Характеристика микробиоценоза кишечника животных при инвазии Balantidium coli

Карпеева, Евгения Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика микробиоценоза кишечника животных при инвазии Balantidium coli
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика микробиоценоза кишечника животных при инвазии Balantidium coli"

, лЛ

На правах рукописи

Кариеева Евгения Александровна

ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОБИОЦЕНОЗА КИШЕЧНИКА ЖИВОТНЫХ ПРИ ИНВАЗИИ BALANT1DIUM COLI

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

О 3 0E3 20*1

Саратов - 2011

4843651

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова»

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент

Ильина Наталья Анатольевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, старший научный

сотрудник

Белов Лев Георгиевич

доктор биологических наук, профессор Романова Елена Михайловна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный

аграрный университет»

Защита состоится «17» февраля 2011 года в 1400 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 при Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335, диссертационный зал.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335.

Автореферат разослан «У/» <ХКшХ/'1хЯ-'2011 года и размещен на сайте университета sgau.ru.

Отзывы на реферат направлять по адресу: 410012, г. Саратов, Театральная площадь, 1, ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ», ученому секретарю диссертационного совета.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор /Ц Л.В. Кариунина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время хорошо известна важная роль нормальной микробиоты пищеварительного тракта в целом, и кишечника в частности, в создании резистентности макроорганизма к колонизации патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, действию токсинов, ферментов защиты и агрессии, формировании иммунного гомеостаза и витаминного баланса, участии в метаболических и ферментативных процессах, антимутагенной активности (Красноголовец, 1989; Куваева, Ладодо, 1991; Воробьев, 1997; Акбаева, 1998; Шендеров, 1998; Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001; Ильина, 2008). В свою очередь, микробиота кишечника является индикатором состояния макроорганизма и целый ряд факторов приводит к изменению ее качественного и количественного состава. При снижении резистентности макроорганизма представители микробиоценоза кишечника могут проявлять свою патогенность (Шендеров, 2000; Потатуркина-Нестерова с соавт., 2004; Ильина, 2006; Красноперова, 2009).

Среди условно-патогенных микроорганизмов, способствующих возникновению и поддержанию дисбиотического процесса в кишечнике животных, помимо бактерий и грибов, значительное место занимают кишечные простейшие, которые в небольшом количестве встречаются в кишечнике практически всех здоровых животных (Walker, 2005). Естественным резервуаром возбудителей многих паразитарных инвазий, в том числе балантидиаза, являются домашние животные - свиньи.

В последние гады в России особенно напряженной стала эпидемиологическая обстановка по паразитарным болезням животных. В стране ежегодно официально регистрируется более 1,3 миллионов больных различными паразитозами сельскохозяйственных животных, среди которых отмечается рост заболеваемости кишечньми протозоозами (Романенко, 2001). Особый интерес вызывает балантидиаз, который очень широко распространен у свиней. По данным ряда авторов зараженность свиней балантидиями составляет от 21 % до 100 % , так в Великобритании - 36 %, в Египте - 70 %, в Болгарии от 14 до 81 %, в Греции - 74,6 %, в Новой Гвинее - 100 % (Жордания, 1971; Хамцов, 1972; Рочкене, 1977). Носителями балантидий могут быть также крысы, мыши, дикие кабаны, обезьяны (Kobayashi et al., 1995; Hussain et al., 1997; Кипайкин, Рубашкина, 2002).

В настоящее время достаточно хорошо изучены вопросы биологии балантидий, пути и способы заражения ими животных, дана общая оценка инвазированности разных хозяев (Рочкене, 1977; Лаптева, 1970; Лысенко, 1993). Однако, практически отсутствуют данные о состоянии микробиоценоза кишечника животных при инвазии Balantidium coli, об особенностях межмикробных взаимодействий при формировании паразитоценоза. Малочисленность и фрагментарность работ, дающих представление о стабильности адаптационных и функциональных возможностях кишечника, не отражают характер изменения его микробного статуса при балантидиазе, а также не направлены на изучение нарушений паразитоценоза в целом. В этой

связи сравнительное изучение состояния микробиоценоза кишечника свиней при инвазии балантидиями и оценка характера взаимоотношений микроорганизмов, определяющего тяжесть заболевания, представляют научный и практический интерес.

Цель работы - изучить качественный и количественный состав микробиоценоза кишечника свиней и оценить характер межмикробных взаимодействий при инвазии Balantidium coli.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать структуру паразитоценоза кишечника свиней города Ульяновска и Ульяновской области, оценить частоту встречаемости В. coli.

2. Изучить биологические свойства выделенных балантидий в условиях in vivo и in vitro.

3. Провести сравнительные исследования состава микробиоценоза кишечника свиней в норме и при инвазии В. coli.

4. Выявить зависимость состояния облигатной и транзиторной микрофлоры кишечника свиней от степени вирулентности балантидий.

5. Оценить характер межмикробных взаимодействий в кишечнике свиней в условиях инвазии В. coli.

Научная новизна работы. Установлен широкий спектр представителей паразитоценоза кишечника свиней города Ульяновска и Ульяновской области, включающий 11 видов кишечных паразитов, из которых 8 видов представлены простейшими и 3 вида - гельминтами. Видовой спектр простейших включает инфузории [Balantidium coli), саркодовые (Blastocysts sp„ Е. hartmanni, Е. coli, Е. nana, Iodamoeba butschlii), жгутиковые (Lamblia intestinalis) и кокцидии {Cryptosporidium parvum). Показано, что инвазивность свиней простейшими составляет 81,7 %, из них балантидиями- 18,78 %.

Гельминты, представленные 1 видом трематод (Opistorchis felineus), 1 видом цестод (Hymtnolepis папа) и 1 видом нематод (Ascaris iumbrieoides), выявлены у 12,18 % обследованных свиней.

Впервые проведен комплексный сравнительный анализ состояния микробиоценоза кишечника свиней при балантидиазной инвазии. Охарактеризован видовой состав и выявлены качественные и количественные изменения в составе микрофлоры кишечника животных, инвазированных Balantidium coli.

Впервые. установлено, что балантидии обладают различной степенью вирулентности, показана зависимость дисбиотических изменений в составе микробиоценоза кишечника от степени вирулентности балантидий.

Впервые определены особенности межмикробных взаимодействий в кишечнике свиней при инвазии Balantidium coli, которые сопровождаются сменой абсолютных доминант Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp.,

Bacteroides spp. и появлением Escherihia coli с гемолитической активностью и грибов рода Candida.

Практическая значимость работы. Подобранная оптимальная питательная среда для культурального метода диагностики балантидиаза позволяет дополнить имеющиеся сведения о влиянии В. coli на межмикробные взаимодействия в кишечнике свиней, что обоснованно указывает на необходимость широкого внедрения в ветеринарную практику методов выделения и идентификации В. coli.

По материалам диссертационной работы опубликованы «Методические рекомендации по межмикробным взаимодействиям в кишечнике свиней при инвазии Balantidium coli» для студентов старших курсов, аспирантов, специалистов микробиологических лабораторий, рекомендованные редакционно-издательским советом и одобренные Ученым советом естественно-географического факультета (протокол № 10 от 23 апреля 2010 г.), монография «Экологические параметры микробиоты кишечника при протозойных инвазиях» (в соавторстве с H.A. Ильиной, Н.М. Касаткиной, Н.И. Потатуркиной - Нестеровой, Ю.Ю. Красноперовой, 2009). Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций по микробиологии, паразитологии и экологии микроорганизмов, проведении лабораторно-пракхических занятий и написании дипломных работ в Ульяновском государственном педагогическом университете имени И.Н. Ульянова.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Паразитофауна кишечника свиней г. Ульяновска и Ульяновской области представлена 11 видами кишечных паразитов, из которых 8 видов -простейшие и 3 вида - гельминты. Инвазированность свиней простейшими составляет 81,7 % , балантидиями - 18,78 %.

2. Выделенные из организма животных балантидии имеют типичную морфологию, при культивировании на среде Суреша количество инфузорий с максимальными размерами увеличивается, а с минимальными - уменьшается. Уровень вирулентности балантидий значительно варьирует и является показателем их неодинаковой этиологической значимости в развитии инвазии.

3. Балантидиазная инвазия сопровождается значительными изменениями . количественных показателей основных эндосимбионтов толстого

кишечника животных и увеличением частоты встречаемости представителей транзиторной микрофлоры.

4. Выраженные дисбиотические изменения микрофлоры кишечника свиней регистрируются при инвазии высоковирулентными В. coli.

увеличении частоты встречаемости транзиторной микрофлоры,

свидетельствующие о смене абсолютных доминант микробоценоза.

Работа выполнена на кафедре зоологии и на базе научно-исследовательской лаборатории экологии микроорганизмов ГОУ «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова».

Апробация работы. Результаты работы были представлены на: Международной научной конференции «Современные наукоемкие технологии» (Италия, о. Тенерифе, 2008), III Международной научно-практической конференции «Образование и здоровье. Экономические, медицинские и социальные проблемы» (Пенза, 2008), Международном Форуме по проблемам науки, техники и образования. III тысячелетие - новый мир (Москва, 2008), Всероссийской заочной электронной научной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва, 2008), Международной научной конференции «General practitioner» (Италия, 2009), Международном Форуме по проблемам науки, техники и образования. III тысячелетие - новый мир (Москва, 2009), Международном молодежном научном форуме «Университетское образование: традиции и инновации» (Ульяновск, 2010), III Всероссийской научно-практической конференции «Экология и здоровье: проблемы и перспективы социально-экологической реабилитации территорий, профилактики заболеваемости и устойчивого развития» (Вологда, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, двух глав: обзора литературы и собственных исследований, включающей объект, материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка используемых литературных источников. Работа изложена на 109 страницах, содержит 16 таблиц и 14 рисунков. Список использованных литературных источников включает 166 наименований, в том числе 33 зарубежных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект, материалы и методы исследований

При выполнении работы было обследовано 197 свиней г. Ульяновска и Ульяновской области. Контрольную группу составили 56 свиней, у которых отсутствовали паразитарные инвазии.

Лабораторную диагностику кишечных простейших проводили в соответствии с регламентом (рис. 1). Для выявления кишечных простейших и

гельминтов использовали систему «Консервант Турдыева - формалин-эфирное осаждение - центрифугирование (КТ-ФЭО-МЦН)» с последующим микроскопированием. (Сергиев, Гордеева, Рагимов, 1994). Диагностику кишечных протозоозов проводили путем микроскопии нативных и окрашенных мазков и после формалин-эфирного осаждения по Ритчи в модификации Аллена-Ридли. Размеры простейших определяли при помощи окуляр микрометра (Сергиев, 1992).

Для выделения Baiantidium coli использовали среды Павловой, Зиерта, Суреша и Райса (Методические указания..., 1999).

Определение вирулентности микроорганизмов проводили путем внутрибрюшинного заражения мышей. Белым мышам массой 14-16 г. вводили по 0,5 мл соответствующего разведения 101 - 109 взвеси культуры простейших, выращенной на среде К. Suresh. Учет результатов производили через сутки и определяли величину LD5o, в соответствии с которой штаммы Baiantidium coli относили к высоковирулентным, умеренно вирулентным и слабовирулентным (Костюкова, Андреева, Игнатов, 1996).

Рис. 1. Регламент лабораторной диагностики кишечных простейших

Изучение микрофлоры кишечника у инвазированных и здоровых свиней проводили согласно методическим рекомендациям «Бактериологическая диагностика дисбактериоза», 1989.

Выделение и идентификацию микроорганизмов из состава микробиоценоза кишечника проводили по общепринятым методикам. Содержимое толстого кишечника и разведения фекалий высевали на дифференциально-диагностические среды. Бактерии группы кишечной палочки выделяли на средах Эндо, Ппоскирева, Левина и висмут-сульфитном агаре; для выделения стафилококков использовали солевой мясо-пептонный агар (МПА) и кровяной МПА. Выделение анаэробных бифидобактерий проводили посевом больших разведений фекалий в среду Блаурокка. Для выделения клостридий использовали среды Китта-Тароцци, Вильсона-Блер, глюкозо-кровяной агар

Цейсслера. Лактобациллы определяли по росту на среде MPC. Proteus vulgaris выделяли на среде Плоскирева и средах с добавлением желчи (МПА с 5 % содержанием желчи). Микроскопические грибы родов Candida, Aspergilus, Peniilium выделяли посевом исследуемого материала на среды Чапека и Сабуро.

Оценивали биохимическую активность выделенных бактерий по способности к разжижению желатина, коагуляции молока, утилизации маннита, лактозы, сахарозы, аммиака, сероводорода на стандартных средах Гисса и с использованием индикаторных полосок.

Рассчитывали качественное и количественное содержание бактерий и грибов в исследуемых пробах, результаты переводили в десятичные логарифмы и определяли относительное соотношение различных групп микроорганизмов в микробиоценозе кишечника животных.

Характер межмикробных взаимодействий оценивали по значению индекса контагиозности (Уиттекер, 1980), вычисляемого по формуле: S

UK=— где UK - индекс контагиозности; S - выборочная дисперсия; X

X - средняя арифметическая плотность, и позволяющего определить характер пространственного распределения экологических групп в биотопе.

Для определения значимости экологических групп микробоценоза пользовались индексом, предложенным М.П. Наткевичайте-Иванаускене (1985), и вычисляли по формуле:

w 100-g

V = —т=== где V - индекс значимости; g - сумма встречаемости видов ,nwm-z

данной группы; п - число описанных пробных площадок; m - среднее число видов на пробной площадке; z - число видов в данной группе.

Видовое разнообразие сообщества микроорганизмов, населяющих

толстый отдел кишечника, рассчитывали по формуле Р. Уиттекера (1980): g

d = — где d - видовое разнообразие; S - количество видов; Nj

N - общая плотность бактерий.

Статистическая обработка результатов исследований выполнена на персональном ЭВМ типа IBM «Pentium IV», графическая обработка материалов выполнена с помощью пакета прикладных программ Microsoft Exel-2003. При математической обработке данных использовали пакет CSS3.1 «Компьютерная биометрия» (Лакин, 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование паразитоценоза кишечника свиней

Проведено обследование 197 свиней в г. Ульяновске и Ульяновской области с применением диагностической системы КТ-ФЭО-МЦН. Выявлена

общая высокая зараженность кишечными паразитами у обследованных животных. При этом инвазированность простейшими и гельминтами была не одинакова. Так, простейшие были выявлены у 81,7 % свиней, тогда как гельминты - у 12,2 % животных, 6,1 % из обследованных животных были не инвазированы. Получены новые данные, отражающие богатое видовое разнообразие паразитофауны кишечника обследованных животных (табл. 1).

Инфузории Balantidium coli также занимают значительное место в паразитоцгнозе свиней, они были выявлены у 18,78 % обследованных животных.

Таблица 1 - Встречаемость кишечных паразитов у обследованных свиней

Виды паразитов Встречаемость паразитов

абс. %

Простейшие 161 81,73

1. Саркодовые 145 73,60

1.1. Blastocystis sp. 91 46,19

1.2. Entamoeba hartmanni 15 7,61

1.3. Entamoeba coli 74 37,56

1.4. Endolimax nana 46 23,35

1.5. Iodamoeba butschlii 23 11,68

2. Жгутиковые 49 24,87

2.1. Lamblia intestinalis 73 37,06

3. Инфузории 37 18,78

3.1. Balantidium coli 37 18,78

4. Кокцидии 6 3,05

4.1. Cryptosporidium parvum 6 3,05

Гельминты 24 12,18

1. Трематоды 6 3,05

1.1. Opistorchis felineus 6 3,05

2. Цестоды 3 1,52

2.1. Hymtnolepis nana 3 1,52

3. Нематоды 17 8,63

3.1. Ascaris iumbrieoides 12 6,09

Паразнтоценоз кишечника свиней характеризовался наличием в ряде случаев ассоциаций разных видов паразитов. Были выявлены двухчленные ассоциации: Blastocystis sp. (46,19 %) - Lamblia intestinalis (37,06 %), Balantidium coli (18,78 %) - Blastocystis sp. (46,19 %), Balantidium coli (18,78 %)

- Candida spp. (7,39 %); трехчленные ассоциации: Lamblia intestinalis (37,06 %)

- Balantidium coli - Candida spp. (7,39 %), протозойно-гельминто-грибковые (7,81 %).

Характеристика выделенных штаммов Balantidium coli

Морфология балантидий

Изучение морфологических особенностей балантидий, обнаруженных в нативном материале и в культуре, выращенной на искусственных питательных средах, выявило отличия в размере инфузорий (табл. 2).

Таблица 2 - Размеры балантидий выделенных из исследуемого материала и после культивирования на питательной среде

Размеры инфузорий из исследуемого материала (мкм) и их

количество в %

40,6±19,7х51,3±12,3 67,4±10,6х81,2±14,6 99,6±23,3х114,2±17,5

из нативного материала

16,7% 71,8% 11,5%

после культивирования

11,3% 62,4% 26,3 %

Среди выделенных из нативного материала балантидий преобладали клетки размером 67,4±10,6х81,2±14,6 мкм. После их культивирования на питательной среде количество клеток с минимальными размерами уменьшилось до 11,3 %, а с максимальными - увеличилось до 26,3 %. В мазках с питательной среды выявлены делящиеся формы балантидий, в то время как микроскопия нативного материала редко выявляла клетки в процессе деления.

Культурстьные свойства инфузорий Balantidium coli

Для изучения культуральных свойств инфузорий В. coli проводили исследования фекалий свиней, используя культуральный метод (Генис, 1979).

Для получения, культур простейших использовали двухфазную питательную среду Зиерта, среду Павловой, среду Раиса, среду Джонса, среду Суреша: ЕМ, СЕМ, ТЕМ. Учитывая большое количество имеющихся питательных сред, провели исследования с целью выявления оптимальной питательной среды для культивирования В. coli. Для этого произвели посевы фекалий на все указанные питательные среды, наличие роста балантидий отмечали на 1,2,3,4,5, и б сутки (табл. 3).

Анализ полученных данных показал, что рост в виде помутнения среды появлялся на средах Павловой и Суреша (ЕМ) - на 5 сутки после посева, на средах Райса и Суреша (ТЕМ) - на 4 сутки, на средах Зиерта и Джонса - на 3 сутки и на среде Суреша (СЕМ) - на 2 сутки.

Жизнеспособность выросших балантидий сохранялась во всех случаях дальнейших пересевов полученных культур В. coli.

Таблица 3 - Результаты посевов фекалий на питательные среды

Питательные среды Количество посевов Наличие роста (сутки)

1 2 3 4 5 6

Среда Зиерта 30 - + + + +

Среда Райса 30 - - - + + +

Среда Павловой 30 - - - - + +

Среда Джонса 30 - - + + + +

Среда Суреша ЕМ 30 - - - - + +

Среда Суреша ТЕМ 30 - - - + + +

Среда Суреша СЕМ 30 + + + + +

Примечание: «+» - наличие роста в виде помутнения среды, «-» - отсутствие роста.

Вирулентность изолятов Balantidium coli

Впервые было установлено, что балантидии, выделенные у свиней, обладают вирулентностью, однако часть изолятов были авирулентны. Лишь 60,4 % выделенных простейших вызывали гибель мышей, причем уровень показателей вирулентности был неодинаков.

Проведенные исследования показали, что 119 из 197 изолятов балантидий вызывали гибель мышей при внутрибрюшинном заражении, что составило 60,4% (рис. 2). Показатель LDJ0 для вирулентных культур В. coli варьировал от 2,6±0,7 до 6,7±0,4 мк/мл; в зависимости от его величины были выделены 3 группы балантидий. 1 группу составили 20 культур со слабой вирулентностью (LEVlg 2,6±0,7-3,9±0,4 мк/мл), 2 группу - 46 культур со средней вирулентностью (LD50/lg 4,0±0,6-5,5±0,7 мк/мл); 3 группу - 53 культуры с высокой вирулентностью (LD50/lg 5,6±0,9-6,7±0,5 мк/мл).

60,4%

39,6%

Ш Вирулентные 0 Авирулентные

Рис. 2. Количество вирулентных изолятов балантидий

Характеристика качественного и количественного состава микробиоценоза кишечника свиней

Кишечный микробоценоз свиней без инвазии В. coli

Анализ качественного и количественного состава микробоценоза кишечника свиней, не инвазированных бапантидиями, позволил отнести 368 штаммов идентифицированных микроорганизмов к 10 родам (табл. 4).

Таблица 4 - Частота встречаемости (%) и плотность колонизации (1$ КОЕ/г) микроорганизмами кишечника свиней без паразитарных инвазий

№ п/п Микроорганизмы Частота встречаемости (%) lg КОЕ/г, M±m

1 Lactobacillus spp. 100,0 8,2±1,8

2 Bifidobacterium spp. 100,0 8,«2,1

3 Escherichia spp. 100,0 7,9±2,6

4 Bacteroides spp. 68,1 10,6±3,7

5 Proteus spp. 9,8 3,8±0,7

6 Klebsiella spp. 9,6 2,9±0,9

7 Enterococcus spp. 21,5 5,3±1,9

8 Staphylococcus spp. 16,4 4,6±1,3

9 Candida spp. 22,5 3,9±1,3

Анализ состава микробиоценоза кишечника свиней выявил 100 % присутствие лактобактерий (их плотность колонизации составляла 8,2±1,8 lg КОЕ/г), бифидобактерий (8,9±2,1 lg КОЕ/г) и эшерихий (7,9±2,6 lg КОЕ/г). Среднее содержание Bacteroides spp. в кишечнике неинвазированных животных составляло 10,6±3,7 lg КОЕ/г; эти бактерии были обнаружены у 68,1 % обследуемых животных.

Из фекалий свиней достаточно часто высевались и другие энтеробактерии (26,3 %). Выявлено высокое содержание Proteus spp. (3,8±0,7 lg КОЕ/г), в меньшем количестве обнаруживали Klebsiella spp. (2,9±0,9 lg КОЕ/г). Достаточно часто в фекалиях обнаруживались представители рода Staphylococcus spp., которые были выделены у 16,4 % животных; при этом в 65 % случаев это был S. epidermidis и значительно реже - S. aureus (13,7 %), на долю остальных видов стафилококков приходилось 21,3 %, Enterococcus spp.{5,3±1,9 lg КОЕ/г). У каждого четвертого обследованного животного выявлены грибы рода Candida (22,5 %). Их присутствие было весьма незначительным, средняя арифметическая величина составила 3,9±1,3 lg КОЕ/г.

Полученные нами результаты свидетельствуют о широкой распространенности в микробиоценозе кишечника обследованных животных при отсутствии паразитарных инвазий анаэробных микроорганизмов.

Микробоценоз кишечника свиней при инвазии В. coli

Наличие балантидиазной инвазии у свиней во всех случаях сопровождалось различной степенью выраженности дисбиотических изменений в составе микрофлоры кишечника. Было выделено и идентифицировано 396 штаммов микроорганизмов, анализ которых позволил отнести их к 9 родам (табл. 5).

Таблица 5 - Состав микробиоценоза кишечника свиней в условиях инвазии В. coli

№ п/п Микроорганизмы Частота встречаемости (%) lg КОЕ/г, M±m

1 Lactobacillus spp. 82,0 4,9±1,1

2 Bifidobacterium spp. 79,9 6,2±0,7

3 Escherichia spp. 92,4 8,6±1,2

4 Bacteroides spp. 62,1 6,810,8

5 Enterococcus spp. 49,5 6,9±0,8

6 Proteus spp. 24,3 5,8±0,8

7 Klebsiella spp. 14,7 6,4±1,2

8 Staphylococcus spp. 27,2 4,7±1,1

9 Candida spp. 49,8 6,7±0,9

Установлено, что дисбиотические изменения проявлялись прежде всего в уменьшении основных представителей микробиоценоза кишечника -Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. Представители резидентной микробиоты кишечника - Escherichia spp. - были обнаружены в 92,4 % проб в повышенном количестве (lg 8,6±1,2 lg КОЕ/г). Наряду с Е. coli с нормальной ферментативной активностью встречались и штаммы с гемолитической активностью (56,8 %). Bacteroides spp. были обнаружены в 62,1 % проб, микробное число которых равнялось 6,8±0,8 lg КОЕ/г.

Анализируя состав микрофлоры кишечника свиней при балантидиазе, следует отметить резкое возрастание как количества высеваемых микроорганизмов, так и частоты их обнаружения. Установлено, что доминировали энтеробактерии (62,7 % случаев выделения), со средним микробным числом 6,4±0,4 lg КОЕ/г. Содержание Proteus spp. составило 5,8+0,8 lg КОЕ/г, Klebsiella spp. - 6,4±1,2 lg КОЕ/г. Грибы рода Candida выявлялись в 49,8 % проб, обсемененность ими кишечника свиней была высокой и составляла 6,7±0,9 lg КОЕ/г. Довольно часто выявлялись Enterococcus spp. (49,5 %), при этом средняя арифметическая величина обсемененности была весьма значительной (6,9±0,8 lg КОЕ/г). Staphylococcus spp. обнаруживались в 27,2 % проб в количестве 4,7±1,1 lg КОЕ/г.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что в условиях инвазии балантидиями происходит значительная колонизация кишечника свиней

транзиторными микроорганизмами на фоне снижения содержания представителей облигатной микрофлоры.

Оценка изменений состава микробиоценоза кишечника животных в зависимости от степени вирулентности балантидий

Выявленные дисбиотические изменения в составе микробиоценоза кишечника свиней, инвазированных балантидиями, представляли значительный интерес для определения зависимости выраженного дисбиоза от степени вирулентности данных простейших.

Нарушения содержания облигатной микрофлоры были выявлены у всех опытных животных 3 групп зараженных балантидиями с разной степенью вирулентности. Однако, показатели плотности колонизации кишечника животных отдельными представителями микробиоценоза были различными. При инвазии простейшими со слабо выраженной вирулентностью (1 группа животных) изменения в составе микробиоценоза кишечника были наименее выражены. Отмечено незначительное снижение количественных показателей содержания Bifidobacterium spp. до 8,7±1,5 lg КОЕ/г по сравнению с контрольными показателями (8,9+2,1 lg KOE/r; р>0,05), Lactobacillus spp. до 8,1±1,3 lg КОЕ/г (контроль 8,2+1,8 lg КОЕ/г; р>0,05), Bacteroides spp. до 10,1 ±0,9 lg КОЕ/г (контроль 10,б±3,7 lg КОЕ/г; р>0,05) и Е. coli с нормальной ферментативной активностью до 7,7+0,5 lg КОЕ/г (контроль 7,9±2,6 lg КОЕ/г; р>0,05). Отмечено также незначительное повышение количественного показателя содержания Enterococcus spp. (3,9±0,6 lg КОЕ/г; в контроле 3,6±1,2 lg КОЕ/г; р>0,05).

В кишечнике животных 2 группы происходило снижение содержания представителей нормобиоты на фоне повышения содержания транзиторных условно-патогенных микроорганизмов. Показатель колонизации Bifidobacterium spp. составил 8,3±0,1 lg КОЕ/г, что было ниже контрольного значения (8,9±2,1 lg КОЕ/г, р<0,05). Отмечено также уменьшение содержания Lactobacillus spp. до 7,2±0,03 lg КОЕ/г (в контроле - 8,2±1,8 lg КОЕ/г; р<0,05), Е. coli до 7,010,3 lg КОЕ/г (7,9±2,6 lg КОЕ/г; р<0,05) и Bacteroides spp. до 8,2+0,9 lg КОЕ/г (10,613,7 lg КОЕ/г; р<0,05). На фоне количественного дисбаланса микрофлоры выявлялись и значительные изменения ее качественного состава. Помимо снижения содержания кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью отмечено появление эшерихий с гемолитической способностью, показатель их колонизационной активности составил 3,211,9 lg КОЕ/г. Уровень содержания Proteus spp. составил 5,510,7 lg КОЕ/г (р<0,05), Klebsiella spp. -4,210,8 lg КОЕ/г (р<0,05), Enterococcus spp. - 4,711,0 lg КОЕ/г (p<0,05), Staphylococcus spp. - 6,010,4 lg КОЕ/г (p<0,05) и Candida spp. - 3,310,1 lg KOE/r (p<0,05). Следовательно, при заражении животных балантидиями со средней степенью вирулентности, дисбиотические изменения микробиоты кишечника были более выражены и сопровождались не только снижением содержания

представителей иормобиоты, но и повышением плотности колонизации условно-патогенной микрофлоры.

У животных 3 группы выраженность дисбиотических изменений в кишечнике нарастала, что проявлялось в еще большем снижении содержания бакгерий из состава нормальной микрофлоры и повышении массивности обсеменения условно-патогенными микроорганизмами. Отмечено уменьшение Bifidobacterium spp. до 7,4±0,4 lg КОЕ/г (р<0,05), Lactobacillus spp- до 5,6±1,1 lg КОЕ/г (р<0,05), Е. coli.- до 6,4±2,0 lg КОЕ/г (р<0,05) и Bacteroides spp. - до 7,5±1,6 lg КОЕ/г. На этом фоне происходило повышение колонизационной активности условно-патогенных микроорганизмов. Так, уровень содержания гемолитических эшерихий увеличивался до 5,7 ± 1,8 lg КОЕ/г, Proteus spp. - до 6,8±0,9 lg КОЕ/г (р<0,05), Klebsiella spp. - до 6,3±2,1 lg КОЕ/г ¿<0,05), Enterococcus spp. - до 5,2±1,7 lg КОЕ/г (р<0,05) Staphylococcus spp. - до 6,9±1,8 lg КОЕ/г (р<0,05) и Candida spp. - до 6,2±2,4 lg КОЕ/г (р<0,05).

Анализ полученных результатов показал, что дисбиотические сдвиги в составе микробиоценоза кишечника животных находятся в зависимости от степени вирулентности выделенных балантидий и затрагивают как аэробный, так и анаэробный его компоненты. Характерным для выявленного дисбиоза является снижение колонизационной активности представителей нормобиоты и увеличение количества условно-патогенных микроорганизмов, очень часто ассоциаций нескольких видов. Полученные результаты указывают на тесную взаимосвязь вирулентности балантидий при их инвазии, с одной стороны, и состояния кишечного микробоценоза - с другой.

Межмикробные взаимодействия в кишечнике свиней при инвазии

Balantidium coli

Показатели постоянства представителей микробоценоза кишечника свиней

Особенности межмикробных взаимодействий в кишечнике свиней характеризовали используя показатели индекса постоянства, индекса контагиозно ста и индекса значимости.

Значения индекса постоянства микроорганизмов в кишечнике свиней без паразитарной инвазии свидетельствовали об абсолютном доминировании Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. и Escherichia spp. (C=100 % для всех видов бактерий). К этой же группе микроорганизмов были отнесены и Bacteroides spp. (С=65,0 %).

Добавочную группу составили Candida spp. со значением С=21,8 %. В транзиторную группу представителей микробоценоза кишечника вошли представители семейства Enterobacteriaceae и Staphylococcus spp. (С=19,6 % и 14,8 % соответственно).

Доминирующими видами в составе микробиоценоза кишечника свиней, инвазированных балантидиями, являются Escherichia spp., Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. (C=90,S %; 87,2 % и 79,8 % соответственно), а также Bacteroides spp. (G=63,5 %) (табл. 6).

К этой же группе относятся Enterococcus spp. {С- 57,6 %) и Candida spp. (С=55,5 %), которые не входили в эту группу микроорганизмов кишечника неинвазированных животных.

Таблица 6 - Структура и состав микробиоценоза кишечника свиней неинвазированных балантидиями

№ п/п Структура микробиоценоза Показатель постоянства (С, %)

Доминирующие группы микроорганизмов ■Неинвазированные животные

1 Bifidobacterium spp. 100,0

2 Lactobacillus spp. 100,0

3 Escherichia spp. 100,0

4 Bacteroides spp. 65,0

Добавочные группы

1 Candida spp. 21,8

Транзиторные группы

1 Enterobacter spp. 19,6

2 Staphylococcus spp. 14,8

Было показано, что ценотип кишечника у свиней, инвазированных балантидиями, формируют представители нормальной микрофлоры: Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp., a также Enterococcus spp. и Candida spp.(ra6n. 7)

Таблица 7 - Структура и состав микробиоценоза кишечника свиней инвазированных балантидиями

№ п/п Структура микробиоценоза Показатель постоянства (С, %)

Доминирующие группы микроорганизмов Инвазированные животные

1 Bifidobacterium spp. 87,2

2 Lactobacillus spp. 79,8

3 Escherichia spp. 90,5

4 Bacteroides spp. 63,5

5 Enterococcus spp. 57,6

6 Candida spp. 55,5

Добавочные группы

1 Staphylococcus spp. 48,9

2 Proteus spp. 30,0

' Транзиторные группы

1 Klebsiella spp. 20,4

Появление в группе резидентных видов Enterococcus spp. и Candida spp. в ассоциации с представителями нормальной микробиоты {Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp.) свидетельствует о развитии дисбиоза кишечника. Анализ ценотипа инвазированных животных показал, что его изменения имеют последовательный характер и проявляются на уровне экосистемы.

Уровень контагиозности таксонов микробиоты кишечника свиней

Распределение видов микроорганизмов в структуре микробиоценоза кишечника животных оценивали с помощью индекса контагиозности (Уиттекер, 1980), который характеризуется коэффициентом вариации (табл. 8).

Уменьшение значений контагиозности для условно-патогенных представителей в микробиоценозе кишечника животных при инвазии балантидиями по сравнению с группой неинвазированных свиней приводит к освобождению экологических ниш успешно занимаемых представителями транзиторной микрофлоры, в результате чего индекс контагиозности ее представителей уменьшается. Данное соотношение выявляет диспропорцию участия в горизонтальной структуре экосистемы кишечника при инвазии балантидиями основных симбионтов и представителей транзиторной микрофлоры.

Таблица 8 - Степень контагиозности основных представителей микробиоценоза кишечника обследованных групп животных

№ Обследуемые животные

п/п Микроорганизмы Неинвазированные Инвазированные

животные животные

1 Bifidobacterium spp. 0,6±0,4 2,9±0,4

2 Lactobacillus spp. 0,8±0,3 2,5±0,5

3 Escherichia spp. 0,7±0,3 1,8±0,б

4 Bacteroides spp. 0,3±0,3 1,6±0,5

5 Enterococcus spp. 0,9±0,3 0,5±0,3

6 Candida spp. 1,6±0,4 0,6±0,2

7 Staphylococcus spp. 0,9±0,3 0,3±0,2

8 Proteus spp. 0,8±0,2 0,3±0,1

9 Klebsiella spp. 0,6±0,3 0,2±0,2

Оценка значимости участников микробоценоза кишечника свиней

Оценку значимости представителей нормальной микрофлоры и условно-патогенных микроорганизмов у инвазированных и неинвазированных свиней проводили с помощью индекса значимости, предложенного М.П. Наткевичайте -Иванаускене (1985) (табл. 9).

Таблица 9 - Индекс значимости микроорганизмов в кишечном микробиоценозе животных

№ п/п Микроорганизмы Индекс значимости микробиоценоза животных (%)

Неинвазированных животных Инвазированных животных

1 Bifidobacterium spp. 28,4 11,6

2 Lactobacillus spp. 27,9 12,6

3 Escherichia spp. 24,6 ■ 15,3

4 Bacteroides spp. 22,6 16,3

5 Enterococcus spp. 12,5 24,6

6 Proteus spp. 7,7 16,8

7 Klebsiella spp. 5,7 17,1

8 Candida spp. 8,7 18,2

9 Staphylococcus spp. 0,4 7,8

Показано, что наиболее значимыми в составе микробиоценоза кишечника неинвазированных животных были представители облигатной микробиоты: Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp., тогда как в кишечнике животных с балантидиазом индекс значимости Bifidobacterium spp. уменьшился до 11,6 %, Lactobacillus spp. - до 12,6 %, Escherichia spp. - до 15,3 % и Bacteroides spp. - до 16,3 %. Уменьшение значимости этими бактериями своего доминирующего положения привело к увеличению значимости условно-патогенных микроорганизмов. Наибольшие значения индекса значимости были у Enterococcus spp. (24,6 %), Candida spp. (18,2 %) и Klebsiella spp. (17,1 %).

Изучение межмикробных взаимодействий в составе микробиоценоза кишечника свиней с балантидиазом показало, что при инвазии балантидиями происходят компенсированные качественные и количественные сдвиги кишечного микробоценоза.

Таким образом, проведенные исследования позволили установить, что в широком спектре представителей паразитоценоза кишечника свиней города Ульяновска и Ульяновской области, балантидии составляют 18,78 % от общей инвазивности свиней простейшими, что обуславливает необходимость широкого внедрения в практику ветеринарных лабораторных методов исследований выделения и идентификации Balantidium coli. Проведенный комплексный анализ состояния микробиоценоза кишечника свиней при балантидиазной инвазии позволил выявить качественные и количественные изменения, отражающие формирование дисбиоза, его тяжесть и зависимость от степени вирулентности балантидий. Полученные данные расширяют и углубляют представления о влиянии простейших на межмикробные взаимодействия в кишечнике животных.

ВЫВОДЫ

1. Выявлено 11 видов кишечных паразитов свиней в г. Ульяновске и Ульяновской области, из которых 8 видов представлены простейшими и 3 вида - гельминтами. Видовой спектр простейших включает инфузории (Balantidium coli), саркодовые (Blastocysts sp., Е. hartmanni, Е. coli, Endolimax nana, lodamoeba butschlii), жгутиковые (Lamblia intestinalis) и кокцидии {Cryptosporidium parvum). Инвазированность свиней простейшими составляет 81,7 %, балантидиями - 18,78 %.

2. Установлена типичная морфология in vivo выделенных Balantidium coli; при культивировании на среде Суреша отмечено увеличение количества инфузорий с максимальными размерами с 11,5 до 26,3 % и уменьшение - с минимальными до 11,3%. Определена разная степень вирулентности у 60,4% идентифицированных балантидий.

3. Обнаружено, что при балантидиазе свиней происходит значительное снижение содержания облигатной микробиоты толстой кишки на фоне увеличения микробного числа транзиторных видов, что свидетельствует о глубоких дисбиотических изменениях данного биотопа.

4. Выявленный дисбиоз кишечника имел более выраженный характер при инвазии балантидиями с высокими показателями вирулентности LD50/lg (5,6±0,9-б,7±0,8 мк/мл), выделение авирулентных простейших сопровождалось незначительными изменениями микробоценоза.

5. Бапантидиаз у свиней сопровождался полным доминированием Escherichia spp. (С=90,5 %), широким диапазоном анаэробных бактерий (Bifidobacterium spp. (0=87,2 %), Lactobacillus spp. (C=79,8 %) и Bacteroides spp. (C=63,5 %). К этой же группе относились Candida spp. (С=55,5 %) и Enterococcus spp. (С=57,6 %), которые у животных без инвазии не входили в группу доминирующих микроорганизмов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Карпеева, Е.А. Кишечный амебиаз: клиника и диагностика / Е.А. Карпеева, Н.А. Ильина, И.Т. Гусева, Д.В. Шабанов // Образование и здоровье. Экономические, медицинские и социальные проблемы: материалы III Международной научно-практической конференции, декабрь 2008. - Пенза: Приволжский дом знаний, 2008. - С. 29-30.

2. Карпеева, Е.А. Бактериальная флора кишечника в зависимости от вида заболевания желудочно-кишечного тракта / Е.А. Карпеева, Н.М. Касаткина, Н.А. Ильина // III тысячелетие-новый мир: Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования, 2-5 декабря 2008. - М.: Академия наук о Земле, 2008. - Т.З. - С. 131-133.

3. Карпеева, Е.А. Балантидиаз свиней / Е.А. Карпеева, Д.В. Шабанов // Фундаментальные исследования. - 2008. - № 11. - С. 70-72.

4. Карпеева, Е.А. Общие и специфические свойства бактерий семейства Enterobacteriaceae / Е.А. Карпеева, Н.А. Ильина, Д.В. Шабанов, И.Т. Гусева

// Современный мир, природа и человек: межвузовский сборник научных трудов. - Томск. - 2009. - Т. 1, № 1. - С. 67-68.

5. Карпеева, Е.А. Экспериментальная модель заражения лямблиями крыс / Е.А. Карпеева, H.A. Ильина, Г.В. Криушинская // Естественные н технические науки. - 2009.-№ 4(42). - С. 70-71.

6. Карпеева, Е.А. Экологические параметры микробиоты кишечника при протозойных инвазиях / H.A. Ильина, Н.М. Касаткина, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова. Е.А. Карпеева. - Ульяновск: Корпорация технологий продвижения, 2009. - 80 с.

7. Карпеева, Е.А. Экологические параметры микробиоты кишечника при протозойных инвазиях / H.A. Ильина, Н.М. Касаткина, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, Е.А.Карпеева // III тысячелетие-новый мир: Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования, 1-4 декабря 2009. - М.: Академия наук о Земле. - 2009. - Т. 2. -С.108-109.

8. Карпеева, Е.А. Вирулентность изолятов Balantidium coli / Е.А. Карпеева, И.Д. Ефремова, Д.В. Шабанов, H.A. Ильина // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 2. - С. 45-47.

Подписано в печать 11.01.2011г. Формат 60x90 Бумага офсетная. Печать оперативная. Усл.печ.л._1__Тираж_100 экз._Заказ_748

Ротапринт Ульяновского государственного Педагогического университета им. И.Н.Ульянова 432700 г.Ульяновск, пл. 100-летия со дня рождения В.ИЛенина, д. 4

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Карпеева, Евгения Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика бактериального сообщества кишечника в условиях нормоценоза.

1.2. Дисбиотические нарушения бактериального профиля кишечника.

1.3. Простейшие Balantidium coli как дестабилизирующий фактор микробоценоза кишечника.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект, материалы и методы исследований.

2.1.1. Объект исследования.

2.1.2 Питательные среды.

2.1.3. Методы исследований.

2.1.4. Оценка структуры кишечного микробоценоза.

2.1.5. Определение межмикробных взаимодействий.

2.1.6. Методы статистического анализа результатов.

2.2. Результаты исследований и их обсуждение.

2.2.1. Исследование паразитоценоза кишечника свиней.

2.2.2. Характеристика выделенных штаммов Balantidium coli.

2.2.3. Характеристика качественного и количественного состава микробоценоза кишечника свиней.

2.2.4. Межмикробные взаимодействия в кишечнике свиней при инвазии

Balantidium coli.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика микробиоценоза кишечника животных при инвазии Balantidium coli"

Актуальность темы

В' настоящее время хорошо известна важная роль нормальной микробиоты пищеварительного тракта в целом, и кишечника в частности, в создании резистентности макроорганизма к колонизации патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, действию токсинов, ферментов защиты и агрессии, формировании иммунного гомеостаза и витаминного баланса, участии в метаболических и ферментативных процессах, антимутагенной активности (Красноголовец, 1989; Куваева, Ладодо, 1991; Воробьев, 1997; Акбаева, 1998; Шендеров, 1998; Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001; Ильина, 2008). В свою очередь, микробиота кишечника является- индикатором состояния макроорганизма и целый ряд факторов приводит к изменению ее качественного и количественного состава. При снижении резистентности макроорганизма представители микробиоценоза кишечника могут проявлять свою патогенность (Шендеров, 2000; Потатуркина-Нестерова с соавт., 2004; Ильина, 2006; Красноперова, 2009).

Среди условно-патогенных микроорганизмов, способствующих возникновению и поддержанию дисбиотического процесса в кишечнике животных, помимо бактерий и грибов,- значительное место занимают кишечные простейшие, которые в небольшом количестве встречаются в кишечнике практически всех здоровых животных (Walker, 2005). Естественным резервуаром возбудителей многих паразитарных инвазий, в том числе балантидиаза, являются домашние животные - свиньи.

В последние годы в России особенно напряженной стала эпидемиологическая обстановка по паразитарным болезням животных. В стране ежегодно официально регистрируется более 1,3 миллионов больных различными паразитозами сельскохозяйственных животных, среди которых отмечается рост заболеваемости кишечными протозоозами (Романенко, 2001). Особый интерес вызывает балантидиаз, который очень широко распространен у свиней. По данным ряда авторов зараженность свиней балантидиями составляет от 21 % до 100 % , так в Великобритании - 36 %, в Египте - 70 %, в Болгарии от 14 до 81 %, в Греции — 74,6 %, в Новой Гвинее — 100 % (Жордания, 1971; Хамцов, 1972; Рочкене, 1977). Носителями балантидий могут быть также крысы, мыши, дикие кабаны, обезьяны (Kobayashi et al., 1995; Hussain et al., 1997; Кипайкин, Рубашкина, 2002).

Цель работы — изучить качественный и количественный состав микробиоценоза кишечника свиней и оценить характер межмикробных взаимодействий при инвазии Balantidium coli.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

2. Изучить биологические свойства выделенных балантидий в условиях in vivo и in vitro.

3. Провести сравнительные- исследования состава микробиоценоза кишечника свиней в норме и при инвазии В. coli.

5. Оценить характер межмикробных взаимодействий в кишечнике свиней в условиях инвазии В. coli.

Научная новизна работы

Установлен широкий спектр представителей паразитоценоза кишечника свиней города Ульяновска и Ульяновской области, включающий 11 видов кишечных паразитов, из которых 8 видов представлены простейшими и 3 вида — гельминтами. Видовой спектр простейших включает инфузории {Balantidium coli), саркодовые (Blastocystis sp., Е. hartmanni, Е. coli, Е. nana, Iodamoeba butschlii), жгутиковые (Lamblia intestinalis) и кокцидии (Cryptosporidium parvum). Показано, что инвазивность свиней простейшими составляет 81,7 %, из них балантидиями — 18,78 %.

Гельминты, представленные 1 видом трематод (Opisthorchis felineus), 1 видом цестод (Hymtnolepis папа) и 1 видом нематод (Ascaris iumbrieoides), выявлены у 12,18 % обследованных свиней.

Впервые установлено, что балантидии обладают различной степенью вирулентности, показана зависимость дисбиотических изменений в составе микробиоценоза кишечника от степени вирулентности балантидий.

Bacteroides spp. и появлением Escherihia coli с гемолитической активностью и грибов рода Candida.

Практическая значимость работы

Подобранная оптимальная питательная среда для культурального метода диагностики балантидиаза позволяет дополнить имеющиеся сведения о влиянии В. coli на межмикробные взаимодействия в кишечнике свиней, что обоснованно указывает на необходимость широкого внедрения в ветеринарную практику методов выделения и идентификации В. coli.

По материалам диссертационной работы опубликованы «Методические рекомендации по межмикробным взаимодействиям в кишечнике свиней при инвазии Balantidium coli» для студентов старших курсов, аспирантов, специалистов микробиологических лабораторий, рекомендованные редакционно-издательским советом и одобренные Ученым советом естественно-географического факультета (протокол № 10 от 23 апреля 2010 г.), монография «Экологические параметры микробиоты кишечника при протозойных инвазиях» (в соавторстве с H.A. Ильиной, Н.М. Касаткиной, Н.И. Потатуркиной - Нестеровой, Ю.Ю. Красноперовой, 2009). Результаты диссертационной работы используются в учебном^ процессе при чтении лекций по микробиологии, паразитологии и экологии микроорганизмов, проведении лабораторно-практических занятий и написании дипломных работ в Ульяновском государственном педагогическом университете имени И.Н. Ульянова.

Основные положения, выносимые на защиту:

3. Балантидиазная инвазия сопровождается значительными изменениями количественных показателей основных эндосимбионтов толстого кишечника животных и увеличением частоты встречаемости представителей транзиторной микрофлоры.

5. Межмикробные взаимодействия в кишечнике свиней в условиях инвазии балантидиями характеризуются изменениями, проявляющимися в снижении доминирования и значимости основных симбионтов и увеличении частоты встречаемости транзиторной микрофлоры, свидетельствующие о смене абсолютных доминант микробоценоза.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на: Международной научной конференции «Современные наукоемкие технологии» (Италия, о. Тенерифе, 2008), III Международной научно-практической конференции «Образование и здоровье. Экономические, медицинские и социальные проблемы» (Пенза, 2008), Международном Форуме по проблемам науки, техники и образования. III тысячелетие - новый мир (Москва, 2008), Всероссийской заочной электронной научной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва,

2008), Международной научной конференции «General practitioner» (Италия,

2009), Международном Форуме по проблемам науки, техники и образования. III тысячелетие - новый мир (Москва, 2009), Международном молодежном научном форуме «Университетское образование: традиции и инновации» (Ульяновск, 2010), III Всероссийской научно-практической конференции «Экология и здоровье: проблемы и перспективы социально-экологической реабилитации территорий, профилактики заболеваемости и устойчивого развития» (Вологда, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Карпеева, Евгения Александровна

ВЫВОДЫ

1. Выявлено 11 видов кишечных паразитов свиней г. Ульяновска и Ульяновской области, из которых 8 видов представлены простейшими и 3 вида - гельминтами. Видовой спектр простейших включает инфузории (Balantidium coli), саркодовые (Blastocystis sp., Е. hartmanni, Е. coli, Endolimax nana, Iodamoeba butschlii), жгутиковые {Lamblia intestinalis) и кокцидии {Cryptosporidium parvum). Инвазированность свиней простейшими составляет 81,7 % , балантидиями - 18,78 %.

2. Установлена типичная морфология in vivo выделенных Balantidium coli; при культивировании на среде Суреша отмечено увеличение количества инфузорий с максимальными размерами с 11,5 до 26,3 % и уменьшение — с минимальными до 11,3 %. Определена разная степень вирулентности у 60,4 % идентифицированных балантидий.

3. Обнаружено, что при балантидиазе свиней происходит значительное снижение содержания облигатной микробиоты толстой кишки на фоне -увеличения микробного числа транзиторных видов, что свидетельствует о глубоких дисбиотических изменениях данного биотопа.

4. Выявленный дисбиоз кишечника имел более выраженный характер при инвазии балантидиями с высокими показателями вирулентности LD5o / lg (5,6±0,9-6,7±0,8 мк/мл), выделение авирулентных простейших сопровождалось незначительными изменениями микробоценоза.

5. Балантидиаз у свиней сопровождался полным доминированием Escherichia spp. (С=90,5 %), широким диапазоном анаэробных бактерий {Bifidobacterium spp. (С=87,2 %), Lactobacillus spp. (С=79,8 %) и Bacteroides spp. (С=63,5 %). К этой же группе относились Candida spp. (С=55,5 %) и Enterococcus spp. (С=57,6 %), которые у животных без инвазии не входили в группу доминирующих микроорганизмов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Под нормальной микрофлорой понимают совокупность множества симбиоценозов, характеризующихся определенным составом и занимающих тот или иной биотоп в макроорганизме. Учитывая определенное постоянство микробиоценоза в норме и его высокую чувствительность к изменениям внешней и внутренней среды нормальную микрофлору можно рассматривать как индикатор здоровья. Основным общепринятым индикатором микробиоценоза является нормальная микрофлора кишечника (Шептулин, 1999; Горская с соавт., 1995; Григорьев, Яковенко, 2000).

При воздействии дестабилизирующих факторов микрофлора реагирует количественными и качественными сдвигами в популяциях микроорганизмов (Костюк, 1998). Например, микробиота меняется при недостаточной ферментативной активности, голодании, авитаминозе, развитии патологических процессов, на фоне кишечных инфекций. Состояние нарушения нормофлоры обозначается термином «дисбактериоз» (Красноголовец, 1989; Крамарь с соавт., 1993; Артемова, Яковлев, Кравец, 1999).

В результате снижения индигенной анаэробной флоры (бифидобактерий и лактобактерий), участвующей в обеспечении; колонизационной резистентности кишечника, нарушается контроль за количественным и качественным составом всей микрофлоры, что проявляется в повышении содержания лактозонегативных и гемолитических кишечных палочек,' доминировании патогенных и условно-патогенных представителей семейства Enterobacteriaceae, а также стафилококков и грибов рода Candida (Барановский, Кондрашин, 2000).

Дисбиоз отрицательно влияет на течение физиологических процессов и общую реактивность организма. Это создает предрасположенность для развития заболеваний (Шендеров, 1994).

Макроорганизм — это экологическая ниша для множества разнообразных микроорганизмов, заселяющих его биотопы. Они составляют микробиоценозы, представляющие собой сложные системы, которые отличаются не только чрезвычайной многокомпонентностью, но и количественным разнообразием входящих в них представителей микрофлоры. При этом макроорганизм представляется открытой системой, в которую постоянно извне поступают разнообразные микроорганизмы, в то же время, он сам служит источником их поступления в окружающую среду (Несвижский с соавт., 2002).

При физиологической норме организм животных содержит сотни видов бактерий, а также вирусов и простейших, составляющих в сумме нормальную микрофлору (Акбаева, 1998).

В настоящее время, с нарастающим неблагополучием экологической ситуации в России, обострились многие проблемы, в частности, кишечных, паразитозов (Онищенко, 2000; Онищенко, Самошкин, 2002). Регионы со значительным поражением паразитами приравниваются к зонам экологического бедствия. Известно, что кишечные паразиты оказывают выраженное действие на макроогрганизм, они снижают и угнетают формирование и сохранение иммунитета.

• Литературные данные и результаты собственных исследований свидетельствуют, что паразитарная колонизация^ представляет собой' сложное многофакторное явление. (Коршунов, . 1995; Корнева, 1999). Изучение паразитофауны кишечника свиней с применением диагностической системы КТ-ФЭО-МЦН показал высокую зараженность кишечными паразитами обследованных животных, однако, инвазированность простейшими и гельминтами была не одинакова. Так, простейшие, были выявлены, у 81,7 % свиней, тогда как гельминты — у 12,2 % животных, 6,1 % из обследованных были не инвазированы.

Получены новые данные, отражающие богатое видовое разнообразие паразитофауны кишечника обследованных животных. Выявлено 11 видов кишечных паразитов, из них 8 видов — простейшие. Они были представлены: саркодовые — Blastocystis sp, Е. hartmanni, Е. coli, Endolimax nana, Iodamoeba butschlii, жгутиковые. — Lamblia intestinalis, инфузории - Balantidium coli и кокцидии — Cryptosporidium parvum. Из 4 видов гельминтов обнаружены 1 вид трематод: Opisthorchis felineus, 1 вид цестод: Hymtnolepis nana, 1 вид нематод: Ascaris lumbricoides. Инфузории Balantidium coli также занимают значительное место в паразитоценозе свиней, они были выявлены у 18,78 % обследованных животных.

При оценке паразитоценоза кишечника обследованных в ряде случаев выявлены ассоциации разных видов паразитов: двухчленные ассоциации -Blastocystis sp. (46,19 %) - Lamblia intestinalis (37,06 %), Balantidium coli (18,78 %) - Blastocystis sp. (46,19 %), Balantidium coli (18,78 %) - Candida spp. (7,39 %). Следовательно, чаще всего паразитоценоз был представлен сочетанием простейших с инфузориями (17,21 %), с простейшими (17,67 %), с Candida spp. (21,27 %) и гельминтами (13,41 %), реже сочетанием гельминтов с гельминтами (0,42 %). Кроме того, встречались трехчленные ассоциации: Lamblia intestinalis (37,06 %) — Balantidium coli — Candida spp. (7,39 %), протозойно-гельминто-грибковые (7,81 %).

Обращает на себя внимание высокая встречаемость дрожжеподобных грибов. Достоверно возрастает зараженность грибами в сочетании с одним и двумя-видами паразитов, чаще с простейшими (р<0,0001; р=0,005).

В ходе работы была изучена морфология выделенных простейших Balantidium coli. Установлено, что в препаратах, приготовленных из фекалий свиней, размеры обнаруженных балантидий имели значительные различия.

Наиболее часто (71,8 %) в исследуемом материале встречались балантидии величиной 67,4±10,6х81,2±14,6 мкм. Минимальные размеры (40,6±19,7х51,3±12,3 мкм) встречались в 16,7 % случаев, максимальные показатели (99,6±23,3*114,2±17,5 мкм) отмечены у 11,5 % инфузорий.

После культивирования на искусственной питательной среде Суреша (СЕМ) размеры инфузорий изменялись, увеличилось количество крупных клеток и уменьшилась численность мелких балантидий. Так, количество балантидий с минимальными размерами уменьшилось до 11,3 %, с максимальными размерами увеличилось до 26,3 %. Количество простейших со средними размерами после культивирования составило 62,4 % (была 71,8 %).

Проведенные исследования показали, что во всех случаях балантидии имели типичное строение. В нативном препарате обнаруживались вегетативные формы балантидий, которые быстро передвигались, вращаясь вокруг продольной оси. Тело инфузорий имело яйцевидную форму, передний конец более узкий, несколько сплющенный.

Вся поверхность тела покрыта продольными рядами ресничек, мерцание которых хорошо заметно по краям клетки. На переднем конце имеется воронкообразное углубление — перистом. Цитоплазма разграничена на тонкий поверхностный слой — эктоплазму и внутреннюю мутную зернистую непрозрачную массу - эндоплазму. На ее фоне в центре тела или ближе к одному из его концов, в ряде случаев, определяется бобовидной формы ядро -макронуклеус.

В эндоплазме видны сократительные вакуоли, локализованные на переднем и заднем концах тела, и заглоченные пищевые частицы.

В препаратах, полученных из инфузорий после их культивирования, наблюдали деление простейших, они имели гантелевидную форму, в то время как микроскопия нативного материала- редко выявляла клетки в процессе деления.

С целью диагностики балантидиаза в основном пользуются микроскопическим методом и редко- применяют культуральный, который, как известно, значительно повышает эффективность диагностики (Сахарова, 1997).

Для получения культур простейших используют двухфазную питательную среду Зиерта, среду Павловой (Zierdt, 1988; Белова, 1992), среду Райса (Карпищенко, 2002). К.Т. Мое (1997) получал культуры бластоцист на среде Джонса, К. Suresh (1993) использовал три среды: ЕМ, СЕМ, ТЕМ.

С целью выявления оптимальной питательной среды для культивирования В. coli мы произвели посевы фекалий на все указанные питательные среды. Полученные результаты показали, что оптимальной средой для культивирования является среда Суреша (СЕМ) (Suresh, 1993), так на ней балантидии давали рост в- наиболее ранние сроки. Поэтому в дальнейшей работе для культивирования В. coli мы использовали именно эту питательную среду.

Следующим этапом работы было определение степени вирулентности В. coli, выделенных у обследованных животных, так как от этого свойства зависит способность простейших вызывать развитие патологического процесса. В то же время, до сих пор определению их вирулентности не придавали значения, и этот аспект биологической активности балантидий оставался не изученным.

В связи с этим у выделенных балантидий определяли Dosis letalis 50 (LD50), вызывавшей гибель 50 % мышей, зараженных внутрибрюшинно взвесью В. coli. Проведенные исследования показали, что из 197 изолятов балантидий, только 119 (60,4 %) вызывали гибель мышей, причем показатель LD50, выраженный в lg у этих культур варьировал от2,6±0,7 до 6,7±0,4 мк/мл.

В зависимости от величины этого показателя все вирулентные штаммы были разделены на 3 группы. Вирулентность изолятов 1 группы была слабо выражена, LD50/lg штаммов этой группы (20 культур) составляла 2,6±0,7L 3,9±0,4 мк/мл. Вирулентность балантидий, включенных во 2 группу (46 культур), была несколько выше и LD50/lg равнялась 4,0±0,6-5,5±0,7 мк/мл. В 3 группе (53 культуры) этот показатель еще более увеличивался и составлял 5,6±0,9-6,7±0,5 мк/мл.

Анализ литературных данных и собственных исследований свидетельствуют о том,- что микрофлора кишечника является индикатором состояния макроорганизма и при снижении защитных сил наблюдаются изменения микробоценоза (Гаврилова, 1987; Крамарь с соавт., 1993; 1994; Бондаренко с соавт., 1995; 1998; Бухарина, 2002).

Нарушения микробоценоза кишечника протекает по общим закономерностям — в результате снижения индигенной анаэробной флоры (Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp.), участвующей в обеспечении колонизационной резистентности кишечника, нарушается контроль за количественным составом всей микрофлоры, что проявляется- в повышении содержания гемолитических кишечных палочек, доминировании патогенных и условно-патогенных представителей семейства Enterobacteriaceae, а также Staphlococcus spp. и Candida spp. (Билибин, 1961; Красноголовец, 1989; Крылов, Козлович; Решетнева, 1994; Kleessen et al., 1995; Федянин, 1997; Багрянцева, 1999; Барановский, Кондрашин, 2000).

Последние, при снижении резистентности макроорганизма могут проявлять свою патогенность. Это создает предрасположенность для развития инфекционных и соматических заболеваний (Веселова, 1988; Ван-дер-Ваай, 1992; Шендеров, 1994; Вертиев, 1996).

Следующим этапом работы явилось изучение микробиоты у инвазированных и неинвазированных свиней.

Обнаружение В. coli во всех случаях сопровождалось различной степенью выраженности дисбиотических изменений микробиоты кишечника. Полученные нами результаты свидетельствуют о широкой распространенности в микробиоте кишечника здоровых животных аэробных микроорганизмов, что согласуется с данными А.А. Воробьева с соавт. (1995; 1996). Несмотря на то, что нормофлора на 98 % состоит из; строго анаэробных видов, а все аэробы составляют 2 %, доминирующее положение- кишечных палочек в микробиоценозе позволяет использовать данный микроорганизм как индикатор при изучении микробиоты в норме и при патологии.

В связи с широким спектром патологических состояний, связанных с нарушением микробоценоза, следующим этапом работы явилось изучение микробиоты кишечника свиней неинвазированных и инвазированных балантидиями.

Исследования проводили определяя количественный и качественный состав бактериальных сообществ с последующей идентификацией пространственной структуры и иерархии экологических групп.

Исследования микробоценоза неинвазированных животных показали, что представители нормальной микробиоты кишечника Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp. и кишечные палочки присутствовали у всех животных

100 %), Bacteroides spp. — только у 68,1 %, представители других таксонов встречались реже.

Плотность колонизации кишечника у изученных таксонов значительно колебалась. У неинвазированных животных идентификация выделенных микроорганизмов показала, что доминирующее положение среди анаэробной флоры по частоте встречаемости и по плотности колонизации, занимали представители нормофлоры, такие как Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. и Bacteroides spp.

Анализ кишечной микробиоты выявил значительное количество Lactobacillus spp. (100,0 %), их плотность колонизации составляла 8,2+1,8 lg КОЕ/г.

Также часто обнаруживались Bifidobacterium spp. (100,0 %), средняя арифметическая величина обсемененности была весьма значительной (8,9±2,1 lg КОЕ/г).

Среднее содержание Bacteroides spp. в кишечнике неинвазированных животных равнялось 10,6+3,7 КОЕ/г, они были обнаружены у 68,1 % обследуемых. Е. coli были обнаружены у всех обследуемых (100 %) при плотности колонизации 7,9±2,6 lg КОЕ/г.

Из фекалий свиней достаточно часто высевались .и другие энтеробактерии (26,3 %). Выявлено высокое содержание Proteus spp. (3,8±0,7 lg КОЕ/г), в' меньшем количестве обнаруживали Klebsiella spp.{ 2,9±0,9 lg КОЕ/г). Достаточно часто в фекалиях обнаруживались представители рода Staphylococcus spp., которые были выделены у 16,4 % животных; при этом в 65 % случаев это был S. epidermidis и значительно реже - S. aureus (13,7 %), на долю остальных видов стафилококков приходилось 21,3 %, Enterococcus spp.{5,3±1,9 lg КОЕ/г). У каждого четвертого обследованного животного выявлены грибы рода Candida (22,5 %). Их присутствие было весьма незначительным, средняя арифметическая величина составила 3,9±1,3 lg КОЕ/г.

Полученные результаты свидетельствуют о широкой распространенности в микробиоценозе кишечника обследованных животных при отсутствии паразитарных инвазий анаэробных микроорганизмов.

Наличие балантидиазной инвазии во всех случаях сопровождалось различной степенью выраженности дисбиотических изменений микробиоты кишечника. Анализ полученных данных позволил идентифицировать 396 штаммов микроорганизмов и отнести их к 9 родам.

Наиболее выраженные изменения зафиксированы со стороны анаэробной флоры: снижение частоты встречаемости Bifidobacterium spp. до 61,76 % и показателя плотности колонизации до lg 7,7±0,03 КОЕ/г.

Количественное содержание Lactobacillus spp. и Bacteroides spp. также претерпевает значительные изменения в 36,4 % и 65,07 % случаев соответственно. Показатели уровня содержания данных микроорганизмов составили lg 7,3±0,04 КОЕ/г и lg 8,5+0,04 КОЕ/г.

Дефицит Escherichia spp. был зарегистрирован в 44,49 % случаев. Наряду с этим, характерным микроорганизмом для микропейзажа кишечника обследованных животных являлось появление кишечной палочки с гемолитическими свойствами. Частота обнаружения данных бактерий составила 44,12 %, со средним значением lg 5,7+0,2 КОЕ/г.

Анализируя состав микрофлоры кишечника свиней при балантидиазе, следует отметить резкое возрастание как количества высеваемых микроорганизмов, так и частоты, их обнаружения. Установлено, что доминировали энтеробактерии (62,7 % случаев выделения), со средним микробным числом 6,4+0,4 lg КОЕ/г. Содержание Proteus spp. составило 5,8±0,8 lg КОЕ/г, Klebsiella spp. - 6,4±1,2 lg КОЕ/г. Грибы рода Candida выявлялись в 49,8 % проб, обсемененность ими кишечника свиней была высокой и составляла 6,7±0,9 lg КОЕ/г. Довольно часто выявлялись Enterococcus spp. (49,5 %), при этом средняя арифметическая величина обсемененности была весьма значительной (6,9±0,8 lg КОЕ/г). Staphylococcus spp. обнаруживались в 27,2 % проб в количестве 4,7±1,1 lg КОЕ/г. г

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что в условиях инвазии балантидиями происходит значительная колонизация кишечника свиней транзиторными микроорганизмами на фоне снижения содержания представителей облигатной микрофлоры.

Выявленные дисбиотические изменения микробиоты кишечника свиней, и н Базированных балантидиями, представляли интерес для определения зависимости выраженного дисбиоза от степени вирулентности данных простейших. С этой целью была исследована микробиота кишечника у трех групп инвазированных животных с различной степенью вирулентности балантидий.

Нарушения содержания облигатной микрофлоры были выявлены у животных всех 3 групп однако, показатели плотности колонизации были различны. При инвазии простейшими со слабо выраженной вирулентностью (1 группа) изменения в составе микробиоты были наименее выражены.

Для животных этой группы было характерно незначительное снижение количественных показателей содержания Bifidobacterium spp. до 8,7±1,5 lg КОЕ/г (у здоровых 8,9±2,1 lg КОЕ/г; р>0,05), Lactobacillus spp. до 8,1 ±1,3 lg КОЕ/г (у здоровых 8,2±1,8 lg КОЕ/г; р>0;05), Bacteroides spp. до 1 ОД ±0,9 lg КОЕ/г (у здоровых 10,6±3,7 lg КОЕ/г; р>0,05) и кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью до 7,7±0,5 lg КОЕ/г (у здоровых 1,9+2,6 lg КОЕ/г; р>0,05). Отмечалось также незначительное повышение количественного показателя Enterococcus spp. (3,9±0,6 lg КОЕ/г; в контроле 3,6±1,2 lg КОЕ/г; р>0,05).

КОЕ/г (7,9±2,6 lg КОЕ/г; р<0,05) и Bacteroides spp. до 8,2±0,9 lg КОЕ/г (10,6±3,7 lg КОЕ/г; р<0,05).

На фоне количественного дисбаланса микрофлоры выявлялись и значительные изменения ее качественного состава. Помимо снижения содержания кишечной палочки с нормальной ферментативной активностью наблюдалось появление гемолизирующих эшерихий, показатель их колонизационной активности составил 3,2±1,9 lg КОЕ/г. Уровень содержания Proteus spp. составил 5,5±0,7 lg КОЕ/г (р<0,05), Klebsiella spp. — 4,2±0,8 lg КОЕ/г (р<0,05), Enterococcus spp. - 4,7±1,0 lg КОЕ/г (р<0,05), Staphylococcus spp. - 6,0±0,4 lg КОЕ/г (р<0,05) и Candida spp. - 3,3±0,1 lg КОЕ/г (р<0,05). Следовательно, у животных 2 группы, как показали исследования, дисбиотические изменения микробиоты были более выражены. Это проявлялось не только снижением содержания представителей нормобиоты, но и повышением плотности колонизации условно-патогенной микрофлоры.

У свиней 3 группы - выраженность дисбиотических изменений нарастала. Это проявлялось в еще большем снижении содержания нормобиоты и повышению массивности обсеменения условно-патогенными микроорганизмами. Показатели содержания постоянной микробиоты уменьшались у Bifidobacterium spp. до 7,4±0,4 lg КОЕ/г (р<0,05), у Lactobacillus spp.- до 5,6±1,1 lg КОЕ/г (р<0,05), Escherichia spp.- до 6,4±2,0 lg КОЕ/г (р<0,05) и Bacteroides spp. - до 7,5±1,6 lg КОЕ/г.

Снижение участия в микробоценозе кишечника представителей нормобиоты сопровождалось повышением колонизационной активности условно-патогенной микрофлоры. Так, уровень содержания гемолитической Е. coli увеличивался до 5,7± 1,8 lg КОЕ/г (у здоровых отсутствовала), Proteus spp. - до 6,8±0,9 lg КОЕ/г (р<0,05), Klebsiella spp. - до 6,3±2,1 lg КОЕ/г (р<0,05), Enterococcus spp. - до 5,2±1,7 lg КОЕ/г (р<0,05) Staphylococcus spp. - до 6,9±1,8 lg КОЕ/г (р<0,05) и Candida spp. - до 6,2±2,4 lg КОЕ/г (р<0,05).

Анализ полученных результатов показал, что дисбиотические сдвиги в составе микробиоценоза кишечника животных находятся в зависимости от степени вирулентности выделенных балантидий и затрагивают как аэробный, так и анаэробный его компоненты. Характерным для, выявленного дисбиоза является снижение колонизационной активности представителей нормобиотьги увеличение количества условно-патогенных микроорганизмов, очень часто ассоциаций нескольких видов.

Полученные результаты указывают на тесную взаимосвязь вирулентности балантидий при их инвазии, с одной стороны, и состояния кишечного микробоценоза - с другой.

В исследованиях для оценки качественных и количественных параметров микробиоценоза используют показатели, принятые в теоретической экологии (Ленцнер, 1964; Куваева, 1976; Куваева, Ладодо, 1991; Шендеров, 1994; Пальцев, 2002;). Для выяснения структуры симбиотических взаимоотношений были изучены индексы постоянства различных таксонов, формирующих микрофлору кишечника при инвазии балантидиями.

Характеристика частоты встречаемости и колонизации микроорганизмов еще не дает полного представления о конкретном микробиоценозе.

С этих позиций необходимо . произвести сравнительный анализ межмикробных взаимодействий в кишечнике обследованных свиней в условиях балантидиазной инвазии и без нее:

Полученные нами данные свидетельствуют о широкой колонизации кишечника различными микроорганизмами. Однако, по мнению И.А. Сытникова (1989), не все участники микробиоценоза играют одинаковую роль в определении его природы и функции. Лишь относительно немногие виды оказывают определенное воздействие на микробиоценоз. Именно они определяют ход биоценотических процессов и составляют основу микроэкосистемы (Сытник, 1991).

Особенности межмикробных взаимодействий в кишечнике свиней характеризовали используя показатели индекса постоянства, индекса контагиозности, индекса значимости.

Анализ индекса постоянства микроорганизмов у свиней без паразитарной инвазии показал абсолютное доминирование Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp., Escherichia spp. (C= 100,0 %, 100,0 % и 100,0 % соответственно). К этой же группе микроорганизмов относились, и Bacteroides spp. (065,0 %).

В добавочную группу входили Candida spp. с показателем С=21,8 %. Транзиторную группу представителей микробоценоза кишечника составляли представители семейства Enterobacteriaceae и Staphylococcus spp. (С=19,6 % и 14,8 % соответственно).

При инвазии доминирующими видами в кишечной микробиоте свиней, инвазированных балантидиями, являются Escherichia spp., Bifidobacterium spp. и Lactobacillus spp. (C=90,5 %; 87,2 % и 79,8 % соответственно), а также Bacteroides spp. (C=63,5 %) (табл. 8). К этой же группе относились Enterococcus spp. (С= 57,6 %) и Candida spp. (С=55,5 %), которые у животных без инвазии не входили в группу доминирующих микроорганизмов.

Изменение иерархии отмечали также в структуре транзиторных видов. Было показано, что ценотип кишечника свиней, инвазированных балантидиями, формируют представители нормальной микрофлоры: Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp., а также Enterococcus spp. и Candida spp. Появление в группе резидентных видов Enterococcus spp. и Candida spp. в ассоциации с предствителями нормальной микробиоты (Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp.) свидетельствует о развитии дисбиоза кишечника. Анализ ценотипа инвазированных животных показал, что его изменения имеют последовательный характер и проявляются на уровне экосистемы.

Распределение видов в пространстве определяли с помощью индекса контагиозности (Уиттекер, 1980), который характеризуется коэффициентом вариации. При инвазии балантидиями выявлено достоверное повышение степени контагиозности Bifidobacterium spp. до 2,9±0,4; Lactobacillus spp.

2,5±0,5, кишечных палочек — 1,8±0,6 и Bacteroides spp. — 1,6±0,5. У неинвазированных животных данные показатели составили 0,6±0,4; 0,8±0,3; 0,7±0,3 и 0,3±0,3 соответственно.

Для представителей условно-патогенной флоры при инвазии; балантидиями данный показатель был, напротив, снижен. Так, для Enterococcus spp. он составил 0,5±0,3, Candida spp. 0,6±0,2; Staphylococcus spp. 0,3+0,2; у Klebsiella spp. 0,2±0,2 и Proteus spp. 0,3±0,1, в группе неинвазированных животных данный показатель составил 0,9±0,3; 1,6+0,4; 0,9±0,3; 0,6±0,3 и 0,8±0,2 соответственно. Полученные данные свидетельствуют о нарушении контагиозности основных симбионтов кишечной микрофлоры - Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Bacteroides spp. и Escherichia spp.

Уменьшение значений контагиозности условно-патогенных представителей в микробиоценозе кишечника у животных при, инвазии балантидиями по сравнению с группой неинвазированных свиней приводит к освобождению экологических ниш, успешно занимаемых транзиторной флорой, в результате чего индекс контагиозности ее' представителей уменьшается. Данное соотношение выявляет диспропорцию участия в горизонтальной структуре экосистемы кишечника при инвазии балантидиями основных симбионтов и представителей транзиторной флоры.

Оценку представителей нормальной микрофлоры и условно-патогенных микроорганизмов у инвазированных и неинвазированных свиней проводили с помощью индекса значимости; предложенного' М.П. Наткевичайте -Иванаускене (1985).

Наиболее значимыми в группе неинвазированных животных были представители облигатной микробиоты'. Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp. Так, показатель значимости для Bifidobacterium spp. составил 28,4 %, Lactobacillus spp. 27,9 %, Escherichia spp. 24,6 % и Bacteroides spp. 22,6 %, что значительно превышало аналогичные показатели у инвазированных.

В группе животных с балантидиазом у Bifidobacterium spp. он уменьшился до 11,6 %, у Lactobacillusf spp. до 12,6 %, у Escherichia spp. до 15,3 % и Bacteroides spp. до 16,3 %.

Следовательно, уменьшение значимости этими бактериями своего доминирующего положения привело к увеличению значимости условно-патогенных микроорганизмов. В то же время, при балантидиазе происходило значительное увеличение значимости представителей условно-патогенной флоры. Наибольший индекс значимости был для Enterococcus spp. (24,6 %), Candida spp. (18,2 %) и Klebsiella spp. (17,1 %).

Следовательно, изучение межмикробных взаимодействий в кишечнике свиней с балантидиазом показало, что в данной группе происходят компенсированные качественные и количественные сдвиги кишечного микробоценоза. Это проявляется увеличением общей бактериальной плотности и частоты встречаемости условно-патогенных микроорганизмов на фоне снижения доминирования основных микробов кишечника, прежде всего Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp.

В доминантном составе ценотипа при инвазии балантидиями появились Candida spp., тогда как в группе интактных животных они входили в состав добавочных видов.

Изменение иерархии отмечали также в структуре транзиторных видов, среди которых появились представители рода Klebsiella spp. Иерархические сдвиги проявлялись также в том, что Staphylococcus spp. при инвазии вошли в состав добавочных видов кишечного микробоценоза, тогда как в группе неинвазированных свиней они встречались только в составе транзиторной микробиоты. Следовательно, ценотип кишечника при балантидиазе формирует ассоциация представителей нормальной микрофлоры: Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., Escherichia spp. и Bacteroides spp., с Enterococcus spp. и Candida spp., что свидетельствует о развитии дисбиоза кишечника.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Карпеева, Евгения Александровна, Ульяновск

1. Алимов, А.Ф. Разнообразие, сложность, стабильность, выносливость экологических систем / А.Ф. Алимов // Журнал общая биология. — 1994. -Т. 55, №3.-С. 285.

2. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека / Ю.В. Несвижский и др. // Вестник Российской академии медицинских наук. 2002. — № 3. - С. 23-25.

3. Ардатская, Н.Д. Дисбактериоз кишечника: современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения / Н.Д. Ардатская, A.B. Дубинин, О.Н. Минушкин // Тер. архив. 2001. - № 2. - С. 67-72.

4. Артемова, Т.М. Дисбактериоз: патогенетический признак или заболевание? / Т.М. Артемова, A.A. Яковлев, П.Л. Кравец // Вопросы охраны материнства и детства. 1999. - Т. 36, № 9. - С.64-66.

5. Багрянцева, О.В. Дисбактериоз у детей с заболеваниями желудочно-кишечного тракта / О.В. Багрянцева // Педиатрия. 1999. — № 9. - С. 73-77.

6. Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальных инфекций / B.C. Костюк и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии^и иммунологии. 1998. — № 10. — С. 19-22.,

7. Бактериологическая диагностика дисбактериоза: методические рекомендации для врачей-курсантов. — Казань, 1989. — 30 с.

8. Баранова, A.M. Эволюция инфекционных болезней в России в XX веке / A.M. Баранова, М.Н. Лебедева, В.П. Сергиев // Малярия; под ред. В.И. Покровского, Г.Г. Онищенко, Б.Л. Черкасского. М.: Медицина, 2003. - С. 412-432.

9. Барановский, А.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника / А.Ю. Барановский, Э.А. Кондрашин. СПб.: Питер, 2000. - 209 с.

10. Беклемишев, В.Н. Биоценологические основы сравнительной паразитологии / В.Н. Беклемишев. М.: Сов. Наука, 1956. - 432 с.

11. Белова, JI.M. Мировая фауна и морфофункциональная организация бластоцист / Л.М. Белова // Труды ЗИН РАН. 1992. - Т. 224. - 53 с.

12. Бельмер, C.B. Рациональная терапия дисбактериоза кишечника у детей / C.B. Бельмер, Т.В. Гасилина // Клиническая медицина. 1998. — № 10. - С. 35-39.

13. Беляков, В. Д. Саморегуляция паразитарных систем / В.Д. Беляков, Д.Б. Голубев. Л., 1987. - 240 с.

14. Библии, А.Ф. Дисбактериозы кишечника / А.Ф. Библии // Болезни желудка и кишечника: справочное пособие. М.: Высшая школа, 1961. - С. 99-109.

15. Билимова, С.И. Характеристика факторов персистенции энтерококков / С.И. Билимова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -2000.-№4.-С. 104-105.

16. Биологическая характеристика штаммов лактобацилл, перспективных в качестве эубиотиков / Е.М. Горская, H.H. Лизько, A.A. Ленцнер, К.Г. Трофомиов, П.С. Плющева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1995. - № 3. - С. 17-20.

17. Бластоцистозная инвазия и дисбиоз кишечника / H.A. Ильина и др. // Актуальные вопросы инфекционной патологии: материалы Всероссийской научной конференции молодых учёных с международным участием, — СПб., 2006 С. 36.

18. Бондаренко, В.М. Антилизоцимная активность как генетически контролируемый фактор патогенности энтеробактерий / В.М. Бондаренко, А.Л. Яблочков // Персистенция микроорганизмов. — Куйбышев, 1987. — С. 85-89.

19. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич. M.: КМК, 2003. - 224 с.

20. Бондаренко, В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская // Вестник Российской академии медицинских наук. — 1997. — № 3. — С.7-10.

21. Бондаренко, В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса / В.М. Бондаренко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1999. - № 5. — С. 34-39.

22. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов, A.M. Смирнов. М.: Медицина, 1994. - 528 с.

23. Бочков, И.А. Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальных инфекций / И.А. Бочков, Н.М. Овчарова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1991. -№ 10.-С. 19-22.

24. Буторова, Л.И. Возможности коррекции нарушения кишечного микробиоценоза лактулозой / Л.И. Буторова, A.B. Калинин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии — 2001. — №1. — С. 79-83.

25. Бухарин, О.В. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Теоретическая и прикладная иммунология: Тез. докл. I Всесоюзной конференции. М., 1982:-С. 87-88.

26. Бухарин, О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий / О.В. Бухарин // Микробиология. 1994. —№ 5 (приложение). - С. 4-13.

27. Бухарин, О.В. Механизмы бактериальной персистенции. Персистенция. бактерий / Под. ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1990. - С. 5-14.

28. Бухарин, О.В. Персистенция бактерий: Актовая речь / О.В. Бухарин. -Оренбург, 1992. 32 с.

29. Бухарин, О.В. Способ определения антиинтерфероновой активности микроорганизмов / О.В. Бухарин, В.Ю. Соколов // A.c. СССР. -№ 1564191,1993.

30. Бухарина, С.П. Дисбактериоз кишечника / С.П. Бухарина // Медицинская помощь. 2002. - № 2. - С. 58-60.

31. Ван-дер-Ваай, Д. Пищеварительный тракт как главный, эндогенный источник бактериальных и грибковых инфекций. Важность поддержанияколонизационной резистентности / Д. Ван-дер-Ваай // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т. 37, № 6. - С. 36-41.

32. Вертиев, Н.Д. Дисбактериоз кишечника в клинике соматических заболеваний / Н.Д. Вертиев // Врач. 1996. - № 11. - С. 18-19.

33. Веселова, Ю.Н. Клиника и лечение дисбактериоза кишечника / Ю.Н. Веселова // Клиническая медицина. 1988. - Т. 75, № 7. - С. 47-49.

34. Воробьев, A.A. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции / A.A. Воробьев, Е.А. Лыкова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1999. — № 6. — С. 102105.

35. Воробьев, A.A. Формирование микробиоценоза кишечника у новорожденных в норме и при антибиотикотерапии / A.A. Воробьев // Микробиология. 1997. - № 10: - С. 48-53.

36. Гаврилова, А.Ю. Лактофлора и колонизационная резистентность / А.Ю. Гаврилова // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. -Т. 32, №3, - С. 173-179.

37. Генис, Д.Е. Медицинская паразитология / Д.Е. Генис. — М.: Медицина, 1979.-344 с.

38. Гончарик, И.И. Болезни желудка и кишечника: справочное пособие / И.И. Гончарик. Минск, 1994. - 160 с.

39. Горохов, В.В. К проблеме экологии гельминтов / В.В. Горохов // Эколого— биологические и фаунистические аспекты гельминтозов: Тез. докл. науч. конф., Ереван, 20-22 мая 1991 г. М., 1991. - С. 32-33.

40. Григорьев, П.Я., Яковенко Нарушение нормального состава кишечной микрофлоры, клиническое значение и вопросы терапии: методическое пособие. М., 2000. - 15 с.

41. Дерябин, Д.Г. Роль персистентных характеристик возбудителя в определении затяжного течения гнойно-воспалительного процесса / Д.Г. Дерябин, П.П. Курлаев, Ю.А. Брудастов // Микробиология. 1996. - №3. -С. 74-77.

42. Дерябин, Д.Г. Способность к инактивации факторов естественной резистентности в биологии и экологии стафилококков: автореф. дис. . д-ра. мед. наук. / Дерябин Д.Г. Челябинск, 1997. - 42 с.

43. Дисбактериоз / В.М. Бондаренко и др. — М., 1997. — 22 с.

44. Дисбактериоз. Причины возникновения. Лечение и профилактика / B.C. Крамарь и др.. Ростов - на-Дону, 1988. - 25 с.

45. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта / В.М. Бондаренко и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии — 1998. -№ 1.-С. 66-70.

46. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта / О.Г. Крамарь и др.. — Волгоград, 1994. 28 с.

47. Дисбактериозы у детей: учебное пособие для врачей и студентов / A.A. Воробьев и др.. М., 1999. - 64 с.

48. Дисбиоз / В.М. Бондаренко и др. М., 1995. - 20 с.

49. Дисбиоз кишечника (клиника, диагностика, лечение) / Ю.В. Лобзин и др.. СПб., 2003. - 253 с.

50. Добровольский, О.В. Терапия язвенной болезни и проблемы сохранения микроэкологии желудочно-кишечного тракта / О.В: Добровольский, С.Ю. Сереброва // Российский медицинский журнал. — 2007. — Т. 15, №16. — С. 1193-1198.

51. Догель, В.А. Зоология беспозвоночных / В.А. Догель. 7-е изд. — М.: Высшая школа, 1981. — 606 с.

52. Догель, В.А. Общая паразитология / В.А. Догель. Л:: изд-во ЛГУ, 1962. -463 с.

53. Дорофеев, А.Э. Микробиоценоз толстой кишки у больных неспецифическом язвенным колитом / А.Э. Дорофеев, Ю.В. Несвижский //Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. — № 2. — С. 26-29.

54. Евланов, И.А. Эволюционно-экологические аспекты устойчивости паразитарных систем (на примере паразитов рыб): автореф. дис. . д-ра. биол. наук. / Евланов И.А. М., 1993. - 41 с.

55. Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях. — Страсбург, 18.03.1986.

56. Ефимов, Б.А. Характеристика микроорганизмов, колонизирующих кишечник человека / Б.А. Ефимов, H.H. Волошин, Л.И. Кафарская // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 2002. — № 5. — С. 98-104.

57. Жордания, Т.К. Выявление степени распространения балантидий и амебиаза в Грузии (результаты исследований в высокогорных районах) / Т.К. Жордания //Сборник НИИ медицинской паразитологии им. С.С. Варсаладзе. Тбилиси, 1971.— Т. 3.- квартал 3.- С. 7-15.

58. Жордания, Т.К. Бухташвили В.И. К изучению некоторых вопросов биологии балантидиев / Т.К. Жордания, В.И. Бухаташвили // Сборник НИИ медицинской паразитологии им. С.С. Варсаладзе. — Тбилиси, 1971.- Т. 2. -квартал 2. С. 29-37.

59. Завгородняя, Е.Ф. Итоги и перспективы изучения микрофлоры кишечника детей и взрослых в норме и патологии / Е.Ф. Завгородняя, В.В. Зубова, Л.И. Медведева // Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике.-М., 1983.-С. 181-182.

60. Златкина, А.Р. Кандидоз кишечника как новая проблема гастроэнтерологии / А.Р. Златкина, В.А. Исаков, И.О. Иваников // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии 2001. — № 6. — С. 33-39.

61. Ильина H.A. Паразитоценоз кишечника гастроэнтерологических больных. / H.A. Ильина, Н.М. Касаткина // Современные наукоёмкие технологии.-2008. -№ 1.-С. 34-37.

62. Карпищенко, А.И. Медицинские лабораторные диагностики: справочник /А.И. Карпищенко. СПб.: Интермедика, 2002. - С. 600.

63. Кипайкин, В.А. Эпидемиология / В.А. Кипайкин, Л.А. Рубашкина. -Ростов н/Д.: Феникс, 2002. 480 с.

64. Колиценогенная активность кишечной микрофлоры как показатель дисбиотического состояния желудочно-кишечного тракта / О.В. Бухарин и др. // Микробиология. 2002. - № 4.- С. 55-57.

65. Колонизационная резистентность пищеварительного тракта / О.Г. Крамарь и др.. — Волгоград, 1993. — 18 с.

66. Комаров, Ф. Возвращаясь к язвенной болезни / Ф. Комаров, С. Раппорт // Врач. 2000. — № 3. - С. 9-11.

67. Корнева, Т.К. Дисбактериоз кишечника у проктологических больных: микробиологические аспекты / Т.К. Корнева // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии — 1999. — № 3. — С. 12

68. Корнилова, O.A. О патогенной роли инфузории В. coli / O.A. Корнилова // Функциональная морфология, экология и жизненные циклы животных: сборник научных трудов кафедры зоологии. — СПб, 2004. Вып. 4. — С. 69 -71.

69. Коршунов, В.М. Дисбактериоз сопутствующее заболевание / В. Коршунов // Медицинская газета. — 1995. - № 89. - С. 9.

70. Коршунов, В.М. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника: учеб. пособие для вузов / В.М. Коршунов, H.H. Володин, Е.А. Ефимов. М., 1999. - С. 47-48.

71. Костюкова, Н.И. Методы диагностики дисбактериозов / Н.И. Костюкова и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1996. - № 5. - С. 23-28.

72. Котельников, Г.С. Гельминтологические исследования окружающей среды / Г.С. Котельников. — М.: Росагропромиздат, 1991. 143 с.

73. Красноголовец, В.Н. Дисбактериоз кишечника / В.Н. Красноголовец. -Москва, 1989.-208 с.

74. Краткий определитель бактерий Берджи: пер. с англ. / под ред. Дж. Хоулта. -М.: Мир, 1980.-495 с.

75. Крылов, A.A. Дисбактериоз кишечника (пособие для врачей) / A.A. Крылов, И.В. Козлович, Е.М. Решетнева. СПб.: изд-во СПб. Мед. Академии, 1994. - 24 с.

76. Куваева, И.Б. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей / И.Б. Куваева, К.С. Ладодо. М.: Медицина, 1991.

77. Куваева, И.Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора / И.Б. Куваева. М., 1976. - 248 с.

78. Лабораторные методы исследования патогенных простейших / сост. Е.И.Горден / под. ред. Д.Н.Засухина. М.: Медгиз, 1987. - 264 с.

79. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

80. Лаптева, И.М. История изучения балантидиаза на Украине / И.М. Лаптева // Материалы II Всесоюзного съезда протозоологов. Киев, 1970 - Ч. 2.-С.57-59.

81. Лебедева, Н.В. Биоразнообразие и методы его оценки / Н.В. Лебедева, H.H. Дроздов, Д.А. Криволуцкий. М.: МГУ, 1999. - 94 с.

82. Лебедева, Н.В. География и мониторинг биоразнообразия / Н.В'. Лебедева, Д.А. Криволуцкий, К.Н. Пузаченко. — М.: изд-во науч. и учеб.-метод. центра, 2002. 432 с.

83. Лопатина, Т.К. Иммуномодулирующее действие препоратов-эубиотиков / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н. Николаенко // Вестник Российской академии медицинских наук. — 1997. № 3. - С. 30-34.

84. Лысенко, А.Я. Паразитарные болезни в России (региональный аспект проблемы) / А.Я. Лысенко, С.А. Беэр // Региональные проблемы здоровья населения России. -М.: АЕН РФ, 1993. С. 21-25.

85. Лысенко, А.Я. Эпидемиология гельминтозов / А.Я. Лысенко, А.Е. Беляев. -М., 1987.-45 с.

86. Малов, В.А. Дисбактериозы кишечника / В.А. Малов // Медицинская помощь. 2000. - № 5. - С. 13-14.

87. Малышева, Н.С. Эколого-паразитологический мониторинг / Н.С. Малышева, H.A. Романенко. М., 2006. - 382 с.

88. Мельникова, В.Н. Проблемы химиопрофилактики, химиотерапии эндогенной инфекции и дисбактериоз / В.Н. Мельникова // Вестник Российской академии медицинских наук. 1997. — №3. - С. 26-30.

89. Минздрав России, 2001. Решение Коллегии от 21 декабря 2001 г., протокол №21.

90. Наткевичайте-Иванаускене, М.П. Количественные соотношения встречаемости и константности групп видов в растительных сообществах / М.П. Наткевичайте-Иванаускене // Науч. докл. высш. шк. биол. науки. — 1985. №8.-С. 63-68.

91. Обгольц, A.A. Механизмы персистирования бактерий / A.A. Обгольц // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1992. — № 4. — С. 70-72.

92. Онищенко, Г.Г. О мерах по усилению профилактики паразитарных болезней в России / Г.Г. Онищенко // Медицинская паразитология. -2003. -№ 3. С. 3-7.

93. Онищенко, Г.Г. Социально-гигиенический мониторинг практика применения и научное обеспечение: сборник научных трудов / Г.Г. Онищенко, В.П. Самошкин. - М., 2000. - Ч. 1. - С. 13-21.

94. Онищенко Г.Г. Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов: методические указания 4.2.735-99 от 25.02.1999.

95. Особенности микрофлоры толстого кишечника при инфекционном эндокардите / A.A. Воробьев и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1996. — № 1. - С. 70-74.

96. Пальцев, А. Микробная экология кишечника и ее и нарушения (конспекты врача) / А. Пальцева // Медицинская газета. 2002. - № 69. - С. 7-10.

97. Паразитарные болезни человека, их профилактика и лечение / В.П. Сергиев и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1997. С. 8-11.

98. Паразитология и инвазионные болезни животных // под ред. М.Ш. Акбаева. -М.: Колос, 1998.-743 с.

99. Покровский, В.И. Медицинская микробиология / В.И. Покровский, O.K. Поздеев. Москва, 1999. - 1184 с.

100. Популяционно-генетические аспекты микробиологического фенотипа кишечника здорового человека / A.A. Воробьев и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1995. — №4. — С. 30-35.

101. Региональный экологический мониторинг безопасности среды в зоне Среднего Поволжья / Е.М. Романова и др.. Ульяновск, 2006. — 158 с.

102. Романенко, H.A. Современные задачи санитарной паразитологии / H.A. Романенко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2001. - № 4. - С. 25-29.

103. Рочкене, A.A. Особенности распространения балантидиаза в Литовской ССР и некоторые биологические свойства балантидий человека и животных: автореф. дис. . канд. биол. наук. / Рочкене A.A. Вильнюс, 1977.-22 с.

104. Сафронов, М.Г. Балантидиаз свиней / М.Г. Сафронов, С.И. Исаков, К.С. Олесова // Ветеринария. 1979. - №2. - С. 48-50.

105. Сахарова, Т.В. Изучение морфологии бластоцист низших обезьян с помощью световой микроскопии / Т.В. Сахарова, Л.М. Гордеева, В.П. Сергиев // Медицинская паразитология — 1997. — № 2. — С. 24-27.

106. Сергиев, В.П. Распространение паразитарных болезней и их профилактика^ в России / В.П. Сергиев, М.Н. Лебедева // Медицинская паразитология. -1997. -№3.- С. 5-9.

107. Сергиев, В.П. Регистрируемая и истинная распространенность паразитарных болезней / В.П. Сергиев // Медицинская паразитология. — 1992.-№2.-С. 3-5.

108. Сорокин, A.A. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника / A.A. Сорокин, Е.Р. Федорова. — Казань.: Казанский государственный университет усовершенствования врачей им. В.И. Ленина, 1990. 37 с.

109. Сытник, И. А. Заселение тонкой и толстой кишок детей раннего возраста стафилакокками в условиях стационара / И.А. Сытник // Кишечные инфекции. Киев, 1989. - Вып. 2. - С. 97-101.

110. Сытник, С.И. Пространственная структура и иерархия экологических групп в кожном микробиоценозе молочных желез / С.И. Сытник // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1991. — № 3. — с. 21-24.

111. Уиттекер, Р. Сообщества и экосистемы / Р. Уиттекер М., 1980. - 217 с.

112. Федеральный закон от 01.01.1997 г. «О защите животных от жестокого обращения».

113. Федянин, Ю.П. Микрофлора кишечника при неспецифическом язвенном колите / Ю.П. Федянин // Казанский медицинский журнал. 1997. — № 3. — С. 202-204.

114. Хамцов, В.Г. Балантидиаз (Распространение, патогенез, патологическая анатомия, клиника, диагностика и лечение): автореф. д-ра. мед. наук. / Хамцов В.Г. М., 1972. - 38 с.

115. Хамцов, В.Г. Балантидиаз / В.Г. Хамцов // Клиническая медицина. 1971.— №4.-С. 145-151.

116. Хаусман, К. Протозоология / К. Хаусман. — М.: Мир, 1988. — 336 с.

117. Циммерман, Я.С. О сущности понятия «дисбактериоз кишечника» и правомерности использования этого термина / Я.С. Циммерман // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии — 2000.-Т. 10, №1.-С. 81-84.

118. Чахава, О.В. Гнотобиология о микрофлоре организма хозяина и антибиотикотерапии / О.В. Чахава // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - Т. 32, № 3. - С. 170-173.

119. Чахава, О.В. Микробиологические и иммунологические основы гнотобиологии / О.В. Чахава, Е.М. Горская, С.З. Рубак. М., 1982. - 160 с.

120. Чистенко, Г.Н. Как избежать заразных болезней / Г.Н. Чистенко. Минск.: Беларусь, 1997. - 64 с.

121. Шарова, И.Х. Зоология беспозвоночных / И.Х. Шарова. М.: Владос, 1999. - 592 с.

122. Шендеров, Б.А. Некоторые первоочередные задачи отечественной микроэкологии / Б.А. Шендоров // Колонизационная резистентность и химиотерапевтические антибактериальные препараты. — М., 1994. — Ч. I. —1. C. 7-9.

123. Шендеров, Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека / Б.А. Шендоров // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 1998. — Т. 7, № 1.— С. 61-65.

124. Шептулин, А.А. Синдром избыточного роста бактерий и «дисбактериоз кишечника»: их место в современной гастроэнтерологии / А.А. Шептулин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 1999.-№3,-С. 24-30.

125. Экология и таксономия трематод позвоночных фауны Узбекистана / Д.А. Азимов, Д.Т. Исакова, М.К. Кожабаев, С. Д. Дадаев // Эколого-биологические и фаунистические аспекты гельминтозов: Тез. докл. науч. конф., Ереван, 20-22 мая 1991 г. М., 1991. - С. 5-6.

126. Язвенная болезнь желудка, двенадцатиперстной кишки Н. Pylori / Г.К. Жерлов и др. // Клиническая медицина. 2001. — № 1. — С. 55-57.

127. Arienti, Н. Prevalence of enteroparasites in a residence for children in the Cordoba Province, Argentina / H. Arienti // Eur. J. Epidemiol. 2000. - V. 16.-P. 28-293.

128. Amebiasis and "nonpathogenic" intestinal protozoa / J.N. Aucott et al. // Infect Dis Clin North Am. 1993. - V. 7, № 3. - P. 467-485.

129. Cimerman, S. Prevalence of intestinal parasitic infections in patients with acquired immunodeficiency syndrome in Brazil / S. Cimerman, B. Cimerman,

130. D.S. Lewi // Int. J. Infect. Dis. 1999. - V. 3, № 4. - P. 203 -206.

131. The microbiota of the gastroitestinal tract / T.M. Gibson et al. // Gastroenterology. 1994. - V. 51, № 5. - P. 808-815.

132. Prevalence of enteroparasites in a residence for children in the Cordoba Province, Argentina / S. Guignard, H. Arienti, L. Freyre, H. Lujan, H. Rubinstein // Eur. J. Epidemiol. 2000. - V. 16. - P. 287-293.

133. Prevalence of enteric pathogens among community based asymptomatic individuals / L.C. Ho et al. // J. Gastroenterol. Hepatol. -1995. V. 15. -P. 290-304.

134. Multiyear prospective study of intestinal parasitism in a cohort of Peace Corps volunteers in Guatemala / B.L. Hussain et al. // J. Clin. Microbiol. 1997. -V. 39. - P. 34-42.

135. Human normal and abnormal gastrointestinal flora / F.M. Kleessen et al. // Am J Clin Nutr. 1995. - V. 23, № 11*. - P. 1433-1439.

136. Prevalence of intestinal parasitic infection in five farms in Holambra, San-Paulo, Brazil / J. Kobayashi et al. // Rev. InSt. Med. Trop. 1995. - V. 37. - P. 13-18.

137. Maggi, P. Intestinal protozoa in HIV-infected patients in Apulia, South Italy / P. Maggi, O. Brandonisio // Epidemiol Infect. 1999. - V. 123. - P. 457-462.

138. Seasonal variation of intestinal protozoa infections in outpatients of the north section of Santiago, Chile / R. Mercado, J. Otto, M. Jimenes., Perez, M // Bol. Chil. Parasitol. 1999. -V. 54. - P. 41-47.

139. Moe, K.T. Development of Blastocystis hominis cysts in to vacuolar forms in vitro / K.T. Moe // Parasitol Res. 1997. - V. 85, № 2. - P. 103-108.

140. Nelson, J.D. Etiology and epidemiology of diarrheal diseases in the United States / J.D. Nelson // Am. J. Med. 1985. - V. 28. - P. 76-80.

141. Pakianathan, M.R. Intestinal protozoa in homosexual men in Edinburgh / M.R. Pakianathan, A. Millan // Schweiz Rundsch Med Prax. 1999. -V. 88. - P. 877-879.

142. Identification of enteric pathogens in HIV-positive patients with diarrhoea in northern India/ K.N. Prasad et al. // J. Health. Popul. Nutr. 2000. -V. 18, № l.-P. 23-26.

143. Enteroparasitos en escolares de una institución publica del municipio Maracaibo, Venezuela / Z. Rivero-Rodriguez et al. // Invest. Clin. 2000. - V. 41.-P. 37-57.

144. Sherchand, J.B. Intestinal parasites in children and adults with and without abdominal discomfort from the Kathmandu area of Nepal / J.B. Sherchand, S. Larsson, M.P Shrestha //Trop. Gastroenterol. 1996. -V. 17. - P. 15-22.

145. Intestinal parasitism protozoa and helminthes - in primates at the Barcelona Zoo / M. Soledad Gomez et al. // J. Med. Primatol. - 1996. -V. 25.-P. 419-423.

146. Steinmann, E. Atiology of diarrheal diseases in immunocompetent and HIVpositive Patients / E. Steinmann, A. Di-Gallo, V.C. Dubach // Schweiz. Med. Wochenschr. 1990. -V. 120. - P. 1253-1256.

147. Human parasite finds taxonomic home / J.D. Storgaard, M.L. Sogin, D.D. Leipe, C.G. Clark // Nature. 1996. - V. 380. - P. 398.

148. Suresh, K., Ramachandran, N. P. In vitro encystment ahd experimentai infections of Blastocystis hominis / K. Suresh, G.C. Hg, N. P. Ramachandran // Parasitology Research. 1993. - V. 79. - P. 456-460.

149. Polymicrobial aetiology of travellers' diarrhoea / D.N. Taylor et al. // Lancet. -1995.-V. 16.-P. 381-385.

150. Etiology of diarrhea among travelers and foreign residents in Nepal / D.N. Taylor et al. // JAMA. 1988. - V. 260. - P. 1245-1248.

151. Taylor, L.H., Risk factors for human disease emergence / L.H. Taylor, S.M. Latham, M.E. Woolhouse // Philosophical Transactions of the Royal Society. -2001.-V. 356.-P. 983-989.

152. Thepsuparungsikul, V. Differential of Entamoeba: encystation of E. invadens in monoxenic and and axenic cultures / V. Thepsuparungsikul, L. Seng, G.B. Baily //J. Protozool., 1971. -V. 57. - P. 1288-1292.

153. Topinka, J., Mutagenicity studies on paracetamol in humanvolunteers. Ill Unscheduled DNA synthesis and micronucleus test / J. Topinka, R.J. Sram, G. Sirinjan // Mutat. Res. 1989. -V. 227, № 3. - P. 147-152.

154. Walker, W.A. Роль микрофлоры в развитии защитных функций кишечника / W.A. Walker // Педиатрия. 2005. - № 1. - С. 85-91.

155. WHO Report of the WHO informal consultation on hookworm infection and anaemia in girls and women? / WHO. Geneva: WHO, 2007. - 54 p.

156. Intestinal sarcocystosis in Thai laborers / P. Wilairatana et al. // J. Trop. Med. -1996. V. 27.-P. 43-46.

157. Gastrointestinal nematodes in dogs from Debre Zeit, Ethiopia / H.T. Yacob, T. Ayele, R. Fikru, A.K. Basu // Vet. Parasitol. 2007. - V. 148, № 2. -P. 144-148.

158. Zdero, M. Parasitosisen una peblacion adulta con trastornos gastrointestinales cronicos / M. Zdero // Acta Gastoenterol. Latinoam. 1997. - V. 27. - P. 67-73.

159. Zierdt, C. Studies of Blastocystis hominis / C. Zierdt // J. Protozool. 1983. - V. 20.-P. 114-121.

160. Zierdt, C.H. Blastocystis hominis, a long misunderstood intestinal pathogen / C.H. Zierdt // Parasitol. Taday. 1988. - V. 4. - P. 15-19.

Информация о работе

Карпеева, Евгения Александровна
кандидата биологических наук
Ульяновск, 2011
ВАК 03.02.03

Диссертация

Характеристика микробиоценоза кишечника животных при инвазии Balantidium coli - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы