Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние паразитических простейших на изменение биоэкологических свойств участников микробоценоза кишечника

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Влияние паразитических простейших на изменение биоэкологических свойств участников микробоценоза кишечника"

На правах рукописи

КУРЗИН АЛЕКСАНДР ВАЛЕРЬЕВИЧ

ВЛИЯНИЕ ПАРАЗИТИЧЕСКИХ ПРОСТЕЙШИХ НА ИЗМЕНЕНИЕ БИОЭКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ УЧАСТНИКОВ МИКРОБОЦЕНОЗА

КИШЕЧНИКА.

03.00.16-экология 03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 о !!!3:] 2003

Ульяновск-2009

003472678

Работа выполнена на кафедре общей и клинической фармакологии с курсом микробиологии в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ульяновский государственный университет

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Чураков Борис Петрович доктор медицинских наук, профессор Потатуркина-Нестерова Наталия Иосифовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Каменек Валерий Михайлович доктор биологических наук, профессор Тихомирова Елена Ивановна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Мордовский Государственный университет им. Н.П. Огарева

Защита диссертации состоится » Сл.1Л>к> 2009 г. в И" часов на заседании диссертационного совета Д 212.278.07 при ГОУ ВПО «Ульяновский государственный университет» по адресу: ул. Набережная реки Свияги, 106, корпус 1, ауд. 703.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ульяновского государственного университета, с авторефератом - на сайте ВУЗа http://www.uni.ulsu.ru.

Отзывы на автореферат направлять по адресу: 432000, г.Ульяновск, ул. Л.Толстого, д.42, Ульяновский государственный университет, управление научных исследований

Автореферат разослан «23» 2009 года

Ученый секретарь С /у f

диссертационного совета _ /Н~7 I /

кандидат биологических наук, доцент \Д ijAÂJyi С.В.Пантелеев

ОСНОВНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Человек и окружающая среда представляют единую экологическую систему, находящуюся в состоянии биологического равновесия между макро- и микроорганизмами, строго адаптированными друг к другу (Бондаренко В.М., 2007).

Полагают, что микробы-симбионты, формирующие микроэкологические системы организма, определяют стабильность нормальной микрофлоры человека и принимают самое непосредственное участие в регуляции процессов, происходящих в организме человека.

Качественное и количественное соотношение популяций микробов в отдельных органах и системах, является чрезвычайно чувствительным индикатором состояния организма человека. Система популяций микроорганизмов нормальной микробиоты представляет собой эволюционно созданный «биологический барьер» макроорганизма, позволяющий ему существовать в нашей биосфере.

Нарушение нормальной микрофлоры кишечника характеризуется исчезновением или снижением числа облигатных ее представителей, с одной стороны, и увеличением популяционного уровня условно-патогенных микробов (энтеробактерий, стафилококков, грибов рода Candida и др.), отсутствующих или встречающихся в ничтожных количествах в норме - с другой. В итоге такие дисбиозные микробные ассоциации не в состоянии выполнять защитные и физиологические функции в кишечнике, которые они осуществляют в условиях нормоценоза. Нарушения микробоценоза кишечника может возникать при воздействии самых различных факторов экзогенной и эндогенной природы.

Одной из причин, способствующих развитию нарушений микробного равновесия в кишечнике могут являться паразитарные инвазии. В России ежегодно официально регистрируется более 1,3 миллионов больных различными паразитозами, а по мнению Главного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Онищенко (2002), этот показатель составляет 20 млн. Одним из наиболее распространенных возбудителей кишечных протозоозов является простейшее Blastocystis hominis.

Данный паразитоз длительное время не привлекал внимания специалистов, однако в последние годы было убедительно показано участие

данных паразитических простейших в развитии различных патологий человека (Stensvold et al. 2009).

Находясь в кишечнике, бластоцисты участвуют в формировании микробоценоза данного биотопа. Нарушая баланс микроорганизмов, данные возбудители способствуют более полной реализации патогенного потенциала транзиторной микробиоты, особенно при образовании ими протозойно -бактериальных ассоциаций.

Одними из чрезвычайно распространенных представителей условно-патогенной микробиоты кишечника являются бактерии рода Proteus, роль которых в формировании микробоценоза кишечника остается недостаточно изученной. Имеются факты, свидетельствующие о способности микроорганизмов этого рода изменять свои биологические свойства при взаимодействии с другими представителями микробиоты, формирующей микробный пейзаж кишечника. Однако до сих пор эти аспекты взаимодействия микроорганизмов в микробоценозе кишечника остаются мало изученными.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Изучить изменение биоэкологических свойств компонентов микробоценоза кишечника под действием паразитических простейших В. hominis.

ЗАДАЧИ:

1. Изучить видовой состав и экологические отношения в микробоценозе кишечника в норме.

2. Изучить влияние паразитических простейших на изменение межмикробных отношений в составе микробоценоза.

3. Выявить изменения биологических свойств участников микробоценоза кишечника на примере P. mirabilis.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые изучено влияние паразитического простейшего В- hominis на изменение биологических свойств отдельных представителей микробоценоза кишечника на примере бактерий Р. mirabilis.

Показано значительное усиление вирулентных свойств данных бактерий в результате взаимодействия с паразитическими простейшими В. hominis in vivo и in vitro, что является проявлением повышения агрессии микроорганизмов в отношении макроорганизма.

Взаимодействие бактерий P. mirabilis с паразитическими простейшими В. hominis в бактериально-протозойных ассоциациях позволяет протеям наиболее полно проявить свой патогенный потенциал, что выражается в значительном усилении летального эффекта этих бактерий при заражении мышей.

Установлено влияние бластоцист на экологические характеристики микробоценоза кишечника макроорганизма. Анализ ценотипа кишечника показал, что его изменения проявляются на уровне экосистемы и имеют последовательный характер.

Изучены изменения во взаимодействии представителей различных родов бактерий, формирующих микробоценоз кишечника при развитии протозойной инвазии.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Полученные в работе данные расширяют представления о характере протозойно - бактериальных взаимодействий, углубляют знания об особенностях патологического действия В. hominis и изменениях патогенного потенциала бактерий, формирующих микробные сообщества макроорганизма. В результате взаимодействия с паразитическими простейшими бактериальная составляющая микробоценоза кишечника значительно изменяет свои вирулентные свойства, оказывая патологическое действие на макроорганизм.

В связи с высокой степенью инвазированности населения различными кишечными паразитами, в том числе В. hominis, при образовании бактериально - протозойных ассоциаций, следует учитывать изменения патогенных свойств бактерий, формирующих нормальный микробоценоз кишечника, и возможность возникновения эндогенной инфекции в результате изменения патогенного потенциала представителей условно патогенной микробиоты.

Выраженные изменения вирулентных свойств бактерий P. mirabilis при их взаимодействии с паразитическими простейшими В. hominis диктуют необходимость учета фактора протозойной инвазии при рассмотрении роли данных микроорганизмов в рамках микробоценоза кишечника, это предполагает необходимость внедрения паразитологических исследований в работу практических лабораторий.

По материалам диссертации опубликованы практические рекомендации «Особенности диагностики инфекций, вызванных представителями рода Proteus» (2009) и «Дисбиоз кишечника и методы его диагностики» (2009).

Результаты исследования используются в работе клинико-бактериологической лаборатории ОККВД (г. Ульяновск), городской клинической детской больницы №1 (г. Ульяновск).

Данные, полученные в результате исследования, позволяют совершенствовать учебный процесс по курсу микробиологии. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Проявления кишечного бластоцистоза и нарушения микробоценоза кишечника зависят от степени выраженности патогенности бластоцист.

2. Структурная перестройка микробоценоза кишечника при бластоцистной инвазии сопровождается нарушением количественных и качественных показателей микробного сообщества кишечника.

3. Бластоцистная инвазия вызывает изменения культуральных, биохимических и вирулентных свойств бактерий P. mirabilis.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты исследований доложены на на 15-й ежегодной научно-практической конференции «Труды молодых ученых Ульяновского государственного университета» (Ульяновск, 2005); 1-й конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007). ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 9 работ, одна из них в издании, рекомендованном ВАК РФ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 2 глав собственных исследований, обсуждения, выводов и списка используемой литературы. Диссертация изложена на 115 страницах. Список литературы содержит 284 наименований, в том числе 132 зарубежных. Работа иллюстрирована 12 таблицами, 22 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1 содержит обзор отечественной и зарубежной литературы по теме работы.

Раздел 1.1. посвящен рассмотрению микробоценоза кишечника и его характеристикам. В данном разделе указаны основные причины, приводящие к развитию нарушений нормального состава микробиоты кишечника и негативное воздействие данных нарушений на макроорганизм.

Раздел 1.2. посвящен роли паразитических простейших В. hominis и их роли в патогенезе человека и животных. В данном разделе анализируется многогранность проявлений патогенного потенциала паразитических простейших и их влияние на изменения состава кишечного микробоценоза.

В разделе 1.3. рассмотрены факторы вирулентности представителя транзнторной микрофлоры P. mirabilis и факторы, способствующие изменениям его патогенности. Изучены основные работы, посвященные способности данных бактерий образовывать ассоциации с другими микроорганизмами и изменять свойства при образовании подобных ассоциаций.

Глава 2 Материалы и методы исследований. Изучение микробоценоза кишечника и воспроизведение кишечного бластоцистоза проводили на нелинейных лабораторных мышах массой 23,1+2,2 г, которых содержали в условиях постоянного температурного режима (20°-25°С) и стабильной освещённости. Животные получали полноценное питание. Перед проведением экспериментов и опытные, и контрольные группы находились в карантине.

Кишечный бластоцистоз воспроизводили по модифицированной методике К.Т.Мое (1997) (Патент на изобретение №2224465, от февраля 2004г.). Культуры В.hominis были получены из музея кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии. Выявление бластоцист проводили микроскопическим и культуральным методами. Микроскопию нативных или окрашенных мазков производили после формалин эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена-Ридли (Al-Braiken 2008). Размеры бластоцист определяли при помощи окуляр-микрометра. Для культивирования простейших В. hominis использовали среды Павловой, Zierdt, Джонсона и Suresh.

В ходе исследований у экспериментальных животных проводили изучение микробиоты кишечника. Культуры, выросшие на питательных средах, подвергли групповой, родовой и видовой идентификации.

Таблица 1

Среды, использованные при изучении кишечной микробиоты

п/п Среда Микроорганизмы Условия культивирования

1. Эндо, висмут-сульфит агар Эшерихии, другие энтеробактерии 24 ч, аэробное, +37° С

2. Блаурокка Бифидобактерии 3-4 сут, анаэробное, +37° С

3. МРС-4 Лактобациллы 4 сут, анаэробное, +37° С

4. ЖСА Стафилококки 48 ч, аэробное, +37°С

5. 5% кровяной агар, Калины Стрептококки, энтерококки 48 ч, аэробное, +37°С

6. 5% кровяной агар Гемолитические штаммы 24 ч, аэробное, +37°С

7. Вильсона-Блера Анаэробы 2 сут, анаэробное, +37°С

8. Сабуро Дрожжеподобные грибы 1-е сут, +37и С, 2-5 сут. +22° С, аэробное

Видовую идентификацию микроорганизмов проводили с использованием определителя Берги (1997). Учет результатов проводили согласно приказа № 535 от 22.04.85 МЗ РСФСР «Об унификации микробиологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях и лечебно-профилактических учреждениях» и приказа Минздрава России от

09.06.2003 №231 «Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91500.11.0004 -2003)» Работа выполнена на базе:

1. Бактериологической лаборатории городской больницы №1 г. Ульяновска (зав. лабораторией -Т.И. Волгина).

2. Центра общего пользования УлГУ.

Количество микроорганизмов подсчитывали по формуле: для плотных сред X = 20-х-п-х-к, для жидких сред X = 2 ■ х • к, где X - количество микроорганизмов каждого вида (КОЕ/г), п - количество выросших колоний, к -разведение, из которого произведен посев с обратным знаком степени.

Результаты исследований сопоставляли с данными нормального состава биотопа. При этом исходили из следующих критериев:

1) значительного (на несколько порядков) снижения численности основных для данного биотопа видов или вариантов.

2) значительного (на несколько порядков) увеличения численности популяций видов, которые в нормальном биоценозе встречаются в небольших количествах.

3) появления в микрофлоре большого количества атипичных штаммов основных видов.

Экологический анализ микробоценоза проводили путем определения индекса контагиозности (МеЬга], 2008), индекса значимости (Манат е1 а1., 2008), видового разнообразия сообществ микроорганизмов (Бшта й а1., 2008). Характер пространственного распределения экологических групп в

биотопе изучали с помощью индекса контагиозности по формуле: 1)К = —, где

X

ик - индекс контагиозности; Б - выборочная дисперсия; X -

среднеарифметическая плотность.

Индекс значимости экологических групп микробиоценоза рассчитывали по

формуле: V = , где V - индекс значимости; g - сумма встречаемости

видов данной группы; п - число описанных пробных площадок; т - среднее число видов на пробной площадке; ъ - число видов в данной группе.

Видовое разнообразие сообществ микроорганизмов, населяющих

различные биотопы, определяли по формуле: с! = —, где с! ~ видовое

N

разнообразие; Б - количество видов; N - общая плотность бактерий.

Для определения доли участия разных видов в структуре биоценоза использовали показатель постоянства С (Не]шу еХ а1., 2008), его вычисляли по

формуле: С = -^-100%, где С - показатель постоянства; р - число выборок, содержащих изучаемый объект; Р - общее число взятых образцов.

Таблица 2

Объем проведенных исследований

№ Наименование проведенного исследования Количество

п.п. исследований

1 Получение культур простейших В. hominis 589

2 Выделение культур бактерий P. mirabilis 418

3 Световая микроскопия препаратов 2366

4 Приготовление препаратов для электронной микроскопии 50

5 Электронная микроскопия препаратов бактерий и простейших 42

6 Видовая идентификация микрорганизмов 842

7 Определение сахаролитической активности бактерий P. mirabilis 316

8 Определений культуральных свойств 452

протеев

9 Определение гемолитической активности протеев 224

10 Тесты адгезивной активности 158

11 Внутрибрюшинное заражение мышей 263

12 Воспроизведение кишечного бластоцистоза 249

Все полученные данные подвергались статистической обработке с определением коэффициента достоверности Стьюдента. Результаты считались

достоверными при р<0,05. Также производилось определение коэффициента корреляции. Для обработка данных использовался пакет Microsoft Office 2003. Глава 3 состоит из 4 разделов и включает в себя изложение собственных результатов, полученных в ходе исследования.

В разделе 3.1. изложено состояние бактериальной эндофлоры кишечника у мышей, до начала эксперимента. Проведенные исследования выявили: клостридии у 7,1% животных в количестве 0,2±0,06 Ig КОЕ/г, представителей рода Klebsiella в 24,3% случаев, их количество составило 1,07±0,04 Ig КОЕ/г, протеев-у 27,1% мышей в количестве 3,02±0,1 lgKOE/r.

Результаты исследования микробного пейзажа у животных показали, что в их испражнениях преобладали бесспоровые облигатные анаэробы -бактероиды (10,1±0,12 lg КОЕ/г) и бифидобактерии (6,4+0,13 lg КОЕ/г). Количество лактобактерий было значительно меньше и не превышало 5,3±0,18 lg КОЕ/г. Кишечные палочки были обнаружены во всех пробах испражнений у животных в количестве 7,4±0,16 lg КОЕ/г.

В зависимости от полученного значения показателя постоянства, все виды подразделили на постоянные (доминирующие), которые присутствовали более чем в 50% образцов; добавочные, выявляемые в 25-50% проб и случайные, обнаруженные в < 25% образцов.

Таблица 3

Структура кишечного микробиоценоза мышей до начала эксперимента

№ п/п Микроорганизмы Показатель постоянства

Доминирующие виды %

1 Bifidobacterium spp. 100

2 Escherichia coli 100

3 Bacteroid.es spp. 100

Добавочные виды

1 Klebsiella spp. 24

2 Proteus spp. 27

Случайные (транзиторные виды)

1 Clostridium spp. 7,1

Таким образом, ясно видна главенствующая роль представителей родов Bifidobacterium, Escherichia и Bacteroides в составе микробиоты кишечника.

В разделе 3.2. описаны особенности течения экспериментальной бластоцистной инвазии и ее проявления у мышей. Процесс развития бластоцистной инвазии был разделен на три стадии:

1 - начальная (от момента заражения до 5 суток)

2 - разгара заболевания (с б по 15 сутки)

3 - выздоровления (ремиссии) (с 16 по 28 сутки)

Во время 1-ой стадии у животных отмечалось появление первых признаков заболевания: изменение характера шерстяного покрова, вялость, снижение аппетита, появление жидкого стула у некоторых животных.

2-я стадия характеризовалась выраженными проявлениями протозойной инвазии: жидкий стул в тяжелых случаях с примесью слизи и крови, животные слабо реагировали на внешние раздражители.

В течение 3-ей стадии происходило постепенное выздоровление животных с обратным развитием всех признаков заболевания.

У зараженных мышей развивалась острая бластоцистная инвазия, однако степень ее проявления варьировала. У 57,5% животных наблюдали выраженные признаки заболевания: изменение характера шерстяного покрова, вялость, снижение аппетита, жидкий стул, в тяжелых случаях с примесью слизи и крови, слабая реакция на внешние раздражители (1-я группа).

У животных 2-й группы (35,7%) развивался менее выраженный процесс, кровь и слизь в фекалиях не обнаруживались, отмечалась нормальная реакция на внешние раздражители, однако фиксировалась вялость, жидкий стул, снижение аппетита.

У животных 3-й группы (4,2%) признаков заболевания не выявлено.

В разделе 3.3. изложены данные о количественных и качественных изменениях видового состава микробоценоза кишечника у мышей с экспериментальным бластоцистозом. Инвазия сопровождалась значительными изменениями микробоценоза кишечника, происходило нарушение баланса межвидовых отношений, проявлявшееся наиболее значительно у животных первой группы. У них, начиная со 2-3 суток эксперимента, наблюдалось значительное снижение численности представителей индигенной микробиоты: у бактерий рода Bifidobacterium до 1,54±0,25 lg КОЕ/г (в контроле 6,4±0,13 lg

КОЕ/г; р<0,05), у рода Escherichia до 1,03±0,19 lg КОЕ/г (в контроле 7,4+0,16 lg КОЕ/г; р<0,05). Одновременно наблюдалось увеличение количества клебсиелл от 1,07+0,04 lg КОЕ/г (первые сутки) до 4,22±0,75 lg КОЕ/г (двенадцатые сутки). Содержание эшерихий с нормальной ферментативной активностью и лактозонегативных кишечных палочек составило 7,96±0,12 lg КОЕ/г (р <0,05) и lg 2,61 + 0,34 КОЕ/г (р < 0,05) соответственно. Наряду с этим характерным микроорганизмом для микробного пейзажа кишечника обследованных больных являлась кишечная палочка с гемолитическими свойствами, обнаруженная в количестве lg 2,32+0,35 КОЕ/г (рис. 1).

Гемолитические штаммы

Не

ферментирующие лактозу

Нормальная ферментативная активность

0123456789 И животные с умеренными проявлениями бластоцистоза

Н животные с выраженными проявлениями бластоцистоза

{________._

Рис. 1. Соотношение штаммов кишечной палочки с различной ферментативной активностью

У животных второй группы выявлены менее выраженные изменения качественного и количественного состава микробоценоза кишечника. Количество таких представителей индигенной микробиоты, как Bifidobacterium, изменялось до 3,45+0,32 lg КОЕ/г (в контроле 6,4±0,13 lg КОЕ/г; р<0,05), рода Escherichia до 2,01±0,1 lg КОЕ/г (в контроле 7,4+0,16 lg КОЕ/г.). Также наблюдалось некоторое увеличение количества представителей транзиторной микробиоты кишечника: клебсиелл - до 2,27+0,17 lg КОЕ/г (в контроле 1,56+0,03 lg КОЕ/г; р<0,05),

У представителей третьей группы экспериментальных животных (без признаков бластоцистоза) достоверных изменений в составе микробиоты кишечника не выявлено, в составе микробоценоза доминировали представители родов Bifidobacterium, Escherichia и Bacteroides.

Таблица 4

Микробиота кишечника при развитии бластоцистоза на 2-3 сутки эксперимента

Микроорганизмы Количественное содержание микробиоты Lg КОЕ/г (M±m)

1 группа 2 группа Контроль

Bifidobacterium spp. 1,54±0,25* 3,45±0,32* 6,4±0,13

Lactobacillus spp. 7,87+0,11* 8,7 ±0,3* 13,9±0,26

Escherichia coli с нормальной ферментативной активностью (типичные) 7,96t 0,12* 8,3 ±0,21* 7,4±0,16

Escherichia coli гемолитические 1,03±0Д9* 0,45 ±0,08* Не обнаружен

Escherichia coli лактозонегативные 2,32±0,35 2,27± 0,24 1,5 ±0,08

Klebsiella spp. 4,22±0,75* 3,17±0,51* 1,03±0,01

Staphylococcus aureus 1,47 ±0,24 0,3 5 ±0,03 Не обнаружен

Дрожжеподобные грибы p. Candida 2,26 ±0,29* 2,26 ±0,29* 1,0±0,03

Примечание: различия с контролем достоверны - * р < 0,05.

В разделе 3.4. описаны изменения основных экологических характеристик, описывающих микробоценоз кишечника.

Исходя из полученных нами данных на начальной стадии развития заболевания распределение микроорганизмов в пространстве носило равномерный характер, что подтверждалось значениями индекса контагиозности меньше единицы.

Так, индекс контагиозности бифидобактерий равен 0,45±0,01, в то время как в группе сравнения этот показатель приближается к единице (0,75-0,08), что свидетельствует о случайном распределении бактерий в микробиоценозе. Для таких представителей облигатной микрофлоры, как лактобактерии и бактероиды, было характерно равномерное распределение в пространстве (0,7±0,1 и 0,87±0,3 соответственно), в то время как в контрольной группе данный показатель составил 0,9±0,1 и 0,075±0,12 соответственно (р<0,01).

Индекс контагиозности бактерий рода Escherichia составил 0,31±0,3, в контроле - 0,95±0,4. Наряду с этим, выявлялось повышение индекса контагиозности для бактерий условно-патогенной группы (рисунок 9 6). Так, для бактерий рода Enterococcus он составил 0,64±0,7 (0,48±0,1 в контрольной группе), Staphylococcus - 0,55±0,03 (0,39±0,17), Candida - 1,34±0,2 (0,43±0,25). Показатель распределения бактерий рода Proteus составил 1Д±0,1, в то время как в группе здоровых людей этот показатель не превышал 0,75±0,1 (р<0,05).

Максимальное снижение индекса контагиозности отмечалось у кишечных палочек с нормальной ферментативной активностью (разница между контрольными и экспериментальными значениями составила 31,1%). Выявлено также значительное снижение индекса контагиозности у бифидобактерий (на 15,1 %).

Напротив, у представителей условно-патогенной группы, таких как Staphylococcus и Enterococcus отмечено значительное увеличение индекса контагиозности (на 103,7% и 60% соответственно). У представителей рода Proteus изменение индекса контагиозности составило 29,4%.

У представителей рода Proteus изменение индекса контагиозности составило 29,4%, что объясняется прогрессирующим нарушением экологических связей в микробоценозе кишечника (рис. 2).

Bacteroides

Bifidobacterium b

\y

Escherichia 0 эксперимент □ контроль

Lactobacillus

Proteus

Enterococcus l,s,

Staphylococcus

Candida 0 эксперимент □ контроль

б

Рис. 2. Изменение контагиозности облигатной (а) и условно-патогенной микробиоты (б)

Анализ результатов изменения флористической значимости микроорганизмов кишечника, свидетельствует о том, что значимость облигатной микробиоты достоверно снижалась в 1-й период развития бластоцистной инвазии (табл. 5).

Таблица 5

Показатели индекса флористической значимости видов биоценоза кишечника

Микроорганизмы Индекс флористической значимости (%)

Начальная стадия Разгар заболева ния контроль

Bifidobacterium spp. 10,1 9,8* 12,1

Lactobacillus spp. 7,95 7,9 8,2

Escherichia spp. 8,15 8,0 8,7

Bacteroides spp. 10,31 10,1 11,0

Enterococcus spp. 7,6* 6,7 6,2

Proteus spp. 4,45 4,9 4,0

Klebsiella spp. 3,73 4,2* 3,5

Staphylococcus spp. 4,99 4,97 4,83

Clostridium spp. 6,35 6,36 6,30

Грибы Candida spp. 4,7 4,5 4,2

* - достоверность р<0,05

Напротив, для представителей условно-патогенной биоты микропейзажа кишечника в начальной стадии было характерно некоторое увеличение флористической значимости. Так, для энтерококков данный показатель увеличился в начальной стадии инвазивного процесса до значения 7,6%, в то время как в контрольной группе он составлял 6,2% (р<0,05). У клебсиелл увеличение флористической значимости было незначительным 3,73% - (3,5% в контролеУ клостридий данный показатель практически не изменился (6,35% против 6,3% в контрольной группе). Не было также обнаружено достоверного изменения флористической значимости бактерий рода Proteus (р>0,05).

Анализ ценотипа кишечника показал, что его изменения имеют последовательный характер и проявляются на уровне экосистемы. Это выражалось в появлении среди доминантных видов представителей транзиторной биоты, а роды Klebsiella и Proteus из группы случайной микробиоты перешли в группу добавочных видов.

В разгар заболевания в микробоценозе кишечника выявлено достоверное уменьшение контагиозности представителей нормальной микробиоты, что приводило к освобождению экологических ниш, успешно занимаемых транзиторной флорой. Данное соотношение свидетельствует о неравномерности участия в горизонтальной структуре микробопейзажа кишечника основных симбионтов и представителей транзиторной флоры. Выявленные изменения подтверждались изменениями индекса флористической значимости и показателем видового разнообразия (табл. 6).

Таблица 6

Показатели индекса флористической значимости видов биоценоза кишечника

в первую стадию

Индекс флористической значимости

Микроорганизмы (%)

Начальная стадия Разгар заболевания контроль

Bifidobacterium 10,1 9,8* 12,1

Lactobacillus 7,95 7,9 8,2

Escherichia 8,15 8,0 8,7

Bacteroides 10,31 10,1 11,0

Enterococcus 7,6* 6,7 6,2

Proteus 4,45 4,9 4,0

Klebsiella 3,73 4,2* 3,5

Staphylococcus 4,99 4,97 4,83

Clostridium 6,35 6,36 6,30

Грибы Candida 4,7 4,5 4,2

* - достоверность р<0,05

Напротив, для представителей условно-патогенной биоты микропейзажа кишечника в начальной стадии было характерно некоторое увеличение флористической значимости. Так, для энтерококков данный показатель увеличился в начальной стадии инвазивного процесса до значения 7,6%, в то время как в контрольной группе он составлял 6,2% (р<0,05). У клебсиелл увеличение флористической значимости было незначительным 3,73% (3,5% в контроле). У клостридий данный показатель практически не изменился (6,35% против 6,3% в контрольной группе). Не было также обнаружено достоверного изменения флористической значимости бактерий рода Proteus (р>0,05).

Флористическая значимость представителей транзиторной микрофлоры в свою очередь демонстрировала стойкий рост. Так, для представителей рода Proteus изменение данного показателя составило более 0,4 % (от 4,45% на начальной стадии до 4,9% на стадии разгара заболевания, в контроле 4,0%)

Результаты исследований выявили корреляционную зависимость между численностью представителей группы эшерихий и протеев, коэффициент корелляции составил 0,47 у контрольной группы и 0,45 у экспериментальной группы на момент начала эксперимента. В дальнейшем у рассматриваемых групп микроорганизмов наблюдалось стойкое снижение значения коэффициента корелляции до уровня 0,09, что свидетельствует о нарушении межмикробных отношений в кишечнике.

Глава 4. Изменение биологических свойств P. mirabilis при взаимодействии с простейшими В. hominis.

Учитывая высокую значимость P. mirabilis в развитии нарушений микробоценоза кишечника, а также патологии человека и животных было проведено изучение биологических свойств данных бактерий при влиянии простейших В. hominis на микробное сообщество кишечника.

С этой целью определяли морфологические, тинкториальные и культуральные свойства протеев, а также их ферментативную и гемолитическую активность, наличие факторов, отвечающих за адгезию (MR/P фимбрии) и способность к развитию летального эффекта в опытах in vivo.

Проведенные исследования выявили значительные изменения проявлений свойств патогенной активности протеев при их взаимодействии с простейшими В. hominis.

В разделе 4.1. были изучены морфологические, тинкториальные и культуральные свойства протеев, выявлено усиление вирулентной активности P.mirabilis, что проявлялось в приобретении способности всех штаммов протея к образованию феномена «роящегося» роста, тогда как до совместного культивирования «роение» фиксировалось у 87% штаммов.

В разделе 4.2. показано, что все штаммы протеев после взаимодействия с бластошстами in vitro и in vivo изменяли ферментативную активность, в частности все изученные штаммы P. mirabilis приобретали способность к ферментации маннозы.

В разделе 4.3. изложены данные по изменению гемолитической активности протеев. Все группы штаммов P. mirabilis, использовавшиеся в эксперименте, демонстрировали достоверное увеличение коэффициента гемолитической активности. Бактерии, выделенные из фекального материала экспериментальных животных до их заражения простейшими, обладали гемолитической активностью в 53% случаев. После взаимодействия с бластоцистами in vitro 67% штаммов протеев проявляли гемолитическую активность, что также подтверждает усиление вирулентных свойств данных микроорганизмов (рис. 2).

Ш1 группа Ш2 группа □ 3 группа □ 4 группа ■ контроль

Рис. 2.Увеличение уровня коэффициента гемолитической активности

Раздел 4.4. посвящен изменению адгезивных свойств представителей P. mirabilis при их сокультивировании с паразитическими простейшими. По результатам взаимодействия бактерий с простейшими in vivo и in vitro был выявлен значительный рост числа штаммов, обладающих

маннозорезистентными фимбриями, что свидетельствует об усилении адгезивной активности протеев. Так, после совместного культивирования бактерий, полученных от здоровых животных, с простейшими количество штаммов, вызывающих агглютинацию эритроцитов, выросло с 26,7% до 63,3%. Более чем в два раза выросла доля штаммов, обладающих маннозорезистентными фимбриями (таблица 6).

Таблица 6.

Изменение способности протеев вызывать агглютинацию эритроцитов

человека

1 группа 2 группа 3 группа 4 группа Контроль

Количество штаммов способных к агглютинации эритроцитов (абс/%) 8/ 26,7 19/63,3 22/ 73,3 26/ 86,7 10/33,3

Из них устойчивы к действию маннозы 3 12 14 14 4

Значительных изменений адгезивных свойств бактерий, выделенных у мышей с бластоцистной инвазией, после их сокультивирования in vitro с простейшими В. hominis не выявлено.

В разделе 4.5. представлены результаты теста определения вирулентности методом внутрибрюшинного заражения мышей, обнаружено увеличение вирулентности штаммов протея взаимодействовавших с простейшими. Наибольшее увеличение вирулентных свойств отмечалось после взаимодействия протеев с бластоцистами in vivo в кишечнике экспериментальных животных.

Вирулентность штаммов, выделенных у здоровых и инвазированных животных, была не одинакова, она варьировала в пределах от 3,2±0,1 до 4,2±0,2, часть изолятов не обладали вирулентными свойствами.

Полученные данные позволяют сделать вывод об усилении вирулентности бактерий рода Proteus при взаимодействии их с паразитическими простейшими В. hominis. Выводы:

]. Нормоценоз кишечника представлен 8 видами микрорганизмов, из которых 3 относятся к группе облигатной кишечной микробиоты, 2 к добавочным видам и 1 к транзиторным, условно патогенным микроорганизмам. В доминирующую группу входили представители родов Bifidobacterium, Escherichia и Bacteroides.

2. Паразитические простейшие В. hominis вызывают острую протозойную инвазию, сопровождающуюся значительными изменениями количественных и качественных показателей микробиоты, что проявлялось снижением флористической значимости основных симбионтов, и увеличением частоты встречаемости транзиторной биоты.

3. В результате взаимодействия паразитических простейших В. hominis с бактериями P. mirabilis у последних изменяются культуральные, биохимические свойства и уровень вирулентности.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Курзин А.В. Мониторинг микробиоты кишечника при экспериментальной ишемии на фоне бластоцистной инвазии I А.М Лазарев, Ю.Ю. Красноперова, А.В. Курзин // Проблемы региональной экологии. №2,2009. - №2 - С. 74 - 78.

2. Курзин А.В. Влияние простейших Blastocystis hominis на формирование ишемии толстого кишечника / А.М. Лазарев, Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Е.А. Зубкова И Успехи современного естествознания. - 2006. - № 2. - С. 30 - 31.

3. Курзин А.В. Микробная экология кишечника при экспериментальной ишемии, отягащенной бластоцистной инвазией / А.М. Лазарев, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, А.В. Курзин // Материалы всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека». - Ульяновск: УлГУ, 2007. -С. 145 -146.

4. Курзин А.В. Изменение состава микрофлоры кишечника при дисбиозе, вызванном инвазией простейшими Blastocystis hominis / А.В. Курзин, Ю.Ю. Красноперова, Н.С. Глебова, А.М. Лазарев // Материалы I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов. - Ульяновск: УлГУ, 2007. - С. 51 - 52.

5. Курзин А.В. Морфологические изменения и микробиоценоз толстой кишки при экспериментальной ишемии на фоне бластоцистоза / А.М. Лазарев, Ю.Ю. Красноперова, А.В. Курзин, Е.А. Крючков // Материалы I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов. - Ульяновск: УлГУ, 2007. - С. 152- 154.

6. Курзин A.B. Влияние микробиоты толстой кишки на формирование и тяжесть течения экспериментальной ишемии, ассоциированной с бластоцистозом / A.M. Лазарев, Н.И. Потатуркина -Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, A.B. Курзин, Е.А Зубкова, М.П. Свитайло // Естествознание и гуманизм. - Томск, 2007. - Том 4, № ]_ с. 116.

7. Курзин A.B. Оценка нарушений межвидового взаимодействия микроценоза кишечника при экспериментальном бластоцистозе / A.B. Курзин, A.M. Лазарев // Проблемы и перспективы современной науки. - Томск, 2008. -Вып. 1-С. 81-82.

8. Курзин A.B. Особенности микробиоты тонкого отдела кишечника при экспериментальной ишемии на фоне инвазии Blastocystis hominis / A.M. Лазарев, Н.И. Потатуркина-нестерова, Ю.Ю. Красноперова, A.B. Курзин // Проблемы и перспективы современной науки. - Томск, 2008. - Вып. 1 - С. 82-83.

9. Курзин A.B. Частота встречаемости бластоцистной инвазии при хронической экземе / Н.С. Глебова, A.B. Курзин // Материалы I конференции молодых ученых медико-биологическая секции Поволжской ассоциации государственных университетов. - Ульяновск: УлГУ, 2008 - С. 28-29.

Подписано в печать 21.05. 2009г. Тираж 100 экз., печать офсетная Заказ № 597

Отпечатано в типографии ООО «КОПИРИНГ» ул. К. Маркса, 26, тел.: 42-07-81

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Курзин, Александр Валерьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Микроэкология биоценоза кишечника.

1.2 Простейшие Blastocystis hominis как дестабилизирующий фактор микроценоза кишечника.12'

1.3 Характеристика патогенных свойств представителей рода Proteus.

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2. 1. МАТЕРИАЛЫ.

2. 1. 1. Культуры В.hominis.■.

2.1.2. Среды культивирования.

2.1.3. Лабораторные животные.302. 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.;.

2. 2. 1. Методика изучения микробиоты кишечника.

2. 2. 2. Экологическая оценка микробиоценоза.

2. 2. 3. Получение культур В.hominis.

2. 2. 4. Обогащение культур B.hominis.■.

2. 2. 5. Способ консервирования культур.

2'. 2. 6. Микроскопия препаратов.

2. 2. 7. Определение патогенности бластоцист.

2. 2. 8. Метод воспроизведения кишечного бластоцистоза.

2. 2. 9. Получение культур P. mirabilis.

2. 2. 10. Определение факторов вирулентности P. mirabilis.

2. 2. 11 Методика приготовления препаратов.и проведения сканирующей электронной микроскопии.

2. 3. Методы статистического анализа.

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭУБИОЗА КИШЕЧНИКА ПРИ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ БЛАСТОЦИСТОЗЕ.

3.1. Микробоценоз кишечника мышей до начала эксперимента.

3.2. Проявления кишечного бластоцистоза у экспериментальных животных

3.3. Изменение кишечной микробиоты при экспериментальном бластоцистозе.

3.3.1. Изменение кишечного микробоценоза у мышей первой группы.

3.3.2. Микробиота кишечника у животных второй группы.

3.4. Экологическая характеристика микробоценоза кишечника при бластоцистной инвазии.

3.4.1. Изменение индекса контагиозности микроорганизмов в зависимости от периода заболевания.

3.4.2. Изменения индекса флористической значимости в зависимости от стадии бластоцистоза.

3.4.3. Динамика показателя постоянства микроорганизмов.

3.4.4. Динамика показателя видового разнообразия у экспериментальных животных.

3.4.5 Корреляция количественных показателей облигатной и транзиторной микробиоты.

ГЛАВА 4. ИЗМЕНЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

PROTEUS MIRABILIS ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С ПРОСТЕЙШИМИ

BLASTOCYSTIS HOMINIS.

4.1 Морфологические, тинкториальные и культуральные свойства штаммов протея.

4.2. Изменения ферментативной активности представителей P. mirabilis.

4.3. Гемолитическая активность протеев при сокультивировании с простейшими В. hominis.

4.4. Изменение адгезивных особенностей протеев.

4.5. Выявление вирулентности протеев на модели внутрибрюшинного заражения мышей.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ:.:.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ.

УСЛОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

ЖСА - желточно-солевой агар ЖКТ - желудочно-кишечный тракт КА - кровяной агар КОЕ - колониеобразующая единица МПА - мясо-пептонный агар МПБ - мясо-пептонный бульон

ЬЭ5о- количественное выражение вирулентности микробов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние паразитических простейших на изменение биоэкологических свойств участников микробоценоза кишечника"

Актуальность проблемы. При физиологической норме организм человека содержит огромное количество различных микроорганизмов, которые поступают в него из окружающей среды, и одновременно, является источником поступления микроорганизмов в окружающую среду.

Вся совокупность множества симбиозов, хараотеризующих определенный биотоп организма человека, называемая микробиотой, является чрезвычайно чувствительным индикатором состояния организма человека.

При воздействии дестабилизирующих факторов микробиота реагирует количественными и качественными сдвигами в популяциях микроорганизмов. Например, микробиота может меняться при недостаточной ферментативной активности, голоданиях, развитии патологических процессов на фоне поражения кишечника различными паразитическими микроорганизмами.

В результате снижения количества представителей индигенных микроорганизмов, обеспечивающих колонизационную резистентность кишечника, освобождаются сайты прикрепления, занимаемые представителями транзиторной микробиоты.

В качестве одного из распространенных факторов способствующих развитию изменений в микробоценозе кишечника можно рассматривать поражение его паразитическими простейшими Blastocystis hominis.

Данный паразитоз длительное время не привлекал внимания специалистов, однако 'в последние годы было убедительно показано участие данных паразитических простейших в развитии различных патологий человека (авторы).

Находясь в кишечнике, бластоцисты участвуют в формировании микробоценоза данного биотопа. Нарушая баланс микроорганизмов, данные возбудители способствуют созданию благоприятных условий для развития патологических процессов.

Кроме того, они могут способствовать изменению биологических свойств и вирулентной активности микрорганизмов при образовании ими протозойно - бактериальных ассоциаций.

Одними из . чрезвычайно распространенных представителей условнопатогенной микробиоты кишечника являются бактерии рода Proteus, роль которых в формировании микробоценоза кишечника остается недостаточно изученной. Имеются данные о способности микроорганизмов данного рода изменять свои биологические свойства при взаимодействии с другими представителями микробиоты, формирующей микробный пейзаж кишечника. Однако данные о том, как изменяются их свойства, в том числе вирулентность, при образовании ассоциаций с простейшими В. hominis, отсутствуют.

Мало изученными остаются вопрос о влиянии паразитических простейших на формирование микробоценоза кишечника.

Цель исследования:

Изучить изменение эубиоза кишечника под действием паразитических простейших В. hominis.

Задачи:

1. Рассмотреть компоненты нормоценоза кишечника.

2. Выявить частоту встречаемости паразитических простейших в норме и при патологических состояниях желудочно-кишечного тракта.

3. Изучить влияние паразитических простейших на изменение межмикробных отношений в составе микроценоза

4. Выявить изменения биологических свойств участников микроценоза кишечника на примере Proteus mirabilis.

Научная новизна работы. Впервые изучено влияние паразитического простейшего В. hominis на изменение биологических свойств отдельных представителей микробоценоза кишечника на примере бактерий P. mirabilis.

Выявлено значительное усиление вирулентных свойств бактерий после взаимодействия с паразитическими простейшими in vivo и in vitro. Обнаружено усиление летального действия данных бактерий в тесте внутрибрюшинного заражения мышей.

Также рассмотрено влияние бластоцист на изменение экологических характеристик микробоценоза кишечника макроорганизма. ' Показано изменение не только количественных показателей микробного сообщества кишечника, но и пространственной структуры бактериальных популяций. i

Изучены изменения во взаимодействии представителей различных родов бактерий, формирующих микробоценоз кишечника при развитии протозойной инвазии.

Теоретическая и практическая* значимость. Полученные в работе данные расширяют представления о характере протозойно - бактериальных взаимодействий, углубляют знания об особенностях патологического действия Blastocystis hominis и изменениях в патогенном потенциале бактерий, формирующих микробные сообщества макроорганизма.

Высокая встречаемость бластоцист среди населения позволяет рассматривать их как возможный фактор, способствующий развитию эндогенных инфекций.

Выраженные изменения вирулентных свойств бактерий Proteus mirabilis при их взаимодействии с паразитическими простейшими Blastocystis hominis диктуют необходимость учета фактора протозойной инвазии, при рассмотрении роли данных микроорганизмов в рамках микробоценоза кишечника, это предполагает необходимость внедрения паразитологических исследований в работу практических лабораторий.

По материалам диссертации опубликованы практические рекомендации «Особенности диагностики инфекций, вызванных представителями рода Protensv> (2009) и «Дисбиоз кишечника и методы его диагностики» (2009).

Результаты исследования используются в работе клинико-бактериологической лаборатории ОККВД (г. Ульяновск), городской клинической детской больницы №1 (г. Ульяновск).

Данные, полученные в процессе работы, используются в учебном процессе по курсу микробиологии и проведении элективных занятий.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Проявления кишечного бластоцистоза и нарушения s микробоценоза кишечника зависят от степени выраженности патогенности бластоцист.

2. Структурная перестройка микробоценоза кишечника при бластоцистной инвазии сопровождается нарушением количественных и качественных показателей микробного сообщества кишечника.

3. Развитие бластоцистной инвазии сопровождается изменениями культуральных, биохимических и вирулентных свойств бактерий P. mirabilis.

Апробация работы

Результаты исследований доложены на на 15-й ежегодной научно-практической конференции «Труды молодых ученых Ульяновского государственного университета» (Ульяновск, 2005); 1-й конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ, одна из них в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 2 глав собственных исследований, обсуждения, выводов и списка используемой литературы. Диссертация изложена на 117 страницах. Список литературы содержит 284 наименований, в том числе 132 зарубежных. Работа иллюстрирована 12 таблицами, 21 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Курзин, Александр Валерьевич

Выводы:

Нормоценоз кишечника представлен 6 видами микрорганизмов, из которых 3 относятся к группе облигатной кишечной микробиоты, 2 — к добавочным видам и 1 — к транзиторным, условно патогенным микроорганизмам. В доминирующую группу входили представители родов Bifidobacterium, Escherichia и Bacteroides.

Паразитические простейшие В. hominis вызывают острую протозойную инвазию, сопровождающуюся значительными изменениями количественных и качественных показателей микробиоты, что проявлялось снижением флористической значимости основных симбионтов, и увеличением частоты встречаемости транзиторной биоты.

В результате взаимодействия паразитических простейших В. hominis с бактериями P. mirabilis у последних изменяются культуральные, биохимические свойства и уровень вирулентности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Курзин, Александр Валерьевич, Ульяновск

1. Ардатская М.Д., Дубинин А.В., Минушкин О.Н. Дисбактериоз кишечника: Современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения // Терапевт, арх. 2001. - №2. — С.67-72.

2. Аряев М.Л., Циунчик Ю.Г. О клинической роли пробиотиков в связи с уточнением концепции дисбактериоза у детей. — Современная педиатрия. 2006. - №. - С. 4-10

3. Баженов Л.Г., Перепелова И.Н. Helicobacter pylori.и грибы рода Candida при гастродуоденальной патологии // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,-1997.-ЖЗ.-С. 100-101

4. Барановский А.Ю., Кондрашин Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. Санкт-Петербург, «Питер», 2000.- 209 с.

5. Белова Л.М. Мировая фауна и морфофункциональная организация бластоцист / Л.М. Белова // Труды Зоологического института РАН. -1992.-Т. 224.-53 с.

6. Белова Л.М. Фауна Blastocystis / Л.М. Белова.// Паразитология. 1995.- Т. 29. -Вып. 3,- С. 208-213.

7. Белова Л.М! Выживаемость бластоцист вне организма хозяина / Л.М. Белова//Паразитология. 1998.-Т. 32. - Вып. 2. - С. 180-183.

8. Белова Л.М. Ультраструктура Blastocystis Galli из кур/ Л.М. Белова // Паразитология. 1998. - Т. 32. - Вып. 6. - С. 553-559.

9. Белова Л.М. Распространение бластоцист по различным систематическим группам хозяев / Л.М. Белова, М.В. Крылов // Паразитология. 1998. - Т. 32. - Вып. 3. - С. 268-275.

10. Беляков В.Д. Саморегуляция паразитарных систем: молекулярно-генетические механизмы / В Д. Беляков, Д.Б. Голубев, Г.Д. Каминский, В.В. Тец. Л.: Медицина. - 1987. - 238 с.

11. Билимова С.И. Характеристика факторов персистенции энтерококков / С.И. Билимова // ЖМЭИ. 2000. - № 4. - С. 104-105.

12. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / М.О. Биргер. М.: Медицина. - 1982. - 464 с.

13. Н.Бирюков В.В., Карпова Т.И., Карпова Е.Ю. Выявление грибов рода Candida в составе микрофлоры толстой кишки гастроэнтерологических больных // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России,- М. 2002,- С.350.

14. Бойков С.С., Мороз А.Ф., Бабаева Е.Е. Ассоциации грибов Candida albicans с некоторыми условно-патогенными микроорганизмами при дисбиозе кишечника у пациентов разных возрастных групп // Журн. микробиол.-2005.-№2.-С.65-69'.

15. Бондаренко В.М. Дисбактериоз М.,1997. -22 с.

16. Бондаренко В.М. «Острова» патогенности бактерий! // Журн. микробиол.-2001 .-№ 4.-С.67-74.

17. Бондаренко В.М., Грачева Н.М.' Препараты пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов // Фарматека. -2003. -№>7. -С.56-63

18. Бугеро Н.В. Влияние условий литейного производства на микробиоценоз кишечника человека: Автореф дис. канд. биол. наук/ Н.В. Бугеро. Ульяновск: УлГУ, 2004. - 23 с.

19. Буторова Л.И. Возможности коррекции нарушения кишечного микробиоценоза лактулозой / Л.И. Буторова, A.B. Калинин // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 2001. - № 1. - С. 79-83.

20. Бухарин О.Б. Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект) Екатеринбург: УрО РАН, 1996.- 206 с.

21. Бухарин О.В. Персистенция бактерий/ О.В. Бухарин.- М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН,-1999,- 365 с.

22. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Хуснутдинова JT.M. Межбактериальные взаимодействия//Журнал микробиол. 2003 - №4 - С.3-8.

23. Валышев A.B., Гильмутдинова Ф.Г., Фомичева C.B. Факторы персистенции энтеробактерий фекальной флоры при дисбиозахкишечника//Журн. микробиол. 1996. - №6. — С. 10-13.i

24. Василенко В.В. Дисбактериоз синдром раздраженного кишечника: эссе — анализ проблемы // Рос. журн. гастроэнтерол., гепетол., колопроктол. - 2000. - № 6. С. 10-13.

25. Вельский В.В., Шаталова Е.В., Прадиуман Кумар Сингх. Структура популяций синегной палочки при ассоциации со стафилококками и эшерихиями // Журп. микробиологии, эпидемиологии и иммуиобиологми.- 1994.-№6.-С 37-38

26. Вельский В.В., Шаталова Е.В. Взаимное влияние возбудителей при смешанной инфекции ожоговой травмы // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 1999.- №4,- С.3-7.

27. Воробьев A.A., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры биологические свойства и защитные функции // Журн. Микробиологии.- 1999. №6.-С. 1,02-105

28. Воробьев A.A., Пак С Г., Савицкая К.И., Горбунова Ю.П. Дисбактериозы у детей: Учебное пособие для врачей и студентов. М., 1999,- 64 с.

29. Воробьев А А. Исследование пристеночной микрофлоры кишечника человека / А А. Воробьев, Ю.В. Несвижский, Е М. Липицкий // Микробиология. 2003. - № 1. - С.60-63.

30. Гаврилова А.Ю. Лактофлора и колонизационная резистентность / А.Ю. Гаврилова // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1991.- Т. 32.- №3.-С. 173-179.

31. Генис Д Е. Медицинская паразитология / Д.Е. Генис. М.: Медицина, 1991.-238 с.

32. Григорьев П.Я., Яковенко Э.П. Нарушение нормального состава кишечной микрофлоры, клиническое значение и вопросы терапии. -Москва, 2000,- 16 с.

33. Дерябин Д.Г. Вирулентность и персистенция стафилококков: фенотипические проявления и механизмы генетического контроля / Д.Г. Дерябин, И.А. Шагинян // Микробиология. 2000. - № 4. - С. 2643.

34. Джиллер П.А. Структура сообществ и экологическая ниша / П.А. Джиллер — М.: Мир, 1989.-211 с.

35. Домбровский A.M. Особенности представленных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae ассоциаций, выделенных из испражнений здоровых и больных сальмонеллезом детей //Журн. микробиол. 1986.- №12. — С.38-43.

36. Доморадский И.В. Чума. -М., Медицина,- 1998.

37. Дорофеев А.Э. Микробиоценоз толстой кишки у больных • неспецифическим язвенным колитом / А.Э. Дорофеев, Ю.В.

38. Несвижский // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - № 2.- С. 26-29.

39. Егоров Н.С., Ландау Н.С. Биосинтез биологически активных соединений смешанными культурами микроорганизмов //Прикладн.Iбиохимия и микробиол. 1982. - №18. - С. 835-849.

40. Ермолаева С.А., Романова Ю.М., Тартаковский И.С. // Вестн. РАМН. -2005. -№1,-С. 44.

41. Ефимов Б.А. Характеристика микроорганизмов, колонизирующих кишечник // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии-2002,- №5,- С.98-104.

42. Зайцев В.М. Прикладная медицинская статистика. М.: Медицина, 2003.-250 с.

43. Ивашкин В.Т. Синдром диареи / В.Т. Ивашкин, A.A. Шептулин. -М.: ГЭОТАР Медицина, 2000. 135 с.

44. Кадынцева Л.П., Щукина Р.К. Характеристика сальмонеллеза у детей по материалам Орехово-Зуевского района Московской области // Вопросы острой инфекционной патологии органов пищеварения у детей. М.:3нание. - 1998. - С.42-44.

45. Казарин B.C., Юсуф-Заде A.A. Особенности сочетанного течения сальмонеллеза и острых респираторных вирусных инфекций у детей // Вопросы охраны материнства и детства. 1998. - №9. - С.27-31.

46. Канарейкина С.К. Количественный и видовой состав условно-патогенных энтеробактерий у клинически здоровых и больных людей / С.К. Канарейкина, Е.К. Левина, В.А. Полферов // Вопросы клинической лабораторной диагностики. 1981. -Т. 12. - № 2. - С. 56-58.

47. Карпунина Т.И. Новые подходы к оценке состояния системыtмикроорганизмы макрорганизм»: Автореф. дис. канд. биол. наук / Т.И. Карпунина. - Пермь, 2001. - 29 с.

48. Квасова НА. Биологические свойства.простейших Blastocystis hominis и их влияние на микроэкологию кишечника: Автореф. дис. . канд. биол. наук / H.A. Квасова. Волгоград, 2002. - 22 с.

49. Коренберг Э.И. // Успехи совреме. биологии. 2005. - № 2. - С. 131.

50. Кормилицина М.И., Барановский П.М.,- Ананова Е.В. Патогенные бактерии в сообществах. M , 1994. С.65.

51. Костюкова H.H., Бехало В.А. Современные представления о механизмах патогенного действия менингококка // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. - №3. - С. 40-3.

52. Красильников А.П. Основы клинической микробиологии /А.П. Красильников // Медицина и микробиология, вирусология и иммунология. — M : Медицина, 1994. С. 483-496.

53. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника / В.Н. Красноголовец. — М„ 1989.-208 с.

54. Крылов A.A., Козлович И.В., Решетнева Е.М. Дисбактериоз кишечника (пособие для врачей). С.-Пб.: Изд-во С.-Пб. мед. академии. - 1994. -24 с.

55. Кубась В.Г. Кандидоз. Спб: С.Петербург, мед. акад. последиплом. Образования. - 1997.- 51 с.

56. Кузнецов В.Г., Тимченко Н.Ф. Взаимодействие возбудителей некоторых сапронозов в смешанных культурах на плотной среде при разных температурах // Журн. микробиол. 2002. - №1. - С. 11-16.

57. Лакин Г.Ф. Биометрия.-М.: Высш.шк,- 1990,- 352 с.

58. Лебензон С.С. Сочетание течения стафилококково-сальмонеллезной инфекции у детей первого года жизни // Материалы 2-го съезда детских врачей Таджикистана. Душанбе. - 1981. - С.86-87.

59. Лебензон С.С., Лаврова К.В., Амиров Т.Д., Лосин Л.И., Холстейн A.A. Клебсиеллезная и клебсиеллезно-сальмонеллезная инфекция у детей первых месяцев жизни // Педиатрия. 1986. - №5. - С. 18-21.

60. Ленцнер А. А. Лактофлора и колонизационная резистентность. //Антибиотики и мед Биотехнология. 1987. - Т.32, №3. - С. 173 - 179.

61. Лисишникова Л.П. Особенности микробиоценоза основных биотопов организма человека в условиях Европейского Севера России: Автореф. дис. канд. биол. наук / Л.П. Лисишиикова. Архангельск, 1997. - 25 с:

62. Литвин В Ю. Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И. Обратимый переход патогенных бактерий в покоящееся (некультивируемое) состояние: экологические и генетические механизмы // Вестн. РАМН. 2000. -№1. - С. 7-13.

63. Литвин В.Ю., Пушкарева В.И. О вероятном механизме поддержания вирулентности бактерий в почвенных и водных сообществах. М., 1994.- С. 24-35.

64. Лобзин Ю.В. Дисбактериоз кишечника (клиника, диагностика, лечение). Рук-во для врачей / Ю.В. Лобзин, В.Г. Макарова. СПб.: Фолиант, 2003.-253 с.

65. Лопатина Т.К. Иммуномоделирующее действие препаратов-эубиотиков / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н. Николаенко // Вестн. РАМН. 1997.- №3,-С. 30-34

66. Лопатина Д.Г., Бляхер A.A., Николаенко Л.О. Проблемы химиопрофилактики, химиотерапии эндогенных инфекций и дисбактериоз // Вестн. РАМН. 1997. - №4. - С.26-30.

67. Маркин A.B. Корнишева И.А.,.Горлшов В.Г. Вторичная пиококковая инфекция и пролиферация грибом рода Candida в кишечнике при атопическом дерматите у детей, // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.-М. 2002. - С.328.

68. Миллер Г.Г. Биологическое значение ассоциаций микроорганизмов // Клиническая микробиол. 2000. - №2. - С. 45.

69. Наумкина Е.В., Наумкина.Н.В. Рудакова Л.В. Белкина В.М. Иванова Т.С. Микроэкология' женских половых путей при урогенитальном кандидозе // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России,- М. 2002,- С.329.

70. Несвижский Ю.В., Воробьев А.А , Белоносов С.С. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека // Вестник РАМН -1997.-№3.-С.23-26

71. Пархоменко Л.К., Репетева Е.В. Микроэкология кишеч ника и ее коррекция в детском возрасте // Сучасна гастро ентерол. -2006. -№ 3. -С. 72—75.

72. Плотников А.О., Немцева Н.В. Бухарин О.В. Персистентные свойства бактерий ассоциантов простейших // Журн. микробиол. - 2002. - №4. -С. 60.

73. Потатуркина-Нестерова Н.И., Гладинец A.M. Микромицеты'Aspergillus flavus и их воздействие на макроорганизм. Ульяновск. - УлГУ - 2003.- 204 с.

74. Пушкарева В.И. Листерии и эризопилотриксы в ассоциации со свободноживущими простейшими // Журн. микробиол. — 1996. №5. — С.93-94.

75. Пушкарева В.И. Экспериментальная оценка взаимодействия Yersinia pestis EV с почвенными инфузориями и возможности длительного сохранения бактерий в цистах простейших //Журн. микробиол. 2003.- №4. С.40-44.

76. Пушкарева В.И., Величко В.В., Каминская А.А. // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. 2005. - №3. - С.39.

77. Пушкарева В.И., Емельяненко Е.Н., Диденко Л.В. Покоящиеся формьь Yersinia pseudotuberculosis при взаимодействии с сине-зелеными водорослями и их экзометаболитами (популяционная динамика и ультраструктура) // Журн. микробиол. 1998. - №5. - С.9-13.

78. Пушкарева В.И., Константинова Н.Д., Литвин В.Ю. Анализ механизмов межпопуляционного взаимодействия иерсиний с инфузориями Tetrahymena piriformis на клеточном и субклеточном уровнях//Журн. микробиол. 1990. - №1. - С.3-9.

79. Пушкарева В.И., Литвин В.Ю., Тартаковский И.С. // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. 1989. - №1. - С. 17.

80. Реброва Р.Н. Грибы рода Candida при бактериальных инфекциях.-М.: Медицина,- 1979,- 256 с.

81. Резцова Ю.В. Изучение этиологии пневмоний, острых бронхитов и ОР //Материалы 7 Национального конгресса по болезням органов дыхания. -Москва,- 1997.-С. 600.

82. Рыбальченко О.В., Бондаренко В.M., Вербицкая Н.Б. Проявление антогонистического действия бактериоциногенных Lactobacillus acidophilus на клетки Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii и Proteus mirabilis II Журн. микробиол. 2006. - №7. - С. 8-11.

83. Смолянская А.З., Дмитриева П.В., Нуммаев Б.Г., Коротков A.M. Оппортунистическая инфекция у онкологических больных // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России,- М. 2002.- С.375-376.

84. Солохина Л.В., Пушкарева В.И., Литвин В.Ю. Образование покоящихся форм и изменчивость Yersinia pseudotuberculosis под воздействием сине-зеленых водорослей (цианобактерий) и их экзометаболитов// Журш микробиол. 2001. - №3. - С. 17-22.

85. Сорокин А.А., Федорова Е.Р. Диагностика и лечение, дисбактериоза кишечника. Казань.: Казан, гос. ун-т усовершентсв. врачей им.1. B.И.Ленина, 1990.-37 с.

86. Степанских А.С. Общая экология. М., ЮНИТИ-ДАНА. 2000. '

87. Сытник С.И. Экологический подход к оценке кожной микрофлоры /

88. C.И. Сытник // Антибиотики и химиотерапия. — 1989. — Т. 34. № 6. — С. 466-472.

89. Сытник С.И. Заселение тонкой и толстой кишок детей раннего возрасти стафиллококами в условиях стационара / С.И. Сытник // Кишечные инфекции. Киев, 1989.-Вып. 2.-С. 97-101.

90. Сытник С И. Стафилококки в микробиоценозе кожи рук / С.И. Сытник // ЖМЭИ. 1992. - № 4. - С. 4-8.

91. Тимченко Н.Ф. • Подходы к изучению биохимической экологии патогенных бактерий //Пробл. инфекц. патол. В регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера. Новосибирск. - 1998. - С.74-75.j

92. Хидоятива Л.Н., Нусратуллаев С.Н., Лазарева Н.И., Арщинова Г.С., Филяндская О.Г. Особенности течения сальмонеллезной инфекции в сочетании со стафилококковым заболеванием^ у детей // Мед. журн. Узбекистана. 1980. - №7. - С. 18-21.

93. Циммерман Я.С. О сущности понятия «дисбактериоз» («Дисбиоз кишечника») и о правомерности использования этого термина // Рос. журн. гастроэнтерол., гепетол., колопроктол. 2000. - №2 1. С. 81-84.

94. Циммерман Я.С. Язвенная болезнь и проблема H.pylori: новые факты, размышления, предположения // Клинич. мед-на. 2001. - № 4. - С. 67-70.

95. Черкасов СВ., Забирова Т.М., Сгибнев А.В. Изменение биологических свойств Staphylococcus epidermidis и Escheridiia coli под влиянием метаболитов лактобацилл в эксперименте // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 2001.-№4,- С. 114116

96. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.- М.: Издательство ГРАНТЪ,- 1998.- Т. 1,-288с.

97. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание,- М.: Издательство ГРАНТЪ.-1999.- Т.2.- 416 с.

98. Abe N, Wu Z, Yoshikawa H. Molecular characterization of Blastocystis isolates from primates // Veterinary Parasitology. 2003. — V. — 113. - P.321-325.

99. Abe N., Nagoshi M. A survey of Blastocystis sp. In livestock, pets, and zoo animals in Japan // Vet Parasitai. 2002. - V. 106(3). - P. 203-212.

100. Albrecht H., Stellbrink H.J., Koperski K., Greten H. Blastocystis hominis in human immunodeficiency virus related diarrhea // Scand. J. Gastroenterol. - 1995. - V.30. -№ 9. -P.909-914.

101. Al-tawil YS, Gilger MA, Gopalakrishna GS, Langston C, Bommer КБ. Invasive Blastocystis hominis infection in a child // Archives of Pediatrics and Adolesccents Medicales. 1994. - V. 148. - P. 882-885.

102. Arisue N, Hashimoto T, Yoshikawa H. Sequence heterogeneity of the small subunit ribosomal RNA genes among Blastocystis isolates // Parasitology. 2003. - V. 126. - P. 1-9.

103. Bird RG, Ellis DS. A comparison of the outer layers of Blastocystis Hominis with the cyst walls of certain common intestinal protozoa // Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. -1971.-V. 65.-P. 429.

104. Biteau N, Bringaud F, Gibson W, True P, Baltz T. Characterization of Trypanozoon isolates using a repeated coding sequence and microsatellite markers // Molecular and Biochemical Parasitology. 2000. - V. 105. - P. 185-201.

105. Bojanowicz K. Pathogenese der Ulkuskrankheit mit besonderer Berücksichtigung eigener Untersuchungen uder die Rolle der Nebennierenrindendishormonose // Zschr. inn. Med., 1982, №13, S. 605609. * •

106. Boreham P., Stenzel D. Blastocystis in human and animals: morphology, biology and epizootiology // Adv. Parasitol. 1993. - V.32. -P. 61-70.

107. Boreham P.F., Dunn L.A., Upcroft S.A. Protein and DNA evidence for two demes of B. hominis from humans // Int. J. Parasitol. 1992. - V.22. — № 1. — P.49-53.

108. Boreham PFL, Stenzel DJ. The current status of Blastocystis hominis // Parasitology Today. 1993. - V. 9. - P. 251.

109. Boreham RE, Benson S, Stenzel DJ, Boreham PFL. Blastocystis hominis infection // .The Lancet. 1996. - V. 348. - P. 272-273.

110. Cammarota H., Ogava M. Helicobacter pylori, gastric ulcer, and agents noxious to the gastric mucosa // Kansenshogsku Zasshi 1998. - V. 67,-№9.-P. 781-784.

111. Carbajal J.A., del-Castillo L., Lanusa M.D., Villar J., Borras R. Karyotypic diversity among B.hominis isolates // Int. J. Parasitol. 1997. -V.27. - № 8. - P.941-945.

112. Carbajal J.A*., Villar J., Lanuza M. D. Significación clinica de la infección por B.hominis: estudio epidemio epidemiológico // Med. Clin. Bare. 1997. - V. 108. - P.608-612.

113. Carbajal JA. Estudio morfofuncional de Blastocystis hominis Brumpt, 1912" evidencias cromosómicas y enzimáticas de la existencia de diferentes poblaciones. 1996 -P. 119.

114. Carlson E. Effect of strain of Staphylococcus aureus on synergism with Candida albicans resulting in mouse mortality and morbidity // Infect. Immun.- 1983,- V. 42(1).-P. 285-292.

115. Carrascosa M, Martínez J, Pérez-Castnllón JL. Hemorrhagic Proctosigmoiditis and Blastocystis hominis Infection // Annals of Internal Medicine. 1996. - V. 124. - P. 278-279.

116. Casemore DP, Armstrong M, Jackson FB. Clinical relevance of Blastocystis hominis // The Lancet. 1984. - V. 1. - P. 1234.

117. Cassidy M., Stenzel D., Boreham P. Electron microspory of surface structures of Bl. sp. from different hosts // Parasitology. 1994. - V.80. -P.505-511.

118. Chen J, Vaudry WL, Kowalewska K, Wenman WM. Lack of serum immune response to Blastocystis hominis // The Lancet. 1987. - P. 1021.

119. Clark C.G. Extensive genetic diversity in Blastocystis hominis II Mol. Biochem. Parasitol. 1997. - V.87. - P.79-83.

120. Clark CG, Diamond LS. Methods for cultivation of luminal parasitic protists of clinical importance // Clinical Microbiology Reviews. -2002. -V. 15.-P. 329-341.

121. Clark CG. Cryptic genetic variation in parasitic protozoa // Journal Medical Microbiology. 2000. - V. 49; - P. 489-491.

122. Devera R, Requena I, Velasquez V, Castillo H, González R. Cerdos como reservorios de Blastocystis spp. en una comunidad rural del Estado Bolívar, Venezuela // Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. -1999.-V. 17.-P. 422.

123. Devera R., Azacon B., Jimenez M., Puños G.N., Velasquez V.J., Catenese J.A., Meneses R.G. Blastocystis hominis in patients at the Ruiz y Paez University Hospital from Bolivar City, Venezuela // Bol. Chil'. Parasitol. 1998. - V.53. -P.65-70.

124. Dunn L.A., Boreham P.E., Stenzel D.S. Ultrastrutural variation of B. hominis stocks in culture // Int. J. Parasitol. 1989. - V. 19. - P.43-56.

125. Dunn LA, Boreham PFL. The in-vitro activity of drugs against Blastocystis hominis // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 1991. -V. 27.-P. 507-516.

126. Gallagher PG, Venglarcik JS. Blastocystis hominis enteritis // Pediatric Infectious Disease. 1985. - V. 4. - P. 556-557.

127. Garavelli P. Blastocystis: a new disease in the acquired immundeficiency syndrom // Int. S. S.TD. AIDS. 1990. - P. 134-135.

128. Garavelli P.L. The therapy of blastocystosis // J. Chemother. 1991. V. 3. - Suppl. l.-P. 245-246.

129. Garavelli PL, Libanore M, Scaglione L. La Blastocistosi (Prospezioni tassonomiche e patologiche) // Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. -1989,-V. 41.-P. 467-468.

130. Garavelli PL, Orsi P, Scaglione L. Blastocystis hominis infection during AIDS // The Lancet. 1990. - V. 2. - P. 1364.

131. Garavelli PL, Scaglione L, Bicocchi R, Libanore M. Pathogenicity of Blastocystis hominis // Infection. 1991. - V. 19. - P. 185.

132. Garavelli PL, Scaglione L, Merighi A, Libanore M. Endoscopy of blastocystosis (Zierdt-Garavelli Disease) // Italian Journal of Gastroenterology. 1992. - V. 24. - P. 206.

133. Garavelli PL, Zierdt CH, Fleisher TA, Liss H, Nagy B. Serum antibody detected by fluorescent antibody test in patients whith symtomatic Blastocystis hominis infection // Recenti Progressi in Medicina. 1995: - V. 86.-P. 398-400.

134. Garavelli PL. Blastocystosis or Zierdt-Garavelli disease // La Presse Médicale. 1996. - V. 16. - P. 777.

135. Garavelly P., Scaglione L. Blastocystis hominis and blastocystosis // Ital. J.Gastroenterol. 1993. - V.25. - P.33-36.

136. Garcia LS, Bruckner DA, Clancy MN. Clinical relevance of Blastocystis hominis // Lancet. 1984. -V. 2. - P. 1233-1234.

137. Gasser RB. PCR-based technology in veterinary parasitology // Veterinary Parasitology. 1999. - V. 84. - P. 229-258.

138. Gericke AS, Burchard GD, Knoblock J, Walderich B. Isoenzyme patterns of Blastocystis hominis patient isolates derived from symptomatic and healthy carriers // Tropical Medicine and International Health. 1997. -V. 2. - P. 245-253.

139. Giacometti A, Cirioni O, Fiorentini A, Fortuna M, Scalise G. Irritable bowel syndrome in patients with Blastocystis hominis infection // European Journal Clinical of Microbiology and Infectious Diseases. 1999. - V. 18. -P. 436-439.

140. Gibson T.M., Klary E.H., Norton B.B., Temros J.H., Cassidy G.R., Praston V.D. The microbiota of the gastrointestinal tract // Gastroenterology. 1994.-V.51. -№5.-P.808-815.

141. Harms G, Dörner F, Bienzle U, Stark K. Infections and diseases after travelling to tropical and subtropical areas // Deutsche medizinische Wochenschrift. 2002.-V. 127. -P. 1748-1753.

142. Harris H, Hopkinson DA. Handbook of enzyme electrophoresis in N human genetics. North Holland Publishing Co. Amsterdam. 1976: - P.239.

143. Hayakowa V., Howe J., Hg M. Variation in the cysts morphology of

144. B. hominis II Parasitoses. 1996. - V.83. - P.306-308.

145. Hellard.M.E., Sinclair M.I., Hogg G.G., Fairley C.K. Prevalence of enteric pathogens among community based asymptomatic individuals // J'. Gastroenterol. Hepatol: 2000. - V. 15. - P.290-304.

146. Herwaldt BL, De Arroyave KR, Wahlquist SP, De Merida AM, Lopez AS, Juranek DD. Multiyear prospective study of intestinal parasitism in a cohort of peace corps volunteers in Guatemala // Journal of Clinical Microbiology. 2001. - V. 39. - P. 34-42.

147. Ho L.C., Singh M., Suresh K., Ng G.C., Yap E.H., Hogg G.G., Fairley

148. C.K. Prevalence of enteric pathogens among community based asymptomatic individuals // J. Gastroenterol. Hepatol.-1995 V. 15.-P.290-304.

149. Ho LC, Armugam A, Jeyaseelan K, Yap EH, Singh M. Blastocystis elongation factor-la: genomic organization, taxonomy and phylogenetic relationships//Parasitology. -2000. V. 121.-P. 135-144.

150. Ho LC, Singh M, Suresh G, Ng GC, Yap EH. Axenic culture of Blastocystis hominis in Iscoves modified Dulbeccos medium // Parasitology Research. 1993,-V. 79.-P. 614-616.

151. Ho LC, Singh M, Suresh K, Ng GC, Yap EH. A study of the karyotypic patterns of Blastocystis hominis by pulsed-field gradient electrophoresis // Parasitology Research. 1994. - V. 80. - P. 620-622.

152. Iqbal J., Hira P.R., Al-Ali F., Philip R. Cryptosporidiosis in Kuwaiti children: seasonality and endemicity // Clin. Microbiol. Infect. — 2001. -V. 7(5).-P. 261-266.

153. Islam M.S., Rahum Z., Alam M.J. Association of Vibrio Holerae 01 with the cianobacterium, Anabaena sp.,elucidated by polymerase chain reaction and transmission electron microscopy // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg.- 1999,-V.93.-P. 36-40.

154. Jack M. Evidence for the involvement of thiocyonate in the inhibition of Candida albicans by Lactobacillus acidophilus // Microbios,-1990.-62(250).- P, 37-46.

155. Jacobson RL, Doyle RJ. Lectin-parasite interactions // Parasitology Today. 1996. - V. 12. - P. 55-60.

156. Jeddy T.A., Farrington G.H. Blastocystis hominis complicating ulcerative colitis//J. Soc. Med. 1991. - V.84.-P.623.

157. Jelinelc T., Peyerl G., Loscher T., von Sonnenburg F., Nothdurft H.D. The role of Blastocystis hominis as a possible intestinal pathogen in travelers //J. Infect. 1997,-V.35.-P.63-66.

158. Jiang JB, He JG. Taxonomic status of Blastocystis hominis // Parasitology Today. 1993. - V. 9. - P. 2-3.

159. Johnson A.M., Thanou A.A., Boreham P.F., Baverstock P.R. Blastocystis hominis: phylogenetic affinities determined by rRNA sequence comparison // Exp. Parasitol. -1989. V.68. - P.283-289.

160. Justin P., Sallivan K.G. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2000. -V19.-P. 121.

161. Keenan TW, Huang CM, Zierdt CH. Comparative analysis of lipid composition in axenic strains of Blastocystis hominis // Comparative Biochemistry and Phisiology. 1992,- V. 102.-P. 611-615.

162. Keenan TW, Zierdt CH. Lipid biosynthesis by axenic strains of Blastocystis hominis // Comparative Biochemistry and Physiology. 1994. -V. 107.-P. 525-531.

163. Keystone JS. Editorial: Blastocystis hominis and Travelers Diarrhea // Clinical Infectious Diseases. 1995. -V. 21. - P. 102-103.

164. Kivilaakso E. High plasma HC03-protects gastric mucosa in? acute ulceration in the rat. // Gastroenterol.-198l.-V.8l.-№5.-P.921-927.

165. Kleessen F.M., Görden T.V., Cantonelly G.I., Faycii D.S., Spriden H.K., Tortiny DJ., Cowart A.O.* Human normal and abnormal gastrointestinal flora//Am J ClinNutr.-1995.-V.23.-№ll.-P. 1433-1439.

166. Kobayashi J., Hasegawa H., Forli A.A., Nishimura N.F., Yamanaka A., Shimabukuro T., Sato Y. Prevalence of intestinal parasitic infection in five farms in Holambra, San-Paulo, Brazil // Rev. Inst. Med. Trop. 1995 -V.37. - P. 13—18.

167. Konig G. B.hominis in animals:' incidence of four serogroups // Zentral. Bacterid. 1997. - V.286. - № 3. - P.435^140.

168. Landry P., van Saanen M. Routine cases in intestinal parasitology //

169. Schweiz Med. Wochenschr. 1997. - V.29. - P.535-540.

170. Lanusa M.D. Description of an improved metod for B.hominis culture and axenization // Parasitol. Res. 1997. - V.83. - №1. - P.60-63.

171. Lanusa M.D., Carbajal J.A., Borras R., Boccardo G., De Prisco O., Ettari G. Identification of surface coat carbohydates in Blastocystis hominis by lectin probes // Int J Parasitol. 1996. - V.26.-№5.-P.527-32.

172. Lanuza MaD, Carbajal JA, Villar J, Borräs R. Blastocysts hominis, patögeno intestinal // Anales de Medicina Interna (Madrid). 1997. - V. 14. -P. 490.

173. Lanuza MaD, Carbajal JA, Villar J, Mir A, Borräs R. Soluble-protein and antigenic heterogeneity in axenic Blastocysts hominis isolates: pathogenic implications // Parasitology Research. 1999. - V. 85. - P. 9397.

174. Lee MG, Stenzel DJ. A survey of Blastocystis in domestic chickens // Parasitology Research. 1999. - V. 85. - P. 109-117.

175. Lee MJ. Pathogenicity of Blastocystis hominis // Journal of Clinical Microbiology. 1991. - V. 29. - P. 2089.

176. Mac Cleur H.M., Strobert E.A., Healy G.R., Anderson^., Clairmont ' J. The B.hominis. New York. - 1998. - V.36. - №21. - P. 236-241.

177. Mac Pherson D.W., Mac Gueen WM. Morphological diversity of B.hominis in sodium acetate-acetic acid-formalin-preserved stool samples stained with iron hematoxylin // J. Clin. Microbiol. 1994. - V.32. - № 1. -P.267-268.

178. Martin AM, Canut A, Rodriguez J, Monies I, Garcia JA. Epidemiology and clinical significance of Blastocystis hominis in different population groups in Salamanca (Spain) // European Journal of Epidemiology. 1992. - V. 8. -P. 553-559

179. Mathewson I.I., Salameh B.M., DuPont G.L., Jaing Z.D., Nelson A.S., Arduino R. Variation in the cysts morphology of B. hominis II Parasitol Res. 1998. - V.83. - P.306-308.

180. Matsumoto I., Iamada M., Ioshida I. Light microscopical appearance and ultrastructure of B.hominis, an intestinal parasite of man // Zentral.

181. Bakteriol. Mikrobiol. Hyg. 1987. - V.264. -P.379-385.

182. Mehlhorn H. Blastocystis hominis, Brumpt 1912: are there different stages or species? // Parasitology Research. 1988. - V. 74. - P. 393-395.

183. Mendes U. // Klinische Pathophysiologie.-Stuttgert-New York.-1994.-P.864-900.

184. Mercado R., Arias B. Blastocystis hominis: frequency of infection in ambulatory patients from the northern section of Santiago, Chile // Bol. Chil. Parasitol. 1991. - V.46. - P.30-32.

185. Mercado R., Otto J., Perez M., Jimenes M. Seasonal variation of intestinal protozoa infections in outpatients of the north section of Santiago, Chile // Bol. Chil. Parasitol. 1999. - V.54. - P.41-47.

186. Merino JM, Hermida G, Iglesias G, Elvira AI, Álvarez T, González JB. Linfocitosis aguda infecciosa asociada a coinfección por Giardia lamblia y Blastocystis hominis // Anales Españoles de Pediatría. 2001. - V. 54. -P. 518-520.

187. Moe K.T. Development of Blastocystis hominis cysts into vacuolar forms in vitro // Parasitol Res. 1997. - V.85. - №2. - P. 103-108.

188. Moe K.T., Singh M., Howe J., Ho L.C., Tan S.W., Hg G.C., Chen X.Q., lap E.H. Observations on the ultrastructure and viability of the cystic stage of B.hominis from human feces // Parasitol. Res. 1996. - V 82. - № 5. - P.439-444.

189. Moe K.T., Singh M., Howe J., Ho L.C., Tan S.W., Chen X.Q., Hg G.C., Yap E.H. Experimental Blastocystis hominis infection in laboratory mice // Parasitol. Res. 1998. - V.83. - P.319-325.

190. Moe KT, Singh M, Gopalakrishnakone P, Ho LC, Tan SW, Chen XQ, Yap EH. Cytopathic effect of Blastocystis hominis after intramuscular inoculation into laboratory mice // Parasitology Research. 1998. - V. 84. -P. 450-454.

191. Muller H.E. Four serologically different groups within the species Blastocystis hominis II Zentralbl. Bakteriol. 1994. - V.280. - P.403^08.

192. Muntean E, Boceat T. Observations on four atypical cases of blastocystosis // Revista de Igiena, Bacteriología, Virusología, Parazitologia, Epidemiología, Pneumoftiziologia. 1989. - V. 34. - P. 285-288.

193. Nasirudeen AMA, Singh M, Yap EH, Tan KS. Blastocystis hominis: evidence for caspasa-3-like activity in cells undergoing programmed cell death // Parasitology Research. 2001. - V. 87. - P. 559-565.

194. Nasirudeen AMA, Tan KS, Singh M, Yap EH. Programmed cell death in human intestinal parasite, Blastocystis hominis // Parasitology. -2001.-V. 123.-P. 235-246.

195. Nelson J.D. Etiology and epidemiology of diarrheal diseases in the United States // Am. J. Med. 1985. - 28. - P.76-80.

196. Ng G.C., Ho L.C., Singh M., lap A.L., Moe K.T. Axenic culture of Blastocystis isolates in monophasic medium and speciation by karyotypic typing // Parasitol. Res. 1996. - V.82. - № 2. - P. 165-169.

197. Ng GC, Tan SW. Colony growth as a step towards axenization of Blastocystis isolates // Parasitology Research. 1999. - V. 85. - P. 678-679.

198. Nimri L., Batchoun R. Intestinal colonization of symptomatic and asymptomatic schoolchildren with Blastocystis hominis II J. Clin. Microbiol. 1994. - V.32. - P.2865-2876.

199. Pakand M. Occurrence of Blastocystis sp. in pigs I I Parasitoli Res. -1991. V.38. -№ 4. - P.297-301.

200. Pakandl M. Blastocystis sp. from pigs: ultrastructural changes occurring during polyxenic cultivation in Iscoves modified Dulbeccos medium // Parasitology Research. 1999. - V. 85. - P. 743-748.

201. Pena MJ, Elcuaz R, Cañas A, Bordes A, Lafarga B. Características clínicoepidemiológicas de la infección por Blastocystis hominis // Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 1992. — V. 10. - P. 16. •

202. Perez de Suarez E., Guzman de Rondon C. Morphology of B.hominis in feces and evaluation of parasitological methods // GEN. 1994. - V.48. -№ 4. - P.226-231.

203. Qadri S.M., Al-Okaili G.A., Al-Dayel F.C. Clinical significance of B.hominis IIJ. Clin. Microbiol- 1989. - V.27. - P.2407-2409.

204. Qiao J., Xue H., Turxunai. Morphological observation on Blastocystis hominis II Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Za Zhi. -1998.-V. 16(2).-P. 124-125.

205. Quílez J, Clavel A, Sánchez-Acedo C, Causapé AC, Albalá F. Detection of Blastocystis sp. in pigs in Aragón (Spain) // Veterinary Parasitology. 1993. - V. 56. - P. 345-348.

206. Rajah S.H., Suresh K.G., Vellayan S., Mak J.W., Khairul Anuar A., Tnit I., Vennila G.D., Saminathan R., Ramakrishnan K. Blastocystis in animal handlers //Parasitol. Res. 1999. -V.85. - P. 1032-1033.

207. Reischl Udo. Molecular Diagnosis of Infectious Diseases. Humana Press. Ricci N, Toma P, Furlani M, Caselli M, Gullini S. 1984. Blastocystis hominis: a neglected cause of diarrhoea? // The Lancet. 1998. - V. 1. - P. 966.

208. Rozalslci A., Sidorczylc Z., Kotelko K. Potential Virulence Factors of Proteus Bacilli // Microbioligy and molecular biology reviews 1997 №1 V. 61 p 65-89

209. Singh M. Ultrastructural changes during in vitro encystment of Blastocystis hominis II Parasitol. Res. 1994. - V.80. - № 4. - P.327-335.

210. Stenzel D.J., Boreham P.F. A cyst-like of Blastocystis hominis II Int. J. Parasitol. 1991.-V.21 .-№ 5. - P.613-615.

211. Stenzel D.J., Boreham P.F. B.hominis revisited // Clin. Microbiol. Rev. 1996. - V.9. - № 4. - P.563-584.

212. Stenzel D.J., Dunn L.A. Endocystosis in cultures of Blastocystis hominis II Int. J. Parasitol. 1989. - V. 19. - № 7. - P.787-791.

213. Stenzel DJ, Cassidy MF, Boreham PFL. Morphology of Blastocystis sp. from domestic birds // Parasitplogy Research. 1994. - V. 80. - P. 131137.

214. Stenzel DJ, Cassidy MF, Boreham PFL. Morphology of Blastocystis sp. isolated from circus animals // International Journal for Parasitology. -1993.-V. 23.-P. 685-687.

215. Stahl, S. J., K. R. Stewart, and F. D. Williams. 1983. Extracellular slime associated with Proteus mirabilis during swarming. J. Bacteriol. 154:930-937.

216. Sun T, Katz S, Tanenbaum B, Schenone C. Questionable clinical significance of Blastocystis hominis infection // American Journal of Gastroenterology. 1989. -V. 84. - P. 1543-1547.

217. SureshK, Anuar AK. Multiple reproductive processes in Blastocystis // Trends in Parasitology. 2002. - V. 18. - P. 528.

218. S uresh K, Howe J, Chong SY, Ng GC, Ho LC, Log AK, Ramachandran NP, Yap EH, Singh M. Ultrastructural changes during in vitro encystment of Blastocystis hominis // Parasitology Research. 1994. -V. 80.-P. 327-335.

219. Suresh K, Init 1, Reuel PA, Rajah S, Lokman H, Anuar AK. Glycerolwith fetal calf serum a better cryoprotectant for Blastocystis hominis // Parasitology Research. 1998. - V. 84. - P. 321-322.

220. Suresh K, Ng GC, Ho LC, Yap EH; Singh M. Differentiation of the various stages of Blastocystis hominis by acridine orange staining// International Journal for Parasitology. 1994. - V. 24. - P.1605-606.

221. Suresh K, Ng GC, Ramachandran NP, Ho LC, Yap EH, Singh M. In vitro encystment and experimental infections of Blastocystis hominis // Parasitology Research. 1993. - V. 79. - P. 456-460.

222. Suresh K., Howe J., Ng G.C. A multiple fission-like mode of asexual reproduction in B,hominis // Parasitol. Res. 1994, - V.80. - № 6. - P.523-527.

223. Taamasri P., Leelayoova S. Prevalence of Blastocystis hominis carriage in Thai army personnel based in Chonburi, Thailand // Mil. Med. -2002. Aug. - V. 167(8). - P. 643-646

224. Tan HK, Harrison M, Zierdt CH. Freeze-etch studies of the granular and vacuolated forms of Blastocystis hominis // Zeitschrift für parasitenkunde. 1974. - V. 44. - P. 267-278.

225. Tan HK, Zierdt CH. Ultrastructure of Blastocystis hominis // Zeitschrift für parasitenkunde. 1973. - V. 42. - P. 315-324.

226. Tan K.S., Singh M., Yap E.H. Recent advances in Blastocystis hominis research: hot spots in terra incognita // Int. J. Parasitol. 2002. -Jun.-V. 15.-P. 789-804.

227. Tan KS, Ng GC, Queck E, Howe J, Ramachandran NP, Yap EH, Singh M. Blastocystis hominis: a simplified, high-efficiency method for clonal growth on solid agar // Experimental Parasitology. 2000. - V. 96. -P. 9-15.

228. Van Saanen-Ciurea M., El-Achachi H. Blastocystis hominis: morphological study using optical and electron microscopy // Bull Soc Pathol Exot Filiales. 1983. - V.76. - P.766-776.

229. Vdovenko A.A. Blastocystis hominis: origin and significance of vacuolar and granular forms // Parasitol. Res. 2000. - V.86. - P.8-10.

230. Villar D.J., Boreham P.F., McDoygall R. Ultrastructure of B.hominis in human stool samples // Int. J. Parasitol. 1998. - V.21. - № 7. - P.807-812.

231. Wagner R.D. Biotherapeutic effects of probiotic bacteria on candidiasis in mmunodeficient mice // Infect. Imrrnm. 1997,- V.65(10).- P. 4165-72.

232. Waikagul J., Krudsood S., Radomyos P. A cross-sectional study of intestinal parasitic infections among schoolchildren in Nan Province, Northern Thailand // Southeast Asian J. Trop. TSfred. Public. Health. 2002. -Jun.-V. 33(2).-P. 218-223.'

233. Wang K.X., Li C.P., Wang J. Epidemiological survey of Blastocystis hominis in Huainan City, Anhui Province, China // World. J. Gastroenterol. 2002. - Oct. - V. 8(5). - P. 928-932.

234. Warren J. W., Mobley H. L. T. (ed ), Urinary tract infections. Molecular pathogenesis and clinical management. ASM Press, Washington, D.C. 1996

235. Wilairatana P., Radomyos P., Radomyos B., Phraevanich R, Plooksawasdi W., Chanthavanich P., Viravan C., Looareesuwan S. Intestinal sarcocystosis in Thai laborers // J. Trop. Med. 1996. - V.27. - P.43-46.

236. Windsor J.J., Macfarlane L. Incidence of Blastocystis hominis in faecal samples submitted for routine microbiological analysis // Br. J. Biomed. Sci. 2002. - V. 59(3). - P. 154-157.

237. Yamada M, Yoshikawa H, Tegoshi T, Matsumoto Y, Yoshikawa T, Shiota T, Yoshida Y. Light microscopical study of Blastocystis spp. in monkeys and fowls // Parasitol Res. 1987. - №> 6. P. 527-531.

238. Yoshikawa H. Freeze-fracture study of Blastocystis hominis //-J. Protozool. 1988. - V.35. -P.522-528.

239. Yoshikawa H., Abe N., Iwasawa M., Kitano S., Nagano I., Wu Z., Takahashi Y. Genomic analysis of Blastocystis hominis strains isolated from two long-term health care facilities // J. Clin. Microbiol. 2000. - V.38. -P. 1324—1330.

240. Yoshikawa H., Hayakawa A. Freeze-frature cytochemistry of membrane cholesterol in B.hominis // Int. J. Parasitol. 1996. - V.26. -P.l 111-1114.

241. Yoshikawa H., Nagano I., Wu Z., Yap E.H., Singh M., Takahashi Y. Genomic polymorphism among of Blastocystis hominis strains and develpment of subtype-specific diagnostic primers // Mol. Cel. Probes — 1998.-V.12.-№3.-P. 153-159.

242. Yoshikawa H., Yamada M., Yoshida Y. Freeze-fracture study of Blastocystis hominis II J. Protozool. 1988. - V.35. - P.522-528.

243. Zalci M., Manzoor M., Howe J., Ng M. Postcystis development of Blastocystis hominis II Parasitol.Res. 1994. - V.85. - P.437-440.

244. Zaman V, Postcystic development of Blastocystis hominis // Parasitol Res. 1999. - № 6. P. 437-440.

245. Zaman V, Khan KZ, Khan MA, Khan NA. Isolation of Blastocystis hominis from sewage // Southeast Asian J Trop Med Public Health.- 1994. № 1. — P. 211.i >

246. Zaman V., Howe J., Hg M. A comparative morphology of Blastocystishominis cysts with and without the "fibrillar layer" // Southeast Asian J. Trop Med. 1996. - V.26. - P.801-802

247. Zaman V., Howe J., Hg M. Observation on the surface coat of B.hominis II Parasitol. Res. 1997. - V. 83. - №7. - P. 731-733.

248. Zdero M. Parasitosisen una peblacion adulta con trastornos gastrointestinales cronicos // Acta Gastoenterol. Latinoam. 1997. - V.27. -P.67-73.

249. Zierdt C.H. Blastcystis hominis an intestinal protozoa parasite of man II Publ. Hlth. Lab. 1973. - V.36. - P. 147-161.

250. Zierdt C.H., Moe K.T., Singh M, Ho L.C., Tan S.W. Ätiologie von Durchfallserkrankungen bei immunkompetenten und HIV-positiven Patienten. //Schweiz. Med. Wochenschr.- 1991. V.4. - P. 15-19.

251. Zierdt C.H., Rude W.S., Bull B.S., Echeverría P., Blaser M.J., Pitarangsi C., BlacklowN., Cross J. Protozoan characteristics of B.hominis II- Am.J. Clin. Pathol. 1967. - V.48. - P.495-501.

252. Zierdt C.H., Swan J. Generation time and growth rate of the human intestinal parasite Blastocystis hominis II J. Protozool. 1981. - V. 28. - P. 483-485.

253. Zierdt C.H., Swan J. In vitro response of Blastocystis hominis to antiprotozoa drugs // J. Protozool. 1983. -V. 30. - P. 332-334.

254. Zierdt C.H., Zierdt W.S. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of serum antibody to B. hominis in symptomatic infections. // J. Parasitol. 1996. - V. 81.-P. 127-129.

255. Zierdt CH, Nagy B. Antibody response to Blastocystis hominis infections // Ann Intern Med. 1993. - № 12. - P. 985-986.

256. Zierdt CH, Williams RL. Serotyping of Pseudomonas aeruginosa isolates from patients with cystic fibrosis of the pancreas // J Clin Microbiol. 1974. -№6.-P. 521-526.

257. Zierdt CH, Zierdt WS, Nagy B., Swan JC, Hosseini J. // J Parasitol. -1999.-V. 53.-P. 437-440.

258. Zuckerman M., Watts M. T., Ho H. B.hominis intestinal injury // Am. J. Med. Sei. 1994. - V.308. - № 2. - P.96-101.

259. Zuckerman M.J., Ho H., Hooper L. Frequency of recovery of B.hominis in clinical practice // J. Clin. Gastroenterol. -1990. V. 12. - № 5. - P.525-532.