Характеристика изменений патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях

Красноперова, Юлия Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика изменений патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика изменений патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях"

На правах рукописи

КРАСНОПЕРОВА Юлия Юрьевна

ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗМЕНЕНИЙ ПАТОГЕННОГО ПОТЕНЦИАЛА МИКРООРГАНИЗМОВ-СИМБИОНТОВ В ПРОТОЗОЙНО-БАКТЕРИАЛЬНЫХ АССОЦИАЦИЯХ

03.00.07 - «Микробиология»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

О 3 СЕН 2033

Оренбург-2009

003476052

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор

ПОТАТУРКИНА-НЕСТЕРОВА Наталия Иосифовна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, заведующий ЩЕРБАКОВ Анатолий кафедрой микробиологии, вирусологии и Анисимович иммунологии ГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова», профессор

доктор медицинских наук, старший ПЛОТНИКОВ Олег Петрович научный сотрудник, зав. лабораторией коллекционных штаммов отдела Государственной коллекции патогенных бактерий ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб»

доктор медицинских наук, профессор, КАГАН Юда Давидович заведующий кафедрой инфекционных болезней ФППС ГОУ ВПО Оренбургской государственной медицинской академии

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»

Защита состоится « часов на заседании

диссертационного совета Д.208.066.03 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: 460000, г. Оренбург, ул. Советская, д.6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совет

д.м.н., профессор

Немцева Наталия Вячеславовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Микробное сообщество является первичным звеном любых биоценозов и экосистем (Звягинцев, Добровольская, Лысак, 1993). Подавляющее большинство микробных биоценозов представляют собой сложившиеся симбиотические ассоциации, в которых между микроорганизмами складываются сложные и неоднозначные связи (Нетрусов и др., 2004; Дяковецкая, Лапшина, Шулаева, Фёдоров, 2005).

Популяции микроорганизмов, вступая в сложные взаимоотношения -конкурентные или кооперативные, при заселении различных частей органов, тканей макроорганизма формируют специфический его «микросимбиоценоз» (Проворов, 2001; Бухарин и др., 2006).

Анализ направленности межмикробных взаимоотношений ассоциативных микросимбионтов позволяет прояснить патогенез широкого спектра заболеваний, правильно оценить происхождение тех или иных аномалий в структуре микросимбионтов, приводящих к изменению их типичных или проявлению новых биологических свойств (Бухарин, Усвяцов, Хуснутдинова, 2000, 2003, 2007; Миллер, 2000).

Изменения важных характеристик вирулентности участников микросимбиоценоза, наряду с их количественной оценкой, может существенно сказаться на течении заболеваний, осложнённых дисбиозом кишечника (Воробьев, Гинцбург, Бондаренко, 2000; Постникова и др. 2004; Багдасарян, 2007).

В последние годы появились данные о важной роли в формировании патобиоценозов кишечника, помимо бактерий и грибов, таких простейших как Entamoeba hystolylica, Giardia lamblia и Criptosporidium (Воробьев и др., 2001; Плотников, 2002; Крылов, 2004). Менее известен протозооз, обусловленный паразитированием преимущественно в толстой кишке простейших Blastocystis hominis (Guignard et al., 2000; Taamasri et al., 2000; Abe, Wu, Yoshikawa, 2003). Возбудитель бластоцистной инвазии является микроорганизмом, к усилению агрессии которого, с одной стороны, могут приводить факторы, снижающие

защитные силы макроорганизма, а с другой стороны - микроорганизмы, входящие в состав биоценоза.

Известно, что в природных биоценозах простейшие могут служить хозяевами для широкого круга патогенных и условно-патогенных бактерий (Домарадский, 1998; Литвин, 2003). Наибольший интерес среди микробов, вступающих в симбиотические связи с простейшими, привлекли микобактерии, псевдомонады, иерсинии, холерные вибрионы, сальмонеллы, эшерихии, франциселлы, кампилобактеры, листерии (Ермолаева, Романова, Тартаковский, 2005).

Работами В.И. Пушкаревой и соавт. (1989, 1990, 1996, 2003) показано, что бактерии, находясь в клетке простейших, избегают массовой гибели, а их хозяева - простейшие поддерживают их численность и вирулентность.

Проводимые исследования по характеристике ассоциативного симбиоза простейших с другими микроорганизмами ограничиваются изучением механизмов выживания и их взаимодействия вне макроорганизма, который также представляет собой среду обитания для огромного количества видов микробов (Несвижский, Воробьев, Белоносов, 1997; Шендеров, 1998, 1999; Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001). В связи с этим, вопрос о роли простейших в изменении численности и вирулентности представителей симбиоценозов макроорганизма остается открытым.

Раскрытие механизмов межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание ассоциативных симбиозов организма хозяина в норме и при патологических состояниях, открывает перспективы решения фундаментальных проблем микробиологии - выявления причинно-следственных связей формирования патогенных вариантов микросимбионтов.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось теоретическое обоснование и оптимизация подхода к микробиологическому мониторингу патогенного потенциала микросимбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Показать взаимосвязь между особенностями строения клеточной поверхности и вирулентностью микросимбионтов B.hominis.

2. Определить характер изменений микробиоценоза кишечника на фоне бластоцистной инвазии.

3. Дать оценку изменения вирулентности E.coli в рамках ассоциативного симбиоза с бластоцистами в условиях кишечного биотопа.

4. Провести анализ динамики численности популяций B.hominis и E.coli при совместном культивировании.

5. Исследовать взаимодействие вегетативных форм E.coli с цистами B.hominis при действии антибактериальных препаратов.

6. Выявить изменения встречаемости генетических детерминант факторов патогенности, обеспечивающих поддержание численности E.coli в ассоциации с B.hominis in vitro.

7. Дать комплексную оценку направленности изменений биологических свойств участников протозойно-бактериального симбиоценоза при взаимодействии до и после сокультивирования.

Новизна исследования. Показана взаимосвязь между структурными особенностями клеточной поверхности Blastocysüs hominis и их вирулентностью. Литическое действие на клетки B.hominis различной вирулентности оказывали ферменты, обладающие протеазной, хитиназной, глкжаназной, липазной и целлюлазной активностями. Отмечена закономерность изменения скорости лизиса при действии липазы на все три группы штаммов бластоцист - с усилением вирулентности замедляется скорость лизиса. Целлюлазы способны лизировать клетки только высоко- и умеренновирулентных B.hominis. Это может свидетельствовать в пользу того, что при укреплении клеточной оболочки целлюлозой усиливаются вирулентные свойства бластоцист, а клетки умеренно- и авирулентных вариантов B.hominis имеют области незащищенной мембраны вследствие частичного или полного отсутствия защитной целлюлозной оболочки.

В опытах in vivo установлена диссоциация эшерихий по показателю вирулентности. У штаммов E.coli, выделенных в консорциуме с

высоковирулентными бластоцистами значения показателя вирулентности (LDso/lg) были выше, чем с умеренновирулентными и авнрулентными.

Впервые исследована динамика численности популяций B.hominis и E.coli при совместном культивировании. Показано, что в результате межмикробного взаимодействия выявлено устойчивое совместное существование популяций эшерихий и бластоцист, с сохранением высокой численности микросимбионтов.

Показано взаимодействие вирулентных и авирулентных E.coli с цистами B.hominis при действии дестабилизирующих факторов, таких как антибактериальные препараты.

Впервые установлено, что в условиях микросимбиоценоза с B.hominis, происходит увеличение частоты встречаемости генетических детерминант факторов патогенности, обеспечивающих адгезию и токсинообразование среди выделенных фенотипических групп E.coli, а также селекция клонов с сочетаниями генов, не встречавшихся у штаммов, изученных до сокультивирования и в монокультурах.

Дана оценка изменения патогенного потенциала микросимбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях после совместной инкубации. Показано, что неферментирующие и гемолитические эшерихии в тандеме с высоко- и умеренновирулентными бластоцистами обоюдно усиливали вирулентность, напротив, кишечные палочки с нормальной ферментативной активностью угнетали активность факторов патогснности бластоцист. В сообществах E.coli с нормальной ферментативной активностью и авирулентных бластоцист отмечен индифферентный характер взаимодействия.

Практическая ценность работы. Полученные в работе данные расширяют и углубляют представления о характере межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание микросимбиоценозов кишечника, что позволит оптимизировать диагностику, профилактику и коррекцию риска формирования патомикробиоценозов.

№2239236), «Способ воспроизведения ишемии толстого кишечника на фоне бластоцистной инвазии» (патент РФ №2310239). Создан мзтод сокультивирования микроорганизмов в условиях бактериально-протозойных ассоциаций in vitro (заявка на получение патента РФ №2008147600). Данные методики могут быть использованы в практических лабораториях и научно-исследовательских учреждениях при диагностике и прогнозировании течения широкого спектра заболеваний, ассоциированных с дисбиотическими состояниями кишечника.

Результаты изучения взаимодействия вегетативных форм E.coli с цистами В.hominis при действии стрессорных факторов, а именно антибактериальных препаратов, возможно, использовать для оптимизации проведения химиотерапии патологий микробного генеза.

Внедрение в практику. По материалам диссертационной работы написаны монографии «Бластоцистная инвазия и дисбактериоз кишечника», «Экологические параметры микробиоты кишечника при протозойных инвазиях» «Простейшие Blastocysts hominis и их влияние на макроорганизм»; практические рекомендации: «Экологическая характеристика микробиоценоза кишечника», «Особенности микроэкологии кишечника больных псориазом», «Биологические свойства микробов-симбионтов в условиях протозойно-бактериальных ассоциаций макроорганизма», «Дисбиоз кишечника и методы его диагностики».

Основные положения и выводы диссертационной работы включены в лекционные курсы и практические занятия для студентов биологических и медицинских специальностей по темам: «Микробная экология», «Особенности этиопатогенеза эндогенных инфекций», «Инфекционный и постинфекционный иммунитет»; в практику клинической и бактериологической лабораторий ГУЗ Городской клинической больницы №1 г. Ульяновска при диагностике и оценке микробиоценоза кишечника, при определении чувствительности микробов к антибиотикам.

Положения, выносимые на защиту

1. Обоснован симбиотический подход к оценке динамики патогенного потенциала микросимбионтов в ассоциации E.coli-B.hominis, позволяющий

выявить некоторые условия селекции вирулентных эшерихий в кишечном биотопе.

2. Молекулярно-генетический анализ при изучении ассоциативных симбиотических взаимодействий способствует выявлению основных направлений взаимоадаптации микроорганизмов в изменяющихся условиях симбиоценоза.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: Российской научно-практической конференции "Актуальные вопросы педиатрии и детской хирургии" (Ульяновск, 2000); VIII съезде Итало-Российского общества по инфекционным болезням "Проблема инфекции в клинической медицине" (Санкт-Петербург, 2002); Юбилейной научной конференции, посвященной 80 - летию кафедры микробиологии Военной медицинской академии и 300 летию основания Санкт - Петербурга "Современная микробиология в клинической медицине и эпидемиологии (Санкт - Петербург, 2003); II Международной научно - практическая конференция. "Медицинская Экология" (Пенза, 2003); Международной конференции, посвященной 125-летию К.И. Скрябина и 60-летию основания Лаборатории гельминтологии АН СССР - Института паразитологии РАН «Основные достижения и перспективы развития паразитологии» (Москва, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» (Ульяновск, 2005); Falk Symposium № 142 (Birmengem, 2005); Международной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006); I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007); Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2007).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 45 работ, из них 12 статей в рецензируемых научных журналах; изданы 4 практических пособия и 3 монографии; получены 3 патента на изобретение.

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на страницах машинописи, содержит введение, 5 глав, заключение, выводы, практические рекомендации, указатель литературы, включающий в себя 102 отечественных и 391 иностранных источников. Иллюстрации представлены 35 таблицами, 57 рисунками.

Основные разделы работы выполнены по плану НИР Института медицины, экологии и физической культуры Ульяновского государственного университета «Биология простейших Blastocystis hominis и их влияние на макроорганизм» (№гос. регистрации 01.200.2211659).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.

Исследования микробного пейзажа кишечника проводили в период с 2002 по 2007 года на базе бактериологической лаборатории городской клинической больницы №1 г. Ульяновска (табл. 1).

Таблица 1

Количество штаммов E.coli, изолированных из протозойно-бактериальных

ассоциаций толстой кишки человека

Группы доминантных микросимбионтов E.coli Вирулентность ассоциантов- В.hominis, LD50/lg

Высокая 4,4±0,3-5,3±0,2 Умеренная 3,2±0,3-4,3±0,1 Отсутствие вирулентности Отсутствие B.hominis

Гемолитические 130 45 - -

Неферментирующие 69 43 36 -

С нормальной ферментативной активностью 29 32 33 134

Итого: 228 120 69 134

В работе использовали штаммы Е.соИ, выделенные из фекалий 307 пациентов в возрасте от 20 до 75 лет, находившихся на лечении в условиях

дневного гастроэнтерологического стационара Городской поликлиники № 5 г. Ульяновска.

Контрольную группу составили 150 практически здоровых лиц репрезентативных по полу и возрасту, из которых 134 (89,3 %) -неинфицированных данными простейшими.

При изучении микробиоценозов кишечника согласно Приказу № 535 от 22.04.85 МЗ РСФСР «Об унификации микробиологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях и лечебно-профилактических учреждениях», определяли как частоту высеваемости отдельных видов, так и их количественные показатели в пересчете на 1 г фекалий (Сорокин, Федорова, 1990; Крылов, Козлович, Решетнева, 1994).

В качестве контрольных также использовали эталонные штаммы E.coli, содержащие гены, детерминирующие синтез факторов патогенности (табл. 2).

Таблица 2

Эталонные штаммы E.coli

Ген Фактор патогенности Штамм E.coli Ген Фактор патогенности Штамм E.coli

рарС фимбрии Р 763/К, 853/63 fimA фимбрии 1 типа 763/К, 853/63

рарН фимбрии Р 763/К, 853/63 hlyB а-гемолизин 763/К,853/63

sfaG фимбрии S типа 763/К, 853/63 cnfl цитотоксический некротизирующий фактор-1 763/К, 853/63

sfaA S фимбрии типа 763/К, 853/63 stxl ншгаподобный токсин 1 типа 0157:117, Я-10, Я-23

eaeA интимин Н 10407 stx2 ншгаподобный токсин 2 типа 0157:117 Я-10, Я-23

ehx энтерогемолизин 0157:117 Я-] 0, Я-23 отрицательный контроль J-62

Молекулярно-генетические исследования с применением полимеразно-

цепной реакции (Маккреди, Чимера, 1999) проводили на базе клинико-

диагностической лаборатории Государственного учреждения здравоохранения Ульяновской областной клинической больницы №1 (ГУЗ УОКБ).

Для постановки полимеразно-цепной реакции выделение бактериальной ДНК проводили по методу Boom et al. (1988) с использованием гуанидинтиоцианата (GuSCN). Подбор праймеров и температуры отжига осуществляли при использовании пакета программ «Lasergene» (США). Праймеры синтезированы в НПФ «ДНК-технология» (Россия). Для получения достаточного количества копий искомого характеристического фрагмента ДНК амплификация включает 20-40 циклов. Регистрацию результатов ПЦР осуществляли путем электрофоретического разделения продуктов амплификации на окрашенном бромистым этидием агарозном геле (Маккреди, Чимера, 1999). Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей проводили с помощью компьютерной программы Vector NT1 Suite (США).

Определение факторов патогенности таких как: гемолитическая, липолитическая, ДНК-азная, протеолитическая, лецитоветилазная проводили с использованием общепринятых методик (Биргер, 1982).

Колициногенная активность изучалась методом отсроченного антагонизма. В качестве тест-культуры использовали музейный штамм E.coîi К-12 ГИСК №240367 (плотность 10 ед. по оптическому стандарту мутности ГИСК Л.А. Тарасевича).

Чувствительность бактерий определяли к следующим антимикробным препаратам: ампициллину, стрептомицину, цефазолину, гентамицину. Для выявления степени антибактериальной активности определяли минимальную подавляющую концентрацию химиопрепарата (Навашин, Чучалин, Белоусов, 1998).

Для получения аксеничных культур B.hominis использовали среду Suresh (Suresh, Ng, 1993), в анаэробных условиях.

Изучение действия гидролитических ферментов с известной субстратной специфичностью на клетки изолятов бластоцист проводили по методу Степной O.A. и соавт. (2003) на базе Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН, г.Пущино (ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН). В работе использовали следующие гомогенные, очищенные ферменты:

протеазу Lysobacter sp. XL 1(7Е/мг) (10), липазу панкреатическую (ЕС 3.1.1.74; Sigma; 250 Е/мг), пектиназу (ЕС 3.1.1.73), деллюлазу (ЕС 3.2.1.4), ß-глюкуронидазу (ЕС 3.1.6.2; Worthington biochemical corporation; 30 Е/мг, 5 Е/мг, 0,03 Е/мг соответственно), эндоглюканазу Aspergillus terreus 5 Е/ мг (ЕС 3.2.1.155; любезно предоставлена Рязановой Л.П. ИБФМ им Г.К. Скрябина РАН), хитиназу Serratia marcescens ((ЕС 3.2.1.14; Sigma; 0,01Е/мг).

Культивирование с целью изучения взаимного влияния микробов-симбионтов в протозойно-бактериальной ассоциации проводили с использованием разработанной питательной среды (приоритетная справка №2008114890 от 5.10.2008) с определением количества взаимодействующих микробов и индекса обилия (ИО) (Степаиских, 2000).

С целью изучения взаимодействия E.coli с цистами B.hominis на 21-е сутки совместного культивирования контрольные и опытные посевы подвергали действию антибактериальных препаратов ампициллина, стрептомицина, гентамицина и цефазолина в концентрации 60,6; 47,3; 39,2 и 10,4 мкг/мл, с последующим высевом для проведения качественной и количественной оценки микробов и их свойств.

Степень вирулентности микробов (LD50/lg) определяли внутрибрюшинной и кератоконъюнктивалыюй пробами с использованием белых мышей и морских свинок.

Полученные данные обработаны для медико-биологических работ критериями параметрической и непарамстрической статистики. Для параметров указывалась точность оценки. В работе использовался 95% и 99% доверительный интервал.

При сравнении двух связанных групп использовался парный одновыборочный t-критерий; при сравнении двух независимых групп применялся непарный двухвыборочный t-критерий Стыодента. Непараметрические (качественные) данные двух независимых групп сравнивались с помощью критерия хи-квадрат Пирсона, а также подвергались корреляционному анализу по методу Спирмена.

Статистическую обработку результатов исследований выполняли на персональном ЭВМ типа IBM «Pentium III», графическая обработка материалов

выполнена с помощью пакета прикладных программ Exel-2000. Для статистической обработки материала, применена компьютерная программа StatSoft Statistica 6.0. (Лакин, 1990; Зайцев, 2003).

Результаты исследования

Известно, что вирулентность микроорганизмов в значительной мерс определяется строением клеточной стенки (Бухарин и др., 2004). Ранее показано, что вирулентность микросимбионтов В.hominis значительно варьирует (Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю.Красноперова, Чебан, Ильина, 2000; Красиопсрова, Глебова, Лазарев, Курзин, 2007), тем не менее, не изученной остается взаимосвязь степени вирулентности бластоцист и особенностей структуры клеточной стенки возбудителя.

Основываясь на известных в литературе немногочисленных и фрагментарных данных относительно строения клеточной поверхности В.hominis мы предположили, что клетки простейших могут либо вовсе не иметь клеточных покровов, либо иметь покровы, включающие хитин (как например, у корненожек, солнечников, биченосцев и инфузорий), целлюлозу, пектин (сходство с растительной клеткой). В случае если клетки бластоцист не имеют клеточной оболочки, они должны быть чувствительными к действию липаз или протеаз. Можно также предположить участие в организации клеточных покровов полисахаридов, распространенных у животных и бактерий -гиалуроновых или тейхуроновых кислот (Наумова, Шашков, 1997), и полимеров, характерных для клеточных стенок грибов - глюкана, структурных белков (Калебина, Кулаев, 2001; Klis, 1994; Kapteyn, Van Den Ende, Klis, 1999).

Поэтому для проверки действия на клетки В. hominis были выбраны следующие ферменты: липаза, протеаза, пектиназа, целлюлаза, глюкуронидаза, глюканаза, хитиназа. В ходе эксперимента определяли количество жизнеспособных клеток бластоцист разной вирулентности после воздействия на них ферментов.

Результаты исследования показали различия в гидролитической активности и скорости проявления положительных эффектов изучаемых ферментов в зависимости от выраженности вирулентных свойств бластоцист. Литическое действие на клетки авирулентных, умеренно- и высоковирулентных

В.hominis оказывали ферменты, обладающие протеазной (р=0,95; р=0,91; р=0,86 соответственно), хитиназной (р=0,83; р=0,72; р=0,72 соответственно), липазной (р=0,9; р=0,89; р=0,88 соответственно) и глюканазной активностями (р=0,79; р=0,73; р=0,71 соответственно). Под действием данных ферментов происходило значительное снижение популяционной численности бластоцист, уменьшение размеров клеток В.hominis с 15 мкм до 7 мкм, сжатие и затемнение цитоплазмы. Нами показаны отличия в скорости лизиса при действии липазы и целлюлазы на все три группы штаммов бластоцист. С увеличением вирулентности простейших замедлялась скорость проявления положительного действия при действии липазы от 1 до 4 часов, при воздействии целлюлазы отмечался прямо противоположный эффект (рис. 1).

время регистрации

лизиса, ч , о

2 О

авирулентные умеренновирулентные высоковирулентные

вирулентность бластоцист, LD50/lg

□ действие липазы 0 действие целлюлазы

Рисунок 1 - Скорость проявления положительного литического действия на клетки бластоцист липазы и целлюлазы Это может свидетельствовать в пользу того, что вирулентность микроорганизма усиливается вследствие укрепления клеточной оболочки бластоцист целлюлозой и другими полимерами, что придает микробу конкурентные преимущества в условиях кишечного биотона и может служить лигандами при взаимодействии с пили бактерий. Клетки умеренно- и авирулентных вариантов В.hominis имеют области незащищенной липидсодержащей мембраны вследствие частичного или полного отсутствия защитной целлюлозной оболочки.

Исследованиями, проведенными нами ранее (2003, 2004), были выявлены микроэкологические нарушения микробного сообщества толстой кишки при бластоцистной инвазии. Тем не менее, остается не изученной взаимосвязь устойчивости популяций микросимбиоценоза кишечника в сопоставлении с вирулентностью бластоцист

Данные, подтвержденные линейным регрессионным анализом, показали, при увеличении вирулентности изолированных бластоцист отмечается снижение высеваемости бактерий рода Bifidobacterium и Lactobacillus со значений lg 9,3±0,4 и 8,6±0,3 КОЕ/г до lg 6,1±0,3, 4,3±0,3 КОЕ/г соответственно (р<0,001). Коэффициенты корреляции составили г=-0,9 и г=-0,8 соответственно.

Противоположную направленность имела зависимость, демонстрирующая обсемененность кишечника микробами родов Etiterococcus, Clostridium, Staphylococcus и Candida. При изменении вирулентности паразитов от LD50/lg О до 5,3±0,2 статистически достоверно изменялась обсемененность кишечника микробами родов Enterococcus, Clostridium, Staphylococcus и Candida со значений lg 3,1±0,3, 6,3±0,2, 3,9±0,4 и 2,5±0,3 КОЕ/г до lg 8,1±0,3, 9,2±0,1, 6,2±0,3 и 5,7±0,2 КОЕ/г соответственно (р<0,001). Коэффициенты корреляции составили г-0,7. г=0,9, г=0,8 и г=0,8 соответственно.

Полученные результаты по бактериям родов Proteus и Klebsiella имели сходную направленность, но носили менее выраженный характер. Так, при усилении вирулентности бластоцист статистически достоверно увеличивалось количество Proteus и Klebsiella с lg 3,1±0,3, 2,8±0,4 КОЕ/г до lg 5,1±0,1, 5,2±0,2 КОЕ/г соответственно (р<0,05). Коэффициенты корреляции составили г=0,5 и г=0,7 соответственно.

Исследования также выявили, что вегетирование в кишечном биотопе вирулентных Blastocystis hominis, сопровождалось не только резким уменьшением общего содержания микросимбионтов Escherichia coli с нормальной ферментативной активностью, но и появлением большого количества штаммов, обладающих гемолитической и лактозонегативной активностями.

Изменение численности различных фенотипических групп бактерий E.coli под влиянием бластоцист проходило в следующих направлениях. Количество

лактозонегативных и гемолитических форм эшерихий увеличилось с 0 до ^ 3,8±0,3, 5,4±0Д КОЕ/г соответственно (р<0,001). Коэффициент корреляции составил г=0,8 и г=0,9 соответственно. Угол наклона линии тренда демонстрирует обратную связь изменения численности бактерий с нормальной ферментативной активностью от вирулентности простейших, где г=-0,9 (рис. 2).

КОЕ/г

9,0 - ......................................

g 0___ у = 0,9852* + 0,3696

R2= 0.8887

0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0

вирулентность простейших бластоцист LX>50(lg)

• Уровень содержания гемолитических E.coli а Уровень содержания лактозонегативных E.coli

Уровень содержания Ii.coli с нормальной ферментативной активностью

Рисунок 2 - Характеристика связи вирулентности B.hominis с количеством

E.coli

Полученные результаты свидетельствуют о наличии прямой взаимосвязи глубины качественных и количественных изменений внутри микробных ассоциаций кишечника от вирулентности изолятов B.hominis, в частности вегетирование умеренно- и высоковирулентных бластоцист сопровождается увеличением содержания E.coli с широким набором факторов патогенности.

Изменение биологических свойств условно-патогенных энтеробактерии, в частности усиление вирулентности, рассматривают в качестве одной из причин изменения этиологической структуры патологических состояний инфекционного генеза (Бондаренко, 2001). Тем не менее, исследования гетерогенности эшерихий в протозойно-бактериальных ассоциациях толстой

кишки по показателю вирулентности, с последующим количественным выражением, не проводилось.

Исследования изменения вирулентности эшерихий, как механизма адаптации к ассоциативному симбиотическому взаимодействию с простейшими В.hominis, выявили увеличение данного показателя у штаммов в сообществе с высоковирулентными бластоцистами по сравнению с умеренновирулентными, который составил LD50/lg 3,7 и 3,1 ед соответственно (рис. 3).

контроль

E.coli с нормальной ферментативной активностью неферментиругащие E.coli гемолитические E.coli

0,5

1,5

2,5

3 3,5 4

LD50/lg,e4

В ассоциации с авирулентными бластоцистами D ассоциации с умеренновирулентными бластоцистами ■ ассоциации с высоковирулентными бластоцистами

Рисунок 3 - Показатель вирулентности микросимбионтов E.coli в протозойно-бактериалышх ассоциациях толстой кишки

Показатель LD50/lg для неферментирующих изолятов E.coli, выделенных совместно с высоковирулентными бластоцистами составил 2,8, с умеренновирулентными - 1,9, с авирулентными - 1,1 ед.

Выявленная неоднородность по указанному признаку является отражением направленности межмикробных взаимодействий E.coli с В.hominis в условиях ассоциативного симбиоценоза толстой кишки. Аспекты взаимодействия бактерий и простейших требуют дальнейшего изучения на генетическом уровне.

В последние десятилетия простейшие рассматриваются как возможные хозяева возбудителей ряда инфекционных заболеваний (Коренберг, 2005). Все

имеющиеся данные описывают изучение взаимодействия бактерий и простейших - обитателей почв и водоемов. Известно, что организм человека также представляет собой экологическую нишу для разнообразных микроорганизмов, заселяющих его биотопы (Нетрусов и др., 2004). Однако до сих пор, не изученными остаются формы и аспекты отношений, ск ладывающихся между простейшими В.hominis и другими микросимбионтами как внутри макроорганизма, так и в экспериментах in vitro.

В связи с этим дальнейшим этапом нашей работы явилось проведение совместного культивирования различных феиотипических групп бактерий E.coli и простейших В.hominis.

Показано, что при сокультивироваяии гемолитических форм эшерихий с высоко- (рис. 4) и умеренновирулентными (рис. 5) бластоцистами через 24 часа взаимодействия численность бактерий достигла максимальных значений.

количество микробов, КОЕ/мл

l,00E+09i

1ДЮЕ+08-

1,00Е+07-

1.00Е+06-

1.00Е+05-

U00E+04-

1,ООЕ+О3-

U00E+02-

1.00Е+01-

1.00Е+00

1,00Е-01

¡|- динамика бактерий при

сокультивировании ]] - динамика бластоцист при сокультивировании

щ - динамика бактерий в монокультурах

1 - динамика бластоцист в монокультурах

К 1 и £ U й о § 1 Е о s ■ а £ о р >> а

К 0) (U CD и

СП ЧО <ч чч (N

время эксперимента

Рисунок 4 - Динамика численности гемолитических E.coli в рамках ассоциативного симбиоза с высоковирулентными В.hominis при совместном

культивировании

количество микробов, КОЕ/мл

1,00Е+08-|

1,00Е+07

1.00Е-Ю6

1,00Е+05Н

1,00Е+04-

1,00Е+03-

1,00Е+02-

1,00Е+01

1,0ОЕ+00

1,00Е-01

□

- динамика бактерий при я сокультивиоовании g S • динамика бластоцист jJ 5"

я S

ич

tu с

о се У

& О

К '1 Я ' К § К

£ Н ^ £ Р.

о о о о

и и и и

мэ es V-) I—t

< '—1 <N

время эксперимента

при сокультивировании | - динамика бактерий в монокультурах динамика бластоцист в монокультурах

Рисунок 5 - Динамика численности гемолитических Е.соЫ в рамках ассоциативного симбиоза с умеренновирулентными ВМоттк при совместном

культивировании

В эти сроки численность бактериальных популяций составляла 1,8х108±1,4 и 1,9х107±1,1 КОЕ/мл соответственно (в контрольных посевах количества бактерий находились на уровне 1,5х107±2,4 и 6,7х107±2,4, р>0,05). Динамика численности высоко- и умеренновирулентных бластоцист также носила положительный характер.

В последующее время наблюдений плотность популяций E.coli неуклонно снижалась, что, по-видимому, связано с активным антагонистическим действием высоко- и умеренновирулентных простейших В.hominis, и достигла минимума на 12-е и 15-е сутки соответственно. При ассоциативном симбиотическом взаимодействии с высоковирулентными бластоцистами уровень гемолитических эшерихий в это время составил 1,3х 103±2,2 КОЕ/мл, с умеренновирулентными - 1,5х102±1,4 КОЕ/мл (в монокультурах данные

показатели равнялись 1,9х102±1,6 и 6,2х103±1,6 КОЕ/мл соответственно, р>0,05).

Напротив, именно в эти сроки отмечена максимальная численность высоко- и умеренновирулентных простейших В.hominis, которая соответствовала 4,8х10б±1,9 и 9,3х105±1,5 КОЕ/мл соответственно (в зоне контрольных высевов данные показатели составили 4,2x10^2,4 и 4,2х104±0,3 КОЕ/мл соответственно, р<0,05). КОЕ/мл. К 21 суткам численность E.coli возросла до значений 2,2x104±2,3 при взаимодействии с высоковирулентными B.hominis и до З,9х103±1,5 КОЕ/мл при взаимодействии с умеренновирулентными бластоцистами (в контроле плотность популяции E.coli составляла 8,4±0,2 и 1,8±0,1 КОЕ/мл соответственно, р<0,001). Количество высоко- и умеренновирулентных клеток бластоцист напротив снизилось и составило 6,7х103±1,3 и 1,7х103±0,9 КОЕ/мл соответственно (в контроле плотность популяции бластоцист составила 4,2х104±1,5 и 3,2х104±1,5 КОЕ/мл соответственно, р<0,001). Повышение численности гемолитических кишечных палочек, по-видимому, связано с активизацией защитных механизмов, направленных на нейтрализацию антагонистической активности бластоцист. Это проявлялось, во-первых, в неуклонном уменьшении числа бактерий, чувствительных к проявлениям антагонизма, во-вторых, стимулированием усиления вирулентности бактерий, приводящей к деструкции простейших.

При ассоциативных взаимоотношениях лактозонегативных эшерихий с высоко-, умеренно- и авирулентными бластоцистами все популяции продолжали существовать, сохраняя определенные количественные соотношения на протяжении всего опыта (21 сутки). Периоды увеличения численности эшерихий одновременно сопровождались снижением плотности популяции B.hominis и наоборот. Это позволяет предположить, что при антагонистических взаимодействиях внутри микросимбиоценоза активизировались механизмы взаимоадаптации. Появление более вирулентных и устойчивых клонов бактерий стимулировало формирование и более вирулентных простейших.

При анализе динамики авирулентных E.coli с высоко-, умеренно- и авирулснтными В.hominis, можно сделать вывод о том, что отсутствие вирулентности приводит к быстрому уничтожению не устойчивых к антагонистической активности эшерихий в ассоциациях с высоко- и умеренновирулентными бластоцистами - на 6-е и 15-е сутки соответственно. При сокультивировании авирулентных простейших бластоцист и E.coli с нормальной ферментативной активностью отмечен обоюдосдерживающий рост обеих культур до конца эксперимента (21-е сутки) - с доминированием популяции эшерихий (2,7х103±2,7 против 1,8х102±0,8 КОЕ/мл).

Способность многих патогенных и условно-патогенных бактерий сохранять свою жизнеспособность внутри свободноживущих простейших доказана многими авторами (Литвин, 2003; Пушкарева, Величко, Каминская, 2005; Пушкарева, 2006). Конкретные экологические факторы и механизмы устойчивого сохранения обитателей кишечного биотопа, обладающих потенциальной патогенностью в условиях, когда их активная жизнедеятельность и размножение затруднены или невозможны, практически не изучены.

С целью создания условий, неблагоприятных для существования кишечных палочек адекватных антибактериальной терапии, во все пробирки с протозойно-бактериальными ассоциациями и монокультурами добавляли антибактериальные препараты ампициллин, стрептомицин, гентамицин и цефазолин в концентрациях 60,6; 47,3; 39,2 и 10,4 мкг/мл соответственно.

Через 18 часов воздействия антибиотиков на посевы культур, кишечные палочки бактериологически не выявлялись (в контрольных посевах вегетативных форм также не было обнаружено). Количество бластоцист при этом существенно не менялось.

При переносе образцов с цистами из контрольных и опытных пробирок, на модифицированную среду Suresh (приоритетная справка №№¡2008114890 от 5.10.2008) уже через 6 часов был зарегистрирован рост как вирулентных, гак и авирулентных бактерий E.coli в количестве от 0,5х102±0,9 до 0,9х102±1,3

КОЕ/см2 и вегетативных форм простейших на уровне 0Дх102±0,4 - 1,3х102±2,5 КОЕ/см2.

Исследование материала из контрольных посевов не выявило роста бактерий кишечной палочки ни в одном случае. Полученные результаты демонстрируют взаимодействие не только вирулентных, но и авирулентных E.coli с цистами простейших В.hominis, способствующее длительному выживанию бактерий при действии стрессорных факторов, а именно антибактериальных препаратов. Данные результаты могут способствовать пониманию процессов передачи инфекций, а также развития рецидивных состояний патологий микробного генеза после проведения активной химиотерапии.

Усиление вирулентности среди гетерогенных популяций потенциально патогенных энтеробактерий в настоящее время является важньм объектом исследований различных отраслей биологической и медицинской наук. Наиболее существенными для изменения патогенности условно-патогенных энтеробактерий, ввиду «скачкообразного» характера и кардинальности происходящих превращений микроорганизма, рассматривают генетические рекомбинации, которые определяют геномную пластичность микробов, реализуемую через несколько конкретных механизмов связанных, в частности с «островами» и «островками» патогенности (Brunder, Karch, 2000).

Используя набор праймеров, амплифицирующих фрагменты генов рарС, рарН, sfaA, sfaG, fimA, stxl, stx2, eaeA, cnf-1 и hlyB и ehx было протестировано 417 фенотипически различных штаммов E.coli, выделенных при ассоциативных симбиотических взаимодействиях с В.hominis различной вирулентности, а также после их совместного культивирования и 134 штамма эшерихий выделенных из консорциумов, где бластоцисты не являлись участниками микробного сообщества.

Тестирование микросимбионтов E.coli, выделенных из ассоциации с авирулентными бластоцистами, показали, что чаще всего, независимо от периода исследования и изучаемой фенотипической группы бактерий, искомые ампликоны выявлялись при использовании праймеров к рарС, рарН и sfaA

генам. Частота встречаемости данных апмликонов у авирулентных кишечных палочек составила 33,3, 12,1 и 12,1 % соответственно (в монокультурах и до сокультивирования данные показатели составили - 6,1, 0, 0 % и 12,1, 6,1, 6,1 % соответственно, р<0,05). В данной фенотипической группе не были выявлены ампликоны, специфичные б Гай и йгаА генам.

В группе лактозонегативных эшерихий частота встречаемости генетических детерминант фимбрий Р и 8 типа была выше по сравнению с нормальными эшерихиями. Так, фрагменты рарС, рарН и вГаА генов после 24 часов совместного культивирования тестировались с частотой 25,0, 16,7, 16,7 % соответственно. Кроме того положительные результаты были получены с парами праймеров, амплифицирующих фрагменты генов эГаО и АшА с частотой 2,8 и 8,3 % соответственно. По истечению 21-х суток образование искомых ампликонов специфичных рарС гену составило 38,9 %, рарН - 30,5 %, БГаА - 30,5 %, эГаО - 8,3 %, йтА - 13,9 %, что соответствовало появлению более вирулентных клонов и увеличению численности нсферментирующих бактерий. До сокультивирования распространенность изучаемых нуклеотидных последовательностей была следующей: рарС - 13,9 %, рарН - 5,6 %, яГаА - 5,6 %, вГаС - 0 %, йшА - 8,3 % (в монокультурах 5,6,0, 0, 0, 0 соответственно, р<0,001).

Далее была изучена частота встречаемости нуклеотидных последовательностей генов, контролирующих синтез фимбрий Р, Б и 1 типа у микросимбионтов Е.соИ, выделенных из ассоциации с умеренновирулентными бластоцистами. В общем пуле исследуемых штаммов эшерихий с нормальной ферментативной активностью, отмечено увеличение частоты образования искомых ампликонов, специфичных изучаемым генам - через 24 часа совместного культивирования, что соответствовало увеличению численности популяции бактерий, вследствие усиления их защитных механизмов от антагонистической активности бластоцист. В группах лактозонегативных и гемолитических Е.соИ также выявлено увеличение частоты встречаемости генетических детерминант фимбрий Р, Б и 1 типа, по сравнению с

исследованиями штаммов до сокультивирования и в монокультурах, на 15-е и 21-е сутки соответственно (р<0,001), как усиление механизмов защиты.

Далее была проведена оценка частоты образования искомых ампликонов у микросимбионтов E.coli, выделенных из ассоциации с высоковирулентными бластоцистами. Результаты тестирования штаммов эшерихий с нормальной ферментативной активностью показали достоверно более широкую распространенность нуклеотидных последовательностей генов рарС, papll, sfaA, sfaG, fimA через 24-е часа проведения эксперимента по сравнению данными, полученными до сокультивирования и в монокультурах (р<0,001).

Исследование неферментирующих штаммов кишечных палочек, показало, что достоверно чаще других после сокультивирования тестировались генетические детерминанты, обеспечивающие синтез фимбрий Р и S типа (рарС -78,3, рарН - 42,0, sfaA - 42,0 % , р<0,001). До совместного культивирования и в монокультурах показатели встречаемости всех пар праймеров были значительно ниже. Идентичная тенденция изменений распространенности изучаемых генетических детерминант отмечена и в популяции гемолитических эшерихий. Следует отметить, что показатели изменений были значительно выраженнее.

В общем пуле контрольных штаммов положительные сигналы были получены только с фрагментами гена рарС - у 9 культур (6,9 %).

Проведенные тестирования показали, что после сокультивирования бактерий с вирулентными бластоцистами чаще всего искомые ампликоны выявлялись с использованием праймеров к рарС, рарН и sfaA генам. С наименьшей частотой обнаруживались фрагменты sfaG и fimA генов. Следует также отметить, что возрастание количества положительных сигналов со всеми изучаемыми фрагментами генов совпадало с периодами увеличения плотности популяций всех фенотипических групп бактерий E.coli и появлением в среде разрушенных клеток В.hominis.

Из 417 протестированных штаммов с праймерами к еаеА гену, положительный сигнал был получен только с 82 культурами, что составляет 19,7 % (табл. 3).

Таблица 3

Частота встречаемости нуклеотидных последовательностей саеА гена в различных фенотипических группах бактерий кишечной палочки__

Фототипические группы Е.соИ Период изучения Частота встречаемости фрагмента еаеА гена

Абс. %

в ассоциации с авирулентными бластоцистами

с нормальной ферментативной активностью (п=33) до сокульт-ия 1 3,0

после 3-х суток сокульт-ия 1 3.0

монокультуры 0 0

лаетозонегативные (п=36) до сокульт-ия 1 2,8

после 3-х суток сокульт-ия 2 5,6**

монокультуры 0 0

в ассоциации с умеренновирулентными бластоцистами

с нормальной ферментативной активностью (п=32) до сокульт-ия 2 6,2

после 21-х суток сокульт-ия 4 12,5**

монокультуры 0 0

лактозонегативные (п=43) до сокульт-ия 4 9.3

после 15-ти суток сокульт-ия И 25,6**

монокультуры 0 0

гемолитические (п=45) до сокульт-ия 7 15,6

после 21 -х суток сокульт-ия 9 20,0*

монокультуры 0 0

в ассоциации с высоковирулентными бластоцистами

с нормальной ферментативной активностью (п=29) до сокульт-ия 1 3,4

после 24 часов сокульт-ия 5 17,2**

после 21 -х суток сокульт-ия 7 24,1*

монокультуры 0 0

лактозонегативные (п=69) до сокульт-ия 8 11,6

после 15-ти суток сокульт-ия 17 24,6**

монокультуры 0 0

гемолитические (п=130) до сокульт-ия 23 17,7

после 21 -х суток сокульт-ия 31 23,8*

монокультуры 0 0

Примечание: * - Р<0,05; ** - Р<0,001.

Распространенность нуклеотидной последовательности еаеА гена в различных фенотипических группах бактерий кишечной палочки, как правило, возрастала после совместного культивирования с В.hominis в те же сроки, что и при обнаружении генетических детерминант фимбрий Р, S и 1 типа.

Отмечен так же статистически достоверный рост встречаемости искомого ампликона при увеличении вирулентности микросимбионтов бластоцист (р<0,001). В общем пуле контрольных штаммов положительные сигналы были получены у 2 культур (1,5 %).

Не вызывает сомнения, что в патогенезе любого заболевания одна из важных ролей принадлежит факторам патогенности, оказывающим прямое и косвенное токсическое воздействие. Это связано с высокой биологической активностью токсинов и их способностью вызывать функциональные и структурные повреждения клетки-хозяина. В связи с этим была поставлена задача - изучить распространенность нуклеотидных последовательностей генов токсинообразования: цитотоксического некротизирующего фактора 1 типа (cnf-1), энтерогемолизина (ehx), а-гемолизина (hlyB), шигаподобных токсинов 1 и 2 типов (stxl и stx2).

Используя праймеры, амплифицирующие нуклеотидные последовательности cnfl гена, были получены ампликоны размером 406 пн. В исследуемых группах отмечена зависимость роста числа положительных сигналов с праймерами, специфичными к cnfl гену от вирулентности ассоциантов B.hominis (г=0,87), как до сокультивирования, гак и после (р<0,001). По нашему мнению, это свидетельствует о резкой мобилизации защитных механизмов, проявляющихся в увеличении числа особей, содержащих в своем генотипе фрагменты cnfl гена и его фенотипической экспрессии.

С целью подтверждения полученных результатов мы также изучили распространенность нуклеотидных последовательностей гена, детерминирующего выработку энтерогемолизина (ehx). Наши исследования выявили, что частота встречаемости фрагментов ehx гена во всех изучаемых фенотипических группах возрастала после совместного культивирования бактерий E.coli с простейшими B.hominis, однако распространенность нуклеотидных последовательностей была в целом ниже, по сравнению с

таковой cnfl гена. Так, среди неферментирующих кишечных палочек в консорциуме с авирулентными бластоцистами данный показатель увеличился в 2 раза; нормальных, неферментирующих и гемолитических эшерихий в ассоциации с умеренновирулеитными бдастоцистами - в 1,3, 1,4, 1,5, раза соответственно; нормальных, неферментирующих и гемолитических эшерихий в ассоциации с высоковирулентными бластоцистами - в 1,2, 1,4, 1,6 раза соответственно. В группе контрольных штаммов данный показатель не превышал 0,7 %.

Далее используя праймеры, амплифицирующие нуклеотидные последовательности hlyB гена, контролирующего синтез ct-гемолизина, были получены ампликоны размером 542 пн, при тестировании штаммов эшерихий различных фенотипических групп. Показано, что максимальные значения встречаемости фрагментов данного гена выявлены в группах гемолитических эшерихий в ассоциации с умеренно- и высоковирулентными простейшими бластоцистами, как до так и после совместного культивирования. Значения распространенности специфичных данному гену ампликонов составили 33,3 и 34,6 % - до сокультивирования и 44,4 и 52,3 % - после. Среди штаммов других фенотипических групп E.coli не выявлено изменений данного показателя (в контроле-1,5 %).

Используя праймеры, амплифицирующие нуклеотидные последовательности stxl гена, были получены ампликоны, частота встречаемости которых варьировала в различных фенотипических группах эшерихий. В группе бактерий с нормальной ферментативной активностью и лактозонегативных в ассоциации с авирулентными простейшими В.hominis распределение фрагментов изучаемого гена оказалось равно 0 % как до, так и после совместной инкубации. В общем пуле эшерихий с нормальной ферментативной активностью при взаимодействии с высоко- и умеренновирулеитными бластоцистами отмечено статистически достоверное увеличение встречаемости фрагмента stxl гена с 6,9 до 10,3 % и с 3,2 до 9,4 % соответственно, (р<0,05). Среди неферментирующих E.coli в консорциуме с умеренновирулеитными бластоцистами отмечено статистически достоверное увеличение частоты обнаружения нуклеотидных последовательностей stxl гена

после сокультивирования с 4,6 % до 11,6 % соответственно (р<0,05). В группе неферментирующих эшерихий в консорциуме с высоковирулентными бластоцистами отмечен также статистически достоверный рост частоты обнаружения искомых ампликонов после сокультивирования с 7,2 % до 13,0 % соответственно (р<0,001). Среди гемолитических штаммов кишечных палочек в консорциуме с умеренно- и высоковирулентными В.hominis увеличение данного показателя не имело достоверного характера, (р>0,05). В общем пуле контрольных штаммов данный показатель не превышал 0,7 % (1 культура).

В группе бактерий с нормальной ферментативной активностью и лактозонегативных в ассоциации с авирулентными простейшими B.hominis распределение фрагментов stx2 гена также оказалось равно 0 % как до, так и после совместной инкубации (р>0,05). В общем пуле эшерихий с нормальной ферментативной активностью при взаимодействии с высоко- и умеренновирулентными бластоцистами отмечено статистически достоверное увеличение встречаемости фрагмента stx2 гена с 6,9 до 10,3 % и с 3,2 до 6,2 % соответственно, (р<0,05).Среди неферментирующих E.coli в консорциуме с умеренновирулентными бластоцистами отмечено статистически достоверное увеличение частоты обнаружения нуклеотидных последовательностей stx2 гена после совместного культивирования с 4,6 % до 9,3 % соответственно (р<0,05). В группе неферментирующих эшерихий в консорциуме с высоковирулентными бластоцистами отмечен также статистически достоверный рост частоты обнаружения искомых ампликонов после сокультивирования 7,2 % до 11,6 % соответственно (р<0,05). Среди гемолитических штаммов кишечных палочек в консорциуме с умеренно- и высоковирулентными B.hominis увеличение данного показателя не имело достоверного характера, (р>0,05). В группе контрольных штаммов данный показатель не превышал 0,7 % (1 культура).

Анализ полученных результатов показал, что в общем пуле штаммов эшерихий с нормальной ферментативной активностью после проведения совместного культивирования с авирулентными, умеренно- и высоковирулентными B.hominis, увеличилась частота выявления изучаемых нуклеотидных последовательностей в 0,8±0,06, 1,2±0,6 и 2,1±0,7 раза соответственно, в группе неферментирующих E.coli в 1,5±0,5, 2,3±0,4 и 2,7±0,2

раза соответственно. Количество встречаемости фрагментов генов патогенности гемолитических E.coli при взаимодействии in vitro с умеренно- и высоковирулентными В.hominis возросло в 2,4±0,3 и 2,9±0,4 раза соответственно.

Полученные данных при изучении генетических детерминант факторов патогенности E.coli, при ассоциативных симбиотических взаимодействиях с бластоцистами, демонстрируют статистически достоверное увеличение встречаемости изучаемых генов, индуцированное усилением вирулентности симбионтов В.hominis.

Как показано на рисунке 6 статистически достоверными при формировании генетических комбинаций в геноме микросимбионтов E.coli во всех протозойно-бактериальных ассоциациях до проведения сокультивирования являлись показатели совместного обнаружения фрагментов рарС и hlyB генов (р=0,00071).

Комбинации генов

□ До сокуяьтвирования ¡0 После

Рисунок 6 - Изменение встречаемости комбинаций генов патогенности E.coli в результате ассоциативных взаимоотношений с В.hominis in vitro

После взаимодействия in vitro частота совместного обнаружения данных генетических комбинаций сократилась, в то же время выявлено большое количество особей с комбинациями генов, не встречавшихся у исходных штаммов и в монокультурах. Так, высокая частота встречаемости отмечена для комбинаций генов рарС, рарН, sfaA и hlyB и рарС, fimA и ehx. Это свидетельствует о механизмах формирования вирулентных вариантов и адаптации E.coli к изменившимся условиям среды.

Литературные данные и результаты собственных исследований показывают высокую частоту встречаемости простейших В.hominis как среди людей, так и среди животных (Larrosa-Haro, Ruiz-Perez, 2002; Wang, Li, Wang, 2002). При формировании патобиоценозов толстой кишки, происходит снижение популяционного уровня авирулентных форм Escherichia coli, обладающих высокой антагонистической активностью, создавая условия для избыточной колонизации лактозонегативными, и обладающими гемолитической активностью штаммами, размножение которых в нормальных условиях подавлено конкуренцией активных симбионтов (Леванова, Алешкин, Воробьев, Леванова, Бондаренко 2002). Тем не менее, не изученными остаются изменения биологических свойств бактерий кишечной палочки в ходе межмикробных взаимодействий, в частности в протозойно-бактериальных ассоциациях.

В связи с этим следующим этапом нашего исследования явилось изучение направленности изменений биологических свойств, таких как: сахаролитическая, протеолитическая, гемолитическая, колициногенная и антибиотикорезистентность бактерий E.coli, а также гемолитическая, ДНК-азная, протеолитическая, лецитоветилазная и липолитическая ферментативная активности Blastocystis hominis до и после совместного культивирования.

Проведя статистический анализ полученных данных, было выявлено, что в результате совместного культивирования вирулентных бластоцист с вирулентными эшерихиями отмечено статистически достоверное усиление биологической активности взаимодействующих микросимбионтов, а именно гемолитической протеолитической колициногенной активностей и антибиотикорезистентности со стороны бактерий (р=0,00047), также гемолитической, ДНК-азной, лецитоветилазной, липолитической активностей

со стороны простейших (р=0,0006). Напротив, после сокультивирования авирулентных эшерихий с вирулентными бластоцистами выявлено статистически достоверное угнетение активности изучаемых ферментов как среди Е.соП (р=0,00046) так и среди В.котЫя (р=0,00653). Все проведенные исследования демонстрируют нестабильность ассоциативных микросимбиоценозов, участниками которых являются гемолитические и неферментирующие бактерии кишечной палочки а также высоко- и умеренновирулентные простейшие бластоцисты. Высокий уровень ассоциативных симбиотических взаимодействий, изменяющих выраженность факторов патогенности (усиливая или подавляя их), свидетельствует об активных процессах взаимоадаптации и селекции биоваров с различным уровнем вирулентности.

Таблица 4

Изменение биологических свойств микроорганизмов в

протозойно-бактериальных ассоциациях после взаимодействия in vitro, %

Ассоциации вирулентных Ассоциации авирулентных Ассоциации авирулентных

Е.соЦ н вирулентных B.hominis E.coli и вирулентных. '.hominis E.coli и авирулентных B.hominis

Ферментативная активность Усиление Ослабление Индифф-ое влияние Усиление Ослабление Индифф-ое влияние Усиление Ослабление Индифф-ое влияние

Гемолитическая 97,7±1,7 1,1±0,3 1ДЮ,3 5,1±0,8 93,5±1,9 1,4±0,4 0,9±0,04 1,4±0,5 97,7±1,6

Колициногенная 97,1±1,1 0,6±0,02 2,3±0,8 1,2±0,3 96,1±2,1 2,7±0,5 3,1±0,5 ЗД±0,7 И,7±1,4

"о Протсолнтическая 93,7±1Д 1,1±0,5 5Д±0,6 0,6±0,03 94,Ы,7 4,8±0,5 4,(Ш),5 6,4±0,9 89,fetl,5

hj Сахаролнтичсская 2,8±0,6 96,6±1,9 0,6±0,03 11,1±1,6 87,5±1,5 1,4±0,2 12,9±1,2 1,8±0,6 85,3±1,5

Антибиспихорсзисг-сгь 63,4±1,6 5,1 ±0,6 31,5*1,8 5,5±0,7 89,3±1,8 5,2±1,4 3,4±0,8 4,2±1,3 92,4±1,6

Р Р-0,00047 Р=0,00046 Р-0,0001

Гемолитическая 75,0±1,9 3,6±0,6 21,4±1,1 7,1±0,8 81,7±1,3 11 Д±0,9 3,4±0,6 3,5±0,4 93,1±1,8

с Лецитоветилазная 58,9±1,4 2,4±0,4 38,7±1,7 9,4±1,1 67,4±1Д 23,2±1,4 5,7±0,2 6,8±0,7 87,5±1,4

S о ДНК-азная 81,4±1,6 5,6±0,7 13,0±U 7,1±1,1 92,5±1,7 0,4±0,01 8,0±0,8 7,3±0,9 84,7±1,1

ai Липолнгическая 96,9±1,б 2,4±0,6 0,7±0,04 6,4±0,9 85Д±1,4 8,4±1 Д 5,6±0,9 2,3±0,4 92,1 ±1,3

Протеолитическая 52,4±1,7 6,1 ¿0,5 41,5±1,3 8,3±0,8 63,8±1,6 27,9±],5 5,2±0,4 1,7±0,5 93.Ш.9

Р Р=0,0006 Р=0,00653 Р=0,0001

Оценка направленности изменений биологических свойств в ассоциативных микросимбноценозах авирулентных E.coli и авирулентных простейших бластоцист показала только индифферентное взаимодействие в отношении всех изучаемых видов активностей, что позволяет рассматривать сообщества данных видов микробов как стабильные.

Направление отбора в сторону усиления патогенности среди гетерогенных микроорганизмов, обнаруженное in vitro, не всегда позволяют составить полное представление о патогенном потенциале изучаемого объекта ввиду не идентичности условиям in vivo. Последние часто определяют уровень экспрессии всех факторов патогенности, причем недостаточная изученность регуляторных механизмов этого повышает значимость оценки патогенности в эксперименте на лабораторных животных (Фиалкина, 2004).

Далее с целью подтверждения изменения вирулентности эшерихий под влиянием бластоцист проводили кератоконъюнктивальную пробу. Для постановки пробы использовали только E.coli с нормальной ферментативной активностью, которые после сокультивирования с вирулентными бластоцистами, приобретали свойства, не характерные для данных бактерий.

Этот метод позволяет исключить действие других представителей кишечной микробиоты на выраженность кератита и конъюнктивита.

Проведенные исследования показали, что заражение животных E.coli с нормальной ферментативной активностью, полученных до взаимодействия in vitro приводило к развитию слабо выраженных кератита и конъюнктивита. Введение этих же штаммов после сокультивирования с В.hominis, сопровождалось формированием прогрессирующих конъюнктивита и кератита, характеризующихся склеиванием изъязвленных век, обильным гнойным или гнойно-творожистым экссудатом, интенсивным помутнением роговицы. Кроме того, было показано, что на выраженность кератоконъюнюгивальной пробы влияет количество генов патогенности в геноме штаммов E.coli, использованных для заражения животных.

Полученные данные свидетельствуют, об изменении экологических возможностей бактерий под воздействием ассоциантов бластоцист,

приводящим к селекции и накоплению вирулентных вариантов в гетерогенной бактериальной популяции, с адекватными данным условиям существования биологическими свойствами.

Таким образом, проведенная работа по характеристике патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях выявила перспективность использования комплексного симбиотического подхода в решении фундаментальных и прикладных задач микробной экологии, что позволило выделить два основных момента:

Во-первых, оценка динамики патогенного потенциала микросимбионтов в ассоциации E.coli-B. hominis позволила выявить некоторые условия формирования и функционирования микробиоценозов, которые необходимо учитывать при диагностике и прогнозировании течения широкого спектра заболеваний, ассоциированных с дисбиотическими состояниями.

Во-вторых, показана молекулярно-геиетическая основа формирования патогенных вариантов эшерихий в рамках ассоциативных симбиотических взаимодействий, где накопление и рекомбинация фрагментов генов патогенности - пусковой механизм клонально-селекционного процесса, направленного на взаимоадаптацию микроорганизмов к изменяющимся условиям биотопа.

ВЫВОДЫ

1. Литическую активность по отношению к B.hominis различной вирулентности проявляли ферменты протеаза, хитиназа, глюканаза, липаза и целлюлаза. С увеличением вирулентности простейших изменялась скорость литического действия липазы и целлюлазы.

2. Выявлена прямая взаимосвязь между нарушениями микробиоценоза кишечника и вирулентностью B.hominis, сопровождающимися снижением высеваемости бифидобактерий и лактобацилл, а также увеличением количества микробов родов: Proteus, Klebsiella, Staphylococcus, Clostridium, Candida, Enterococcus.

3. Установлено, что вегетирование в микробиоценозе кишечника вирулентных бластоцист сопровождалось накоплением атипичных

штаммов и повышением показателя вирулентности одного из основных микросимбионтов - E.coli с LD5(/lg 1,1±0,4 до 3,7±0,3 ед.

4. Динамика численности взаимодействующих in vitro эшерихий и бластоцист демонстрирует активизацию механизмов группового отбора, направленных на подавление антагонистической активности ассоциативных микросимбионтов, характеризующихся изменением их биологических свойств. Усиление вирулентности бактерий сопряжено с изменением патогенного потенциала B.hominis.

5. Показано, что взаимодействие E.coli с цистами B.hominis способствовало выживанию бактерий в изменившихся условиях среды обитания, в частности при действии антибактериальных препаратов.

6. Выявлено, что в результате ассоциативного симбиотического взаимодействия E.coli с B.hominis in vitro происходило увеличение частоты выявления генетических детерминант факторов патогенности эшерихий, обеспечивающих адгезию и токсинообразование. Отмечена высокая частота встречаемости комбинаций генов рарС, рарН, sfaA, hlyB, и рарС, fimA, ehx, что свидетельствует об их значимости в процессах адаптации к изменившимся условиям.

7. При исследовании ассоциативных взаимоотношений эшерихий и бластоцист установлено стимулирующее, ингибируюхцее и индефферентное действие в отношении биологических свойств микросимбионтов, что свидетельствуют об активных процессах взаимоадаптации и селекции биоваров с различным уровнем вирулентности.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Публикации в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Характеристика кишечного микробиоценоза людей инвазированных бластоцистами / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, И.Н. Исаева, H.A. Ильина // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - Москва, 2002. - №5. — С. 216.

2. Оценка желчевыделительной функции печени при экспериментальном бластоцистозе / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, И.Н.

Исаева, H.A. Ильина // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - Москва, 2002. - №5. С. 473.

3. Влияние простейших В.hominis на функциональную активность печени / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Краснопсрова, H.A. Квасова, И.Н. Исаева // Мед. паразитология и паразитарные болезни. - Москва, 2003. - №2. - С. 1618.

4. Бластоцистоз - протозооз человека / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, H.A. Квасова, И.Н. Исаева и соавт. // Мед. паразитология и паразитарные болезни - Москва, 2004.- №4. - С.58-61.

5. Результаты определения чувствительности простейших Blastocystis hominis к антипротозойным препаратам / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, O.E. Фалова, A.C. Нестеров // Вестник Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова. - Саратов, 2004.- №4,- С.29-32.

6. Влияние микробиоценоза кишечника на формирование и тяжесть течения экспериментальной язвы желудка, ассоциированной с бластоцистозом / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.В. Бугеро, Е.А. Зубкова // Вестник Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова. - Саратов, 2005,- №1.- С.17-19.

7. Красноперова Ю.Ю. Биологические формы простейших Blastocystis hominis / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, O.E. Фалова // Вестник Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова. -Саратов, 2005.- №2.- С.25-28.

8. Антиинтерферонная активность простейших Blastocystis hominis / H.A. Квасова, H.B. Бугеро, Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова // Вестник Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова. - Саратов, 2005.- №2,- С.7-9.

9. Изменение функциональной активности системы фагоцитоза при нарушениях микроэкологии кишечника, связанной с бластоцистной инвазией / Ю.Ю. Красноперова, В.М. Кудрова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, A.C. Нестеров // Вестник новых медицинских технологий. - Тула, 2007,- №2.-T.X1V.- С. 195-196.

10. Красноперова Ю.Ю. Изучение динамики популяционной численности различных по вирулентности простейших Blastocystis hominis и бактерий Escherichia coli при совместном культивировании / Ю.Ю. Красноперова // Проблемы региональной экологии. - Москва, 2008. - №5. - С. 153-157

11. Красноперова Ю.Ю. Мониторинг микробиоты при экспериментальной ишемии на фоне бластоцистной инвазии с последующим анализом патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях кишечника / Ю.Ю. Красноперова, A.M. Лазарев, A.B. Курзин // Проблемы региональной экологии. - Москва, 2009. - №1. - С. 74-78.

12.Красноперова Ю.Ю. Некоторые молекулярно-генетические механизмы взаимоадаптации штаммов Escherichia coli до и после сокультивировашя с простейшими Blastocystis hominis I Ю.Ю. Красноперова, Р.В. Асеинова II Вестник новых медицинских технологий. - Тула, 2009. - № 1.-С. 12-14.

Публикации в других изданиях

13.Изменения микрофлоры кишечника на фоне бластоцистной инвазии / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, И.Н. Исаева // Материалы VIII съезда Итало-Российского общества по инфекционным болезням. "Проблема инфекции в клинической медицине". - Санкт-Петербург, 2002. - С.268 -269.

14.Значение В.hominis в патологии кишечника / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, И.Н. Исаева // Юбилейная научная конференция, посвященная 80-летию кафедры микробиологии Военной медицинской академии и 300 летию основания Санкт - Петербурга «Современная микробиология в клинической медицине и эпидемиологии». -Санкт - Петербург, 2003. - С. 84.

15. Роль бластоцист в изменении микробиоценоза кишечника / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, Н.А. Квасова, И.Н. Исаева и соавт. // II Международная научно - практическая конференция. "Медицинская Экология ". - Пенза, 2003. - С. 81-84.

16. Бластоцистная инвазия и дисбактериоз кишечника / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, Н.А. Квасова, А.С. Нестеров.- Ульяновск, 2003.-211 с.

17. Ассоциации бластоцистоза с другими паразитозами / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, И.Н. Исаева и соавт. // Материалы VI Российского съезда врачей инфекционистов. - Санкт -Петербург, 2003. - С. 309.

18. Бластоцистная инвазия у гастроэнтерологических больных / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. // Медлайн-экспресс. - Москва, 2003.- №12. - С.3-5.

19.Реализация потенциала патогенности простейших Blastocystis hominis в условиях пониженной резистентности макроорганизма / IO.IO. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Н.А. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. II Материалы региональной научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы современного здравоохранения и экологии». - Ульяновск, 2003. - С. 64-65

20.Микроэкология кишечника как показатель здоровья населения Ульяновкой области / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, Н.А. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. // Материалы Всероссийской научно-практической конференции "Роль социальных и биологических факторов в становлении возрастных особенностей здоровья населения". - Пенза, 2003.-С. 68-70.

21.Бластоцистная инвазия у лиц с заболеваниями пищеварительной системы / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. // Материалы Международной конференции, посвященной 125-летию К.И. Скрябина и 60-летию основания Лаборатории гельминтологии АН СССР Института паразитологии РАН «Основные достижения и перспективы развития паразитологии». - Москва, 2004. -С.239-241.

22.Патогенные свойства штаммов Blastocysts hominis / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. // Материалы выездного пленума НОГР «Новые горизонты гастроэнтерологии». - Новосибирск, 2004,- С.303-304.

23.Влияние микробиоценоза кишечника на формирование и тяжесть течения экспериментальной язвы желудка, ассоциированной с бластоцистозом / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. // Сборник статей НИИ Кардиологии ТНЦ СО РАМН «Науки о человеке». - Томск, 2004.-С.147-148.

24.Некоторые показатели микробиоценоза при бластоцистной инвазии / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. // Материалы выездного пленума НОГР «Новые горизонты гастроэнтерологии». - Новосибирск, 2004.-С. 142-143.

25.Формирование язвы желудка на фоне инвазии Blastocysts hominis / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Квасова, Н.В. Бугеро и соавт. // Материалы Международной конференции, посвященной 125-летию К.И. Скрябина и 60-летию основания Лаборатории гельминтологии АН СССР - Института паразитологии РАН «Основные достижения и перспективы развития паразитологии». - Москва, 2004.- С. 146-148.

26.Красноперова Ю.Ю. Значение антиинтерферонной активности Blastocysts hominis / Ю.Ю. Красноперова, H.A. Квасова, Н.В. Бугеро // Материалы XI межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и соискателей «Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных». - Пенза, 2004.-С.23-26.

27.Krasnoperova Y.Y.The usage of antiprotozoal medications at complex treatment for colitis associated with enteric blastocystosis / Y.Y. Krasnoperova, N.I. Potaturkina-Nesterova // Falk Symposium № 142. Birmengem, 2005. - P.42.

28.The diagnostic value of disclosing blastocysts at colitis patients / Y.Y. Krasnoperova, N.I. Potaturkina-Nesterova, N.A. Ilina, N.V. Bugero, A.S. Nesterov // Falk Symposium №. 142. Birmengem, 2005. - P.56.

29.Красноперова Ю.Ю. Состояние микрофлоры толстой кишки при экспериментальной ишемии на фоне бластоцистной инвазии / Ю.Ю. Красноперова, A.M. Лазарев // Труды молодых ученых Ульяновского государственного университета. - Ульяновск, 2005. - С. 21-23.

30. Чувствительность к химиопрепаратам бластоцист, выделенных у гастроэнтерологических больных / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Квасова, Е.А. Зубкова // Медлайн-экспресс. - Москва, 2005,- №3. - С.23-24.

31. Состояние микрофлоры толстой кишки на фоне инвазии простейшими Blastocystis hominis / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, A.M. Лазарев, Е.А. Зубкова // Успехи современного естествознания. -Москва, 2006.-№L- С.93.

32.Некоторые вопросы эпидемиологии бластоцистоза / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, H.A. Ильина, И.С. Немова // Материалы Международной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных. 21-23 июня 2006г» -Ульяновск, 2006. - С.322-327.

33.Изменение состава микрофлоры кишечника при дисбиозе, вызванном инвазией простейшими Blastocystis hominis / Ю.Ю. Красноперова, Н.С. Глебова, A.M. Лазарев, A.B. Курзин И Материалы I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов. - Ульяновск, 2007. - С. 51-52.

34. Результаты определения чувствительности простейших к антибактериальному ферментному препарату / Ю.Ю. Красноперова, Н.Г. Гумаюнова, A.M. Лазарев, Е.А. Зубкова // Материалы I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов. - Ульяновск, 2007. - С. 140-141.

35.Микробная экология кишечника при экспериментальной ишемии, отягощенной бластоцистной инвазией / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, A.M. Лазарев, A.B. Курзин // Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека. 24-28 сентября 2007г.» -Ульяновск, 2007. - С. 145-146.

36.Определение чувствительности простейших Blastocystis hominis к различным концентрациям и фракциям ферментного препарата лизоамидаза / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, O.A. Степная, Е.А. Зубкова // Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека. 24-28 сентября 2007г» - Ульяновск, 2007. - С. 202-203.

37.Красноперова Ю.Ю. Экологические параметры микробиоты кишечника при протозойных инвазиях / Ю.Ю. Красноперова, H.A. Ильина, Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Касаткина и соавт. - Ульяновск, 2009. - 79 с.

38.Красноперова Ю.Ю. Простейшие Blastocystis hominis и их влияние на макроорганизм / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, H.A. Квасова, O.E. Фалова и соавт. - М.: Наука, 2009. - 215 с.

Изобретения по теме диссертации

39.Способ заражения экспериментальных животных бластоцистами. Патент РФ на изобретение №2224465 / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, H.A. Ильина, И.Н. Исаева, Р.Ф. Бурганова, Н.М. Чебан // Бюл., 2004.-№ 6.

40.Способ воспроизведения язвы желудка на фоне экспериментального бластоцистоза. Патент на изобретение №2239236 / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова // Бюл., 2004 - №30.

41.Способ воспроизведения ишемии толстого кишечника на фоне бластоцистной инвазии. Патент на изобретение №2310239 / Ю.Ю. Красноперова, A.M. Лазарев II Бюл., 2007. - №31.

Методические материалы

42.Экологическая характеристика микробиоценоза кишечника. Практические рекомендации / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, Н.В. Бугеро, O.E. Фалова, H.A. Квасова, И.С. Немова, Г.М. Кулагина, Л.К. Богомолова. Ульяновск, 2004. - 23 с. 43.Особенности микроэкологии кишечника больных псориазом. Практические рекомендации / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, Н.В. Бугеро, O.E. Фалова, H.A. Квасова, Й.С. Немова, Г.М. Кулагина, A.C. Нестеров. Ульяновск, 2004. - 19 с.

44.Биологические свойства микробов-симбионтов в условиях протозойно-бактериальных ассоциаций макроорганизма. Практические рекомендации / Ю.Ю. Красноперова, Н.И. Потатуркина-Нестерова, И.С. Немова, A.C. Нестеров. Ульяновск, 2009. - 20 с.

45.Дисбиоз кишечника и методы его диагностики. Практические рекомендации / Н.И. Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю. Красноперова, A.M. Лазарев, М.А. Орлина, A.B. Курзин. Ульяновск, 2009.- 33 с.

КРАСНОПЕРОВА Юлия Юрьевна

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 18.05.2009 г. Тираж 100 экз. Заказ №1675 Оригинап-макет изготовлен с помощью текстового редактора Microsoft Word 2003 for Mindows™. Гарнитура тайме. Печать офсетная. Усл.печ.листов - 2,0.

Формат 64x84 1/16 Отпечатано: ООО «Вега-МЦ»

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Красноперова, Юлия Юрьевна

Введение.

Глава Биологическое значение ассоциативных взаимоотношений микроорганизмов (Обзор литературы).

1.1. Характеристика микробных ассоциаций.

1. 2. Особенности морфологических и физиологических свойств Blastocystis hominis.

1.3. Эколого-эпидемиологическая характеристика инвазии

В.hominis.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

2. 1. Характеристика культур, используемых в работе.

2. 2. Среды культивирования.

2. 3. Лабораторные животные.

2. 4. Методика изучения микробиоценоза кишечника.

2. 5. Методы выявления В.hominis.

2. 6. Исследование нуклеотидных последовательностей генов, определяющих продукцию факторов патогенности.

2. 7. Определение биологических свойств микроорганизмов.

2. 8. Методика культивирования микросимбионтов в ассоциации

2.9. Определение вирулентности ассоциативных симбионтов.

2. 10. Определение структурных компонентов клеточной оболочки ассоциантов-бластоцист.

2.11. Постановка кератоконъюнктивальной пробы.

2. 12. Методы статистического анализа.

Глава 3. Характеристика биологических свойств микросимбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях толстой кишки человека.

3.1. Изучение взаимосвязи между особенностями строения клеточной поверхности и вирулентностью штаммов В. hominis.

3. 2. Оценка характера изменений микробиоценоза кишечника при бластоцистной инвазии.

3.3. Характеристика показателя вирулентности E.coli в рамках ассоциативного симбиоза с бластоцистами в условиях кишечного биотопа.

Глава 4. Анализ динамики численности ассоциативных микросимбионтов В.hominis и E.coli в процессе взаимоадаптации при совместном культивировании.

4. 1. Изменение численности эшерихий и высоковирулентных штаммов бластоцист.

4. 2. Изменение численности эшерихий и умеренновирулентных штаммов бластоцист.

4. 3. Изменение численности эшерихий и авирулентных штаммов ^ бластоцист.

4.4. Результаты изучения взаимодействия бактерий E.coli с цистами В. hominis. 113 i

Глава 5. Изучение встречаемости нуклеотидных последовательностей генов патогенности, обеспечивающих поддержание численности популяции E.coli в ассоциации с B.hominis in vitro.

5.1. Определение нуклеотидных последовательностей генов контролирующих синтез фимбрий S, Р и 1 типа.

5. 2. Обнаружение нуклеотидных последовательностей еаеА гена в различных фенотипических группах E.coli до и после сокультивирования с бластоцистами.

5.3. Изучение генетических детерминант токсинообразования в различных фенотипических группах is. coli до и после сокультивирования с бластоцистами.

5. 4. Сравнительный анализ частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей генов патогенно сти E.coli при ассоциативных симбиотических взаимоотношениях с В.hominis до и после сокультивирования.

Глава 6. Исследование факторов патогенности Escherichia coli и Blastocystis hominis в алгоритме ассоциативного симбиотического взаимодействия до и после сокультивирования.

6. 1. Анализ биологических свойств E.coli и высоковирулентных бластоцист до и после совместного культивирования.

6.2. Анализ биологических свойств E.coli и умеренновирулентных бластоцист до и после совместного 169 культивирования.

6.3. Анализ биологических свойств E.coli и авирулентных бластоцист до и после совместного культивирования.

Глава 7. Оценка патогенности микросимбионтов E.coli, полученных после совместного культивирования с ассоциантами B.hominis in vivo.

7. 1. Сравнительный анализ уровня экспрессии факторов патогенности и количества генов патогенности в геноме E.coli.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика изменений патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях"

Актуальность проблемы

Микробное сообщество является первичным звеном любых биоценозов и экосистем (Звягинцев, Добровольская, Лысак, 1993). Подавляющее большинство микробных биоценозов представляют собой сложившиеся симбиотические ассоциации, в которых между микроорганизмами складываются сложные и неоднозначные связи (Нетрусов и др., 2004; Дяковецкая, Лапшина, Шулаева, Фёдоров, 2005).

В последние годы появились данные о важной роли в формировании патобиоценозов кишечника, помимо бактерий и грибов, таких простейших как Entamoeba hystolytica, Giardia lamblia и Criptosporidium (Воробьев и др., 2001;

Плотников, 2002; Крылов, 2004). Менее известен протозооз, обусловленный паразитированием преимущественно в толстой кишке простейших Blastocystis hominis (Guignard et al., 2000; Taamasri et al., 2000; Abe, Wu, Yoshikawa, 2003). Возбудитель бластоцистной инвазии является микроорганизмом, к усилению агрессии которого, с одной стороны, могут приводить факторы, снижающие защитные силы макроорганизма, а с другой стороны - микроорганизмы, входящие в состав биоценоза.

Известно, что в природных биоценозах простейшие могут служить хозяевами для широкого круга патогенных и условно-патогенных бактерий (Домарадский, 1998; Литвин, 2003). Наибольший интерес среди микробов, вступающих в симбиотические связи с простейшими, привлекли микобактерии, псевдомонады, иерсинии, холерные вибрионы, сальмонеллы, эшерихии, ■<.-франциселлы, кампилобактеры, листерии (Ермолаева, Романова, Тартаковский, 2005).

Работами В.И. Пушкаревой и соавт. (1989, 1990, 1996, 2003) показано, что бактерии, находясь в клетке простейших, избегают массовой^ гибели, а их хозяева - простейшие поддерживают их численность и вирулентность.

Проводимые исследования по характеристике ассоциативного симбиоза простейших с другими микроорганизмами ограничиваются изучением механизмов выживания и их взаимодействия вне макроорганизма, который также представляет собой среду обитания для огромного количества видов микробов (Несвижский, Воробьев, Белоносов, 1997; Шендеров, 1998, 1999; Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001). В связи с этим, вопрос о роли простейших В/ изменении- численности и вирулентности представителей симбиоценозов макроорганизма остается открытым.

Раскрытие механизмов межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание ассоциативных симбиозов организма хозяина в норме и, при патологических состояниях, открывает перспективы решения фундаментальных проблем микробиологии — выявления причинно-следственных связей формирования патогенных вариантов микросимбионтов.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Показать взаимосвязь между особенностями строения клеточной поверхности и вирулентностью микросимбионтов В.hominis.

2. Определить характер изменений микробиоценоза кишечника на фоне бластоцистной инвазии.

4. Провести анализ динамики численности популяций В.hominis и E.coli при совместном культивировании.

5. Исследовать взаимодействие вегетативных форм E.coli с цистами В.hominis при действии антибактериальных препаратов.

6. Выявить изменения встречаемости генетических детерминант факторов патогенности, обеспечивающих поддержание численности E.coli в ассоциации с В.hominis in vitro.

Новизна исследования. Показана взаимосвязь между структурными особенностями клеточной поверхности Blastocystis hominis и их вирулентностью. Литическое действие на клетки В. hominis различной вирулентности оказывали ферменты, обладающие протеазной, хитиназной, глюканазной и липазной активностями. Отмечена закономерность изменения скорости лизиса при действии липазы на все три группы штаммов бластоцист -с усилением вирулентности замедляется скорость лизиса. Целлюлазы способны лизировать клетки только высоко - и умеренновирулентных В.hominis. Это может свидетельствовать в пользу того, что при укреплении клеточной оболочки целлюлозой усиливаются вирулентные свойства бластоцист, а клетки умеренно - и авирулентных вариантов В.hominis имеют области незащищенной мембраны вследствие частичного или полного отсутствия защитной целлюлозной оболочки.

В опытах in vivo установлена диссоциация эшерихий по показателю вирулентности. У штаммов E.coli, выделенных в консорциуме с высоковирулентными бластоцистами значения показателя вирулентности (LDso/lg) были выше, чем с умеренновирулентными и авирулентными.

Впервые исследована динамика численности популяций В.hominis и бактерий-ассоциантов в процессе межвидовой борьбы при совместном культивировании. Показано, что в результате взаимодействия эшерихий с нормальной ферментативной активностью, а также гемолитических и лактозонегативных форм с вирулентными бластоцистами, в популяции бактерий активизируются механизмы адаптации, проявляющиеся, во-первых, неуклонным уменьшением числа бактерий, чувствительных к перевариванию, во-вторых, постепенным накоплением бактериальных клеток устойчивых к фагоцитозу, в-третьих, усилением вирулентности бактерий, приводящей к деструкции и уменьшению численности простейших.

Показано взаимодействие вирулентных и авирулентных E.coli с цистами В.hominis при действии дестабилизирующих факторов, таких как антибактериальные препараты.

Впервые установлено, что после взаимодействия с B.hominis in vitro, происходит увеличение частоты встречаемости генетических детерминант факторов патогенности, обеспечивающих адгезию и токсинообразование среди выделенных фенотипических групп E.coli, а также селекция клонов с сочетаниями генов, не встречавшихся у штаммов, изученных до сокультивирования и в монокультурах.

Дана оценка изменения патогенного потенциала микроорганизмов в протозойно-бактериальных сообществах после совместной инкубации. Показано, что неферментирующие и гемолитические эшерихии в тандеме с высоко - и умеренновирулентными бластоцистами обоюдно усиливали вирулентность, напротив, кишечные палочки с нормальной ферментативной активностью угнетали активность факторов патогенности бластоцист. В сообществах Е. coli с нормальной ферментативной активностью и авирулентных бластоцист отмечен индифферентный характер взаимодействия.

Разработаны и утверждены «Способ заражения экспериментальных животных бластоцистами» (патент РФ №2224465), «Способ воспроизведения язвы желудка на фоне экспериментального бластоцистоза» (патент РФ №2239236), «Способ воспроизведения ишемии толстого кишечника на фоне бластоцистной инвазии» (патент РФ №2310239). Создан метод сокультивирования микроорганизмов в условиях бактериально-протозойных ассоциаций in vitro (заявка на получение патента РФ №2008147600). Данные методики могут быть использованы в практических лабораториях и научноисследовательских учреждениях при диагностике и прогнозировании течения широкого спектра заболеваний, ассоциированных с дисбиотическими состояниями кишечника.

Результаты изучения взаимодействия вегетативных форм E.coli с цистами В,hominis при действии стрессорных факторов, а именно антибактериальных препаратов, возможно, использовать для оптимизации проведения химиотерапии патологий микробного генеза.

По материалам диссертационной работы написаны монографии «Бластоцистная инвазия и дисбактериоз кишечника», Ульяновск, 2003, 155 с. (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Квасова H.A., Нестеров A.C.); «Экологические параметры микробиоты кишечника при протозойных инвазиях» (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Ильина H.A., Касаткина Ю.Ю., Карпеева Е.А.) «Простейшие Blastocystis hominis и их Влияние на макроорганизм», Санкт-Петербург, 209, 215 с. (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Квасова H.A., Нестеров A.C., Бугеро Н.В. Фалова O.E.); практические рекомендации: «Экологическая характеристика микробиоценоза кишечника» Ульяновск, 2004, 23 с. (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И. Бугеро Н.В., Фалова O.E., Квасова H.A., Немова И.С., Кулагина Г.М., Богомолова Л.К.); «Особенности микроэкологии кишечника больных псориазом» Ульяновск, 2004, с. 19 (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Бугеро Н.В., Фалова O.E., Квасова H.A., Немова И.С., Кулагина Г.М., Нестеров A.C.), «Биологические свойства микробов-симбионтов в условиях протозойно-бактериальных ассоциаций макроорганизма» Ульяновск, 2009, с. 20 (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Немова И.С., Нестеров A.C.), «Дисбиоз кишечника и методы его диагностики» Ульяновск. УлГУ, 2009, 33 с. (соавт. Потатуркина-Нестерова Н.И., Лазарев A.M., Орлина М.А., Курзин A.B.).

Результаты исследования используются в процессе преподавания науки о биологическом многообразии (раздел микробиология), экологической эпидемиологии, экологической иммунологии, на кафедре биоэкологии и генетики человека Института медицины, экологии и физической культуры ГОУ ВПО «Ульяновский государственный университет (Акт о внедрении от 17.12.2008 г., утвержденный ректором ГОУ ВПО «Ульяновский государственный университет» Б.М. Костишко); микробиологии, микроэкологии, общей экологии на кафедре зоологии ГОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова» (Акт о внедрении от 04.02.2009 г., утвержденный проректором по научной работе ГОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова» H.A. Ильиной); в практике клинической и бактериологической лабораторий ГУЗ Городской клинической больницы №1 г. Ульяновска при диагностике и оценке микробиоценоза кишечника, при определении чувствительности микробов к антибиотикам (Акт о внедрении от 03.12.2008 г., утвержденный главным врачом ГУЗ Городской клинической больницы №1 г. Ульяновска Л.К. Богомоловой).

Положения, выносимые на защиту

1. Обоснован симбиотический подход к оценке динамики патогенного потенциала микросимбионтов в ассоциации E.coli-B.hominis, позволяющий выявить некоторые условия селекции вирулентных эшерихий в кишечном биотопе.

2. Молекулярно-генетический анализ при изучении ассоциативных симбиотических взаимодействий способствует выявлению основных направлений взаимоадаптации микроорганизмов к изменяющимся условиям симбиоценоза.

Работа выполнена

Диссертация выполнена в соответствии с комплексным планом научной работы Института медицины, экологии и физической культуры Ульяновского государственного университета «Биология простейших Blastocystis hominis и их влияние на макроорганизм» (№ гос. регистрации 01.200.2211659).

Апробация работы. Результаты работы доложены и обсуждены на: Российской- научно-практической конференции "Актуальные вопросы педиатрии и детской хирургии" (Ульяновск, 2000); VIII съезде Итало-Российского общества по инфекционным болезням "Проблема инфекции в клинической медицине" (Санкт-Петербург, 2002); Юбилейной научной конференции, посвященной 80 - летаю кафедры микробиологии. Военной медицинской академии и 300 летию основания Санкт - Петербурга "Современная микробиология в клинической медицине и эпидемиологии (Санкт — Петербург, 2003); II Международной научно - практическая конференция. "Медицинская Экология" (Пенза, 2003); Международной конференции, посвященной 125-летию К.И. Скрябина и 60-летию основания Лаборатории гельминтологии АН СССР - Института паразитологии РАН «Основные достижения и перспективы развития паразитологии» (Москва, 2004); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы здоровья и среды обитания современного человека» (Ульяновск, 2005); Falk Symposium № 142 (Birmengem, 2005); Международной конференции «Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных» (Ульяновск, 2006); I конференции молодых ученых медико-биологической секции Поволжской ассоциации государственных университетов (Ульяновск, 2007); Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2007).

Объем и структура диссертации. Текст диссертации изложен на страницах машинописи, содержит введение, 5 глав результатов собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации, указатель литературы, включающий в себя 102 отечественных и 391 иностранных источников. Иллюстрации представлены 35 таблицами, 57 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Красноперова, Юлия Юрьевна

223 ВЫВОДЫ

Литическую активность по отношению к В.hominis различной вирулентности проявляли ферменты протеаза, хитиназа, глюканаза, липаза и целлюлаза. С увеличением вирулентности простейших изменялась скорость литического действия липазы и целлюлазы. Выявлена прямая взаимосвязь между нарушениями микробиоденоза кишечника и вирулентностью В. hominis, сопровождающимися снижением высеваемости бифидобактерий и лактобацилл, а также увеличением количества микробов родов: Proteus, Klebsiella, Staphylococcus, Clostridium, Candida, Enterococcus.

Установлено, что вегетирование • в микробиоценозе кишечника вирулентных бластоцист сопровождалось накоплением атипичных штаммов и повышением показателя вирулентности одного из основных микросимбионтов - E.coli с LD5o/lg 1,1±0,4 до 3,7±0,3 ед. Динамика численности взаимодействующих in vitro эшерихий и бластоцист демонстрирует активизацию механизмов группового отбора, направленных на подавление антагонистической активности, характеризующихся изменением биологических свойств ассоциативных микросимбионтов. Усиление вирулентности бактерий сопряжено с изменением патогенного потенциала В.hominis.

Показано, что взаимодействие E.coli с цистами В.hominis способствовало выживанию бактерий в неблагоприятных условиях среды обитания, в частности при действии антибактериальных препаратов. Выявлено, что в результате ассоциативного симбиотического взаимодействия E.coli с В.hominis in vitro происходило увеличение частоты выявления генетических детерминант факторов патогенности эшерихий, обеспечивающих адгезию и токсинообразование. Отмечена высокая частота встречаемости комбинаций генов рарС, рарН, sfaA, ЫуВ, и рарС, йтА, еЬх, что свидетельствует об их значимости в процессах адаптации к изменившимся условиям. 7. Интенсивное изменение биологических свойств участников протозойно-бактериального симбиоценоза, свидетельствуют об активных процессах взаимоадаптации и селекции биоваров с различным уровнем вирулентности.

225

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Организм человека и животных представляет собой экологическую нишу для разнообразных микроорганизмов, заселяющих их биотопы. Микробиоценозы макроорганизма представляют собой сложные системы, которые отличаются не только чрезвычайной многокомпонентностыо, но и разнообразным содержанием входящих в него представителей микрофлоры (Нетрусов и др., 2004; Арутюнян, Лалаян, Алексанян, 2001). Естественно, что при заселении биотопов между микробами складываются определенные взаимоотношения, которые отражаются на качественной и количественной характеристике того или иного микробного пейзажа (Несвижский, Воробьев, Белоносов, 1997; Шендеров, 1998, 1999). Изменения важных характеристик вирулентности участников микробиоценоза, наряду с их количественной оценкой; может существенно сказаться на течении заболеваний, осложнённых дисбиозом кишечника (Воробьев, Гинцбург, Бондаренко, 2000; Постникова и др. 2004; Багдасарян, 2007).

Имеющиеся в литературе данные описывают некоторые бактериальные и бактериально-грибковые ассоциативные симбиозы макроорганизма. В то же время, в биотопах человека и животных, в частности желудочно-кишечном тракте, нередко встречаются простейшие.

В последние годы, появились данные о важной роли в формировании патобиоценозов кишечника, помимо бактерий и грибов, таких простейших как Entamoeba hystolytica, Giardia lamblia и Criptosporidium (Воробьев и др., 2001; Плотников, 2002; Крылов, 2004). Менее известен протозооз, обусловленный паразитированием преимущественно в толстой кишке простейших Blastocysts hominis (Guignard et al., 2000; Taamasri et al., 2000; Abe, Wu, Yoshikawa, 2003). Возбудитель бластоцистной инвазии является микроорганизмом, к усилению агрессии которого, с одной стороны, могут приводить факторы, снижающие защитные силы макроорганизма, а с другой стороны - микроорганизмы, входящие в состав биоценоза.

Проводимые исследования по характеристике ассоциативного симбиоза простейших с другими микроорганизмами ограничиваются изучением механизмов выживания и их взаимодействия« вне макроорганизма, который также представляет собой среду обитания для огромного количества видов микробов (Несвижский, Воробьев, Белоносов, 1997; Шендеров, 1998, 1999; Ардатская, Дубинин, Минушкин, 2001). В связи с этим, вопрос о роли простейших в изменении численности и вирулентности представителей симбиоценозов макроорганизма остается открытым.

Раскрытие механизмов межмикробных взаимодействий, определяющих формирование и поддержание ассоциативных симбиозов организма хозяина в норме и при патологических состояниях, открывает перспективы решения фундаментальных проблем микробиологии — выявления причинно-следственных связей формирования патогенных вариантов микросимбионтов.

Известно, что вирулентность микроорганизмов в значительной мере определяется строением клеточной стенки (Бухарин и др., 2004). Ранее показано, что вирулентность микросимбионтов В.ИогпШб значительно варьирует (Потатуркина-Нестерова, Ю.Ю.Красноперова, Чебан, Ильина, 2000; Красноперова, Глебова, Лазарев, Курзин, 2007), тем не менее, не изученной остается взаимосвязь степени вирулентности бластоцист и особенностей структуры клеточной стенки возбудителя.

Одним из подходов в определении структуры полимеров клеточной оболочки микроорганизмов является изучение действия на них ферментов с известной субстратной специфичностью.

О строении клеточной поверхности простейших известно следующее: часть видов одноклеточных простейших не обладают покровами, их клетка отграничена от внешней среды только цитоплазматической мембраной; другая часть имеет плотную кутикулу, которая является утолщенным слоем эктоплазмы; покровы третьей группы простейших могут образовываться продуктами выделения эктоплазмы и, в ряде случаев, соответствовать оболочке растений. Так, например, у некоторых простейших обнаружена кутикула, состоящая из клетчатки (Языкова, 2005). Клетчатка - это термин, объединяющий растительные полимеры, различного химического строения — пектин, целлюлозу, гемицеллюлозу. У простейших обнаружены также хитиновые покровы, которые могут располагаться только с одной стороны клетки или полностью ее окружать. Хитиновые покровы характерны для корненожек, солнечников, биченосцев и инфузорий. Для морских простейших характерно присутствие в оболочке наряду с хитином углекислых и фосфорнокислых солей кальция. У пресноводных простейших обнаружены в оболочке кремниевые пластины, образующие кремниевые раковины. У радиолярий семейства Acanthometreae обнаружен скелет, состоящий из белка (Шарова, 2002).

Основываясь на известных в литературе немногочисленных и фрагментарных данных относительно строения клеточной поверхности простейших, мы предположили, что клетки В.hominis могут либо вовсе не иметь клеточных покровов, либо иметь покровы, включающие хитин, целлюлозу, пектин- В случае если клетки бластоцист не имеют клеточной оболочки, они должны быть чувствительными к действию липаз или протеаз. Можно также предположить участие в организации клеточных покровов полисахаридов, распространенных у животных и бактерий - гиалуроновых или тейхуроновых кислот (Наумова, Шашков, 1997), и полимеров, характерных для клеточных стенок грибов - глюкана, структурных белков (Калебина, Кулаев, 2001; Klis, 1994; Kapteyn, Van Den Ende, Klis, 1999).

Поэтому для проверки действия на клетки В.hominis были выбраны следующие ферменты: липаза, протеаза лизоамидазы, пектиназа, целлюлаза, глюкуронидаза, эндоглюканаза, хитиназа.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Красноперова, Юлия Юрьевна, Оренбург

1. Ардатская М.Д., Дубинин А.В., Минушкин О.Н. Дисбактериоз кишечника: Современные аспекты изучения проблемы, принципы диагностики и лечения // Терапевт, арх. 2001. - №2. - С.67-72.

2. Арзуманян В.Г., Мокронова М.А., Самуилова Т.Л., Гервазиева В.Б. Дрожжеподобные грибы на коже больных атоническим дерматитом // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1998. №3. -С. 10-13

3. Арутюнян Н.М., Лалаян А.А., Алексанян Ю.Т. Биологические свойства условно-патогенных энтеробактерий выделенных от здоровых и больных людей // Журн. микробиол., эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. -№2. - С.124-125.

4. Багдасарян А.С. Биотехнология симбиотических продуктов на молочной основе с использованием растительных бифидогенных волокон // Автореф. дис. канд. технич. наук. Москва . - 2007. - 22с.

5. Баженов Л.Г., Перепелова И.Н. Helicobacter pylori и грибы рода Candida при гастро дуоденальной патологии // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-1997.-№3.-С.100-101

6. Барановский А.Ю., Кондрашин Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. Санкт-Петербург, «Питер», 2000.- 209 с.

7. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / М.О. Биргер. М.: Медицина. - 1982. - 464 с.

8. Бирюков В.В., Карпова Т.И., Карпова Е.Ю. Выявление грибов рода Candida в составе микрофлоры толстой кишки гастроэнтерологических больных // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России,- М. 2002.- С.350.

9. Бойков С.С., Мороз А.Ф., Бабаева Е.Е. Ассоциации грибов Candida albicans с некоторыми условно-патогенными микроорганизмами при дисбиозе кишечника у пациентов разных возрастных групп // Микробиология.-2005.-№2.-С.65-69.

10. Бондаренко В.М. Дисбактериоз М. Медицина, 1997. — 22 с.

11. Бондаренко В.М. «Острова» патогенности бактерий // Микробиология. -2001.-№ 4.-С.67-74.

12. Бондаренко В.М. Мавзютов А.Р., Golkocheva Е. Секретируемые факторы патогенности энтеробактерий // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2002. - №1. - С.84-90.

13. Брудастов ЮЛ., Валышев A.B., Брудастов А.Н. Антикомплементарная активность производственного штамма Bac.cereus IP 5832 и энтеробактерий при их совместном культивировании // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-1994. Приложение.-С.29-32.

14. Бухарин О.Б. Усвяцов Б.Я. Бактерионосительство (медико-экологический аспект) Екатеринбург: УрО РАН, 1996.- 206 с.

15. Бухарин О.В. Персистенция бактерий/ О.В. Бухарин.- М.: Медицина;г

16. Екатеринбург: УрО РАН.-1999.- 365 с.

17. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Хуснутдинова Л.М. Некоторые особенности микрофлоры миндалин и межмикробного взаимодействия (в норме и при патологии) // Микробиология. 2000. - №4. - С. 82-85.

18. Бухарин О .В., Усвяцов Б.Я., Хуснутдинова JI.M. Межбактериальные взаимодействия // Микробиология. 2003. - №4. - С.3-8.

19. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Чайникова И.Н., Михайлова Е.А., Валышев A.B., Ляшенко И.Э. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН C.B. Бухарина. М.:Медицина. 2004. - С. 61-80.

20. Бухарин О.В., Валышев A.B., Гильмутдинова Ф.Г. и др. Экология микроорганизмов человека. Екатеринбург: УрО РАН, 2006. 480 с.

21. Бухарин О.В., Лобакова Е.С., Немцева Н.В., Черкасов C.B. Ассоциативный симбиоз. Екатеринбург: УрО РАН, 2007. 264 с.

22. Валышев A.B., Гильмутдинова Ф.Г., Фомичева C.B. Факторы персистенции энтеробактерий фекальной флоры при дисбиозах кишечника // Микробиология. 1996. - №6. - С. 10-13.

23. Василенко В.В. Дисбактериоз синдром раздраженного кишечника: эссе - анализ проблемы // Рос. журн. гастроэнтерол., гепетол., колопроктол. -2000.- №6. С. 10-13.

24. Вельский В.В., Шаталова Е.В., Прадиуман Кумар Сингх. Структура популяций синегнойной палочки при ассоциации со стафилококками и эшерихиями // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1994.-№6.-С.37-38

25. Вельский В.В., Шаталова Е.В. Взаимное влияние возбудителей при смешанной инфекции ожоговой травмы // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 1999.- №4.- С.3-7.

26. Воробьев A.A., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции // Микробиология. 1999. -№6.-С. 102-105.

27. Домбровский A.M. Особенности представленных микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae ассоциаций, выделенных из испражнений; здоровых и больных сальмоисллезом детей // Микробиология. 1986.№12. С.38-43.

28. Доморадский И.В. Чума. -М., Медицина.- 1998.

29. Дяковецкая Н.К., Лапшина Г.Н., Шулаева М.П., Федоров Р.В. Особенности микробиоценоза кишечника у детей первого года жизни и детей до трех лет с патологиями желудочно-кишечного тракта // Парафармацевтика.1. Казань. -2005. С. 18-20.

30. Егоров Н.С., Ландау II.С. Биосинтез биологически активных соединений смешанными культурами микроорганизмов // Приклада, биохимия и микробиол. -1982. №18i - G. 835-849:

31. Ермолаева С.А., Романова Ю.М., Тартаковский И.С. // Вестн. РАМН. — 2005. №1. - С. 44.

32. Ефимов Б.А. Характеристика микроорганизмов, колонизирующих кишечник // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2002.-№5,- С.98-104.

33. Зайцев В.М. Прикладная медицинская статистика. М.: Медицина, 2003. -250 с.

34. Звягинцев Д.Н., Добровольская Т.Г., Лысак Л.В. Растения как центры формирования микробных сообществ // Журн. общ. биологии. 1993. - Т. 54.-С. 183-199.

35. Кадынцева Л.П., Щукина Р.К. Характеристика сальмонеллеза у детей по материалам Орехово-Зуевского района Московской области // Вопросы острой инфекционной патологии органов пищеварения у детей. М.: Знание. - 1998. - С.42-44.

36. Казарин B.C., Юсуф-Заде A.A. Особенности сочетанного течения сальмонеллеза и острых респираторных вирусных инфекций у детей // Вопросы охраны материнства и детства. 1998. - №9. - С.27-31.

37. Калебина Т.С., Кулаев И.С. // Успехи биол. химии. 2001. - Т. 41. - С. 105-130.

38. Коренберг Э.И. // Успехи современной биологии. 2005. - № 2. - С. 131.

39. Кормилицина М.И., Барановский П.М., Ананова Е.В. Патогенные бактерии в сообществах. М., 1994. С.65.

40. Костюкова H.H., Бехало В.А. Современные представления о механизмах патогенного действия менингококка // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. - №3. - С. 40-43.

41. Крылов A.A., Козлович И.В., Решетнева Е.М. Дисбактериоз кишечника (пособие для врачей). С.-Пб.: Изд-во С.-Пб. мед. академии. - 1994. - 24 с.

42. Крылов A.A. // Определитель паразитических простейших. М.: Медицина - 2004. - 150 с.

43. Кубась В.Г. Кандидоз. Спб: С.Петербург, мед. акад. последиплом. образования. - 1997.- 51 с.

44. Куваева И.Б. Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей М. Медицина.- 1991.

45. Кузнецов В.Г., Тимченко Н.Ф. Взаимодействие возбудителей некоторых сапронозов в смешанных культурах на плотной среде при разных температурах // Микробиология. 2002. - №1. - С.11-16.

46. Лакин Г.Ф. Биометрия. -М.: Высш.шк.- 1990.- 352 с.

47. Лебензон С.С. Сочетание течения стафилококково-сальмонеллезной инфекции у детей первого года жизни // Материалы 2-го съезда детских врачей Таджикистана. Душанбе. - 1981. - С.86-87.

48. Лебензон С.С., Лаврова К.В., Амиров Т.Д., Лосин Л.И., Холстейн A.A. Клебсиеллезная и клебсиеллезно-сальмонеллезная инфекция у детей первых месяцев жизни // Педиатрия. 1986. - №5. - С.18-21.

49. Ленцнер А. А. Лактофлора и колонизационная резистентность. // Антибиотики и мед. биотехнологиям- 1987. ~ Т.32, №3; О. 173 - 179;

50. Литвип В.Ю. Гинцбург А.Л., Нушкарева В.И. Обратимый? переход патогенных бактерий в покоящееся (некультивируемое) состояние: экологические и генетические механизмы // Вёстн. РАМН. — 2000. №1. -е. 7-13.

51. Литвин В.Ю., Нушкарева В.И. О вероятном механизме поддержания вирулентности бактерий в почвенных и водных сообществах. М., 1994. -С. 24-35.

52. Литвин В.Ю. // Успехи соврем, биологии. 2003. - №6. - G. 543.

53. Лопатина Д.Г., Бляхер А.А., Николаенко Л.О. Проблемы химиопрофилактики, химиотерапии эндогенных инфекций и дисбактериоз // Вестн. РАМН. 1997. - №4. - С.26-30.

54. Маккреди Б.Дж., Чимера Д.А. Обнаружение и идентификация патогенных: микроорганизмов молекулярными методами. Молекулярная клиническая^ диагностика^Методы; Mh Млр; L999i G. 496-506.

55. Миллер Г.Г. Биологическое значение ассоциаций; микроорганизмов // Клиническая микробиол. — 2000. №2.— С. 45.

56. Навашин С.М., Чучалин А.Г., Белоусов Ю.Б. Антибактериальная терапия пневмоний у взрослых: Учеб. пособие / С.М. Навашин, А.Г. Чучалин, Ю.Б. Белоусов. — М., 1998. — С. 28.

57. Наумкина Е.В., Наумкина Н.В. Рудакова Л.В. Белкина В.М. Иванова Т.С. Микроэкология женских половых путей при урогенитальном кандидозе // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.-М. 2002.- С.329.

58. Наумова А.Б., Шашков A.C. // Биохимия. 1997. - Т. 62. - С. 947-982

59. Несвижский Ю.В., Воробьев A.A., Белоносов С.С. Анализ простых межмикробных взаимоотношений в микробиоценозе толстой кишки человека // Вестник РАМН.-1997.-№3.-С.23-26.

60. Плотников А.О., Немцева Н.В. Бухарин О.В. Персистентные свойства бактерий ассоциантов простейших // Микробиология. - 2002. - №4. - С. 60.

61. Потатуркина-Нестерова Н.И., Гладинец A.M. Микромицеты Aspergillus flavus и их воздействие на макроорганизм. Ульяновск. — УлГУ. - 2003. — 204 с.

62. Проворов Н.А. Генетико-эволзоционные основы учения о симбиозе // Журн. общ. биологии. 2001. - Т. 62. - С. 472-495.

63. Пушкарева В.И. Паразитизм в простейших как стратегия существования патогенных бактерий в почвах и водоемах // Успехи совр. биологии. -2006.-№4.-С. 323-332.

64. Пушкарева В.И. Листерии и эризопилотриксы в ассоциации со свободноживущими простейшими // Микробиология. 1996. - №5. — С.93-94.

65. Пушкарева В.И. Экспериментальная оценка взаимодействия Yersinia pestis EV с почвенными инфузориями и возможности длительного сохранения бактерий в цистах простейших // Микробиология. 2003. -№4. - С.40-44.

66. Пушкарева В.И., Величко В.В., Каминская А.А. // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. 2005. - №3. - С.39.

67. Пушкарева В.И., Емельяненко Е.Н., Диденко Л.В. Покоящиеся формы Yersinia pseudotuberculosis при взаимодействии с сине-зелеными водорослями и их экзометаболитами (популяционная динамика и ультраструктура) // Микробиология. 1998. - №5. - С.9-13.

68. Пушкарева В.И., Константинова Н.Д., Литвин В.Ю. Анализ механизмов межпопуляционного взаимодействия иерсиний с инфузориями

69. Tetrahymena piriformis на клеточном и субклеточном уровнях // Микробиология. 1990. - №1. - С.3-9.

70. Пушкарева В.И., Литвин В.Ю., Тартаковский И.С. // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. 1989. - №1. - С. 17.

71. Реброва Р.Н. Грибы рода Candida при бактериальных инфекциях.- М.: Медицина,- 1979.- 256 с.

72. Резцова Ю.В. Изучение этиологии пневмоний, острых бронхитов и ОР // Материалы 7 Национального конгресса по болезням органов дыхания. -Москва. 1997. - С. 600.

73. Рыбальченко О.В., Бондаренко В.М., Вербицкая Н.Б. Проявление антагонистического действия бактериоциногенных Lactobacillus acidophilus на клетки Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii и Proteus mirabilis II Микробиология. 2006. - №7. - С. 8-11.

74. Смолянская А.З., Дмитриева П.В., Нуммаев Б.Г., Коротков A.M. Оппортунистическая инфекция у онкологических больных // Современная микология в России: Тез. докл. 1 съезда микологов России.-М. 2002.- С.375-376.

75. Солохина Л.В., Пушкарева В.И., Литвин В.Ю. Образование покоящихся форм и изменчивость Yersinia pseudotuberculosis под воздействием сине-зеленых водорослей (цианобактерий) и их экзометаболитов // Микробиология. -2001. №3. - С. 17-22.

76. Сорокин А.А., Федорова Е.Р. Диагностика^ и лечение дисбактериоза кишечника. Казань.: Казан, гос. ун-т усовершенств. врачей им. В.И.Ленина, 1990. - 37 с.

77. Степанских А.С. Общая экология. М., ЮНИТИ-ДАНА. 2000.

78. Степная О.А., Бегунова Е.А., Лысанская В.Я., Кулаев И.С. // Биохимия. -2003. т. 68. - вып. 7. - С. 896-901.

79. Степная О.А., Цфасман ИМ., Чайка И. А., Муранова Т.А., Кулаев И.С. // Биохимия. 2008. - т. 73. - вып. 3. - С. 381-387.

80. Тец В.В. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1997.-№1.-С.106-111.

81. Тимченко Н.Ф. Подходы к изучению биохимической экологии патогенных бактерий // Пробл. инфекц. патол. В регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера. Новосибирск. - 1998. - С.74-75.

82. Фиалкина С.В. Генетические детерминанты патогенности клинических штаммов Klebsiella pneumoniae'. Автореф. диссертации . кандидата биологических наук. 2004. - С. 20.

83. Хидоятива JI.H., Нусратуллаев С.Н., Лазарева Н.И., Арщинова Г.С., Филяндская О.Г. Особенности течения сальмонеллезной инфекции в сочетании со стафилококковым заболеванием у детей // Мед. журн. Узбекистана. 1980. - №7. - С. 18-21.

84. Циммерман Я.С. О сущности понятия «дисбактериоз» («Дисбиоз кишечника») и о правомерности использования этого термина // Рос. журн. гастроэнтерол., гепетол., колопроктол. 2000. - № 1. С. 81-84.

85. Циммерман Я.С. Язвенная болезнь и проблема H.pylori: новые факты, размышления, предположения // Клинич. мед-на. 2001. - № 4. - С. 6770.

86. Черкасов С.В., Забирова Т.М., Сгибнев А.В. Изменение биологических свойств Staphylococcus epidermidis и Escheridiia coli под влиянием метаболитов лактобацилл в эксперименте // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.- 2001.-№4.- С. 114-116.

87. Шарова И.Х. Зоология беспозвоночных: учебник для студ. высш. уч. Заведений. М.: Гумманит. изд. центр ВЛАДОС. - 2002.

88. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.- М.: Издательство ГРАНТБ.- 1998.- Т.1.- 288с.

89. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание." М.: Издательство ГРАНТБ.-1999.- Т.2.- 416 с.

90. Языкова И.М. Методическое пособие по самостоятельной работе по специальному курсу паразитология. Ростов-на-Дону.: Изд-во Феникс. -2005.

91. Abe N, Wu Z, Yoshikawa H. Molecular characterization of Blastocysts isolates from primates // Veterinary Parasitology. 2003. - V. - 113. - P.321-325.

92. Abe N., Nagoshi M. A survey of Blastocysts sp. In livestock, pets, and zoo animals in Japan // Vet Parasitol. 2002. - V. 106(3). - P. 203-212.

93. Akao N., Ohyama T., Ohkawa T., Kondo K., Hirokawa Y., Ito S., Takeguchi A., Matsuzaki M. A survey of intestinal parasites of the foreign laborers (Indonesians and Filipinos) in Ishikawa Prefecture // Kansenshogaku Zasshi. -1992. V.66. - P.1256-1261.

94. Albrecht H., Stellbrink H.J., Koperski K., Greten H. Blastocysts hominis in human immunodeficiency virus related diarrhea // Scand. J. Gastroenterol. -1995. - V.30.-№ 9.-P.909-914.

95. Al-tawil YS, Gilger MA, Gopalakrishna GS, Langston C, Bommer KE. Invasive Blastocysts hominis infection in a child // Archives of Pediatrics and Adolesccents Medicales. 1994. -V. 148. - P. 882-885.

96. Amin A.M. B.hominis among apparently healthy food handlers in Jeddan // J. Egypt.Soc.Parasitol. 1997. - V.27. - P.817-823.

97. Amin O.M. Seasonal prevalence of intestinal parasites in the United States during 2000. // Am. J. Trop. Med. Hyg. -2002. V. 66(6). - P. 799-803.

98. Anderson TJC, Su XZ, Bockarie M, Lagog M, Day KP. Twelve microsatellite markers for characterization of Plasmodium falciparum from fingerprick blood samples // Parasitology. 1998. - V. 119. - P. 113-125.

99. Andrews BJ, Mentzoni L, Bjorvatn B. Zymodeme conversion of isolates of Entamoeba histolytica II Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 1990. - V. 84. - P. 63-65.

100. Andrews RH, Chilton NB. Multilocus enzyme electrophoresis: a valuable technique for providing answers to problems in parasite systematics // International Journal for Parasitology. 1999. - V. 29. - P. 213-253.

101. Andrews RH, Mayrhofer G, Chilton NB, Boreham PFL, Grimmond TR. Changes in allozyme pattern of the protozoan parasite Giardia intestinalis I I International Journal for Parasitology. 1992. - V. 22. - P. 403-406.

102. Ann Trop Med Parasitol. 1997. - № 2. - P. 223-224.

103. Arienti H. Prevalence of enteroparasites in a residence for children in the Cordoba Province, Argentina // Eur. J. Epidemiol. 2000. - V.16. - P.287-293.

104. Arisue N, Hashimoto T, Yoshikawa H. Sequence heterogeneity of the small subunit ribosomal RNA genes among Blastocystis isolates // Parasitology. -2003.-V. 126.-P. 1-9.

105. Arribas J.M., Fernandes G.H. Acute infectious lymphocytosis associated to Giardia lamblia and Blastocystis hominis coinfection // An. Esp. Pediatr. -2001. V. 54(5). - P: 518-520.

106. Babb RR, Wagener S. Blastocystis 'hominis a potential intestinal pathogen // Western Journal of Medicine. 19891 - V. 151. - P. 518-5191

107. Babcock D, Houston R, Kumaki D, Shlim D. Blastocystis hominis in' Kathmandu, Nepal' // The New England Journal of Medecine. 1985. - V. 313. -P: 1419.

108. Bailey A. Adherence of Candida albicans to Human Buccal Epithelial Cells: Host-Induced Protein Synthesis and Signaling Event //Infect, and Immun. -1995.-P.569-572.

109. Bartolomé R, Tórtola MT, Blanch E, Server T, Nogueiras C. Blastocystis hominis en pacientes alérgicos // XIV Congreso Nacional de Microbiología. Zaragoza. 1993. - P. 165.

110. Bassily S. Potential clinical significance of Blastocystis hominis in Egypt // Soc. Trop. Med. Hyg. 1990. - V.84. - P.695.

111. Bienenstock J., Ernst P.B., Underdown B.J. The gastrointestinal tract as an immunologic organ state of the art // Ann. Allergy. - 1987. - V. 59. - P. 1720.

112. Bird RG, Ellis DS. A comparison of the outer layers of Blastocysts Hominis with the cyst walls of certain common intestinal protozoa // Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 1971. - V. 65. - P. 429.

113. Biteau N, Bringaud F, Gibson W, True P, Baltz T. Characterization of Trypanozoon isolates using a repeated coding sequence and microsatellite markers // Molecular and Biochemical Parasitology. 2000. - V. 105. - P. 185-201.

114. Bojanowicz K. Pathogenese der Ulkuskrankheit mit besonderer Berücksichtigung eigener Untersuchungen uder die Rolle der Nebennierenrindendishormonose// Zschr. inn. Med., 1982, №13, S. 605-609.

115. Boom R., Sal C J., Salimans M.M., Carniel E., Vandeic B., Rainolds C. Rapid and simple method for purification of nucleic acids // J Clin Microbiol. 1988. -V. 28.-495-503 p.

116. Boreham P., Stenzel D. Blastocysts in human and animals: morphology, biology and epizootiology // Adv. Parasitol. 1993. - V.32. - P.61-70.

117. Boreham P.F., Dunn L.A., Upcrofit S.A-. Protein and DNA evidence for two demes of B. hominis from humans // Int. J. Parasitol. 1992. - V.22. - № 1. — P.49-53.

118. Boreham PFL, Stenzel DJ. The current status of Blastocysts hominis II Parasitology Today. 1993. - V. 9. - P. 251.

119. Boreham RE, Benson S, Stenzel DJ, Boreham PFL. Blastocystis hominis infection // The Lancet. 1996. - V. 348.- P. 272-273.

120. Botet JP, Auguet T, Rubiés- Prat J. Blastocystis hominis: A controversial enteric protozoon // Clinical Gastroenterology. 1992. - V. 1. - P. 88.

121. Brumpt E. B.hominis, sp. et formes voisines //Bull; Soc. Pathol. Exot. 1912. - V.5.-P.725-730.

122. Camli G.vBlum Ji Hymenolépis «£3rA7£7. 45-year-old refugee the-Kosovo region with epigastric pain and detection of Hymenolepis nana: and Blastocystis hominis¡miihe stoolf// Int: JÍ SI®; AIDS: 1999: - Volt .10:- P: 780-784;.

123. Cammarota H., Ogava M. Helicobacter pylori, gastric ulcer, and agents noxious to the gastric mucosa // Kansenshogsku Zasshi. 1998.- V. 67. - №9. -P. 781-784. ! /

124. Carbajal J.A., del-Castillo E., Lanusa M.D., Villar J., Borras R. Karyotypic diversity among Bchominis isolates // Int. J. Parasitol. 1997. — V.27. -№ 8. -P.941-945.

125. Carbajal J.A., Villar J., Lanuza M. D. Significación clinica de la infección por B.hominis: estudio epidemio epidemiológico // Med. Clin. Bare. 1997. -V.108. - P.608-612

126. Carbajal JA. Estudio morfofuncional? úq Blastocystis hominis Bmmpt; 1912: evidencias cromosómicas y enzimáticas dé la existencia de diferentes poblaciones. 1996. - P. 119.

127. Carlson E. Effect of strain of Staphylococcus aureus on synergism with Candida albicans resulting in mouse mortality and morbidity // Infect. Immun.- 1983.- V. 42(1).-P. 285-292.

128. Carrascosa M, Martinez J, Perez-Castrillön JL. Hemorrhagic Proctosigmoiditis and Blastocystis hominis Infection // Annals of Internal Medicine. 1996. - V. 124. - P. 278-279.

129. Casemore DP, Armstrong M, Jackson FB. Clinical relevance of Blastocystis hominis II The Lancet. 1984. - V. 1. - P. 1234.

130. Cassidy M., Stenzel D., Boreham P. Electron microspory of surface structures of Bl. sp. from different hosts // Parasitology. 1994. - V.80. - P.505-511.

131. Chen J, Vaudry WL, Kowalewska K, Wenman WM. Lack of serum immune response to Blastocystis hominis II The Lancet. — 1987. P. 1021.

132. Chen XQ, Singh M, Howe J, Ho LC, Tan SW, Yap EH. In vitro encystation and excystation of Blastocystis ratti II Parasitology. 1999. - V. 118. — P. 151160.

133. Church D.L., Sutherland L.R., Gill M.J., Visser N.D., Kelly J.K. Absence of an association between enteric parasites in the manifestations and pathogenesis of HIV enteropathy in gay man // Scand. J. Infect. Dis. 1992. - V.24. - № 5. -P.567-575.

134. Cimerman S., Cimerman B., Lewi D.S. Prevalence of intestinal parasitic infections in patients with acquired immunodeficiency syndrome in Brazil // Int. J. Infect. Dis. 1999. - V.3. -№ 4. -P.203-206.

135. Cirioni O., Giacometti A., Drenaggi Dv Ancarani F., Scalise G. Prevalence and clinical relevance of Blastocysts hominis in diverse patient cohorts // Eur. J. Epidemiol. 1999. - V.15. - P.389-393.

136. Clark C.G. Extensive genetic diversity in Blastocysts hominis II Mol. Biochem. Parasitol. 1997. - V.87. - P.79-83.

137. Clark CG, Diamond LS. Methods for cultivation of luminal parasitic protists of clinical importance // Clinical Microbiology Reviews. 2002. - V. 15. - P. 329-341.

138. Clark CG. Cryptic genetic variation in parasitic protozoa // Journal Medical Microbiology. 2000. - V. 49. - P. 489-491.

139. Cohen AN. Ketoconazol and Resistant Blastocysts hominis Infection // Annals of Internal Medicine. 1985. - V. 103. - P. 480-481.

140. Collins W. II Appl. Environ. Microbiol. 1999. - V.71. - P. 4628.

141. Conen D, Gerber A, Dubach UC. Prävalenz von Blastocysts hominis bei Asylbewerbern II Deutsche medizinische Wochenschrift. 1987. - V. 112. -P. 1477.

142. Cotte C., Blum J. Hymenolepis nana. 45-year-old refugee from the Kosovo region with epigastric pain and detection of Hymenolepis nana and Blastocysts hominis in the stool // J. STD AIDS. 1993. - V. 10. - P.780-784.

143. De Vos R. J., De Boer W.A., Haas F.D. Is there a relationship between psoriasis and coeliac disease? // J. Intern. Med. 1995. - P. 237:118.

144. Debat Zoguereh. Postcystis development of Blastocystis hominis II Parasitol.Res. 1995. - V.85. - P.437-440.

145. Dellers EA, Dunn JC, DeSantis P, Aronchick CA. Identification of Blastocystis hominis by colonic brush cytology. A case-report // Acta Cytologica. 1992. - V. 36. - P. 757-758.

146. O.Deloul AM. Blastocystis hominis: nouveau parasite pathogène? Il Feuillets De Biologie. 1993. - V. 34. - P. 37-40.

147. Demling L., Lux G. Ulcus duodeni Internistische Behandlung, Erfolge und Grenzen. // Chirurg, 1982. - №1. - S. 1-8.

148. Devera R, Requena I, Velasquez V, Castillo H, González R. Cerdos como reservorios de Blastocystis spp. en una comunidad rural del Estado Bolívar, Venezuela // Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 1999. — V. 17.-P. 422.

149. Devera R., Azacon B., Jimenez M., Punos G;N., Velasquez V.J., Catenese J A., Meneses R.G. Blastocystis hominis in patients at the Ruiz y Paez University Hospital from Bolivar City, Venezuela // Bol. Chil. Parasitol. -1998. V.53. -P.65-70.

150. Doyle P.W., Helgason M.M., Russo A.R., Stoun S.L., Taplin M.E. Epidemiolodgy and pathogenicity of Blastocystis hominis // J. Clin; Microbiol. -1990.-V.28.-P.115-121.

151. Duda A., StenzeÍ D.J., Boreham P.P., Shiotani A., Graham D.Y. Detection of Blastocystis-sp. in domestic dogs and cats // Vet. Parasitol.-l 998.-V.31 -P.9-17.

152. Dunn L.A., Boreham P.E., Stenzel D.S. Ultrastrutural variation of Blhominis stocks in culture // Int. J. Parasitol. 1989. - V.19. - P.43-56.

153. Dunn LA, Boreham PFL. The in-vitro activity of drugs against^ Blastocystis hominis II Journal of Antimicrobial Chemotherapy: 1991. - V. 271 — P. 507516. ' ■ . '.■•••■"

154. Editorial. Blastocystis hominis: comensal* or pathogen? // The Lancet. 1991. -V. 337.-P. 521-522.

155. El Masry NA, Bassily S, Farid Zl; Blastocystis hominis: clinical and , therapeutic aspects // Transactions of the Royal Society of Tropical Medicineand Hygiene. 1988. - V. 82. - P. 173.

156. Escobedo A., Nunez F.A. Blastocystis hominis infection in Cuban AIDS patientis II Med: Inst. Oswaldo Cruz. 1997. - V.92. - № 3. - P.321-322.

157. Espinoza L.Rl, van Solingen R. Insights into the pathogenesis of psoriasis and psoriatic arthritis //Am; J: Medl Sci. 19981 - V. 316. -P. 271-276.

158. Estlinbaum T., Halts Ch. 50-year-old patient returning from Hawaii with changed stool habits Blastocysts hominis II Schweiz. Rundsch. Medí Prax. — 2002.-V. 22.-P. 936-938.

159. Fitch WM, Margoliash E. Construction of phylogenetic trees // Science. -1967.-V. 155.-P. 279-284.

160. Fitzsimmons S. // J. Med. Microbiol. 1994. - Y.36. - P. 303.

161. Fleta Zaragozano J, Bueno Lozano M. La infección por Blastocysts Hominis en el niño //Pediatría Rural. 1996. - V. 16. - P. 259-264.

162. Fleta Zaragozano J, Clavel Parrilla A, Castillo García FJ, Bueno Lozano M, Sarria Chueca A. Blastocysts hominis y dolor abdominal en la infancia // Anales Españoles de Pediatría. 1993. - V. 38. - P. 13-16.

163. Gabriel O. Locating enzymes on gels // Methods in Enzimology. 1971. - V. 22.-P. 578-604.

164. Galantowicz BB, Illueca MD, Levy J, Rayburn JL, Weinstock DJ. Neonatal Blastocysts hominis diarrhea // The Pediatric Infectious Disease Journal. -1993.-V. 12.-P. 345-347.

165. Gallagher PG, Venglarcik JS. Blastocysts hominis enteritis // Pediatric Infectious Disease. 1985. - V. 4. - P. 556-557.

166. Garavelli P. Blastocysts: a new disease in the acquired immundeficiency syndrom//Int. S. STD. AIDS.- 1990.-P.134-135.

167. Garavelli P., Scaglione L., Bicocchir R., Libanere M. Genomic polymorphism among B.hominis strains and development of subtype-specific diagnostic primers //Mol. Cell. Prob. 1998. - V.12. -№ 3. -P.153-159.

168. Garavelli P., Scaglione L., Rossi M.1, Bicocchir R., Libanere M. Blastocystis: a new disease in patients with leikemia // Haematologica.-1991.-V.76.-P.76-80.

169. Garavelli P., Scaglione L., Rossi M., Bicocchir R., Libanere M. Blastocystis in Italy // Ann. Parasit, hum. comp. 1989. - V.64. - P.391-395.

170. Garavelli P.L. The therapy of blastocystosis // J. Chemother. 1991. V. 3. -Suppl. 1.-P. 245-246.

171. Garavelli PL, Libanore M, Scaglione L. La Blastocistosi (Prospezioni tassonomiche e patologiche) // Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. -1989.-V. 41.-P. 467-468.

172. Garavelli PL, Orsi P, Scaglione L. Blastocystis hominis infection during AIDS // The Lancet. 1990. - V. 2. - P. 1364.

173. Garavelli PL, Scaglione L, Bicocchi R, Libanore M. Pathogenicity of Blastocystis hominis II Infection. 1991. - V. 19. - Pi 185.

174. Garavelli PL, Scaglione L, Merighi A, Libanore M. Endoscopy of blastocystosis (Zierdt-Garavelli Disease) // Italian Journal of Gastroenterology.- 1992. -V. 241 P. 206.

175. Garavelli PL, Scaglione L. Blastocystis hominis II Rivista.di Parassitologia. -1988.-V. 5.-P. 2-11.

176. Garavelli PL, Scaglione L. Blastocystosis. An epidemiological study // Microbiologics 1989. - V. 12. - P. 349-350.

177. Garavelli PL, Zierdt CH, Fleisher TA, Liss H, Nagy B. Serum antibody detected by fluorescent antibody test in patients whith symtomatic Blastocystis hominis infection // Recenti Progressi in Medicina. 1995. - V. 86. - P. 398400.

178. Garavelli PL. Blastocystosis or Zierdt-Garavelli disease // La Presse Médicale.- 1996. -V. 16.-P. 777.

179. Garavelly P., Scaglione L. Blastocystis hominis and blastocystosis // Ital. J.Gastroenterol. 1993. - V.25. - P.33-36.

180. Garcia LS, Bruckner DA, Clancy MN. Clinical relevance of Blastocystis hominis II Lancet. 1984. - V. 2. - P. 1233-1234.

181. García Pascual L, Bartolomé Comas R, Cuenca Luque R, San José Laporte A. Enteritis por Blastocystis hominis II Medicina Clínica (Barcelona). 1988. — V. 91.-P. 797.

182. García-Martos P, Benjumeda M. Blastocystis hominis II Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 1992. - V. 10. - P: 421-424.

183. Gasser RB. PCR-based1 technology in veterinary parasitology // Veterinary Parasitology. 1999. - V. 84. - P. 229-258.

184. Gericke AS, Burchard GD, Knoblock J, Walderich B. Isoenzyme patterns of Blastocystis hominis patient isolates, derived from symptomatic and healthy carriers // Tropical Medicine and International Health. 1997. - V. 2. - P. 245-253.

185. Giacometti A, Cirioni O, Fiorentini A, Fortuna M, Scalise G. Irritable bowel syndrome in patients with Blastocystis hominis infection // European Journal Clinical of Microbiology and Infectious Diseases. 1999. - V. 18. - P. 436439.

186. Gibson T.M., Klary E.H., Norton B.B., Temros J.H., Cassidy G.R., Praston V.D. The microbiota of the gastrointestinal tract // Gastroenterology. 1994. — V.51. - №5. -P.808-815.

187. Grimont PAD. "Taxotron package: users manual" (2nd ed.). Institut Pasteur, Paris.-1996.-P. 1-48.

188. Grisard EC, Campbell DA, Romanha A J. Mini- exon sequence polymorphism among Trypanosoma rangeli strains isolated fron distinct geographical regions // Parasitology. 1999. - V. 118. - P. 375-382.

189. Guignard S, Arienti H, Freyre L, Lujan H, Rubinstein H., Frasi M. Prevalence of enteroparasites in a residence for children in the Cordoba province, Argentina // European Journal of Epidemiology. 2000. - V. 16. - P. 287293.

190. Haldane DJM. The role of Blastocysts hominis in enteric disease // The Nova Scotia Medical Journal. 1988'. - V. 67. - P. 33-34.

191. Haresh K, Suresh K, Khairul Anuar A, Saminathan S. Isolate resistance of Blastocysts hominis to metronidazole // Tropical Medicine and International Health. 1999. - V. 4. - P. 274-277.

192. Harms G, Dörner F, Bienzle U, Stark K. Infections and diseases after travelling to tropical and subtropical areas // Deutsche medizinische Wochenschrift. 2002.-V. 127. -P. 1748-1753.

193. Harris H, Hopkinson DA. Handbook of enzyme electrophoresis in human genetics. North Holland Publishing Co. Amsterdam. 1976. - P. 239.

194. Hayakowa V., Howe J., Hg M. Variation in the cysts morphology of B.hominis II Parasitoses. 1996. - V.83. - P.306-308.

195. Hellard M.E., Sinclair M.I., Hogg G.G., Fairley C.K. Prevalence of enteric pathogens among community based asymptomatic individuals // J. Gastroenterol. Hepatol. 2000. - V.15. - P.290-304.

196. HerwaldtBL, De Arroyave KR, Wahlquist SP, De Merida AM, Lopez AS, Juranek DD. Multiyear prospective study of intestinal parasitism in a cohort of peace corps volunteers in Guatemala // Journal of Clinical Microbiology. -2001.-V. 39.-P. 34-42.

197. Ho L.C., Singh M., Suresh K., Ng G.C., Yap E.H., Hogg G.G., Fairley C.K. Prevalence of enteric pathogens among community based asymptomatic individuals // J. Gastroenterol. Hepatol.-1995 V.15.-P.290-304.

198. Ho LC, Armugam A, Jeyaseelan1 K, Yap EH, Singh M. Blastocystis elongation factor-la: genomic organization, taxonomy and phylogenetic relationships // Parasitology.-2000.-V. 121.-P. 135-144.

199. Ho LC, Singh M, Suresh K, Ng GC, Yap EH. A study of the karyotypic patterns of Blastocystis hominis by pulsed-field gradient electrophoresis // Parasitology Research. 1994. - V. 80. - P. 620-622.

200. Hollebeke NL, Mayberry LF. Taxonomic uncertainty and Blastocystis {Protista: Sarcodina) // Parasitology Today. 1994. - V. 10. - P. 64.

201. Horiki N, Kaneda Y, Maruyama M, Fujita Y, Tachibana H. Intestinal blockage by carcinoma and Blastocystis hominis infection // American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 1999. - V. 60. - P. 400-402.

202. Horiki N, Maruyama M, Fujita Y, Yonekura T, Minato S, Kaneda Y. Epimiologic survey of Blastocystis hominis infection in Japan // American Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 1997. - V. 56. - P. 370-374.

203. Hoskins L.S. The basic symbiotic unit: a concept of community organisation in enteric microbial ecosystems // Microb. Ecol. in Heals and Disease. 1994.-V. 7. - 35-55.-P.41.

204. Hussai B.L., de Arroyave K.R., Drlmont J., Faugere B., Bourgeade A. Multiyear prospective study of intestinal parasitism in a cohort of Peace Corps volunteers in Guatemala // J. Clin. Microbiol.-1997.-V.39.-P.34-42.

205. Jacobson RL, Doyle RJ. Lectin-parasite interactions // Parasitology Today. -1996.-V. 12.-P. 55-60.

206. Justin P., Sallivan K.G. II Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2000. -VI9. -P. 121.

207. Kaczmarski W. Isolation and identification of the products of Streptococcus Faecalis inhibiting mycelial transformation of Candida albicans II Med. Dosw. Mikrobid. 1999. - V. 41(3-4). - P. 192-201.

208. Kain K, Noble M. Blastocysts hominis infection in humans // Reviews of Infectious Diseases. 1989. - V. 11. - P.508-509.

209. Kain K.C., Noble M.A., Freeman H.J., Barteluk R.L. Epidemiology and clinical features associates with B.hominis II Diagn. Microbiol. Infect. Dis. -1987. V.8. - P.234-244.

210. Kaneda S.W., Ng G.C., Howe J., Ramachandran N.P., Yap E.H., Singh M. Blastocysts hominis: A simplified, high-efficiency method for clonal growth on solid agar I I Exp. Parasitol. 2000. - V.96. - № 1. - P.9-15.

211. Kaneda Y, Horiki N, Cheng XJ, Fujita Y, Maruyama M, Tachibana H. Ribodemes of Blastocysts hominis isolated in Japan // American, Journal of Tropical Medicine and Hygiene. 2001. - V. 65. - P. 393-396.

212. Kaneda Y, Horiki N, Cheng XJ, Tachibana H, Tsutsumi Y. Serologic response to Blastocysts hominis infection in asymptomatic individuals // Tokai Journal Experimental Clinical Medicine. 2000. - V. 25. - P. 51-56.

213. Kapteyn, J.C., Van Den Ende, H., Klis, F.M. // Biochim. Biophis. Acta. -1999. V.1426. - P. 373- 383.

214. Katz D.E., Taylor D.N. Parasitic infections of the gastrointestinal tract. // Gastroenterol. Clin. North. Am. 2001. - V. 30(3). - P. 797-815.

215. Keenan T., Cleghorn R., Zierdt C.H., Huang C.M., Glaziou P., Hocquet D. B.hominis is a new desease // Biochem. J.-1992—V.289-P.l-7.

216. Keenan T.W., Zierdt C.H. DNA polymorphism reveales by arbitrary primers polymerase chain reaction among Blastocysts strains isolated from humans, achicken and a reptile // J. Eukaryot. Microbiol. 1996. - V.43. - №2. -P.127—130.

217. Keenan TW, Huang CM, Zierdt CH. Comparative analysis of lipid composition in axenic strains of Blastocysts hominis // Comparative Biochemistry and Phisiology. 1992. - V. 102. - P. 611-615.

218. Keenan TW, Zierdt CH. Lipid biosynthesis by axenic strains of Blastocysts hominis II Comparative Biochemistry and Physiology. — 1994. — V. 107. P. 525-531.

219. Keystone JS. Editorial: Blastocysts hominis and Travelers Diarrhea // Clinical Infectious Diseases. 1995. -V. 21. - P. 102-103.

220. Kivilaakso E. High plasma HC03-protects gastric mucosa in acute ulceration in the rat. II Gastroenterol.-198l.-V.81.-№5.-P.921-927.

221. Kleessen F.M., Görden T.V., Cantonelly G.I;, Faycii D.S., Spriden H.K., Tortiny D.J., Cowart A.O. Human normal and abnormal gastrointestinal flora // Am J ClinNutr.-1995.-V.23.-№11.-P.1433-1439.

222. Klis F.M. // Yeast. 1994: - № 10. - P.851-869.

223. Kobayashi J., Hasegawa. H., Forli A.A., Nishimura N.F., Yamanaka A., Shimabukuro T., Sato Y. Prevalence of intestinal parasitic infection in five farms in Holambra, San-Paulo, Brazil // Rev. Inst. Med. Trop. 1995. - V.37. -P.13-18.

224. Konig G. B.hominis in animals: incidence of four serogroups // Zentral. Bacteriol. 1997. - V.286. - № 3. - P.435-440.

225. Krech T, Mai Nguyen X, Spicher H. Blastocysts hominis im stuhl II Schweizerische Medizinische Wochenschrift. 1990. - V. 120. -P. 742-744.

226. Kruger K., Kamilli I. B.hominis als seltener arthritogener Erreger II Z. Rheumatol. 1994. - V.53. - № 2. - P.83-85.

227. Kukoschke KG, Müller HE. SDS-PAGE and immunological analysis of different axenic Blastocysts hominis strains // Journal of Medical Microbiology. 1991. -V. 35. - P. 35-39.

228. Kukoschke KG, Necker A, Müller HE. Detection of Blastocystis hominis by direct microscopy and culture // European Journal of Clinical Microbiology and Infections Diseases. 1990. - V. 9. - P. 305-307.

229. Lakhanpal S, Cohen SB, Fleischmann RM. Reactive arthritis from Blastocystis hominis II Arthritis and Rheumatism. — 1991. V. 34. - P. 251253.

230. Landry P., van Saanen M. Routine cases in intestinal parasitology // Schweiz Med. Wochenschr. 1997. - V.29. - P.535-540.

231. Lanusa M.D. Description of an improved metod for B.hominis culture and axenizationII Parasitol. Res. 1997. - V.83. -№1. - P:60-63.

232. Lanusa M.D., Carbajal J.A., Borras R., Boccardo G., De Prisco O., Ettari G. Identification of surface coat carbohydates in Blastocystis hominis by lectin probes // Int J Parasitol. 1996. - V.26.-№5.-P.527-32.

233. LanuzaMaD, Carbajal JA, Villar J, Borräs R. Blastocystis hominis, patögeno intestinal II Anales de Medicina Interna (Madrid). 1997. - V. 14. - P. 490.

234. Lanuza MaD, Carbajal JA, Villar J, Mir A, Borräs R. Soluble-protein and antigenic heterogeneity in axenic Blastocystis hominis isolates: pathogenic implications II Parasitology Research. 1999. - V. 85. - P. 93-97.

235. Lanuza MaD. Estudio.de la estructura antigenica de Blastocystis hominis II Tesis Doctoral. Universidad de Valencia. 1994. - 123 p.

236. Larrosa-Haro A., Ruiz-Perez M. Utility of studying feces for the diagnosis and management of infants and preschool children with acute diarrhea // Salud. Publica. Mex. 2002. - V. 44(4). - P. 328-334.

237. LeBar WD, Larsen EC, Patel K. Afebrile diarrhea and Blastocystis hominis II Annals of Internal Medicine. 1985. - V. 103. - P. 306.

238. Lebbad M., Norrgren H., Naucler A. Intestinal parasites in HTV-2 associated AIDS cases with chronic diarrhoea in Guinea-Bissau // Acta. Trop. 2001. -V. 80(1). - P. 45-49.

239. Lee J.D., Wang J.J., Chung L.Y. A survey on the intestinal parasites of the school children in Kaohsiung country // Kaohsiung. J. Med. Sci. 2000. - V. 16(9).-P. 452-458.

240. Lee M.G., Rawlins S.C., Jensen B., Kepley W., Guarner J. Infective arthritis due to B.hominis II Rheum. Dis. 1990. - Vol.49. - P.192-193.

241. Lee MG, Stenzel DJ. A survey of Blastocystis in domestic chickens // Parasitology Research. 1999. - V. 85. - P. 109-117.

242. Lee MJ. Pathogenicity of Blastocystis hominis II Journal of Clinical Microbiology. 1991. - V. 29. - P. 2089.

243. Legesse M., Erko B. Zoonotic intestinal parasites in Papio anubus (baboon) and Cercopithecus aethiops (vervet) from four localities in Ethiopia // Acta. Trop. 2004. - May. - V. 90(3). - P. 231-236.

244. Levy Y, George J, Shoenfeld Y. Severe Blastocystis hominis in an elderly man II Journal of Infection. 1996. - V. 33. - P. 57-59.

245. Libre J.M., Tor J., Manterola J.M., Cabonell C., Faz M. B.hominis chronic diarrhea in AIDS patients // Lancet. 1989. - № 1. - P.221.

246. Liu C, Vigdorovich V, Kapur V, Abrahamsen MS. A random survey of the Cryptosporidium parvum genome // Infection and Immunity. 1999. - V. 67. -P. 3960-3969.

247. Llorente M.T., Clavel A., Varea M. Evaluation of an immunochromatographic dip-strip test for the detection of Cryptosporidium oocysts in stool speciments // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2002. - Aug. - V. 21(8). - P. 624-625.

248. Lloyd D. Obligate anaerobe or not? //Nature. 1996. - V. 381. - P. 121.

249. Logar J, Andlovic, Poljsak-Prijatelj M. Incidence of Blastocystis hominis in patients with diarrhoea// Journal of Infection. 1994. - V. 28. - P. 151-154.

250. Long H.Y., Handschack A., Konig W., Ambrosch A. Blastocystis hominis modulates immune responses and cytokine release in colonic epithelial cells // Parasitol. Res.-2001,-Dec.-V. 87(12).-P. 1029-1030.

251. Mac Cleur H.M., Strobert E.A., Healy G.R., Anderson K., Clairmont J. The B.hominis. -New York. 1998. - V.36. - №21. - P. 236-241.

252. Mac Pherson D.W., Mac Gueen W.M. Morphological diversity of B.hominis in sodium acetate-acetic acid-formalin-preserved stool samples stained with iron hematoxylin // J. Clin. Microbiol. 1994. - V.32. - № 1. - P.267-268.

253. Machado Motta MC, Soares MJ, de Souza W. Intracellular lectin-binding sites in symbiont-bearing Crithidia species // Parasitology Research. 1993. - V. 79.-P. 551-558.

254. Maco Flores V., Marcos R. Distribution of entero-parasitic infections in theperuvian highland: study carried out in six rural communities of thedepartment of puno, Peru. // Rev. Gastroenterol. Peru. 2002. - Oct-Dec. -V. 22(4).-P. 304-309.

255. Maggi P., Brandonisio O. Intestinal protozoa in HIV-infected patients in Apulia, South Italy // Epidemiol Infect. 1999. - V. 123. - P.457-462.

256. Mai Nguyen X, Krech T. Blastocystis hominis, ein parasitärer Durchfallerreger // Schweizerisch Medizinische Wochenschrift. 1989. - V. 119.-P. 457-460.

257. Makihira S., Nicawa H., Taraagami M. Bacterial and Candida adhesion to intact and denatured collagen in vitro/ et.al.// Mycoses.- 2002.- V. 45.- P.389-392.

258. Mansour M.J., Poucell S., Patherton J., Valencia P. The B.hominis. New York, 1995.-236 P.

259. Mansour NS, Mikhail EM, El Masry NA, Sabiy AG, Mohareb EW. Biochemical characterisation of human isolates of Blastocystis hominis II Journal of Medical Microbiology. 1995. - V. 42. - P. 304-307.

260. Markell E.K., Udkow M.P. B.hominis Pathogen or fellow traveller // J. Trop. Med. Hyg. 1986. - V.35. - P.1023-1026.

261. Markell EK, Udkow MP. Association of Blastocystis hominis with human disease // Journal of Clinical Microbiology. 1988. - V. 26. - P. 609-610.

262. Markell EK. Editorial: Is there any reason to continue treating Blastocystis infections? // Clinical Infectious Diseases. 1995. - V. 21. - P. 104-105.

263. Marks J.N., Wright J.P., Lücke W., Austin E.H., Austin G.E. Relapse rats following initial ulcer healing with sucralfate and Cimetidine. // Scand. J. Gastroenterol., 1983. V. 18. - suppl. 83. - P. 53-56.

264. Marks J., Shuster S. Small-intestinal mucosal abnormalities in various skin diseasea fact or fancy? // Gut. - 1970. - V. 11. - P. 281-291.

265. Mathewson I.I., Salameh B.M., DuPont G.L., Jaing Z.D., Nelson A.S., Arduino R. Variation in the cysts morphology of B. hominis II Parasitol.Res. -1998. V.83. — P.306-308.

266. Matsumoto I., Iamada M., Ioshida I. Light microscopical appearance and ultrastructure of B.hominis, an intestinal parasite of man // Zentral. Bakteriol. Mikrobiol. Hyg. 1987. - V.264. - P.379-385.

267. Mehlhorn H. Blastocystis hominis, Brumpt 1912: are there different stages or species? II Parasitology Research. 1988. - V. 74. - P. 393-395.

268. Mendes U. // Klinische Pathophysiologie.-Stuttgert-New York.-1994.-P.864-900.

269. Mercado R., Arias B. Blastocystis hominis', frequency of infection in ambulatory patients from the northern section of Santiago, Chile // Bol. Chil. Parasitol. 1991. - V.46. - P.30-32.

270. Mercado R., Otto J., Perez M., Jimenes M. Seasonal variation of intestinal protozoa infections in outpatients of the north section of Santiago, Chile // Bol. Chil. Parasitol. 1999. - V.54. - P.41^17.

271. Merino JM, Hermida G, Iglesias G, Elvira AI, Álvarez T, González JB. Linfocitosis aguda infecciosa asociada a coinfección por Giardia lamblia y Blastocystis hominis II Anales Españoles de Pediatría. — 2001. — V. 54. P. 518-520.

272. Miller R.A., Minshew B.H. B.hominis an organism in search of a disease I I Rev. Infect. Dis. 1988. - V.10. - P.930-938.

273. Miller S.A., Rosaroi C.L., Rojas E. Intestinal parasitic infection and associated symptoms in children attendig day care centres in Trujillo, Venezuela // Tropical Medicine and International Health. 2003. - V. 8. -1. 4. - P.342.

274. Mirelman D, Bracha R, Chayen A. Entamoeba histolytica: effect of growth conditions and bacterial associates on isoenzyme patterns and virulence // Experimental Parasitology. 1986. - V. 62. - P. 142-148.

275. Mirelman D, Bracha R, Wexler A, Chayen A. Changes in isoenzyme patterns of a cloned culture of nonpathogenic Entamoeba histolytica during axenization // Infection and Immunity. 1986. - V. 54. - P. 827-832.

276. Moe K.T. Development of Blastocystis hominis cysts into vacuolar forms in vitro // Parasitol Res. 1997. - V.85. - №2. - P. 103-108.

277. Moe K.T., Singh M., Howe J., Ho L.C., Tan S.W., Hg G.C., Chen X.Q., lap E.H. Observations on the ultrastructure and viability of the cystic stage of B.hominis from human feces // Parasitol. Res. 1996. - V.82. - № 5. - P.439-444.

278. Moe K.T., Singh M., Howe J., Ho L.C., Tan S.W., Chen X.Q., Hg G.C., Yap E.H. Experimental Blastocystis hominis infection in laboratory mice // Parasitol. Res. 1998. - V.83. - P.319-325.

279. Moe KT, Singh M, Gopalakrishnakone P, Ho LC, Tan SW, Chen XQ, Yap EH. Cytopathie effect of Blastocysts hominis after intramuscular inoculation into laboratory mice // Parasitology Research. 1998. - V. 84. - P. 450-454.

280. Mohandas K, Sehgal R, Sud Ai, Mallas N. Prevalence of intestinal parasitic pathogens in HIV-seropositive individuals in northern India // Japanese Journal Infectious Disease. 2002. - V. 55. - P. 83-84.

281. Molet B, Werler C, Kremer M. Blastocysts hominis: improved axenic cultivation» // Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine an Hygiene. 1981. - V. 75. - P. 752-753.

282. Monis PT, Andrews RH, Saint CP. Molecular biology techniques in parasite ecology // International Journal for Parasitology. 2002. — V. 32. - P. 551562.

283. Muller H.E. Four serologically different groups within the species Blastocysts hominis II Zentralbl. Bakterioh 1994. - V.280¿ - P.403-408.

284. Muntean E, Boceat T. Observations on four atypical cases of blastocystosis // Revista1 de Igiena, Bacteriología; Virusología, Parazitologia; Epidemiología, Pneumoftiziologia. 1989: - V. 34. - P: 285-288.

285. Myjak M. Scanning electron microscopy of Blastocysts hominis cysts // Parasitol.Res. 1997. - V.84. - P.476-477.

286. Nagler J., Brown M. Blastocysts hominis in inflammatory bowel disease // J. Clin. Gastroenterol. 1993. - V.16. - № 2. - P.109-112.

287. Nair R.G. The effect of oral commensal bacteria on candidal adhesion to den ture acrylic surfaces IIAPM1S. 1996. - V. 104(5).-P. 339-349.

288. Narkewicz MR, Janoff EN, Sokol RJ, Levin MJ. Blastocysts hominis gastroenteritis in a hemophiliac with acquired immune deficiency syndrome // Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 1989. - V. 8. - P. 125128.

289. Nasirudeen AMA, Singh M, Yap EH* Tan KS. Blastocysts hominis: evidence for caspasa-3-like activity in cells undergoing programmed cell* death // Parasitology Research. 2001. - V. 87. - P. 559-565.

290. Nasirudeen AMA, Tan KS, Singh M, Yap EH. Programmed cell death in human intestinal parasite, Blastocysts hominis // Parasitology. 2001. — V. 123.-P. 235-246.

291. Nelson J.D. Etiology and epidemiology of diarrheal diseases in the United States // Am. J. Med. 1985. - 28. - P.76-80.

292. Ng G.C., Ho. L.C., Singh M., lap A.L., Moe K.T. Axenic culture of Blastocysts isolates in monophasic medium and speciation by karyotypic typing II Parasitol. Res. 1996. - V.82. - № 2. - P. 165-169.

293. Ng GC, Tan SW. Colony growth as a step towards axenization of Blastocysts isolates //Parasitology Research. 1999. -V. 85. - P. 678-679.

294. Nimri L., Batchoun R. Intestinal colonization of symptomatic and asymptomatic schoolchildren with Blastocysts hominis II J. Clin. Microbiol. — 1994. V.32. - P.2865-2876.

295. Nimri LF. Evidence of an epidemic of Blastocysts hominis infections in preschool children in Northern Jordan // Journal of Clinical Microbiology. -1993.-V. 31.-P. 2706-2708.

296. Pakand M. Occurrence of Blastocystis sp. in pigs // Parasitol. Res. — 1991. -V.38. -№ 4. -P.297-301.

297. Pakandl M. Blastocystis sp. from pigs: ultrastructural changes occurring during polyxenic cultivation in Iscoves modified Dulbeccos medium // / Parasitology Research. 1999. - V. 85. - P. 743-748.

298. Pena MJ, Elcuaz R, Cañas A, Bordes A, Lafarga B. Características clínicoepidemiológicas de la infección por Blastocystis hominis // Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 1992. - V. 10. — P. 16.

299. Perez de Suarez E., Guzman de Rondon C. Morphology of B.hominis in feces and evaluation of parasitological methods // GEN. 1994. - V.48. - № 4. -P.226-231.

300. Philips B.P., Zierdt C.H. B. hominis'. pathogenic potential in human patients and in gnotobiotes // Exp. Parasitol. 1976. - V. 39. - P. 358-364.

301. Pikula Z.P. j3. hominis and human disease (letter) // J. Clin. Microbiol. — 1987. -V.25.-P. 1581.

302. Pinel C, Réjasse C, Picot S, Brenier-Pinchart MP, Grillot R, Ambroise-Thomas P. Blastocystis hominis: réflexions épidémiologiques et cliniques ápropos de plus de 3500 examens coprologiques // Annales de Biologie Clinique. 1999. -V. 57. - P. 601-604.

303. Prasad K.N., Nag V.L., Dhole T.N., Ayyagari A. Identification of enteric pathogens in HIV-positive patients with diarrhoea in northern India // J. Health. Popul. Nutr. 2000. - V.l 8. - № 1. - P.23-26.

304. Pybiis V. A commensal symbiosis between Prevotella bivia and Pcptostreptococciis anaerobius involves amino acids: potential significance to the pathogenesis of bacterial vaginosis // FEMS Immimol. And Med. Microbiol. 1998. - V. 22.- P. 317-327. .

305. Qadri S.M., Al-Okaili G.A., Al-Dayel F.C. Clinical significance of B.hominis H J. Clin. Microbiol. 1989. - V.27. - P.2407-2409.

306. Qiao J., Xue H., Turxunai. Morphological observation on Blastocystis hominis II Zhongguo Ji Sheng Chong Xue Yu Ji Sheng Chong Za Zhi. 1998. - V. 16(2).-P. 124-125.

307. Quilez J, Clavel A, Sánchez-Acedo C, Causapé AC, Albalá F. Detection of Blastocystis sp. in pigs in Aragón (Spain) // Veterinary Parasitology. 1993. -V. 56.-P. 345-348.

308. Rajah S.H., Suresh K.G., Vellayan S., Mak J.W., Khairul Anuar A., Init I., Vennila G.D., Saminathan R., Ramakrishnan K. Blastocystis in animal handlers // Parasitol. Res. 1999. - V.85. - P.1032-1033.

309. Reinthaler F.F., Mascher F., Math E. Blastocystis hominis intestinal parasit or commensal II Wien. Med. Wochenschr. - 1988. - VI5. - P.545-552.

310. Reinthaler FF, Hermentin K, Mascher F, Klem G, Sixl W. Criptosporidiosis in Ogun State, south-west Nigeria // Annals of Tropical Medicine and Parasitology. 1987.-V. 38.-P. 51-52.

311. Reinthaler FF, Linck G, Klem G, Mascher F, Sixl W. Intestinal parasites in children with diarrhea in El Salvador // Georgia Medical. 1988. - V. 18. - P. 175-180.

312. Reinthaler FF, Mascher F, Klem G, Sixl W. A survey of gastrointestinal parasites in Ogun State, southwest Nigeria // Annals of Tropical Medicine and Parasitology. 1988. -V. 82. - P. 181-184.

313. Reinthaler FF, Mascher F, Marth E. Blastocystis hominis: intestinal parasite or nonpathogen? // WMW. 1988. - V. 21. - P. 545-547.

314. Reischl Udo. Molecular Diagnosis of Infectious Diseases. Humana Press. Ricci N, Toma P, Furlani M, Caselli M, Gullini S. 1984. Blastocystis hominis: a neglected cause of diarrhoea? // The Lancet. 1998. - V. 1. - P. 966.

315. Rengpien S., Bailey G. Differetiation of Entamoeba: a new medium and optimal conditions of axegenic encystations of E.invadens I I J. Parasitol. — 1975. — V.6. P.24 — 30.

316. Ricci N., Toma P., Furlani M. B. hominis: a neglectes cause of diarrhoea // Lancet. 1984. - V.l. - P. 966.

317. Riley DE, Samadpour M, Krieger J. Detection of variable DNA repeats in diverse eukaryotic microorganisms by- a single set of polymerase chain reaction primers // Jounal of Clinical Microbiology. 1991. - V. 29. - P. 2746-2751.

318. Rivero-Rodriguez Z., Chourio-Lozano G., Diaz I., Cheng R., Rucson G. Enteroparasitos en escolares de una institución publica del municipio Maracaibo, Venezuela // Invest. Clin. 2000. - V.41. P.37-57.

319. Rogan MT. Analytical Parasitology. Ed Springer Lab Manual.Rosenblatt JE. 1990. Blastocystis hominis // Journal of Clinical Microbiology. 1997. - V. 28.-P. 2379-2380.

320. Rosenberg E.W., Noah P.W. Microorganisms // J. natl. Med Assoc. 1994. -V. 86.-P. 305-310.

321. Russo A.R., Stoun S.L., Taplin M. E. Presumptive evidence for B.hominis as a cause of colitis // Arch. Inter. Med. 1988. - V.148. - P.1064.

322. Salavert M, Roig P, Nieto A, , Navarro V, Borras R. Enterocolitis; por Blastocysts: hominis e infección por VIH II Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. 1989. - V. 8. - P. 63-64.

323. Sargeaunt PG, Willians JE. Electrophoretic isoenzyme patterns of the pathogenic : and non-pathogenic intestinal amoebae of man // Transactions of the Royal Society of Tropical' Medicine and Hygiene; 1979. - V. 73. - P. 225-227.

324. Schwartz E, Houston R. Effect of co-trimoxazole on stool recovery of Blastocystis hominis;II The Eancet: 1992. - V; 339:-P: 428-429;

325. Selander. RK, Gaugant DA, Ochman H, Musser JM, Gilmour MN, Whittman TS. Methods of multilocus enzyme : electrophoresis for bacterial population genetics and systematics // Applied and Environmental Microbiology. 1986. -V. 51.-P. 873-884.

326. Senay H, MacPherson D. Blastocystis hominis'., Epidemiology and natural ; history// The Journal of Infectious Diseases. 1990. - V. 162.-P. 987-990.

327. Sheehan D.J., Raucher B.G., McKitrick J.C. Association of Blastocystis hominis with signs and symptoms of human disease // J. Clin. Microbiol; -1986. V.24. — P.548-550.

328. Sherchand; JiB;, Earsson Sï, ShresthasMiP; Intestinaliparasitesiin children and adults with and without abdominal discomfort from the Kathmandu area of Nepal // Trop; Gastroenterol. 1996. - V, 17. - P. 15-22.

329. Shlim D. Blastocystis hominis in Kathmandu, Nepal II N. Engl. J. Med. -1995.-V.28.-P.1419.

330. Silard R, Burghelea B. Ultrastructural aspects of Blastocystis hominis strain resistant to antiprotozoal drugs // Archives Roumaines de Pathologie Experimentale et de Microbiologie. -1985: V. 44. -P. 73-85.

331. Silard R, Petrovici M, Panaitescu D, Stoicescu V. Blastocystis hominis in the liver of Cricetus auratus // Archives Roumaines de Pathologie Experimentale et de Microbiologie. 1977. - V. 36. - P. 55-60.

332. Silard R. Contributions to Blastocystis hominis studies. Aspects of degenerescence II Archives Roumaines de Pathologie Experimentale et de Microbiologie. 1979. - V. 38. - P. 105-114.

333. Silberman J.D., Sogin M.L., Leipe D.D., Clark C.G., Muller J. Human parasite finds taxonomic home //Nature.-1996.-V.380.-№6.-P.398.

334. Sinclar E.B., Dommett L.S., Healey A., Uperoft P., Uperoft J.A. Polymicrobial etiology of travellers diarrhoea // Lancet. 1995. - V.16. -P.381—385.

335. Singh M, Ho LC, Yap ALL, Ng GC, Tan SW, Moe KT, Yap EH. Axenic culture of reptilian Blastocystis isolates in monophasic medium and speciation by karyotypic typing // Parasitology Research. 1996. - V. 82. - P. 165-169.

336. Singh M, Suresh K, Ho LC, Ng GC, Yap EH. Elucidation of the life cycle of the intestinal protozoan Blastocystis hominis II Parasitology Research. 1995. -V. 81.-P. 446-450.

337. Singh M. Ultrastructural changes during in vitro encystment of Blastocystis hominis II Parasitol. Res. 1994. - V.80. - № 4. - P.327-335.

338. Slifkin M. Tween 80 opacity test responses of various Candida species //J Clin Microbiol. 2000. - V. 38. - P. 4626-8.

339. Snowden K, Logan K, Blozinski C, Hoevers J, Holman P. Restriction-fragment-length polymorphism analysis of small-subunit rRNA genes of Blastocystis isolates from animal hosts // Parasitology Research. 2000. - V. 86.-P. 62-66.

340. Soledad Gomez M., Gracenea M., Montoliu I., Feliu C., Monleon A., Fernandez J., Ensenat C. Intestinal parasitism protozoa and helminthes - inprimates at the Barcelona Zoo // J. Med. Primatol. 1996. - V.25. - P.419-423.

341. Soledad Gomez M., Gracenea M., Montoliu I., Feliu C., Monleon A., Fernandez J., Ensenat C. Intestinal parasitism protozoa and helminthes - in primates at the Barcelona Zoo // Ji Med. Primatol. - 1996. - V.25. - P.419-423.

342. Stenzel D.J., Boreham P.F. A cyst-like of Blastocysts hominis II Int. J.

343. Stenzel DJ, Cassidy MF, Boreham PFL. Morphology of Blastocysts sp. fromdomestic birds 11 Parasitology Research. 1994. - V. 80. - P. 131-137.

344. Stenzel DJ, Cassidy MF, Boreham PFL. Morphology of Blastocystis sp. isolated from circus animals // International Journal for Parasitology. 1993. — V. 23.-P. 685-687.

345. Storgaard J.D., Sogin M.L., Leipe D.D., Clark C.G. Human parasite finds taxonomic home // Nature. 1996. - V.380. - P.398.

346. Strahl E.D., Gillaspy G.E., Falkinham J.O. // Appl. Environ. Microbiol. — 2001.-V. 67.-P. 4432.

347. Sun T, Katz S, Tanenbaum B, Schenone C. Questionable clinical significance of Blastocystis hominis infection // American Journal of Gastroenterology. -1989.-V. 84.-P. 1543-1547.

348. Suresh K, Anuar AK. Multiple reproductive processes in Blastocystis II Trends in Parasitology. 2002. - V. 18. - P. 528.

349. Suresh K, Chong SY, Howe J, Ho LC, Ng Gc, Yap EH, Singh M. Tubulovesicular elements in Blastocystis hominis from the caecum of experimentally-infected rats // International Journal for Parasitology. 1995. -V. 25.-P. 123-126.

350. Suresh K, Howe J, Chong SY, Ng GC, Ho LC, Log AK, Ramachandran NP, Yap EH, Singh M. Ultrastructural changes during in vitro encystment of Blastocystis hominis I I Parasitology Research. 1994. - V. 80. - P. 327-335.

351. Suresh K, Init I, Reuel PA, Rajah S, Lokman H, Anuar AK. Glycerol with fetal calf serum a better cryoprotectant for Blastocystis hominis I I Parasitology Research.-1998.-V. 84.-P. 321-322.

352. Suresh K, Ng GC, Ho LC, Yap EH, Singh M. Differentiation of the various stages of Blastocysts hominis by acridine orange staining // International Journal for Parasitology. 1994. - V. 24. - P. 605-606.

353. Suresh K, Ng GC, Ramachandran NP, Ho LC, Yap EH, Singh Mi In vitro encystment and'experimental infections of Blastocysts hominis // Parasitology Research. 1993. - V. 79. - P. 456-4601

354. Suresh> K., Howe J., Ng G.C. A multiple fission-like mode of asexual reproduction in B.hominis II Parasitol. Res. 1994. - V.80. - № 6. - P.523-527.

355. Swank G.M., Deitch E.A. Role of the gut in multiple organ failure: bacterial translocation and permeability changes // World. J. Surg. 1996. - V. 20.' - P. 411-417'.

356. Taamasri P., Leelayoova S. Prevalence of Blastocysts hominis carriage in Thai army personnel based in Chonburi, Thailand // Mil. Med. 2002. - Aug. -V. 167(8).-P. 643-646.

357. Tan HK, Harrison M, Zierdt CH. Freeze-etch studies of the granular and vacuolated forms of Blastocysts hominis II Zeitschrift fur parasitenkunde. -1974. — V. 44.-P. 267-278.

358. Tan HK, Zierdt CH. infrastructure of Blastocystis hominis II Zeitschrift für parasitenkunde. 1973. -V. 42. - P. 315-324.

359. Tan K.S., Singh M., Yap E.H. Recent advances in Blastocystis hominis research: hot spots in terra incognita // Int. J. Parasitol. 2002. - Jun. - V. 15. -P. 789-804.

360. Tan KS, Howe J, Yap EH, Singh M. Do Blastocystis hominis colony forms undergo programmed cell death? // Parasitology Research. 2001. - V. 87. -P. 362-367.

361. Tan KS, Ibrahim M, Ng GC, Nasirudeen AMA, Ho LC, Yap EH, Singh M. Exposure of Blastocystis species to a cytotoxic monoclonal antibody // Parasitology Research. 2001. - V. 87. - P. 534-538.

362. Tan KS, Ng GC, Queck E, Howe J, Ramachandran NP, Yap EH, Singh M. Blastocystis hominis: a simplified, high-efficiency method for clonal growth on solid agar // Experimental Parasitology. 2000. - V. 96. - P. 9-15.

363. Tan S.W., Singh M. Clonal growth of B.hominis in soft agar with sodium thiogly collate // Parasitol! Res. 1996. - V.82. - № 8. - P.737-739.

364. Tan SW, Ho LC, Moe KT, Chen XQ, Ng GC, Yap EH, Singh M. Production and characterization/ of murine monoclonal antibodies to Blastocystis hominis II International Journal for Parasitology. 1996. - V. 26. - P. 375-381. ,

365. Tan SW, Singh M, Ho LC, Howe J, Moe KT, Chen XQ, Ng GC, Yap EH. Survival of Blastocystis hominis clones after exposure to a cytotoxic monoclonal antibody // International Journal for Parasitology. — 1997. V. 27. -P.* 947-9541

366. Taylor D.N., Echeverria P., Blaser M.J., Pitarangsi C., Blacklow N., Cross J., Weniger B.G. Polymicrobial etiology of travellers diarrhoea // Lancet. 1995. - V.16. — P.381—385.

367. Taylor D.N., Houston R., Shlim D.R., Bhaibulaya M., Ungar B.L., Echeverria P. Etiology of diarrhea among travelers and foreign residents in Nepal // JAMA. 1988. - V.260. - P.1245-1248.

368. Taylor S.J., Ahonen L.J., de Leij F.A., Dale J.W. // Appl. Environ. Microbiol. -2003. -V. 69.-P. 4316

369. Tayoda M.H., Chen M.S., Wang H.P. Helicobacter pylori associated with a high prevalence of duodenal ulcer disease and a low prevalence of gastric cancer in a developing nation // Gut. 2000. - V. 36. - № 2. - P. 198-202.

370. Telalbasic S, Pikula ZP, Kapidzic M. Blastocysts hominis may be a potential cause of intestinal disease I I Scandinavian Journal of Infectious Diseases. -1991.-V. 23.-P. 389-390.

371. Teow WL, Zaman V, Ng GC, Chan YC, Yap EH, Howe J, Gopalakrishnakone P, Singh M. A Blastocysts especies from the sea-snake, Lapemis hardwickii. -1991.-P 421.

372. Tezcan-Merdol D., Ljungstrom M., Winiecka-Krusnell J., Linder E., Engstrand L., Rhen M. // Appl. Environ. Microbiol. 2004. - V. 70. - P. 3706.

373. Udkow MP, Markell EK. Blastocystis hominis: prevalence in asymptomatic versus symptomatic hosts // J Infect Dis. 1993. - № 1. - P.242-244.

374. Upcroft JA, Dunn LA, Dommett LS, Healey A, Upcrofit P, Boreham PF. Chromosomes of Blastocysts hominis U Int J Parasitol. — 1989. № 8. -P.879-883.

375. Vannatta JB, Adamson D, Mullican K., Henry MC, De Clercq D, Lokombe B, Kayembe K, Kapita B, Mamba K, Mbendi N, Mazebo P. Blastocysts hominis infection presenting as recurrent diarrhea // Ann Intern Med. 1985. - № 4. -P.495-496.

376. Van Saanen-Ciurea M., El-Achachi H. Blastocysts hominis', morphological study using optical and electron microscopy // Bull Soc Pathol Exot Filiales. -1983. V.76. — P.766—776.

377. Vdovenko A.A. Blastocysts hominis: origin and significance of vacuolar and granular forms // Parasitol. Res. 2000. - V.86. - P.8-10.

378. Villar D.J., Boreham P.F., McDoygall R. infrastructure of B.hominis in human stool samples II Int. J. Parasitol. 1998. - V.21. - № 7. - P.807-812.

379. Wagner R.D. Biotherapeutic effects of probiotic bacteria on candidiasis in mmunodeficient mice II Infect. Imrrnm. 1997. - Y.65 (10). - P. 4165-72.

380. Waikagul J., Krudsood S., Radomyos P. A cross-sectional study of intestinal parasitic infections among schoolchildren in Nan Province, Northern Thailand // Southeast Asian J. Trop. Med. Public. Health. 2002. - Jun. - V. 33(2). - P. 218-223.

381. Wang K.X., Li C.P., Wang J. Epidemiological survey of Blastocysts hominis in Huainan City, Anhui Province, China // World. J. Gastroenterol. 2002. -Oct. - V. 8 (5). - P. 928-932.

382. Wilairatana P., Radomyos P., Radomyos B., Phraevanich R., Plooksawasdi W., Chanthavanich P., Viravan C., Looareesuwan S. Intestinal sarcocystosis in Thai laborers // J. Trop. Med. 1996. - V.27. - P.43-46.

383. Windsor J J., Macfarlane L. Incidence of Blastocystis hominis in faecal samples submitted for routine microbiological analysis // Br. J. Biomed. Sei. -2002. V. 59(3). - P. 154-157.

384. Yamada M, Yoshikawa H, Tegoshi T, Matsumoto Y, Yoshikawa T, Shiota T, Yoshida Y. Light microscopical study of Blastocystis spp. in monkeys and fowls // Parasitol Res. 1987. - № 6. P.527-531.

385. Yoshikawa H. Freeze-fracture study of Blastocystis hominis II J. Protozool. — 1988. V.35. - P.522-528.

386. Yoshikawa H., Nagano I., Wu Z., Yap E.H., Singh M., Takahashi Y. Genomic polymorphism among of Blastocystis hominis strains and develpment of subtype-specific diagnostic primers // Mol. Cel. Probes.-1998.-Y.12.-№3-P.153-159.

387. Yoshikawa H., Yamada M., Yoshida Y. Freeze-fracture study of Blastocystis hominis II J. Protozool. 1988. - Y.35. - P.522-528.

388. Zaki M., Manzoor M., Howe J., Ng M. Postcystis development of Blastocystis hominis // Parasitol.Res. 1994. - V.85. - P.437-440.

389. Zaman V. Postcystic development of Blastocystis hominis // Parasitol Res. -1999.-№6. P.437-440.

390. Zaman Y, Howe J, Ng M„ Zaki M, Manzoor M. Scanning electron microscopy of Blastocystis hominis cysts I I Parasitol Res. — 1998. № 6. P.76-477.

391. Zaman V, Howe J, Ng M., Zaki M, Manzoor M. Ultrastructure of Blastocystis hominis cysts I I Parasitol Res. 1995. - № 6. -P.465-469.

392. Zman V, Khan KZ. A comparison of direct microscopy with culture for the diagnosis of Blastocystis hominis II Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1994. - № 4. - P.792-793.

393. Zaman V, Howe J, Ng M. Zaki M, Manzoor M. Variation in the cyst morphology of Blastocystis hominis II Parasitol Res. 1997. - № 3. - P.306-308.

394. Zaman V, Khan KZ, Khan MA, Khan NA. Isolation of Blastocystis hominis from sewage // Southeast Asian J Trop Med Public Health. 1994. - № 1. - P. 211.

395. Zaman V., Howe J., Hg M. A comparative morphology of Blastocystis hominis cysts with and without the "fibrillar layer" // Southeast Asian J. Trop Med. 1996. - V.26. - P.801-802.

396. Zaman V., Howe J., Hg M. Observation on the surface coat of B.hominis II Parasitol. Res. 1997. - V. 83. - №7. - P.731-733.

397. Zdero M. Parasitosisen una peblacion adulta con trastornos gastrointestinales cronicos // Acta Gastoenterol. Latinoam. 1997. - V.27. - P.67-73.

398. Zierdt C. Studies of B.hominis II J. Protozool. 1983. - V.20. -P. 114-121.

399. Zierdt C.H. B. hominis Past and future I I Clin. Microbiol. Rev. - 1991. - V. 4.-P. 61-79.

400. Zierdt C.H. Blastcystis hominis an intestinal protozoa parasite of man // Publ. Hlth. Lab. 1973. - V.36. -P.147-161.

401. Zierdt C.H. Blastocystis hominis, a longmisunderstood intestinal pathogen // Parasitol. Taday. 1988. - V.4. - P. 15-19.

402. Zierdt C.H. Cytochrom-free mitochondria of an anaerobic protozoan -Blastocystis hominis II J. Protozool. 1986. — V.33. - P .67-69.

403. Zierdt C.H. // J. Parasitol.-1993.-V.31.-P.301-309.

404. Zierdt C.H. // Schweiz. Med. Wochenschr.-1996.-V.41.-P.219-225.1. T)

405. Zierdt C.H. Ultrastructure and ligHfmicroscope appearance of B. hominis in a patient with enteric // Z. Parasitenk. 1976. - V.50. - P.277-283.

406. Zierdt C.H., Moe K.T., Singh M., Ho L.C., Tan S.W. Ätiologie von Durchfallserkrankungen bei immunkompetenten und HIV-positiven Patienten. //Schweiz. Med. Wochenschr. 1991. - V.4. - P. 15-19.

407. Zierdt C.H., Rude W.S., Bull B.S., Echeverría P., Blaser M.J., Pitarangsi C., Blacklow N., Cross J. Protozoan characteristics of B.hominis II Am.J. Clin. Pathol. 1967. - V.48. - P.495-501.

408. Zierdt C.H., Swan J. Generation time and growth rate of the human intestinal parasite Blastocystis hominis II J. Protozool. 1981. - V. 28. - P. 483-485.

409. Zierdt C.H., Swan J. In vitro response of Blastocystis hominis to antiprotozoa drugs II J. Protozool. 1983. -V. 30. - P. 332-334.

410. Zierdt C.H., Zierdt W.S. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of serum antibody to B. hominis in symptomatic infections. // J. Parasitol. 1996. -V. 81.-P. 127-129.

411. Zierdt CH, Nagy B. Antibody response to Blastocystis hominis infections // Ann Intern Med. 1993. - № 12. -P.985-986.

412. Zierdt CH, Williams RL. Serotyping of Pseudomonas aeruginosa isolates from patients with cystic fibrosis of the pancreas // J Clin Microbiol. 1974. № 6.-P.521-526.

413. Zierdt CH, Zierdt WS, Nagy B., Swan JC, Hosseini J. IIJ Parasitol. 1999. -V. 53. -P.437-440.

414. Zuckerman M., Watts M. T., Ho H. B.hominis intestinal injury // Am, J. Med. Sei. 1994. - V.308. - № 2. - P.96-101.

415. Zuckerman M.J., Ho H., Hooper L. Frequency of recovery of B.hominis in clinical practice // J. Clin. Gastroenterol. -1990. V. 12. - № 5. - P.525-532.

Информация о работе

Красноперова, Юлия Юрьевна
доктора биологических наук
Оренбург, 2009
ВАК 03.00.07

Диссертация

Характеристика изменений патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы