Межбактериальные взаимодействия на слизистой оболочке миндалин человека

Хуснутдинова, Лилия Мидехатевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Межбактериальные взаимодействия на слизистой оболочке миндалин человека
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Межбактериальные взаимодействия на слизистой оболочке миндалин человека"

На правах рукописи

ХУСНУТДИНОВА Лилия Мидехатевна

МЕЖБАКТЕРИАЛЬНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ НА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКЕ МИНДАЛИН ЧЕЛОВЕКА

03.00.07 - «Микробиология»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург 2004

Работа выполнена в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук

Научный руководитель

Доктор медицинских наук, профессор Усвяцов Борис Яковлевич

Официальные оппоненты

Доктор биологических наук, профессор Карташова Ольга Львовна

Доктор медицинских наук, профессор Каган Юда Давидович

Ведущая организация

Челябинская государственная медицинская академия

Защита состоится 22 апреля 2004 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д.208.066.03 в Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан ъ ¡¿¿¿¿-/ЯЯ-Я 2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

Доктор медицинских наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Микробиоценозы тела человека представляют собой сложные системы, отличающиеся многокомпонентностью и количественным разнообразием (Воробьев А.А. и соавт., 2000). В процессе эволюции при взаимодействии организма хозяина с окружающими его микроорганизмами сформировались симбиотические сообщества, составляющие нормальную микрофлору человека (Бондаренко В.М., Петровская В.Г., 1997). При изучении ассоциаций микроорганизмов решаются две проблемы. С одной стороны, оцениваются механизмы межмикробных взаимодействий в микросистемах и их роль в формировании биоценозов. С другой стороны, взаимодействия микроорганизмов-представителей одного биотопа, используются как инструмент для решения прикладных задач медицины и биологии (Покровский В.И.,

Особенности межмикробных взаимодействий могут существенно влиять на формы и течение инфекционного процесса. Возбудители при смешанной инфекции чаще характеризовались антибиотико-резистентностью, антилизоцимной активностью (Фадеев- СБ., 1998), адгезивной, гемолитической, антилизоцимной, антиинтерцидной, ле-цитовителлазной, ДНК-азной активностями (Азнабаев Г. К., 2003). В то же время, межбактериальные взаимодействия как один из механизмов формирования ассоциаций микроорганизмов при микст-инфекциях, изучены недостаточно.

На слизистой оболочке миндалин обнаружены ассоциации стафилококков (Тетерин Ф.Н. и соавт., 1988; Тарасов Д.И. и соавт., 1991; Солдатов И.Б., 1994), пептострептококков, условно- и облигат-но-патогенных бактерий (Писарев В.Ф., 2000; Белов Б.С., 2000; Белов Б.С., 2001) и дрожжеподобных грибов рода Candida (Платонова М.М. и соавт., 1998; Гуцима И.А, 2002; Маккаева Х.М., 2002). Условно-патогенные микроорганизмы, представители микрофлоры миндалин, характеризовались наличием факторов патогенности (АЛА, ЛА, АИА, АКрА) (Гудима И.А., 2001) и множественной лекарственной устойчивостью (Beigogne-Berezin Е., 1990; Holm S., Grahn E., 1990).

Изменения в проявлении патогенных свойств представителями микрофлоры миндалин с учетом их симбиотических связей изучены недостаточно. Вместе с тем, данные об изменчивости биологических свойств микробов-ассоциантов могут 6i критерии

2000).

при диагностике патологического процесса и выбора антибактериального препарата для элиминации возбудителя из микробиоценоза.

Цель исследования. Изучение межбактериальных взаимодействий на слизистой оболочке миндалин и оценка возможности их кли-нико-лабораторного использования.

Задачи исследования.

1. Изучить распространенность комплекса факторов патогенно-сти и антибиотикорезистентности у микроорганизмов, выделенных со слизистой оболочки миндалин, с учетом состояния биоценоза, а также ассоциации возбудителей.

2. Разработать методы исследования факторов патогенности < и антибиотикорезистентности при межбактериальных взаимодействиях.

3. Выявить особенности проявления факторов патогенности и ан-тибиотикорезистентности при межбактериальных взаимодействиях в биоценозе здоровых и больных хроническим тонзиллитом.

4. Предложить методические подходы к диагностике хронического тонзиллита и выбору антибиотика для эффективной элиминации возбудителя с учетом межбактериальных взаимодействий на слизистой оболочке миндалин.

Научная новизна.

Установлено, что тонзиллярная микрофлора больных, по сравнению со здоровыми, чаще обладает комплексом факторов патогенно-сти (гемолитической, лецитовителлазной, лизоцимной и антилизоцим-ной активностями) и антибиотикорезистентностью. Показано, что возбудители в монокультуре реже, чем в ассоциациях, проявляют факторы патогенности и резистентность к двум и более антибиотикам. Разработаны методы исследования биологических свойств бактерий при межбактериальных взаимодействиях. Обнаружена разнотипная направленность модификации факторов патогенности и антибиотикоре-зистентности в зависимости от видовых характеристик бактерий-симбионтов и состояния микробного биоценоза. Выявлено, что в парах «патоген-индиген» и «индиген-индиген», выделенных от больных, наблюдается взаимное усиление патогенности и антибиотикорези-стентности, тогда как в биоценозах здоровых людей и стафилококковых бактерионосителей взаимодействия между симбионтами носят индифферентный характер. '

Предложен методический ключ, основанный на оценке функциональных особенностей индикаторных пар бактерий-симбионтов, открывающий новые подходы к диагностике и терапии заболеваний с учетом межбактериальных взаимодействий. Использование нового методического подхода позволило разработать способ диагностики хронического тонзиллита (патент РФ на изобретение №2188422 от 27 августа 2002 года) и способ выбора эффективного антибиотика для элиминации возбудителя хронического тонзиллита из биоценоза слизистой оболочки миндалин (решение о выдачи патента РФ на изобретение от 5 января 2004 года по заявке №2002125475/13 от 20.09.2002).

Научно-практическая ценность.

Полученные в работе. данные расширяют представления о функциональной активности при межбактериальных взаимодействиях представителей микрофлоры слизистой оболочки миндалин в норме и при хроническом тонзиллите.

Практическое значение работы определяется разработкой методов изучения модификации факторов патогенности и антибиотико-резистентности при межбактериальных взаимодействиях. Разработанные методические приемы могут быть использованы для диагностики и лечения хронического тонзиллита, а также при проведении экспериментальных исследований симбиотических взаимоотношений бактерий.

Издано информационно-методическое письмо ГУЗО Оренбургской области «Микробиологические основы диагностики хронического тонзиллита» (Оренбург, 2003).

Положения, выносимые на защиту

1. Возбудители в ассоциации и условно-патогенные микроорганизмы в биоценозе миндалин больных хроническим тонзиллитом чаще характеризуются проявлением комплекса факторов патогенности и антибиотикорезистентностью, по сравнению с микрофлорой здоровых лиц.

2. Направленность эффекта модификации биологических свойств зависит от вида бактерий-симбионтов и состояния микробиоценоза (нормоценоз, патоценоз). Микроорганизмы, выделенные из патоценоза, в условиях межбактериальных взаимодействий чаще оказывают синергидное влияние на проявление факторов патогенности и формирование антибиотикорези-стентности, тогда как симбиотические взаимодействия тонзил-

лярной микрофлоры , от здоровых носят индифферентный. характер.

3. Предложен новый методический подход для диагностики патологического процесса и выбора антибиотика с целью элиминации возбудителя < из биоценоза,. основанный на оценке особенностей межбактериальных взаимодействий в индикаторных парах штаммов-симбионтов.

Апробация работы.

Результаты работы доложены и обсуждены на: областной конференции оториноларингологов, посвященной 100-летию со дня рождения А.О. Шульги (Оренбург, 2000); на 54-й, 55-й и 56-й конференциях СНО ОГМА (Оренбург, 1999; 2000; 2001); третьей Российской конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2000); И-м Международном конгрессе по оториноларингологии,, аллергологии, эндоскопической и лазерной хирургии (Греция, Афины, 2001); итоговой. Всероссийской научной, студенческой конференции (Москва, 2002); четвертой Российской конференции с международным участием «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2003); научной:кон-ференции ; по итогам работы в рамках программы Президиума - РАН «Фундаментальные науки — медицине» (Москва, 2003).

Материалы работы были представлены в 2001 году на Всероссийский конкурс научно-исследовательских работ студентов (Медаль Министерства образования РФ). Результаты диссертационного исследования экспонировались на областной выставке научно-технического творчества молодежи НТТМ-2003 (Оренбург, 2003) и на. областной выставке «Наука — сельскому хозяйству» (Оренбург, 2003).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе патент РФ на изобретение №2188422 от 27 августа 2002 года.

Объем и структура диссертационной работы.

Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, главу по материалам и методам исследования,' четыре главы собственных исследований, заключение, выводы, приложение. Указатель литературы содержит 151 отечественный и 33 зарубежных источника литературы. Текст иллюстрирован 21 таблицей и 27 рисунками.

Связь работы с научными программами.

Диссертационное исследование является фрагментом научно-исследовательской работы «Межбактериальные взаимодействия и их роль в формировании микробных биоценозов тела человека», проводимой в рамках темы открытого плана НИР ИКиВС УрО РАН «Изучение симбиотических взаимоотношений в микробиоценозах тела человека» (№ гос.регистрации 01.2.00 104756) и программы Президиума Российской академии наук «Фундаментальные исследования - медицине, 2003». Исследования поддержаны грантом Президиума УрО РАН для молодых ученых и аспирантов УрО РАН.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В работе использовано 455 культур бактерий, выделенных из биоценоза слизистой оболочки миндалин 50 клинически здоровых людей и 50 больных хроническим тонзиллитом в стадии компенсации. Выделение и идентификацию штаммов микроорганизмов проводили на основании общепринятых методов по морфологическим, тинктори-альным, культуральным и биохимическим свойствам (Биргер М.О., 1982). Для идентификации использовали стандартные системы StaphyTest, StreptoTest и EnteroTest (LaChema, Чехия).

У выделенных штаммов микроорганизмов изучали факторы патогенности: гемолитическую, плазмокоагулазную, лецитовителлаз-ную, лизоцимную и антилизоцимную активности по общепринятым методикам (Биргер М.О., 1982; Бухарин О.В. и соавт., 1984). Бакте-риоциногения, характеризующая экологическую активность изучаемого штамма в микробиоценозе, изучалась по методу Мюррея-Шервуда в модификации Б .Я. Усвяцова (1967). Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определялась диско-диффузионным методом согласно «Методическим указаниям по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам» (МЗ СССР 10.03.83 №2675-83).

Для оценки модификации факторов патогенности разработан оригинальный метод изучения изменчивости биологических свойств штаммов в условиях межмикробных взаимодействий. На чашке Петри с плотной питательной средой, содержащей индикатор на выявление определенного свойства бактерий, с помощью стандартной микробиологической петли (диаметр 2 мм) производились посевы штрихом (длина 15 мм, ширина 2 мм) взвеси культур (1х109 КОЕ/мл): одной

культуры горизонтально, а вторая культура высевалась вертикальной полосой (контроль). В центре чашки проводились посевы этих же культур под прямым углом, где и происходило взаимодействие микроорганизмов (опыт). Через 24 часа инкубации в термостате при 37°С, измерялась ширина зон действия фактора. В контроле ширина зоны действия фактора измерялась в области середины макроколонии, а в опыте - на расстоянии 2 мм от центра пересечения макроколоний микробов-симбионтов. При увеличении зоны действия фактора в опыте по сравнению с контролем на 1 мм и более отмечали усиление экспрессии данного свойства, при уменьшении этой зоны на 1 мм и более говорили об ослаблении проявления данного свойства. Отсутствие изменений или изменения менее чем на 1 мм (ошибка метода) оценивались как индифферентное влияние штаммов друг на друга.

Модификация антибиотикорезистентности при взаимодействии микробов-ассоциантов определялась методом перекрестных посевов взвеси культур (1x109 КОЕ/мл) штампом в центре чашки Петри с плотной питательной средой. Контрольные посевы этих же культур проводили штампом по периферии чашки. На место перекреста (в опыте) и на центр посева (в контроле) наносили стандартные диски с антибиотиком, инкубировали и измеряли диаметр зон задержки роста культур вокруг диска в опыте и контроле. При увеличении диаметра зоны задержки роста у штамма возбудителя в опыте, по сравнению с контролем, на 1 мм и более считали антибиотик эффективным для элиминации возбудителя из биоценоза.

Материалы, полученные в результате экспериментальных исследований, были подверпгуты статистической обработке с использованием компьютерной программы SPSS 8.0 for Windows с применением стандартных методов вариационной статистики и корреляционного анализа (Урбах И.Ю., 1975; Лакин Г.Ф., 1990).

Результаты исследования

Изучено видовое разнообразие представителей микрофлоры слизистой оболочки миндалин в норме и при хроническом тонзиллите. Микрофлора слизистой оболочки миндалин была представлена 8 родами микроорганизмов. В биоценозе миндалин здоровых людей, по сравнению с больными, чаще встречались штаммы рода Streptococcus (40,2±3,2% против 26,1 ±2,9%, р<0,05). От больных хроническим тонзиллитом в большем проценте случаев, по сравнению со здоровыми, выделялись микроорганизмы родов Staphylococcus (54,9±3,3% против 44,1 ±3,3%, р<0,05), Klebsiella и Neisseria (3,5±1,2% против 0,8±0,6%,

р<0,05). Среди представителей стафилококковой флоры наиболее часто от больных высевались виды: S.aureus (10,6% случаев против 6,6%), S.warneri (10,6% против 5,2%, при р<0,05), S.haemolyticus (6,2% против 4,8%) и S.epidermidis (7,1% против 3,5%).

Микрофлора слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом, по сравнению со здоровыми, характеризовалась большей распространенностью гемолитической активности - ГА (61,5±3,2% штаммов п р р<0,05), лецитовителлазной

активности - ЛецА (46,0±3,3% п р сЗ h0i8,ft%, р<0,05), лизоцимной активности - JIA (38,1±3,2% п р р<0,05) и антилизо-

цимной активности - АЛА (50,4±3,3% п р с32р<0,05). Тогда как плазмокоагулазная активность — КоА - у микроорганизмов, вьщеленных из биоценоза здоровых и больных, проявлялась с одинаковой частотой (8,3±1,8% против 9,7±1,9%, соответственно).

Так как наиболее распространенной группой микроорганизмов в биоценозе слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом были бактерии рода Staphylococcus, то представляло интерес изучить распространенность факторов патогенности среди отдельных представителей этого рода. Штаммы S.aureus. вьщеленные от больных, проявляли ГА в 87,5±6,7% случаев (тогда как в нормоценозе штаммы золотистого стафилококка обладали ГА в 53,3±12,8% случаев,р<0,05), ЛецА - в 95,8±4,1% случаев (против 40,0±12,6% в нормоценозе, р<0,05), АЛА - в 66,7±9,6% случаев ( п р46/7т1и8& у штаммов от здоровых, р<0,05). Штаммы S.warneri, выделенные от больных, обладали ГА в 1,9 раза чаще по сравнению со штаммами, выделенными из нормоценоза (79,2±11,7% случаев против 41,7±14,2%, р<0,05), ЛецА -в 8 раз чаще (66,7±9,6% случаев против 8,3±7,9%., р<0,05), АЛА - в 5 раз чаще ( 41,7±10,1% случаев против 8,3±7,9%, р<0,05). У изолятов других видов КОС (S.haemolyticus, S.epidermidis и др.), выделенных со слизистой оболочки миндалин больных, по сравнению со штаммами, высеянными от здоровых, обнаружена более высокая частота экспрессии ГА (67,1±5,3% п р cfiQjOifi.ft'/ti, р<0,05), Л А т и в 22,9±4,8%:, р<0,05) и AJIA(55,3±5,7% против 39,2±5,6%, р<0,05).

Учитывая имеющиеся данные о мобильной организации генов факторов патогенности, их объединение в группы сцепления или острова патогенности у бактерий (Бондаренко В.М., 2001), было проанализировано проявление комплекса факторов патогенности: двух, трех и четырех одновременно. Штаммы, выделенные от больных, в два раза чаще, по сравнению со штаммами от здоровых лиц, экспрессировали несколько факторов патогенности (рисунок 1).

% штаммов

25 ........

20 -

10 -

15 -

ГА+Л<аА+ЛА ГА+ЛецА+АЛА

Примечание: * достоверность отличий р<0,05

ГА+ЛА+АЛА

ЛецА+ЛА+АЛА ГА<-Л«А+ЛА+АЛА

Рисунок 1 - Распространенность трех-четырех факторов патогенностн среди штаммов микроорганизмов, выделенными со слизистой оболочки миндалин здоровых н больных хроническим тонзиллитом.

□ здоровые О больные

Как видно из представленных данных, штаммы микроорганизмов, выделенные от больных хроническим тонзиллитом, обладали комплексом факторов патогенности в большем проценте случаев, по сравнению со штаммами, выделенными от здоровых людей.

Так гемолитической, лецитовителлазной и лизоцимной активностью одновременно обладали всех штаммов представителей патобиоценоза, тогда как у штаммов, выделенных из нормоценоза, проявление этих свойств отмечалось в 4,8±1,4% случаев (р<0,05). ГА, ЛецА и АЛА чаще проявлялись у штаммов от больных (11,9±2,1% против у микроорганизмов, выделенных от здоровых, р<0,05). ГА, ЛА и АЛА в патоценозе проявлялись в 19,5±2,6% случаев против 7,1±1»6% в нормоценозе (р<0,05). Представители биоценоза больных людей в 3,1 раза чаще, по сравнению с микроорганизмами из биоценоза здоровых, проявляли одновременно четыре фактора пато-генности.

Золотистые стафилококки, выделенные от больных, обладали одновременно ГА, ЛецА и ЛА в 5 раз чаще по сравнению со штаммами, выделенным от бактерионосителей ( против р<0,05), а ГА, ЛА и АЛА в 8,1 раза чаще (54,2±10,1% против 6,7±6,4%, р<0,05). При исследовании частоты проявления комплекса факторов патогенности различными таксонами условно-патогенных микроорганизмов, установлено, что штаммы коагулазоотрицательных стафило-

кокков (КОС), вьщеленные из патоценоза в 2,2 раза чаще обладали ГА, ЛецА и ЛА, чем штаммы из нормоценоза ( 20,0±4,3% против 9,3±3,1 %, р<0,05). Штаммы микроорганизмов родов Micrococcus, Aerococcus, Enterococcus, Enterobacter, Klebsiella, Neisseria, содержащиеся в биоценозе больных хроническим тонзиллитом людей, в большем проценте случаев ( 18,6±5,9% п р р<0,05), по сравнению с микро-

организмами от здоровых, проявляли комплекс факторов патогенности (ГА, ЛА и АЛА одновременно).

Выявлена прямая корреляционная зависимость между экспрессией факторов патогенности штаммами условно-патогенных видов бактерий из биоценоза больных хроническим тонзиллитом. Если штаммы микроорганизмов, выделенных от больных, обладали гемолитической активностью, то у них одновременно проявлялась лецитови-теллазная, лизоцимная и антилизоцимная активности (Гб=0,41-0,61) Продукция лецитовителлазы у штаммов-преставителей патоценоза сопровождалась выработкой комплекса факторов ГА+ЛецА, ЛецА +ЛА, ЛецА+АЛА, ГА+ЛецА+АЛА (Гб=0,41-0,88)

На основе полученных данных можно говорить о высоком уровне корреляции факторов патогенности и способности микроорганизмов, выделенных из патоценоза, длительно находится в организме человека, поддерживая хронический инфекционный процесс.

При исследовании резистентности выделенных культур к антибиотикам установлено, что кокковая флора слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом лиц чаще, по сравнению с микроорганизмами от здоровых, характеризовалась резистентностью к ампициллину (46,5±3,3% против 13,8±2,5%, р<0,05), ванкомицину (5,8±1,5% п р о т Н&Ь0,9У<О ,05), эритромицину 2Q,4*3*6% т и в 10,6±2,2%, р<0,05) и гентамицину (4,4±1,4% против 1,1±0,7%,р<0,05), тогда как штаммы, выделенных от здоровых лиц, характеризовались чувствительностью к вышеперечисленным антибиотикам. К антибиотику из группы резерва - клиндамицину штаммы от больных и здоровых в большинстве случаев оказались высоко чувствительными (95,Ш,4%).

Под ассоциированной резистентностью понимается резистентность микроорганизма к антибактериальным препаратам более чем одного химического класса одновременно (Страчунский Л.С. и др., 2000). Основываясь на этих сведениях, изучалась устойчивость выделенных штаммов микроорганизмов к двум и более антибиотикам.

Штаммы микроорганизмов, выделенные из биоценоза слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом, прояв-

ляли ассоциированную резистентность к антибиотикам (Ассоц.АБ-R) в 2,8 раза чаще, по сравнению со штаммами, выделенными от здоровых (24,8±2,8% против 9,0±2,1%, р<0,05). Значительно чаще ассоциированной антибиотикорезистентносгью обладали штаммы коагулазо-отрицательных стафилококков С27,0±4,4% п р о13?3±8,9%, р<0,05), стрептококков (20,3±5,2% против 7,4±2,9%, р<0,05) и микроорганизмов родов Micrococcus, Aerococcus, Enterococcus, Enterobacter, Klebsiella, Neisseria (24,8±2,8% против 9,0±2,1%, p<0,05), выделенных от больных людей. Штаммы золотистого стафилококка, выделенные от больных, проявляли Ассоц.АБ-R в 29,2±9,2% случаев.

Высокая частота встречаемости в биоценозе слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом микроорганизмов, обладающих ассоциированной антибиотикорезистентносгью и комплексом факторов патогенности, позволяет считать их этиологическими агентами заболевания.

Работами СБ. Фадеева (1998) показано, что в ассоциациях у возбудителей хирургической инфекции наблюдается высокий уровень антибиотикорезистентности, антилизоцимной активности,. по сравнению с возбудителями, изолированными в монокультуре. Учитывая, что в определенном проценте случаев из биоценоза слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом выделялось одновременно несколько возбудителей, была изучена частота экспрессии биологических свойств возбудителями в монокультуре и в ассоциациях (рисунок 2).

% штаммов 100 -г-

90-----

80-----

70 ---р 60---

50 --40--- Д 30--- "

20 ---

10--0 J—-

ГА

ЛецА

ЛА

АЛА

Ассоц.АБ-R

Примечание: • достоверность отличий pO.OS.

Рисунок 2 - Частота проявления биологических свойств возбудителями хронического тонзиллита в ассоциациях и в монокультуре.

□ монокультура Оассоциация

Установлено, что возбудители в ассоциации чаще, чем в монокультуре проявляли лизоцимную (81,6±6,2% против 46,7±12,3%, р<0,05) и антилизоцимную (63,2±7,8% против 26,7±11,4%, р<0,05) активности. Таким образом, симбионтные взаимоотношения между ас-социантами могут приводить к повышению патогенности возбудителя.

Так как большинство микроорганизмов в естественных условиях находятся в определенных взаимоотношениях друг с другом и с окружающей средой, то для регулирования колонизационной резистентности макроорганизма необходимо изучать причины и механизмы изменчивости микрофлоры, среди которых важная роль отводиться межбактериальным взаимодействиям.

С использованием разработанного метода перекрестного посева in vitro изучался характер взаимодействия штаммов, выделенных со слизистой оболочки миндалин у здоровых людей и больных хроническим тонзиллитом. Изучалось взаимодействие между собой штаммов, выделенных из одного биоценоза. Были изучены межбактериальные взаимодействия в 432 парах штаммов, выделенных от здоровых людей, и в 408 парах штаммов, выделенных от больных. В условиях симбиоза выявлены различные изменения факторов патогенности бактерий: усиление (синергизм), ослабление (антагонизм) и отсутствие изменений (индифферентность).

В условиях межмикробных взаимодействий культуры, выделенные от больных, оказывали усиливающее и ослабляющее действие на проявление биологических свойств симбионтов. В биоценозе здоровых в 77,3% случаев наблюдалось индифферентное действие симбионтов на экспрессию факторов патогенности.

Направленность в изменчивости биологических свойств симбионтов зависела от вида микроорганизмов и коррелировала с состоянием биоценоза. Была изучена особенность симбиоза разных пар бактерий с учетом их экологических и видовых характеристик: взаимодействия между штаммами условно-патогенных видов бактерий (пары «индиген-индиген»), взаимодействия между патогенными видами бактерий (пары «патоген-патоген»), взаимодействия между патогенными и условно-патогенными видами бактерий (пары «патоген-индиген»).

Сравнительная оценка особенностей межбактериальных взаимодействий была проведена в биоценозах 4-х групп лиц: больные, у которых из биоценоза выделялся золотистый стафилококк (п=80 пар бактерий), больные без выделения S.aureus (n=248 пар бактерий), здоровые носители S.aureus (n=56 пар бактерий), здоровые (п=328 пар бактерий). Результаты синергидного эффекта в экспрессии факторов

патогенности при взаимодействии условно-патогенных микроорганизмов представлены на рисунке 3.

Примеиние: цифрами обозначена достоверность различий при р<0,05:1 - в группах здоровых и бактерионосителей;

2 - в группах здоровых и больных без S-aureus; 3 - в группах здоровых и больных с S-aureus;

4 - в группах бактерионосителей и больных без S-aureus; 5 - в группах бактерионосителей и больных с S-aureus.

Как видно из приведенного рисунка, усиление ГА чаще наблюдалось при взаимодействии условно-патогенных бактерий, выделенных из биоценозов больных хроническим тонзиллитом и бактерионосителей, по сравнению со штаммами от здоровых (13,4±3,2%, 15,1±1,6% и 17,4±1,7% против 6,3±0,9%, р<0,05). Повышение ЛецА и ЛА чаще наблюдалось при взаимодействии штаммов от больных (15,6±1,6%, 20,6±3,2% и 12,3±1,5%, 15,0±2,8% соответственно) по сравнению со здоровыми (1,5±0,5% и 2,9±0,7% соответственно, р<0,05) и бактерионосителями (5,4±2,1% и 1,7±1,3% соответственно, р<0,05). Усиление АЛА более часто обнаружено при взаимодействии условно-патогенных видов бактерий, выделенных из биоценозов бактерионосителей (13,4±3,2%), по сравнению со здоровыми (4,6±0,8%) и больными (5,0± 1,7%), р<0,05.

Так как штаммы микроорганизмов рода Staphylococcus высевались от больных хроническим тонзиллитом в большем проценте случаев, были изучены взаимодействия между представителями этого рода. При взаимодействии коагулазоотрицательных стафилококков, выделенных от больных лиц, из биоценоза которых не высевались штаммы S.aureus или S.pyogenes, в 20,3±3,7% случаев наблюдалось усиление ЛецА и в 16,9±3,4% случаев - ЛА, тогда как штаммы, выде-

ленные от здоровых проявляли подобный эффект в 0,9±0,9% и 3,7±1,8% случаев соответственно (р<0,05).

Наряду с повышением частоты проявления факторов патоген-ности, в определенном проценте случаев имело место их подавление при межмикробных взаимодействиях. Эффект антагонизма проявлялся среди штаммов условно-патогенных видов бактерий. Взаимодействие условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от стафилококковых бактерионосителей, чаще, по сравнению с микроорганизмами от больных людей, характеризовалось снижением лизоцимной активности (17,0±3,5% про т^ОДНйр ,05).

При взаимодействии между штаммами патогена (Б.аигеш) наблюдали антагонистический эффект по экспрессии гемолитической активности в биоценозе больных и бактерионосителей (30,0±14,4% и 33,3±19,2% соответственно). Подавление лецитовителлазной активности наблюдали только в биоценозе бактерионосителей ( 16,7±15,2%), а антилизоцимной активности - только в биоценозе больных (20,0±12,6%). При взаимодействии штаммов Б.аигеиз, выделенных от больных людей чаще, по сравнению с представителями микрофлоры слизистой оболочки миндалин у носителей, наблюдалась выраженная бактериоциногенная активность ( против ,

р<0,05).

Индифферентные влияния на экспрессию биологических свойств чаще проявлялись при взаимодействии штаммов, выделенных от здоровых людей. При взаимодействии условно-патогенных микроорганизмов, представителей нормоценоза, по сравнению со штаммами, выделенными из биоценоза больных, чаще наблюдался индифферентный эффект по экспрессии ЛА (81,3±3,7% против 66,9±3,7%, р<0,05) и АЛА (90,1 ±1,2% против 74,1±4,1%, р<0,05). Кроме того, микроорганизмы, представители нормоценоза, в не оказы-

вали влияния на ростовые характеристики бактерий-симбионтов.

На следующем этапе изучались межбактериальные взаимодействия в парах «патоген-индиген». Исследовано 90 пар микроорганизмов, выделенных от бактерионосителей, и 150 пар бактерий, представляющих микрофлору слизистой оболочки миндалин больных людей. На рисунке 4 показана распространенность синергидных взаимодействий штаммов Б.аигеиз и коагулазоотрицательных стафилококков, выделенных от бактерионосителей и больных хроническим тонзиллитом.

% пар штаммов

ГА ЛецА ЛА АЛА

Примечание: • достоасрносп огличнй р<0,05 □ бастерионосители В больные

Рисунок 4 • Распространенность синергндных взаимодействий штаммов

S.aureus и коагулазоотринательк^1х стафилококков, выделенных от бактерионосителей н больных хроническим тонзиллитом.

Отмечалось повышение частоты выраженности ГА (27,5±5,4% симбиотических связей против 10,0±5,4% связей между микроорганизмами, выделенными из биоценоза бактерионосителей, р<0,05) и ЛецА (в 60,3±5,9% случаев симбиоза против 3,3±3,2% в группе здоровых бактерионосителей, р<0,05). Штаммы коагулазоотрицательных стафилококков, представителей патоценоза, усиливали ЛецА и ЛА патогена (у 52,9±8,5% и 32,4±8,0% штаммов, р<0,05), при этом у них самих усиливалась экспрессия ГА и ЛецА (у 32,3±8,0% и 67,6±8,0% штаммов, соответственно, р<0,05).

Изменения в экспрессии ГА и ЛецА наблюдались и при взаимодействии условно-патогенных стрептококков с золотистым стафилококком (26,3±7,1% симбиотических связей с модификацией ГА у штаммов от больных против 8,8±4,8% среди штаммов от бактерионосителей и 31,6±7,5% случаев симбиоза с модификацией ЛецА у штаммов из патоценоза против 2,9±2,8% у штаммов, выделенных из нормоценоза, р<0,05). Штаммы рода Streptococcus ослабляли ГА у 36,8±11,0% штаммов S.aureus, но усиливали ЛецА у 47,4±11,4% штаммов золотистого стафилококка, выделяемого из патоценоза. Одновременно, патоген значительно подавлял рост условно-патогенных микроорганизмов за счет выраженной бактериоциногенной активности, оказываемой патогеном в отношении 63,2±11,1% штаммов.

Изменения в проявлении факторов патогенности характеризуют золотистого стафилококка, выделяемого из биоценоза больных людей как

возбудителя. Увеличивая численность штаммов условно-патогенных микроорганизмов, обладающих ГА, ЛецА и ЛА, Б.аигеиз способствует поддержанию воспалительного процесса. Снижение антилизоцимной активности и выраженная бактериоциногения патогена, направленные против представителей нормофлоры, приводит к элиминации их из биоценоза, что подтверждается формированием дисбиоза на слизистой оболочки миндалин у больных хроническим тонзиллитом.

Схематически наиболее характерные особенности функционирования индикаторных пар бактерий по экспрессии факторов патогенности в норме и при патологии можно представить следующим образом (рисунок 5).

Индикаторные пары Обследуемые (микробиоценозы) ГА ЛецА ЛА АЛА Рост

индиген-индиген Больные Ж * ; 3? шш щт ШуЖ

Бактерионосители » И 111 V* и

Здоровые и И И и и

патоген-индиген Больные >Г у Ж 1Ш ш

Бактерионосители и и и и и

Примечание:

! у | взаимное усиление экспрессии фактора взаимное подавление экспрессии фактора

| и | индифферентное действие

Рисунок 5 - Особенности функционирования индикаторных пар бактерий по экспрессии факторов патогенности в норме и при патологии.

Как видно из рисунка 5, взаимодействия между представителями индигенной микрофлоры больных хроническим тонзиллитом носят си-нергидный характер по экспрессии ГА, ЛецА и ЛА; антагонистический -по АЛА и ростовым показателям. В биоценозе бактерионосителей при межмикробных взаимодействиях проявляется усиление ГА и АЛА, в то время как снижается ЛА, а ЛецА и ростовые показатели не меняются. Взаимодействия представителей нормофлоры здоровых людей носили индифферентный характер по проявлению факторов патогенности и показателю роста.

В парах «патоген-индиген», выделенных из биоценоза больных наблюдалось взаимное усиление факторов патогенности (гемолитиче-

ской, лецитовителлазной и лизоцимной активностей), подавление антили-зоцимной активности и бактериоциногения, тогда как в подобных парах, выделенных от бактерионосителей, имело место индифферентное влияние.

Чаще других факторов патогенности наблюдалось взаимное усиление лецитовителлазной активности в биоценозе больных в парах «ин-диген-индиген» и «патоген-индиген». На основе проведенных исследований была выбрана наиболее информативная пара (S.aureus-KOC) по синергизму в отношении лецитовителлазной активности, что позволило предложить микробиологические критерии диагностики хронического тонзиллита. Для решения указанной задачи из микрофлоры слизистой оболочки миндалин выделяли чистые культуры S.aureus и коагулазоотри-цательных стафилококков (КОС), готовили их микробные взвеси, проводили перекрестный посев взвесей двух культур микробов-ассоциантов на плотную питательную среду с яичным желтком, контрольные посевы этих же культур проводили штрихом. Посевы инкубировали, затем изучали характер изменения лецитовителлазной активности (ЛецА) у выделенных микробов-ассоциантов путем измерения ширины зоны помутнения в опыте и контроле, при увеличении ее в опыте по сравнению с контролем на 1 мм и более, хотя бы у одной культуры, диагностировали хронический тонзиллит.

Предлагаемый способ (патент РФ на изобретение №2188422 от 27 августа 2002 года) позволял повысить эффективность диагностики, а именно повысить точность и сократить ее сроки.

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам изменяется в процессе воздействия на них препаратов: имеет место привыкание и возникновение устойчивых к антибиотикам вариантов. В связи с изложен -ным, изучалась модификация антибиотикорезистентности микроорганизмов в условиях межмикробных взаимодействий.

В условиях межбактериальных взаимодействий культуры, выделенные от больных, по сравнению со штаммами, выделенными от здоровых, в случаев усиливали резистентность ко всем антибиогикам. Тогда как штаммы, выделенные от здоровых, чаще не оказывали влияния (в 75,1±1,6% - 86,9±1,2% случаев).

При сравнении особенностей взаимодействия условно-патогенных микроорганизмов, выделенных из биоценозов, содержащих патогенный вид - S.aureus, по сравнению с микрофлорой носителей, чаще выявлено усиление устойчивости исследуемых штаммов к ампициллину (15,6±2,8% против 8,6±3,3%, р<0,05) и левомицетингу (,1±2,1% против 1,4±1,4%, р<0,05). Взаимодействия между микроорганизмами-представителями

биоценоза больных, свободных от Б.аигеиз, по сравнению с взаимовлияниями штаммов из биоценоза, содержащего данный патоген, чаще характеризовались повышением антибиотикорезистентности в отношении ван-комицина (24,0±1,9% против 5,0±1,7%, р<0,05), клиндамицина (10,1±1,3% п р5,Ш=1Д%,ир<(^05) и левомицетина (19,4±1,7% против 8,1±2,6%,Р<0,05).

Антагонистический эффект на экспрессию антибиотикорезистент-ности был выражен при взаимодействии штаммов, выделенных из биоценоза больных. Так, снижение устойчивости к клиндамицину наблюдалось в 12,3% случаев, к эритромицину - в 21,4% случаев.

Таким образом, при взаимодействии микроорганизмов, выделенных из биоценозов больных, по сравнению с представителями нормоце-ноза, происходило повышение резистентности к антибиотикам. Параллельно отмечалось снижение уровня устойчивости к клиндамицину и эритромицину.

Взаимодействия между штаммами Б.аигеш, выделенными от больных хроническим тонзиллитом в 10% - 50% случаев характеризовались повышением резистентности ко всем антибиотикам, что способствовало селекции антибиотикорезистентных штаммов, тогда как штаммы Б.аигеиз, выделенные от здоровых бактерионосителей, проявляли индифферентное действие на антибиотикоустойчивость.

Золотистый стафилококк, присутствовавший в биоценозе больных, в большем проценте случаев, по сравнению со штаммами Б.аигеиз, выделенными от бактерионосителей, повышал резистентность штаммов условно-патогенных видов микроорганизмов к эритромицину (24,0±4,9% против 4,0±3,9%, р<0,05). В парах «патоген-индиген», выделенных из биоценозов здоровых в 100% случаев отмечался индифферентный эффект воздействия золотистого стафилококка на антибиотикорезистентность индигенной флоры. Тогда как влияние на него условно-патогенных микроорганизмов ограничивалось повышением резистентности к эритромицину (37,3±5,5% против 4,0±3,9%, р<0,05).

Полученные данные об изменчивости антибиотикорезистентности штаммов в условиях межмикробных взаимодействий позволили разработать микробиологические критерии выбора эффективного антибиотика для элиминации возбудителя из биоценоза слизистой оболочки миндалин.

Со слизистой оболочки миндалин выделяли чистые культуры возбудителя и условно-патогенных микроорганизмов, готовили их микробные взвеси, проводили штампом перекрестный посев микробных взвесей возбудителя с каждым из выделенных представителей условно-патогенных микроорганизмов на плотную питательную среду, контроль-

ные посевы этих же культур проводили полосой, на место перекреста в опыте и на центр посева в контроле наносили индикаторный диск, пропитанный антибиотиком, инкубировали и измеряли диаметр зон задержки роста культур вокруг диска в опыте и контроле.

Если в опыте, по сравнению с контролем, диаметр зоны задержки роста возбудителя увеличивался на 1 мм и более, то говорили об усилении чувствительности к данному антибиотику у патогена в ассоциации с представителем условно-патогенной микрофлоры. Если микробы-ассоцианты, представители условно-патогенной микрофлоры, устойчивы к антибиотику, как в монокультуре, так и в условиях симбиоза с патогеном, то предпочтительно применение данного антибиотика, так как он губительно действует на патоген и не действует на условно-патогенные микроорганизмы. Если же диаметр зоны задержки роста патогена уменьшался в опыте, то это свидетельствовало о снижении чувствительности возбудителя к данному препарату и его нельзя применять для лечения больного. Нежелательно применение антибиотика в случае чувствительности к нему микроорганизма, представителя условно-патогенной флоры, как в монокультуре, так и в ассоциации с патогеном.

Таким образом, предлагаемый способ определения эффективности антибиотика для лечения воспалительных заболеваний микробной этиологии позволял выбрать препарат, к которому в условиях межмикробных взаимодействий происходит снижение резистентности патогена и одновременно повышается или не изменяется резистентность индигенной флоры. Применение выбранного данным способом антибиотика для лечения заболевания микробной этиологии позволит элиминировать патоген из экониши, сохранив при этом представителей нормофлоры.

Оценивая полученный фактический материал в целом, следует выделить три основных момента:

Во-первых, выявлено, что тонзиллярная микрофлора больных, по сравнению с представителями данного биоценоза у здоровых людей, характеризуется более высокой частотой встречаемости микроорганизмов рода Staphylococcus, среди которых виды S.aureus, S.warneri, S.haemolyticus и S.epidermidis являются доминирующими. Микрофлора слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом, чаще характеризуется комплексом факторов патогенности и антибиотикорези-стентностью. В ассоциациях возбудители чаще проявляют ЛА и АЛА, чем в монофлоре.

Во-вторых, в патомикробиоценозах наблюдается значительная активность симбионтов при межбактериальных взаимодействиях, часто вы-

ражающаяся в усилении экспрессии гемолитической, лецитовителлазной, лизоцимной, антилизоцимной активностей и повышении устойчивости к антибактериальным препаратам. Микроорганизмы, выделенные со слизистой оболочки миндалин здоровых людей, в условиях межмикробных взаимодействий редко оказывают влияние друг на друга по модификации факторов патогенности и антибиотикорезистентности.

В-третьих, выявленные особенности межбактериальных взаимодействий в индикаторных парах «патоген-индиген» позволяют предложить методический подход к диагностике хронического тонзиллита и выбору эффективного антибиотика для элиминации возбудителя из биоценоза слизистой оболочки миндалин.

Выводы

1. В биоценозе здоровых людей, по сравнению с больными, в 1,5 раза чаще встречались штаммы рода Streptococcus, тогда как на слизистой оболочке миндалин больных хроническим тонзиллитом в 1,3-4 раза чаще преобладали микроорганизмы родов Staphylococcus, Klebsiella и Neisseria.

2. Среди микроорганизмов, выделенные от больных, в два раза чаще, по сравнению с представителями биоценоза здоровых, встречались штаммы, обладающие двумя и более факторами патогенности одновременно. Микрофлора слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом лиц характеризовалась резистентностью к пе-нициллинам, макролидам и аминогликозидам, но одновременно проявляла чувствительность к линкосамидам, гликопептидам.

3. Штаммы возбудителей в ассоциации чаще; чем в монокультуре, обладали факторами патогенности. В ассоциациях микроорганизмы в 1,8 раза чаще проявляли резистентность к двум и более антибиотикам.

4. Разработан методический подход к изучению модификации биологических свойств микроорганизмов в условиях симбиоза. Направленность межмикробных взаимодействий по экспрессии факторов пато-генности и антибиотикорезистентности зависела от видов симбионтов и состояния микробного биоценоза. У больных в парах «патоген-индиген» происходило взаимное усиление гемолитической, лецитови-теллазной и лизоцимной активностей. В парах «патоген-индиген», выделенных от бактерионосителей, взаимодействия между симбионтами носили индифферентный характер.

5. Разработан метод оценки антибиотикорезистентности микробов-ассоциантов в условиях сокультивирования на плотной питательной среде. Установлено, что в патоценозе имела место значительная активность симбионтов в парах «патоген-индиген» по усилению антибиотикорезистентности к пенициллинам, макролидам, левомицетину, линкосамидам, аминогликозидам, гликопептидам. Среди представителей нормобиоценоза изменений в антибиотикорезистентности не наблюдалось.

6. Предложен методический подход, основанный на оценке функциональных особенностей индикаторных пар бактерий-симбионтов и позволяющий получить дополнительные критерии к диагностике и терапии заболеваний с учетом межбактериальных взаимодействий.

7. Использование нового методического подхода позволило разработать способ диагностики хронического тонзиллита (патент РФ) и способ выбора эффективного антибиотика с учетом межбактериальных взаимодействий патогена и индигена (решение о выдачи патента РФ).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Усвяцов Б.Я. Микрофлора слизистой миндалин при хроническом тонзиллите у детей в современных условиях / Б.Я. Усвяцов, Л.М. Хуснутдинова / Спорные вопросы оториноларингологии. Сборник науч. трудов посвященный 100-летию А.О. Шульги. Оренбург, 2000.-С. 97-99

2. Бухарин О. В. Некоторые особенности микрофлоры миндалин и межмикробного взаимодействия (в норме и при патологии) / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, Л.М. Хуснутдинова // Журн.микробиол.-2000.-№4 приложение - С. 82-85.

3. Хуснугдинова Л.М. Роль межмикробного взаимодействия в формировании биоценоза слизистой миндалин у здоровых детей / Л.М. Хуснутдинова // Здравоохранение Башкортостана.-2000.-№2.-С. 217-218.

4. Хуснутдинова Л.М. Оценка свойств пар микробов-симбионтов при диагностике хронического тонзиллита / Л.М. Хуснутдинова / Тезисы докладов 56-й итоговой конференции студ. науч. общества. Оренбург, 2001, с. 155-156.

5. Усвяцов Б.Я. Особенности межмикробных взаимодействий на слизистой миндалин у здоровых детей и больных хроническим тонзиллитом / Б.Я. Усвяцов, Л.М. Хуснутдинова А.И. Шульга / Тезисы докладов И-го Международного конгресса оториноларин-

галоши, аллергологии,. эндоскопической и лазерной хирургии. Греция. Афины, 2001, С. 121.

6. Хуснутдинова Л.М. Микробиологические критерии диагностики безангинных форм хронического тонзиллита / Л.М. Хуснутдинова // Здравоохранение Башкортостана. - 2001. - №8. - С. 122-124.

7. ХуснутдиноваЛ.М. Формирование микробного биоценоза слизистой миндалин в норме и при патологии 7 Л.М. Хуснутдинова / Тезисы докладов Итоговой Всероссийской научной студенческой конференции. Москва, 2002 - С. 203-204.

8. Бухарин О.В. Способ диагностики хронического тонзиллита / О.В. Бухарин,- Б .Я. Усвяцов, Л.М. Хуснутдинова / Патент РФ на изобретение №2188422 от 27 августа 2002 года, бюл. №24. - 12с.

9. Бухарин О.В. Межбактериальные взаимодействия/ O.B; Бухарин, Б.Я. Усвяцов, Л.М. Хуснутдинова // Журн; микробиол.-2003.-№4.-С.3-8.

Хуснутдинова Лилия Мидехатевна

Межбактериальные взаимодействия на слизистой оболочке миндалин человека.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оригинал-макет изготовлен с помощью текстового редактора Microsoft Word 2000 for Windows. Подписано в печать 6.02.2004. Гарнитура Тайме. Печать офсетная. Усл. печ. л. - 1,0. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Хуснутдинова, Лилия Мидехатевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Межбактериальные взаимодействия и их роль в формировании биоценозов тела человека (обзор литературы).

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика исследуемого материала.

2.2. Методика исследования микробного биоценоза слизистой оболочки миндалин.

2.3. Методы изучения факторов патогенности, чувствительности к антибиотикам.

2.4: Методика изучения факторов патогенности в условиях межбактериальных взаимодействий.

2.5. Методика изучения чувствительности к антибиотикам в условиях межбактериальных взаимодействий.

2.6. Методы статистической обработки.

ГЛАВА 3. Микрофлора слизистой оболочки миндалин здоровых людей и больных хроническим тонзиллитом таксономия, распространенность биологических свойств).

3.1. Таксономическое разнообразие микробных биоценозов.

3.2. Распространенность факторов патогенности среди представителей микрофлоры слизистой оболочки миндалин.

3.2.1. Распространенность отдельных факторов патогенности.

3.2.2. Распространенность комплекса факторов патогенности среди представителей микрофлоры слизистой оболочки миндалин в норме и при хроническом тонзиллите.

3.3. Чувствительность к антибиотикам.

3.3.1. Чувствительность к антибиотикам различных таксонов.

3.3.2. Ассоциированная резистентность к антибиотикам.

ГЛАВА 4. Распространенность факторов патогенности у возбудителей в монофлоре и в ассоциациях.

ГЛАВА 5. Модификация биологических свойств микроорганизмов в условиях межбактериальных взаимодействий in vitro.

5.1. Модификация факторов патогенности при межбактериальных взаимодействиях.

5.1.1. Модификация факторов патогенности при межбактериальных взаимодействиях разных таксонов.

5.1.2. Модификация факторов патогенности при взаимодействии условно-патогенных видов микроорганизмов, с учетов выделения их из биоценозов, содержащих золотистый стафилококк или свободных от него.

5.1.3. Модификация факторов патогенности при взаимодействии штаммов золотистого стафилококка между собой.

5.1.4. Модификация факторов патогенности при взаимодействии штаммов условно-патогенных микроорганизмов и золотистого стафилококка.

5.2. Модификация резистентности к антибиотикам при межбактериальных взаимодействиях.

5.2.1. Модификация резистентности к антибиотикам при межбактериальных взаимодействиях разных таксонов.

5.2.2. Модификация антибиотикорезистентности при взаимодействии микроорганизмов с учетов выделения их из биоценозов, содержащих золотистый стафилококк или свободных от него.

5.2.3. Модификация резистентности к антибиотикам при взаимодействии штаммов золотистого стафилококка.

5.2.4. Модификация резистентности к антибиотикам при взаимодействии условно-патогенных видоб микроорганизмов и золотистого стафилококка.

ГЛАВА 6. Практическое использование данных о характере межбактериальных взаимодействий в биоценозе слизистой оболочки миндалин.

6.1. Микробиологические критерии диагностики хронического тонзиллита.

6.2. Микробиологические критерии выбора антибиотика для элиминации возбудителя из биоценоза слизистой оболочки миндалин.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Межбактериальные взаимодействия на слизистой оболочке миндалин человека"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Организм человека — экологическая ниша для множества разнообразных микроорганизмов, которые в норме заселяют его биотопы [102]. Микробиоценозы тела человека представляют собой сложные системы, отличающиеся многокомпонентностью и количественным разнообразием. Общепризнано, что в процессе эволюции при взаимодействии организма хозяина с окружающими его микроорганизмами произошел отбор определенных видов микробов, способных к прикреплению и колонизации слизистых оболочек соответствующих экологических ниш и использующих организм хозяина как новую среду обитания. Так сформировались симбиотические ассоциации, составляющие нормальную микрофлору человека и животных [18].

Совершенно очевидно, что в природе не существует так называемых чистых биосистем и подавляющее большинство явлений, наблюдаемых в естественных условиях, является результатом эволюционно сложившихся форм существования различных ассоциаций [31]. Широкое распространение микроорганизмов, существование в близких территориальных границах, конкуренция за питательные ресурсы, борьба за сохранение вида — все это неизбежно приводит к тесному взаимодействию биологических существ во всем многообразии их проявлений [7].

Среди ассоциаций многочисленны примеры симбиотических форм взаимоотношений двух и более микроорганизмов разных видов, при которых создаются взаимовыгодные условия, и ассоцианты совместно участвуют в регуляции отношений с внешней средой [14]. Периодический анализ и осмысление на новом уровне многочисленных проявлений ассоциаций позволяют выяснить патогенез ряда инфекционных заболеваний различной этиологии или правильно оценить происхождение тех или иных аномалий в структуре микроорганизмов, приводящих к изменению их типичных свойств например, изменению специфического клеточного тропизма), или проявлению совершенно новых необычных биологических свойств (например, возникновение химерных фенотипических антигенных вариантов у вирусов) [78]. Бактерии не остаются безучастными к антибактериальному воздействию на них ассоциантов, а так же к различным изменениям условий существования. Они адаптируются к ним, изменяя свои свойства и, прежде всего, обменные процессы. В результате этих изменений происходит образование устойчивых к антибактериальному воздействию форм, отличных от исходной культуры по своим морфологическим, биохимическим, антигенным и другим свойствам. Образование таких устойчивых форм наблюдается как в лабораторных условиях, так и в условиях естественного роста и является выражением приспособления бактерий к условиям внешней среды [71].

При изучении ассоциаций микроорганизмов решаются две проблемы. С одной стороны, оцениваются механизмы межмикробных взаимодействий в микросистемах и их роль в формировании биоценозов. С другой стороны, взаимодействия микроорганизмов-представителей одного биотопа, используются как инструмент для решения прикладных задач медицины и биологии [102].

Особенности межмикробных взаимодействий могут существенно влиять на формы и течение инфекционного процесса. Возбудители при ассоциированной инфекции чаще характеризовались антибиотикорезистентностью, антилизоцимной активностью [142], адгезивной, гемолитической, антилизо-цимной, антиинтерцидной, лецитовителлазной, ДНК-азной активностями [1]. В то же время, межбактериальные взаимодействия как один из механизмов формирования ассоциаций микроорганизмов при микст-инфекциях, изучены недостаточно.

На слизистой оболочке миндалин обнаружены ассоциации стафилококков [123, 132, 133], пептострептококков, условно- и облигатно-патогенных бактерий [9, 10, 99] и дрожжеподобных грибов рода Candida [40, 68, 100]. Условно-патогенные микроорганизмы представители микрофлоры миндалин характеризуются наличием факторов патогенности (AJIA, ЛА, АИА, АКрА) [39] и множественной лекарственной устойчивостью [156, 168]. Микрофлора слизистой оболочки миндалин чувствительна к различного рода воздействиям на организм в целом [32, 51, 76, 117] и может служить индикатором общего состояния макроорганизма.

Изменения в проявлении патогенных свойств представителями микрофлоры миндалин с учетом их симбиотических связей изучены недостаточно. Вместе с тем данные об изменчивости биологических свойств микробов-ассоциантов могут быть использованы как критерии для диагностики патологического процесса и выбора антибактериального препарата для элиминации возбудителя из микробиоценоза.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ, Целью настоящего исследования явилось изучение межбактериальных взаимодействий на слизистой оболочке миндалин и оценка возможности их клинико-лабораторного использования.

Для реализации этой цели были поставлены следующие ЗАДАЧИ:

1. Изучить распространенность комплекса факторов патогенности и анти-биотикорезистентности у микроорганизмов, выделенных со слизистой оболочки миндалин, с учетом состояния биоценоза, а также ассоциации возбудителей.

2. Разработать методы исследования факторов патогенности и антибиотико-резистентности при межбактериальных взаимодействиях.

3. Выявить особенности проявления факторов патогенности и антибиотико-резистентности при межбактериальных взаимодействиях в биоценозе здоровых и больных хроническим тонзиллитом.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Установлено, что тонзиллярная микрофлора больных, по сравнению со здоровыми, чаще обладает комплексом факторов патогенности (гемолитической, лецитовителлазной, лизоцимной и антилизо-цимной активностями) и антибиотикорезистентностью. Показано, что возбудители в монокультуре реже, чем в ассоциациях проявляют факторы патогенности и резистентность к двум и более антибиотикам. Разработаны методы исследования биологических свойств бактерий при межбактериальных взаимодействиях. Обнаружена разнотипная направленность модификации факторов патогенности и антибиотикорезистентности в зависимости от видовых характеристик бактерий-симбионтов и состояния микробного биоценоза. Выявлено, что в парах «патоген-индиген» и «индиген-индиген», выделенных от больных, наблюдается взаимное усиление патогенности и антибиотикорезистентности, тогда как в биоценозах здоровых людей и стафилококковых бактерионосителей взаимодействия между симбионтами носят индифферентный характер.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Полученные в работе данные расширяют представления о функциональной активности при межбактериальных взаимодействиях представителей микрофлоры слизистой оболочки миндалин в норме и при хроническом тонзиллите.

Практическое значение работы определяется разработкой методов изучения модификации факторов патогенности и антибиотикорезистентности при межбактериальных взаимодействиях. Разработанные методические приемы могут быть использованы для диагностики и лечения хронического тонзиллита, а также при проведении экспериментальных исследований сим-биотических взаимоотношений бактерий.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Возбудители в ассоциации и условно-патогенные микроорганизмы в биоценозе миндалин больных хроническим тонзиллитом чаще характеризуются проявлением комплекса факторов патогенности и антибиотикорези-стентностью, по сравнению с микрофлорой здоровых лиц.

2. Направленность эффекта модификации биологических свойств зависит от вида бактерий-симбионтов и состояния микробиоценоза (нормоценоз, па-тоценоз). Микроорганизмы, выделенные из патоценоза, в условиях межбактериальных взаимодействий чаще оказывают синергидное влияние на проявление факторов патогенности и формирование антибиотикорезистентности, тогда как симбиотические взаимодействия тонзиллярной микрофлоры от здоровых носят индифферентный характер.

3. Предложен новый методический подход для диагностики патологического процесса и выбора антибиотика с целью элиминации возбудителя из биоценоза, основанный на оценке особенностей межбактериальных взаимодействий в индикаторных парах штаммов-симбионтов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы доложены и обсуждены на: областной конференции оториноларингологов, посвященной 100-летию со дня рождения А.О. Шульги (Оренбург, 2000); на 54-й, 55-й и 56-й конференциях СНО ОГМА (Оренбург, 1999; 2000; 2001); третьей Российской конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2000); П-м Международном конгрессе по оториноларингологии, аллергологии, эндоскопической и лазерной хирургии (Греция, Афины, 2001); итоговой Всероссийской научной студенческой конференции (Москва, 2002); четвертой Российской конференции с международным участием «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2003); научной конференции по итогам работы в рамках программы Президиума РАН «Фундаментальные науки — медицине» (Москва, 2003).

Материалы работы были представлены в 2001 году на Всероссийский конкурс научно-исследовательских работ студентов (Медаль Министерства образования РФ). Результаты диссертационного исследования экспонировались на областной выставке научно-технического творчества молодежи НТТМ-2003 (Оренбург, 2003) и на областной выставке «Наука - сельскому хозяйству» (Оренбург, 2003).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе патент РФ на изобретение №2188422 от 27 августа 2002 года.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Хуснутдинова, Лилия Мидехатевна

ВЫВОДЫ

1. В биоценозе здоровых людей, по сравнению с больными, в 1,5 раза чаще встречались штаммы рода Streptococcus, тогда как на слизистой оболочке миндалин больных хроническим тонзиллитом в 1,3 — 4 раза чаще преобладали микроорганизмы родов Staphylococcus, Klebsiella и Neisseria.

2. Среди микроорганизмов, выделенные от больных, в два раза чаще, по сравнению с представителями биоценоза здоровых, встречались штаммы, обладающие двумя и более факторами патогенности одновременно. Микрофлора слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом лиц характеризовалась резистентностью к пенициллинам, макролидам и аминогликозидам, но одновременно проявляла чувствительность к лин-косамидам, гликопептидам.

3. Штаммы возбудителей в ассоциации чаще, чем в монокультуре, обладали факторами патогенности. В ассоциациях микроорганизмы в 1,8 раза чаще проявляли резистентность к двум и более антибиотикам.

4. Разработан методический подход к изучению модификации биологических свойств микроорганизмов в условиях симбиоза. Направленность межмикробных взаимодействий по экспрессии факторов патогенности и антибиотикорезистентности зависела от видов симбионтов и состояния микробного биоценоза. У больных в парах «патоген-индиген» происходило взаимное усиление гемолитической, лецитовителлазной и лизоцимной активностей. В парах «патоген-индиген», выделенных от бактерионосителей, взаимодействия между симбионтами носили индифферентный характер.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Формирование организма человека в процессе его эволюции происходило в постоянном и теснейшем контакте с миром микроорганизмов [102]. Микробиоценозы тела человека представляют собой сложные системы, отличающиеся не только многокомпонентностью, но и количественным разнообразием [31]. В процессе эволюции при взаимодействии организма хозяина с окружающими его микроорганизмами сформировались симбиотические сообщества, составляющие нормальную микрофлору человека [18]. В последнее время появляется все большее число работ, свидетельствующих о причастности отдельных представителей индигенной микрофлоры к развитию патологических процессов. В отличие от официально признанных патогенных микроорганизмов условно-патогенные микробы вызывают инфекционный процесс, как правило, при наличии сниженной естественной резистентности организма хозяина. Причины этого явления остаются до конца невыясненными.

Особенности межмикробных взаимодействий могут существенно влиять на формы и течение инфекционного процесса. Известно, что возбудители при ассоциированной инфекции чаще характеризовались антибиотикорези-стентностью, антилизоцимной активностью [142], адгезивной, гемолитической, антилизоцимной, антиинтерцидной, лецитовителлазной, ДНК-азной активностями [1]. В то же время, межбактериальные взаимодействия как один из механизмов формирования ассоциаций микроорганизмов при микст-инфекциях, изучены недостаточно.

На слизистой оболочке миндалин обнаружены ассоциации стафилококков [96, 123, 132, 133, 147], пептострептококков, условно- и облигатно-патогенных бактерий [9, 10, 99] и дрожжеподобных грибов рода Candida [40, 68, 100]. Условно-патогенные микроорганизмы представители микрофлоры миндалин характеризовались наличием факторов патогенности (АЛА, ЛА, АИА, АКрА) [39] и множественной лекарственной устойчивостью [156, 168]. Микрофлора слизистой оболочки миндалин чувствительна к различного рода воздействиям на организм в целом [32, 51, 76, 117] и может служить индикатором общего состояния макроорганизма. Изменения в аутомикрофлоре можно использовать как критерий для диагностики явных и скрытых нарушений функций организма, форм патологического процесса и оценки эффективности проводимой терапии.

Целью настоящего исследования явилось изучение межбактериальных взаимодействий на слизистой оболочке миндалин и оценка возможности их клинико-лабораторного использования. Для реализации этой цели были поставлены и решены следующие задачи: изучена распространенность комплекса факторов патогенности и антибиотикорезистентности у микроорганизмов, выделенных со слизистой оболочки миндалин, с учетом состояния биоценоза, а также ассоциации возбудителей; разработаны методы исследования факторов патогенности и антибиотикорезистентности при межбактериальных взаимодействиях; выявлены особенности проявления факторов патогенности и антибиотикорезистентности при межбактериальных взаимодействиях в биоценозе здоровых и больных хроническим тонзиллитом; предложены методические подходы к диагностике хронического тонзиллита и выбору антибиотика, для эффективной элиминации возбудителя, с учетом межбактериальных взаимодействий на слизистой оболочке миндалин.

При проведении настоящего исследования использовано 455 штаммов микроорганизмов, выделенных со слизистой оболочки миндалин 50 клинически здоровых людей и 50 больных хроническим тонзиллитом, проживающих в городе Оренбурге. У выделенных штаммов микроорганизмов изучали факторы патогенности: гемолитическую, плазмокоагулазную, лецитовителлаз-ную, лизоцимную и антилизоцимную активности по общепринятым методикам [75, 124]. Для оценки изменения факторов патогенности в условиях межмикробных взаимодействий, разработан оригинальный метод сокульти-вирования штаммов на плотной питательной среде. На чашке Петри с плотной питательной средой, содержащей индикатор на выявление определенного свойства бактерии, с помощью стандартной микробиологической петли (диаметр 2 мм) производились посевы штрихом (длина 15 мм, ширина 2 мм) взвеси культур (1x109 КОЕ/мл): одной культуры горизонтально, а вторая культура высевалась вертикальной полосой (контроль). В центре чашки проводились посевы этих же культур под прямым углом, где и происходило взаимодействие микроорганизмов (опыт). Через 24 часа инкубации в термостате при 37°С, измерялась ширина зон действия фактора. В контроле ширина зоны действия фактора измерялась в области середины макроколонии, а в опыте - на расстоянии 2 мм от центра пересечения макроколоний микробов-симбионтов. При увеличении зоны действия фактора в опыте по сравнению с контролем на 1 мм и более отмечали усиление экспрессии данного свойства, при уменьшении этой зоны на 1 мм и более говорили об ослаблении проявления данного свойства. Отсутствие изменений или изменения менее чем на 1 мм (ошибка метода) оценивались как индифферентное влияние штаммов друг на друга.

Модификация антибиотикорезистентности при взаимодействии мик-робов-ассоциантов определялась методом перекрестных посевов взвеси культур (1x109 КОЕ/мл) штампом в центре чашки Петри с плотной питательной средой. Контрольные посевы этих же культур проводили штампом по периферии чашки. На место перекреста (в опыте) и на центр посева (в контроле) наносили стандартные диски с антибиотиком, инкубировали и измеряли диаметр зон задержки роста культур вокруг диска в опыте и контроле. При увеличении диаметра зоны задержки роста у штамма возбудителя в опыте, по сравнению с контролем, на 1 мм и более считали антибиотик эффективным для элиминации возбудителя из биоценоза.

Материалы, полученные в результате экспериментальных исследований, были подвергнуты статистической обработке с использованием компьютерной программы SPSS 8.0 for Windows с применением стандартных методов вариационной статистики и корреляционного анализа [63, 137].

Изучено видовое разнообразие представителей микрофлоры слизистой оболочки миндалин в норме и при хроническом тонзиллите. Выявлено, что тонзиллярная микрофлора больных, по сравнению с представителями данного биоценоза у здоровых людей, характеризуется более высокой частотой встречаемости микроорганизмы рода Staphylococcus, среди которых виды S.aureus, S.warneri, S.haemolyticus и S.epidermidis являются доминирующими. Полученные результаты сопоставимы с данными Гудима И.А. (2002). Микрофлора слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом, чаще характеризуется комплексом факторов патогенности и антибиотикоре-зистентностью. В ассоциациях возбудители чаще проявляют ГА, ЛецА, ЛА и АЛА, чем в монофлоре, что вероятно можно рассматривать в качестве реализации известного в экологии принципа усиления патогенности [111].

Кокковая флора слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом лиц, чаще, по сравнению с микроорганизмами от здоровых, характеризовалась резистентностью к ампициллину, ванкомицину, эритромицину и гентамицину, тогда' как штаммы, выделенных от здоровых лиц, характеризовались чувствительностью к вышеперечисленных антибиотикам. К антибиотику из группы резерва - клиндамицину штаммы в большинстве случаев оказались чувствительными. Штаммы микроорганизмов, выделенные из биоценоза слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом людей, проявляли ассоциированную резистентность к антибиотикам в 2,8 раз чаще, по сравнению со штаммами, выделенными от здоровых. Штаммы золотистого стафилококка, присутствовавшего в исследуемом биоценозе бактерионосителей, не проявляли ассоциированную резистентность, в отличие от группы больных, где она составила 29,2%. Полученные экспериментальные данные подтверждаются исследованиями Института ревматологии РАМН [8].

Выявлена прямая корреляционная зависимость между экспрессией факторов патогенности штаммами условно-патогенных видов бактерий из биоценоза больных хроническим тонзиллитом. Если штаммы микроорганизмов, выделенных от больных, обладали гемолитической активностью, то у них одновременно проявлялась лецитовителлазная, лизоцимная и антили-зоцимная активности (i"6=0,41-0,61). Продукция лецитовителлазы у штаммов-преставителей патоценоза сопровождалась выработкой комплекса факторов ГА+ЛецА, ЛецА+ЛА, ЛецА+АЛА, ГА+ЛецА+АЛА (Гб=0,41-0,88). Полученные результаты сопоставимы с данными Фадеева С.Б. (1998).

Высокая частота встречаемости в биоценозе слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом микроорганизмов, обладающих ассоциированной антибиотикорезистентностью и комплексом факторов патогенности, позволяет считать их этиологическими агентами заболевания.

Учитывая, что в определенном проценте случаев из биоценоза слизистой оболочки миндалин больных хроническим тонзиллитом выделялось одновременно несколько возбудителей, была изучена распространенность биологических свойств у возбудителей в монокультуре и в ассоциациях. Установлено, что возбудители в ассоциации чаще, чем в монокультуре, проявляли лизоцимную (81,6±6,2% против 46,7±12,3%, р<0,05) и антилизоцимную (63,2±7,8% против 26,7±11,4%, р<0,05) активности.

Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что симбионт-ные взаимоотношения между ассоциантами могут приводить к повышению патогенности возбудителя.

В условиях межмикробных взаимодействий культуры, выделенные от больных, оказывали усиливающее и ослабляющее действие на экспрессию биологических свойств симбионтов. В биоценозе здоровых наблюдалось индифферентное действие симбионтов на экспрессию факторов патогенности.

Сравнительная оценка особенностей межбактериальных взаимодействий была проведена в биоценозах 4-х групп лиц: больные, у которых из биоценоза выделялся золотистый стафилококк (п=80 пар бактерий), больные без выделения S.aureus (п=248 пар бактерий), здоровые носители S.aureus (п=56 пар бактерий), здоровые (п=328 пар бактерий).

Установлено, что усиление ГА чаще наблюдалось при взаимодействии условно-патогенных бактерий, выделенных из биоценозов больных хроническим тонзиллитом и бактерионосителей, по сравнению со штаммами от здоровых. Повышение ЛецА и ЛА чаще наблюдалось при взаимодействии штаммов от больных по сравнению со здоровыми и бактерионосителями. Повышение АЛА более часто обнаружено при взаимодействии условно-патогенных видов бактерий, выделенных из биоценозов бактерионосителей, по сравнению со здоровыми и больными.

Наряду с усилением факторов патогенности, в определенном проценте случаев имело место их подавление при межмикробных взаимодействиях. Эффект антагонизма проявлялся среди штаммов условно-патогенных видов бактерий. Взаимодействие условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от стафилококковых бактерионосителей, чаще, по сравнению с микроорганизмами от больных людей, характеризовалось снижением лизоцимной активности (17,0±3,5% против 6,9±1,1%, р<0,05). При взаимодействии между штаммами патогена (S.aureus) наблюдали антагонистический эффект не проявление гемолитической активности в биоценозе больных и бактерионосителей (30,0±14,4% и 33,3±19,2% соответственно). Подавление лецитовителлазной активности наблюдали только в биоценозе бактерионосителей (16,7±15,2%), а антилизоцимной активности — только в биоценозе больных (20,0±12,6%). При взаимодействии штаммов S.aureus, выделенных от больных людей чаще, по сравнению с представителями микрофлоры слизистой оболочки миндалин у носителей, наблюдалась выраженная бактериоцино-генная активность (80,0±12,6% против 33,3±19,2%, р<0,05). В то же время штаммы S.aureus, выделенные от носителей, чаще проявляли индифферентное действие на проявление факторов патогенности.

Штаммы микроорганизмов различных видов, выделенных от здоровых людей не оказывали влияния на экспрессию биологических свойств. При взаимодействии условно-патогенных видов микроорганизмов, представителей нормоценоза, по сравнению со штаммами, выделенными из биоценоза больных, чаще наблюдался индифферентный эффект по экспрессии JIA (81,3±3,7% против 66,9±3,7%, р<0,05) и АЛА (90,1±1,2% против 74,1±4,1%, р<0,05). Кроме того, микроорганизмы, представители нормоценоза, в 47,5±1,9% не оказывали влияния на ростовые характеристики бактерий-симбионтов.

На следующем этапе изучались межбактериальные взаимодействия в парах патоген-условно-патогенный вид микроорганизмов. Исследовано 90 пар микроорганизмов, выделенных от бактерионосителей, и 150 пар бактерий, представляющих микрофлору слизистой оболочки миндалин больных людей. Отмечалось повышение частоты выраженности ГА (27,5±5,4% сим-биотических связей против 10,0±5,4% связей между микроорганизмами, выделенными из биоценоза бактерионосителей, р<0,05) и ЛецА (в 60,3±5,9% случаев симбиоза против 3,3±3,2% в группе здоровых бактерионосителей, р<0,05). Штаммы коагулазоотрицательных стафилококков, представителей патоценоза, усиливали ЛецА и ЛА патогена (у 52,9±8,5% и 32,4±8,0% штаммов, р<0,05), при этом у них самих усиливалась экспрессия ГА и ЛецА (у 32,3±8,0% и 67,6±8,0% штаммов, соответственно, р<0,05).

Изменения в экспрессии ГА и ЛецА наблюдались и при взаимодействии условно-патогенных стрептококков с золотистым стафилококком. Штаммы рода Streptococcus ослабляли ГА у 36,8±11,0% штаммов S.aureus, но усиливали ЛецА у 47,4± 11,4% штаммов золотистого стафилококка, выделяемого из патоценоза. Одновременно, патоген значительно подавлял рост условно-патогенных микроорганизмов за счет выраженной бакгериоцино-генной активности, оказываемой патогеном в отношении 63,2±11,1% штаммов.

Изменения в проявлении факторов патогенности характеризуют золотистого стафилококка, выделяемого из биоценоза больных людей как возбудителя. Вызывая повышение частоты встречаемости ГА, ЛецА и ЛА у условно-патогенной флоры, он способствует поддержанию воспалительного процесса. Снижение антилизоцимной активности и выраженная бактериоцино-гения патогена, направленные против представителей нормофлоры, приводит к элиминации их из биоценоза, что подтверждается формированием дисбиоза на слизистой оболочки миндалин у больных хроническим тонзиллитом.

Рисунок 27.

Особенности функционирования индикаторных пар бактерий по экспрессии факторов патогенности в норме и при патологии.

Индикаторные пары Обследуемые (микробиоценозы) ГА ЛецА ЛА АЛА Рост индиген-индиген Больные У У у IIIIIIII 1111111

Бактерионосители у и ill! У и

Здоровые и и и и и

Больные ;; у I у V патоген-индиген J J штт ШШш

Бактерионосители и и и и и

Примечание: взаимное усиление экспрессии фактора j|j:;|j взаимное подавление экспрессии фактора и | индифферентное действие

Как видно из рисунка 27, взаимодействия между представителями ин-дигенной микрофлоры больных хроническим тонзиллитом носят синергид-ный характер по экспрессии ГА, ЛецА и ЛА; антагонистический - по АЛА и ростовым показателям. В биоценозе бактерионосителей при межмикробных взаимодействиях проявляется усиление ГА и АЛА, в то время как снижается ЛА, а ЛецА и ростовые показатели не меняются. Взаимодействия представителей нормофлоры здоровых людей носили индифферентный характер по проявлению факторов патогенности и показателю роста.

В парах «патоген-индиген», выделенных из биоценоза больных наблюдалось взаимное усиление факторов патогенности (гемолитической, лецитовителлазной и лизоцимной активностей), подавление антилизоцимной активности и бактериоциногения, тогда как в подобных парах, выделенных от бактерионосителей, имело место индифферентное влияние.

Выявленные особенности межбактериальных взаимодействий в индии-каторных парах «патоген-индиген» позволяют предложить методический подход к диагностике хронического тонзиллита (патент РФ на изобретение).

В условиях межбактериальных взаимодействий культуры, выделенные от больных, по сравнению со штаммами, выделенными от здоровых, в 10,0±1,0% - 25,5±1,7% случаев усиливали резистентность ко всем антибиотикам. Тогда как штаммы, выделенные от здоровых, чаще проявляли индифферентное действие (в 75,1±1,6% - 86,9±1,2% случаев). Взаимодействия между штаммами S.aureus, выделенными от больных хроническим тонзиллитом в 10% - 50% случаев характеризовались повышением резистентности ко всем антибиотикам, что способствовало селекции антибиотикорезистентных штаммов, тогда как штаммы S.aureus, выделенные от здоровых бактерионосителей, проявляли индифферентное действие на антибиотикоустойчивость. В парах «патоген-индиген», выделенных из биоценозов больных, по сравнению со штаммами от бактерионосителей, золотистый стафилококк, в большем проценте случаев, повышал резистентность условно-патогенных микроорганизмов к эритромицину (24,0±4,9% против 4,0±3,9%, р<0,05), тогда как в биоценозах здоровых в 100% случаев отмечался индифферентный эффект воздействия золотистого стафилококка на антибиотикорезистентность инди-генной флоры.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Хуснутдинова, Лилия Мидехатевна, Оренбург

1. Азнабаев Г.К. Некоторые биологические свойства бактерий рода Citro-bacter, выделенных при моно- и ассоциированных бактериальных ин-фециях. Дисс. . канд. мед. наук. - Оренбург, 2003. - 122с.

2. Антибактериальная терапия. Практическое руководство / под ред. JI.C. Страчунского, Ю.В. Белоусова, С.Н. Козловой., М.: изд-во, 2000 184с.

3. Бабич Е.Н. Типы взаимодействия микрофлоры ротоглотки с менингококками / Е.Н. Бабич //Микробиологический журнал (Украина). — 1995. -Т57, №5 .-С.57-63.

4. Бактериально-грибковые ассоциации в условиях колонизации кишечника дрожжеподобными грибами рода Candida / О.В. Бухарин, А.В. Ва-лышев, Н.Б. Перунова и др. // Журн.микробиол. 2002. - №5. - С. 4548.

5. Бакулина Э.В. Теория паразитоценозов и генетический обмен у бактерий / Э.В. Бакулина, И.Т. Олейник, М.: Медицина, 1970. — 216с.

6. Белобородова Н.В. Гомеостаз малых молекул микробного происхождения и его роль во взаимоотношении микроорганизмов с организмом хозяина / Н.В. Белобородова, Г.А. Осипов // Вестник РАМН. 1999. - №7. -С. 25-31.

7. Белобородова Н.В. Особенности микрофлоры зева у детей в отделениях интенсивной терапии / Н.В. Белобородова, Т.Ю. Вострикова // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - №8. — С. 16 - 22.

8. Белов Б.С. А-стрептококковый тонзиллит: клиническое значение, вопросы антибиотикотерапии / Б.С. Белов // Лечащий врач. 2002. -№1-2. - С.24-30.

9. Белов Б.С. Современные аспекты А-стрептококковых инфекций / Б.С. Белов // Инфекции и антимикробная терапия. — 2001. — ТЗ, №4. — С.104-109.

10. Белов Б.С. Современные подходы к антибактериальной терапии А-стрептококкового тонзиллита / Б.С. Белов // Инфекции и антимикробная терапия. 2000. - Т2, №2 - С.37-39.

11. Белоусова А.К. Молекулярные основы специфического взаимодействия сигнальных белков / А.К. Белоусова // Успехи современной биологии. — 1999. Т119, №4 - С.345-358.

12. Бельский В.В. Взаимное влияние возбудителей при смешанной инфекции ожоговой травмы /В.В. Бельский, Е.В. Шаталова // Журн. микро-биол. 1999. - №4. - С.3-7.

13. Бельский В.В. Структура популяций синегнойной палочки при ассоциации со стафилококком и эшерихиями /В.В. Бельский, Е.В. Шаталова, Прадиуман Кумар Сингх. // Журн.микробиол. 1994. - №6. - С.37-38.

14. Беляков В.Д. Гипотеза направленной самоперстройки популяции микроорганизмов и ее общебиологическое значение / В.Д. Беляков, Г.Д. Каминский, С.Г. Каминская // Журн. микробиол. — 1985. -№1.- С.93-100.

15. Бондаренко В.М. Антилизоцимная активность как генетически контролируемый фактор патогенности энтеробактерий / В.М. Бондаренко, A.JI. Яблочков / Персистенция микроорганизмов. Сб. науч. трудов. / под. ред. О.В. Бухарина Куйбышев, 1987. - С.85-89.

16. Бондаренко В.М. Острова патогенности бактерий / В.М. Бондаренко // Журн.микробиол.- 2001. -№4. С.67-74.

17. Бондаренко В.М. Сериновые протеазы грамотрицательных бактерий: структура, механизмы секреции, биологическая активность / В.М. Бондаренко, А.Р. Мавзютов, О.В. Агапова // Журн.микробиол. 2002. -№6. - С.80-85.

18. Бондаренко В.М. Этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / В.М. Бондаренко, В.Г. Петровская // Вестник РАМН. 1997. - №3. - С.7-10.

19. Бриан JI.E. Бактериальная резистентность и чувствительность к хими-опрепаратам: пер. с англ.. М.: 1984 - 270с.

20. Бухарин О.В. Биология патогенных кокков / О.В.Бухарин, Б.Я.Усвяцов, O.JI. Чернова, М.: Медицина, Екатеринбург: УрО РАН.- 2002.-282с.

21. Бухарин О.В. Система «лизоцим антилизоцим» и ее роль в обеспечении симбиотических связей гидробионтов / О.В.Бухарин, Н.В. Немцева // Успехи современной биологии. - 2002 - Т122, №4. - С.326-334.

22. Валышев А.В. Влияние водорастворимых витаминов на антилизоцим-ную активность энтеробактерий / А.В.Валышев, В.А.Кириллов, Д.А. Кириллов // Журн. микробиол. 2000. - №4 приложение. -С.80-82.

23. Валышев А.В. Факторы персистенции энтеробактерий и влияние на них пробиотиков при дисбактериозе кишечника. Автореф. дис. . канд.мед.наук.- Оренбург, 1997.-18с.

24. Вирулентность и антибиотикорезистентность эшерихий, выделенных от человека / В.М.Бондаренко, А.И.Ференц, В.Г.Колесников, Т.А.Бурая // Журн.микробиол.— 1990.-№3 .-С.66-70.

25. Вирусно-бактериально-грибковые ассоциации при хроническом тонзиллите у детей / И.А.Гудима, Л.И.Васильев, Л.Е.Брагина, И.Ю. Сучков // Журн.микробиол.- 2001. №5. - С.16-20.

26. Влияние бифидобактерий на антилизоцимную активность энтеробактерий / А.В.Валышев, Н.Н.Елагина, В.А. Кириллов и др. // Журн. микробиол. 2000. - №4 приложение. - С.77-79.

27. Влияние микробных метаболитов на активность каталазы и рост S.aureus 6538р / О.В.Бухарин, С.В.Черкасов, А.В. Сгибнев и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2000. №7 - С.80-82.

28. Влияние пенициллина и среды обитания в организме бактерионосителей на межклеточные связи популяций менингококка и коклюшного микроба / В.В.Высоцкий, М.А.Смирнова-Мутушева, О.Г.Ефимова, Н.А.Бакулина //Антибиотики и химиотерапия. 1984. - №4. - С.271-278.

29. Влияние РНКазы Bacillus intermedius с разной каталитической активностью на размножение Escherichia coli и Bacillus sutilis / Л.В.Кипенская, Ф.Г.Куприянова — Ашина, О.Н. Ильинская и др. // Микробиология. 1998. - Т67, №2 - С.165-169.

30. Влияние РНКазы Bacillus intermedius на рост и развитие смешанных бактерий / Ф.Г.Куприянова-Ашина, А.И.Колпаков, С.Ю. Егоров и др. // Микробиология. 1995.-Т64, вып.1. - С. 18-21.

31. Воробьев А.А. Мир микробов / А.А.Воробьев, А.Л.Гинцбург, В.М. Бондаренко // Вестник РАМН. 2000.- №11.-С.11-14.

32. Воропаева Е.А. Антибиотикорезистентность и продукция гистамина у бактерий, изолированных из ротоглотки детей, страдающих бронхиальной астмой / Е.А. Воропаева // Антибиотики и химиотерапия. — 2002. — Т47. -№3. С.8-13.

33. Воропаева С.Д. Микрофлора женских половых путей и ее чувствительность к антибактериальным препаратам / С.Д. Воропаева // Антибиотики и химиотерапия 1999. - Т44, №3 - С. 42.

34. Габриэлян Н.И. Функции микрофлоры желудочно-кишечного тракта и последствия ее нарушения после хирургических вмешательств / Н.И.Габриэлян, Е.М.Горская, Н.Д. Снегова // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т45, №9 - С. 24-29.

35. Гатиятуллин Р.Ф. Роль патологии верхних дыхательных путей в генезе некоторых соматических заболеваний у часто болеющих детей. Авто-реф. дис. . докт.мед.наук.-Самара, 2000.- 31с.

36. Герасимов В.Н. Электронно-микроскопическое изучение межклеточного контакта вакцинного штамма Francisela tularensis с грамположительными и грамотрицательными бактериями / В.Н.Герасимов, Н.Н. Кис-личкина // Журн.микробиол.— 1991. №4. — С. 4-5.

37. Головлев E.JI. Механизм формирования биопленки — структурированной популяции Pseudomonas aeruginosa / E.JI. Головлев //Микробиология. 2002. - Т71, №3 - С. 293-300.

38. Гудима И.А. Микробная колонизация миндалин при хроническом тонзиллите и гипертрофии лимфоидного кольца глотки у детей / И.А. Гудима // Известия вузов Северо-Кавказского региона. Естественные науки. 2001. - №2. - С.77-81, 91.

39. Гудима И.А. Микробные биоценозы при гипертрофии лимфоидного кольца глотки и хроническом тонзиллите у детей. Автореф. дис. . канд.мед.наук. Ростов-на-Дону, 2002.- 24с.

40. Действие препаратов аутостимуляторов роста E.coli М-17 (Актофлор) на рост чистых и смешанных культур бактерий / Т.Я.Вахитов, О.Ю.Яшина, Л.Н.Петров, А.Б. Королюк // Журн.микробиол. 2000. -№3. - С.20-24.

41. Действие серотонина на рост и дифференциацию микроорганизмов / А.В.Олескин, Т.А.Кировская, И.В.Ботвиненко, Л.В.Лысак // Микробиология.- 1998.-Т67, №3-С. 305-312.

42. Дерябин Д.Г. Стафилококки. Экология и патогенность / Дерябин Д.Г. Екатеринбург: УрО РАН.- 2000.-238с.

43. Диксон М. Ферменты. Т.2 пер. с англ. / М.Диксон, Э. Уэбб. М.: Мир, 1982.-1120с.

44. Добровольская Т.Г. О показателях структуры бактериальных сообществ / Т.Г.Добровольская, И.Ю.Чернов, Д.Г. Звягинцев // Микробиология. 1997. - Т66,№3. - С. 408-414.

45. Дронова О.М. Антибиотики и микроэкология человека и животных / О.М.Дронова, М.:Медицина. 1988. - 150с.

46. Егоров Н.С. Бактериоцины. Образование, свойства, применение / Н.С.Егоров, И.П. Баранова // Антибиотики и химиотерапия. — 1999. — Т44, №6 С. 33-41.

47. Жуковицкий В.Г. Обоснование рациональной антибактериальной терапии в оториноларингологии с позиции бактериолога / В.Г. Жуковицкий //Consilium medicum. 2001.-ТЗ, №8 - С.362-371.

48. Забирова Т.М. Биологические свойства лактобацилл биотопов человека в норме и при дисбиозах. Автореф. дис. . канд.мед.наук. Оренбург, 2001.-22с.

49. Зубов JT.A. Современные проблемы антибиотикорезистентности в педиатрической практике / Л.А.Зубов, Ю.М. Богданов // Антибиотики и химиотерапия. 1998. -Т43, №4 - С.43-50.

50. Иванов Д.В. Аутомикрофлора поверхностных биотопов при некоторых системных заболеваниях соединительной ткани и системных васкули-тах. Автореф. дис. . канд.мед.наук. Ярославль, 2000. - 26с.

51. Изменение антибиотикочувствительности стафилококков в условиях реализации эффекта пептидного антибактериального фактора / В.П.Коробов, А.В.Титова, Л.М.Лемкина, И.И. Механошина // Антибиотики и химиотерапия. 2002. - Т47, №2 — С. 11-15.

52. Изменение структурного состояния мембран М. lysodeikticus под влиянием препаратов ауторегуляторных факторов dj / А.С.Капрельянц, В.И.Скрыпин, Г.И. Эль-Регистан и др. // Прикладная биохимия и микробиология. 1985. -Т21, №31 -С. 378-381.

53. Исследование влияния РНК-азы Bacillus intermedius на рост и физиологическую характеристику Escherichia coli / С.Ю.Егоров, С.В. Улахович, В.В. Дмитриев и др. //Микробиология. 1999. - Т68, №1 - С.51-55.

54. Конев С.В. Межклеточные контакты как причина перехода микроорганизмов от логарифмической к стационарной фазе развития / С.В.Конев, Ж.В. Прокопова // Биофизика. 1973. -№ 2. - С. 324-327.

55. Королюк A.M. Медицинская микробиология: Уч/ пособие. / A.M. Ко-ролюк, В.Г. Сбойчак; С-Петербург, 1999 322с.

56. Кремлева Е.А. Микробиологические подходы к прогнозированию воспалительных осложнений при внутриматочных вмешательствах / Е.А.Кремлева, О.Д.Константинова, С.В. Черкасов // Журн. микробиол. 2000. - №4 приложение. - С.92-95.

57. Кудлай Д.Г. Бактериоциногения / Д.Г.Кудлай, В.Г.Лиходец, Л. Медицина.- 1966.-169с.

58. Курепина Н.Е. Микроцины: природа и генетическое детерминирование / Н.Е.Курепина, И.А. Хмель // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1986. - №4. - С.3-9.

59. Курлаев П.П. Роль факторов бактериальной персистенции в патогенезе, прогнозировании и обосновании выбора метода лечения больных гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей. Автореф. дисс. . докт.мед.наук.- Оренбург, 2001.- 44с.

60. Лабораторная диагностика инфекций, вызванных стрептококками группы А. / Р.Джонсон и др. М. Медицина 1998. - 117с.

61. Лакин Г.Ф. Биметрия (учебное пособие для биологических специальностей университетов) / Г.Ф. Лакин.- М.:Высшая школа, 1990. — 288с.

62. Леванов А.В. Феномен бактериальной транслокации условно-патогенных микроорганизмов из желудочно-кишечного тракта / А.В. Левано'в // Антибиотики и химиотерапия. 2001. -Т46, №5. - С.28-30.

63. Лотарева О.В. Дефективные фаги как фактор антагонизма у близкородственных бацилл / О.В.Лотарева, А.А. Прозоров // Микробиология. — 1998. Т67, №6 - С.788 - 791.

64. Лыкова ЕА. Дисбактериоз кишечника при антибактериальной терапии и перспективы лечения антибиотикорезистентными пробиотиками / Е.А. Лыкова //Антибиотики и химиотерапия. 2001. - №3. — С.21-25.

65. Ляшенко Ю.И. Смешанные инфекции / Ю.И. Ляшенко, А.И. Иванов.-Л. «Медицина», 1989.- 234с.

66. Маккаева Х.М. Распространенность, особенности клинических проявлений и осложнений хронических заболеваний лимфоидного глоточного кольца у детей / Х.М. Маккаева // Российский вестник перинатоло-гии и педиатрии. 2002. - №1. - С. 28-33.

67. Марушко Ю.В. Чувствительность к антибиотикам тонзиллярной стафилококковой и стрептококковой флоры у часто болеющих детей / Ю.В. Марушко // Врачебное дело. 1999. - №4. - С. 95-98.

68. Матусков С.И. Об антагонизме и синергизме стафилококков и стрептококков в эксперименте / С.И. Матусков // Вестник дерматологии и венерологии. 1966. - №9. - С.41-44.

69. Мельников Н.И. Возбудители гнойных заболеваний и их ассоциации / Н.И. Мельников. М.: Медгиз, 1962. - 264.

70. Мембраноактивные свойства препарата из культуральной жидкости бактерий, обладающих ауторегуляторным действием / Г.Н. Вострокну-това, А.С.Карпельянц, В.В. Светличный и др. // Прикладная микробиология и биохимия. 1983. -Т19, Вып.4-С.547-551.

71. Метаболиты анаэробных бактерий (летучие жирные кислоты) в фолликулярной жидкости женщин, страдающих бесплодием / С.М. Белобородов, Б.В. Леонов, Н.В. Белобородова, В.В. Поздоровкина // Акушерство и гинекология. — 2001. №4. - С. 29-33.

72. Метаболиты микромицетов — ингибиторы роста и биосинтеза стеринов у дрожжей / Н.А. Баранова, В.Г. Крейер, Н.С. Ландау, Н.С. Егоров // Антибиотики и химиотерапия. 2002. - Т47, №1. — С. 3-6.

73. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов / О.В.Бухарин, Б.Я.Усвяцов, А.П.Малышкин, Н.В. Немцева // Журн.микробиол. 1984. - №2. - С.27-28.

74. Микробиота зева пациентов и помещений многопрофильной клинической больницы Волгограда: экологические аспекты / В.С.Лессовой, И.В. Новицкая, И.В.Зимина, О.И. Кузнецов // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002. - №5. - С.16-19.

75. Микрофлора зева у здоровых лиц в условиях экстремальных состояний / И.А. Бочков, Н.А.Селин, Н.Н.Лизько, Л.П. Юрко // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1998. - №3. -С.26-30.

76. Миллер Г.Г. Биологическое значение ассоциаций микроорганизмов / Г.Г. Миллер // Вестник РАМН. 2000. - №1. - С. 45-51.

77. Миронов А.Ю. Условно-патогенные микроорганизмы при гнойно-воспалительных заболеваниях ЛОР-органов и менингитах / А.Ю.Миронов, К.И.Савицкая, А.А. Воробьев // Журн.микробиол.—2001.-№2.-С. 21-25.

78. Назарова Е.К. Микробиоценоз влагалища и его нарушения. Этиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика / Е.К.Назарова, Е.И.Гиммельфарб, Л.Г. Созаева // Антибиотики и химиотерапия.2002. Т47, №4 - С. 34-43.

79. Низкомолекулярные ауторегуляторы развития бактерий Thioalkalivibrio versutus / Н.Г.Лойко, А.Н.Козлова, Г.А.Осипов, Г.И. Эль-Регистан // Микробиология. 2002. - Т71, №3 - С. 308-316.

80. Николаев Ю.А. Внеклеточные факторы, влияющие на адгезию Pseudo-monas fluorescens на стекле / Ю.А.Николаев, Дж.И. Проссер // Микробиология. 2000. - Т69, №2 - С.231-237.

81. Николаев Ю.А. Обнаружение двух новых внеклеточных адаптогенных факторов у Escherichia coli К-12 / Ю.А. Николаев // Микробиология. -1997. Т66, №6 - С.785-789.

82. Николаев Ю.А. Перекрестное действие внеклеточных факторов адаптации к стрессу у микроорганизмов / Ю.А.Николаев, Н.А. Воронина // Микробиология. 1999. - Т68, №1 - С. 45-50.

83. Николаев Ю.А. Свойства адгезина и антиадгезига Pseudomonas fluorescens / Ю.А.Николаев, Дж.И. Проссер // Микробиология. 2000.- Т69, №2 - С.237-242.

84. Николаев Ю.А. Участие экзометаболитов в адаптации Escherichia coli к стрессам / Ю.А. Николаев // Микробиология. — 1997. Т66, №1. — С.38-41.

85. Новик Г.И. Архитектоника популяций бифидобактерий: субмикроскопический аспект адгезии клеток Bifidobacterium adolescentis и Bifidobacterium bifidum / Г.И.Новик, В.В. Высоцкий // Микробиология. 1995. - Т64, № 2 - С.222-227.

86. Обнаружение и изучение динамики накопления ауторегуляторного фактора di в культуральной жидкости и клетках Micrococcus luteus / А.Л.Мулюкин, А.Н.Козлова, А.С.Капрельянц, Г.И. Эль-Регистан // Микробиология. 1996.-Т65, Вып.1 - С.20-25.

87. Образование покоящихся форм в автолизирующихся суспензиях микроорганизмов / А.Л.Мулюкин, К.А.Луста, М.Н. Грязнова и др. // Микробиология. 1997. -Т66, №1 - С.42-49.

88. Олескин А.В. Колониальная организация и межклеточная коммуникация у микроорганизмов / А.В.Олескин, И.В.Ботвиненко, Е.А.Цавкелова // Вестник Моск. Ун-та. Серия Биология. 1999. -№4. - С.10-14.

89. Олескин А.В. Микробная эндокринология и биополитика / А.В.Олескин, И.В.Ботвиненко, Т.А. Кировская // Вестник Моск. Ун-та. Серия Биология. 1998. - №4. - С.3-10.

90. Олескин А.В. Политический потенциал современной биологии /А.В. Олескин //Вестник РАН. 1999. - №1. - С.35-41.

91. Орлова Т.И. Изучение компонентов клеточной стенки Staphylococcus aureus, устойчивого к грамицидину S / Т.И.Орлова, В.Г.Булгакова, А.Н. Полин // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т48, №1 - С. 13-18.

92. Оценка состояния общего иммунитета при хроническом тонзиллите у детей и взрослых / Н.М.Хмельницкая, Л.Л.Кличко, Е.В. Тырнова и др. // Тюменский медицинский журнал. 2000.-№2- С. 18-20.

93. Пальчун В.Т. Ангина, хронический тонзиллит, сопутствующие и сопряженные с ними заболевания (современная оценка проблемы) / В.Т. Пальчун // Терапевтический архив. 1988. — ТбО, №10 -С.56-60.

94. Пальчун В.Т. Лечебно-диагностические подходы к проблеме хронического тонзиллита / В.Т.Пальчун, Т.С.Полякова, О.Н. Романова // Вестник оториноларингологии. 2001. - №1. - С.4-8.

95. Паников Н.С. Рост и адгезия Pseudomonas fluorescens в периодической культуре: кинетический анализ действия внеклеточных антиадгезинов / Н.С.Паников, Ю.А. Николаев // Микробиология. 2002. - Т71, №5 — С.619-629.

96. Перунова Н.Б. Характеристика биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях кишечника. / Автореферат дисс. . канд.мед.наук. Оренбург, 2003. - 25с.

97. Писарев В.Ф. Влияние тонзилэктомии на физическое развитие юношей / В.Ф. Писарев // Вестник оториноларингологии. — 2000. -№2. — С.41-43.

98. Платонова М.М. Клиническое значение грибково-микробных ассоциаций и антибактериальная терапия при хронических воспалительных заболеваниях органов дыхания у детей / М.М.Платонова, Е.В.Середа,

99. JI.K. Катосова // Антибиотики и химиотерапия. — 1998. — Т43, №9 — С. 19-23.

100. Погорелов В.И. Изучение взаимодействия холерных вибрионов с инфузориями / В.И.Погорелов, А.Ф.Пинигин, А.С. Марамович // Журн. мик-робиол. 1995. - № 2. - С. 22-26.

101. Покровский В.И. Человек и микроорганизмы. Здоровье и болезнь. /

102. B.И. Покровский // Вестник РАМН. 2000. -№11.- С.3-6.

103. Поляк М.С. Теория и практика определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам диско-диффузионным методом (лекция) /М.С. Поляк // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. - №1.- С.25-32.

104. Применение экзогенной рибонуклеазы для улучшения биологических свойств лактобацилл / А.И.Колпаков, Д.В.Юнусов, А.В. Гарусов и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т43, №9. - С.5-8.

105. Пружняк О.В. Антагонистическая активность стрептококков и ее роль в сохранении экологической стабильности микробиоценоза носоглотки / О.В. Пружняк // Антибиотики и химиотерапия. 1989. — Т34, № 6—1. C.437-439.

106. Пузырь А.П. Архитектоника колоний Flavobacterium sp.56 и Flavobacte-rium sp.22 по данным просвечивающей электронной микроскопии / А.П. Пузырь, О.А. Могильная, Л.С. Тирранен // Микробиология. — 1998. Т67, №5. - С. 672 - 679.

107. Реброва Р.Н. Грибы рода Candida при бактериальных инфекциях. / Р.Н. Реброва.- М.: Медицина. 1979-123с.

108. Резидентное стафилококковое бактерионосительство в популяции человека как показатель микроэкологического мониторинга среды его обитания / О.В.Бухарин, Б.Я.Усвяцов, O.JI. Чернова и др. // Журн. мик-робиол. 1996. -№3. - С.71-74.

109. Рихванов Е.Г. Эффект внеклеточного белка, продуцируемого Bacillus sp. на термотолерантность дрожжей Debaryomyces vanriji / Е.Г.Рихванов, В.К. Войников // Прикладная биохимия и микробиология. 1995. -Т31, № 3 - С. 329-333.

110. Розенберг Г.С. Базы экологических знаний: технология создания и предварительные результаты / Розенберг Г.С., Дудин Д.П. // Известия Самарского научного центра РАН — 1999 №2 — с. 186-192.

111. Романова Ю.М. Цитокины возможные активаторы роста патогенных бактерий / Ю.М.Романова, А.Л.Гинцбург // Вестник РАМН. - 2000. -№ 1.-С. 13-17.

112. Савицкая К.И. Современные представления о роли и составе кишечной микрофлоры у здоровых взрослых людей / К.И.Савицкая, А.А.Воробьев, Е.Ф. Швецова // Вестник РАМН. 2002. - №2. - С.50-53.

113. Самсыгина Г.А. Эпидемиология инфекционно-воспалительных заболеваний и роль грибов рода Candida у новорожденных детей / Г.А. Самсыгина, Г.Н. Буслаева // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т43, №8-С. 23-27.

114. Сафронова И.Ю. Межклеточный матрикс Bacillus subtilis 271: полимерный состав и функции / И.Ю.Сафронова, И.В. Ботвинко // Микробиология. 1998. - Т67, №1. - С. 55-60.

115. Сергеева Е.Л. Диагностика и лечение алларгических респираторных микозов / Е.Л.Сергеева, А.В. Караулов // Современная микология в России: тезисы докл. 1-го съезда микологов России. М. 2002- с.374.

116. Сидоренко С.В. Бета-лактамные антибиотики для перорального применения в лечении инфекций дыхательных путей / С.В. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия. 2001. - Т46, № 7. - С. 27-34.

117. Сидоренко С.В. Есть ли будущее у антибактериальной терапии / С.В. Сидоренко //Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т44, №1 - С. 3-5.

118. Сидоренко С.В. Происхождение, эволюция и клиническое значение антибиотикорезистентности /С.В. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия. 1999. -Т 44, №12 - С. 19-22.

119. Славский А.Н. Влияние тонзилогенной интоксикации на нарушение менструальной функции у женщин детородного возраста / А.Н. Славский, Ю.М. Овчинников, Н.М. Побединский // Акушерство и гинекология. 1999. - №2. - С. 23.

120. Смирнов В.В. Действие микробов-антагонистов на аутофлору кожи человека / В.В.Смирнов, С.Р.Резник, С.И. Сытник // Микробиологический журнал. 1987. - Т49, №5 - С. 42-47.

121. Смирнов И.В. Возбудители бактериальных инфекций человека / И.В. Смирнов // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000. - Т2, №2 - С.4-12.

122. Солдатов И.Б. Руководство по оториноларингологии / И.Б.Солдатов. -М., «Медицина» 1994. 607с.

123. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / М.О.Биргер. М. «Медицина» 1982. - 462с.

124. Стимулирующее действие Bacillus sp. на рост дрожжей Debaryomyces vanriji / Е.Г. Рихванов, Д.Ю. Созинов, Н.Н. Варакина, В.К. Войников //Микробиология. 1998. - Т67, №5. - С.643 - 648.

125. Стимулирующее действие экзогенной РНКазы на эубиотические штаммы лактобацилл, бифидобактерий и Escherichia coli / А.И.Колпаков, Ф.Г.Куприянова-Ашина, В.М.Бондаренко, С.Ю.Егоров // Журн.микробиол. 1996. - №4. - С. 14-18.

126. Страчунский JI.C. Влияние антибиотикорезистентности на выбор антимикробных препаратов в оториноларингологии / JI.С.Страчунский, Е.И.Каманин, А.А. Тарасов //Consilium medicum. -2001.-ТЗ, №8 — С.352-351

127. Структурно-функциональные изменения в бактериальных и модельных мембранах под действием фенольных липидов / А.С.Капрельянц, М.К.Сулейменов, А.Д. Сорокина и др. // Биология мембраны. 1987. — Т4, Вып.З - С.254-261.

128. Сытник С.И. Антагонистическое действие коринебактерий и бацилл кожного экотипа на стафилококки / С.И. Сытник // Микробиологический журнал. 1989. - Т51, №1 - С.82 - 86.

129. Сытник С.И. Микрококки в кожном биоценозе молочных желез. Экологическая характеристика сообщества / С.И. Сытник // Журн.микробиол.- 1990. №9. - С.27 -31.

130. Сытник С.И. Популяционные характеристики и биологические свойства микрококков, населяющих кожу молочных желез / Сытник С.И. // Журн.микробиол. 1988. - №6. - С.16-20.

131. Тарасов Д.И. Частота и структура хронических заболеваний уха, горла и носа среди населения и их динамика / Д.И.Тарасов, А.Б. Морозов // Вестник оториноларингологии. — 1991. №2. - С. 12-14.

132. Тетерин Ф.Н. К диагностике безангинных форм хронического тонзиллита / Ф.Н. Тетерин, Г.А. Щевичкин, В.А. Горбунов // Военно-медицинский журнал. -1983. -№9. С.54-55.

133. Тец В.В. Контакты между клетками в бактериальных колониях / В.В.Тец, О.В. Рыбченко // Журн.микробиол. 1991. - №2. - С.7-13.

134. Тирранен JI.C. Роль летучих метаболитов в межмикробном взаимодействии / JI.C. Тиранен . Новосибирск, 1989. -290с.

135. Титова А.В. Изучение антибактериального действия низкомолекулярного поликатионного пептида варнерина на антибиотикорезистентные штаммы S. epidermidis. Автореф. дис. . канд.мед.наук. Пермь, 2002. -22с.

136. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях / В.Ю.Урбах. М: Медицина - 1975. — 295с.

137. Усвяцов Б.Я. Бактериоцины стрептококков. Автореф. дис. канд.мед.наук . Оренбург, 1967. - 14с.

138. Усвяцов Б.Я. Лизоцимная и антилизоцимная активность патогенных кокков. Автореф. дис. . докт.мед.наук. Оренбург, 1986. - 40с.

139. Усвяцов Б.Я. Роль факторов персистенции в формировании микробного биоценоза слизистой носа у стафилококковых бактерионосителей / Б.Я.Усвяцов, Л.И. Паршута // Журн.микробиол 1998. - №1. - С. 17.

140. Участие микробных алкилоксибензолов в регуляции автолитической деструкции дрожжевых клеток / Т.А.Карпекина, И.Ю.Степаненко, Е.И. Крылов и др. // Микробиология. 2002. - Т71, №5 - С.611-619.

141. Фадеев С.Б. Видовой состав и персистентные характеристики возбудителей хирургической инфекции мягких тканей. Автореферат дисс. . канд.мед.наук. Оренбург, 1998.-24с.

142. Фомина-Косолапова В.П. О диагностике хронического тонзиллита / В.П.Фомина-Косолапова, В.А. Малышев // Военно-медицинский журнал. 1977. - №2. - С.69-71.

143. Функции аутоиндукторов анабиоза микроорганизмов при создании метаболического блока в клетке / М.М.Беспалов, А.И.Колпаков, Н.Г. Лойко и др. // Микробиология. 2000. - Т69, №2 - -С.217-224.

144. Хмель И.А. Микроцины пептидные антибиотики энтеробактерий: генетический контроль синтеза, структура, механизм действия / И.А. Хмель // Генетика. - 1999. - Т35, №1 С.5-16.

145. Хохолявина P.M. Этиология возбудителей гнойно-септических заболеваний и их антибиотикорезистентность / Р.М.Хохолявина, В.В.Мефодьев, Л.Б. Козлов // Научный вестник ТМА. 2000. - №1. - С. 79-82.

146. Хыдыров Б.Х. Биологическая характеристика S.aureus, выделенных от больных хроническим тонзиллитом / Б.Х.Хыдыров, Н.Н. Непесова // Здравоохранение Туркменистана. 1983. - №2. - С. 19-22.

147. Шевченко Ю.Л. Микроорганизмы и человек. Некоторые особенности взаимосуществования на современном этапе / Ю.Л.Шевченко, Г.Г. Онищенко // Журн.микробиол. 2001.- №2. - С.94-104.

148. Шестаков С.В. Геномика патогенных бактерий / С.В. Шестаков // Вестник РАМН. 2001. - №10. - С. 18-25.

149. Шестаков С.В. Клинико-лабораторные особенности течения локализованной формы дифтерии ротоглотки на фоне хронического тонзиллита / В.П.Шпотин, А.И. Проскурин // Вестник оториноларингологии. — 2001. №2.-С. 28-32.

150. Электронно-микроскопическое исследование развития бактерий в колониях. Морфология колоний бактерий / И.Б.Павлова, А.В .Куликовский, И.В. Ботвинко и др. // Журн. микробиол. —1990. -№12.-С.15-20.

151. A simple method to detect bacteriolytic enzymes product by Enterobacteri-aceae / G.Branca, C.Galasso, G. Gomaglia et al. // Microbios 1996. - V86, №349 — P.205-212.

152. Adherence of Streptococcus pneumoniae to respiratory epithelial cells is inhibited by sialylated oligosaccharides / R.Barthelson, A.Mobasseri, D.Zopf, P.Simon // Infection and immunity. 1998. - V66, №4. - P. 1439-1444.

153. Bacteriology of necrotizing fascitis: a rewiew of 58 cases / L.F.Ou, F.L.Yeh, R.H.Fang, K.W. Yu // Chund Hua - I - Hsueh - Nsa - Chin - Taibei. -1993. - №51(4). — P.271-275.

154. Baquero F. The microcins / F.Baquero, F.Moreno // Microbiology Letters. — 1984.-№23.-P. 117-124.

155. Bergogne-Berezin E. Microbiology of acute paediatric infections / E.Bergogne-Berezin // Research and Clinical Forums. 1990. - VI2, №3 -P.9-19.

156. Buchman G.W. Structure, expression and evolution of a gene encoding the precursor of nisin, a small protein antibiotic / G.W.Buchman, S Banerjee, J.N. Hansen// J. Biol.Chem. 1988. - V263 - P. 16260-16266.

157. Coagulase-negative staphylococci isolated from two case of toxic shock suidrome lack superantigenic activity, but induce cytokine production / G. Lina, A.Flee, J.Tnienne et al. // FEMS Immunol, and Med.Microdiol. -1996.- V13,№l-P.81-86.

158. Davidson P.M. Antimicrobial substance / P.M. Davidson // Microbiol. Ecol. Healph. dis. 1992. - V5. №6.- P.3-4.

159. Drlica R. Histon-like proteins of bacteria / R.Drlica, J.Rouviere-Yaniv // Microbiol. Rev. 1987. -V 51. - P. 301-319.

160. Early events after intra-abdominal infection with Bacteroides fragilis and Escherichia coli / W.RVerweij, F.Namavar, W.F.Schouten, D.M. Maclaren //J.Med.Microbiol. 1991. - V35, №1. - P. 18-22.

161. Farley V.V. Grop В streptococcal infection in older patients. Spectrum of desease and management strategies / V.V. Farley // Drugs Aging. — 1995. — №6(4). — P.293-300.

162. Fletcher M. Bacterial attachments in aquatic environments: a diversity of surfaces and adhesion srtreques / M. Fletcher // Bacterial adhesion (molecular and ecological diversity). New-York: Wiles- Liss. 1996. P. 1-24.

163. Galmiche A. Toxines bacteriennes. Facterus de virulence et outiles de biolo-gie cellulaire / A.Galmiche, P.Boquet // Med. Science. 2001. - V17, №6-7 -P. 691-700.

164. Ghaffar F. Dinamics of nasopharyngeal cjljnjzation by Streptococcus pneumoniae / F.Ghaffar, I.Friedland, G.McCracken // Pediatr.Infection Dis.J. -1999. — V18, №7 — P.638-646.

165. Gonzalis-Pastor J.E. The smallest known gene / J.E.Gonzalis-Pastor, J.L.San millan, F. Moreno // Nature. 1994. - V369. - P.281.

166. Hartman G. Quorum sensing: Potential means of treating gram-negative infection? / G.Hartman, R. Wise // Lancet. 1998. - V351, №9106 - P.848-849.

167. Holm S. Recurreence of streptococcal tonsillitis after penicillin treatment / S.Holm, E. Grahn // Research and Clinical Forums. 1990. - V12, №3 -P.37-48.

168. Jack R.W. Dacteriocins of gram-positive bacteria / R.WJack, J.R.Tagg, B.Ray // Microbiol. Reweus. 1995. -V58. - P. 171-200.

169. James R. Bacteriocins, microcins and lantibiotics / R.James, C.Lazdunski, F.Pattus Sprinter-Verlag. New-York, 1992. 500p.

170. Jung G. Nisin and novel lantibiotics / G.Jung, H.G.Sahl, Escom Publishers, Leiden, The Netherlands, 1991. 256p.

171. Kell D.G. Pheromones, social behaviour and the functions of secondary metabolism in bacteria / D.G.Kell, A.S.Kaprelyants, A.Grafen // Tree. 1995. -№10. — P.24

172. Kolter R. Genetics of ribosomally synthesized peptide antibiotics / R.Kolter, F. Moreno // Annu.Rev. Microbiol. 1992. - V46 - P.141-146.

173. M protein of the group A Streptococcus binds to the seventh short consensus repeat of human complement factor H / T.Blackmore, V.Fischetti, T.Saldon et al. // Infection and immunity. 1998. - V66, №4. - P. 1427-1431.

174. Marcotte H. Oral microbial ecology and the role of salivary immunoglobulin ; A / H.Marcotte, M.C. Lavoie // Microbiology and molecular biology reviews. 1998. - V62, № l.-P. 71-109.

175. Marsh P.D. Dental plaque as a biofilm / P.D.Marsh, D.J. Branshaw // Journal industrial microbiology. 1995. - №15. — P. 169-175.

176. Marugg J.D. Bacteriocin, their role in developing natural products / J.D. Mai-ugg // Food biotechnology. 1991. - №3. - P.305-312.

177. Microcin plasmids: a group of extrachromosomal elements coding for low-molecular-weight antibiotics in Escherichia coli / F.Baquero, D.Bounchaud, M.C.Martiner-Perez, C. Fernandes // J. Bacteriology. 1978. - V135. - P. 342-347.

178. Murase Т. Molecular typing of Streptococcus pyogenes / T.Murase, R.Suzuki, S.Yamai // Nippon Saikingaki Zasshi. 1999. - V54, №3 -P.617-629.

179. Naidu A.S. Identification of a human lactoferrin-binding protein in S.aureus / A.S. Naidu // Med.Microbiol. 1992.- V36. - P. 177-183.

180. Parrot M. Preliminary characterization of four bacteriocins from Streptococcus mutans / M.Parrot, P.W.Caufield, M.C. Lavoie // Canada Journal Microbiol. 1990. - V36, №2. - P. 123-130.

181. Ring A. Host cell invasion by Streptococcus pneumoniae / A.Ring, E.Tuomanen // Subcell Biochem. 2000. - V33. - P. 125-135.

182. Sahl H.G. Staphylococcin 1580 in identical to the lantibiotic epidermin: implication for nature of bacteriocins from gram-positive bacteria / H.G. Sahl // Appl. Enveron Microbiol. 1994. -V60, №2. -P.752-755.

183. Visca P. Interaction of lactoferrin with E.coli cells and correlation with antibacterial activity / P.Visca // Med. Microbiol. Immunol. — 1990. VI79. -P.323-333.

Информация о работе

Хуснутдинова, Лилия Мидехатевна
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Межбактериальные взаимодействия на слизистой оболочке миндалин человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы