Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина (на модели женского репродуктивного тракта)

Черкасов, Сергей Викторович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина (на модели женского репродуктивного тракта)
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина (на модели женского репродуктивного тракта)"

ЧЕРКАСОВ СЕРГЕЙ ВИКТОРОВИЧ

АССОЦИАТИВНЫЙ СИМБИОЗ КАК БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОСНОВА КОЛОНИЗАЦИОННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ХОЗЯИНА (на модели женского репродуктивного тракта)

03.02.03 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

- 8 ДЕК 2011

Оренбург-2011

005004793

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН

Научный консультант: член-корреспондент РАН, академик РАМН, Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Бухарин Олег Валерьевич

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО Оренбургская государственная

медицинская академия Росздрава Чайннкова Ирина Николаевна

Доктор медицинских наук,

ГБОУ ВПО Оренбургский государственный

университет Брудастов Юрий Авенирович

Доктор медицинских наук, профессор,

ГБОУ ВПО Башкирский государственный

медицинский университет Росздрава Габидуллин

Зайнулла Гайнулинович

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Росздрава

Защита состоится 29 декабря 2011 г. в 9 ч. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д. 208.066.03 ГБОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии Росздрава (Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, тел.: (3532) 40-35-62, факс: (3532) 77-24-59, e-mail: orgma_dsl@esoo.ru, зал заседаний диссертационного совета).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии Росздрава.

Автореферат разослан 2011 г., автореферат и

текст объявления размещены на официальном сайте ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицински^ наук, ^

профессор

Немцева Наталия Вячеславовна

Актуальность проблемы

Микросимбиоценоз репродуктивного тракта женщин - многокомпонентная система, находящаяся в динамическом равновесии. Относительное постоянство микросимбиоценоза определяется наличием колонизационной резистентности организма, которая зависит от качественных и количественных характеристик нормофлоры и факторов естественной резистентности биотопа.

ганизмов подавлять персистентный потенциал условно-патогенных аллохтон-ных микроорганизмов. С позиций ассоциативного симбиоза колонизационная резистентность организма может осуществляться посредством взаимодействия доминантных лактобацилл с другими представителями микросимбиоценоза репродуктивного тракта женщин, а это открывает новые перспективы, как для расшифровки бактериальных механизмов колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин, так и для биотехнологической разработки штаммов пробиотических микроорганизмов с комплексным воздействием на аллохтонную микрофлору.

Учитывая, что факторы персистенции ассоциативных патогенных и условно-патогенных бактерий способствуют их выживанию в организме хозяина, формированию длительно текущего инфекционного процесса и развитию дис-биотических состояний, изучение подавления экспрессии персистентных свойств бактерий различными биотическими и абиотическими факторами лежит в основе рационального подхода в борьбе с патогенами женского репродуктивного тракта. Представляет интерес и исследование взаимодействия ассоциативных микроорганизмов с организмом хозяина через взаимосвязь факторов его местного иммунитета и персистентного потенциала бактерий. Если к этому присовокупить, что колонизационная резистентность биотопов, рассматриваемая как результат действия нормофлоры и факторов защиты макроорганизма, где мощное защитное действие факторов естественной резистентности может быть связано с их взаимным потенцированием (Кокряков В.Н., 2006), то совместное влияние доминантных микроорганизмов и факторов эндогенной защиты хозяина требует дополнительного изучения.

Наконец, снижение колонизационной резистентности организма, способствующее дисбиотическим состояниям и воспалительным заболеваниям женского репродуктивного тракта, делает проблему исследования колонизационной резистентности биотопов актуальной ещё и потому, что выявление нарушений ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин, открыва-

ет новые возможности в прикладном аспекте для диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний и коррекции микроэкологических нарушений.

Вышеизложенное явилось основанием для формулирования цели и задач настоящего исследования.

Цель и задачи исследования

Цель исследования - охарактеризовать бактериальные механизмы колонизационной резистентности на модели репродуктивного тракта женщин и определить значение симбиотических взаимодействий макроорганизма, доминантных и ассоциативных микроорганизмов в его защите.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать бактериальные механизмы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женского организма и оценить роль доминантных микроорганизмов в её реализации.

2. Выявить значение симбиотических взаимодействий в условиях микросим-биоценоза доминантных и ассоциативных микроорганизмов для поддержания колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин]

3. Охарактеризовать взаимосвязь факторов местного иммунитета и перси-стентного потенциала бактерий как основу взаимодействия ассоциативных микроорганизмов с организмом хозяина.

4. Определить характер нарушений ассоциативного симбиоза при инфекцион-но-воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта женщин.

5. Оценить значение показателей состояния ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин для диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний и коррекции микроэкологических нарушений.

Научная новизна

Колонизационная резистентность - физиологический феномен, направленный на поддержание микроэкологического гомеостаза, являющийся результатом симбиотических взаимодействий организма хозяина и автохтонной микрофлоры. Представлена рабочая классификация бактериальных механизмов колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин, включающая: препятствие адгезии, антагонистическое действие нормофлоры за счет продукции антибактериальных субстанций, подавление персистентных свойств аллохтонных микроорганизмов и потенцирование (усиление) эндогенной антимикробной защиты организма.

Колонизирующая способность лактобацилл как доминантной микрофлоры репродуктивного тракта женщин связана с выраженностью их адгезии и способностью сорбировать лизоцим. Показатель микробной обсеменённости (ПМО) прямо коррелировал со значениями указанных признаков. Микроорганизмы, выделенные при эубиозе, характеризовались выраженным колонизирующим потенциалом, высокой лизоцимной активностью и низкой антибиоти-корезистентностью по сравнению со штаммами, выделенными при дисбиозе.

Оценено значение бактериоциногении и бактериоциночувствительности в формировании видовой структуры лактофлоры, где наиболее часто встречающиеся виды лактобацилл характеризовались высокой бактериоциногенией и низкой бактериоциночувствительностью.

Для оценки стабильности состояния микросимбиоценозов предложен «Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека» (Патент РФ № 2175673), основанный на выявлении антагонистического действия аутохтонной микрофлоры по отношению к ассоциантам тест - штаммам Б.аигеж и Е.соН.

Разработан метод определения способности микроорганизмов ингибиро-вать бактериальную каталазу (Патент РФ № 2180353) и метод количественного определения продукции перекиси водорода для выявления антагонистически активных лактобацилл в отношении аллохтонных бактерий на основе способ-

ности перекись продуцирующих лактобацилл ингибировать бактериальную ка-талазу.

Выявлено модифицирующее действие метаболитов лактобацилл на активность каталазы, персистентные характеристики и прирост биомассы S. epi-dermidis и Е. coli. Супернатанты лактобацилл оказывали более выраженное ин-гибирующее действие на активность каталазы по сравнению с клеточными экстрактами. Наибольшее снижение значений антилизоцимной активности (AJIA) и антикомплементарной активности (АКА) S. epidermidis происходило при воздействии клеточных экстрактов, а у Е. coli указанные свойства снижались преимущественно под влиянием супернатантов.

Выявлены эффекты стимуляции антагонистической активности представителей нормальной микрофлоры репродуктивного тракта женщин и её инги-бирование у патогенов фрагментами пептидогликана лактобацилл (Патент РФ № 2376381), что обосновывает использование регуляторов антагонизма на основе пептидогликанов в качестве биопрепаратов для повышения колонизационной резистентности биотопов человека.

Острые воспалительные заболевания репродуктивного тракта женщин или обострение хронических протекают на фоне снижения колонизационной резистентности, что проявляется в абсолютном или относительном увеличении количества ассоциативных условно-патогенных микроорганизмов, возрастании у них значений персистентных характеристик с реакцией со стороны факторов местного иммунитета организма.

Нормализующее действие эстриолсодержащих препаратов на ассоциативный симбиоз вагинального биотопа репродуктивного тракта женщин (Патент РФ № 2161971), основанное на увеличении количества доминантных лактобацилл и снижении факторов персистенции условно-патогенных ассоциативных микроорганизмов, способствует восстановлению колонизационной резистентности организма, за счёт реализации функции доминантной микрофлоры и объясняет механизм действия эстрогенов на вагинальный микросимбио-ценоз.

Теоретическая и практическая значимость

Получены новые данные, расширяющие патогенетические представления о механизмах симбиотических взаимоотношений доминантных, ассоциативных микроорганизмов и макроорганизма в реализации колонизационной резистентности биотопов репродуктивного тракта женщин.

Практическая ценность работы характеризуется возможностью использования биологических характеристик лактофлоры для дифференциации штаммов по их способности поддерживать колонизационную резистентность репродуктивного тракта женщин. Исследованные свойства лактобацилл: продукция перекиси водорода, способность ингибировать каталазу и факторы пер-систенции (антилизоцимную и антикомплементарную активности) аллохтон-ных микроорганизмов могут быть использованы в качестве критериев отбора пробиотических штаммов. Предложены методические подходы к определению указанных биологических характеристик лактобацилл.

Для повышения эффективности ранней диагностики дисбиотических состояний в клинической и лабораторной практике рекомендован разработанный «Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека», позволяющий определить уровень колонизационной резистентности биотопов человека.

Результаты работы по применению эстриолсодержащих препаратов для восстановления колонизационной резистентности положены в основу способа коррекции дисбиотических состояний репродуктивного тракта женщин.

Материалы работы использованы в медицинской практике Областного центра планирования семьи и репродукции (г. Оренбург), а также внедрены в учебный процесс на кафедре микробиологии ГОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии Росздрава.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Колонизационная резистентность - физиологический феномен, направленный на поддержание микроэкологического гомеостаза за счет симбио-

тических взаимодействий автохтонной микрофлоры и организма хозяина в целях препятствия колонизации аллохтонных микроорганизмов.

2. Нарушения ассоциативного симбиоза при инфекционно-воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта женщин однотипны и характеризуются снижением колонизационной резистентности организма, что проявляется в дефиците доминантных микроорганизмов и усилении перси-стентного потенциала ассоциативных микроорганизмов.

3. Лакгобациллы как доминантные микросимбионты репродуктивного тракта женщин реализуют бактериальные механизмы колонизационной резистентности хозяина, включающие - препятствие адгезии патогенов, антагонистическое действие нормофлоры путем продукции антибактериальных субстанций, подавление персистентного потенциала аллохтонных бактерий и потенцирующий (синергидный) эффект совместно с факторами эндогенной антимикробной защиты хозяина.

4. Нарушения ассоциативного симбиоза - биологическая основа инфекции репродуктивного тракта женщин, где выявление микроэкологических изменений в биотопах определяет прогнозирование характера течения инфекционного процесса и пути его коррекции в целях профилактики.

Апробация работы

Основные положения работы доложены на: III - VI Российских научных конференциях «Персистенция микроорганизмов», г. Оренбург, 2000, 2003, 2006, 2009; Российских научных конференциях «Репродуктивное здоровье населения» г. Оренбург, 1999, 2001, 2005; г. Челябинск, 2002; Международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбиотики и функциональные продукты питания», г. Москва, 2004; Конференции «Фундаментальные науки -медицине» по программе фундаментальных исследований Президиума РАН, г. Москва, 2004; Международной научной конференции «Физиология микроорганизмов в природных и экспериментальных системах», г.Москва, 2006,2009.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 30 работ, в том числе 19 статей в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 4 патента РФ на изобретения и 3 монографии.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 258 страницах и содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов, 4 главы собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации и указатель литературы, включающий 51 отечественный и 257 зарубежных источников. Иллюстрации представлены 15 таблицами и 50 рисунками.

Работа выполнена в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН в соответствии с планом научно-исследовательской работы: тема «Изучение симбиотических взаимоотношений в микробиоценозах тела человека», № гос. регистрации 01.2.00 104756; проект «Межбактериальные взаимодействия и их роль в формировании микробных биоценозов тела человека» по программе Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине»; тема «Изучение механизмов взаимоотношений симбионтов и их регуляции в различных биологических системах», № гос. регистрации 0120.0 600145.

Материалы и методы исследования

При выполнении работы было исследовано 980 штаммов микроорганизмов. Все выделенные штаммы идентифицированы общепринятыми методами на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств (Берджи, 1997). Биохимический профиль выделенных микроорганизмов оценивали с помощью тест-систем фирмы bio Merieux (Франция): "ID 32 STAPH"," rapid ID 32 STREP" , "rapid ID 32 A" , " rapid ID 32 E" и с помощью тест-систем фирмы LACHEMA (Чехия): ENTEROtest, STREPTOtest, NEFERMtest, STAPHYtest, ANAEROtest.

Микроорганизмы были выделены от 346 женщин репродуктивного возраста, из них 76 женщин составили группу сравнения, 54 - больные трихомонозом, 52 - больные воспалительными заболеваниями придатков матки (ВЗПМ), 44 женщины больные трихомонозом в сочетании с воспалительными заболеваниями придатков матки, 55 женщин с острым эндометритом и 65 женщин с хроническим эндометритом, находящихся на лечении в Областном центре планирования семьи и репродукции (гл. врач М.Г. Шухман) и в Областной клинической больнице №2 (гл. врач, д.м.н. Б.Л. Колесников), г. Оренбург.

В качестве материала для исследования использовали вагинальную жидкость, которую отбирали из заднего свода влагалища. Исследуемый материал высевали на плотные питательные среды методом секторных посевов. Выделение факультативно-анаэробных микроорганизмов проводили методом секторных посевов в соответствии с рекомендациями Ю.М. Фельдман с соавт. (1984) на Колумбийский агар с 5% крови, желточно-солевой агар, среду Эндо и МРС-агар. Посевы инкубировали при 37°С 24-48 ч. в микроаэрофильных условиях. Для выделения анаэробных микроорганизмов использовали Шедлер-агар с 5% лизированной крови. Посевы инкубировали при 37°С 48-72 ч. в анаэробных условиях с использованием анаэростатов и газогенераторных пакетов.

Антилизоцимную (АЛА), антикомплементарную (АКА) и антилактофер-риновую (АЛфА) активности микроорганизмов изучали по описанным методам (О.В. Бухарин с соавт., 1992, 1997, 2005). Антилизоцимную активность микроорганизмов выражали в мкг/млОД, за единицу антикомплементарной активности (антиСН50) принимали активность супернатанта суточной бульонной культуры бактерий исследуемого штамма, которая при контакте 1 мл супернатанта с 1 мл сыворотки обеспечивала инактивацию 1 гемолитической единицы, анти-лактоферриновую активность выражали в условных единицах (Ед.).

Продукцию перекиси водорода у лактобацилл определяли на основе выявления окисления тетраметилбензидина в присутствии пероксидазы хрена ("МИв М. й а!., 2004). Изучение антилизоцимной активности лактобацилл осуществляли по методике В.Ю. Соколова и А.П. Луды (1987). Изучение способ-

ности лактобацилл к продукции лизоцимподобных ферментов прводили по методу А.А; Ленцнера с соавт. (1975). Чувствительность к антибиотикам определяли методом диффузии в агар с использованием стандартных индикаторных дисков. Изучение адгезивных свойств микроорганизмов проводили по методике В.И. Брилис с соавт. (1986). Бактериоциногенность исследуемых культур определяли по методу Мюррея-Шервуда (1949) в модификации Б.Я. Усвяцова (1967). Способность лактобацилл к закислению среды оценивали путём измерения рН супернатантов исследуемых культур на приборе Мультитест ИПЛ-113 (НПО «Семико», г. Новосибирск)

Диагностику трихомонадной инфекции проводили с использованием микроскопического и культурального методов (Дмитриев Г.А., 2003). Для культурального исследования использовали жидкую питательную среду для выделения трихомонад (ООО НПФ «Диагност-мед», г. Омск). Флаконы со средой и исследуемым материалом инкубировали 4 суток при температуре 37° С затем отбирали осадок, смешивали с 1% водным раствором генцианового фиолетового на предметном стекле, высушивали и микроскопировапи. Диагноз трихомоноза ставили на основании наличия в мазке колоний, микроколоний или типичных форм трихомонад.

Факторы местного иммунитета определяли в вагинальном отделяемом: лизоцим - по методике О.В. Бухарина с соавт. (1990), количество 51§А, 8 сош, ^М, ^А, ^Е, СЗ компонента комплемента, лактоферрина - методом им-муноферментного анализа с использованием наборов реактивов «ИФА- СЗ» ООО «Цитокин». г. Санкт-Петербург, «Лактоферрин - стрип», "^Е - ИФА -Бест - стрип " ЗАО «Вектор - Бест» г. Новосибирск; наборы реагентов для определения концентрации секреторного 1§А, ^М, 1§А, 8сош, ООО «Поли-гност» г. Санкт-Петербург. Общее количество лейкоцитов и нейтрофилов подсчитывали в камере Горяева общепринятым методом. Полученные результаты анализировали с применением параметрических методов статистики (Лакин Г.Ф., 1990). Достоверность полученных различий между средними величинами групп определяли при помощи вычисления средней ошибки разности, степень

достоверности - по таблице Стьюдента-Фишера. В качестве минимально допустимого использовали уровень значимости р<0,05. Способ прогнозирования рецидивов воспалительных заболеваний придатков матки разрабатывали с расчетом коэффициентов информативности и диагностических коэффициентов на основе использования «неоднородной последовательной процедуры распознавания образов» (Гублер Е.В., Генкин А.А., 1973).

Результаты исследования и их обсуждение

Опираясь на концепцию ассоциативного симбиоза на первом этапе работы мы попытались оценить значение лактобацилл как доминантных микроорганизмов в ассоциативном симбиозе репродуктивного тракта женщин. Для этого были исследованы их симбиотические взаимодействия с организмом хозяина и ассоциативными микроорганизмами. Известно, что механизм поддержания нормального микроэкологического статуса репродуктивного тракта женщин связан с наличием в микробиоценозе перекись продуцирующих лактобацилл. Именно эти микроорганизмы по мнению ряда авторов (Hawes S.E. et al., 1996; Gupta К. et al., 1998) обладают наиболее выраженным антагонизмом по отношению к аллохтонным бактериям. Однако, микроорганизмы, проявляющие выраженную каталазную активность, являются устойчивыми к действию перекись продуцирующих лактобактерий. В связи с этим мы исследовали наличие ингибиторов каталазы у перекись продуцирующих лактобацилл.

Перекись продукцию лактобацилл изучили у 45 штаммов в реакции разложения перекиси водорода, ферментом пероксидазой с окислением тетраме-тилбензидина в качестве субстрата. В результате исследований было установлено, что 67% изученных штаммов лактобацилл продуцируют перекись водорода. Количество продуцируемой перекиси достигало до 1,5 мкмоль/мл (Рис. 1). Половина исследуемых микроорганизмов продуцировали перекись водорода в количестве, до 0,3, мкмоль/мл, 39% штаммов - 0,3-0,6 мкмоль/мл, 7% штаммов - 0,6-0,9 мкмоль/мл, и 4% штаммов 1,2-1,5 мкмоль/мл. Для определения наличия ингибиторов каталазы был отобран штамм Lactobacillus acidophi-

lus, продуцирующий перекись водорода в количестве 0,78 мкмоль/мл. Популя-ционная структура исследуемого штамма имела сходное распределение клонов по количеству продуцируемой перекиси водорода, при этом максимальные значения продукции перекиси водорода превышали популяционные и достигали уровня 2,0 мкмоль/мл (Рис. 2а).

g 40 s

I 30 э

* 20 10 о

0,3 0,6 0,9 1,2

Н202 (мкмоль/мл)

1,5

Рис.1 - Выраженность продукции перекиси водорода различными штаммами лактобацилл

35 30

2 25 m § 20 о

I-

ç о

ч 10

5 0

80 70

¡о

g 50 О

§ 40 к

§ 30

20 10 0

п ■ , , г-1

0,29 0,67 1,06 1,45 1,8

2,2

18 25.8 33,6 41,4 49,2 57

перекись водорода ингибиторование

(мкмоль/мл) каталазы (%)

Рис. 2 - Разнообразие популяции штамма L. acidophilus по продукции Н202 (а) и способности ингибировать каталазу (б)

Все перекись продуцирующие клоны штамма L.acidophilus в разной степени обладали способностью ингибировать бактериальную каталазу (Рис. 26), что было установлено при определении активности каталазы тест- штамма Staphylococcus aureus АТСС 6538Р после контакта с культуральной жидкостью лактобацилл.

Таким образом, перекись продуцирующие лактобациллы оказались способными ингибировать бактериальную каталазу аллохтонных бактерий, что, вероятно, объясняет антагонизм лактобацилл по отношению к широкому ряду различных таксонов микроорганизмов, включая каталазоположительные. Не исключено, что ингибирование каталазы как признак лактобацилл наряду с продукцией ими перекиси водорода может рассматриваться в качестве критерия отбора пробиотических штаммов.

Межбактериальные взаимодействия занимают важное место в процессах формирования микробных биоценозов (Бухарин О.В.; 1999). Одним из факторов формирования микробиоценозов являются антагонистические отношения между микроорганизмами (Pahlson С., Larsson P.G., 1991). В основе микробного антагонизма лежит ряд факторов, в том числе продукция лизоцима (Усвяцов Б.Я., 1986), органических кислот (Митрохин С.Д., Иванов А.А., 1995), бакте-риоцинов (Егоров Н.С., Баранова И.П., 1999), перекиси водорода (Hillier S.L. et al., 1992). Интерес представляет вопрос, могут ли влиять продукты жизнедеятельности микроорганизмов в смешанных микробных сообществах на системы защиты клеток бактерий от окислительного повреждения, в частности на каталазу? Выявление микробных ингибиторов бактериальной каталазы у различных представителей вагинальной микрофлоры позволило бы установить новые механизмы межбактериальных взаимодействий, направленных на поддержание и формирование устойчивых микросимбиоценозов. В связи с этим было изучено влияние метаболитов бактерий, выделенных вагинального биотопа, на активность каталазы S. aureus и проведена оценка влияния метаболитов бактерий на ростовые характеристики S. aureus в условиях перекисного окисления in vitro. . .

Для выявления ингибиторов каталазы микроорганизмов обрабатывали тест-штамм S. aureus их супернатантами и клеточными экстрактами, а затем определяли активность каталазы тест-штамма. В результате проведенных исследований был выявлен ингибирующий эффект действия клеточных экстрактов (КЭ) и культуральных жидкостей (КЖ) бульонных культур бактерий на активность каталазы S. aureus. Ингибирующим воздействием на каталазу S. aureus обладали метаболиты 100% штаммов Lactobacillus spp. и Corynebacterium spp.; 89,5% - КОС; 73,9% - Micrococcus spp.; 42,9% - E. coli-, 41,7% - S. aureus, выделенных из женского репродуктивного тракта. При определении влияния метаболитов штаммов Lactobacillus spp., Corynebacterium spp. и КОС было показано, что они в большей степени снижали активность каталазы aureus (на 40-60%), чем КЭ и КЖ Micrococcus spp., Е. coli и КПС (на 5-15%). Установлено, что КЖ исследуемых культур микроорганизмов обладали большим ингибирующим действием на каталазу S. aureus по сравнению с гомологичными КЭ.

Ингибирующим эффектом обладали и КЖ и КЭ, что, вероятно, свидетельствовало о различной локализации микробных ингибиторов бактериальной каталазы. Выраженное подавление активности каталазы S. aureus внеклеточными продуктами лактобацилл можно объяснить большим содержанием ингибитора в КЖ, чем в КЭ. Наибольшей способностью подавления активности каталазы S. aureus обладали метаболиты Lactobacillus spp., Corynebacterium spp. и КОС, относимые к доминирующим видам влагалища (Соколова KJL с соавт., 1998), тогда как, являющиеся нехарактерными для указанного биотопа в норме Е. coli и S. aureus, характеризовались низкой распространенностью и выраженностью исследуемого признака. Не исключено, что высокая выраженность ин-гибирования каталазы является характеристикой представителей автохтонной микрофлоры.

Выявленный эффект ингибирования активности каталазы метаболитами нормальной микрофлоры человека можно рассматривать как один из возможных механизмов межбактериальных взаимоотношений, определяющих форми-

рование и/или стабилизацию микросимбиоценозов за счет подавления защитных систем каталазопозитивных микроорганизмов от токсического действия перекиси водорода. Это достигается регуляцией уровня каталазной активности, как представителей нормальной микрофлоры, так и аллохтонных микроорганизмов. Снижение уровня антиоксидантной защиты микроорганизмов при воздействии бактериальных ингибиторов каталазы увеличивает повреждающий эффект активных форм кислорода, что может влиять на их выживание и численность в микросимбиоценозе. Данное предположение подтверждается экспериментальными данными in vitro. Выявлено, что вне- и внутриклеточные бактериальные продукты не оказывали влияния на ростовые характеристики S. aureus АТСС 6538Р за исключением метаболитов Lactobacillus spp. В результате изучения совместного действия КЖ С. minutissimum и перекиси водорода на рост S. aureus АТСС 6538Р установлено, что предварительная обработка S. aureus АТСС 6538Р внеклеточными метаболитами достоверно повышала чувствительность бактериальных клеток к действию перекиси водорода, что' проявлялось в снижении прироста биомассы золотистого стафилококка в опыте по сравнению с контролем.

Ингибирование антиокислительных ферментных систем микроорганизмов происходило без изменения накопления их биомассы, что позволило сделать вывод о независимом влиянии метаболитов коринебактерий на рост и активность каталазы микроорганизмов. Таким образом, автохтонные микроорганизмы, определяющие состояние вагинального микросимбиоценоза, влияют на другие бактерии не только за счет прямого антагонизма, но также за счет изменения активности их ферментных систем.

Симбиотические взаимодействия микроорганизмов в микросимбиоценозе представлены на следующей схеме (Рис. 3). Известно, что основная функция доминантных микроорганизмов включена в колонизационную резистентность. При этом одним из механизмов её реализации у лактобацилл является продукция перекиси водорода. Однако, аллохтонные микроорганизмы благодаря наличию каталазы способны предотвратить действие активных форм ки-

слорода, разрушая перекись водорода. Поэтому весьма существенной оказывается роль микроорганизмов, обладающих ингибиторным действием на ката-лазную активность аллохтонных бактерий.

Рис. 3 - Схема симбиотических взаимодействий микроорганизмов в реализации функции колонизационной резистентности

Таким образом, коринебактерии, как и лактобациллы, ингибируя катала-зу аллохтонных бактерий, предотвращают разрушение перекиси водорода и усиливают её антибактериальный эффект. Этот пример ассоциативного симбиоза, когда коринебактерии выступают помощниками для доминантных лак-тобацилл, является существенным для выполнения основной функции колонизационной резистентности. Не исключено, что наличие у бактерий ингибиторов каталазы, следует рассматривать в качестве одного из критериев автохтонной микрофлоры.

Принимая во внимание, что даже при достаточном содержании лактоф-лоры возможно присутствие в вагинальном микросимбиоценозе условно-патогенных микроорганизмов, наличие лактофлоры не всегда свидетельствует об её участии в колонизационной резистентности биотопа (Pahlson С., Larsson P.G., 1991). В связи с этим мы посчитали необходимым исследовать характер влияния лактобацилл на биологические свойства бактерий-симбионтов. С одной стороны, это могло бы позволить разработать дополнительные критерии

оценки состояния лактофлоры, а с другой - приблизиться к расшифровке механизмов формирования микробиоценозов человека. Было определено влияние лактобацилл, выделенных из влагалища, на рост, каталазную, антилизоцимную и антикомплементарную активность Staphylococcus epidermidis и Escherichia coli в условиях инкубирования супернатантов и клеточных экстрактов лакто-бактерий с тест-штаммами.

В результате проведенных исследований выявлено разнонаправленное влияние метаболитов лактобацилл на рост бактерий-симбионтов. Клеточные экстракты лактобацилл стимулировали прирост биомассы исследуемых культур S. epidermidis и Е. coli, тогда как гомологичные супернатанты оказывали ингибирующее действие на рост симбионтов. Наибольшее подавление роста отмечено при действии внеклеточных продуктов L. acidophilus и L. fermentum. При определении влияния супернатантов и экстрактов лактобацилл на антилизоцимную и антикомплементарную активность S. epidermidis был выявлен ин-гибирующий эффект, причем экстракты оказывали более выраженное действие (Табл. 1). Выраженность модифицирующего влияния на факторы персистен-ции S. epidermidis убывала в ряду L. acidophilus, L. fermentum, L. rhamnosus. Несколько иной характер изменения персистентных характеристик выявлен при оценке влияния супернатантов и экстрактов лактобацилл на Е. coli. Отмечено подавление АКА, значения которой в большей степени снижались под действием супернатантов. Разнонаправленное влияние оказывали штаммы лактобацилл на АЛА Е. coli: L. acidophilus и L. fermentum незначительно снижали значения признака, тогда как при действии супернатантов L. rhamnosus отмечено незначительное увеличение АЛА. Клеточные экстракты и супернатанты лактобацилл подавляли активность каталазы бактерий (Рис. 4,5). Ингибирую-щим влиянием обладали все исследуемые штаммы. Более выраженный инги-бирующий эффект лактобациллы оказывали на каталазу Е. coli, в сравнении с S. epidermidis. Вместе с тем, супернатанты подавляли активность каталазы обоих штаммов в большей степени, чем клеточные экстракты. Полученные результаты выявили модифицирующее действие метаболитов лактобацилл на ак-

тивность каталазы, персистентные характеристики (АЛА, АКА) и прирост биомассы 5. epidermidis и Е. coli.

Таблица 1.

Выраженность факторов персистенции S. epidermidis и Е. coli под воздействием вагинальных лактобацилл

Лактобациллы Препараты из лактобацилл S. epidermidis Е. coli

АЛА, мкг/млОД АКА, антиСН50 АЛА, мкг/млОД АКА, антиСН5о

L. acidophilus супернатан-ты 0,66±0,6* 7,4±1,1* 0,63±0,05* 8,6±1,3*

кл.экстракты 0,54±0,15* 5,1±U* 0,81±0,15 10,8±0,7*

L.fermentum супернатан-ты 0,77±0,03* 9,7±2,2 0,77±0,08 8,3±2,6*

кл.экстракты 0,54±0,14* 6,7±1,5* 0,14±0,03* 12,2±1,5

L. rhamnosus супернатан-ты 0,91±0,04 9,9±1,5 1,01 ±0,0 8 5,4±1,1*

кл. экстракты 0,66±0,11* 12,4±2,0 0,81±0,18 9,2±0,3*

контроль 0,99±0,07 11,8±1,1 0,86±0,06 14,8±1,0

Примечание: * - р<0,05 по сравнению с контролем

Неодинаковое действие на активность каталазы S. epidermidis и Е. coli клеточных экстрактов и супернатантов лактобацилл, вероятно, свидетельство наличия различных механизмов регуляции указанных биологических характеристик. Нельзя исключить, что регулирующее влияние супернатантов обусловлено низкими значениями pH последних. Снижение активности каталазы бактерий при воздействии метаболитов лактобацилл может способствовать усилению повреждающего эффекта активных форм кислорода, вырабатываемых нейтрофилами (Маянский А.Н, Маянский Д.Н., 1989) и представителями нор-мофлоры (Hillier S.L. et al., 1992) и определять выживание и численность ал-лохтонных микроорганизмов в вагинальном микросимбиоценозе.

Характер и выраженность модифицирующего влияния зависели от вида лактобацилл, что было определено при сравнительном анализе воздействия

Рис. 4 - Изменение активности каталазы Е. coli под действием пернатантов и клеточных экстрактов лактобацилл

су-

1 - контроль 2-1. acidophilus

□

- супернатанты

3 - L. fermentum

4 — L. rhamnosus

V7j

клеточные экстракты

Рис. 5 - Изменение активности каталазы 5. е.р'к1егт'иИ$ под действием супернатантов и клеточных экстрактов лактобацилл

1 - контроль 2-L. acidophilus

3 - L. fermentum

4 - L. rhamnosus

□

- супернатанты

■ клеточные экстракты

супернатантов и клеточных экстрактов L. fermenlum и L. rhamnosus на активность каталазы Е. coli. Супернатанты лактобацилл оказывали более выраженное ингибирующее действие на рост и активность каталазы Е. coli по сравнению с клеточными экстрактами, тогда как при оценке влияния лактобацилл на факторы персистенции такой закономерности не было выявлено. Наибольшее снижение значений АЛА и АКА S. epidermidis происходило при воздействии клеточных экстрактов, а у Е. coli указанные свойства снижались преимущественно под влиянием супернатантов, что также свидетельствует о наличии различных механизмов модификации биологических свойств микроорганизмов при межбактериальных взаимодействиях. Были установлены различия в изменении биологических свойств исследованных микроорганизмов под действием метаболитов лактобацилл: у S. epidermidis - преимущественно снижение анти-лизоцимного признака, у Е. coli - угнетение АКА.

Полученные данные позволяют понять некоторые механизмы колонизационной резистентности, когда аллохтонные микроорганизмы становятся чувствительными к факторам защиты хозяина за счет снижения их персистентного потенциала. Таким образом, результаты модифицирующего влияния лактобацилл, выделенных из влагалища, на биологические свойства S. epidermidis и Е. coli, раскрывают особенности межбактериальных взаимодействий, зависящих не только от вида лактобацилл, но и от вида бактерий-симбионтов, и расширяют наши представления о механизмах формирования вагинального микросим-биоценоза.

Лактофлора, являясь основным компонентом вагинального микросим-биоценоза, играет важную роль в поддержании колонизационной резистентности за счет своего антагонистического действия по отношению к аллохтонным бактериям-симбионтам. Однако совместное антибактериальное действие лактобацилл и факторов врождённого иммунитета не исследовано. Для решения поставленного вопроса оценивали совместное влияние культуральной жидкости лактобацилл (разведение 1/16) с антибактериальными субстратами организма хозяина: антимикробным белком тромбоцитов (разведение 1/10000), ли-

зоцимом (10 мкг/мл) на Staphylococcus aureus и с сывороткой крови (разведение 1/8) на Escherichia coli. Было установлено потенцирование антибактериального эффекта антимикробного белка тромбоцитов (Рис. 6), лизоцима и

контроль

АБТ

лактобациллы лакт+АБТ

Рис. 6 - Потенцирование антибактериального действия к S. aureus при совместном влиянии лактобацилл и антимикробного белка тромбоцитов (АБТ)

сыворотки крови культуральной жидкостью лактобацилл по отношению к тест-штаммам. Отдельно взятый антимикробный белок тромбоцитов оказывал незначительное антибактериальное действие, подавляя рост тест штамма на 10%. Действие культуральной жидкости лактобацилл способствовало более выраженному антибактериальному эффекту. Тогда как совместное действие двух указанных факторов приводило к увеличению подавляющего влияния на рост тест-штамма до 50%. Аналогичные данные получены при совместном инкубировании супернатантов лактобацилл с лизоцимом и сывороткой крови. Потенцирующий антибактериальный эффект при совместном влиянии факторов местного иммунитета и лактобацилл можно расценивать как один из меха-

низмов колонизационной резистентности, в основе которого лежат симбиоти-ческие взаимодействия доминантных микроорганизмов и хозяина. Полученные материалы, свидетельствуют о наличии потенцирующего эффекта лактофлоры и факторов эндогенной антимикробной защиты,' что подкрепляется и синер-гидным эффектом лактобацилл с лактоферрином (Бухарин О.В.- и др., 2011).

При исследовании взаимодействий лактобацилл, патогенных и условно-патогенных микросимбионтов репродуктивного тракта женщин обнаружено, что антагонизм изученных микроорганизмов подвержен разнонаправленному действию. Для определения изменения антагонистической активности микроорганизмов при их взаимодействиях был разработан «Способ определения способности микроорганизмов регулировать антагонистическую активность бактерий» (Патент РФ на изобретение № 2376381). Фрагменты пептидоглика-на Lactobacillus casei и L.plantarum обладали способностью повышать антагонистическую активность Enterococcus spp. и Corynebacterium spp. и ингибиро-вать антагонизм некоторых коагулазопозитивных стафилококков. В то же время, влияние пептидогликана на антагонистическую активность Lactobacillus spp. и энтеробактерий не выявлено (Рис. 7).

В качестве тест-культуры для штаммов-антагонистов Enterococcus sp., Corynebacterium sp., Lactobacillus sp. и Enterobacter sp. использовали клинический изолят Staphylococcus aureus. На основе полученных результатов расшифрованы новые механизмы колонизационной резистентности биотопа -стимуляция антагонизма непатогенных ассоциативных микросимбионтов и ин-гибирование колонизационного потенциала патогенов доминантными микроорганизмами.

Обнаруженные эффекты стимуляции антагонистической активности представителей нормальной микрофлоры репродуктивного тракта женщин и её ин-гибирование у патогенов обосновывают использование регуляторов антагонизма на основе пептидогликанов лактобактерий в качестве биопрепаратов для повышения колонизационной резистентности биотопов человека.

Ehterococcus sp. Corynebacterium Lactobacillus sp. biterobactersp. SAureus tp.

штаммы-антагонисты □ Контроль □ ПГ L.casei ■ ПГ L.plantaium

* - p<0,05 - различия достоверны по сравнению с контролем

Рис. 7 - Влияние пептидогликана лактобацилл на антагонизм микросимбионтов репродуктивного тракта женщин. '

Если попытаться суммировать данные по участию доминантной микрофлоры в защите репродуктивного тракта женщин от заселения посторонних микроорганизмов, то бактериальные механизмы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин представляются следующими: 1) препятствие адгезии ассоциантов (патогенов); 2) прямой антагонизм (органические кислоты (лактат); антибактериальные ферменты (лизоцим); перекись водорода; продукция бактериоцинов и бактериоцинподобных веществ); 3) косвенный (непрямой) антагонизм или подавление персистентных характеристик аллохтонных микроорганизмов; 4) потенцирование (усиление) факторов эндогенной антимикробной защиты хозяина. Что же касается оценки вклада прямого антагонизма в колонизационную резистентность, то нами был предложен способ оценки колонизационной резистентности экологической ниши человека (Патент РФ № 2175673), основанный на выявлении качественных характеристик доминантных микроорганизмов, в частности, продукции ими различных секретируемых антагонистически активных веществ.

Поскольку была определена существенная роль в поддержании колонизационной резистентности симбиотических взаимодействий лактобацилл с организмом хозяина и с ассоциативными микроорганизмами, то на следующем этапе работы нами был исследован вагинальный микросимбиоценоз репродуктивного тракта женщин в зависимости от наличия или отсутствия этих доминантных микроорганизмов (Табл. 2). Оказалось, на фоне отсутствия или дефицита лактобацилл факторы персистенции (антилизоцимная и антикомплементарная активности) ассоциативных микроорганизмов выше, по сравнению с ас-социантами, где в микросимбиоценозе присутствует достаточное количество лактобацилл, что является отражением симбиотических отношений в векторе

Таблица 2.

Факторы персистенции микроорганизмов вагинального микросимбиоценоза с наличием или отсутствием лактобацилл__

Микроорганизмы лакгобациллы с ПМО >5 lgKOE/мл лактобациллы с ПМО <4 lgKOE/мл Без лактобацилл

АЛА АКА АЛА АКА АЛА АКА

S. epidermidis 0,4±0,05 13,1±6,11 0,34±0,06 13,5±4,0 0,65±0,07* 16,9±5,10

S. haemolyticus 0,45±0,07 10,8±7,22 0,47±0,07 11,4±5,79 0,43±0,06 11,9±5,03

КОС 0,38±0,04 11,6±0,73 0,41±0,04 12,4±1,17 0,46±0,04* 11,2±1,90

КПС 0,35±0,01 12,5±1,29 0,72±0,13* 16,9±1,59 0,58±0,10* 16,2±1,51

Streptococcus spp. 0,32±0,05 8,0±1,85 0,30±0,10 12,4±1,02 0,24±0,04 15,1±1,21*

Enterococcus spp. 0,29±0,08 11,2±1,13 озб±о,об* 12,1± 1,64 0^5±0,14* 13,9±1,48

Enterobacteria-ceae spp. 0,65±0,10 11,4±1,24 0,58±0,07 17,5±1,35* 0,56±0,04 18,2±1,84*

Corynebacterium spp. 0,27±0,01 6,9±0,76 0,44±0,04* 11,5±1,57 0,36±0,02* 10,0±1,54

Bacteroides spp. 0,20±0,06 9,2±1,30 0,04±0,01 16,4±1,25* 0,03±0,01 16,1±1,75*

Eubacterium spp. 0,04±0,01 7,8±1,57 0,1±0,02 9,5±1,15 0,22±0,02* 8,8±1,04

Propionibacterium spp. 0,31±0,06 6,3±1,26 0,35±0,07 12,1±1,04* 0,35±0,08 14,4±1,17*

Fusobacterium spp. 0,24±0,11 12,1±1,06 0,31±0,14* 18,4±1,20* 0,35±0,18* 17,7±1,39*

Bifidobacterium spp. 0Д4±0,02 6,3±1,31 0Д4±0,02* 7,8±1,62 0,26±0,02* 12,5±1,23*

Peptostreptococ-cus spp. 0,12±0,04 8,4±1,9 0,15±0,09 7,9±0,61 0,39±0,05* 17^±1,62*

Peptococcus spp. 0,17±0,10 12,8±1,47 0,53±038* 18,8±1,22* 0,23±0,02 18,4±1,22*

* - р<0,05 по сравнению с микроорганизмами из вагинального микросимбиоценоза с лактобациллами, ПМО которых >5 lgKOE/мл

«доминант - ассоциант». В этой ситуации происходят изменения в векторе «хозяин - ассоциант», которые реализуются на уровне взаимодействий ассоциативных микроорганизмов, обладающих персистентным потенциалом, с факторами местного иммунитета. Взаимодействие ассоциативных микроорганизмов с факторами местного иммунитета было продемонстрировано на примере двух важных и характерных для репродуктивного женского тракта систем: «лактоферрин хозяина - антилактоферриновая активность» и «лизоцим хозяина - антилизоцимная активность». Было выявлено наличие системы «лактоферрин хозяина - антилактоферриновая активность микроорганизмов» в вагинальном биотопе репродуктивного тракта у здоровых и больных эндометритом женщин (Рис. 8), которая в вагинальном биотопе отражает особенности

здоровые остр, энцометрит хр. эндометрит

Рис. 8 - Характеристика системы «антилактоферриновая активность микроорганизмов - лактоферрин хозяина» в вагинальном биотопе у женщин с эндометритом

| | - антилактоферриновая активность микроорганизмов - лактоферрин в вагинальном биотопе женщин

ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин и характер взаимодействия ассоциативных микроорганизмов с хозяином.

С точки зрения расшифровки патогенеза воспалительных заболеваний придатков матки (ВЗПМ) и оценки микрозкологического состояния репродуктивного тракта у больных женщин была проанализирована функциональная система «лизоцим хозяина - антилизоцимная активность микроорганизмов», которая базируется на взаимодействии антибактериальных факторов биотопа и факторов устойчивости к ним микроорганизмов, являясь одной из универсальных биологических систем. В случае развития и течения ВЗПМ микроорганизмы существуют в условиях действия антибактериального фактора естественной резистентности организма - лизоцима, концентрация которого в репродуктивном тракте женщин наиболее высокая по сравнению с другими органами и системами и достигает 40 мкг/мл. Результаты анализа данной системы у пациенток с ВЗПМ представлены на рис. 9,

70 т-------------------------

<о

а 20--

10---

0 -I-1-1-1--1-

0-0,5 0,5-1 1-1,5 1,5-2 2-2,5

антилизоцимная активность, мкг/млОД

Рис. 9 - Характеристика связи антилизоцимной активности микроорганизмов и лизоцима цервикального канала у женщин с воспалительными заболеваниями придатков матки

из которого видно, что для системы «лизоцим - антилизоцимная активность» имеет место усиление антилизоцимной активности бактерий при увеличении количества лизоцима в цервикальном канале. Кроме того, было отмечено, что факторы врождённого иммунитета в биологических секретах в большом количестве приводят к селекции штаммов с выраженными персистентными свойствами. В данном случае так происходило с антилактоферриновой и антилизоцимной активностями микроорганизмов. Не исключено, что это может быть одним из базовых механизмов развития нарушений ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта и иметь патогенетическое значение в развитии инфекции, так как происходит селекция устойчивых штаммов.

На следующем этапе исследований мы установили характер микроэкологических изменений в вагинальном микросимбиоценозе при различных инфек-ционно-воспалительных процессах, который заключается в снижении количества лактофлоры, увеличении видового богатства микрофлоры, увеличении доли анаэробных микроорганизмов и повышении персистентного потенциала вагинальной микрофлоры.

Анализ изменений видового состава и биологических свойств микроорганизмов, изолированных у обследованных женщин, позволил выделить 4 основных типа вагинального микросимбиоценоза (Табл. 3), где 2-4 типы рассматривали как варианты дисбиотических состояний: 1) соответствует нормальному состоянию, характеризуется достаточным количеством лактофлоры и низкими значениями факторов персистенции условно-патогенных микроорганизмов; 2) микросимбиоценоз, характеризующийся дефицитом лактофлоры и наличием условно-патогенных микроорганизмов с низкими значениями факторов персистенции; 3) микросимбиоценоз, характеризующийся высокими значениями факторов персистенции условно-патогенных микроорганизмов на фоне нормального или низкого содержания лактобацилл; 4) бактериальный ваги-ноз, как особый тип микроэкологических нарушений.

Из представленных данных следует, что трихомонадная инфекция, воспалительные заболевания придатков матки и трихомоноз в сочетании с воспа-

лительными заболеваниями придатков матки сопровождались достоверным снижением частоты встречаемости нормального состояния микросимбиоцено-за до 13,0%, 7,7% и 4,5% соответственно по сравнению с 50,0% у здоровых.

Таблица 3

Характеристика микробиоценоза влагалища обследованных женщин

Характеристика мик росимбиоценоза

1. Состояние 2.Дефицит 3. Наличие 4.Бактери-

вагинального лактофлоры УПМ с вы- альный ва-

Обследованные микробиоце- без увеличе- раженными гиноз

женщины ноза, соответ- ния количест- персистент-

ствующее ва анаэробных ными харак-

нормальному микроорганизмов теристиками

Женщины 50,0% 34,8% 8,7% 6,5%

группы срав- (23) (16) (4) (3)

нения,

п = 46

Больные три- 13,0%* 24,1%* 38,8%* 24,1%*

хомонозом, (7) (13) (21) (13)

п = 54

Больные три- 4,5* 9,1* 59,1* 27,3*

хомонозом и (2) (4) (26) (12)

ВЗПМ,

п = 44

Больные 7,7%* 17,3%* 67,3%* 7,7%

ВЗПМ, п = 52 (4) (9) (35) (4)

Женщины с 10%* 20%* 40%* 30%*

острым эндо- (4) (8) (16) (12)

метритом, п= 40

Женщины с 6%* 20%* 44%* 30%*

хроническим (3) (10) (22) (15)

эндометритом, п= 50

* - р <0,05 по отношению к группе сравнения

Одновременно с этим отмечено увеличение частоты выделения условно-патогенных микроорганизмов с выраженными персистентными свойствами -8,7% у женщин группы сравнения и 38,8% у больных трихомонозом, 67,3% у больных ВЗПМ и 59,1% у больных трихомонозом и ВЗПМ. Кроме того, было

выявлено увеличение доли пациенток с бактериальным вагинозом до 24,1% при трихомонадной инфекции, до 7,7% при ВЗПМ и до 27,3% при трихомонозе и ВЗПМ по отношению к 6,5% в группе сравнения.

Вместе с этим процент женщин с дефицитом лактофлоры среди больных трихомонозом (24,1%), больных ВЗПМ (17,3%) и больных трихомонозом в сочетании с ВЗПМ (9,1%) был ниже, чем процент женщин с дефицитом лактофлоры в группе сравнения (34,8%). Оказалось, что у 57,6% здоровых женщин, состояние микрофлоры влагалища соответствовало норме. В 25,6% было выявлено преобладание условно-патогенной флоры с выраженными персистент-ными характеристиками. Дефицит лактофлоры встречался у 16,8% здоровых женщин.

В группе женщин больных острым и хроническим эндометритом нормо-ценоз регистрировался в 10% и в 6% случаев соответственно. У 20% женщин данной группы выявлен дефицит лактофлоры. Преобладание условно-патогенной флоры с выраженными персистентными характеристиками в вагинальном микробиоценозе регистрировалось у 40-44%. В 30% случаев был выявлен бактериальный вагиноз, как самостоятельный тип микроэкологических нарушений.

Таким образом, при инфекции репродуктивного тракта женщин наблюдаются микроэкологические изменения, характеризующиеся дефицитом нор-мофлоры и увеличением частоты выделения условно-патогенных микроорганизмов с выраженными персистентными характеристиками, что может иметь патогенетическое значение в развитии воспалительных заболеваний.

Для оценки связи между нарушениями в вагинальном микросимбиоцено-зе и воспалительными заболеваниями репродуктивного тракта женщин было определено количество доминантных лактобацилл, наличие условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в вагинальном биотопе у женщин с воспалительными осложнениями внутриматочной контрацепции и без них. Как видно из таблицы 4, наиболее часто возникали осложнения у женщин, в ваги-

нальной микрофлоре которых наблюдали либо дефицит лактобацилл, с содержанием данных микроорганизмов <4 lg КОЕ/мл, либо присутствие аллохтон-ных микроорганизмов: энтеробактерий, золотистого стафилококка, гарднерелл или грибов рода Candida. Другими словами была выявлена связь между частотой возникновения осложнений и типом микросимбиоценоза влагалища.

Таблица 4.

Связь воспалительных осложнений у женщин с различными типами вагинального микросимбиоценоза при внутриматочной контрацепции

Типы вагинального микросимбиоценоза Отсутствуют Е. coli, S. aureus, G. vaginalis, Candida spp. Присутствуют Е. coli, S. aureus, G. vaginalis, Candida spp.

ПМО лактобацилл >5 lg КОЕ/мл ПМО лактобацилл <4 lg КОЕ/мл ПМО лактобацилл >5 lg КОЕ/мл ПМО лактобацилл <4 lg КОЕ/мл

Количество женщин с осложнениями (%) - 66,6 71,4 100

Количество женщин без осложнений (%) 100 33,4 28,6 -

Исследование связи микроэкологических изменений в репродуктивном тракте женщин с клиническими проявлениями воспалительных заболеваний придатков матки позволили выделить дополнительные критерии оценки и разработать способ прогнозирования течения воспалительных заболеваний. Были установлены частота и сроки возникновения рецидивов воспалительных заболеваний у женщин с различными типами вагинального микробиоценоза. Проведённый анализ показал, что рецидивы чаще возникали у женщин с микроэкологическими нарушениями как на фоне трихомонадной инфекции, так и без трихомоноза. У женщин с микросимбиоценозом, соответствующим норме, рецидивы воспалительных заболеваний придатков матки с трихомонадной инфекцией и без трихомоноза были зарегистрированы соответственно в 62,5% и

33,3% случаев, у женщин с дефицитом лактофлоры в 77,3% и 64,0%, при наличии бактерий в вагинальном биотопе с выраженными факторами персистенции у 71,0 и 60,0 % женщин и с бактериальным вагинозом у 87,5% и 50,0% женщин. Следует отметить преобладание частоты рецидивов воспалительных заболеваний придатков матки на фоне трихомонадной инфекции.

Кроме того, была проанализирована длительность ремиссии воспалительных заболеваний придатков матки у обследованных женщин. Самая длительная ремиссия заболевания была отмечена у женщин с вагинальным микро-симбиоценозом, соответствующим норме с трихомонадной инфекцией - 11,6 мес. и без протозойной инвазии - 17,5 мес. У женщин с дисбиотическими состояниями вагинального микросимбиоценоза сроки ремиссии значительно сокращались и составили на фоне трихомоноза и при его отсутствии соответственно: с дефицитом лактофлоры - 8,4 и 11,3 мес., с наличием в вагинальном биотопе микроорганизмов с выраженными факторами персистенции - 8,2 и 12,2 мес. и с бактериальным вагинозом - 7,1 и 14,5 мес.

Данные о значении микроэкологических изменений в биотопах репродуктивного тракта женщин в рецидивировании воспалительных заболеваний придатков матки были также подтверждены исследованиями, позволившими установить связь между микроэкологическим статусом вагинального биотопа и развитием рецидивов эндометрита. Микроэкологическое состояние влагалища оценивали на основании количества лактобацилл, наличия условно-патогенных микроорганизмов и их факторов персистенции (АЛА и АКА), наличия бактериального вагиноза. Наименьшая частота рецидивирования и наибольшая длительность ремиссии была у женщин с нормоценозом вагинального биотопа, тогда как у женщин с микроэкологическими нарушениями частота рецидивов возрастала, а длительность ремиссии снижалась. Это позволило сделать заключение о возможности использования состояния вагинального микробиоценоза для оценки характера течения эндометрита.

Исследование частоты рецидивирования эндометрита и сроков ремиссии в зависимости от типа вагинального микросимбиоценоза показало, что при

нормоценозе вагинального биотопа процент рецидивов составлял около 10%, тогда как преобладание условно-патогенной микрофлоры с высоким перси-стентным потенциалом способствовало увеличению данного показателя в 6 и 8 раз, что соответствовало 60% при остром процессе и 78% при хроническом эндометрите. У женщин с бактериальным вагинозом рецидивы возникали в 2,5 раза чаще (24-27%). При дефиците лактофлоры во влагалище рецидивы отмечались в 15-18% случаев.

Также была проанализирована длительность ремиссии у женщин с эндометритом в зависимости от состояния вагинального микробиоценоза. Принимая во внимание незначительный процент нормоценоза влагалища у женщин с воспалительным процессом полости матки, у данной категории пациенток выявлена самая длительная ремиссия: 15 месяцев после острого эндометрита и 12 месяцев после обострения хронического. На фоне дефицита лактофлоры, наблюдалось укорочение сроков ремиссии. Преобладание ассоциативных микроорганизмов с высокими персистентными характеристиками в вагинальном биотопе способствовало укорочению сроков ремиссии в 2 раза, что соответствовало 7,5 и 7,1 месяцам после острого и обострения хронического эндометрита. Наименьшая длительность ремиссии выявлена у женщин с бактериальным вагинозом как после острого, так и после обострения хронического эндометрита.

Таким образом, наименьшая длительность ремиссии и наибольшая частота рецидивов воспалительных заболеваний выявлена у женщин с бактериальным вагинозом и наличием в вагинальном биотопе микроорганизмов с выраженными персистентными характеристиками. Иными словами, микроэкологический подход позволяет использовать состояние вагинального микросим-биоценоза для оценки характера течения воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин.

Принимая во внимание значение микроэкологических нарушений репродуктивного тракта женщин в развитии воспалительных заболеваний придатков

матки, была предпринята попытка прогнозирования рецидивов указанных патологических состояний.

Для этой цели был осуществлен анализ данных, полученных при обследовании 72 женщин, которые были разделены на две группы: группу А, в которую вошли 40 пациенток с рецидивом и группу В - 32 пациентки без рецидива.

Исследовали наиболее значимые факторы для прогнозирования течения воспалительного процесса в гениталиях: наличие в высеваемой микрофлоре микроорганизмов, нетипичных для данного биотопа; ПМО условно-патогенных микроорганизмов; ПМО лактобацилл, наличие у микроорганизмов высоких (или низких) уровней выраженности факторов персистенции (АЛА и АКА), наличие трихомонад, грибов рода Candida и ключевых клеток. Каждый из исследуемых признаков имел два диапазона: «+»- наличие признака, «- » -отсутствие признака.

При выборе диагностических порогов остановились на порогах «-15» и «+15», при которых вероятность допустимой ошибки составляет 15%.

Группу проверки диагностической таблицы составили из обследуемых аналогичной выборки и для каждого обследуемого определяли возможность причисления к группе А или В (Табл. 5).

Накопление диагностической информации вели в порядке убывания информативной значимости признаков, складывая диагностические коэффициенты (ДК) соответствующих признаков.

В итоге проведенный математический анализ дал следующие результаты:

1. Неоднородная последовательная процедура позволяет дифференцировать больных на 2 группы с вероятностью ошибки не более 15% при достижении пороговых значений.

2. Наиболее информативные показатели для прогнозирования в порядке убывания: ПМО условно-патогенных микроорганизмов, ПМО лактобацилл, AJIA, АКА, наличие трихомонад, наличие грибов рода Candida, клиниче-

ское улучшение от проводимого консервативного лечения, наличие в вагинальном биотопе нетипичных микроорганизмов, наличие ключевых клеток.

Таблица 5

Информативность и диагностические коэффициенты признаков, значимых при прогнозировании воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин ____

Признаки Диапазоны вероятность Ра/Рь дк - Информативность

Ра Рь

Нетипичные микробы «+» 0,164 0,315 0,521 -2,829 0,213

«-» 0,836 0,685 1,220 0,865 0,065

ПМО лак-тобацилл < 4,0 «+» 0,233 0,883 0,264 -5,788 1,881

0,767 0,117 6,550 8,162 2,653

ПМО УПМ >105 «+» 0,192 0,901 0,213 -6,719 2,382

« -» 0,808 0,099 8,156 9,115 3,232

АЛА >0,4 0,356 0,748 0,476 -3,221 0,631

«-» 0,644 0,252 2,552 4,069 0,797

АКА >4,0 «+» 0,438 0,802 0,547 -2,622 0,477

«-» 0,562 0,198 2,834 4,524 0,822

Трихомонады «+» 0,110 0,423 0,259 -5,870 0,921

«-» 0,890 0,577 1,544 1,887 0,296

Грибы рода Candida «+» 0,205 0,523 0,393 -4,053 0,643

«-» 0,795 0,477 1,664 2,212 0,351

Наличие ключевых клеток «+» 0,096 0,216 0,443 -3,531 0,212

«-» 0,904 0,784 1,154 0,620 0,037

Анализируя представленные данные следует отметить, что попытка прогнозирования течения воспалительного заболевания или возникновения воспалительных осложнений различных внутриматочных вмешательств, основанная на оценке комплекса показателей микроэкологического статуса репродуктивного тракта женщин оправдала себя. Не случайно критерии оценки состояния вагинального микросимбиоценоза были включены в перечень микроэкологических показателей, отобранных для расчета прогноза рецидивирования заболевания, что нашло подтверждение в других работах (Кремлёва Е.А., 2000, Чайникова И.Н., 2006).

Проведенные исследования позволили определить клиническое значение микроэкологических изменений в репродуктивном тракте женщин для прогнозирования рецидивирования воспалительных заболеваний. При составлении таблицы диагностических коэффициентов, были включены информативные патогенетически значимые показатели в цифровом выражении: ПМО условно-патогенных микроорганизмов, ПМО лактобацилл, АЛА, АКА, наличие трихо-монад, наличие грибов рода Candida, наличие в вагинальном биотопе нетипичных микроорганизмов, наличие ключевых клеток. Прогноз основывался на расчете суммы диагностических коэффициентов указанных показателей. При достижении максимально возможных значений ошибка прогнозирования рецидива воспалительных заболеваний составила не более 15%.

Таким образом, установлена высокая распространенность рецидивов и короткие сроки ремиссии у женщин с микроэкологическими нарушениями в репродуктивном тракте. Микроэкологические изменения в вагинальном биотопе являются фактором рецидивирования воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин, способствующим сокращению сроков ремиссии и увеличению частоты рецидивов. Поэтому микроэкологический подход позволяет использовать состояние вагинального микросимбиоценоза (дефицит лак-тофлоры, наличие условно - патогенных микроорганизмов с выраженными персистентными свойствами и изменениями по типу бактериального вагиноза) для оценки характера течения воспалительных заболеваний.

Другой прикладной аспект проведенных исследований заключается в том, что полученные данные относительно ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин объясняют эффективность предложенного ранее нами «Способа коррекции урогенитального дисбиоза» (Патент РФ № 2161971). Применение эстрогенов, лежащее в основе данного способа, способствует восстановлению ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин, поскольку приводит к восстановлению количества доминантных микроорганизмов и их симбионтов - коринебактерий, снижению персистентных характеристик ассоциативных условно-патогенных микроорганизмов и восстановлению

факторов местного иммунитета, что, в конечном итоге, приводит к снижению частоты рецидивирования и увеличению сроков ремиссии инфекционно-воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин.

Выявленные типы дисбиотических нарушений вагинального биотопа женщин позволили обосновать патогенетические особенности формирования воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин. Важным моментом в развитии воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин является наличие провоцирующих факторов таких как антибиотикотера-пия, нарушения гормональной регуляции (Рис. 10). Вероятно, не меньшее значение имеет и выявленная высокая корреляционная связь внутриматочных вмешательств и трихомоноза с воспалительными заболеваниями придатков матки, что объясняется развитием дисбиотических изменений в вагинальном биотопе женщин с дефицитом лактофлоры, появлением условно-патогенных микроорганизмов с высоким персистентным потенциалом и появлением микроорганизмов не свойственных данному биотопу. Уменьшение количества лактобацилл, приводит к снижению их прямого антагонизма и антиперси-стентного действия, что проявляется избыточным ростом условно-патогенных микроорганизмов, включая и анаэробные, с выраженными факторами персистенции. В цепи происходящих изменений немаловажным является изменение со стороны факторов врожденного иммунитета хозяина. С позиций ассоциативного симбиоза повышение значений факторов местного иммунитета, одно из условий для селекции штаммов бактерий с высоким персистентным потенциалом. Вот почему, описанные явления, происходящие в репродуктивном тракте, можно определить как нарушение ассоциативного симбиоза, включающее изменения состояния факторов местной защиты и, как следствие, дисбиотические явления в биотопах репродуктивного тракта. Естественно, это способствует отбору штаммов с персистентными характеристиками и реализации патогенного потенциала возбудителя, вследствие чего развивается эндометрит или воспаление придатков матки, что ещё в большей степени приводит

Провоцирующий фактор

АССОЦИАТИВНЫЙ СИМБИОЗ

Организм хозяина (вагинальный эпителий, факторы местного иммунитета)

Доминантные микроорганизмы

Ассоциативные микроорганизмы

НАРУШЕНИЕ АССОЦИАТИВНОГО СИМБИОЗА

- Увеличение значений факторов местного иммунитета;

- Дефицит лактобацилл, увеличение количества ассоциативных микроорганизмов, включая анаэробные;

- Увеличение значений факторов персистенции ассоциативных микроорганизмов

Инфекционно-воспалительные заболевания репродуктивного тракта женщин

Рис. 10 - Нарушения ассоциативного симбиоза в патогенезе воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин

к нарушению микроэкологического состояния репродуктивного тракта женщин и замыкает порочный круг.

Оценивая изложенный материал в целом, следует отметить, что:

- ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта женщин является биологической основой колонизационной резистентности, отражающей уровень микроэкологического гомеостаза;

- нарушение ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин носит универсальный характер и сопровождается дефицитом доминантной микрофлоры, усилением персистентного потенциала ассоциативных микросимбионтов и их видового разнообразия;

- выявленные изменения способствуют снижению колонизационной резистентности хозяина и, как следствие, возникновению и/или рецидивирова-нию воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин, что позволяет прогнозировать развитие инфекционных процессов репродуктивного тракта женщин, и корректировать их профилактику.

Выводы:

1. Ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта женщин включает доминантную микрофлору - лактобациллы, различные таксоны ассоциативных микроорганизмов и хозяина с его врождённым иммунитетом, формируя взаимодействия в трёх векторах: «хозяин - доминант», «хозяин - ассоци-ант» и «доминант - ассоциант» (микросимбиоценоз).

2. Антагонизм перекись продуцирующих лактобацилл по отношению к ката-лазоположительным микроорганизмам реализуется за счет их способности ингибировать бактериальную каталазу в качестве одного из бактериальных механизмов колонизационной резистентности.

3. Подавляющее воздействие вагинальных лактобацилл на биологические свойства (персистентный потенциал) S. epidermidis и Е. coli характеризует непрямой антагонизм доминантной микрофлоры по отношению к ассоциативным микроорганизмам и зависит не только от вида лактобацилл, но и от вида бактерий-ассоциантов, способствуя эффективному поддержанию микроэкологического гомеостаза организма.

4. В рамках симбиотических взаимодействий вектора «хозяин - доминант» выявлена способность лактобацилл потенцировать антибактериальное действие сыворотки крови, лизоцима и антимикробного белка тромбоцитов по отношению к ассоциативной микрофлоре (S.aureus, Е. coli и В. subtilis), усиливая эндогенную защиту хозяина.

5. Нарушение колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин при инфекции осуществляется на фоне отсутствия или дефицита лактобацилл в вагинальном микросимбиоценозе и характеризуется наличием ассоциативных микроорганизмов с выраженными факторами персистенции (антилизоцимная и антикомплементарная активности).

векторе «хозяин - ассоциант» и определяя один из механизмов развития нарушений ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин.

7. В репродуктивном тракте женщин при различных инфекционно-воспалительных заболеваниях на основе оценки количества доминантных микроорганизмов, а также количественно-качественных характеристик пер-систентного потенциала ассоциативных микросимбионтов выделено 4 универсальных типа вагинального микросимбиоценоза, что . имеет патогенетическое значение в развитии инфекции репродуктивного тракта женщин.

8. Оценка состояния ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин позволяет прогнозировать развитие инфекционно-воспалительных процессов (осложнений) репродуктивного тракта женщин и осуществлять коррекцию ассоциативного симбиоза в целях профилактики инфекций.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Монографии

1. Черкасов C.B. Микробная экология репродуктивного тракта женщин. С. 337-388. /Коллективная монография под ред. О.В. Бухарина: Экология микроорганизмов человека. Екатеринбург: УрО РАН, 2006,480 с.

2. Бухарин О.В., Лобакова Е.С., Немцева Н.В., Черкасов C.B. Ассоциативный симбиоз. Екатеринбург: УрО РАН, 2007,260 с.

3. Бухарин О.В., Лобакова Е.С., Перунова Н.Б., Усвяцов Б.Я., Черкасов C.B. Симбиоз и его роль в инфекции. Екатеринбург: УрО РАН, 2011,301 с.

Статьи в журналах, рекомендованных ВАК

4. Бухарин О.В., Константинова О.Д., Кремлева Е.А., Черкасов C.B. Характеристика влагалищной микрофлоры при внутриматочной контрацепции /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. №4. С. 63-65.

5. Бухарин О.В., Константинова О.Д., Кремлева Е.А., Черкасов C.B. Микробиологические критерии прогнозирования воспалительных осложнений внутриматочной контрацепции /Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. 1999. №3. С. 118-119.

6. Константинова О.Д., Кремлева Е.А., Черкасов C.B., Чертков К.Л. Микрофлора репродуктивного тракта женщин при внутриматочных вмешательствах /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. №2. С. 98-100.

7. Бухарин О.В., Константинова О.Д., Кремлева Е.А., Черкасов C.B. Коррекция дисбиоза репродуктивного тракта женщин с помощью эстриолсодержа-щего препарата /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. №2. С. 100-102.

8. Константинова О.Д., Кремлева Е.А., Черкасов C.B. Микробиологические подходы к прогнозированию воспалительных осложнений внутриматочных вмешательств /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. №4. С. 92-95

9. Бухарин О.В., Черкасов C.B., Сгибнев A.B., Забирова Т.М., Иванов Ю.Б. Влияние микробных метаболитов на активность каталазы и рост Staphylo-

coccus aureus 6538 P /Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2000. Т. 130. № 6. С. 80-82.

10. Черкасов С.В., Забирова Т.М., Сгибнев А.В., Иванов Ю.Б., Бухарин О.В. Изменение биологических свойств Staphylococcus epidermidis и Escherichia coli под влиянием метаболитов вагинальных лактобацилл в эксперименте /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. № 4. С. 114-117.

11. Бухарин О.В., Сгибнев А.В., Черкасов С.В., Иванов Ю.Б. Изменение активности каталазы Staphylococcus aureus АТСС 6538 Р под влиянием метаболитов микроорганизмов, выделенных из разных экотопов /Микробиология. 2002. Т. 71. №2. С. 183-186.

12. Черкасов С.В., Забирова Т.М., Сгибнев А.В., Черкасов И.В. Роль биологических свойств вагинальных лактобацилл в процессах колонизации /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003. №4. С. 61-64.

13. Бухарин О.В., Валышев А.В., Черкасов С.В. Персистентный потенциал условно-патогенных микроорганизмов /Эпидемиология и вакцинопрофи-лактика. 2005. № 4 (23). С. 43-48.

14. Бухарин О.В., Валышев А.В., Черкасов С.В. Современные аспекты микробной экологии человека /Вестник уральской медицинской академической науки. 2006. № 1. С. 29-32.

15. Черкасов И.В., Забирова Т.М., Лешина Е.А., Черкасов С.В. Характеристика вагинального микробиоценоза при трихомонадной инфекции /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. №4. С. 97100.

16. Черкасов С.В. Бактериальные механизмы колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006. №4. С. 100-105.

17. Семёнов А.В., Сгибнев А.В., Черкасов С.В., Бухарин О.В. Микробная регуляция антагонистической активности бактерий /Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2007. Т. 144. №11. С. 545-548.

18. Бухарин О.В., Усвяцов Б .Я., Карташова О.Л., Валышев А.В., Черкасов С.В., Гриценко В.А. Микробная экология человека: современные аспекты /Медицинская наука и образование Урала. 2008. №2. С. 18-21.

19. Глухова Е.В., Черкасов'C.B., Сгибнев A.B., Бухарин О.В. Характеристика микроэкологических нарушений при эндометрите /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2009. №4. С. 93-96.

20. Бухарин О.В., Семёнов A.B., Черкасов C.B. Характеристика антагонистической активности пробиотических бактерий при их взаимодействии /Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2010. Т. 12. №4. С. 347-352.

21. Черкасов C.B., Гладышева И.В. Антибиотикорезистентность коринеформ-ных бактерий репродуктивного тракта женщин /Антибиотики и химиотерапия. 2010. Т.55, № (9-10). С. 45-49.

22. Семенов A.B., Черкасов C.B. Влияние ассоциативных микроорганизмов на антагонистическую активность бактерий /Вестник Новосибирского государственного университета. 2011. Т. 9. № 3. С. 20-27.

Публикации в других изданиях

23. Черкасов C.B., ЗабироваТ.М., Сгибнев A.B., Черкасов И.В. Биологические свойства лактобацилл биотопов человека в норме и при дисбиозах /Сб. материал. междунар. конф. «Пробиотики, пребиотики, синбиотки и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы», Москва, 2004, с. 36-37.

24. Бухарин О.В., Валышев A.B., Гриценко В.А., Карташова О.Л., Усвяцов Б.Я., Черкасов C.B. Новые подходы к диагностике и терапии дисбиозов и ассоциированной с ними инфекционно-воспалительной патологии /Тез. докл. конф. «Фундаментальные науки - медицине» по программе фундаментальных исследований Президиума РАН, Москва, 2004, с. 26-27.

25. Черкасов C.B., Сгибнев A.B. Бактериальные механизмы колонизационной резистентности /Физиология микроорганизмов в природных и экспериментальных системах (памяти профессора М.В. Гусева): Материалы междунар. науч. конф., Москва, МГУ им. М.В. Ломоносова, биологический факультет, 16-19 мая 2006 г. - М.: МАКС Пресс 2006. - С. 43.

26. Черкасов C.B. Характеристика ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин при различных инфекционных состояниях /Бюллетень московского общества испытателей природы. Отдел биологический, 2009, Т. 114, выпуск 2, приложение 1, с. 116-117.

Патенты на изобретения

27. Бухарин О.В., Кузьмин М.Д., Константинова О.Д., Черкасов C.B., Кремле-ва Е.А., Иванов Ю.Б. Способ коррекции урогенитального дисбиоза. Патент РФ на изобретение № 2161971 от 20.01.2001 г.

28. Бухарин О.В., Забирова Т.М., Чертков K.JL, Черкасов C.B., Иванов Ю.Б. Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека. Патент РФ на изобретение № 2175673 от 10.11.2001 г.

29. Бухарин О.В., Сгибнев A.B., Черкасов C.B., Иванов Ю.Б. Способ выявления у бактерий ингибиторов каталазы микроорганизмов. Патент РФ на изобретение № 2180353 от 10.03.2002 г.

30. Бухарин О.В., Семёнов A.B., Черкасов C.B., Сгибнев A.B. Способ определения способности микроорганизмов регулировать антагонистическую активность бактерий. Патент РФ на изобретение № 2376381 от 20.12.2009 г.

ЧЕРКАСОВ Сергей Викторович

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Подписано в печать 12.09.2011 г. Формат 60x84 1/16. Печать офсетная. Усл. печ. листов - 2,0. Тираж 150 экз.

Оригинал-макет изготовлен с помощью текстового редактора Microsoft Word 2003 for Windows. Гарнитура Times.

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Черкасов, Сергей Викторович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Экология микроорганизмов репродуктивного тракта женщин (Обзор литературы).

1.1. Микросимбиоценоз репродуктивного тракта женщин.

1.1.1. Лактобациллы - доминантные микроорганизмы вагинального биотопа.

1.1.2. Ассоциативная микробиота репродуктивного тракта женщин

1.2. Местный иммунитет репродуктивного тракта женщин.

1.3. Факторы, оказывающие влияние на состояние микроэкологии репродуктивного тракта женщин.

1.4. Микроэкологические нарушения и инфекционные состояния репродуктивного тракта женщин.

1.5. Современные подходы к коррекции микроэкологических на- 59 рушений репродуктивного тракта женщин.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Общие данные.

2.2. Характеристика штаммов микроорганизмов.

2.3. Методы выделения микроорганизмов.

2.4. Методы идентификации выделенных штаммов микроорганиз-66 мов.

2.5. Характеристика состояния микросимбиоценоза репродуктивного тракта женщин.

2.6. Лабораторная диагностика трихомонадной инфекции.

2.6.1. Микроскопическое исследование.

2.6.2. Культуральное исследование.

2.7. Изучение биологических свойств бактерий.

2.7.1. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов.

2.7.2. Метод определения антикомплементарной активности микроорганизмов.

2.7.3. Метод определения антилактоферриновой активности микроорганизмов.

2.7.4. Метод изучения способности лактобацилл сорбировать лизо-цим.

2.7.5. Метод определения лизоцимной активности лактобацилл.

2.7.6. Метод определения чувствительности лактобацилл к антибиотикам

2.7.7. Метод определения адгезивной способности лактобацилл.

2.7.8. Метод определения бактериоциногенности и бактериоцино-чувствительности лактобацилл.

2.7.9. Метод определения продукции лактобациллами перекиси водорода

2.8. Методы определения факторов естественной резистентности. 83 2.8.1. Определение количества лейкоцитов и нейтрофилов в цервикальном секрете.

2.8.2. Определение лизоцима в цервикальном секрете.

2.8.3. Метод количественного определения SIgA, Scorn, IgG, IgM, IgA, IgE, СЗ компонента комплемента и лактоферрина в цервикальной слизи.

2.9. Методика изучения изменения биологических свойств Staphylococcus epidermidis и Escherichia coli под влиянием метаболитов вагинальных лактобацилл.

2.10. Определение роста S. aureus при совместном влиянии метаболитов Corynebacterium minutissimum и перекиси водорода.

2.11. Методика изучения влияния эстриолсодержащих препаратов и комбинированных оральных контрацептивов на микрофлору репродуктивного тракта при дисбиозе.

2.12. Методы статистической обработки полученных результатов.

ГЛАВА 3. Характеристика лактобацилл, как доминантных микроорганизмов репродуктивного тракта женщин.

3.1. Вагинальная лактофлора в норме и при дисбиотических состояниях.

3.2. Характеристика прямого антагонизма вагинальной лактофло

3.3. Косвенный (непрямой) антагонизм вагинальных лактобацилл.

3.4. Потенцирование лактобациллами эндогенных факторов защиты организма хозяина.

ГЛАВА 4. Взаимодействие ассоциативных микроорганизмов и факторов местного иммунитета репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях.

ГЛАВА 5. Характеристика микросимбиоценоза репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях.

5.1. Вагинальный микросимбиоценоз при воспалительных заболеваниях придатков матки и трихомонадной инфекции.

5.2. Микрофлора биотопов репродуктивного тракта женщин при эндометрите.

5.3. Сравнительная характеристика вагинального микросимбиоценоза в норме и при различных воспалительных заболеваниях.

ГЛАВА 6. Значение нарушений ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин при воспалительных заболеваниях.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина (на модели женского репродуктивного тракта)"

Актуальность проблемы

В настоящее время открытым остаётся вопрос о симбиотических взаимодействиях лактобацилл, ассоциативных микроорганизмов и макроорганизма в реализации колонизационной резистентности. Являясь доминантным таксоном, лактобациллы вносят весомый вклад в бактериальную составляющую колонизационной резистентности хозяина, хотя известно, что отдельные биовары лактобацилл не всегда обладают полным набором факторов антагонизма и осуществляют достаточную защиту биотопа. Этот важный момент определяет необходимость исследования биологических свойств лактобацилл и комплексную оценку их участия в реализации колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин. Интерес представляет и изучение не только прямой антагонистической активности лактобацилл за счет продукции различных антибактериальных субстанций, таких как органические кислоты, лизо-цим, бактериоцины, перекись водорода, но и выявление возможности этих микроорганизмов подавлять персистентный потенциал условно-патогенных аллохтонных микроорганизмов. С позиций ассоциативного симбиоза колонизационная резистентность организма может осуществляться посредством взаимодействия доминантных лактобацилл с другими представителями микросимбиоценоза репродуктивного тракта женщин, а это открывает новые перспективы, как для расшифровки бактериальных механизмов колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин, так и для биотехнологической разработки штаммов пробиотических микроорганизмов с комплексным воздействием на ал-лохтонную микрофлору.

Учитывая, что факторы персистенции ассоциативных патогенных и условно-патогенных бактерий способствуют их выживанию в организме хозяина, формированию длительно текущего инфекционного процесса и развитию дисбиотических состояний, изучение подавления экспрессии персистентных свойств бактерий различными биотическими и абиотическими факторами лежит в основе рационального подхода в борьбе с патогенами женского репродуктивного тракта. Представляет интерес и исследование взаимодействия ассоциативных микроорганизмов с организмом хозяина через взаимосвязь факторов его местного иммунитета и персистентного потенциала бактерий. Если к этому присовокупить, что колонизационная резистентность биотопов, рассматриваемая как результат действия нормофлоры и факторов защиты макроорганизма, где мощное защитное действие факторов естественной резистентности может быть связано с их взаимным потенцированием (Кок-ряков В.Н., 2006), то совместное влияние доминантных микроорганизмов и факторов эндогенной защиты хозяина требует дополнительного изучения.

Вышеизложенное явилось основанием для формулирования цели и задач настоящего исследования.

Цель и задачи исследования

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

2. Выявить значение симбиотических взаимодействий в условиях мик-росимбиоценоза доминантных и ассоциативных микроорганизмов для поддержания колонизационной резистентности репродуктивного тракта женщин.

3. Охарактеризовать взаимосвязь факторов местного иммунитета и пер-систентного потенциала бактерий как основу взаимодействия ассоциативных микроорганизмов с организмом хозяина.

4. Определить характер нарушений ассоциативного симбиоза при ин-фекционно-воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта женщин.

Научная новизна

Колонизирующая способность лактобацилл как доминантной микрофлоры репродуктивного тракта женщин связана с выраженностью их адгезии и способностью сорбировать лизоцим. Показатель микробной обсеменённости (ПМО) прямо коррелировал со значениями указанных признаков. Микроорганизмы, выделенные при эубиозе, характеризовались выраженным колонизирующим потенциалом, высокой лизоцимной активностью и низкой антибиотикорезистентностью по сравнению со штаммами, выделенными при дисбиозе.

Оценено значение бактериоциногении и бактериоциночувстви-тельности в формировании видовой структуры лактофлоры, где наиболее часто встречающиеся виды лактобацилл характеризовались высокой бактериоциногенией и низкой бактериоциночувствительностью.

Разработан метод определения способности микроорганизмов ин-гибировать бактериальную каталазу (Патент РФ № 2180353) и метод количественного определения продукции перекиси водорода для выявления антагонистически активных лактобацилл в отношении аллохтонных бактерий на основе способности перекись продуцирующих лактобацилл ингибировать бактериальную каталазу.

Выявлено модифицирующее действие метаболитов лактобацилл на активность каталазы, персистентные характеристики и прирост биомассы S. epidermidis и Е. coli. Супернатанты лактобацилл оказывали более выраженное ингибирующее действие на активность каталазы по сравнению с клеточными экстрактами. Наибольшее снижение значений антилизоцимной активности (АЛА) и антикомплементарной активности (АКА) S. epidermidis происходило при воздействии клеточных экстрактов, а у Е. coli указанные свойства снижались преимущественно под влиянием супернатантов.

Острые воспалительные заболевания репродуктивного тракта женщин или обострение хронических протекают на фоне снижения колонизационной резистентности, что проявляется в абсолютном или относительном увеличении количества ассоциативных условно-патогенных микроорганизмов, возрастании у них значений персистент-ных характеристик с реакцией со стороны факторов местного иммунитета организма.

Выявлены эффекты стимуляции антагонистической активности представителей нормальной микрофлоры репродуктивного тракта женщин и её ингибирование у патогенов фрагментами пептидогликана лак-тобацилл (Патент РФ № 2376381), что обосновывает использование регуляторов антагонизма на основе пептидогликанов в качестве биопрепаратов для повышения колонизационной резистентности биотопов человека.

Теоретическая и практическая значимость

Практическая ценность работы характеризуется возможностью использования биологических характеристик лактофлоры для дифференциации штаммов по их способности поддерживать колонизационную резистентность репродуктивного тракта женщин. Исследованные свойства лактобацилл: продукция перекиси водорода, способность ингиби-ровать каталазу и факторы персистенции (антилизоцимную и антикомплементарную активности) аллохтонных микроорганизмов могут быть использованы в качестве критериев отбора пробиотических штаммов.

Предложены методические подходы к определению указанных биологических характеристик лактобацилл.

Для повышения эффективности ранней диагностики дисбиотиче-ских состояний в клинической и лабораторной практике рекомендован разработанный «Способ определения колонизационной резистентности экологической ниши тела человека», позволяющий определить уровень колонизационной резистентности биотопов человека.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Колонизационная резистентность - физиологический феномен, направленный на поддержание микроэкологического гомеостаза за счет симбиотических взаимодействий автохтонной микрофлоры и организма хозяина в целях препятствия колонизации аллохтонных микроорганизмов.

2. Нарушения ассоциативного симбиоза при инфекционно-воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта женщин однотипны и характеризуются снижением колонизационной резистентности организма, что проявляется в дефиците доминантных микроорганизмов и усилении персистентного потенциала ассоциативных микроорганизмов.

3. Лактобациллы как доминантные микросимбионты репродуктивного тракта женщин реализуют бактериальные механизмы колонизационной резистентности хозяина, включающие - препятствие адгезии патогенов, антагонистическое действие нормофлоры путем продукции антибактериальных субстанций, подавление персистентного потенциала аллохтонных бактерий и потенцирующий (синергидный) эффект совместно с факторами эндогенной антимикробной защиты хозяина.

Апробация работы

Основные положения работы доложены на: III - VI Российских научных конференциях «Персистенция микроорганизмов», г. Оренбург, 2000, 2003, 2006, 2009; Российских научных конференциях «Репродуктивное здоровье населения» г. Оренбург, 1999, 2001, 2005; г. Челябинск, 2002; Международной конференции «Пробиотики, пребиотики, синбио-тики и функциональные продукты питания», г. Москва, 2004; Конференции «Фундаментальные науки - медицине» по программе фундаментальных исследований Президиума РАН, г. Москва, 2004; Международной научной конференции «Физиология микроорганизмов в природных и экспериментальных системах», г.Москва, 2006, 2009.

Публикации

Объем и структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Черкасов, Сергей Викторович

выводы

1. Ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта женщин включает доминантную микрофлору - лактобациллы, различные таксоны ассоциативных микроорганизмов и хозяина с его врождённым иммунитетом, формируя взаимодействия в трёх векторах: «хозяин - доминант», «хозяин - ассоциант» и «доминант - ассоциант» (микросим-биоценоз).

2. Антагонизм перекись продуцирующих лактобацилл по отношению к каталазоположительным микроорганизмам реализуется за счет их способности ингибировать бактериальную каталазу в качестве одного из бактериальных механизмов колонизационной резистентности.

6. При повышении факторов местного иммунитета репродуктивного тракта женщин имеет место селекция штаммов ассоциативных микроорганизмов с выраженными персистентными свойствами (антилак-тоферриновой и антилизоцимной активностью), отражая взаимодействия микросимбионтов в векторе «хозяин - ассоциант» и определяя один из механизмов развития нарушений ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин.

7. В репродуктивном тракте женщин при различных инфекционно-воспалительных заболеваниях на основе оценки количества доминантных микроорганизмов, а также количественно-качественных характеристик персистентного потенциала ассоциативных микросимбионтов выделено 4 универсальных типа вагинального микросимбиоце-ноза, что имеет патогенетическое значение в развитии инфекции репродуктивного тракта женщин.

7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С современных позиций ассоциативный симбиоз представляет собой многокомпонентную интегральную систему, включающую хозяина в качестве макропартнера, стабильный доминантный микросимбионт и ассоциированные микросимбионты с разнонаправленными воздействиями, определяющими формирование, стабильность существования и продуктивность симбиоза в целом (Бухарин О.В. и др., 2007). Этой концепции соответствует ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта женщин, включающий как факторы иммунитета хозяина, взаимодействующие с микроорганизмами, так и доминантные бактерии - лактоба-циллы и многочисленные ассоциативные микроорганизмы, имеющие существенное значение, как в норме, так и при инфекционной патологии. Микросимбиоценоз репродуктивного тракта женщин - многокомпонентная система, находящаяся в динамическом равновесии. Относительное постоянство микросимбиоценоза определяется наличием колонизационной резистентности организма, которая зависит от качественных и количественных характеристик нормофлоры и факторов естественной резистентности биотопа.

В настоящее время открытым остаётся вопрос о симбиотических взаимодействиях лактобацилл, ассоциативных микроорганизмов и макроорганизма в реализации колонизационной резистентности. Являясь доминантным таксоном, лактобациллы вносят весомый вклад в бактериальную составляющую колонизационной резистентности хозяина, хотя известно, что отдельные биовары лактобацилл не всегда обладают полным набором факторов антагонизма и осуществляют достаточную защиту биотопа. С позиций ассоциативного симбиоза колонизационная резистентность организма может осуществляться посредством взаимодействия доминантных лактобацилл с другими представителями микросимбиоценоза репродуктивного тракта женщин. Представляет интерес и исследование взаимодействия ассоциативных микроорганизмов с организмом хозяина через взаимосвязь факторов его местного иммунитета и персистентного потенциала бактерий. С этой токи зрения колонизационная резистентность биотопов должна рассматриваться как результат действия нормофлоры и факторов защиты макроорганизма, где мощное защитное действие факторов естественной резистентности может быть связано с их взаимным потенцированием (Кокряков В.Н., 2006). Наконец, снижение колонизационной резистентности организма, способствующее дисбиотическим состояниям и воспалительным заболеваниям женского репродуктивного тракта, делает проблему исследования колонизационной резистентности актуальной ещё и потому, что выявление нарушений ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин, открывает новые возможности в прикладном аспекте для диагностики инфекционно-воспалительных заболеваний и коррекции микроэкологических нарушений.

Вышеизложенное явилось основанием для формулирования цели настоящего исследования. Цель исследования - охарактеризовать бактериальные механизмы колонизационной резистентности на модели репродуктивного тракта женщин и определить значение симбиотических взаимодействий макроорганизма, доминантных и ассоциативных микроорганизмов в его защите.

Проведенные исследования по изучению видового состава и биологических характеристик вагинальных доминантных микроорганизмов - лактобацилл выявили, что видовой состав в норме и при дис-биозе характеризуется преобладанием L. acidophilus, тогда как доля L.fermentum, часто встречающихся в норме, снижается при дисбиозе и наоборот, L. rhamnosus с низким удельным весом в норме гораздо чаще выделяются при дисбиозе. Несмотря на то, что доля L. plantarum и L. са-sei при дисбиозе возрастает почти в два раза, тем не менее она остаётся незначительной.

Корреляционный анализ позволил выявить положительную связь ПМО с АЛА и индексом адгезии и отрицательную с антибиотикорези-стентностью. Т.е. штаммы с высоким ПМО обладают высокими значениями АЛА и адгезии, что позволяет отнести эти характеристики к свойствам колонизации микроорганизмов, тем более что эти биологические характеристики явились составляющими фактора колонизации, который был выделен при проведении факторного анализа. Тот факт, что адгезия по нашим данным входит в фактор «колонизации», подтверждается данными Ленцнера А.А. (1987) о важном значении адгезивности лактобацилл в колонизации биотопов.

Штаммы с низким ПМО демонстрировали увеличение их антибио-тикорезистентности. По всей видимости, высокий маркёр антибиотико-резистентности штаммов лактобацилл, выделенных при дисбиозе, является результатом антибиотикотерапии, которая проводится при дисбио-тических нарушениях и воспалительных заболеваниях репродуктивного тракта. Вместе с тем, вагинальный дисбиоз может являться следствием антибиотикотерапии, что сопровождается селекцией устойчивых к антибиотикам штаммов.

Анализ бактериоциногенности и бактериоциночувствительности показал, что наибольший вклад в формирование фактора внутриродово-го антагонизма вносит вид L. acidophilus, имеющий высокий удельный вес в норме и при дисбиозах. Широкая распространённость этого вида в структуре вагинальной лактофлоры может быть объяснена тем фактом, что по данным Е. Parente и A.Ricciardi (1999) L. acidophilus продуцируют наибольшее количество бактериоцинов, определяющих внутриродо-вой антагонизм лактобацилл.

Таким образом, штаммы лактобацилл, выделенные в норме, обладают высокой колонизирующей способностью и характеризуются наличием выраженных значений антилизоцимной активности и высокой адгезивной способностью. Лактобациллы, изолированные при дисбиозе, имели более низкие значения указанных свойств и, вместе с тем, демонстрировали высокую антибиотикорезистентность.

При дисбиотических состояниях в вагинальном микробиоценозе наблюдается снижение колонизационной резистентности, которое сопровождается не только уменьшением количества лактобацилл, но и увеличением рН их культуральной среды и снижением лизоцимной активности.

Была выявлена зависимость частоты выделения видов лактобацилл с микроэкологическим статусом биотопа. Так, вид L. fermentum наиболее характерен для нормомикробиоценозов, а вид L. rhamnosus чаще выделялся при дисбиозе. Подтверждением этому служат данные Klein G. (1998), выделявшего L. rhamnosus при дисбиотических состояниях. Процент штаммов L.acidophilus и L. casei, выделенных в норме и при дисбиозе зависел не от вида микроорганизма, а от источника выделения. Полученные результаты были подтверждены корреляционным анализом. Вид L. rhamnosus положительно коррелировал с состоянием дисбиоза (г= 0,18; Р<0,05), а вид L. fermentum положительно коррелировал с нормальным микроэкологическим состоянием экониши (г= 0,27; Р<0,05).

Кроме того, исследование видового состава биотопов обнаружило доминирование одних видов и низкий удельный вес в видовой структуре лактофлоры других. Так, была выявлена высокая положительная корреляционная связь L.acidophilus с бактериоциногенией и отрицательная корреляционная связь с чувствительностью к бактериоцинам. Другие виды лактобацилл имели низкую или отрицательную связь с бактериоциногенией и, напротив, высокую положительную связь с чувствительностью к подавляющему большинству бактериоцинов микроорганизмов этого же рода. Т.е. распространённость определённых видов в структуре лактофлоры связана с двумя факторами. Во - первых, с их бактериоциногенией - свойством, определяющим внутриродовой антагонизм, а вовторых, с бактериоциночувствительностью, характеризующей способность лактобацилл выживать в условиях антагонизма.

Изучение антагонистических свойств лактобацилл и их сочетаний у разных штаммов создавали трудности в оценке суммарного антагонистического потенциала лактофлоры. Поэтому для решения задачи по определению антагонизма лактобацилл нами был предложен методический подход, основанный не на определении биологических свойств лактобацилл, а на выявлении антагонизма по отношению к тест - штаммам. Это позволило разработать способ определения колонизационной резистентности экониш тела человека.

Таким образом, различия биологических свойств в норме и при дисбиозе, а так же их различия у разных видов в пределах одного биотопа свидетельствует не только о видовой гетерогенности лактофлоры тела человека, но и о широком разнообразии биовариантов в пределах одного вида.

В микробиоценозе репродуктивного тракта преобладают лактоба-циллы - автохтонные, «ключевые» микроорганизмы, определяющие поддержание нормального микроэкологического баланса. Известно, что в состав нормальной микрофлоры кроме лактобацилл входит большое количество аэробных и анаэробных микроорганизмов и при этом наличие определенных видов и видовое сочетание индивидуально и разнообразно. Все это многообразие динамически изменяется как в видовом, так и в количественном отношении. Формирование микробиоценоза носит гормонзависимый характер, связанный с влиянием эстрогенов на синтез в эпителиоцитах гликогена, являющегося субстратом для лактобацилл (Е.Ф. Кира, 2001).

Микробиоценоз изменяется в зависимости от физиологического состояния женщины: половое созревание, менструальный цикл, беременность, климактерический период. Кроме этого, состояние микробиоценоза зависит от воздействия ряда экзогенных факторов: применение гормональных средств, внутриматочная контрацепция, искусственное прерывание беременности, антибиотикотерапия и др. Поэтому понятие стабильности нормального микробиоценоза репродуктивного тракта женщин весьма относительно. Отсюда отнюдь не праздным является вопрос о нормальной микрофлоре. Если одни и те же виды микроорганизмов присутствуют в норме, при дисбиотических состояниях и выделяются из инфекционных очагов репродуктивного тракта женщин, то как индивидуально дифференцировать нормофлору и аллохтонных представителей? Что касается лактобацилл, хотя встречаются их различные виды, подавляющее большинство исследователей относят их основным микроорганизмам, поддерживающим нормальный микроэкологический статус репродуктивного тракта. Относительно других микроорганизмов данные исследователей различны в силу разнообразия контингента обследуемых женщин, условий исследования, демографических показателей и др., но при этом они не противоречат друг другу, а лишь дополняют их. Это заставляет серьезно задуматься о критериях дифференцирования состояний микробиоценоза. Отнесение того или иного вида микроорганизмов к аллохтонным, а также того или иного микроэкологического статуса к дисбиотическим состояниям основано на их ассоциированности с инфекционно-воспалительными процессами, имеющими конкретные клинические проявления. Классическим примером тому является бактериальный вагиноз, как одна из форм вагинального дисбиоза, имеющий не только лабораторные и клинические проявления, но и приводящий к осложнениям течения беременности и воспалительным заболеваниям репродуктивного тракта женщин различной локализации. Учитывая это, по-видимому, в развитии дисбиотических состояний имеет значение не только появление в микробиоценозе видов микроорганизмов, преимущественно ассоциированных с инфекционной патологией (например, Е. coli, S. aureus), но и появление у различных микроорганизмов определенных биологических свойств, ассоциированных с инфекционными процессами - факторов персистенции.

По сути, все описанные механизмы формирования микробиоценоза репродуктивного тракта женщин определяют условия существования микроорганизмов, т.е. особенности микробной экологии биотопа. Микроэкология репродуктивного тракта женщин (как и других биотопов человека) включает не только состояние микробиоты, но и морфо-функциональную характеристику биотопа, что подразумевает наличие взаимодействий в системе «микроорганизм-макроорганизм». Взгляд на микробную экологию репродуктивного тракта женщин с этой точки зрения позволяет шире взглянуть на проблему колонизационной резистентности и дисбиотических состояний, как проявление взаимодействий в рамках указанной системы, объединяя экзогенные и эндогенные факторы, определяющие условия существования микроорганизмов в биотопе. В норме условия биотопа адекватны биологическим характеристикам лактобацилл - основных представителей нормофлоры и ключевых микроорганизмов в реализации колонизационной резистентности. Установленное защитное значение синергидного антибактериального действия метаболитов лактобацилл и факторов естественной резистентности хозяина позволило определить колонизационную резистентность, как физиологический феномен, являющийся результатом симбиотических взаимодействий автохтонной микрофлоры и организма хозяина.

В основе взаимодействий микробиоты с организмом при дисбио-зах лежит инактивация защиты хозяина, связанная с повышением перси-стентного потенциала микроорганизмов. Это заключение позволило установить роль дисбиотических состояний в развитии инфекционно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенной микрофлорой и определить основные типы микроэкологических нарушений. Бактериологические исследования позволили заключить, что изменения в микробиоценозе репродуктивного тракта женщин характеризуются не только снижением количества лактобацилл, появлением нетипичных представителей или значительным возрастанием количества уже присутствующих микроорганизмов, но и изменением биологических характеристик - персистентного потенциала бактерий, определяющего устойчивость к факторам защиты хозяина. Это явилось важной теоретической предпосылкой для разработки методов диагностики дисбиотических и воспалительных состояний с использованием факторов персистенции, как маркеров. Что же касается коррекции дисбиозов, то в основу методов лечения указанных состояний было положено использование приемов ингибирующего воздействия на персистентные характеристики, как на патогенетически значимые свойства микроорганизмов.

Как видно из представленных данных существование микробиоценозов репродуктивного тракта женщин укладывается в общие закономерности ассоциативных симбиозов. В то же время, обладая некоторыми особенностями, определяемыми и условиями биотопа и основной функцией микроорганизмов в этом биотопе, рассматриваемый микробиоценоз включает и общие характеристики микрофлоры человека. В репродуктивном тракте женщин доминантной микрофлорой являются лактобациллы, представляющие собой непатогенные микроорганизмы с высокой колонизирующей способностью и антагонизмом по отношению к аллохтонным бактериям. Доминантная микрофлора - важнейшая компонента колонизационной резистентности хозяина, обеспечивает устойчивость биотопа к колонизации аллохтонными микроорганизмами и определяется симбиотическими взаимодействиями доминантов с организмом. Ассоциативная микрофлора представлена различными видами бактерий, относимыми к условно-патогенным микроорганизмам. В репродуктивном тракте женщин ассоциативный симбиоз представлен непатогенными доминантными и условно-патогенными ассоциативными микроорганизмами. Результатом такого симбиоза является препятствие заселению в биотоп аллохтонных микроорганизмов. Как показали представленные материалы, один из механизмов реализации этой функции, основан на потенцировании действия активных форм кислорода, продуцируемых лактобациллами, за счет ингибирования ассоциативными микроорганизмами (коринебактериями) ферментов антиокислительной защиты аллохтонных бактерий. Интересно, что ассоциативные микроорганизмы в определенных ситуациях могут выступать в роли возбудителей различных заболеваний, чему способствует их устойчивость к факторам противоинфекционной защиты хозяина за счет повышения перси-стентного потенциала. В норме, как правило, этого не происходит т.к. доминантные лактобациллы оказывают ингибирующее действие на экспрессию факторов персистенции, что было установлено экспериментально. Однако, при дисбиозах, когда количество лактобацилл снижается ниже чем 104 КОЕ/мл, персистентный потенциал ассоциативных микроорганизмов нарастает.

Детальное исследование микробиоценоза репродуктивного тракта женщин при различных патологических состояниях: воспалительных заболеваниях придатков матки, эндометрите, трихомонадной инфекции позволили выявить однотипные изменения в вагинальном микробиоценозе не зависимо от патологического процесса и классифицировать их. Они преимущественно характеризовались либо снижением доминантных микроорганизмов - лактобацилл, либо изменениями биологических характеристик ассоциативных микроорганизмов, а именно, увеличением выраженности их персистентных характеристик, либо изменениями по типу бактериального вагиноза. Очевидная связь дисбиотических изменений в вагинальном микробиоценозе с патологическими состояниями различных отделов репродуктивного тракта женщин объясняет почему дисбиоз характеризовался изменениями в доминантной и ассоциативной микрофлоре и являлся нарушением ассоциативного симбиоза с деформацией его основной функции - колонизационной резистентности.

Один из центральных вопросов проблемы ассоциативного симбиоза это вопрос управления или искусственного воссоздания микробиоценоза при микроэкологических нарушениях. Поскольку его решение позволяет не только определить ряд теоретических позиций по раскрытию механизмов формирования микробиоценозов, но и достичь прогресса в прикладном медицинском аспекте - осуществлении коррекции дисбио-зов для профилактики их осложнений. В плане коррекции предложено восстанавливать условия биотопа, определяющие существование доминантных видов. В частности, использование гормональных препаратов, обладающих действием на эпителий и на ассоциативные микроорганизмы, способствовало восстановлению нормального микробиоценоза. Создан ряд препаратов-пробиотков, представляющих собой живые микроорганизмы, таксономически соответствующие доминантным, которые при попадании в биотоп, могут колонизировать его и тем самым восстановить доминантную микрофлору. Предложены критерии отбора штаммов лактобацилл для использования их в качестве пробиотиков. Однако эффективность пробиотикотерапии не всегда соответствует ожиданиям. Тому имеется ряд причин. Таксономический состав доминантных микроорганизмов индивидуален и может быть образован одним из 15 перечисленных выше видов лактобацилл, обладающих оптимальным набором биологических характеристик адекватных экологическим условиям биотопа. К сожалению, до настоящего времени применение пробиотиков осуществляется без учета индивидуального видового состава доминантных микроорганизмов и соответствия пробиотиков микроэкологии биотопа. Поэтому в результате не всегда удается добиться колонизации биотопа применяемыми биопрепаратами. Кроме того, одним из проявлений взаимодействия близкородственных микроорганизмов является конкуренция, в основе которой лежит бактериоциногения, определяющая внутриродовой антагонизм лактобацилл. В результате таких взаимодействий может произойти вытеснение собственной доминантной микрофлоры, либо колонизация пробиотиком биотопа окажется безуспешной. И то и другое вносит дисбаланс в микроэкологический статус репродуктивного тракта женщин и не способствует нормализации микробиоценоза. Поэтому разработка критериев индивидуального подбора пробиотических препаратов для восстановления доминантной микрофлоры с учетом уже сложившегося ассоциативного симбиоза в репродуктивном тракте женщин является одной из ключевых задач экологии микроорганизмов человека, где участие ассоциативной микрофлоры, по-видимому, весьма существенно.

Репродуктивный тракт женщин, с микрофлорой в его различных биотопах, можно рассматривать в качестве модели ассоциативного симбиоза. Бактерии, населяющие слизистые репродуктивного тракта женщин в совокупности формируют микросимбиоценозы. Несмотря на то, что органы репродуктивного тракта женщин сообщаются с внешней средой, наибольшее биоразнообразие и количество микроорганизмов отмечается в вагинальном биотопе, по сравнению с цервикаль-ным каналом и полостью матки. Это связано с анатомическими и функциональными особенностями отделов репродуктивного тракта. Вагинальный биотоп характеризуется наличием гликогена в клетках плоского неороговевающего эпителия, который является питательным субстратом для большинства микроорганизмов, основными из которых являются лактобациллы. В цервикальном канале и в полости матки в высоких концентрациях присутствуют факторы врождённого иммунитета, оказывающие подавляющее действие на рост и размножение микроорганизмов. Кроме того, периодическая смена эпителиального покрова полости матки является ещё одним моментом, способствующим элиминации микроорганизмов. Поэтому ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта женщин наиболее полно представлен в вагинальном биотопе, где относительно устойчивые симбиотические связи образованы макроорганизмом и лактобациллами, а ассоциативные микроорганизмы представляют таксономически разнородную группу. В цервикальном канале не всегда встречаются доминантные и ассоциативные микроорганизмы, а полость матки в норме не имеет микрофлоры.

Основной функцией ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин в норме является колонизационная резистентность, представляющая собой физиологический феномен, направленный на поддержание микроэкологического гомеостаза за счет эволюционно сложившихся симбиотических взаимодействий автохтонной микрофлоры и организма хозяина. Учитывая, что колонизационная резистентность является производной ассоциативного симбиоза, очевидно, что она определяется тремя векторами взаимодействий в системах «хозяин - доминант», «хозяин - ассоциант» и «доминант - ассоциант».

Взаимодействие в рамках системы «хозяин - доминант» характеризуется соответствием свойств лактобацилл экологическим параметрам вагинального биотопа и возможностью адаптации доминантных микроорганизмов к организму хозяина. Интегральным количественным показателем благоприятных условий для существования доминантов является микробная обсеменённость, являющаяся результатом адгезии лактобацилл к вагинальному эпителию, а также роста и размножения популяции доминантнов при наличии питательного субстрата - гликогена. Поэтому колонизация лактобациллами нижнего отдела репродуктивного тракта женщин может представлять собой модель для изучения симбиотических взаимодействий бактерий с макроорганизмом.

Взаимодействие хозяина с ассоциантами, определяется не только процессами адгезии микроорганизмов к вагинальному эпителию, предоставлением хозяином и утилизацией ассоциантами питательного субстрата, но и наличием антибактериальных факторов, ограничивающих рост и размножение патогенных и потенциально патогенных бактерий. С одной стороны, данные микроэкологические условия в репродуктивном тракте необходимы для противоинфекционной защиты, а с другой - способствуют селекции ассоциативных микроорганизмов, обладающих устойчивостью к антибактериальным механизмам хозяина, в основе которой лежит их персистентный потенциал. Поэтому некоторые ассоциативные микроорганизмы могут стать причиной дисбиотических и ин-фекционно-воспалительных заболеваний.

Взаимоотношения доминантных и ассоциативных микроорганизмов определяются как прямым, так и непрямым антагонизмом лактобацилл, представляющим собой бактериальную составляющую колонизационной резистентности. Прямой антагонизм реализуется за счет продукции антибактериальных субстанций, а непрямой связан с подавлением лактобациллами персистентных свойств ассоциативных микроорганизмов. Прямой антагонизм лактобацилл связанный с продукцией перекиси водорода может быть усилен коринебактериями, обладающими выраженной способностью подавлять фермент антиокислительной защиты - каталазу. Поэтому значение ассоциантов репродуктивного тракта женщин неоднозначно: они могут играть роль помощников, потенцируя антагонизм доминантных лактобацилл, как коринебак-терии, а другие, являясь аллохтонными микроорганизмами для репродуктивного тракта женщин, способствуют развитию инфекционно-воспалительных заболеваний.

Таким образом, эффективное проявление феномена колонизационной резистентности реализуется в результате симбиотических взаимодействий хозяина и лактобацилл. Непрямой антагонизм доминантов приводит к подавлению факторов персистенции ассоциантов, и таким образом, повышает эффективность факторов врожденного иммунитета хозяина. Кроме того, ряд антагонистических факторов лактобацилл является существенным дополнением к защите хозяина, как лизоцим и перекись водорода, потенцирующие действие лизоцима хозяина и кислород зависимого киллинга нейтрофилов.

Нарушение устойчивого гомеостаза ассоциативного симбиоза влечет за собой и нарушение его функции - колонизационной резистентности, следствием чего является развитие инфекционных заболеваний. Снижение колонизационной резистентности является результатом нарушения взаимодействий в трёх векторах ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин. Поэтому отмечаются нарушения, как со стороны факторов местного иммунитета, характеризующих состояние хозяина, так и со стороны доминантных и ассоциативных микроорганизмов. Эти изменения нашли своё отражение в основных типах микросимбиоценоза влагалища в норме и при дисбиотических состояниях. Проведенное комплексное исследование микроэкологического статуса пациенток с дисбиотическими состояниями репродуктивного тракта, позволило определить качественные и количественные изменения видового состава и персистентного потенциала вагинальной микрофлоры. Было выявлено снижение удельного веса доминантных микроорганизмов - лактобацилл и увеличение доли или появление различных видов ассоциантов - энтеробактерий, коагулазоположительных стафилококков, стрептококков, энтерококков, пептострептококков, пептококков и пропионибактерий. Причем аэробные и анаэробные вагинальные штаммы микроорганизмов, выделенные от женщин с трихомонозом и различными воспалительными заболеваниями репродуктивного тракта, характеризовались высокими значениями персистентных характеристик. Были установлены универсальные типы дисбиотических состояний вагинального биотопа у обследованных женщин: дефицит лактоф-лоры, наличие ассоциативных микроорганизмов с выраженными персистентными характеристиками и бактериальный вагиноз, чаще встречающиеся у больных трихомонадной инфекцией, эндометритом и воспалительными заболеваниями придатков матки при сопоставлении с женщинами группы сравнения.

Выявленные типы дисбиотических нарушений вагинального биотопа женщин позволили обосновать патогенетические особенности формирования дисбиозов. Как было установлено ранее, важным моментом в развитии воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин является наличие провоцирующих факторов (Рис. 7.1.). Вероятно, не меньшее значение имеет и выявленная высокая корреляционная связь внутриматочных вмешательств и трихомоноза с воспалительными заболеваниями придатков матки, что объясняется развитием дисбиотических изменений в вагинальном биотопе женщин с дефицитом лактофлоры, появлением условно-патогенных микроорганизмов с высоким персистентным потенциалом и появлением микроорганизмов не свойственных данному биотопу. Уменьшение количества лактоба-цилл, приводит к снижению их прямого антагонизма и антиперсистент-ного действия, что проявляется избыточным ростом условно-патогенных микроорганизмов, включая и анаэробные, с выраженными факторами персистенции.

В цепи происходящих изменений немаловажным является изменение со стороны факторов естественной защиты хозяина. С позиций ассоциативного симбиоза повышение значений факторов местного иммунитета, вероятно, - условие для селекции штаммов бактерий с высоким персистентным потенциалом. Вот почему, описанные явления, происходящие в репродуктивном тракте, можно определить как нарушение ассоциативного симбиоза, включающее изменения гормональной регуляции, состояния факторов местной защиты и, как следствие, дис-биотические явления в биотопах репродуктивного тракта. Естественно, это способствует отбору штаммов с персистентными характеристиками и реализации патогенного потенциала возбудителя, вследствие чего

АССОЦИАТИВНЫЙ СИМБИОЗ

Организм хозяина (вагинальный эпителий, факторы местного иммунитета)

Доминантные микроорганизмы

Ассоциативные микроорганизмы V

НАРУШЕНИЕ АССОЦИАТИВНОГО СИМБИОЗА

Увеличение значений факторов местного иммунитета; Дефицит лактобацилл, увеличение количества ассоциативных микроорганизмов, включая анаэробные; Увеличение значений факторов персистенции ассоциативных микроорганизмов V

Инфекционно-воспалительные заболевания репродуктивного тракта женщин

Рис. 7.1. Нарушения ассоциативного симбиоза в патогенезе воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин развивается эндометрит или воспаление придатков матки, что ещё в большей степени приводит к нарушению микроэкологического состояния репродуктивного тракта женщин и замыкает порочный круг (Рис. 23).

Таким образом, устойчивый, стабильный гомеостаз ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин определяется местным иммунитетом и вагинальным микросимбиоценозом, оказывающих существенное влияние на развитие инфекции. Это представляет несомненный интерес с точки зрения прикладного аспекта проблемы ассоциативного симбиоза: диагностики и лечения дисбиотических и инфекционных состояний репродуктивного тракта женщин. Справедливо полагать, что возникновение и рецидивирование воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин связаны с иммунологическими и бактериологическими изменениями. Особое значение при дисбиотических нарушениях репродуктивного тракта женщин, как мы указывали, имеет персистентный потенциал вагинальной микрофлоры. Рецидивирование эндометрита и воспалительных заболеваний придатков матки является следствием бактериального вагиноза и наличия бактерий с выраженным персистентным потенциалом. Была выявлена и связь частоты и сроков возникновения рецидивов воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин с различными типами вагинального микросимбиоценоза. Не исключено, что выполняя в норме защитную функцию, микрофлора влагалища при определенных условиях может стать основной причиной инфекционно-воспалительных заболеваний женских половых органов, внутриамниотической, раневой инфекции, а участки половых путей с эндогенной микрофлорой - источником инфицирования (Кира Е.Ф., 2001).

Понимание патогенетических основ рецидивирования воспалительных заболеваний на фоне микроэкологических нарушений позволило разработать критерии их прогнозирования. Выявление ключевых показателей, характеризующих состояние доминантных и ассоциативных микроорганизмов вагинального микросимбиоценоза позволило разработать способ прогнозирования рецидивов воспалительных заболеваний репродуктивного тракта женщин.

Что же касается лечения дисбиозов и инфекции репродуктивного тракта, то в основе разработки новых подходов должна быть комплексная коррекция ассоциативного симбиоза, направленная как на хозяина, так и на доминантную и ассоциативную микрофлору.

Оценивая изложенный материал в целом, следует отметить, что ассоциативный симбиоз репродуктивного тракта женщин является биологической основой колонизационной резистентности, отражающей уровень микроэкологического гомеостаза. Нарушение ассоциативного симбиоза репродуктивного тракта женщин, сопровождается дефицитом доминантной микрофлоры, увеличением персистентных характеристик микросимбионтов и видового разнообразия ассоциативной микрофлоры, а также изменением местного иммунитета организма. Указанные изменения приводят к снижению колонизационной резистентности хозяина и, как следствие, возникновению и/или рецидивированию воспалительных заболеваний в женском организме.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Черкасов, Сергей Викторович, Оренбург

1. Абдумаликов P.A. Комплексный способ терапии больных мочеполовым трихомониазом /Автореф. дисс. . канд. мед.наук. - М., 1995. - 16 с.

2. Акопян Т.Э. Бактериальный вагиноз и беременность / Акуш. и гин. 1996. 6: 3-6.

3. Анкирская A.C. Бактериальный вагиноз. / Акуш. и гин. 1995. 6: 13-16.

4. Баев О.Р., Стрижаков А.Н. Резидентная флора генитального тракта и этиология инфекционных осложнений беременности и послеродового периода// Акуш. и гин. 1997. 5:3-7.

5. Болотова A.A. Урогенитальный трихомониаз у женщин репродуктивного возраста (клиника, диагностика, лечение) /Автореф. дисс. . канд. мед. наук., Пермь, 2004 28 с.

6. Бондаренко В.И., Ференц А.И., Колесников В.Г., Бурая Т.А. Вирулентность и антибиотикорезистентность эшерихий, выделенных от человека/Микробиол. журн. 1990. 52 (3): 66-69.

7. Боровиков В.П., Боровиков И.П. STATISTICA Статистический анализ и обработка данных в среде Windows. М: Информационно-издательский дом "Филинъ", 1997. - 608 с.

8. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер A.A. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов /Лаб. дело. 1986. 4: 210-212.

9. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий: Автореф. дис.канд.мед.наук. Челябинск, 1992. — 20 с.

10. Ю.Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН. 1999 367 с.

11. П.Бухарин О.В., Валышев A.B., Валышева И.В. Роль лактоферрина в противоинфекционной защите /Успехи современной биологии. 2011. 2: 135-144.

12. Бухарин О. В., Карташова О. Л., Киргизова С. Б., Валышева И. В. Ан-тилактоферриновая активность микроорганизмов /Журн. микробиол. 2005. 6: 7-10.

13. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л.: Медицина, 1973. 141 с.

14. Гуртовой Б. Л., Кулаков В.И., Воропаева С.Д. Применение антибиотиков в акушерстве и гинекологии. М.: Медицина, 1996.- 140с.

15. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогени-тальных инфекций. Москва: Мед. книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003. 336 с.

16. Долгушин И. И., Андреева Ю. С. Роль нейтрофилов в регуляции микробиоценоза репродуктивного тракта женщин /Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2005. 5: 84-87.

17. Долгушин И.И., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз. Екатеринбург: УрО РАН, 2001. 284 с.

18. Долгушин И.И., Долгушина В.Ф., Телешева Л.Ф. Дифференцированная коррекция местного иммунитета репродуктивного тракта с помощью лизоцима и иммуноглобулинов у беременных с генитальной инфекцией /Журн. Микробиол. 1997. 4: 111 115.

19. Долгушин И.И., Телешева В.Ф., Долгушина В.Ф. Местная противо-инфекционная защита репродуктивного тракта женщин различного возраста /Журн. микробиол. 2002. 2: 86-89.

20. Долгушина В.Ф., Смольникова Л.А., Долгушин И.И. Состояние факторов местной иммунной защиты репродуктивного тракта при вагинозе у беременных /Журн. микробиол. 2001. 4: 89-93.

21. Егоров Н.С., Баранова И.П. Бактериоцины. Образование, свойства, применение /Антибиотики и химиотер. 1999. 44(6): 33-40.

22. Каграманова К.А., Ермольева З.В. Сравнительная характеристика методов определения активности лизоцима /Антибиотики. 1966. 10: С. 917-919.

23. Карки Т.В, Ленцнер Х.П., Ленцнер A.A. Количественный состав лак-тофлоры и методика его определения / Журн. микробиол. 1994. 2: 16-18.

24. Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. СПб.: ООО «Нева-Люкс», 2001. -364 с.

25. Клименко Б.В., Авазов Э.Р., Барановская В.Б. Степанова М.С. Три-хомониаз мужчин, женщин и детей. СПб., ООО «Сюжет», 2001. 192 с.

26. Константинова О.Д. Микробиологические подходы к диагностике и лечению воспалительных заболеваний придатков матки неспецифической этиологии: Автореф. дис. . доктор, мед.наук. Оренбург, 2004. 48с.

27. Костюковская О Н, Гладкая Е А Идентификация недифтерийных бактерий рода Corynebactenum и определение их антибиотикочувстви-тельности/ /Журн. микробиол, эпидемиол, иммунобиол. 1992. 9-10: 2931.

28. Краснопольский В.И., Буянова С.Н., Щукина H.A. Гнойная гинекология. М.: «МЕДпресс», 2001.- 282 с.

29. Кремлева Е.А. Характеристика микрофлоры репродуктивного тракта женщин при внутриматочных вмешательствах: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Челябинск, 2000. - 22с.

30. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммунохимия: пер. с англ. В.И. Левенсона; под ред. Н.В. Холчева. М.: Медицина, 1968. - 684 с.

31. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. шк., 1990. - 352 с.

32. Лебедева О. П., Калуцкий П. В. Антиинфекционная защита влагалища на фоне применения низкодозированных монофазных контрацептивов /Журнал микробиол. 2007. 1: 67-70.

33. Ленцнер A.A., Ленцнер Х.П., Тоом М.А. О способности лактоба-цилл микрофлоры человека продуцировать лизоцим. Журн. микробиол. 1975. 8: 77-81.

34. Мавров Г.И., Никитенко И.Н. Особенности микробных ассоциаций при трихомониазе. Ультраструктурное исследование /Дерматолопя та венеролопя. 2005. №3 (29). С. 16-20.

35. Мальцева Л.И., Миннуллина Ф.Ф. Применение гексикона при бактериальном вагинозе у женщин /Гинекология. 2003. 5(3): 92-94.

36. Маянский А. Н., Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука, 1989. 340 с.

37. Митрохин С.Д., Иванов A.A. Значимость отдельных карбоновых кислот фекалий в диагностике дисбаткриоза /Журн. Микробиол. 1995. 4: 99-101.

38. Муравьева В.В., Анкирская A.C. Особенности микроэкологии влагалища при бактериальном вагинозе и вагинальном кандидозе // Акуш. и гинек. 1996. 6: 27-30.

39. Овчинников Н.М., Беднова В.М., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. М.: Медицина, 1987.-304 с.

40. Окунь Я. Факторный анализ: Пер. с польск. М.: Статистика, 1974.- 200 с.

41. Паршута Л.И. Особенности формирования микробного биоценоза слизистой оболочки носа при стафилококковом бактерионосительстве /Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 1998.

42. Первушина Л.А. Антилизоцимный признак микроорганизмов в бактериологической диагностике и лечений воспалительных заболеваний внутренних женских половых органов: Автореф. дис. . канд.мед.наук.- Челябинск, 1989. 20с.

43. Репродуктивное здоровье /Под ред. Л.Г.Кейта, Г.С.Бергера, Д.А.Эдельмана: в 2-х т.: Пер с англ.- М.: Медицина, 1988. 400с.

44. Смирнова Г.В., Музыка Н.Г., Глуховченко М.Н., Октябрьский О.Н. Перекись водорода модулирует внутриклеточные уровни тиолов и калия в клетках Escherichia coli /Микробиология. 1998. Т. 67. №5: 594-600.

45. Соколов В.Ю., Луда А.П. К вопросу о механизме антилизоцимной активности бактерий. В: О.В. Бухарин (ред.). Персистенция микроорганизмов. Куйбышев, КМИ, 1987, с. 24-26.

46. Соколова К.Я., Савельева И.В., Попова И.В. и др. Аутофлора человека в норме и патологии и её коррекция /Под. Ред. Блохиной И.Н., Горький, 1998. С. 144-148.

47. Стрижаков А.Н., Подзолкова Н.М. Гнойные воспалительные заболевания придатков матки. М.: «Медицина», 1996. 360 с.

48. Усвяцов Б .Я. Бактериоцины стрептококков /Афтореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург. 1967. 48 с.

49. Усвяцов Б.Я. Лизоцимная и антилизоцимная активность патогенных кокков /Дис. . докт. мед. наук. Оренбург, 1986. 328 с.

50. Чайникова И.Н. Инфектологическая характеристика сальмонеллеза / Автореф. дис. . докт. мед. наук. Оренбург, 2006. 48 с.

51. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и её функции.-М.: Грантъ, 1998, 288 с.

52. Al-Harti L., Roebuck K., Olinger G., Landay A., Sha В., Hashemi F., Spear G. Bacterial vaginisis-associeted microflo isolated from the female genital tract activates HIV-l expression/JAIDS. 1999.21: 194-202.

53. Altrichter T., Heizmann W.R. Gardnerella vaginalis: transport, microscopy, testing resistance (in German). Geburtshilfe Frauenheilkd. 1994. 54: 606-611.

54. Alvarez-Olmos M.I., Barousse M.M., Rajan L., Van Der Pol B.J., Fortenberry D., Orr D. et al. Vaginal lactobacilli in adolescents: presence and relationship to local and systemic immunity, and to bacterial vaginosis /Sex Transm Dis. 2004. 31: 393-400.

55. Amsel R., Totten P.A., Spiegel C.A., Chen K.C., Eschenbach D., Holmes K.K. Nonspecific vaginitis: diagnostic criteria and microbial and epidemiological association /Am J Med. 1983. 74: 14-22.

56. Antonio M.A.D., Hawes S.E., Hillier S.L. The identification of vaginal Lactobacillus species and the demographic and microbiologic characteristics of women colonized by these species /J Infect Dis. 1999. 180: 1950-1956.

57. Anukam K.C., Osazuwa E.O., Ahonkhai I., Reid G. Lactobacillus vaginal microbiota of women attending a reproductive health care service in Benin city, Nigeria /Sex Transm Dis. 2006a. 33: 59-62.

58. Armstrong N.R., Wilson J.D. Tinidazole in the treatment of bacterial vaginosis /Int J Womens Health. 2010.1: 59-65.

59. Aroutcheva A., Gariti D„ Simon M., Shott S., Faro J., Simoes J.A., et al. Defense factors of vaginal lactobacilli /Am J Obstet Gynecol. 2001. 185: 375379.

60. Azargoon A., Darvishzadeh S. Association of bacterial vaginosis, trichomonas vaginalis, and vaginal acidity with outcome of pregnancy /Arch Iran Med. 2006. 9(3): 213-217.

61. Bannatyne R., Smith A. Recurrent bacterial vaginosis and metronidazol resistance in Gardnerella vaginalis /Sex Transm Infect. 1998. 74: 455-456.

62. Berkhout B., Floris R., Recio I., Visser S. The antiviral activity of the milk protein lactoferrin against the human immunodeficiency virus type 1 /Biometals. 2004. 17: 291-294.

63. Berrebi A., Ayoubi J.M. Le déséquilibre de la flore vaginale /Gynecol Obstet Endocrinol. 1999. 44: 1-4.

64. Biron C.A., Brossay L. NK cells and NKT cells in innate defense against viral infections /Curr Opin Immunol. 2001. 13: 458-^464.

65. Biron C.A., Nguyen K.B., Pien G.C., Cousens L.P., Salazar-Mather T.P. Natural killer cells in antiviral defense: function and regulation by innate cytokines/Annu Rev Immunol. 1999. 17: 189-220.

66. Biswas M.K. Bacterial vaginosis /Clin. Obstet. Gynecol. 1993. 36: 166176.

67. Bjercke S., Brandtzaeg P. Glandular distribution of immunoglobulin, j chain, secretory component, and HLA-DR in the human endometrium throughout the menstrual cycle /Hum Reprod. 1993. 8: 1420-1425.

68. Boris S., Suarez J., Barbes C. Characterization of the aggregation promoting factor from Lactobacillus gasseri, a vaginal isolate /J Appl Microbiol. 1997. 83:413-420.

69. Boris S., Suarez J., Vazques F., Barbes C. Adherence of human vaginal lactobacilli to vaginal epithelial cell and interaction with uropathogenes /Infect Immun. 1998. 66: 1985-1989.

70. Boskey E., Cone R., Whaley K., Moench T. Origins of vaginal acidity: high D/L lactate ratio is consistent with bacteria being the primary source /Human Reprod. 2001. 16: 1809-1813.

71. Boskey E., Telsch K., Moench T., Cone R. Acid production by vaginalflora in vitro is consistent with the rate and extent of vaginal acidification1.fect Immun. 1999. 67: 5170-5175.

72. Bourlioux P. Ecologie microbienne du tractus digestif humain. In: DeRoissart H., Luquet F., Les bactéries lactiques II. Uriage, Lorica, 1994: 657-661.

73. Branco K.M.G.R., Nardi R.M.D., Moreira J.L.S. et al. Identification and in vitro production of Lactobacillus antagonists from women with or without bacterial vaginisis /Brasilian Journal of Medical and Biological Research. 2010.43: 338-344.

74. Brandtzaeg P. Mucosal immunity in the female genital tract /J Reprod Immunol. 1997. 36: 23-50.

75. Burton J.P., Cadieux P.A., Reid G. Improved understanding of the bacterial vaginal microbiota of women before and after probiotic instillation /Appl Environ Microbiol. 2003. 69: 97-101.

76. Burton J. P., Reid G. Evaluation of the bacterial vaginal flora of 20 postmenopausal women by direct (Nugent score) and molecular (polymerase chain reaction and denaturing gradient gel electrophoresis) techniques /J. Infect. Dis. 2002. 186: 1770-1780.

77. Cadieux P., Burton J., Gardiner G., Braunstein I., Bruce A.W., Kang C.Y., Reid G. Lactobacillus strains and vaginal ecology /JAMA. 2002. 287: 1940-1941.

78. Caillouette J.C., Sharp C.F., Zimmerman G.J., Subir R. Vaginal pH as a marker for bacterial pathogens and menopausal status /Am. J. Obstet. Gynecol. 1997. 176: 1270-1277.

79. Catlin B.W. Gardnerella vaginalis: characteristics, clinical consideration, and controversies /Clin Microbiol Rev. 1992. 5: 213-237.

80. Cauci S., Culhane J.F., Di Santolo M., McCollum K. Among pregnant women with bacterial vaginosis, the hydrolytic enzymes sialidase and prolidase are positively associated with interleukin-lbeta /Am J Obstet Gynecol. 2008. 198, 132.e 1-7.

81. Cherpes T.L., Meyn L.A., Krohn M.A., Lurie JG, Hillier S.L. Association between acquisition of herpes simplex virus type 2 in women and bacterial vaginosis /Clin Infect Dis. 2003. 37: 319-325.

82. Chimura T., Hirayama T., Takase M. Lysozyme in cervical mucus of patients with chorioamnionitis /Jpn J Antibiot. 1993.46 (8): 726-9.

83. Cohen C.R., Duerr A., Pruithithada N., Rugpao S., Hiller S., Garcia P., Nelson K. Bacterial vaginosis and HIV seroprevalence among female commercial sex workers in Chiang Mai, Thailand /AIDS. 1995. 9: 1093-1097.

84. Collins E.B., Aramaki K. Production of hydrogen peroxide by Lactobacillus acidophilus //J. Dairy Sci. 1980. 63: 353-357.

85. Coolen M. J. L., Post E., Davis C.C., Forney L.J. Characterization of microbial communities found in the human vagina by analys is of terminal restriction fragment length polymorphisms of 16S rRNA genes /Appl. Environ. Microbiol. 2005. 71: 8729-8737.

86. Cowland J.B., Johnsen A.H., Borregaard N. hCAP-18, a cathelin/pro-bactenecin-like protein of human neutrophil specific granules /FEBS Lett 1995. 368: 173-176.

87. Cribby S., Taylor M., Reid G. Vaginal microbiota and the use probiotics /Interdisciplinary Perspectives on Infectious Diseases. 2008. 2008: 256490.

88. Cristiano L., Coffetti N., Dalvai G., Lorusso L., Lorenzi M. Bacterial vaginosis: prevalence in outpatients, association with some micro-organisms and laboratory indices /Genitourin Med. 1989. 65: 382-387.

89. Demes P., Gombosova A., Valent M., Janoska A., Fabusova H., Petrenko M. Differential susceptibility of fresh Trichomonas vaginalis isolates to complement in menstrual blood and cervical mucus /Genitourin. Med. 1988. 64: 176-179.

90. Demirezen S., Korkmaz E., Beksa? M.S. Association between trichomoniasis and bacterial vaginosis: examination of 600 cervicovaginal smears. Cent Eur J Public Health. 2005. 13(2): 96-98.

91. Devillard E., Burton J. P., Reid G. Complexity of vaginal microflora as analyzed by PCR denaturing gradient gel electrophoresis in a patient with recurrent bacterial vaginosis /Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2005. 13: 25-31.

92. Doderlein A. Das Scheidensekret und seine Bedeutung fur das Puerperal-fieber. Leipzig: Verlag von E. Besold. 1892. 95 p.

93. Donders G.G. The prevalence of bacterial vaginosis and aerobic vaginitis in young Finish women /APMIS. 2011. 119(3): 224-225.

94. Donders G.G.G. Definition and classification of abnormal vaginal flora /Best Practice & Reserch Clinical Obstetrics and Gynaecology. 2007. 21(3): 355-373.

95. Donders G.G.G., Bosmans E., Dekkersmaecker A., Vereecken A., Bulck B.V., Spitz B. Pathogenesis of abnormal vaginal bacterial flora / Am J Obstet Gynecol. 2000. 182: 872-878.

96. Donders G.G.G., Vereecken A., Bosmans E., Dekeersmaecker A., Sa-lembier G., Spitz B. Definition of a type of abnormal vaginal flora that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis /Br J Obstet Gynaecol. 2002. 109: 34-43.

97. Dunbar J. Levels of bacterial community diversity in four arid soils compared by cultivation and 16S rRNA gene cloning /Appl. Environ. Microbiol. 1999. 65: 1662-1669.

98. Eggert-Kruse W., Botz I., Pohl S., Rohr G., Strowitzki T. Antimicrobial activity of human cervical mucus /Hum Reprod. 2000.15(4):778-84.

99. Eschenbach, D. A. History and review of bacterial vaginosis /Am. J. Obstet. Gynecol. 1993. 169: 441-445.

100. Eschenbach D.A., Hillier S., Critchlow C., Stevens C., DeRouen T., Holmes K.K. Diagnosis and clinical manifestation of bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 1988. 158: 819-828.

101. Eschenbach D., Davick P., Williams B., Klebanoff S., Young-Smith K., Critchlow C., Holmes K. Prevalenceof hydrogen peroxide-producing Lactobacillus species in normal women and women with bacterial vaginisis /J Clin Microbiol. 1989. 27: 151-156.

102. Evangelista A.T., Coppola K.M., Furness G. Relationship between group JK corynebacteria and the biotypes of Corynebacterium genitalium and Cory-nebacterium pseudogenitalium /Canadian Journal of Microbiolog. 1984. 30:(8) 1052-1057.

103. Fahey J.V., Schaefer T.M., Channon J.Y., Wira C.R. Secretion of cytokines and chemokines by polarized human epithelial cells from the female reproductive tract /Human Reproduction. 2005. 20: 1439-1446.

104. Falsen E., Pascual C., Sjoden B., Ohlen M., Collins M.D. Phenotypic and phylogenetic characterization of a novel Lactobacillus species from human sources: description of Lactobacillus iners sp. nov. /Int J Syst Bacteriol. 1999. 49 (Part 1): 217-221.

105. Famularo G., Pieluigi M., Coccia R., Mastroiacovo P., DeSimone C. Mi-croecology, bacterial vaginosis, and probiotics: perspectives for bacteriother-apy /Med Hypotheses. 2001. 56: 421-430.

106. Farrelly V., Rainey F.A., Stackebrandt E. Effect of genome size and rrn gene copy numbers on PCR amplification of 16S rRNA genes from a mixture of bacterial species /Appl. Environ. Microbiol. 1995. 61: 2798-2801.

107. Faurschou M., Sorensen O.E., Johnsen A.H., Askaa J., Borregaard N. Defensin-rich granules of human neutrophils: characterization of secretory properties /Biochim Biophys Acta. 2002. 1591: 29-35.

108. Ferris M.J., Norori J., Zozaya-Hinchliffe M., Martin D.H. Cultivation-independent analysis of changes in bacterial vaginosis flora following metronidazole treatment /J Clin Microbiol. 2007. 45:1016-1018.

109. Fichorova R.N., Cronin A.O., Lien E., Anderson D.J., Ingalls R.R. Response to Neisseria gonorrhoeae by cervicovaginal epithelial cells occurs in the absence of toll-like receptor 4-mediated signaling /J Immunol. 2002. 168: 2424-2432.

110. Fleming D.C., King A.E., Williams A.R.W., Critchley H.O.D., Kelly R.W. Hormonal contraception can suppress natural antimicrobial gene transcription in human endometrium /Fertility and Sterility. 2003. 79: 856-863.

111. Fogel G.B., Collins C.R., Brunk C.F. Procariotic genomic size and SSU rDNA copy number: estimation of microbial relative abundance from a mixed population /Microb. Ecol. 1999. 38: 93-113.

112. Fontaine E.A., Taylor-Robinson D. Comparison of quantitative and qualitative methods of detecting hydrogen peroxide produced by human vaginal strains of lactobacilli /J. Appl. Bacteriol. 1990. 69: 326-331.

113. Fredericks D. N., Fiedler T. L., Marrazzo J. M. Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis /N. Engl. J. Med. 2005. 353: 1899-1911.

114. Ganz T. Antimicrobial polypeptides /Journal of Leukocytes Biology. 2004. 75: 34-38.

115. GaoY., Lu Y., Teng K.L., Chen M.L., Zheng H.J. Zhu Y.Q., Zhong J. Complete genome sequence of Lactococcus lactis subsp. lactis CV56, a pro-biotic strain isolated from the vaginas of healthy women /J Bacteriol. 2011. 193 (11): 2886-2887.

116. Garg K.B., Ganguli I., Das R., Talwar G.P. Spectrum of Lactobacillus species present in healthy vagina of Indian women /Indian J Med Res. 2009. 129: 652-657.

117. Gelber S.E., Aguilar J.L., Lewis K.L., Ratner A.J. Functional and phy-logenetic characterization of vaginolysin, the human-specific cytolysin fron Gardnerella vaginalis /J Bacteriol. 2008. 190. 3896-3903.

118. Giraldo P.C., Gongalves A.K., Junior J.E. Secretory Immunoglobulin A: A Protective Factor in the Genital Mucosa / The Brazilian Journal of Infectious Diseases 2006;10(4):232-234.

119. Gomes D.A., Souza A.M., Lopes R.V., Nunes A.C., Nicoli J.R. Comparison of antagonistic ability against enteropathogens by G+ and G- anaerobic dominant components of human fecal microbiota /Folia Microbiol. 2006. 51: 141-145.

120. Gupta K., Stapleton A.E., Hooton T.M. Inverse association of H202-producing lactobacilli and vaginal E. coli colonization in women with recurrent urinary tract infection /J Infect Dis. 1998. 178: 446-450.

121. Hallen A., Jarstrand C., Pähl son C. Treatment of bacterial vaginosis with Lactobacilli/SexuaWy Transmitted Diseases. 1992. 19(3): 146-148.

122. Hammill H.A. Normal vaginal flora in relation to vaginitis / Obstet. Gy-nec. Clin. N. Amer. 1989. 16 (2): 329 336.

123. Harmanli O.H., Cheng G.Y., Nyirjesy P., Chatwani A., Gaughan J.P. Urinary tract infections in women with bacterial vaginosis /Obstet. Gynecol. 2000. 95: 710-712.

124. Hawes S.E., Hillier S.L., Benedetti J. et al. Hydrogen peroxide-producing lactobacilli and acquisition of vaginal infections /J Infect Dis. 1996. 174: 1058-1063.

125. Hay P. Recurrent bacterial vaginosis /Curr Infect Dis Rep. 2000. 2: 506512.

126. Hein M., Petersen A.C., Helmig R.B., Uldbjerg N., Reingoldt J. Immunoglobulin levels and phagocytes in the cervical mucus plug at term of pregnancy /Acta Obstet Gynecol Scand. 2005. 84: 734-742.

127. Hein M., Valore E.V., Helmig R.B., Uldbjerg N., Ganz T. Antimicrobial factors in the cervical mucus plug /Am J Obstet Gynecol. 2002. 187: 137144.

128. Hillier S. Diagnostic microbiology of bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 1993. 169:455-459.

129. Hillier S.L., Krohn M.A., Klebanoff S.J., Eschenbach D.A. The relationship of hydrogen peroxide-producing lactobacilli to bacterial vaginosis and genital microflora in pregnant women /Obstet. Gynecol. 1992. 79(3): 369373.

130. Hillier S.L., Lau R.J. Vaginal microflora in postmenopausal women who have not received estrogen replacement therapy /Clin. Infect. Dis. 1997. 25(Suppl. 2): S123-S126.

131. Hooton T.M., Hillier S., Johnson C., Roberts P.L., Stamm W.E. Escherichia coli bacteriuria and contraceptive method /The Journal of the American Medical Association. 1991. 265(1): 64-69.

132. Hocini H., Barra A., Belec L., Iscaki S., Preud'homme J.L., Pillot J. et al. Systemic and secretory humoral immunity in the normal human vaginal tract /Scand J Immunol. 1995. 42: 269-274.

133. Hooton T.M. Pathogenesis of urinary tract infections: an update /Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2000. 46, Suppl. SI: 1-7.

134. Hordnes K., Tynning T., Kvam A., Jonsson R., Haneberg B. Colonization in the rectum and uterine cervix with Group B streptococci may induce specific antibody responses in cervical secretions of pregnant women /Infect Immun. 1996. 64: 1643-1652.

135. Home A.W., Stock S.J., King A.E. Innate immunity and disorders of the female reproductive tract /Reproduction. 2008. 135. 739-749.

136. Hyman R.W., Fukushima M., Diamond L., Kumm J., Giudice L.C., Davis R.W. Microbes on the human vaginal epithelium /Proc Natl Acad Sci. USA. 2005. 102: 7952-7957.

137. Janeway C.A., Medzhitov R. Innate immune recognition /Annual Review of Immunology. 2002. 20: 197-216.

138. Jenssen H., Sandvik K., Andersen J.H., Hancock R.E., Gutteberg T.J. Inhibition of HSV cell-to-cell spread by lactoferrin and lactoferricin /Antiviral Res. 2008. 79: 192-198.

139. Johnson J.L., Phelps C.F., Cummins C.S., London J., Gasser F. Taxonomy of the Lactobacillus acidophilus group /Int. J. Syst. Bacteriol. 1980. 30: 53-68.

140. Juliano C., Cappuccinelli P., Mattana A. In vitro phagocytic interaction between Trichomonas vaginalis isolates and bacteria /Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1991. 10 (6): 497-502.

141. King A.E., Kritchley H.O., Kelly R.W. Innate immune defences in the human endometrium/2003a. 1: 116.

142. King A.E., Fleming D.C., Critchley H.O.D., Kelly R.W. Differential expression of the natural antimicrobials, beta-defensins 3 and 4, in human endometrium /Journal of Reproductive Immunology. 2003b. 59: 1-16.

143. King A.E., Paltoo A., Kelly R.W., Sallenave J.M., Booking A.D., Challis J.R. Expression of natural antimicrobials by human placenta and fetal membranes /Placenta. 2007. 28: 161-169.

144. Kiss H., Kôgler B., Petricevic L. et al. Vaginal Lactobacillus microbiota of healthy women in the late first trimester of pregnancy /International Journal of Obstetrics & Gynaecology. 2007. 114(11): 1402-1407.

145. Klebanoff S., Belding M. Virucidal activity of H202-generating bacteria: requirement for peroxidase and a halide /J Infect Dis. 1974. 129: 345-348.

146. Klebanoff S.J., Hillier S.L., Eschenbach D.A., Waltersdorph A.M. Control of the microbial flora of the vagina by H202-generating lactobacilli //J. Infect. Dis. 1990. 164: 94-100.

147. Klotman M.E., Chang T.L. Defensins in innate antiviral immunity /Nature Reviews Immunology. 2006. 6: 447-456.

148. Kutteh W.H., Mestecky J. Secretory immunity in the female genital tract /Am J Reprod Immunol. 1994. 31: 40-46.

149. Kutteh W.H., Mestecky J., Wira C.R. Mucosal immunity in the human female reproductive tract. In: Mestecky J., Bienenstock J., Lamm M.E., Mayer L., McGhee J.R., Strober W., eds. Mucosal Immunology. New York: Academic Press, 2005:1631-1646.

150. Kutteh W.H., Prince S.J., Hammond K.R., Kutteh C.C., Mestecky J. Variations in immunoglobulins and IgA subclasses of human uterine cervical secretions around the time of ovulation /Clin Exp Immunol. 1996. 104: 538542.

151. Lamont R.F., Morgan D.J., Wilden S.D., Taylor-Robinson D. Prevalence of bacterial vaginosis in women attending one of the three general practices for routine cervical cytology /Int. J. STD AIDS. 2000. 11: 495-498.

152. Larsen B., Monif G.R. Understanding the bacterial flora of the female genital tract /Clin Infect Dis. 2001. 32: e69-e77.

153. Lefevre J.C. La vaginose bactérienne /La letter de l'infectiologue. 1993. 8: 386-390.

154. Lepargneur J.-P., Rousseau V. Role protecteur de la flore de Doderlein /J Gynecol Biol Reprod. 2002. 31: 485-494.

155. Levison M.E., Corman L.C., Carrington E.R., Kaye D. Quantitative microflora of the vagina /Am J Obstet Gynecol. 1977. 127: 80-85.

156. MacPhee R.A., Hummelen R., Bisanz J.E., Miller W.L., Reid G. Probi-otic strategies for the treatment and prevention of bacterial vaginosis /Expert Opin Pharmacother. 2010.11(18): 2985-2995.

157. Maniatis T., Frisc E.F., Sambrook J.J. Molecular Cloning Laboratory Manual. New York, NY: Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Press; 1982.

158. Marchetti M., Ammendolia M.G., Superti F. Glycosaminoglycans are not indispensable for the anti-herpes simplex virus type 2 activity of lactoferrin /Biochimie. 2009. 91: 155-159.

159. Marchetti M., Trybala E., Superti F. Johansson M., Bergstrom T. Inhibition of herpes simplex virus infection by lactoferrin is dependent on interference with the virus binding to glycosaminoglycans /Virol. 2004. 318: 405413.

160. Marrazzo J.M. Evolving issues in understanding and treating bacterial vaginosis //Expert. Rev. Anti Infect. Ther. 2004. 2: 913-922.

161. Marrazzo J.M., Koutsky L.A., Eschenbach D.A., Agnew K., Stine K., Hillier S.A. Characterization of vaginal flora and bacterial vaginosis in women who have sex with women /J Infect Dis. 2002. 185. 1307-1313.

162. Martin R., Soberon N., Vaneechoutte M., Florez A.B., Vazquez F., Suarez J.E. Characterization of indigenous vaginal lactobacilli from healthy women as probiotic candidates /Int Microbiol. 2008. 11: 261-266.

163. Mastromarino P., Brigidi P., Macchia S., Maggi L., Pirovano F., Trinch-ieri V. et al. Characterization and selection of vaginal Lactobacillus strains for the preparation of vaginal tablets /J. Appl. Microbiol. 2002. 93: 884-893.

164. Menendez M.C., Ainsa J.A., Martin C., Garcia M.J. katGI and katGII encode two different catalases-peroxidases in Mycobacterium fortuitum /J. Bacteriol. 1997. 179(22): 6880-6886.

165. Mestecky J., Fultz P.N. Mucosal immune system of the human genital tract/J Infect Dis. 1999. 179: S470-S474.

166. McGregor J.A., French J.I. Bacterial vaginosis in pregnancy /Obstet. Gynecol. Surv. 2000. 55: SI-SI 9.

167. McGroarty J. Probiotic use of lactobacilli in the human female urogenital tract /FEMS Immunol Med Microbiol. 1993. 6: 252-264.

168. McGroarty J., Reid G. Detection of a Lactobacillus substance that inhibits Escherichia coli /Can J Microbiol. 1988. 34: 974-978.

169. McGrory T., Garber G.E. Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection /Infect. Immun. 1992. 60: 2375-2379.

170. McGrory T., Meysick K., Lemchuk-Favel L.T., Garber G.E. The interaction of Lactobacillus acidophilus and Trichomonas vaginalis in vitro /J. Para-sitol. 1994. 80(1): 50-54.

171. Miller L., Patton D.L., Meier A., Thwin S.S., Hooton T.M., Eschenbach D.A. Depomedroxyprogesterone-induced hypoestrogenism and changes in vaginal flora and epithelium /Obstet Gynecol. 2000. 96(3): 431-439.

172. Milson I., Arvidsson L., Ekelund P., Molander U., Eriksson O. Factors influencing vaginal cytology, pH and bacterial flora in elderly women /Acta Obstet. Gynecol. Scand. 1993. 72: 286-291.

173. Moriuchi M., Moriuchi H. A milk protein lactoferrin enhances human T cell leukemia virus type 1 and suppresses HIV-1 infection /J. Immunol. 2001. 166: 4231-4236.

174. Morris M., Nicoll A., Simms I., Wilson J., Catchpole M. Bacterial vaginosis: a public health review /Br. J. Obstet. Gynaecol. 2001. 108: 439-450.

175. Nagy E., Froman G., Mardh P. Fibronectin binding of Lactobacillus species isolated from women with and without bacterial vaginosis /J Med Microbiol. 1992. 37: 38-42.

176. Murphy M., Condon S. Correlation of oxygen utilisation and hydrogen peroxide accumulation with oxygen induced enzymes in Lactobacillus planta-rum cultures /Arch Microbiol. 1984. 138: 44-48.

177. Nagy E., Petterson M., Mardh P.A. Antibiosis between bacteria isolated from the vagina of women with and without signs of bacterial vaginosis /AP MIS. 1991. 99: 739-744.

178. Ness R.B., Kip K.E., Hillier S.L., Soper D.E., Stamm C.A., Sweet R.L., Rice P., Richter H.E. A cluster analysis of bacterial vaginosis-associated microflora and pelvic inflammatory disease / Am J Epidemiol. 2005. 162(6): 585-590.

179. Niku-Paavola M.L., Laitila A., Mattila-Sandholm T. & Haikara A. New types of antimicrobial compounds produced by Lactobacillus plantarum /J. Appl Microbiol. 1999. 86: 29-35.

180. Norderhaug I., Johansen F., Schjerven H., Brandtzaeg P. Regulation of the formation and external transport of secretory immunoglobulins /Crit Rev Immunol. 1999., 19: 481-508.

181. Nugent R.P., Krohn M.A., Hillier S.L. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation /J Clin Microbiol. 1991. 29: 297-301.

182. Oakley B.B., Fiedler T.L., Marrazzo J.M., Fredricks D.M. Diversity of human vaginal bacterial communities and associations with clinically defined bacterial vaginosis /Applied and Environmental Microbiology. 2008. 74 (15): 4898-4909.

183. Ocana V.S., Holgado A.A.P.R., Nader-Macias M.E. Characterization of a bacteriocin like substance produced by a vaginal Lactobacillus salivarius strain/Appl Environ Microbiol. 1999. 65: 5631-5635.

184. Ocana V., Ruiz-Holgado A., Nader-Macias M. Growth inhibition of Staphylococcus aureus by H202-producing Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei isolated from the human vagina /FEMS Immun Med Microbiol. 1999. 23: 87-92.

185. Ocana V., Silva C., Nader-Macias M.E. Antibiotic susceptibility of potentially probiotic vaginal lactobacilli /Infect Dis Obstet Gynecol. 2006. 2006: 18182.

186. Ouwehand A.C., Kirjavainen P.V., Shortt C., Salminen S. Probiotics: mechanisms and established effects. International diary journal. 1999. 9: 4352.

187. Pahlson C., Larsson P.G. The ecologically wrong lactobacilli /Med. Hypotheses. 1991.36: 125-130.

188. Parente E., Ricciardi A. Production, recovery and purification of bacte-riocins from lactic acid bacteria /Appl.Microbiol. Biotechnol. 1999. 52(5): 628-638.

189. Parr E.L., Parr M.B. A comparison of antibody titres in mouse uterine fluid after immunization by several routes, and the effect of the uterus on antibody titres in vaginal fluid /J. Reprod. Fertil. 1990. - Vol. 89, №2. - P. 619-625.

190. Pascual L.M., Daniele M.B., Pajaro C., Barberis L. Lactobacillus species isolated from the vagina: identification, hydrogen peroxide production and nonoxynol-9 resistance /Contraception. 2006. 73: 78-81.

191. Pioli P.A., Amiel E., Schaefer T.M., Connolly J.E., Wira C.R., Guyre P.M. Differential expression of toll-like receptors 2 and 4 in tissues of the human female reproductive tract /Infection and Immunity. 2004. 72: 57995806.

192. Poulouin L., Gallet O., Imhoff J. La fibronectin: propriétés et function de la molecule native et de ses fragment /Med Siences. 1997. 13: 657-661.

193. Pybus V., Onderdonk A.B. Microbial interactions in vaginal ecosystem, with emphasis on the pathogenesis of bacterial vaginosis /Microbes Infect. 1999., 1:285-292.

194. Quayle A.J., Porter E.M., Nussbaum A.A., Wang Y.M., Brabec C., Yip K.P., Mok S.C. Gene expression, immunilocalization, and secretion of human defensin-5 in human female reproductive tract /American Journal of Pathology. 1998. 152: 1247-1258.

195. Redondo-Lopez V., Cook R.L., Sobel J.D. Emerging role of lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora /Rev Infect Dis. 1990. 12: 856-872.

196. Reid G. Probiotic agents to protect the urogenital tract against infection /Am J Clin Nutr. 2001. 73 (suppl): 437-443.

197. Reid G., Beuerman D., Heinemann C., Bruce A.W. Probiotic Lactobacillus dose required to restore and maintain a normal vaginal flora /FEMS Immunol Med Microbiol. 2001a. 32: 37-41.

198. Reid G., Bruce A.W. Urogenital infections in women: can probiotics help? / Postgrad Med J. 2003. 79: 428-432.

199. Reid G., Bruce A.W., Cook R.L., Llano M. Effect on urogenital flora of antibiotic therapy for urinary tract infection /Scand J Infect Dis. 1990. 22(1): 43-47.

200. Reid G., Bruce A.W., Fraser N., Heinemann C., Owen J., Henning B. Oral probiotics can resolve urogenital infections / FEMS Immunol Med Microbiol. 2001b. 30: 49-52.

201. Reid G., Jass J., Sebulsky M.T., McCormick J.K. Potential uses of probi-otics in clinical practice /Clinical Microbiology Reviews. 2003b. 16(4): 658672.

202. Reid G., McGroarty J.A., Tomeczek L., Bruce A.W. Identification and plasmid profiles of Lactobacillus species from the vagina of 100 healthy women /FEMS Immunol Med Microbiol. 1996. 15: 23-26.

203. Reid G. Millsap K., Bruce A.W. Implantation of Lactobacillus casei var rhamnosus into vagina/Lancet. 1994. 344: 1229.

204. Richardson A., Martin H.L., Stevens C.E., Hillier S.L., Mwatha A.K., Chohan B.H., Nyange P.M., Mandaliya K., Ndinya-Achola J., Kreiss J.K. Use of nonoxynol-9 and hanges in vaginal lactobacilli /J Infect Dis. 1998. 178: 441—445.

205. Rodriguez J.M., Collins M.D., Sjoden B., Falsen E. Characterization of a novel Atopobium isolate from the human vagina: description of Atopobium vaginae sp. nov. /Int J Syst Bacteriol. 1999. 49: 1573-1576.

206. Rogosa M., Sharpe M.E. Species differentiation of human vaginal lactobacilli /J Gen Microbiol. 1960. 23: 197-201.

207. Rottini G., Dobrina A., Forgiarini O., Nardon E., Amirante G.A., Patriarca P. Identification and partial characterization of a cytolytic toxin produced by Gardnerella vaginalis /Infect Immun. 1990. 58. 3751-3758.

208. Royce R.A., Thorp J., Granados J.L., Savitz D.A. Bacterial vaginosis associated with HIV infection in pregnant women from North Carolina /J. Ac-quir. Immune Defic. Syndr. Hum. Retrovirol. 1999. 20: 382-386.

209. Russell M.W. IgA as an anti-inflammatory regulator of immunity /Oral Dis. 1999. 5: 55-67.

210. Russell M.W., Mestecky J. Humoral immune responses to microbial infections in the genital tract /Microbes Infect /2002. 4(6): 667-77.

211. Sallenave J.M. The role of secretory leukocyte proteinase inhibitor and elafin (elastase-specific inhibitor/skin-derived antileucoprotease) as alarm an-tiproteinases in inflammatory lung disease /Respiratory Research. 2000. 1: 87-92.

212. Sallenave J.M., Ryle A.P. Purification and characterization of elastase-specific inhibitor. Sequence homology with mucus proteinase inhibitor /Biological Chemistry Hoppe-Seyler. 1991. 372: 13-21.

213. Sawada M., Otsuki K., Mitsukawa K., Yakuwa K., Nagatsuka M., Okai T. Cervical inflammatory cytokines and other markers in the cervical mucus of pregnant women with lower genital tract infection /Int J Gynaecol Obstet. 2006. 92(2): 117-21.

214. Schaefer T.M., Desouza K., Fahey J.V., Beagley K.W., Wira C.R. Tolllike receptor (TLR) expression and TLR-mediated cytokine/chemokine production by human uterine epithelial cells /Immunology. 2004. 112: 428^136.

215. Schaefer T.M., Fahey J.V., Wright J.A., Wira C.R. Innate immunity in the human female reproductive tract: antiviral response of uterine epithelial cells to the TLR3 agonist poly (I:C) /J Immunol. 2005. 174: 992-1002.

216. Schalkwijk J., Wiedow O., Hirose S. The trappin gene family: proteins defined by an N-terminal transglutaminase substrate domain and a C-terminal four-disulphide core /Biochemical Journal. 1999. 340 (Pt 3): 569-577.

217. Schwebke J.R. Role of vaginal flora as a barrier to HIV acquisition /Curr Infect Dis Rep. 2001. 3: 152-155.

218. Schwebke J.R., Burgess D. Trichomoniasis /Clin. Microbiol. Reviews. 2004. 17(4): 794-803.

219. Schwebke J.R., Desmond R.A. Tinidazole vs metronidazole for the treatment of bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 2011. 204(3): 21 l.el-6.

220. Sherwood N.P., Russel B.E. et al. Studies on Streptococci. III. New Antibiotic Substances Produced by Beta Hemolytic Streptococci /J Infect Dis. 1949. 84(1): 88-91.

221. Simoes J.A., Aroutcheva A.A., Shott S., Faro S. Effect of metronidazole on the growth of vaginal lactobacilli in vitro /Infectious Diseases in Obstetrics and Gynecology. 2001. 9(1): 41-45.

222. Simpson A.J., Maxwell A.I., Govan J.R., Haslett C., Sallenave J.M. Elafin (elastase-specific inhibitor) has anti-microbial activity against gram-psitive and gram-negative respiratory pathogens /FEBS Letters. 1999. 452: 309-313.

223. Skarin A., Sylwan J. Vaginal Lactobacilli inhibiting growth of Gardnerella vaginalis, Mobiluncus and other bacterial species cultured from vaginal content of women with bacterial vaginosis /Acta Pathol Microbiol Immunol Scand (B). 1986. 94: 475-500.

224. Sobel J. Vaginitis /New England J Med. 1997. 337: 1896-1903.

225. Sobel J.D. Is there a protective role for vaginal flora? /Curr Infect Dis Rep. 1999. 1:379-383.

226. Sonnex C. Influence of ovarian hormones on urogenital infection /Sexually Transmitted Infection. 1998. 74: 11-19.

227. Soper D.E. Gynecologic complications of bacterial vaginosis: fact or fiction? /Curr. Infect. Dis. Rep. 1999. 1: 393-397.

228. Spiegel C.A. Bacterial vaginosis /Rev Med Microbiol. 2002. 13: 43-51.

229. Spiegel C.A., Amsel R., Eschenbach D., Schoenknecht F., Holmes K.K. Anaerobic bacteria in nonspecific vaginitis /N Engl J Med. 1980. 303: 601-607.

230. Spitznagel J.K., Dalldorf F.G., Leffell M.S., Folds J.D., Welsh I.R., Cooney M.H., Martin L.E. Character of azurophil and specific granules purified from human polymorphonuclear leukocytes /Lab Invest 1974. 30: 774785.

231. Spurbeck R.R., Arvidson C.G. Inhibition of Neisseria gonorrhoeae epithelial cell interactions by vaginal lactobacillus species /Infection and Immunity. 2008. 76 (7): 3124-3130.

232. Stock S.J (неопубликованные данные) no Home A.W., Stock S.J., King A.E. Innate immunity and disorders of the female reproductive tract /Reproduction. 2008. 135. 739-749.

233. Stock S.J., Kelly R.W., Riley S.C., Calder A.A. Natural antimicrobial production by the amnion /American Journal of Obstetrics and Gynecology. 2007. 255: el-e6.

234. Street D.A., Wells C., Taylor-Robinson D., Ackers J.P. Interaction between Ttrichomonas vaginalis and other pathogenic microorganisms of the human genital tract/Br. J. Vener. Dis. 1984. 60: 31-38.

235. Strom K., Sjogren J., Broberg A., Schnorer J. Lactobacillus plantarum MiLAB 393 produces the antifungal cyclic dipeptides cyclo (L-Phe-L-Pro) and cyclo (L-Phe-irara-4-OH-L-Pro) and 3-phenyllactic acid //Appl. Environ. Microbiol. 2002. 68: 4322^1327.

236. Strus M., Brzychczy-Wloch M., Gosiewski T. et al. The in vitro effect of hydrogen peroxide on vaginal microbial communities // FEMS Immunology & Medical Microbiology. 2006. 48(1): 56-63.

237. Sullivan A., Fianu-Jonasson A., Landgren B.-M., Nord C.E. Ecological effect of perorally administered pivmecillinam on the normal vaginal microflora /Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2005. 49(1): 170-175

238. Suzuki M.T., Giovannoni S.J. Bias caused by template annealing in the amplification of mixture of 16S rRNA genes by PCR /Appl. Environ. Microbiol. 1996. 62: 625-630.

239. Sweet R.L. Gynecologic conditions and bacterial vaginosis: implications for the non-pregnant patient /Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2000. 8: 184— 190.

240. Taha E.T., Gray R.H., Kumwenda N.I., Hoover D.R., Mtimavalye L.A., Liomba G.N., Chiphangwi J.D., Dallabetta G.A., Miotti P.G. HIV infectionand disturbances of vaginal flora during pregnancy /J AIDS Hum Retroviral. 1999. 20: 52-59.

241. Testore G.P., Sarrecchia C., Zupi E., Sordillo P., Valli E., Bove F., An-dreoni M. Antibiotic susceptibility of lactobacilli isolated from cervix of healthy women /Microbial Ecology in Health and Disease. 2002. 14: 14-18.

242. Thompson R.C., Ohlsson K. Isolation, properties, and complete amino acid sequence of human secretory leukocyte protease inhibitor, a potent inhibitor of leukocyte elastase /PNAS. 1986. 83: 6692-6696.

243. Thorsen P., Jensen I.P., Jeune B. et al. Few microorganisms associated with bacterial vaginosis may constitute the pathologic core: a population-based microbiologic study among 3596 pregnant women /Am J Obstet Gynecol. 1998. 178: 580-587.

244. Tomas M.S., Bru E., Nader-Macias M.E. Comparison of the growth and hydrogen peroxide production by vaginal probiotic lactobacilli under different culture conditions /Am. J. Obstet. Gynecol. 2003. 188: 35-44.

245. Tosi M.F. Innate immune responses to infection /Journal of Allergy and Clinical Immunology. 2005. 116: 241-249.

246. Totten P.A., Amsel R., Hale J., Piot P., Holmes K.K. Selective differential human blood bilayer media for isolation of Gardnerella (Heamophilus) vaginalis/J Clin Microbiol. 1982. 15: 141-147.

247. Valadkhan Z., Sharma S., Harjai K. et al. In vitro comparative kinetics of adhesive and haemolytic potential of T. vaginalis isolates from symptomatic and asymptomatic females /Indian J Pathol. Microbiol. 2003. 46 (4): 693-699.

248. Vallor A.C., Antonio M.A., Hawes S.E., Hillier S.L. Factors associated with acquisition of, or persistent colonization by, vaginal lactobacilli: role of hydrogen peroxide production /J Infect Dis. 2001. 184: 1431-1436.

249. Vasquez A., Jakobsson T., Ahrne S., et al. Vaginal Lactobacillus flora of healthy Swedish women /J Clin Microbiol. 2002. 40: 2746-2749.

250. Velraeds M., Van Der Mei H., Reid G., Busscher H. Inhibition of initial adhesion of uropathogenic Enterococus faecalis by biosurfactants from Lactobacillus isolates /Appl Environ Microbiol. 1996. 62: 1958-1963.

251. Velraeds M., Van Der Mei H., Reid G., Busscher H. Inhibition of initial adhesion of uropathogenic Enterococcus faecalis to solid subsrata by an absorbed biosurfactant layer from Lactobacillus acidophilus /Urology. 1997. 49: 790-794.

252. Velraeds M., Van De Belt-GritterB., Van Der Mei H., Reid G., Busscher H. Interference in initial adhesion of uropathogenic bacteria and yeasts to silicon rubber by a Lactobacillus acidophilus biosurfactant /J Med Microbiol. 1998. 47: 1081-1085.

253. Verstraelen H., Verhelst R., Claeys G., Temmerman M., Vaneechoutte M. Culture independent analysis of vaginal microflora: The unrecognized association of Atopobium vaginae with bacterial vaginosis /Am J Obstet Gynecol. 2004. 191: 1130-1132.

254. Vollenbroich D., Ozel M., Vater J., Kamp R., Pauli G. Mechanism of inactivation of enveloped viruses by the biosurfactant surfactin from Bacillus subtilis/Biologicals. 1997a. 25: 289-297.

255. Vollenbroich D., Pauli G. ,Ozel M., Vater J. Antimycoplasma propierties and application in cell culture of surfactin, a lipopetdide antibiotic from Bacillus subtilis /Appl Environ Microbiol. 1997b. 63: 44-49.

256. Wallace P.K., Yeaman G.R., Johnson K., Collins J.E., Guyre P.M., Wira C.R. MHC class II expression and antigen presentation by human endometrial cells /J Steroid Biochem Mol Biol. 2001. 76: 203-211.

257. Wang R.-F., Cao W.-W., Cerniglia C.E. PCR detection and quantitation of predominant anaerobic bacteria in human fecal samples /Appl. Environ. Microbiol. 1996. 62: 1242-1247.

258. Wiedow O., Luademann J., Utecht B. Elafin is a potent inhibitor of proteinase 3 /Biochemical and Biophysical Research Communications. 1991. 174: 6-10.

259. Wiesenfeld H.C., Hillier S.L., Krohn M.A., Landers D.V., Sweet R.L. Bacterial vaginosis is a strong predictor of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis infection /Clinical Infect Dis. 2003. 36: 663-668.

260. Wira C.R., Fahey J.V., Sentman C.L., Pioli P.A., Shen L. Innate and adaptive immunity in female genital tract: cellular responses and interactions /Immunological Reviews. 2005. 206: 306-335.

261. Witkin S.S. Bacterial flora of the female genital tract: function and immune regulation /Best Practice & Research Clinical Obstetrics and Gynaecology. 2007.21(3): 347-354.

262. Wolner-Hanssen P., Krieger J.N., Stevens C.E., Kiviat N.B., Koutsky L., Critchlow C., DeRouen T., Hillier S., Holmes K.K. Clinical manifestations of vaginal trichomoniasis /JAMA. 1989. 261: 571-576.

263. Zarember K.A., Godowski P.J. Tissue expression of human toll-like receptors and differential regulation of toll-like receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products, and cytokines /Journal of Immunology. 2002. 168: 554-561.

264. Zariffard M. R., Saifuddin M., Sha B. E., Spear G. T. Detection of bacterial vaginosis-related organisms by real-time PCR for lactobacilli, Gardnerella vaginalis and Mycoplasma hominis /FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2002. 34: 277-281.

265. Zheng H., Alcorn T., Cohen M. Effect of H202-producing lactobacilli on Neisseria gonorrhoeae growth and catalase activity /J Infect Dis. 1994. 170: 1209-1215.

266. Zhou X., Bent S.J., Schneider M.G., Davis C.C., Islam M.R., Forney L.J. Characterization of vaginal microbial communities in adult healthy women using cultivation-independent methods /Microbiology. 2004. 150: 2565-2573.

267. Zhou X., Brown C.J., Abdo Z., Davis C.C., Hansmann M.A., Joyce P., Foster J.A., Forney L.J. Differences in the composition of vaginal microbial communities found in healthy Caucasian and black women /ISME Journal. 2007. 1: 121-133.

268. Zhou X., Hansmann M.A., Davis C.C., Suzuki H„ Brown C.J., Schiitte U., Pierson J.D., Forney L.J. The vaginal bacterial communities of Japanese women resemble those of women in other racial groups /FEMS Immunol Med Microbiol. 2010. 58(2): 169-81.

269. Ya W., Reifer C., Miller L.E. Efficacy of vaginal probiotic capsules for recurrent bacterial vaginosis: a double-blind, randomized, placebo-controlled study /Am J Obstet Gynecol. 2010. 203(2): 120. el-e6.

Информация о работе

Черкасов, Сергей Викторович
доктора медицинских наук
Оренбург, 2011
ВАК 03.02.03

Диссертация

Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина (на модели женского репродуктивного тракта) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Ассоциативный симбиоз как биологическая основа колонизационной резистентности хозяина (на модели женского репродуктивного тракта) - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы