Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменение патогенного потенциала E. faecalis при взаимодействии с M. hominis в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта

ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Изменение патогенного потенциала E. faecalis при взаимодействии с M. hominis в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта"

н

На правах рукописи

005007897

Орлина Маргарита Анатольевна

ИЗМЕНЕНИЕ ПАТОГЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА Е. FAECALIS ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С М. HOMINIS В УСЛОВИЯХ АССОЦИАТИВНОГО СИМБИОЗА РЕПРОДУКТИВНОГО

ТРАКТА

03.02.03-микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 б ЯНВ 2072

0ренбург-2012

005007897

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

ПОТАТУРКИНА-НЕСТЕРОВА Наталия Иосифовна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор КАРТАШОВА

Институт клеточного и внутриклеточного Ольга Львовна Симбиоза УрО РАН

доктор биологических наук, профессор ТИХОМИРОВА Саратовский технический университет Елена Ивановна

Ведущая организация:

ФГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет»

Защита состоится « 16 » февраля 2012 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д.208.066.03 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: 460000, г.Оренбург, ул. Советская, д.6, зал заседаний диссертационного совета.

Тел.: (3532) 77-59-95; факс: (3532) 77-24-59; e-mail: orgma@esoo.ru, официальный сайт: www.orgma.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА

Автореферат разослан « 14 » января 2012 г., автореферат и текст объявления размещен на официальном сайте ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук,

профессор

Немцева Наталия Вячеславовна

ВВЕДЕНИЕ Актуальность

Изучение симбиозов в настоящее время заняло одно из приоритетных мест в ряду актуальных проблем современной биологии. Ассоциативный симбиоз - это многокомпонентная интегральная система, в которой существует макросимбионт (хозяин), а также микросимбионты - доминантные и ассоциативные микроорганизмы (Бухарин О.В., 2006). В составе таких симбиоценозов, как правило, наблюдается разделение доминантного и ассоциативных микросимбионтов с разнонаправленным действием, определяющим формирование, стабильность существования и продуктивность симбиоза в целом (Проворов В.Н., 2001; Бухарин О.В., 2007).

Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин можно рассматривать в качестве важнейшего примера ассоциативного симбиоза человека. Данный биотоп, в отличие от других, имеет один доминантный таксон (лактобациллы) и несколько таксонов ассоциированных микроорганизмов, которые в случае повышения патогенного потенциала могут являться основным или дополнительным этиологическим фактором патологического процесса (Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Хуснутдинова Л.М., 2000,2003,2007).

Урогенитальная система женщины весьма сложна и характеризуется сложной микроэкологической структурой, значение отдельных компонентов которой недостаточно изучено (Кафарская Л.И. и соавт., 2001; Назарова Е.К. и соавт., 2003; Гобечия М„ 2004; Наумкина Е.В., Рудаков Н.В., 2009). Так, например, еще не оценена в. должной мере роль микоплазм в инфекционной патологии человека.

Широко распространенное носигельство микоплазм можно рассматривать как патогенный потенциал этих микроорганизмов, так как оно приводит к развитию многочисленных патологических состояний (Прилепская В.Н., Быковская О.В., 2005; Lidbric Р., 2004). Совокупность характерных для микоплазм свойств, таких как

их убиквитарносгь, мембранный паразитизм, способность преодолевать тканевые барьеры, отсутствие выраженного тропизма, многокомпоненгность факторов вирулентности свидетельствует об особом характере взаимодействия микоплазм с организмом хозяина (Мальцева ЛИ., Зефирова Т.П. и соавт., 2005; Макаров О.В. и соавт., 2007; Зигангирова H.A., 2008). В связи с этим чрезвычайно интересным представляется рассмотрение роли микоплазм в формировании измененных микробных симбиозов (Данилов Е.Ю., 2007). Изучены механизмы взаимодействия макро- и микрокомпонентов АС, а также ДМ и AM (Константинова О.К, 2004). Однако взаимное влияние на биологические свойства в системе «АМ-АМ», определяющие их патогенность и стабильность микросимбиоценоза в целом остаются не изученными.

Целью исследования явилось выявление изменения патогенного потенциала Enterococcusfaecalis при взаимодействии с Mycoplasma hominis в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта.

Для реализации этой цели были сформулированы следующие задачи:

1. Дать характеристику микробиоценоза репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях, вызванных М. hominis.

2. Определить фенотипические проявления и генетические детерминанты патогенности клинических изолятов М. hominis в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин.

3. Выявить биологические свойства и изменения встречаемости генетических детерминант патогенности микросимбионта К faecalis, выделенного из микробных консорциумов репродуктивного тракта женщин при наличии и отсутствии в них микоплазм.

4. Дать оценку патогенного потенциала микросимбионтов после их взаимодействия в условиях сокультивирования in vitro.

Научная новизна

Впервые установлено, что в результате симбиотического взаимодействия при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта происходит изменение патогенного потенциала Е. faecal is при взаимодействии с М. hominis в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта, проявляющегося в увеличении частоты встречаемости генетических детерминант патогенности обоих микросимбионтов.

Выявлено нарушение стабильности ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях, вызванных М hominis, проявляющееся снижением доминирования основных симбионтов на фоне увеличения частоты встречаемости и повышения вирулентности ассоциативной микрофлоры. Показано, что при воспалительных заболеваниях РТ, вызванных микоплазмами, среди условно-патогенных бактерий доминирует микросимбионт Е. faecälis.

Впервые обнаружено достоверное увеличение распространенности генетических детерминант патогенности у клинических изолятов М. hominis (р120) и К faecalis (cylm, cpd и cps генов) после их сокультивирования с вирулентными штаммами ассоцианта in vitro.

Теоретическая и практическая значимость

Результаты проведенных исследований вносят вклад в развитие теоретических основ учения об ассоциативных симбиозах. Полученные в работе данные расширяют и углубляют представления о характере межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание симбиоценоза репродуктивного тракта женщин, в частности, впервые установлено взаимное влияние на патогенный потенциал минорных ассоциантов.

Данные, полученные при изучении взаимодействия М. hominis и К faecalis, свидетельствуют о необходимости определения патогенности микросимбионтов для оценки их этиологической значимости и прогнозирования те-

чения заболевания. Предложено также с целью улучшения качества диагностики микоплазменных инфекций внедрение в работу бактериологических лабораторий диагностических показателей патогенности микроорганизмов, что позволит оптимизировать диагностику и выявлять риск формирования патомикро-биоценозов.

Основные положения диссертационной работы внедрены в практику клинико-диагностической лаборатории ГУЗ Областного клинического кожно-венерологического диспансера г. Ульяновска, а также включены в лекционные курсы и практические занятия по микробиологии в ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет».

По материалам диссертационной работы опубликованы практические рекомендации «Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях» (г. Ульяновск, 2011).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Воспалительные заболевания репродуктивного тракта женщин, вызванные Мйоотши, сопровождаются дестабилизацией ассоциативного симбиоцено-за, что проявляется угнетением доминантной микрофлоры на фоне повышения показателей частоты встречаемости и колонизационной резистентности ассоциативных симбионтов.

2. Минорные микросимбионты в условиях конкурентной борьбы внутри ассоциативного симбиоза оказывают взаимное влияние, стимулирующее накопление детерминант патогенности ассоцианта. Этот механизм имеет важное значение в развитии воспалительных заболеваний репродуктивного -тракта, т.к. взаимодействие микросимбионтов в ассоциации М. Иоття-Е. /авсаИч способствует формированию штаммов с высоким патогенным потенциалом.

Апробация работы

Диссертация выполнена в соответствии с планом научной рабога ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет».

Результаты работы представлены на заочной электронной конференции «Экологические проблемы внутренних болезней перинатологии и педиатрии» (2008 г.), конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии-2009» (г. Санкт-Петербург, 2009 г.), международной конференции «Диагностика, терапия профилактика социально значимых заболеваний человека» (Турция, 2009 г.), Российской научно-практической конференции с международным участием «Высшее сестринское образование в системе российского здравоохранения» (г. Ульяновск, 2010 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, из них 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ; 1 практические рекомендации.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 147 страницах. Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Список включает 223 источника, в том числе 140 - отечественных и 83 - зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 30 таблицами и 16 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе клинико-диагностической лаборатории Ульяновского областного клинического кожно-венерологического диспансера и научно-исследовательской лаборатории ИМЭиФК УлГУ в период с ноября 2008 по ноябрь 2010 гг.

Обследовано 425 женщин в возрасте от 18 до 51 года с воспалительными заболеваниями репродуктивной системы - А, К и ЭЦ. Из них у 168 женщин (39,5%) были выделены штаммы Mycoplasma hominis. Из 168 женщин с воспалительными заболеваниями РТ 75 пациенток были больны А (44,6%), 53 - К

(31,6%) и 40 - ЭЦ (23,8%). Полученные данные сравнивали с результатами исследования 75 практически здоровых женщин, репрезентативных по возрасту. С целью определения видового состава и биологических свойств микрофлоры производили взятие материала из заднего свода влагалища и цервикального канала.

Количественную и качественную оценку состава вагинального микроценоза производили в соответствии с Приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85. «Об унификации микробиологических методов исследования, применяющихся в клинико-диагностических лабораториях» и Приказом Минздрава России от 28.12.1995 г. № 691 «О профилактике внутрибольничных инфекций в акушерских стационарах г. Москвы». При диагностике ИППП использовали Приказ № 286 «Об улучшении выявления больных гонорей и трихомониазом в акушерских и гинекологических отделениях (палатах, кабинетах), женских консультациях и урологических кабинетах)» и Приказ МЗ РФ № 415 от 20.08.2003. «Го-нокковая инфекция».

Для выявления микоплазм использовали культуральный метод, РГШФ с контрастированием фона и ПНР. При выделении микоплазм бактериологическим методом проводили посев исследуемого материала в универсальную жидкую транспортную среду (НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, г. С.-Петербург) с последующим пересевом в среду «Миколлазма-50» (НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера г. С.-Петербург) и среды, содержащую лошадиную сыворотку, дрожжевой экстракт и пенициллин из расчета 1000 ед./мл (BioMeriox, Франция). Положительным результатом считалось наличие микоплазм в количестве более 104 КОЕ/мл (Дмитриев Г.А., 2007). Для выделения культур энтерококков использовали энтерококк агар (НПЦ, г. Оболенск) с последующим накоплением на средах: Columbia agar (Bio-Rad, Франция) и Diskinson Oxoid (Himedia, Индия).

Определение чувствительности энтерококков к химиопрепаратам производили диско-диффузным методом на агаре Мюллера-Хинтона (Испания) (МУ 4.2.1890-04.2004). Чувствительность микоплазм проводили при помощи тест-системы «МИКОПЛАЗМА-АЧ», «МИКОШ1АЗМА-П-120» (НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, г. С.-Петербург) и Mycoplasma IST (BioMeriox, Франция). Для выявления чувствительности микроорганизмов определяли минимальную ингибирующую концентрацию препарата - МИК в ЕД/мл или мкг/мл (Навашш С.М., Чучалин А.Г., Белоусов A.M., 1998). Вирулентность клинических изолятов определяли внутрибрюшинной пробой на белых мышах (Костюкова H.H. и соавт., 1996).

Для выявления микроорганизмов и определения их генетических детерминант патогенности применяли ПЦР (МУ 1.3.2569-09).

С целью обнаружения М. hominis применяли готовые наборы Полимик-МК (НПФ «Литех», Москва) (табл.1).

Таблица 1

Использованные в работе праймеры

Ген Фактор патогенности Пары праймеров: прямой/обратный Размер ампли-кона н.п.

Праймеры энтерококков Enterococcus faecal is

1 Cylm (токси- генность, цитолизин), 5'ACAGGGAGACTCTCATAGTCGCGG 3' 5'CCCCGTGCCGGGGTGCCTGGA CCTG 3' 296

2 cpd (бактерии-оциогенность) 5' CGCGTGAAGAACAAATGGCCGC 3' 5'GCTITCCTGGTAGTTGGCGTAGG 3'' 528

3 eps (адгезия и колонизация) 5' GGCATCGAAGCTAATGGGTGGGT 3' 5' GCTITCCTGG TA GTTGGCGTA G G 3' 298

Праймер Mycoplasma, hominis

4 /)-/20-адгезия 5' TGCGGTTCTTCCTTTGATTGCTAGTT3' 5'GGGTTTTGCTGFFGGAIGCTACCAG 3' 527

Подбор праймеров и температуры отжига осуществляли при использовании пакета программ в Gene Runner Version 3,05 и Primer Blast (ресурсы GeneBank) (США). Праймеры микоплазм и энтерококков были синтезированы в «ЗАО Симтол» (Москва). Регистрацию результатов ПЦР осуществляли путем электрофоретического разделения продуктов амплификации на окрашенном бромистом этидием агарозном геле. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей проводили с помощью компьютерной программы Vector NTI Suite (США).

Все полученные данные подвергали математической обработке с определением коэффициента достоверности Стьюдента. Статистическую обработку материала осуществляли с помощью пакета программ Statistica 8,0.

Результаты исследований и их обсуждение

При воспалительных заболеваниях РТ женщин, вызванных М. hominis, выявлена дестабилизация АС данного биотопа у 85,5% обследованных женщин (в группе сравнения 14,5%). Это проявлялось снижением частоты встречаемости доминантной микрофлоры на фоне увеличения количественных показателей ассоциативных симбионтов.

Прежде всего данные изменения касались представителей рода Lactobacillus - ДМ РТ, определяющего состояние его колонизационной резистентности. Лактобациллы были выделены у 48,8% обследованных женщин, тогда как у здоровых данный показатель составлял 86,7%. Частота встречаемости лактоба-цилл во влагалище была в 1,8 раз, а в цервикальном биотопе в 1,3 раза меньше, чем у здоровых женщин (табл. 2).

Все случаи ВЗРТ сопровождались снижением показателей плотности колонизации и частоты встречаемости ДМ, L. acidophilus высевались в 2,2 раза, L. rhamnosus - в 0,5 раза, L.. plantarum - в 0,8 раза, L. casei - в 0,7 раза реже, чем у здоровых женщин.

Таблица 2

Показатель микробной обсемененности (ПМО) доминантного и ассоциативных симбионтов при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта

(lg КОЕ/мл)

Виды микроорганизмов Влагалище Цервикальный канал

Доминантный симбионт

Lactobacillus spp. 4,2±l,05 1,24±0,29*

Ассоциативные симбионты

Staphylococcus epidermidis 4,71±1,26* 3,01±1,15

S. hominis 2,51+1,26 6,71±2,C6*

S. agalactiae 4,51+1,31* 2,02+1,06

Escherichia coli 4,80±2,72 4,31±0,81

Enterococcus faccalis 7,61+1,72* 4,20±0,82*

Bifidobacterium spp. 2,05+1,04* 1,51±0,17*

Corynebacterium spp. 5,4+1,13* 3,42+0,73

Propionibacterium spp. 1,04±0,17 1,10+0,15

Candida spp. 2,41±0,55* 1,58±0,95

Примечание * - достоверность различия показателя по сравнению со здО' ровыми женщинами (р<0,05).

Плотность колонизации ассоциативных симбионтов при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта также претерпевала изменения. Из всех ассоциативных симбионтов максимальное увеличение показателей частоты встречаемости и ПМО отмечалось у Enteroeoccus faecalis (табл. 2).

Результаты исследования показали, что Mycoplasma hominis были выделены при А у 44,6%, К - 31,6%, ЭЦ - 23,8% пациенток.

Клинические изоляты М. hominis обладали типичными культурально-биохимическими свойствами и высокой чувствительностью к джозамицину, доксициклину, тетрациклину и низкой - к левофлоксацину, спарфлоксацину,

моксифлоксацину и пефлоксацину.

Выявление вирулентности бактерий методом внутрибрюшинного заражения мышей показало, что из 168 клинических изолятов М. hominis только 123

11

(73,2%) вызывали гибель мышей. Уровень LD50/lg этих штаммов варьировал от 3,2±0,2 до 5,3±0,4. В зависимости от величины данного показателя эти штаммы были разделены на три группы: слабо,- умеренно- и высоковирулентные.

Микоплазмы являются мембранными паразитами, поэтому адгезивная активность является важнейшим проявлением их способности вызывать патологический процесс. Основным адгезином М hominis является липопротеин р120 (Балабанов Д.Н., 2009).

В связи с этим далее при помощи ПЦР было проведено выявление гена р 120, детерминирующего адгезивную активность М. hominis, у 168 вирулентных штаммов М. hominis, выделенных у пациенток с ВЗРТ, и 75 клинических изоля-тов, полученных у здоровых женщин. Положительный сигнал был получен у 57,1% штаммов первой группы и у 5,3% культур второй группы. Следовательно, было выявлено достоверное различие (р<0,05) в содержании гена р\20 у ми-коплазм, изолированных у больных и здоровых женщин (рис. 1).

Без

воспалительных заболеваний

При

воспалительных заболеваниях

5,31 ,1,1 г

57,1

20

40

60

80

100

%

И Наличие гена р 120 Н Отсутствие гена р 120

Рис.1. Содержание р 120 гена у М. hominis, выделенного при воспалительных заболеваниях и у здоровых женщин

Исследования показали, что распространенность нуклеотидной последовательности /?120 гена микоплазм изменялась в зависимости от их вирулентности. У слабо вирулентных штаммов показатель его частоты встречаемости составил 17,8±3,2% (р>0,05), у умеренно вирулентных - 33,3±6,1% (р<0,05) и у высоко вирулентных - 48,8±7,5% (р<0,05). Распространенность данной детерминанты патогенности микоплазм, выделенных у здоровых женщин, не превышала 9,3±2,5%.

Наиболее частыми ассоциативными симбионтами микоплазм являлись энтерококки. В связи с этим было проведено изучение распространенности нук-леотидных последовательностей генов ампликонов р120 М hominis после совместного их культивирования с энтероккоками in vitro (табл. 3).

Таблица 3

Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей гена р 120 у

штаммов М. hominis

Штаммы М. hominis в ассоциации с энтероккоками: Культивирование Частота встречаемости фрагмента р 120 гена (%)

слабо вирулентными до сокультивирования 3,8±0,5

после 3-х суток сокультивирования 5,2±0,8

умеренно вирулентными до сокультивирования 3,1±0,3

после 3-х суток сокультивирования 5,6±0,8*

высоко вирулентными до сокультивирования 25,4±5,8*

после 3-х суток сокультивирования 58,4±7,1*

Примечание: * - показатель достоверности различий между показателями частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей ген р120 у культур М. hominis до и после их сокультивирования с энтероккоками (р<0,05).

Проведенные исследования показали, что распространенность нуклеотидной последовательности гена р\20 микоплазм, как правило, возрастала после

совместного культивирования с Е faecalis в течение первых трех суток и зависела от вирулентности энтерококков.

Далее были изучены биологические свойства и изменение патогенного потенциала клинических изолятов энтерококков при ассоциативном симбиоти-ческом взаимодействии с М. hominis in vivo и при их сокультивировании in vitro.

Из всех обследованных женщин энтерококки были выделены из влагалищного и цервикального биотопов у 46,9% и 25,8% здоровых и 26,6% и 16,6% больных соответственно. ПМО Е faecalis при воспалительных заболеваниях репродуктивной системы увеличивались во влагалище в 1,5 раза, а в цервикаль-

ном канале - в 1,7 раза.

Изучение вирулентности клинических изолятов Е. faecalis при помощи биопробы показало, что из 237 штаммов энтерококков, выделенных у женщин с воспалительными заболеваниями репродуктивной системы, только 187 (78,9%) вызывали гибель животных, показатель LD50/lg этих штаммов варьировал от 3,6±0,1 до 5,7±0,6. В зависимости от величины данного показателя эти штаммы были разделены на три группы. LDso/lg штаммов первой группы (39 штаммов) составлял 3,6±0,1 - 4,4±0,3; второй группы - 4,5±0,4 - 5,0±0,5 (97 штаммов) и третьей группы - 5,1±0,7-5,7±0,6 (51 штамм), наибольшее количество изолятов (51,9%) обладало умеренно выраженной вирулентностью.

Патогенность является полидетерминантным признаком, поэтому у энтерококков, выделенных у женщин с ВЗРТ, производили выявление следующих генетических детерминант: cylm (токсигенность, цитолизин), cpd (бактериоцино-генность) и cps (адгезия и колонизация). Для проведения ПЦР был произведен подбор праймеров для выявления генов патогенности энтерококков, а также оптимизация условий и режима проведения ПЦР в режиме «реального времени», позволяющих одновременно совмещать амплификацию и детекцию. На последнем этапе производили проверку специфичности выбранных пар праймеров (cpd, cps и cylm генов) на музейном штамме Е. faecalis №111 (рис.2).

Рис.2. Результаты проверки специфичности праймера для выявления адгезивной активности микоплазм: положительный ответ с культурой Entero-coccus faecalis, Staphylococcus epidermidis (2), Staphylococcus hominis (3), Streptococcus agalactiae (4), Escherichia coli (5), Mycoplasma hominis (6), Bifidobacterium spp. (7), Corynebacterium spp. (8), Propionibacterium spp. (9), Candida spp. (10).

С целью расшифровки механизмов развития ВЗРТ и оценки значения ассоциативной микрофлоры у пациенток изучали взаимное влияние микросимбионтов на их патогенный потенциал. Для этого используя набор праймеров, ампли-фицирующих фрагменты генов cpd, cps и cylm, было протестировано 142 штамма Е. faecalis, выделенных из ассоциаций с М. hominis различной степени вирулентности после их совместного культивирования, а также 87 штаммов энтерококков, выделенных из микробных консорциумов, где микоплазмы не являлись участником микробного сообщества.

Обращает на себя внимание достоверно более широкая распространенность нуклеотидных последовательностей генов cylm, cpd, cps после 3-х суток сокультивирования с микоплазмами, по сравнению с данными, полученными до сокультивирования, особенно значительной она была после сокультивирования с высоко вирулентными М hominis (табл. 4).

Таблица 4

Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей гена cpd у культуры Е. faecalis

Штзммы Efaecalis, выделенные в ассоциации с микоплазмами: Совместное культивирование Частота встречаемости фрагмента cpcl гена(%)

слабо вирулентными (п=29) до сокультивирования 3,4±0,5

после 3-х суток сокультивирования 3,8±0,2

умеренно вирулентными (п=76) до сокультивирования 14,4± 1,7

после 3-х суток сокультивирования 19,7±2,7*

высоко вирулентными (п=37) до сокультивирования 54,1±2,9

после 3-х суток сокультивирования 86,5±3,5*

Примечание: * - показатель достоверности различия между уровнем частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей гена cpd у культур Е faecalis до и после их сокультивирования с М. hominis (р<0,05).

Тестирование штаммов Е. faecalis на наличие гена cps, выделенного из ассоциации с слабо вирулентными, умеренно вирулентными и высоко вирулентными микоплазмами, также подтвердило зависимость роста числа положительных сигналов с праймерами, специфичными к cps гену, от вирулентности ассо-циантов (г=0,87), как до, так и после сокультивирования (табл.5).

Выявление гена cylm у штаммов Е. faecalis после их сокультивирования с микоплазмами различной вирулентности показало увеличение частоты встречаемости искомых ампликонов, что свидетельствовало о повышении патогенно-сти энтерококков (табл. 6).

Следовательно, в результате взаимоадаптации микросимбионтов М. hominis и Е. faecalis с различной вирулентностью в условиях макроорганизма и in vitro происходило увеличение численности особей, в генотипе которых локализованы cylm, cpd и cps гены, что является свидетельством их взаимного влияния на

способность реализации патогенного потенциала в условиях ассоциативного симбиоза.

Таблица 5

Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей ген ф5 у культур

Е./агсаИз ■__

Е. /аесаПх в ассоциации с микоплазмами: Совместное культивирование Частота встречаемости фрагмента ген еря гена (%)

слабо вирулентными (п=29) до сокультивирования 4,1±0,6

после 3-х суток сокультивирования 4,9±0,8

умеренно вирулентными (п=76) до сокультивирования 15,7 ±0,7

после 3-х суток сокультивирования 22,3 ±2,7*

высоко вирулентными (п=37) до сокультивирования 67,5±3,5

после 3-х суток сокультивирования 92,5±4,5*

Примечание: * - показатель достоверности различия между показателями частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей еря гена К /аеса'ая до и после их сокультивирования с микоплазмами (р<0,05).

Взаимодействие ассоциативных симбионтов приводит к селекции и накоплению вирулентных вариантов в бактериальной популяции, которая может стать микроорганизмами, этиологически ассоциированными с воспалительными заболеваниями репродуктивного тракта.

Таким образом, проведенная работа по характеристике взаимного влияния микросимбионтов в условиях симбиоценоза на патогенный потенциал ассоци-антов выявила перспективность использования комплексного симбиотического подхода в решении фундаментальных и прикладных задач микробной экологии.

Результаты исследования свидетельствуют о необходимости учета при диагностике и прогнозировании течения воспалительных заболеваний репродуктивного тракта оценку динамики патогенного потенциала микросимбион-

тов, реализуемых через молекулярно-генетические механизмы взаимоадаптации микроорганизмов к изменяющимся условиям биотопа.

Таблица 6

Частота встречаемости гена cylm у культур Е. faecalis

Штаммы Е. /аесаШ в ассоциации с микоплазмами: Совместное культивирование Частота встречаемости фрагмента cylm гена (%)

слабо вирулентными (п=29) до сокультивирования 6,8±0,8

после 3-х суток сокультивирования 7,3±0,3

умеренно вирулентными (п=76) до сокультивирования 35,5±1,3

после 3-х суток сокультивирования 46,7±1,7*

высоко вирулентными (1=37) до сокультивирования 48,6±7,2

после 3-х суток сокультивирования 78,3±6,4 *

Примечание: * - показатель достоверности между показателями частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей су1т гена Е. /аесаШ до и после их сокультивирования с микоплазмами (р<0,05).

ВЫВОДЫ

1. Выявлено нарушение стабильности ассоциативного симбиоза при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта женщин, вызванных М. hominis, проявляющегося в угнетении его доминантного компонента (Lactobacillus spp.) на фоне повышения содержания минорных симбионтов, таких как Corynebacterium spp., Streptococcus spp., грибы рода. Candida. Максимальное увеличение показателей частоты встречаемости в биотопах влагалища, церви-кального канала и колонизационной активности отмечалось у ассоцианта Е. faecalis.

2. В условиях ассоциативного симбиоза при воспалительных заболеваниях репродуктивной системы М. hominis были выявлены у 44,6% больных аднек-ситом, у 31,6% пациенток с кольпитом и у 23,8% - эндоцервицитом. Из общего

18

пула выделенных штаммов микоплазм 73,2% обладали вирулентностью и 57,1% содержали ген /Л 20, детерминирующий адгезивную активность (у здоровых женщин 5,3%). При повышении вирулентности микоплазм частота встречаемости искомого ампликона достоверно возрастала от 17,8±3,2% у слабо вирулентных до 48,8±7,5% у высоко вирулентных штаммов (в группе сравнения -9,3±2,5%; р<0,05), а чувствительность к химиопрепаратам снижалась.

3. При воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта микоплаз-менной этиологии микросимбионт Е. faecalis обнаруживался почти в два раза чаще, чем у здоровых женщин, 78,9% клинических изолятов Е. faecalis были вирулентными. В результате подавления ассоциативных микросимбионтов происходило увеличение частоты выявления генетических детерминант патогенно-сти энтерококков, выделенных из микробных консорциумов при наличии в них микоплазм - cylm (токсигенности, цитолитической активности), cpd (бакгерио-циногенности) и cps (адгезии и колонизации). При отсутствии микоплазм в микробноценозе достоверного изменения количества участков генов патогенно-сти не происходило.

4. Установлено, что в результате ассоциативного симбиотического взаимодействия М, hominis и Е. faecalis in vitro происходило накопление генетических детерминант патогенности, что приводило к формированию штаммов микросимбионтов, обладающих более выраженной патогенностью. Совместное культивирование Е. faecalis с вирулентными микоплазмами вызывало увеличение показателей частоты встречаемости участков генов, детерминирующих факторы патогенности, особенно значительным оно было после сокультивиро-вания с высоко вирулентными М. hominis. В группе энтероккоков, выделенных из микробных консорциумов, в которых отсутствовали микоплазмы, частота встречаемости генетических детерминант cylm, cpd и cps достоверно не изменялась.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Публикации в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Эффективность использования ПЦР-диагностики воспалительных заболеваний урогенитадьного тракта ! Н.И. Потатуркина-Нестерова., М.А. Орлина, И.С. Немова // Вестник новых медицинских технологий. - 2011. - №4. -С. 81-83.

2. Мониторинг микробиоценоза урогенитального тракта женщин при мико-плазменных инфекциях / И.С. Немова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, М.А. Орлина, A.B. Мясникова // Вестник новых медицинских технологий. -2011.-№1.-С. 34-36.

3. Изменение патогенного потенциала энтерококков при взаимодействии с ми-коплазмами в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин / М.А. Орлина, И.С. Немова, Н.И. Потатуркина-Нестерова // Естественные и технические науки. - 2011. -№6. - С. 105-107.

4. Особенности микробиоты урогенитального тракта женщин с избыточным весом при воспалительных заболеваниях внутренних половых органов / О.И. Ивандеева, И.С. Немова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, М.А. Орлина / Фундаментальные исследования - 2010. - №6. - С. 42-48.

Публикации в других изданиях

5. Особенности микробиоты кожи при урологических инфекциях / Н.И. Пота-туркина-Нестерова, М.А. Орлина, И.С. Немова // Успехи современного естествознания. - 2008.-№5. - С. 125.

6. Особенности видового состава микрофлоры при воспалительных заболеваний внутренних половых органов / Н.И. Потатуркина-Нестерова, М.А. Орлина, И.С. Немова, М.А. Авдеенко // Современные наукоемкие технологии. -2008. -№6.- С. 58.

7. Особенности состава вагинальной микробиоты при урогенитальных инфекциях / Н.И. Потатуркина-Нестерова, М.А. Орлина, И.С. Немова, A.B. Мяс-

никова // Материалы научной конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии - 2009». -Санкт-Петербург, 2009. - С. 63.

8. Резистентность уреаплазм и рациональная антибиотикотерапия / Н.И. Пота-туркина-Нестерова, М.А. Орлина И.С. Немова // Eropin Journal Of Natural. -2010.-Ш-C.il.

9. Микрофлора влагалища как индикатор репродуктивного здоровья женщин / A.B. Мясникова, М.А. Орлина, И.С. Немова // Материалы российской научно-практической конференции с международным участием «Высшее сестринское образование в системе российского здравоохранения», Ульяновск. -2010.-С. 121-122.

10. Роль микоплазм в урогенитальной патологии / Н.И. Потатуркина-Нестерова, М.А. Орлина, И.С. Немова // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2010. - №1. - С. 56 - 59.

11. Выявление микоплазм при урогенитальных инфекциях / М.А. Орлина, И.С. Немова // Медицинский академический журнал. - 2010. - Т.10. - №5. -С. 146-147.

12. Антибиотикорезистентность возбудителя урогеннтального уреаплазмоза / Н.И. Потатуркина-Нестерова, М.А. Орлина, И.С. Немова, A.B. Мясникова // Современные наукоемкие технологии. - 2010. -№8. - С. 139.

ПЕРЕЧЕНЬ ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

А - аднексит

АМ-ассоциативный микросимбионт АС - ассоциативный симбиоз БВ - бактериальный вагиноз

ВЗРТ - воспалительные заболевания репродуктивного тракта ДМ - доминантный микросимбионт К - кольпит

КОЕ/ мл - колониеобразугощая единица

КР - колонизационная резистентность

МС - макросимбионт (хозяин)

МИК - минимальная ингибирующая концентрация

ПМО - плотность микробного обсеменения

РТ - репродуктивный тракт

ЭЦ - эндоцервицит

ОРЛИНА Маргарита Анатольевна ИЗМЕНЕНИЕ ПАТОГЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА £ FAECAL1S ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С М. HOMINIS В УСЛОВИЯХ АССОЦИАТИВНОГО СИМБИОЗА РЕПРОДУКТИВНОГО ТРАКТА Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать... Тираж 100 экз. Заказ №... Оригинал-макет изготовлен с помощью текстового редактора Microsoft Word 2003 for Mindows™. Гарнитура тайме. Подписано в печать 12.01.2012 г. Формат 64x84 1/16. Усл. печ, л. -1,0. Печать офсетная. Тираж 100 экз.

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Орлина, Маргарита Анатольевна, Оренбург

61 12-3/555

л

Ckf-

На правах рукописи

Орлина Маргарита Анатольевна

ИЗМЕНЕНИЕ ПАТОГЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА Е. FAECALIS ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С М. HOMINIS В УСЛОВИЯХ АССОЦИАТИВНОГО СИМБИОЗА РЕПРОДУКТИВНОГО ТРАКТА

03.02.03- микробиология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Н.И. Потатуркина-Нестерова

Оренбург, 2012

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................5

ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................................................................................6

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................................11

1.1. Микросимбиоз влагалища при инфекционно- 11 воспалительных заболеваниях..................................

1.2. Роль микоплазм в патологии урогенитального тракта 21

1.3. Энтерококки как ассоциативный симбионт микрофлоры репродуктивного тракта женщин........................30

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................................40

2.1. Материалы исследования....................................................................................40

2.2. Методы исследования............................................................................................44

2.3. Методы статистического анализа данных...................... 52

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ДОМИНАНТНОЙ И АССОЦИАТИВНОЙ МИКРОФЛОРЫ РЕПРОДУКТИВНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ДАННОГО БИОТОПА .................................................. 54

3.1. Ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта практически здоровых женщин................................. 54

3.2. Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях................................. 57

3.2.1. Состояние доминантной микрофлоры

3.2.2. Характеристика ассоциативных микросимбионтов 59

3.3 Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин при отдельных нозологических формах воспалительных заболеваний..........................................................

3.3.1. Показатели частоты встречаемости и плотности колонизации доминантного симбионта........................ 62

3.3.2. Показатели частоты встречаемости и плотности колонизации ассоциативных симбионтов репродуктивного тракта при кольпите, аднексите и эндоцервиците...................................................... 63

ГЛАВА 4. ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОСИМБИОНТА MYCOPLASMA HOMINIS, ВЫДЕЛЕННОГО ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ОРГАНОВ ЖЕНЩИН................................................................... 69

4.1. Частота выделения микоплазм у обследованных

женщин............................................................... 69

4.2. Характеристика клинических изолятов микоплазм......... 71

4.2.1. Культурально-биохимические свойства выделенных штаммов............................................. 71

4.2.2. Выявление вирулентности микоплазм на модели внутрибрюшинного заражения мышей........................ 72

4.2.3. Антибиотикорезистентность микоплазм............... 74

4.3. Молекулярно-генетическое исследование M.hominis....... 76

4.3.1. Выявление адгезивной активности микоплазм....... 76

4.3.2. Влияние ассоциантов на генетические детерминанты адгезивной активности микоплазм.......... 79

ГЛАВА 5.

ИЗМЕНЕНИЕ ПАТОГЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА ENTEROCOCCUS FAECALIS ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С МИКОПЛАЗМАМИ...................................................... 85

5.1. Частота встречаемости и колонизационная активность энтерококков у женщин с воспалительными заболеваниями............................................................... 85

5.2. Биологические свойства клинических изолятов энте-роккоков............................................................. 86

5.2.1. Культурально-биохимические свойства Е. faecalis.. 86

5.2.2. Вирулентность клинических изолятов Е. faecalis... 88

5.3. Результаты изучения генетических детерминант пато- 89 генности энтероккоков...........................................

5.3.1.Подбор праймеров для определения cpd, cps и cylm генов Е. faecalis..................................................... 89

5.3.2. Изучение встречаемости генетических детерминант патогенности микросимбионта Е. faecalis в ассоциации с микоплазмами in vitro........................... 94

5.3.2.1. Определение нуклеотидных последовательностей генов, контролирующих синтез бактериоцитогенности (cpd).................................... 95

5.3.2.2. Выявление нуклеотидных последовательностей генов, контролирующих синтеза адгезии и колонизации (cps)................................................................... 98

5.3.2.3. Результаты обнаружения нуклеотидных последовательностей генов, контролирующих синтез

токсигенности (су1т)............................................................................................101

5.3.2.4. Выявление генов су 1т, срс1 и сря у Е./аесаШ, изолированных из микробных консорциумов, в которых отсутствовали микоплазмы.......................................

103

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ............................................................................105

ВЫВОДЫ........................................................................................................................................................................123

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..................................................................................................................................124

ПЕРЕЧЕНЬ ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

А - аднексит

АМ - ассоциативный микросимбионт АС - ассоциативный симбиоз БВ - бактериальный вагиноз

ВЗРТ - воспалительные заболевания репродуктивного тракта ДМ - доминантный микросимбионт К - кольпит

КОЕ/ мл - колониеобразующая единица

КР - колонизационная резистентность

МС - макросимбионт (хозяин)

МИК - минимальная ингибирующая концентрация

НВ - неспецифический вульвовагинит

ПМО - плотность микробного обсеменения РТ - репродуктивный тракт ЭЦ - эндоцервицит

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы

Изучение симбиозов в настоящее время заняло одно из приоритетных мест в ряду актуальных проблем современной биологии. Ассоциативный симбиоз - это многокомпонентная интегральная система, в которой существует макросимбионт (хозяин), а также микросимбионты - доминантные и ассоциативные микроорганизмы (Бухарин О.В., 2006). В составе таких симбиоценозов, как правило, наблюдается разделение доминантного и ассоциативных микросимбионтов с разнонаправленным действием, определяющим формирование, стабильность существования и продуктивность симбиоза в целом (Проворов В.Н., 2001; Бухарин О.В., 2007).

Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин можно рассматривать в качестве важнейшего примера ассоциативного симбиоза человека. Данный биотоп, в отличие от других, имеет один доминантный таксон (лактобациллы) и несколько таксонов, ассоциированных микроорганизмов, которые в случае повышения патогенного потенциала могут являться основным или дополнительным этиологическим фактором патологического процесса (Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Хуснутдинова Л.М., 2000, 2003, 2007).

Урогенитальная система женщины весьма сложна и характеризуется сложной микроэкологической структурой, значение отдельных компонентов которой недостаточно изучено (Кафарская Л.И. и соавт., 2001; Назарова Е.К. и соавт., 2003; Гобечия М., 2004; Наумкина Е.В., Рудаков Н.В., 2009). Так, например, еще не оценена в должной мере роль микоплазм в инфекционной патологии человека.

Широко распространенное носительство микоплазм можно рассматривать как патогенный потенциал этих микроорганизмов, так как оно приводит к развитию многочисленных патологических состояний (Прилепская В.Н., Быковская О.В., 2005; Р. 1лс1Ьпс, 2004). Совокупность характерных для микоплазм свойств, таких как их убиквитарность, мембранный паразитизм, способность преодолевать тканевые барьеры, отсутствие выраженного тропизма, многокомпонентность факторов

вирулентности свидетельствует об особом характере взаимодействия микоплазм с организмом хозяина (Мальцева Л.И., Зефирова Т.П. и соавт., 2005; Макаров О.В. и соавт., 2007; Зигангирова H.A., 2008). В связи с этим чрезвычайно интересным представляется рассмотрение роли микоплазм в формировании измененных микробных симбиозов (Данилов Е.Ю, 2007). Изучены механизмы взаимодействия макро- и микрокомпонентов АС, а также ДМ и AM (Константинова О.К, 2004). Однако взаимное влияние на биологические свойства в системе «АМ-АМ», определяющие их патогенность и стабильность микросимбиоценоза в целом, остаются не изученными.

Целью исследования явилось выявление изменения патогенного потенциала Е. faecalis при взаимодействии М. hominis в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта.

Для реализации этой цели были сформулированы следующие задачи:

1. Дать характеристику микробиоценоза репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях, вызванных М. hominis.

2. Определить фенотипические проявления и генетические детерминанты патогенности клинических изолятов М. hominis в условиях ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин.

3. Выявить биологические свойства и изменения встречаемости генетических детерминант патогенности микросимбионту Е. faecalis, выделенному из микробных консорциумов репродуктивного тракта женщин при наличии и отсутствии в них микоплазм.

4. Дать оценку патогенного потенциала микросимбионтов после их взаимодействия в условиях сокультивирования in vitro.

Научная новизна работы: 1. Впервые установлено, что в результате симбиотического взаимодействия при воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта происходит изменение патогенного потенциала ассоциантов М. hominis и Е. faecalis, проявляющегося в увеличении экспрессии генетических детерминант патогенности обоих микросимбионтов.

2. Выявлено нарушение стабильности ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях, вызванных М. hominis, проявляющихся снижением доминирования основных симбионтов на фоне увеличения частоты встречаемости и повышения вирулентности ассоциативной микрофлоры.

3. Показано, что при воспалительных заболеваниях РТ, вызванных микоплазмами среди условно-патогенных бактерий, доминирует микросимбионт Е. faecalis.

4. Впервые обнаружено достоверное увеличение распространенности генетических детерминант патогенности у клинических изолятов М. hominis (р120) и Е. faecalis (cylm, cpd и cps генов) после их сокультивирования с вирулентными штаммами ассоцианта in vitro.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Воспалительные заболевания репродуктивного тракта женщин, вызванные М. hominis, сопровождаются дестабилизацией ассоциативного симбиоценоза, что проявляется угнетением доминантной микрофлоры на фоне повышения показателей частоты встречаемости и плотность колонизационной резестентности ассоциативных симбионтов.

2. Минорные микросимбионты в условиях конкурентной борьбы внутри ассоциативного симбиоза оказывают взаимное влияние, стимулирующее накопление детерминант патогенности ассоцианта. Этот механизм имеет важное значение в развитии воспалительных заболеваний репродуктивного тракта, т.к. взаимодействие микросимбионтов в ассоциации М. hominis-E. faecalis способствует формированию штаммов с высоким патогенным потенциалом.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты проведенных исследований вносят вклад в развитие теоретических основ учения об ассоциативных симбиозах. Полученные в работе данные расширяют и углубляют представления о характере межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание симбиоценоза репродуктивного тракта женщин, в частности, впервые установлено взаимное влияние на патогенный потенциал минорных ассоциантов.

Данные, полученные при изучении взаимодействия М. hominis и Е. faecalis, свидетельствуют о необходимости определения патогенности микросимбионтов для оценки их этиологической значимости и прогнозирования течения заболевания. Предложено также с целью улучшения качества диагностики микоплазменных инфекций внедрение в работу бактериологических лабораторий диагностических показателей патогенности микроорганизмов, что позволит оптимизировать диагностику и выявлять риск формирования патомикробиоценозов.

Основные положения диссертационной работы внедрены в практику клинико-диагностической лаборатории ГУЗ Областного клинического кожно-венерологического диспансера г. Ульяновска, а также включены в лекционные курсы и практические занятия по микробиологии в ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет».

По материалам диссертационной работы опубликованы практические рекомендации «Микробиоценоз репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях» (г. Ульяновск, 2011).

Апробация работы

Диссертация выполнена в соответствии с планом научной работы ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет».

Результаты работы доложены на Научной конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии -2009» (г. Санкт-Петербург, 2009), «Диагностика, терапия профилактика

социально значимых заболеваний человека» научная международная конференция (Турция, 2010); Российская научно практическая конференция с международным участием «Высшее сестринское образование в системе российского здравоохранения» (г. Ульяновск, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 12 научных работ, из них 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ; 1 практическое пособие.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на страницах 147. Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка использованных литературных источников. Список литературы включает 223 источников, в том числе 140 — отечественных и 83 - зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 30 таблицами и 16 рисунками.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Микросимбиоз влагалища при инфекционно-воспалительных

заболеваниях

В современных условиях все большее значение в этиологии воспалительных заболеваний органов малого таза приобретают полимикробные ассоциации с различной степенью значимости микроорганизмов ассоциантов (Бухарин О.В., Лобакова Е.С., 2007).

Популяции микроорганизмов, вступая в сложные взаимоотношения, конкурентные или кооперативные, при заселении различных органов, тканей макроорганизма формируют специфический его «микросимбиоз». При этом прослеживаются ступени последовательного усложнения морфологического и функционального соподчинения компонентов микросимбиоценоза с макросимбионтом. В составе таких симбиоценозов микросимбионтов, как правило, наблюдается прстранственное разделение ассоциативных и доминантного симбионтов в экологических нишах макропартнера, в которых отсутсвуют конкурентные отношения между ними. Необходимо подчеркнуть, что стабильное существование сложной интегрированной симбиотической системы возможно только при регуляции макропартнером численности, интенсивности метаболизма и репродуктивной активности микросимбионтов, потенциальная скорость размножения которых обычно значительно выше, чем у макросимбионта. Процессы регуляции проявляются в изменение метаболизма, программы клеточной дифференцировки и жизнеспособности микросимбионтов (доминантного и ассоциативного) в направлении, благоприятном для развития макропартнера (Бухарин О.В., 2007).

Вагинальная микрофлора является индикатором состояния здоровья женщины, представляя собой динамическую систему, реагирующую на изменения гормонального и иммунологического статуса при различных патологических состояниях. Определённое постоянство микробиоценоза в норме и его высокая реактивность к изменениям внешней и внутренней среды

позволяют рассматривать нормальную микрофлору как индикатор здоровья человека (Наумкина Е.В., Рудаков Н.В., Пахалкова Е.В., 2009).

В последние годы большое количество исследований посвящено изучению особенностям изменений нормальной микрофлоры влагалища при различных инфекционно-воспалительных заболеваниях женской репродуктивной сферы (Анкирская A.C., Кира Е.Ф., 2001; Кафарская Л.И., 2002; Киргизова С.Б. с соавт., 2004; Воропаева Е.А., 2005; 2006; Сидорова И.С., 2007).

Однако культуральное исследование вагинального отделяемого с количественной оценкой основных показателей микробиоценоза не нашло широкого применения в связи с его высокой стоимостью и трудоемкостью. В большинстве случаев диагностика и лечение основываются на выявлении основного возбудителя без учета количественных критериев, не проводится контроль степени нарушений нормальной микрофлоры (Кисина В.И., Коршунова О.В. и соавт., 2000; Кафарская Л.И. и соавт., 2002; Соколовский Е.В. и соавт., 2006; Сидорова И.С., 2007).

В настоящее время имеется достаточное количество исследований, посвящённых роли микрофлоры в жизнедеятельности человека (Черкасов C.B., Валышев A.B., 2005). Каждому органу свойственна своя относительно постоянная микробная (аутохтонная, индигенная, резидентная) и добавочная (транзиторная, аллохтонная) флора (D.Madden, 2002).

Регуляцию видового и количественного состава микрофлоры влагалища, поддержание её колонизационной резистентности обеспечивают иммунная, нервная и эндокринная системы организма (Кудрявцева Л.В., 2001; Наумкина Е.В., 2006; Савичева A.M., Макаров О.В., 2007; Захарова Т.П., 2008). В случае «поломки» на уровне одного из этих звеньев, микроэкология влагалища нарушается, что может привести к развитию воспалительных процессов генитального тракта (Krohn M.D. et al., 1991; Porozanova V. et al., 2000; Кира Е.Ф., 2001; Карамова А.Э., 2003; Xia Zhou, Stephen J. Bent