условно-патогенными микроорганизмами, отмеченная рядом авторов в своих исследованиях (Барановский А.Ю. с соавт., 2008; Pares R.W., 1996; Patrick S., 1995; Rodney D., 1994). Антагонистическая активность имела отличия у различных видов бифидобактерий и снижалась в ряду В.longum > В. adolescentis > В. bifidum, что согласуется с более ранними работами (Коршунов В.М. с соавт., 1999; Пикина А.П. с соавт., 1999; Постникова Е.А. с соавт., 2004).

Полученные сведения могут определять отличия в защите кишечника различными видами бифидобактерий при эубиозе и дисбиозе. Менее выраженная антагонистическая активность бифидофлоры в отношении условно патогенных ассоциантов при II-III степени дисбиоза кишечника, может способствовать снижению уровня анаэробных микроорганизмов на фоне увеличению числа оппортунистических бактерий и прогрессирова-нию дисбиоза. Полученные данные расширяют представления об антагонистической активности бифидобактерий при эубиозе и дисбиозе кишечника и раскрывают один из возможных механизмов формирования кишечного микробиоценоза человека.

Известно, что при взаимодействии микроорганизмов в ассоциации может происходить изменение антагонистической активности по отношению друг к другу (Cha С. et al., 1998; Pierson Е.А. et al., 1998; Holden M. et al., 1999). Таким образом, возможно участие сигнальных молекул в регуляции бактериальных свойств. Активная роль в реализации антагонистического типа отношения между микроорганизмами принадлежит микробным регуляторам - феромонам, гомосеринлактонам, клеточным стенкам (Yan L., 2003). Изучение этих вопросов открывает перспективы выявления новых механизмов формирования и функционирования микробиоценозов, через регуляцию антагонизма индигенных микроорганизмов ассоциативными микроорганизмами. В связи с этим, нам представилось целесообразным изучить влияние условно-патогенной микрофлоры на антагонизм бифидобактерий.

Установлено влияние клеточных экстрактов и экзометаболитов условно-патогенных бактерий на антагонистическую активность представителей рода Bifidobacterium. Среди трех видов бифидобактерий модулирующий эффект АА под влиянием компонентов микроорганизмов был различным и снижался в ряду В. adolescentis > В. longum > В. bifidum. Так, вид В. bifidum изменял АА под влиянием 3 видов УПМ, В. longum под действием 5 видов УЕМ, В. adolescentis при воздействии 7 видов УПМ, может быть связано с условиями колонизации В. bifidum В. longum преимущественно при эубиозе кишечника, а В. adolescentis - при глубоких нарушениях микробиоценоза кишечника, характеризующихся увеличением антигенной нагрузки условно-патогенных микроорганизмов на кишечный биотоп. Увеличение АА у всех трёх видов бифидобактерий наблюдалось под действием компонентов S. aureus, Kl. pneumoniae и С. albicans, часто являющихся причиной выраженных нарушений в микробиоценозе кишечника человека. Снижение антагонистической активности Bifidobacterium sp. strain CS было отмечено при влиянии экзометаболитов Е. faecium и E.coli на антагонистическую активность В. longum. Выявленный эффект может быть связан с особенностями формирования ассоциативного симбиоза в условиях толстого кишечника. Влияние экстрактов клеточной стенки УПМ на антагонизм бифидобактерий, связано преимущественно с наличием в составе клеточной стенки пептидогликана, что согласуется с данными литературы (Yan L., 2003; Семёнов А.В., 2009).

Взаимодействие между доминантом и ассоциантом освещалось, в основном, с позиции изменения ростовых свойств культур (Вахитов Т.Я., с соавт., 2006; Hoover D.G., 1993; Gibson G.R. et al., 1994; Gagnon M. et al., 2004), влияния на адгезивную способность (Timmerman Н.М. et al., 2007; Постникова E.A. с соавт., 2004). Однако, для заселения различных экониш хозяина и выживания в условиях макроорганизма, микроорганизмам наряду с факторами агрессии используют факторы персистенции, такие как антилизоцимную и плёнкообразующую способности. Благодаря наличию персистентных свойств бактерии и грибы способны адаптироваться к за-щитно-регуляторным системам хозяина (Бухарин О.В., 1999). В настоящее время существуют работы о влиянии пробиотических штаммов В. bifidum на антилизоцимную активность энтеропатогенных Е. coli, Kl. pneumoniae и S. enteritidis (Елагина H.H., 2001), в работе Перуновой Н.Б. (2003) описаны механизмы взаимовлияния штаммов В. longum с дрожжевыми грибами. Однако вопрос об изменении персистентных свойств бифидобактерий и микроорганизмов-симбионтов в условиях ассоциаций остается открытым. Так как данных, позволяющие проанализировать особенности формирования межмикробных взаимовлияний на факторы персистенции бифидобактерий с представителями, как автохтонных микроорганизмов, так и аллох-тонных микроорганизмов, в настоящее время не полные, что и стало одной из задач нашей работы. Полученные данные позволят выявить основные механизмы, определяющие формирование и поддержание микробиоценозов организма человека в норме и при различных патологических состояниях.

Изучено взаимовлияние экзометаболитов бифидобактерий (В. bifidum, В. longum и В. adolescentis) и условно-патогенных микроорганизмов к продукции ингибиторов лизоцима и способности формировать биоплёнку. Характер взаимодействия между доминантом и ассоциантом зависел от их видовой принадлежности. Экзометаболиты В. bifidum и В. longum, изолируемые в большинстве случаев при эубиозе, в 17-86 % случаев оказывали ингибирующий эффект в отношении антилизоцимной активности и биплёнкообразования транзиторной условно-патогенной микрофлоры и в 11 — 67 % случаев стимулирующий эффект у представителей индигенной кишечной микрофлоры. Культуры В. adolescentis, доминирующие при глубоких микроэкологических нарушения в кишечнике человека, у 55 — 67 % изолятов представителей аллохтонной условно-патогенной микрофлоры снижали АЛА и ПО, у представителей автохтонной микрофлоры вызывали как снижение, так и увеличение изученных свойств.

Таким образом, виды В. bifidum и В. longum кишечного микробиоценоза человека выполняют роль барьера для транзиторных микроорганизмов, распознавая, препятствуя их биоплёнкообразованию и ингиби-руя антилизоцимную активность. Как следствие этого, наблюдается снижение персистентного потенциала и колонизации УПМ в толстом кишечнике. Напротив, представители рода Bifidobacterium стимулируют биологические свойства индигенных бактерий, имеющих значение в реализации колонизационной резистентности кишечника человека. Полученные материалы можно рассматривать как механизм межбактериальных взаимодействий, определяющих формирование и стабилизацию нормального биоценоза кишечника. У представителей В. adolescentis, доминирующих при дисбиозе кишечника, распознавание аллохтонных и автохтонных микроорганизмов не выражено, так как у всех УПМ под влиянием метаболитов В. adolescentis наблюдается ингибирование биологических свойств. Что может быть связано с особенностями микробной перестройки и повышением обсеменённости УПМ при дисбиозе кишечника человека. Ассоциативные микроорганизмы, имеющие положительные значения в норме, при дисбиозе могут менять свои свойства и являться патогенетическим звеном ряда воспалительных заболеваний. Поэтому данные взаимодействия возможно рассматривать как механизм межбактериальных взаимодействий, определяющих стабилизацию биоценоза кишечника.

Анализируя, влияние УПМ на биологические свойства бифидобактерий отмечена та же тенденция. В 33 - 67 % случаев представители автохтонной микрофлоры оказывали стимулирующий эффект на АЛА и ПО бифидобактерий, а культуры аллохтонных бактерий и грибов 67 - 89 % случаев ингибировали биологические свойства представителей нормофло-ры. Таким образом, проведенные исследования позволили определить характер ассоциативных взаимодействий бифидобактерий с условно-патогенными микроорганизмами. Синергидный тип межмикробных взаимоотношений имел место в ассоциации бифидобактерий с аутохтонными представителями микрофлоры кишечного биотопа. В ассоциациях Bifidobacterium sp. strain CS с Escherichia coli lac+ и Enterococcus faecalis в 60-75 % случаев отмечалось взаимное усиление как антилизоцимной активности, так и способности к образованию биопленок у обоих участников ассоциации. Данные микроорганизмы наиболее характерны для эу-биоза кишечника. Таким образом, взаимно усиливая друг друга, формирование данных ассоциаций, способствует увеличению колонизационной резистентности биотопа толстого кишечника человека.

Напротив, антагонистические симбиотические взаимоотношения В. bifidum и В. longum были выявлены с представителями аллохтонных УПМ (Е. coli lac-, Kl. pneumoniae, S. aureus, C. albicans) и характеризовались преимущественным ослаблением одного или обоих участников ассоциации.

Изменение антилизоцимной активности и интенсивности плёнкообразования УПМ может быть одним из возможным защитных механизмов бифидобактерий в условиях дисбиоза кишечника человека. Однако, УПМ также способны снижать персистентный потенциал бифидобактерий, влияя на их биологические свойства и снижая численность представителей рода Bifidobacterium в формирующемся патологическом биоценозе. Полученные результаты согласуются с работами авторов (Парфёнов А.И., 1998; Чубенко Г.И., 2000; Hopkins M.J. et al., 2002, 2005).

Суммируя данные, полученные в ходе исследования, необходимо выделить два основных момента:

Во-первых, различия в видовом составе и экспрессивности биологических свойств бифидобактерий зависят от состояния микробиоценоза кишечника обследуемых лиц.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Иванова, Елена Валерьевна, Оренбург

1. Амерханова A.M. Научно-производственная разработка новых препара-тов-синбиотиков и клинико-лабораторная оценка их эффективности / A.M. Амерханова // Автореф. дис. . д-ра биол. наук. - М., 2009. -260 с.

2. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека / Ю.В. Несвижский, А.А. Воробьёв, С.С. Бела-носов и др. // Вестник РАМН, 1997. №3. С. 23-25.

3. Анализ фосфолипидов бифидобактерий / Г.И. Новик, Г.И. Астапович, А. Гржергоржевич, А. Гамьян// Микробиология, 2006. Том 75, №1.-С. 40-45.

4. Антоненко О.М. Роль пробиотиков в профилактике и лечении дисбио-тических нарушений после антибиотикотерапии / О.М. Антоненко // Consilium medicum, приложение гастроэнтерология, 2009. №1. С. 5155.

5. Ардатская М.Д. Клиническое значение короткоцепочечных жирных кислот при патологии желудочно-кишечного тракта / М.Д. Ардатская // Дис. д-ра мед. наук. М., 2003. - 220 с.

6. Ассоциативный симбиоз / О.В. Бухарин, Е.С. Лобакова, Н.В. Немцева, С.В. Черкасов // Екатеринбург: УрО РАН. 2007. - 264 с.

7. Барановский А.Ю. Дисбактериоз кишечника / А.Ю. Барановский, Э. А. Кондрашина // СПб.: Питер.- 2008.- 240 с.

8. Белобородова Н.В. Роль микробных сообществ или биоплёнок в кардиохирургии/ Н.В. Белобородова, И.Т. Байрамов // Антибиотики и химиотерапия, 2008. Том 73. С. 44-59.

9. Биологическая активность микроорганизмов-пробиотиков. /Г.И. Новик, А.А. Самарцев, Н.И. Астапович и др. // Прикладная биохимия и микробиология, 2006. Т.42, № 2. С. 187-194.

10. Биологическая активность полярных липидов бифидобактерий / Г.И. Новик, Г.И. Астапович, М. Пасцяк, А. Гамьян // Микробиология, 2005. Том 74, № 6. С. 781-787.

11. Блохина И.Н. Подходы к классификации бифидобактерий на основе данных о структуре их ДНК / И.Н. Блохина, Г.Р. Леванова, А.Ю. Лихачёва // Молекулярн. генетика, микробиол., вирусол., 1995. № 4. С .2729.

12. Бокова А.Г. Роль условно-патогенных микрорганизмов при ОКИ и проблема дисбактериоза кишечника у детей / А.Г. Бокова // Автореф. дис . дра мед. наук. 1991. - 220 с.

13. Бондаренко В.М. Прикладные аспекты молекулярной биологии бифидобактерий и лактобацилл / В.М. Бондаренко // Журн. микробиол., 2006. №2. С. 89-97.

14. Бондаренко В.М. Стабилизирующее действие метаболического про-биотика Хилак форте на нормальную микрофлору кишечника / В.М. Бондаренко // Фарматека, 2005. №1(97). С. 44-49.

15. Брюханов А.Л. Аэротолерантность строго анаэробных микроорганизмов: факторы защиты от окислительного стресса / А.Л. Брюханов, А.И. Нетрусов // Прикладная биохимия и микробиология, 2007. Том 43, № 6. -С. 635-652.

16. Брюханов А.Л. Каталаза и супероксиддисмутаза: распространение, свойства и физиологическая роль в клетках строгих анаэробов / А.Л. Брюханов, А.И. Нетрусов // Биохимия, 2004. Том 69, № 9. С. 11701186.

17. Бугланов А.А. Метаболизм железа и металопротеиды / А.А. Бугланов // Вопросы медицинской химии, 1988. № 3. С. 2-7.

18. Бухарин О.В. Анаэробная микрофлора человека / О.В. Бухарин, А.В. Валышев // Екатеринбург: УрО РАН. 2004. - 263 с.

19. Бухарин О.В. Бактериально-грибковые ассоциации кишечника в условиях колонизации дрожжеподобными грибами рода Candida / О. В. Бухарин, А.В. Валышев, Н.Б. Перунова // Журн. микробиол., 2002. № 5.- С.45-48.

20. Бухарин О.В. Бактерионосительство (медико-экологический аспект) /• О.В. Бухарин, Б .Я. Усвяцов // Екатеринбург: УрО РАН. 1996.- 207 с.

21. Бухарин О.В. Биология патогенных кокков / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, O.JI. Карташова // М.: Медицина. 2002. - 285 с.

22. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин // М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН. 1999. - 365 с.

23. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий и влияние на них пробиотиков при дисбиозе кишечника / А.В. Валышев // Автореф. . дисс. канд. мед. наук. Оренбург, 1997. - 122 с.

24. Валышева И.В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов / И.В. Валышева // Автореф. Дис. канд. биол. наук. Оренбург, 2005 -147 с.

25. Вахитов Т.Я. Регуляторные функции экзометаболитов бактерий / Т.Я. Вахитов, JI.H. Петров // Микробиология, 2006. Том 75, № 4. С. 483488.

26. Выделение и характеристика белково-полисахаридного комплекса, секретируемого Bifidobacterium adolescentis / Г.И. Новик, Г.И. Астапо-вич, А.А. Самарцев, Н.Е. Рябая // Микробиология, 1997. Том.66, №5. -С. 621-627.

27. Выделение, идентификация и некоторые биологические свойства бифидобактерий из кишечника человека / С.Г. Карпушина, М.В. Тюрин, А.А. Иванов и др. // Биотехнология, 1998. №2. С. 28-36.

28. Гланц С. Медико-биологическая статистика. / С. Гланц // М.: Практика, 1999. 459 с.

29. Глухова Е.В. Микроэкологическая характеристика биотопов репродуктивного тракта жещин при эндометрите / Е.В. Глухова // Автореф. Дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2009 - 138 с.

30. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека, её защитная роль в организме и обоснование сфер применения препарата бифидумбактерина / Г.И. Гончарова // Автореф. дис. . д-ра биол. наук. М., 1982. - 238 с.

31. Гончарова Г.И. Изучение бифидобактерий, разработка препарата «Сухой бифидобактерии» и его эффективность при кишечных заболеваниях детей первого года жизни / Г.И. Гончарова // Автореф. дис. . канд биол. наук. М., 1970. - 120 с.

32. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции / У.М. Горская // Дис. докт. мед. наук. М., 1994. - 240 с.

33. Действие лактопероксидазы, лактоферрина и лактоглобулина на Shigella sonnei в эксперименте in vitro / И.И. Денисова, Т.Я. Генадьева, Т.В. Жданова и др. // Журн. микробиол., 1996. № 1.- С. 66-69.

34. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта / В.М. Бондаренко, Б.В. Боев, Е.А. Лыкова, А.А. Воробьев // Рос. журн. гастроэнтерологии, ге-патологии, колопроктологии, 1998. № 21. С.66-70.

35. Елагина Н.Н. Факторы персистенции неспорообразующей анаэробной микрофлоры кишечника человека / Н.Н. Елагина // Автореф. Дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2001. - 128 с.

36. Ефимов Б.А. Микрофлора кишечника у населения различных стран / Б.А. Ефимов, Л.И. Кафарская, Н.П. Тарабрина // Тез. докладов конф. "Дисбактериозы и эубиотики", М., 26-28 марта, 1996.

37. Забирова Т.М. Биологические свойства лактобацилл биотопов человека в норме и при дисбиозах / Т.М. Забирова // Автореф. Дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2001. - 148 с.

38. Значение бифидофлоры для организма человека и необходимость её нормализации / Г.И. Гончарова, Э.П. Козлова, A.M. Лянная, В.И. Чистякова// Новые лекарственные препараты. Экспресс-информация, 1987. Вып. 4.-С. 1-5.

39. Зубков М.Н. Современная таксономия и номенклатура облигатно-анаэробных бактерий, выделенных от человека / М.Н. Зубков // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2005. Том 7, №4.-С. 312-322.

40. Изменение микробиоценоза толстого кишечника у больных различными заболеваниями / А.А. Воробьев, Л.О. Иноземцева, Е.П. Буданова и др. // Вестник РАМН., 1995. №5. С. 59-64.

41. Изоляция и сравнительный анализ фракций гликолипидов бифидобактерий / Г.И. Новик, Г.И. Астапович, А. Гржергоржевич, А. Гамьян // Микробиология, 2005. Том 74, № 6. С. 772 - 780.

42. Изучение антагонистической активности бифидобактерий in vitro и invivo с использованием гнотобиологической технологии / В.М. Коршунов, З.А. Уртаева, В.В. Смеянов и др. // Журн. микробиол., 1999. №5. -С. 72-77.

43. Изучение бифидофлоры влагалища у женщин репродуктивного возраста / В.М. Коршунов, З.А. Гудиева, Б.А. Ефимов и др. // Журн. микробиол., 1999. № 4. С. 74-78.

44. Иммунологические препараты и перспективы их применения в инфек-тологии / Г.Г. Онищенко, В.А. Алёшкина, С.С. Афанасьева, В.В. Поспеловой // М.: Медицина. 2002. - 607 с.

45. Иммунорегуляция в системе микрофлора-интестинальный тракт / С.С. Хромова, Б.А. Ефимов, Н.П. Тарабрина и др. // Аллергология и иммунология, 2004. Том 5, № 2. С. 265-271.

46. Калмыкова А.И. Сравнительная характеристика различных штаммов бифидобактерий / А.И. Калмыков // Пробиотики и кисломолочные продукты, 1999.-С. 10-13.

47. Качественный состав нормальнй микрофлоры кишечника у лиц различных возрастных групп / В.М. Коршунов, JI.B. Поташник, Б.А. Ефимов, Н.Н. Володин, О.В. Коршунова, К. Gyr, R. Frei // Журн. микробиол., 2001. №2.- С. 57-61.

48. Классификация и методы идентификации бифидобактерий и лактоба-цилл / А.Ю. Лихачёва, Г.Ф. Леванова, В.М. Бондаренко, И.Н. Блохина // Журн. микробоил., 1997. №5.- С.114-117.

49. Костюкевич О.И. Современные представления о микробиоценозе кишечника. Дисбактериоз и его коррекция. / О.И. Костюкевич // РМЖ,2007. № 28. С. 56-66.

50. Крамарь JI.B. Микробная экология кишечника людей, проживающих в условиях техногенного воздействия крупного промышленного города / JI.B. Крамарь // Автореф. дис . д-ра мед. наук. М., 2001. - 244 с.

51. Краснооголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника / В.Н. Красного-ловец // М.: Медицина. 1989.-89 с.

52. Краткий определитель бактерий Берги.- М., 1980.

53. Куваева И.Б. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей / И.Б. Куваева, К.С. Ладодо // М.: Медицина, 1991.

54. Лахтин И.М. Лектины симбиотических микроорганизмов / И.М. Лах-тин // Мат. 6-й Объеденённой науч. Сессии и 2-го Междунар. конгр. по пробиотиткам, 2009. №4. С. 21.

55. Лебедев К.А. Иммунология образраспознающих рецепторов / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина // М.: УРСС, 2009. 253 с.

56. Леванова Л.А. Состояние нормальной микрофлоры кишечника у детей дошкольного возраста, проживающих в экологически неблагополучном регионе / Л.А. Леванова, В.А. Алёшкин, А.А. Воробьёв //Журн. микро-боил., 2002. № 1.-С. 64-67.

57. Лектиновые системы пробиотических бактерий / И.М. Лахтин, В.А. Алёшкин, М.В. Лахтин и др. // Мат. 6-й Объеденённой науч. Сессии и 2-го Междунар. конгр. по пробиотиткам, 2009. №4. — С. 21-22.

58. Ленцнер А.А. О способности лактобацилл микрофлоры человека продуцировать лизоцим / А.А. Ленцнер, Х.П. Ленцнер, М.А. Тоом // Журн. микробоил., 1975. № 8.- С. 77-81.

59. Лянная A.M. Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве / A.M. Лянная, М.М. Инти-заров, Е.Е. Донских // М.: Медицина. 1986. - С. 32-38.

60. Микрофлора кишечника у детей Монголии, России и Швейцарии /

61. В.М. Коршунов, Л.В. Поташник, Б.А. Ефимов, Н.Н. Володин, О.В. Коршунова, К. Gyr, R. Frei // Журн. микробиол., 2001. №2.- С. 61-64.

62. Микроэкология кишечника у детей и её нарушения. / П.Л. Щербаков, А.А. Нижевич, В.В. Логиновская, М.Ю. Щербакова, Л.В. Кудрявцева и др. // Фарматека, 2007. № 14. С. 28-38.

63. Молекулярно-генетический анализ видового и штаммового разнообразия бифидобактерий у детей раннего возраста / А.Н. Шкопоров, Л.И. Кафарская, С.С. Афанасьев и др. // Вестн. РАМН, 2006. №1. С. 45-50.

64. Мурашова А.О. Бифидогенные факторы как лекарственные препараты / А.О. Мурашова, О.Б. Лисицин, Н.А. Абрамов // Журн. микробиол., 1999. №5. С.56-61.

65. Нетребенко O.K. Роль пробиотиков и умеренно гидролизованного белка в снижении риска атопии у детей / O.K. Нетребенко // Педиатрия, 2009. Том 87, № 3. С. 100-116.

66. Новик Г.И. Исследование структурно- функциональной организации бифидобактерий / Г.И. Новик // Микробиология, 1998. Том 67, № 3. С. 376-383

67. Новик Г.И., Высоцкий В.В. Архитектоника популяций бифидобактерий: субмикроскопический аспект когезии клеток Bifidobacterium adolescentis и Bifidobacterium bifidum / Г.И. Новик, В.В. Высоцкий // Микробиология, 1995. Том 64, № 2. С. 222-227.

68. Определение видовой принадлежности штаммов бифидобактерий на основе секвенирования фрагментов генов 16S рРНК и трансальдолазы / М.Е. Субботина (Карзанова), О.Л. Воронина, В.Г. Лунин и др. // Докл. РАСХН, 2006. №5. С. 9-12.

69. Панчишина М.В. Дисбактериозы кишечника / М.В. Панчишина, С.Ф. Олейник // Киев: Здоровье. 1977. - 190 с.

70. Парфёнов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз / А.И. Парфёнов // Московский мед. журнал, 1998. Т.6, № 18 (78). С. 1170.

71. Первичный скрининг штаммов бифидобактерий и лактобактерий с целью разработки на их основе эффективных препаратов-пробиотиков / А.П. Пикина, В.В. Смеянов, Б.А. и др. // Журн. микробиол., 1999. № 6. -С. 34-38.

72. Перунова Н.Б. Характеристика биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях кишечника / Н.Б. Перунова //Автореф. Дис. канд. мед. наук. Оренбург, 2003. - 127 с.

73. Пинегин Б.Г. Дисбактериозы кишечника / Б.Г. Пинегин, В.Н. Мальцев,

74. B.М. Коршунов // М.: Медицина, 1984. 142 с.

75. Плазмиды бифидобактерий и их использование в генетической инженерии / Б.А. Ефимов, А.Н. Шкопоров, Е.В. Хохлова, С.С. Афанасьев, Е.В. Кулагина, Л.И. Кафарская // Вестник Российской АМН, 2008. № 2.1. C.16-21.

76. Поиск перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл для разработки новых биопрепаратов / Е.А. Постникова, Б.А. Ефимов, Н.Н. Володин, Л.И. Кафарская // Журн. микробиол, 2004. №2. С. 64-69.

77. Полшцук Е.И. Формирование микробиоценозов новорожденных / Е.И. Полшцук // Журн. практич. врача, 1996. №5. — С. 6-10.

78. Приказ Минздрава России от 09.06.2003г. №231 Отраслевой стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91500.11.0004-2003).

79. Пробиотики и функциональное питание / Б.А. Шендеров, М.А. Манве-лова, Ю.Б. Степанчук, Н.Э. Скиба //Антибиотики и химиотерапия, 1997. Т. 42. № 7.- С. 1437-1439.

80. Протеиназная активность микрофлоры ротовой полости больных паро-донтитом / Е.А. Воропаева, А.Л. Байракова, A.M. Бичучер, В.Л. Дьяков, Л.В. Козлов // Биомедицинская химия, 2008. №6. С. 706-712.

81. Разработка питательной среды для накопления биомассы Bifidobacterium bifidum в процессах непрерывного культивирования в биореакторе / И.В. Критская, И.А. Баснакьян, Е.С. Гиршович, Т.Б. Танирбергенов // Журн. микробиол., 1996. № 5. С. 81-83.

82. Семёнов А.В. Характеристика антагонистической активности бактерий при межмикробных взаимодействиях / А.В. Семёнов // Автореф. Дис. канд. биол. наук. Оренбург, 2009. - 132 с.

83. Стимулирующее действие экзогенной РНКазы на эубиотические штаммы лактобацилл, бифидобактерий и Escherichia coli / А.И. Колпаков, В.М. Бондаренко, Ф.Г. Куприянова-Ашина, С.Ю. Егоров // Журн. микробиол, 1996. № 4. С. 14-18.

84. Субботина М.Е. Разработка методики генотипирования бифидобактерий на основе двухлокусного секвенирования с целью видовой идентификации штаммов / М.Е. Субботина // Автореф. дис. . канд биол. наук. -М., 2009.-122 с.

85. Ткаченко Е.И. Питание, эндоэкология человека, здоровье, болезни. Современный взгляд на проблему их взаимосвязей / Е.И. Ткаченко // Микробиология, 2004. №6.-С. 58-61.

86. Тюрин Ю.А. Протеиназная активность микрофлоры кишечника при острых кишечных инфекциях у детей / Ю.А. Тюрин // Автореф. дис. . канд. мед. наук. Казань, 2003. - 141 с.

87. Уголев A.M. Эволюция пищеварения и принципы эволюции функций / A.M. Уголев // Л., 1985. 544 с.

88. Характеристика микроорганизмов, колонизирующих кишечник человека / Б.А. Ефимов, Н.Н. Володин, Л.И. Кафарская, В.М. Коршунов // Журн. микробиол, 2002. №5.- С. 98-104.

89. Хорошилова Н.В. Иммуномодулирующее и лечебное действие пробио-тиков / Н.В. Хорошилова // Иммунология, 2003. № 6. С. 352-355.

90. Чайникова И.Н. Инфектологическая характеристика сальмонеллёза / И.Н. Чайникова // Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Оренбург, 2006. -261 с.

91. Черкасов С.В. Персистентные характеристики микрофлоры репродуктивного тракта женщин в норме и при патологии /С.В. Черкасов // Автореф. Дис. канд. мед. наук. Оренбург, 1998 - 130 с.

92. Чубенко Г.И. Микробиологические, иммунологические и аллергологи-ческие аспекты кишечных инфекций у детей и пути их коррекции / Г.И. Чубенко // Автореф. дис . д-ра мед. наук. 2000. - 249 с.

93. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и её функции / Б.А. Шендеров // М.: Грантъ, 1998.- 288 с.

94. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том II: Социально-экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных / Б.А. Шендеров1. М.: Грантъ, 1998.- 416 с.

95. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание / Б.А. Шендеров // М.: Грантъ, 2001.- 316 с.

96. Шендеров Б.А. Роль анаэробных неспорообразующих бактерий в поддержании здоровья человека / Б.А. Шендеров // Вестник РАМН, 1996. № 1.- С. 8-11.

97. Экология микроорганизмов человека / О.В. Бухарин, А.В. Валышев, Ф.Г. Гильмутдинова, В.А. Гриценко и др. // Екатеринбург: УрО РАН. -2006.-480 с.

98. Янковский Д.С. Бифидобактерии и лактобациллы как оптимальная основа современных пробиотиков / Д.С. Янковский, Г.С. Дымент // Актуальные вопросы педиатрии, 2006. Том 3, № 12. С. 1-10.

99. Analysis of intestinal flora development in breast-fed and formula-fed infants by using molecular identification and detection methods / H. Harmsen, A. Wildeboer-Veloo, G. Raangs et al. // J. Pediatr Gastroenterol Nutr., 2000. №30.-P. 61-67.

100. Anraka J. Transport and utilization of amino acids by bacteria / J. Anraka // Microorganisms and Nitrogen Sourses /Ed. J.W. Payne. N.Y.: Jolin Wiley a. Sons., 1980. Parti.-P. 1-8.

101. Antagonism against anaerobic and facultative bacteria through a diffusible inhibitory compound produceb by a Lactobacillus sp. isolated from the rat fecal microbiota / R. Nardi, A. Santos, M. Carvalho et al. // Anaerobe, 1999. №5-P. 409-411.

102. Antibiotic Susceptibility Profile of Bifidobacteria as Affected by Oxgall, Acid and Hydrogen Peroxide Stress / E.Kheader, N. Dabour, C. Le. Lay et al. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2007. Vol. 51, № 1. P. 169174.

103. Antimicrobial peptides are among the antagonistic metabolites produced by Bifidobacterium against Helicobacter pylori / M.C. Collado, A. Gonzalez, R. Gonzalez et al. // International Journal of Antimicrobial Agents, 2005. № 5. -P. 385-391.

104. Antimicrobial proteinaceous compounds obtained from bi.dobacteria: Fromproduction to their application / A. Cheikhyoussef, N. Pogori, H. Chen, H. Zhang // International Journal of Food Microbiology, 2008. № 12. P. 215222.

105. Antimicrobial Susceptibility and Plasmid Profile of Bifidobacteria Isolated from Infant Stool / A.M. Yazid, M. Shuhaimi, A.M. Ali et al. // Pakistan Jornal of Biological Sciences, 1999. Vol. 2, № 2. P. 555-558.

106. Arunachala K. D. Role of Bifidobacteria in nutrition, medicine and technology / K.D. Arunachala // Nutrition Research, 1999. Vol. 19, № 10. P. 1559-1597.

107. Assessment of microbial diversity in human colonic samples by 16S rRNA sequence analisis / G. Hold, S. Pryde, V. Russel et al. // FEMS Microbiol. Ecol.,2002. №39. — P.33-39.

108. Banwell J.G., The microbial mass in the human large intestine / J.G. Ban-well, W.J. Branch, J.H. Gummings //Gastroenterology, 1981. Vol.80. -P. 1104.

109. Bengmark S. Bioecological control of inflammatory bowel disease / S. Bengmark // Clinical Nutrition, 2007. № 26. P. 169-181.

110. Benno Y. Effect of diets and aging on human fecal flora / Y. Benno, T. Mitsuoka //J. Germfree Life Gnotobiol., 1991. Vol. 21. №1. P. 59-63.

111. Benno Y. Oligosaccharides and human fecal bifidobacteria / Y. Benno // Focused on Glycobiology and Glycotechnology, 1995. № 8. P. 57-58.

112. Benno Y. The intestinal microflora of infants: composition of fecal flora in breast-fed and bott leffed infants / Y. Benno, K. Sawada, T. Mitsuoka // Microbiol. Immunol., 1984. Vol. 28, № 9. P. 975-986.

113. Beno Y. Development of Intestinal Microflora in Humans and Animals / Y. Benno, T. Mitsuoka//Bifidobact. Microflora, 1986. Vol. 5.

114. Beno Y. The role of human intestinal microflora on protein syntesis / Y. Benno, V. Takahashi, T. Mitsuoka // J. Germfree Life Gnotobiol., 1988. Vol. 18.№ 2.

115. Biavati B. The genus Bifidobacterium / B. Biavati, B. Sgorbati, V. Scardovi et al. // The Prokaryotes, 1991. Vol. 1. P. 816-833.

116. Bifidobacteria: the Model Human Gut Commensal / M. Ventura, F. Turro-ni, A. Ribbera et al. // Therapeutic Microbiology: Probiotics and Related

117. Strategies Edited by J. Versalovic and M. Wilson., 2008. P. 35-50.

118. Bifidobacterium pseudocatenulatum is associated with atopic eczema: A nested case-control study investigating the fecal microbiota of infants / M.Gore, K. Munro, C. Lay et al. // J. allergy clin. Immunol., 2008. № 1. P. 135-140.

119. Bifidobacterium strains resident infant human gastrointestinal microflora exert antimicrobial activity / V. Lievin, I. Peiffer, S. Hudault // GUT, 2000. Vol. 47. P. 646-652.

120. Biochemistry and physiology of bifidobacteria /А. Bezkorovainy, R. Mil-ler-Catchpole // Science, 1989. P. 226.

121. Biofilm-Specific Gross-Species Induction of Antimicrobial Compounds in Bacilli / L. Yan, K. Boyd, D. Adams et al.// Appl. Environ Microbiol, 2003. Vol. 69, №7.-P. 3719-3727.

122. Brook I. Isolation of non-sporing anaerobic rods from infections in children /1. Brook//Urology, 1996. Vol. 45, № 1.-P. 21-26.

123. Bruschi M., Hatchikian E.C., Bonicell J. FEBS Lett, 76. P. 121-124.

124. Ceruttil A. The Biology of Intestinal Immunoglobulin A Responses / A. Ceruttil, M. Rescigno // Immunity, 2008. Vol.28, № 6. P. 740-750.

125. Characterization of a water-soluble polysaccharide fraction with immuno-potentiating activity from Bifidobacterium adolescentis Ml01-4 / A. Hosono, J. Lee, A. Ametani, M. Natsume et al. // Biosci. Biotech. Biochem., 1997. -Vol. 61. — P.312-316.

126. Cheikhyoussef A. Antimicrobial activity and partial characterization of bacteriocin-like inhibitory substances (BLIS) produced by Bidobacterium infantis BCRC 14602 / A. Cheikhyoussef, N. Pogori, H. Chen // Food Control,2009. №20.-P. 553-559.

127. Chen J. Development of intestinal bifidobacteria and lactobacilli in breastfed neonates / J. Chen, W. Cai, Y. Feng // Clinical Nutrition, 2007. № 26. -P. 559-566.

128. Coculture of Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve alters their protein expression pro.les and enzymatic activities / L. Ruiz, B. Sanchez, M. Gueimonde et al. // International Journal of Food Microbiology, 2009. № 13. P. 148-153.

129. Collado M.C. Adhesion and aggregation properties of probiotic and pathogen strains / M.C. Collado, J. Meriluoto, S. Salminen // Eur Food Res Tech-nol, 2008. №226.- P.1065-1073.

130. Collado M.C. Identification and differentiation of Lactobacillus, Streptococcus and Bifidobacterium species in fermented milk products with bifidobacteria / M.C. Collado, M. Hernandez // Microbiological Research, 2007. № 162.-P. 86—92.

131. Colonic bacterial proteases to IgAl and slgA in patients with uncerative colitis / G. Barr, M. Hudson, J. Priddle, D. Jewel // GUT, 1987. Vol.70, № 28. -P.186-189.

132. Differences in composition and mucosal adhesion of bifidobacteria isolated from healthy adults and healthy seniors / F. He, A. Ouwehand, E. Isolauri et al. // Curr. Microbiol., 2001. Vol. 43, № 5. P.351-354.

133. Dionysius D.A. Forms of lactoferrin: their antibacterial effect on enterotoxigenic Ecserichia coli / D. Dionysius, P. Grieve, J. Milne // J. Dairy Sci., 1993. Vol. 76, № 9. -P. 2597-2600.

134. Distribution of Bifidobacterial species in human intestinal microflora examined with 16S rRNA-gene-targeted species-specific primers / T. Matsuki, K. Watanabe, R. Tanaka et al. // Appl. Environ. Microbiol., 1999. Vol.65, № 10.-P. 4506-4512.

135. Effects о yogurts containing Bifidobacterium and Lactobacillus / J. Pestka,

136. С. На, R. Warner et al. // J. Food Proect., 2001. Vol. 64, № 3. P. 39-49.

137. Enhancement of natural and acquired immunity by Lactobacillus and Bifidobacterium / H.S. Gill, K.J. Rutherfurd, J. Prassad et al. // Br. J. Nutr., 2000. Vol. 29, N1.-P. 167-176.

138. Exposito I.L. Antibacterial activity of peptides and folding variants from milk proteins / I.L. Exposito, I. Recio // International Diry Journal. 2006. -№ 16 - P.1294-1305.

139. Factors Influencing the Composition of the Intestinal Microbiota in Early Infancy / J. Penders, C. Thijs, C. Vink et al. // PEDIATRICS, 2006. Vol. 118, №2.- P. 511-521.

140. Finegild S.P. Normal Human Intestinal Flora / S.P. Finegild //Ann. 1st. Super. Sanita., 1989. Vol. 321, № 13.-P. 345-351.

141. Fuller R. Probiotics in man and animals / R. Fuller // J. Appl. Bacteriol., 1995. Vol.66.-P. 365-378.

142. Gagnon M. In vitro inhibition of Escherichia coli 0157:H7 by bifidobacteria! strains of human origin / M. Gagnon, E. Kheadr, G. Le Blay, I. Fliss // International Journal of Food Microbiology, 2004. Vol. 92, № 1. P. 69-78.

143. Getting better with bifidobacteria / S. Leahy, D. Higgins, G. Fitzgerald, D. van Sinderen // Journal of Applied Microbiology, 2005. Vol. 98, № 9. P. 1303-1315.

144. Gibson G. Human colonic bacteria: role in nutrition, physiology and pathology / G. Gibson, G. Macfarlane // CRC Press , 1995. P. 1-18.

145. Gibson G. Regulatory effects of bifidobacteria on the growth of other colonic bacteria / G. Gibson, X. Wang // Journal of Applied Bacteriology, 1994. №77.-P. 412-420.

146. Grable P.A. The normal microbial flora as a major stimuls for proliferation of plasma cells synthesis IgA in gat the germfree intestinal tract / P. Grable, H. Baszin, T. Eyssen // Int. Arch. Allergy, appl. Immun., 1968. Vol. 34. P. 362-374.

147. Growth promotion and cell binding ability of bovine lactoferrin to Bifidobacterium longum / Md.Rahmana, W.-S. Kim, Ito Т., H. Kumura et al. // Anaerobe, 2009. № 15. P. 133-137.

148. Growth stimulator for Bifidobacteria produced by Propionibacteriumfreundenreichii and several intestinal bacteria /1. Kaneko, H. Mori, M. Iwata, S. Meguro // Journal of Dairy Science, 1994. Vol. 77, № 2. P. 393-404.

149. Growth-promoting effects of lactoferrin on L. acidophilus and Bifidobacterium spp. / W.-S. Kim, M. Ohashil, T. Tanaka et al. // BioMetals, 2004. № 17.-P. 279-283.

150. Haller D. Activation of human peripheral blood mononuclear cells by nonpathogenic bacteria in vitro: Evidence of NK cells as prymar targets / D. Haller, S. Blum, C. Bode // Infect, and Immun., 2000. Vol. 68, № 2. P. 752-759.

151. Hentges D.J. Human intestinal microflora in health and disease / D.J. Hentges // New York: Academic Press, 1983.

152. Hill M.J. Role of gut bacteria in human toxicology and pharmacology / M.J. Hill // Basingstoke: Burgess Science Press, 1995.

153. Holdemann L. Human fecal flora: Variation in Bacterial Composition within Individuates and a Possible Effect of Emotion Stress / L. Holdemann, I. Good, W. Moor//Appl. Environ. Microbiol., 1976. Vol. 31, № 3. -P.33-39.

154. Holden M. Quorum-sensing cross talk: isolation and chemical characterization of cyclic dipeptides from Pseudomonas aeruginosa and other Gram-negative bacteria / M. Holden, S. Chhabra, R. de Nys // Mol. Microbiol., 1999, №33.-P. 1254-1266.

155. Hoover D. Bifidobacteria: activity and potential benefits / D. Hoover // Food technology. 1993. Vol.47, №6.-P. 120-124.

156. Hopkins M. Age and disease related changes in intestinal bacteria populations assessed by cell culture, 16S rRNA abu dance, and community cellular fatty acid profiles / M. Hopkins, R. Sharp, G. Macfarlane // Gut., 2005. №4. -P. 198-205.

157. Hopkins M. Variation in human intestinal microbiota with age / M. Hopkins, R. Sharp, G. Macfarlane // Digestive and Liver Disease, 2002. Vol. 34, №2.- P. 12- 18.

158. Human secretory immunoglobullin A may contribyte to biofilm formation in the gut / R. Bollinger, M. Everent, D. Palestrant et al. // Immunology, 2003. Vol.109, № 4. P.580-587.

159. Husebye E. The role of normal microbial flora in control of small intestine motility / E. Husebye, R. Hellstrom, T. Midtvedt // Microbiol Therapy, 1990. № 20. P. 389-394.

160. Identification of cultivable Bifidobacterium species isolated from breast-fed infants feces in West-Algeria / M. Hadadji, R. Benama, N. Saidi, D. Henni // African Journal of Biotechnology, 2005. Vol. 4, № 5. P. 422-430.

161. In vivo IgA coating of anaerobic bacteria in human faeces / L.Van der Waaij, P. Limburg, G. Mesander, D. Van der Waaij //Gut, 1996. Vol. 38, №3.-P. 348-354.

162. Inhibition of Clostridium difficile growth and adhesion to enterocytes by Bifidobacterium supernatants / F. Trejoa, J. Minnaarda, P. Pereza, G. De An-toni // Anaerobe, 2006. № 12. P. 186-193.

163. Interpopulation signaling via N-acyl-homoserine lactones among bacteria in the wheat rhizosphere / E. Pierson, D. Wood, J. Cannon, P. Blachere, L. Pierson // Mol. Plant-Microbe Interact., 1998, № 11. P. 1078-1084.

164. Iron metabolism in bifidobacteria / A. Bezkorovainy, E. Kot, R. Miller-Catchpole et al. // International Dairy Journal, 1996. Vol. 6, № 10. P. 905919.

165. Isolation rates of gluconate-fermenting bifidobacteria from human faeces / T. Asano, K. Yuasa, S. Nishiwaki, H. lino // Microbial Ecology in Health and Disease, 2005. № 17. P.l 14-120.

166. Kelly D. Commensal gut bacteria: mechanisms of immune modulation. / D. Kelly, S. Conway, R. Aminov // TRENDS in Immunology, 2005. Vol. 26, № 6. P. 326-333.

167. Kryzova J. Evaluation of ampli.ed ribosomal DNA restriction analysis

168. ARDRA) and species-speci.c PCR for identication of Bifidobacterium species / J. Kryzova, A. Spanova, B. Rittich // Systematic and Applied Microbiology, 2006. № 29. P. 36-44.

169. Lewis K. Persister Cells and the Riddle of Biofilm Survival / K. Lewis // Biochemistry, 2005. Vol.70, № 2. P. 327-336.

170. Lourens R.M. Human Breast Milk: Current Concepts of Immunology and Infectious Diseases / R. Lourens, A. Pane // Current Problems Pediatric and Adolescent Health Care, 2007. Vol. 37, № 1. P. 27-36.

171. Macfarlane G. Human colonic microbiota: ecology, physiology and metabolic potential of intestinal bacteria / G. Macfarlane, S. Macfarlane // Scand J Gastroenterol., 1997. № 32. P. 3-9.

172. Mackowiak P. The normal microbial flora / P. Mackowiak // N. Engl.J. Med., 1982. Vol. 307. P. 83-93.

173. Makras L. The in vitro inhibition of Gram-negative pathogenic bacteria by bifidobacteria is caused by the production of organic acids / L. Makras, L. De Vuyst // International Dairy Journal, 2006. № 16. P. 1049-1057.

174. Mangin I. Ribosomal DNA polymorphism in the genus Bifidobacterium/I. Mangin, N.Bourget, B.Decaris//Res. Microbiol,1996.Vol.147, №3. P. 183.

175. Martin C. Probiotics: Role in Pathophysiology and Prevention in Necrotizing Enterocolitis / C. Martin, W. Walker // Probiotics and NEC, 2008. № 32. -P. 127-137.

176. Meile L. Safety assessment of dairy microorganisms: Propionibacterium and Bifidobacterium / L. Meile, G. Le Blay, A. Thierry // International Journal of Food Microbiology, 2008. № 126. P. 316-320.

177. Mitsuoka T. Ecology of the bifidobacteria / T. Mitsuoka, C. Kaeuchi // The American Journal of Clinical Nutrition, 1977. Vol. 30, № 11. P. 17991810.

178. Molecular monitoring of succession of bacterial communities in human neonates / C.F. Favier, E.E. Vaughan, W.M. De Vos et al. // Appl. Environ

179. Microbiol., 2002. № 68. P. 219-226.

180. Monostrain, multistrain and multispecies probiotics —A comparison of functionality and efficacy / H. Timmerman, C. Koning, L. Mulder, F. Rom-bouts, A. Beynen // International Journal of Food Microbiology, 2004. № 6. -P. 219-233.

181. Muriana P. Conjugal transfer of plasmid-encoded determinants for bacteri-ocin production and immunity of Lactobacillus acidophilus / P.Muriana, T. Klaenhammer // Appl. Environ. Microbiol., 1987. № 53. P. 553-560.

182. Perdigon G. Lactic Acid Bacteria and their Effect on the Immune System / G. Perdigon, R. Fuller, R. Rayal // Curr. Issues Intest. Microbiol, 2001. Vol. 2, № 1. — P. 27-42.

183. Postnatal acquisition of endotoxin tolerance in intestinal epithelial cells / M. Lotz, D. Gutle et al. // J. Exp. Med., 2006. Vol. 203. P. 800-812 .

184. Probiotic and other functional microbes: from markets to mechanisms / M. Saxelin, S. Tynkkynen, T. Mattila-Sandholm, W. de Vos // Current Opinion in Biotechnology, 2005. № 16. P. 204-211.

185. Probiotics modulate the Bifidobacterium microbiota of elderly nursing home residents / S. Lahtinen, L. Tammela, J. Korpela et al. // AGE, 2009. №31.-P. 59-66.

186. Production of acyl- homoserine lactone quorum-sensing signals Gram-negative plantassociated bacteria / C. Cha, P. Gao, E. Chen, P. Shaw, S. Far-rand // Mol. Plant-Microbe Interact., 1998. P.l 119-1129.

187. Relationship Between Oxygen Sensitivity and Oxygen Metabolism of Bifidobacterium Species / S. Shimamura, F. Abe, N. Ishibashi, et al. //Journal of Dairy Science, Vol. 75, № 12. P. 3296-3306.

188. Reuter G. The Lactobacillus and Bifidobacterium Microflora of the Human Intestine: Composition and Succession / G. Reuter // Curr. Issues Intest. Microbiol., 2001. Vol. 2, № 2. P. 43-53.

189. Reyed M. The Role of Bifidobacteria in Health / M. Reyed // Research J. of Medicine and Medical Sciences, 2007. Vol. 2, № 1. p. 14-24.

190. Rolie of intestinal anaerobic bacteria in colonisation resistance / C. Weils, M. Maddaus, R. Jechorec, R. Simmons //Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1988. Vol. 7, № 1.- P. 107-113.

191. Roy D. Bifidobacteria: friends in your food / D. Roy // Alimentech., 1992. Vol. 5, №2.-P. 14-17.

192. Savage D. Microbial Biota of the Human Intestine: A Tribute to Some Pioneering Scientists / D. Savage // Curr. Issues Intest. Microbiol., 2001. Vol. 2,№ l.-P. 1-15.

193. Servin A. Antagonistic activities of lactobacilli and bifidobacteria against microbial pathogens / A. Servin // FEMS Microbiol., 2004. № 4. P.405-410.

194. Sgorbati B. Related structures in the smid profiles of Bifidobacterium longum / B. Sgorbati, V. Scardovi, D. Leblanc // Microbiologica, 1986. №4. P. 415-422.

195. Shah N. Functional cultures and health benefits / N. Shah // International Dairy Journal, 2007. № 17. P. 1262-1277.

196. Sheil B. Probiotic Effects on Inflammatory Bowwel Disease / B. Sheil, F. Shanahan, L. Mahony // The Journal of Nutrition, 2007. Vol 137. P. 819824.

197. Shuhaimi M. Characterisation of Bifidobacterium Species A Review / M. Shuhaimi, A. Ali, N. Saleh, A. Yazid // Bioscience Microflora, 2004. Vol. 23, №2.- P. 81-92.

198. Stiles M. Lactic acid bacteria of foods and their current taxonomy / M.

199. Stiles, W. Holzapfel // International Journal of Food Microbiology, 1997. Vol. 36, №1.- P. 1-29.

200. Streptococcus faecium-derived antibacterial substance antagonistic to Bifidobacteria / R. Harasawa, K. Suzuki, T. Mitsuoka // Antimicrob Agents Chemother, 1980. Vol. 18, № 1. P. 58-62.

201. Tanaka R. Clinical effects of bifidobacteria and lactobacilli / R. Tanaka // Old Herborn University Seminar Monograph. 1995.

202. Tannock G. The search for disease-associated compositional shifts in bowel bacterial communities of humans / G. Tannock // Trends in Microbiology, 2005. Vol.16, №.10. P. 488-495.

203. Tannock G. What immunologists should know about bacterial communities of the human bowel / G. Tannock // Seminars in Immunology, 2007. Vol. 19, №2. P. 94-105.

204. The colonic flora, fermentation and large bowel digestive function // G. Macfarlane, J. Gummings, S. Phillips, J.Pemberton, R. Shorter // Raven press Ltd, New York, 1991.- P. 51-92.

205. The normal human anaerobic microflora / G. Evaldson, A. Heimdahl, L. Kager, C.E. Nord//Scand. J. Infect. Dis. Suppl., 1982. № 35. P. 9-15.

206. Timmerman R. Identification of lactic acid bacteria: culture-dependent and cultureindependent methods / R. Timmerman, G. Huys, J. Swings // Trends in Food Science & Technology, 2004. № 15. P. 348-359.

207. Tosi M. Innate immune responses to infection / M. Tosi // J. allergy clin. Immunol., 2005. № 8. P.241-249.

208. Vasiljevic T. Probiotics—From Metchnikoff to bioactives / T.Vasiljevic, N. Shah // International Dairy Journal, 2008. Vol. 18, № 7. P. 714-728.

209. Wadsworth-KTL anaerobic bacteriology manual. Washington.- 2002.

210. Walker W. Роль микрофлоры в развитии защитных функций кишечника / W. Walker // Педиатрия, 2005. №1. С.85-93.

211. Weng М. Bacterial colonization, probiotics, and clinical disease / M.Weng, W. Walker // The Journal of Pediatrics, 2006. Vol. 149, № 5. P. 107-114.

212. Yaeshima T. Benefits of bifidobacteria to human health / T. Yaeshima // Bulletin FIL-IDF Intern. Dairy Federation, 1996. № 313. P. 36-42.

Информация о работе

Иванова, Елена Валерьевна
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Биологические особенности бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы