Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гуморальный иммунный ответ при кандидозе

ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Гуморальный иммунный ответ при кандидозе"

л ^в ДОЗ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ИНСТИТУТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВРАЧЕЙ

На правах рукописи

УДК 612.017.1+616-056.3 : : 616.98: 582.28 : : 612.017.3:616-0С8.6

ЛЕБЕДЕВА Татьяна Николаевна

ГУМОРАЛЬНЫЙ' ИММУННЫЙ ОТВЕТ

• ПШ КЩДИДОЗЕ

03.00.24 - микология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соисканяе ученой степени доктора медицинских наук

Сайкт-Петврбург 1993

Работа выполнена в Санкт-Петербургском институте усовершенствования врачей имени С.М. Кирова МЗ РФ.

, Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор H.A. Заикина доктор медицинских наук, профессор И.С. Фрейдлин , • доктор медицинских наук, профессор Л.Б. Хазенсон

Ведущее учреждение: ' ,■

Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского ¡43 РФ :

Запита состоится " $ " i..itiIil-1UCY 1993 года в /¿J час на заседании специализированного Ученого Совета (Д 07^.16.03) по защите диссертаций на соискание, ученой степени доктора наук при Санкт-Петербургском институте усовершенствования врачей имени С.11. Кирова МЗ Р§ (I930I5, Санкт-Петербург, ул* , Салтыкова-Щедрина, д. ,41).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Авторёферат разослан " о 7 " i-V-l С fl Сl. i-\ 1993 г.

Ученый, секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

В.Г. Кубась

Актуальность проблемы. В последние десятилетия значительно возрастает заболеваемость кандидозом, вызываемым условдопатоген-ннми грибами рода Candida . Наиболее чаотам возбудителем заболевания является Candida albicans (Караев 3.0.,1991; Кашкин П.Н., Шеклаков Н.Д.,1978 ; Kinsman 0.3. et al. ,1989; Ochiai T. et al. ,1989; Wong В. et al, ,1990; Zoller к. et al. ,1991). Среди факторов, предрасполагающих к развитию кандидоза, основное ■ место отводят нарушениям иммунной сиотемы как вровденнда, так и возникающим вследствие хронических заболеваний, применения имму-нодепрессантов, антибиотиков широкого спектра, обширных оперативных вмешательств, ВИЧ-инфекции и пр. (Папаян А.В, о соавт.,1991; Рахманова А.Г. о соавт.,1991; inamatsu т. et al. ,1989; Piot v., Rhoada J.L. et al. ,1967; Tezzo R. ,1990). -

Инвазивные микотические инфекции нередко становятся непосредственной причиной смерти (Калашникова Е.П. о соавт.,1991; Муньеф, 1991; Rubinstein R. et al. ,1975; Shin i1., Koji M. ,1989).

Большинство исследователей основное значение в возникновении кандидоза отводят нарушениям Т-клеточного звена иммунитета ( Diamond R.D. ,1981; Karaev 2.0. ,1989; Kuilberg в. ,1990). Показано, что тяжелые распространенные формы кандидоза сопровождаются снижением функциональной активнооти Т-звена иммунитета (оняжением или отсутствием гиперчувствительности замедленного типа к антигену гриба, низкой пролиферативной активностью лимфоцитов, подавлением реакции ингибиции миграции лейкоцитов, в присутствии специфического антигена), причем'выраженность этих нарушений коррелирует со степенью тяжести заболевания. Вместе о тем, о роли гуморального иммунного ответа в патогенезе кандидоза нет единого мнения ( Odds F.C. ,1988; Pearsall N.N. et al. ,1978).'РеаКЦИИ CO OTOpO-ны гуморального иммунитета при кандидозе, как правило, сохранены (Храпова Н.П.,1969; Balsdon M.J. ,1988; Dorner J. et al. ,Ï988; Kozinn P. ,1985).

У больных кандидозом часто отмечают повышение титров циркулирующих антител, развитие гиперчувствительности немедленного типа, особенно при тяжелых формах поражения. Поэтому в иммунодиагностике кандидоза основную роль отводят серологическим тестам. С этой целью используют определение титров антигена и антител в сыворотке крови. Антигены гриба в циркуляции при кандидозе выявляются далеко не постоянно, к тому же специфичность этого теота в

диагностике кандидоза дискутабельна ( i'enn к.ь. et ai. ,1903;

Eng К. et ni'. ,1986; Gaterman S. et al. ,1966; 2hln i\ et al. , 1969).

В течение последних десятилетий изучение гуморального иммунного ответа при кандидозе происходит параллельно с совершенствованием серодиагностики заболевания и ограничивается в основном двумя направлениями: повышением чувствительности используемых реакций и поисками специфических антигенов для серологических тестов (Храпова Н.П.,1989; Karaev Z.O. et al. ,1976; Kozinn P.J. et al. ,1909). Однако определение титров антител в сыворотке крови также имеет рад недостатков, что существенно снижает их диагностическую ценность.

1) В ряде случаев у тяжелых больных при исследовании антител в сыворотке крови отмечаются лолшоотрицательные результаты.

2) Исследование титров антител в динамике, предлагаемое рядом авторов, дал дифференциации ложноотрицательных реакций от истинных, не всегда эффективно вследствие возможности нейтрализации антител специфическим антигеном.

3) У лиц без признаков кавдидоза в ряде случаев встречаются ложноположительные реакции, обусловленные носительством гриба и наличием у него перекрестных детерминант с другими антигенами.

Установлено наличие у Candida albicans перекрестно реагирующие антигенных детерминант со многими антигенами и в первую очередь с антигенами различных тканей и органов макроорганизмп (Зуб-жицкий Ю.Н., Сырцов Р.П.,1971; Огурцов Р.П. ,1964; Anderson а. , 1976). Известно, что инфицирование микроорганизмами, имеющими перекрестно реагирующие антигены с тканевыми и органными антигенами, может обусловливать отмену естественной толерантности иммунной системы к антигенам собственных тканей (Лямперт И.М.,1988; Zenet-ti ,м. ,1966). У некоторых больных кандицозом находят аутоантите-ла и ряду органов человека (Соколова Г.А.,1987; edwards j.e. , 1978; Barnova V. et el. ,1980; Mathur S. et al. ,1983; Zduali M. et , al. ,1966). - '

Показано, что противоорганные антитела играют важную роль в развитии аутоиммунных процессов (Лямперт И.М. с соавт. ,1986; Kru-sehel В. et al. ,1984; Mauer S., Tónglo M.M. ,1984). Вместе С тем, остается неясной роль антигенов с.albicans , перекрестно реагирующих с органными антигенами макроорганизма, в патогенезе

дидоза. Наличие перекрестно реагирующих антигенов у c.albi-s и тканей макроорганизма, снижение количества Т-супрессоров шсти больных о тяжелнм течением кандидоза ( Karaev z.o. et al., 17; Salgame p. et al. Д969; Valder J.C. et al. ,1989), чао-I возникновение кандидоза у лиц с аутоиммунными заболеваниями •робьев А.И. ,1965; Kaufman et al. ,1986; Porter R. et al, 19), часто упорное течение инфекции (Кашкия П.Н., Шеклаков I.,1978), а также успешное моделирование кандидоза в экспери-!те на мышах линии nzb , генетически лредетермияяровалных к 1витию аутоиммунной инволюции тимуса со снижением функции Т-ipeccopoB ( Cantor et al. ,1978) свидетельствуют о высокой верности развития аутоиммунного процесса при кандидозе.

Таким образом, при кандидозе часто отмечается угнетение фуя-ш клеточного иммунитета, и основное значение в иммунодиагнос-се заболевания отводят исследованию специфического ^морально-иммунного ответа. Однако изучение'этого звена иммунитета про-штся весьма фрагментарно и сводится в основном к определению рров антител к различным антигенным фракциям гриба, что суще-зенно затрудняет понимание роли гуморального иммунитета в пато-1езе кандидоза и препятствует повышению эффективности серодиа-зстики заболевания. Имеются многочисленные данные, указывающие возможность возникновения аутоиммунного процесса при хроничес-с формах кандидоза, однако в этом направлении проведены лишь шичные исследования, не позволяющие составить представления о ш аутоиммунного процесса в патогенезе заболевания. Углублея-з исследование гуморального иммунного ответа при кандидозе к эцифическому антигену и антигенам пораженных тканей и органов зволит расширить представление о патогенезе заболевания, повы-г эффективность его серодиагностики и создаст предпосылки к, внм подходам в прогнозировании течения и терапии микоза.

Цель работы. Изучить особенности формирования гуморального иунного ответа к грибу-возбудителю и исследовать участие ауто-яунного компонента в развитии патологического процесса при кан-цозв для углубленного представления о патогенезе заболевания, вершенствования его серодиагностики, прогнозирования течения и рапии.

Задачи исследования:

- изучить различные показатели гуморального иммунного отве-

та к с.albicans у больных кандидозом и больных соматическими заболеваниями немикотическэго генеза с ложнополокительнши титрами антител к антигену гриба в сыворотке крови;

- изучить гуморальный иммунный ответ к антигенам тканей пораженных органов (пищевода и влагалища);

. - исследовать иммунные комплексы в ткани пищевода у больных ХККС с проявлением кандидоза пищевода;

- изучить некоторые структурные особенности клеточной стенка с.albicans (антигены, перекрестно реагирующие с тканями макроорганизма, рецепторы к тяжелым цепям иммуноглобулинов человека, адгезивные свойства гриба);

- выявить оптимальные методы серодиагностики кандидоинфекции.

Научная новизна и теоретическая ценность работы

Впервые установлена зависимость характера ^морального иммунного ответа к с.albicans от формы заболевания. Показано, что при хроническом кандидозе гениталий синтезируются антитела .обладающие высокой специфичностью к с.albicans , у больных хроническим кандидозом кожи и слизистых оболочек имеет место полигональная активация В-системы иммунитета. с синтезом антител разной специфичности к антигену гриба.

Впервые у части больных хроническим кандидозом кожи и слизистых оболочек с проявлениями кандидоза пищевода выявлена аутоимму-низация органоспецифическими антигенами слизистой оболочки пищевода и установлено участие аутоиммунного компонента в развитии патологического процесса в этом органе.

Впервые показано, что аллергические заболевания, протекающие по типу немедленной гиперчувствительности, сопровождаются избирательным снижением концентрации промежуточных и мелких иммунных комплексов.

Впервые установлено, что клетки о.albicans имеет рецепторы к тяжелой цепи иммуноглобулина G человека.

Взаимодействие рецептора с.albicans о ie о приводит к отщеплению последнего в окружающую "среду, при этом участок тяжелой цепи иммуноглобулина, реагирующий с рецептором клетки, блокируется* Впервые показана прямая взаимосвязь между частотой поражения различных органов грибом с. albicans с налйчием в них тканеспеци-фических антигенов, перекрестно реагирующих с антигенами возбудителя, что дало основание считать перекрестно реагирующие антигены

) ■ -

albicans одним из его факторов патогенности.

Впервые установлены различия в аргезивной активности между >ммами с.albicans , выделенными от практически здоровых лиц и 1ьных кандидозом.

Практическое значение работы» Внедрение

Разработан метод серодиагностики кандидоза путем определе-i авидности и спектра специфичности антител к антигену с.sibling . Предложен способ неспецифической лабораторной диагностики иергаческих заболеваний, протекающих преимущественно по типу ледленной гиперчувствительности, определением концентрации нро- • суточных и мелких циркулирующих иммунных комплексов. Установле-, что при хроническом кандидозе кожи и слизистых оболочек о эявлением кандидоза пищевода накопление тканеспецифических ауто-гител к слизистой оболочке пораженного органа в сочетании со ижением промежуточных и мелких иммунных комплексов в циркуляции пяется прогностически неблагоприятным тестом и свидетельствует возможности развития аутоиммунного процесса в ткани пораженного гана. Материалы диссертации использованы в учебной работе кафед-, клинической микологии С.-Л.ГИДУВа, лечебно-диагностической pare Всесоюзного центра по глубоким микозам С.-П.1ВДУВа, в Городом клиническом центре передовых медицинских технологий.

По теме диссертации во ВШ1 ГПЭ поданы три заявки на изобре-ние; по заявкам № 342528/28-13 от 21 апреля 1962 г. "Способ ди-ностики кандидоза" и № 4687625 от 5 мая 1989 г. "Способ диагно-ики генитального кандидоза" получены авторские свидетельства,по явке Ji 4914037 (14) ОГ7131 от 13.09.91 г. "Способ диагностики лергии" получено положительное решение БНИИГОЭ.•

Основные положения, выдвигаемые на защиту

I. Характер гуморального иммунного ответа при кандидозе,выз-нном с.albicans , имеет свои особенности, связанные с фо£мой болевания.

При хроническом кандидозе гениталий синтезируются антитела, ладакяие высокой специфичностью к с.albicans у больных хрони-ским кандидозом кожи и слизистых оболочек имеет место поликло-льная активация гуморального иммунитета с синтезом антител раз-й специфичности к антигену гриба.

2» При хроническом кандидозе коки и слизистых оболочек с продвинем кандидоза пищевода могут накапливаться органоспецифичес-

- в -

кие аутоантитела к антигенам слизистой оболочки пищевода; при определенных условиях происходит отложение иммунных комплексов, содержащих оргаяоспецифические аутоантитела и комплемент, в слизистой оболочке пищевода.

3. При аллергических заболеваниях, протекающих преимущественно по типу гиперчувствительности немедленного типа, происходит снижение промежуточных и мелких иммунных комплексов в циркуляции, что, видимо, связано с повышением проницаемости сосудов у этих больных.

4. На клетках с.albicans имеются рецепторы к тяжелой цепи иммуноглобулина "гс человека. После взаимодействия с рецептором иммуноглобулин отщепляется в окружающую среду, при этом его участок, взаимодействующий с рецептором клетки гриба, блокируется.

5. В составе клеточной стенки с.albicans присутствуют антигены, перекрестно реагирующие с рядом тканей макроорганизма и являющиеся одним из факторов патогенности гриба.

Апробация работы

Результаты работы доложены на Международном симпозиуме "Актуальные вопросы медицинской микологии" (Ленинград, 1987), I Международном симпозиуме по патогенным грибам и микробным токсикозам (Токио, 1989), П Международном микологическом симпозиуме "Микозы и иммунодефицита" (Ленинград, 1991), Международном симпозиуме "Clinical and biological aspects of Leukemia" (St. Peterburg, June 25-26, 1992), на заседании мотологической секции Ленинградского отделения Всесоюзного общества микробиологов, эпидемиологов и инфекционистов (1987, 1988 гг.).

Работа апробирована, на совместном научном заседании сотрудников НПО глубоких микозов с клиникой, кг:г|едры клинической микологии и проблемной комиссии }Ь 5 Санкт-Петербургского государственного института усовершенствования врачей им. С.М.Кирова(1992).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ.

' Получены два авторских свидетельства !.' 342528/28-13 от 21 апреля 1982 г. "Способ диагностики кандидоза" и № 4687625 от 5 мая 1989 г. "Способ диагностики генигального кавдидоза". По заявке на изобретение & 4914037 (14 ) 0I7I3I от 13 ноября 1991 г. "Способ диагностики аллергии" получено, положительное решение ЕНЖШЭ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 180.стра-

цах машинописного текста и состоит из введения, обзора литерату-, результатов и их обсуждения, выводов, рекомендаций по внедре-ю практических результатов в практику, заключения, выводов,спис-литературк (128 отечественных и 146 зарубежных источников). Ра-та иллюстрирована 16 таблицами и 13 рисунками.

Диссертация выполнена в научно-исследовательском отделе глу-ких микозов с клиникой Санкт-Петербургского государственного ститута усовершенствования врачей им. С.М.Кирова.

Материалы и методы

Соответственно целям работы был выбран кпинико-эксперименталь-й путь исследования, включающий изучение гуморального иммунитета больных кавдидозом и соматической патологией немикотического ге-за, имепшх ложноположительные титры антител к Candida albicans также исследование некоторых свойств возбудителя.

Основные исследования проведены у 246 человек.

В зависимости от наличия л формы заболевания обследованные ли подразделены на 4 группы.

Первая группа состояла из 33 практически здоровых лиц (доноры, рсанты кафедры клинической микологии Санкт-Петербургского ШДУВа).

Во вторую группу были вклотены 30 женщин, больных хроническим ндидозом гениталий (ХКГ), который характеризовался длительным чением (более 3 лет), периодическим чередованием обострений и миссий и многообразной клинической симптоматикой (Антоньев A.A. соавт. ,1985; Минцкер 0.Б. ,19-38).

Третью группу составили 23 больных хроническим кандидозом ко: и слизистых оболочек (ХККЗ)-тяжелой, распространенной формой шдидоинфекции, характеризующаяся также хроническим течением с редованием обострений и ремиссий ( Bodey g.p. ,1985; Gentry l.o. 65). У 14 человек этой группы имелись проявления кандидоза пище-да.

Бее больные кандидозом были обследованы в стадии обострения |болевания.

В четвертую группу вклкчеш 160 больных различной соматичес->й патологией немикотлчосмой этиологии (с заболеваниями сердечно-юудистой, дыхательной, желудочно-кишечной и мочевыводящей систем, 1льные различными типами аллергии). Среди больных этой группы бы-I выделена подгруппа серопозитивных соматических больных (СПСБ),

состоявшая из 18 человек, с ложноположителышли титрами антител к с. alb leans в скюротко крови, из них 4 человека с поражением желудочно-кишечного тракта, 9-е заболеваниями'дыхательной системы, 5-е аллергическими заболеваниями.

Клииико-микологическое обследование больных проводилось в условиях стационара в научно-исследовательском отделе глубоких микозов с клиникой Санкт-Петербургского ПЩУБа.

Материалом для исследования гуморального иммунитета служила сыворотка венозной крови. При исследовании фиксированного в ткани СЗ-компонента комплемента и специфичности антител, входящих в состав' тканевых иммунных комплексов - криостатлне срезы биоптатного материала слизистой оболочки .пищевода больных.

Антигены Candida albicanс для определения титров антител, представляющие собой тотальный гликопротеид клеточной стенки гриба (с концентрацией белка 177 мкг/мл), очищенный гликопротеид клеточной стенки (с концентрацией белка 213 мкг/мл) и цитоплазматический экстракт (с концентрацией белка 327'мкг/мл) были приготовлены в лаборатории биотехнологии Всесоюзного микологического центра.

При исследовании перекрестно реагирующих антигенов с грибами рода Candida и определения титров антител к антигенам слизистых оболочек пищевода и влагалища человека использовали трупный материал тееициин 35-летнего возраста с группой крови С {<¿ ,ß), погибшей в результате несчастного случая (взятие материала было проведено через 9 часов после наступления летального исхода. При этом для выделения антител к грибам рода Candida использовали музейные штаммы С.albicans ВКПГу 387, ВКПГу 479, ВППГУ S75 и С. krusei ВКГГу 516, полученные из коллекций патогенных грибов НИО глубоких микозов с клиникой СПб ШДУВа. Для исследования рецепторов к тяжелым цепям иммуноглобулинов использовали вышеперечисленные штаммы грибов рода Candido , а также музейные штаммы с. albicans ВКПГу 479, ВКПГу 975, ВКИГу 991 и три штамма с.albi-cana , выделенные непосредственно от больных кандидозом, и полученные нами из микологической лаборатории НПО глубоких микозов с клиникой Санкт-Петербургского ГИДУВа.

Выделение антител к антигенам клеточной стенки с.albicans и C.kruaei проводили из высокотитратных сывороток крови человека путем ее инкубации с жизнеспособными клетками соответствующих грибов с последующей элюцией антител кислым буферным раствором.

Для определения адгезивно!' активности с.albicans были выделе-in 25 штаммов гриба от больных капдидозом гениталий и 15 - от практически здоровых лиц. При этсм эпителиальные клетки слизистой обо-гочки влагалища получали от 20 здоровых женщин в фазе овуляции.

Полное исследование гуморального иммунного ответа к c.albi-cand биЛ0 проведено у здороыгх лиц, больных рвэлячнши формами сандидоза, а та rate больных соматической патологией немикотической этиологии, имевших ложнопологаи-ельные титры антител в сыворотке срови (СПСБ). Определение тигров аутоантител к антигенам слизистых зболочск пищевода и влагалища было проведено у здоровых лиц и боль-1нх кандидозом. Исследование иммунных комплексов, фиксированных в-гкани, проводили в биоптатном материале слизистой оболочки пищевода 10 больных хроническим кандидозом кожи и слизистых оболочек с проявлениями кандидоза пищевода.

У всех больных соматической патологией исследовали титры антител к о.albicans и количество крупных, промежуточных и мелких циркулирующих иммунных комплексов.

При выборе оптимального^тоста для определения титров антител к с.albicans использовали реакцию непрямой иммунофлуоресценции (РШФ) (Левхша Е.В.,1977), рэакцию непрямой гемагглютинации (ИГА) (Никитин В.М.,1977), иммунофериентный анализ (ИФА) (Игнатьева С.М. с соавт.,1987).

В основной работе титры антител к С.albicans исследовали в РИГА. Концентрацию иммуноглобулинов классов М, 6 и А исследовали в реакции радикальной иммуноцийфузии ( Manchini С. et al. ,1965).

Концентрацию крупных, промежуточных и мелких циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определяли модифицированным методом преципитации полиэтиленглинолем с молекулярной массой 6000 кДв (ПЭГ6ооо) (Меньшиков В.В,,1939).

Специфические иммунные комплексы исследовали путем их преципитации в ИЭГ6ооо с последую це:1 инактивацией антител и определением антигена, входящего в сос/аи иммунных комплексов, методом торможения ИФА.

Определение принадлежности противокандидозных антител к иммуноглобулинам ( Ig) классов М, ои А, а также определение титров антител к антигенам слизистых оболочек пищевода и шагалита проводили в ИШФ (Левина Е.Н.,1977). Авидность антител к с.albicans ' определяли по величине иммунных комплексов, образующихся в резуль-

тате взаимодейстшш антител снпоротки крови с эквивалентной дозой специфического антигена.

Спектр специфичности антител определяли в ЕГНГА по их способности нейтрализовынать растворимый антиген с.albicans (Бунин К.В. с соавт.,1986).

, Антигены с.albicans , перекрестно реагирукше с тканями животных, определяли в РТИГА (Никитин В.М.,1977). Фиксированные в тканях иммунные комплексы определяли иммунофермептннм цитохимическим методом с использованием антисыворотки к СЗ-компоиенту компле- . мента, меченной пероксидазой хрена фирмы Serva (Полак Д.,. Норден C.B. ,1987). Специфичность антител, сходящих в состав фиксированных иммунных комплексов, изучали путем определения в срезах биоптата слизистой оболочки пищепода С 3-компонента.комплемента до и после обработки срезов избыточным количеством антигена пищевода кролика ( Albini В. et al. ,1984).

Адгезивную активность грибов C.aibicane определяли по выраженности их сорбции к эпителиальным клеткам плагалища ( King к.и. , 1980).

Результаты оценивали статистически с вычислением средней арифметической M и средней квадратичной ошибки и . Для оценки достоверности был выбран уровень значимости различий р« 0,05. Достоверность различий оценивали использованием критерия и - Вллкоксо-на-Манна-Уитня.

В обследовании больных принимлли участие д.м.н. Яробкова Н.Д., Чернопятола P.M., Шевяков М.А., Миряабалаева АД., к.м.н. Колоб З.К., Могелевская А.Б. (клинико-мнкологическая диагностика канди-доза), к.м.н. Соболев A.B., Егорькова A.C. (аллергологическое обследование). В описании срезов биолтатного материала (заключенных в канадский бальзам) принимал участие зав.лаб.патоморфологии Санкт-Петербургского медицинского института им.акад.И.П.Павлова д.м.н. Бобков А.Г.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОНЗТВЕКЖ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУхЩЕНИЕ

Для исследования специфического гуморального иммунного ответа при кандидозе ваяно было выбрать оптимальную методику определения антител к с.albicans , поэтому на первом этапе работы на ограниченном контингенте лиц совместно с канд.биол.наук С.М.Игнатьевой била проведена работа по выбору , такого серологического теста. С этой целью мы оболедовали 100 человек. Все обследованные лица бшш подразделены на 4 группы:

1 группу составили 13 практически здоровых лиц;

2 группу - 28 больных кандидозом гениталий.

2 3 группу включены 22 больных хроническим кандидозом кожи и слизистых (XKKG), а также кандидозом органов дыхания и пищеварительного тракта.

В 4 группу были включены 37 больных с заболеваниями неканди-цозяой этиологии.

У обследованных лиц били определены титры антител в реакции непрямой иммунофлуоресценцил ШШФ), реакции непрямой гемагглюти-нашш (РИГА) и имыуноферментном анализе (ИФА).

Постановку РИГА осуществляли, применяя в качестве антигена параллельно три специфически антигоиных диагностикума с.albicans , различающихся по способу .их приготовления: I - тотальный гликопро-тевд клеточной стенки (ИЕГАт); 2 - поверхностный гликопротеид клеточной стенки; 3 - глисопротеддный антиген, выделенный из цитопла-зматического содержимого грибной клетки.

Эффективность использоза.ншх тестов в диагностике кандидоза подсчитывали предлокенньм ронзе методом ( Kozinn е. et al. ,1985).

Наиболее высокие значения эффективности оказались при использовании ИФА и РНГАт. В диагностике ХКГ их эффективность составляла 71,4^ и 73,1/5, а при ХККС и висцеральных формах кандидоза - 20, и 81,0$ соответственно.

Из этих двух тестов для дальнейшей -работы нами был выбран РНГАт, поскольку при использовании этой реакции возможно было определение ig м, Q и А-антител к с.albicans , а также определение их авидности и спектра специфичности.

Выбрав оптимальный серологический тест, мы применили его в исследовании титров антител к с.albicans у трех запланированных групп обследуемых (33 практически здоровых лиц, 30 женщин с ХКГ и

23 больных .ХККС), а таксе у 160 больных соматической патологией немпкотпчсской этнологии с целью выяелонля лиц, имевших ложнопо-ложителышо титры антител.

Антитела к c.aibicnns в ШГАт были обнаружены у (всех бальных и здоровых лиц в тиграх от - log22 до - log2 10.

Количество лиц с диагностически значимыми тлтрами антител (_ log27 п более) среда различных групп обследованных колебалось в зависимости от диагноза. Наибольшее число положительных реакций било обнаружено при лККС (43,5£), меньше при ЖГ {33,3%).Частота выявления лоиюположитзльных тестов при соматической патоло-гип немикотического генеза составила 11,3% (у 18 человек из 160 обследованных).

Для выявления различил меаду ложно- и пстиннополоаптельныг.щ титрами антител било проведено углубленное исследование гуморального иммунитета как у больных кацдидозом, так и у серогозитивных больных соматическими заболеваниями немикотического генеза (СПСБ). Последние составили 4 группу обследованных.

Таблица I

Титры антител к с.albicans и специфических ШК у больных кандидозом и другой соматической патологией

Группа и число обследованных (чел.) Титр антител (-i°s2 ) Титр специфических Щ1К (- log3 ) Выявляемость ■

I Практически здоровые (33) П ХКГ (30) Ш ХККС (23) 17 СПСБ (18) 3,7+0,33 6,1+0,61* 6,4+1,06* 8,4+П,49к I) 3; 2) 3; 3) 4 3,9+0,79 0 10 30,4 0

Примечание: к - уровень значимости различий р 0,05 между соот-

вехствуэдЕ.;;; показателям! больных и здоровых лиц Средние значения титров антител к с.аШеапз у больных кандидозом были значительно выше,чем у практически здоровых лиц (табл.1). Максимальные же титры антител отмечены в группе СПСБ, что объяснялось искусственным отбором в эту группу больных с высокими титрами'антител.

Известно о генетической предетерминированности иммунного ответа на отдельные виды антигенов у различных индивидуумов (Петров Р.В.,1987). Вместе с тем, это не является единственной причиной

лошюположительных "и ложноот,оицательных реакций при определении титров антител. В частности,низкие титры антител,, установленные у ряда больных кандидозом, могли быть обусловлены образованием ВДК со специфическим антигеном, а также нарушением функции им-, мунной системы, связанной со снижением синтеза антител. Для оп- . ределения роли этих факторов в возникновении лошюотрлцательных серологических тестов ш исследовали специфические иммунные комплексы, содержащие антиген C.aibicana и концентрацию Ig М,0 и -А в сыворотке крови.

У здоровых лиц и СПСБ ЩК, содержащие антиген с.albicans выявлены не были, при ХХГ они обнаружены в 3-х случаях (1С$ от числа обследованных этой группы), при ЖКС - у 7 (30,4%) больных в титрах -log2 3,9+0,79.

Для понимания роли нейтрализации антител специфическим антигеном в возникновении локноотрицательных серологических тестов у больных кандидозом был проведен анализ взаимосвязи наличия специфических иммунных комплексов в циркуляции с титрами антител к C.aibicana.

Если у больных ЛСГ специфические ЦИК обнаружены в редких случаях (10$ от числа обследованных) и только прп высоких титрах антител в циркуляции, то среди больных ЖКС - у 5 из 13 больных с низкими титрами антител и у 2 больных при высоких титрах антител. Эти результаты свидетельствуют о важной роли нейтрализации антител специфическим антигеном а зозникновении локноотрицательных серологических тестов к необходимости исследования специфических ЦИК в качестве дополнительного теста для серодиагностики этого заболевания.

Для определения функции 3-системы иммунитета мы определили концентрацию иммуноглобулинов М,О и А в сыворотке крови обследуемых групп лиц.

У практически здоровых лиц концентрация ig М составила 1,1+ 0,12 мг/мл, Ig G - 14,0+0,70 мг/мл, Ig А - 1,8+0,27 мг/мл. При кандидозе гениталий отмечена тенденция к возрастанию концентрации ig G и ig А в сыворотке крови. У больных JCKKC обнаружено достоверное (р<0,05) повышение концентрации ig G до 16,5+0,50 мг/мл. Ни в одном случае не было выявлено значительного снижения гаи отсутствие какого-либо из классов иммуноглобулинов в сыворотке крови, т.е. причиной локноотрицательных реакций при кандидозе не могло

быть снижение синтеза ишуно глобулинов.

Увеличение концентрации ig G при ХККС , видимо,обусловлено ■ иммуномодулирующиш свойствами с.albicans . Показано,что маннан и гликопротеины клеточной стенки гриба'способны стимулировать продукцию антител к неродственным антигенам {Caseone a. et ai. , 1981; Dwyer J. et al. ,1988). Установлено так:«,что концентрация ig о в сыворотке крови больных кандвдозом возрастает прямо пропорционально длительности точения заболевания ( Everett Е.l). et el. ,1975). Причины этого кроются скорее всего в нарушении рефляции антителогеиеза Т-супрессорами: снижение количества и (пункции последних является одним из наиболее частых проявлений иыцунодефи-цита при кандидозе (Diamond R.D. ,1981). Блокада i'c-фрагмента IgG или рецепторов Т-супрессор:шх клетск для него может таксе явиться причиной повышенного синтеза ig а.

Известно,что основными показателями полноценного созрелашя гуморального ответа в отношении Т-зависжого антигена являются способность плазматических клеток к переключению с синтеза ifi 1.1-антител на синтез специфических иммуноглобулинов других классов, а также увеличение специфичности антител, связанное с отбором в процессе иммунного ответа В-клеток, обладающих рецепторами с наибольшим сродством к специфическому антигену. В результате увеличивается авидность антител и суяается их спектр специфичности, что проявляется в уменьшении количества антител низкой специфичности (Петров Р.В. ,1982; Леви i.1.11. ,1589).

У всех обследованных нами лиц обнаруживались антитела»принадлежавшие к ig м, Ig G и Ig А классам. При кандидозе количество ig G-антител было несколько выше, чем в контрольной группе,однако эти различия оказались не достоверны (р^0,05). Полученные результаты свидстольстволалл об отсутствии нарушения е порскдэтешы: плазматических клеток с синтеза igM на синтез Ig g nig А-антител и нормальном функционировании поздних Т-хелперов, приншлаквдх активное участие в этом процессе (Галактионов В.Г.,1986; Петров Р.В.,1987).

Известно, что об авидности антител судят по их способности образовывать крупные именные комплексы со специфическим антигеном (Земсков М.В. и соавт.,1973; Фримель Г.,1987). У обследуемых групп больных мы изучили авидность антител путем добавления к сыворотке крови антигена с.albicans с последующей преципитацией иммунных

сомплексов ПЭГ5С00 и определением величины образовавшихся иммунных комплексов (рисЛ).

Рис.1 Образование крупных, промежуточных и мелких иммунных комплексов в сыворотке крови с антигеном С.а1ь±сапэ - исходное количество ДНК крупных; • ОШШ - промежуточных; !=ЁГ- мелких; I I - количество соответствующих иммунных комплексов после добавления антигена гриба

Оказалось, что у здоровых лиц образовывалось небольшое количество иммунных комплексов со специфическим антигеном. У больных ЖКС и в особенности при ЖГ антитела образовывали со специфическим антигеном в основном крупные, меньше - промежуточные ЩК, что звидетельствовало о высокой авидности антител к с.а1Ьд.сапэ . При этом в группе ХКГ отмечено образование наиболее высоких количеств крупных ЦИК (различия мезду опытной и контрольной пробами составляли 0,1 ед.ОП и более), достоверно различающихся (р$0,05) от тех те показателей здоровых и больных СПСБ. Исследование этого показа-геля мы рекомендуем в качестве дополнительного критерия серодиагностики .ХКГ. У СПСБ антитела образовывали с антигеном в основном мелкие иммунные комплексы.

Данные, полученные при определении авидностн антител дали основание предполагать, что специфичность антител к антигену С.а1ы-сапа у отдельных групп больных весьма различна. Мы исследовали спектр специфичности антител путем определения их нейтрализующей

активности (Бунин К.В. и др.,1986). Результаты представлены в

таблице 2- Таблица 2

Спектр специфичности антител к с.albicans у больных кандидозом и другой соматической патологией

Группа и количество обследованных (чел.) Титр низко-специоГшчных антител (-log2 ) Относительное количество низкоспецифичных антител (%) Нейтрализующая доза антигена (мг/мл)

I Практически здоровце(ЗЗ) П ЖГ (30) Ш ХККС (23) ГУ СПСБ (18) 0,5+0,21 1,0+0,51® 2,0+0,36** 7,5+0,67* 12,7+6,20 20,6+6,73** 37,2+7,С?5® 91,2+7,17* ' Й,8+1,29 х 21,7+3,58*^ 19,3+7,50** 3,2+3,74

Примечание: к - уровень значимости разлдчш р <0,05 мэгду соот-

ветствующими пока за то ляг, ш больнцх и здоровых лиц; кк - значимость различий р<0,05 мевду показателями больных кандидозом и СПСБ

Минимальный спектр специфичности 'антител к с.albicans был выявлен у практически здоровых лиц (лишь 12,7+6,20$ антител не обладали нейтрализующей активностью в отношении антигенов с.albicans Это,видимо, связано с минимальным антигеннш стимулированием, в результате чего активируются В-клетки, обладающие высоким сродством .К С.albicans (Uoelle Randolph J. ,1990). У больных кандидозом спектр .специфичности антител возрастал пропорционально тяг.ести заболевания, и при ЖКС количество антител низкой специфичности достигало 37,2+7,07$ от общего количества антител к с.albicans . Наиболее широкий спектр специфичности антител зыявлен у серопози-тивных больных соматическими заболеганиями: антитела низкой специфичности определялись в титрах -log2 7,5+0,67, что составляло 91,2+7,17$ от общего количества противокандидозных антител.

Таким образом, при кандидозе отмечается поликлональная активация В-системы иммунитета не только в отношении неродственных антигенов,но и в отношении антигенов с.albicans .

Помимо значительных различий в количестве антител низкой специфичности у отдельных групп обследованных интересные результаты получены нами при анализе нейтрализующей дозы антигена. Этот показатель мы определяли по дозе растворимого антигена с.albicans . обеспечивающей максимально возможную нейтрализацию антител.

В контрольной группе нейтрализующая доза антигена оказалась невысокой и составила 3,8+1,29. Если у большее кандидозом отот показатель достоверно (р-«С,05) возрастал по сравнению со здоровым лицам;:, то при соматической патологии,сопровогдающе'Лся логлопологл-тельнп.ш титрами антител (1У группа) он был невысок (3,2+3,74).При этом нейтрализации подвергалось лишь 91,2+7,1775 антител от их исходного уровня. Увеличение дозы антигена на вызывало дальнейшей нейтрализации антител.

Мы изучили эф5ект1шность определения титров антител,специфических ЩХ, титров высокоспецифичных антител и нейтрализующей дог-зы антигена в диагностике кавдндоэа. При этом диагностически значимыми считали титры антител - log27 и более, йзкт присутствия специфических ЦИК, нейтрализующую дозу антигена более 6 мг/мл, титры высокоспецифичных антител не менее ~1о&г 5; при определении авиднос-ти антител диагностически значимым считали образование со специфическим антигеном крупных иммунных комплексов в количестве 0,1 единиц оптической плотности и более.

Расчет эффективности тестов проводили описанным ранее методом ( Kozinn р. et ai.,1985). В эту разработку бичи включены показатели не только здоровых п больных каядидозом, но и серопозитивные соматические больные. При этом мы раздельно оценили значимость серологических тестов в диагностике как локально;!, так и распространенной формы кандмдоэа (табл.3).

Таблица 3

Эффективность различных серологических тестов в диагностике кандидоза

Серологический показатель Эсбектшзность (Й) ( (ИП +110) • IC0IS ) ш + ио + лп + ло

■ут/т/у»

Титры антител 51,8 53,1

Специфические Ц!1К 6S,7 78,3

Лвидность антител 91,3 73,9

Титры антител высокой 74,0 74,3

специфичности

Нейтрализующая доза антигена 62,7 86,9

Примечание: ИП - истиняополояительные реакции; ЛП - ложнояоложи-тельные реакция; И0 - истшшоотрицательные реакции; Л0 - лозхноотрицательные реакции

Как видно из данных таблицы 3, эффективность диагностики канди-доза гениталии путем исследования показателей авидности и спектра специфичности антител выше по сравнению с общепринятыми тостами. Так, если при определении титров антител у-обследсганной групп и лиц эффективность составила 51,8^, то исследование авидности и нейтрализующей дозы антигена увеличивали эффективность диагностики до 91,3£ и 82,7^ соотвзтственио. При Л<КС пааболее высокие показатели эффективности были достигнуты определением нейтрализующей дозы антигена: эохиектшшость составила 86,0ГГ, что так;;;е значительно превышало показатели эффективности диагностики путем определения титров антител (53,Ю. lía основашш этих данных могло сделать вывод,что включение в комплексную диагностику кандпцоза определения показателей авидности антител к антигену гриба и пейтрелпзующеи дозы антигена существенно повысят диагностическую значимость серологических тестов. Накопление антител низкой спецн-Ти.чпостг: чревато как нарушением элиминации возбудителя, так и возпшиог.еппегл перекрестных реакций с иеродственпими антигенами (если последц-'.ю обладают структурами, сходными со структура;,::; ант:1гона, с падл: ров.-ыпего синтоз антител) и развитием аутои.вдпного процесса.

Участие гуморального иммунного ответа в повродешш собственных тканей организма определяется накоплением сутоантптел и отлохе-1шем иммунных комплексов в очаге поврекдо.иш ( Tulai к. et ai. , I960; Zanetti i¡. ,1936). .'.in исследовали яугопмцуппые реакции,обусловленные гушральнш иммунным ответом.

У болышх кандндозоп мы определили титры антител к антигенам слизистой оболоч1а1 шагалпща и пищевода человека и отвотпых.

Аутоаптитела к антигенам слизистых оболочек плщеиода и влагалища были выявлены во всех группах обследуемых.

Титры антител к антигенам слизистых оболочек пищевода у практически здоровых лиц оказались минимальны, у больных ЛИ существенно не отличались от контрольной группы, в то время как при Л{КС значение этого показателя возрастало до -lo¡>2 3,3+0,14 '(табл.4).

Известно, что наиболее новрездагощшл действием на ткани макроорганизма оказывают органоспоцифкческие антитела, направленные тленно к оргапосповдиячоскшл антигенам' (Авербах LI.I.I. с соавт.,1985; Лялперт И.И. с соавт.,1986; C'ooke A. et ai. ,1930). Для определения органо-споцифичпости аутоантитол у тех же болышх мы определили титры антител к слизистым оболочкам пищевода и влагалища глвотиых (кролика, морской свинки).

Таблица 4

Антитела к антигенам слизистой оболочки пищевода у болышх кандидозом

Группа и Антитела к слизистой оболочке пищевода

количество человека кролика морской свинга!

обследованных (чел.) титр АТ количество положительных реа^щй титр АТ количество полокп-тельних реашй [/•>) титр АТ количество полояи-тельных реалий

Практически здоровые(ЗЗ) ЖГ (30) 2,6+0,52 2,4+0,16 48,5 48,5 1,9+0,18 2,0+0,48 42,4 36,7 2,2+0,63 1,7+0,53 33.3 33.4

ЖС (23) 3,8+0,14 65,2 5,1+0,63 56,5 4,4+0,41 56,5

Примечание: к - уровень значшлости различий р й 0,05 мегду соот-

ветствующими различиями больных и здоровых лиц

В контрольной группе антитела к антигену пищевода кролика выявлялись в титрах 1,9+0,18, а к антигену пищевода морской свинки —2,2+0,63, у больных я® ХКХС - в титрах 5,1+0,63 и 4,4+0,41 соответственно, при этом различия мекцу соответствующими показателями здоровых и больных лиц были достоверны (р 0,05).

При изучешш титров антител к антигенам слизистых оболочек влагалища наблюдалась иная картшл: титры антител к антигенам человека и швотных у больных ЙСГ и ХКЖ существенно не отличались от контрольной группы.

Далее мы изучили количества больных, пмешпх органоспецифичес-кие (т.е. взаимодействующие как с антигенами человека,так и швот-ных) аутоантитела в каздой из обследуемых групп.

У здоровых лиц органоспецигаические аутоантитела к слизистой оболочке пищевода не выявлялись,к слизистой оболочке влагалища были обнаружены в I из 33 случаев (3,03$). При ХХГ органоспецифичность аутоантител к слизистой оболочке пищевода обнаружена, в I из 30 случаев (3,3%), к антигену слизистой оболочки влагалища в 5 случаях (16,6% от числа обследованных). У больных ХККС количество лиц о ор-ганоспецифическпми аутоантителами к слизистой оболочке влагалища практически не отличалось -от контрольной группы, в то время как к слизистой оболочке пищевода возрастало до 34,8,« (8 случаев из 23 обследованных), что свидетельствовало об их возможном патогенном действии на ткани макроорганизма.

Большую роль в повреждении тканой макрооргшшзма при аутоиммунных процессах могут играть иадно комплексные механизмы (Гуревич " П.С.,1983; Talai n. et al.,I980). ;,1ы исследовали содержание циркулирующих иммунных комплексов и иммунных комплексов, фиксированных в тканях: слизистой оболочки пищевода.

Проведенные исследования показали, что ЦИК присутствовали у всех обследованных Л1Щ, при этом основапое количество иммунных комплексов, как правило, било цредсташепо мелкими ЦИК.

Среди здоровых лиц содержание крупных ЦК колебалось в пределах от 0,2 до 2,4 ед.ОП, промежуточных - от 0,С5 до С,41 ед.ОП, мелких - от 0,13 до 0,5 ед.ОП. Средние значения крупных,промежуточных и мелких ВДК составило 0,2+0,41 ед.ОП; 0,19+0,03 ед.ОП и 0,3+0,07 ед. ОП соответственно.

Соотношение суммарного количества промежуточных и мелких иммунных комплексов к мелюггл в контрольной группе составило менез 3,

Количество ВДК при кандидозе изменялось в зависимости от фермы заболевания. При кандидозе гениталий отмечена тенденция к спитению крупных и промежуточных ЦИК и повышению концентрации мелких ВДК,однако различия между соответствующими показателями у больных ХКГ и контрольной группой обследованных были не достоверны (р>0,05).

У больных ХККС были отмечены значительные индивидуальные колебания количества промежуточных и мелких иммунных комплексов: если у 14 из 23 обследованных не было существенных различий этих показателей по сравнению с группой здоровых лиц, то у остальных 9 больных (39,1$ обследованных) отмечено резкое снижение содержания промежуточных и мелких ЦИК: так, содержание промежуточных иммунных комплексов у этих больных колебалось в пределах от 0,04 до 0,17 ед.ОП, а мелких - не превышало О,СБ ед.ОП. Средние значения содержания промежуточных п мелких ШК у это!: подгруппы больных ХККС достоверно (pi0,05) отличались от соответствующих показателей контрольной группы.

В литературе не удалось найти данных, указывающих на избиратель-нов' снижение концентрации промежуточных и мелких ВДК при каких-либо заболеваниях. Для выяснения причин этого явления мы исследовали концентрацию крупных, промежуточных и мелких ЦИК при различной соматической патологии, включая аллергические заболевания в фазе обострения. Оказалось, что среди всех групп об-следованных значительное снижение промежуточных и мелких ЦИК (до 0,12+0,002 ед.ОП и

С,С6+0,С68 ед.ОП соответственно) определяется толы» у больных аллергическими заболевании!, п основе которых лежит преимущественно немедленный тпп гиперчувствктелыюсти (Пыцкпй В.И.,1351; ЗсЛшц^г-1ег W. ,1320), что, видимо, было связано с повышенной проницаемостью сосудов. На основании этпх данных мы предположили, что у 9 из 23 обследованных ХККС (имевших резкое снижение промежуточных и мелких ЦЖ) тлелось повышенно проницаемости сосудистых стенок. Не исключено, что повышенная чувствительность у этих больных тлелась к тканям пораженных органов (Аде А.Д.,1978).

У 10 больных Ж\С о проявлением кандидоза пищевода ми исследовали отложения иммунных комплексов в. биоптатах слизистой оболочки пищевода пшуногпстохимическиы методом с применением антпекворотки к СЗ компоненту комплемента, меченной пероксидазоп хрена (работа про-Г' г.она совместно с д.м.н.Бобковым А.Г. и Шевяковым 1.1.А.). В иммуно-Vгохпмическш тссте у 5 из 10 обследованных выявлялось отложение С-' компонента комплемента в цитоплазме и по ходу клеточных границ нл-оких и шиповатых, часто безъядерных клеток. При этом по ходу кле-Г'-чрпх границ наблюдалось линекное более интенсивное окрашивание. В '.'.'■¡¡пах сосудов местами отмечалось слабое нечеткое окрашивание.

Заслуживает впшлаппя то£ г'.;акт, что у 4 из 5 больных ХККС,содержавших фиксирозаннке в ткани пищевода иммушшо комплексы, было от-мечзно резкое снижение количества промежуточных и мелких ИК в сыворотке крови. Не исключено, что'именно повышение прошщаепости сосудов явилось у этих больных причиной отложения ПК в тканях.

Для определения спашфп'шости антител, пходялих в состав иммунных комплексов, фиксировашпк в слизистой оболочке пищевода, был использован метод, основанный на расщеплении комплексов "антиген-антитело" избыточным количеством специфического антигена ( А1Ь1п1 ег ах., 1984). Оказалось, что предварительная обработка срезов избытком антигена приводила к значительному снижению бурых отложений в эпителии слизистой оболочки пищевода. Это доказывало, что в состав иммунных комплексов, фиксированных в ткани пищевода, входили аутоантптела к слизистой оболочке последнего.

Полученные, данные свидетачьствуют, что в ряде случаев при 13СКС с проявлением кандидоза пиЩ-звода происходит развитие аутоиммунного процесса, характеризующееся накоплением тканеспецифических аутоанти-тел к антигенам слизистой оболочки пищевода'и отложением иммунных комплексов в ткани порал®нного органа.

Учитывая, что грибы находятся на достаточно высокой ступени эволюционного развития,нельзя было исключить наличие перекрестно реагирующих антигенов у грибов рода Candida и макроорганизма. С помощью специфических антител мы исследовали наличие общих антигенов у грибов рода Candida ,обладающих неодинаковой патогенностью для человека ( с.albicans и c.ki-usei ) и различных тканей и органов человека и животных (кролика и морской свинки).

Оказалось, что результаты исследования существенно зависели от типа антигенов макроорганизма,используемого в реакции,и вида гриба.

Антигены с.albicans взаимодействовали с антигенами кожи,' почки и слизистых оболочек пищевода и кишечника. При этом положительная реакция отмечалась не только с антигенами человека, но и животных, что свидетельствовало в пользу принадлежности перекрестно реагирующих антигенов макроорганизма к органоспецифичоским. Антигены сердца, печени, легкого, поперечно-полосатой мышцы человека и животных не вступали в реакцию с антителами к этому грибу, что означало отсутствие у них перекрестно реагирующих детерминант с с. aibicane . Антигены слизистой оболочки влагалища животных имели перекрестно реагирующие антигены с с.albicans , в то время как у человека таких антигенов нами найдено не было.

у c.krusei перекрестно реагирующие антигены обнаружены лишь с антигенами слизистой оболочки кишечника человека и кролика и не обнаружены с антигеном морской свинки. «

Известно, что некоторые микроорганизмы имеют на поверхности клеток рецепторы к J?c -фрагменту ig о человека (Лейкина Е.С.,1980; Покровский Б.И. с соавт. ,1985). Наличие тати рецепторов на клетках грибов p. Candida могло негативно сказаться на специфичности противокандидозных антител, используемых для определения перекрестно реагирующих антигенов грибов.

Мы исследовали рецепторы к тяжелым цепям ig М, G и А человека у с.albicans и c.krusei в реакции непрямого розеткообразования между соответствующим грибом и эритроцитарными диагностикумами,нагруженными антителами к ig M,G и А человека (ЭДМ, ЭДо и ЭДД соответственно) после предварительной инкубации грибов с опытной сывороткой крови человека, не содержащей термолабильных компонентов комплемента и антител к грибам и эритроцитам барана. Одновременно измеряли концентрацию Ig М, о и А в опытной сыворотке крови до и после ее инкубации с клетками гриба. После-инкубации формол-вакцин грибов с опытной сывороткой крови человека установлено достоверное

(рс 0,05) увеличение розетксобразования между клетками с.albicans и ЭДг?.

Если в контрольных пробах адгезивная активность клеток гриба к ЭД0 составляла 20,7+3,53, тс в опытных - 48,8+1,83, при этот титр ig с в сыворотке крови после инкубации с клетками гриба достоверно (ps 0,05) сшпался до -log2 4,3+0,22 по сравнению с исходным уровнем (~iog2 7), что свидетельствовало о наличии на поверхности формалинизированнкх клеток с.albicans рецепторов к тяжелым цепям ig g человека. Е то же время рецепторы к ig Ми is А у с.albicans отсутствовали: адгезивная активность клеток гриба в отношении эритроцитов барана, сенсибилизированных антисыворотками к Ig М и ig А человека не отличалась в опытных и контрольных пробах. У формалинлзированных клеток c.krusei не обнаружено различий в опытных и контрольных пробах ни в реакции розеткообразо-вания, ни в концентрации ig М, о и А опытной сыворотки крови, что означало отсутствие на этих клетках р&цепторов к тяжелым цепям иммуноглобулинов.

При инкубации опытной сыворотки крови с жизнеспособной культурой клеток с.albicans розеткообразование между клетками гриба и ЭДо отсутствовало, а концентрация is о в сыворотке крови не менялась по сравнению с исходным уровнем. Это указывало на отщепление ig G от жизнеспособного с.albicans в окружающую среду. Ig G,предварительно инкубированный с жизнеспособнш грибом, не сорбировался к формалинизированным клеткем с.albicans , что могло быть связано с отщеплением ig G от клетск гриба в составе комплекса " ig G-pe-цептор" или с блокировкой лскуса тяжелой цепи ig G , взаимодействующего с рецептором с.albicans . Подобный механизм защиты паразита описан у шистосом (Лейкика Е.С.,1980).

Поскольку ig о человека, сорбирующийся за счет тяжелой цепи иммуноглобулина к жизнеспособной с.albicans , отщеплялся шесте с рецептором для нее в окружающую1 среду, не задерживаясь на поверхности клетки, выделенные методом аффинной хроматографии антитела к грибу надо считать специфическими, а определение перекрестно реагирующих антигенов гриба • с использованием выделенных антител - обоснованным.

Данные исследования гуморального иммунного ответа при кандидозе и структурных особенностей клеточной стенки с.albicans свидетельствовали о немаловажной роли гриба в патогенезе заболевания. С этих позиций становится ясной необходимость своевременного определения

инфицирования организма грибом,'способным вызвать заболевание.

Известно, что для.успешной колонизации слизистых оболочек мико-флорой первичным условием является необходимость их прикрепления к . эпителиальной выстилке хозяина- (Караев 3.0. и др. ,1987).

Мы изучили адгезивную активность штаммов с.albicans , выделенных от больных кандидозом и практически здоровых лиц, к клеткам эпителия влагалища здоровых жен'щин. Активность прикрепления грибов к эпителиальным клеткам' выражали индексом адгезии (средним арифметическим количества клеток гриба, сорбированных на I эпителиальной клетке). В результате исследования былл установлены достоверные (р<0,05) различия адгезивной активности между штаммами с.albicans , выделенными от здоровых лиц и больных кандидозом. Если индекс адге-•зии грибов от практически здоровых составил 10,1+0,86, то от больных кандидозом - 16,9+0,56.

Многократны:"! пересев на питательной среде существенно не влиял на адгезивную активность штаммов гриба, выделенных от больных, что свидетельствовало о стойкости этого признака. Высокая адгезивная активность с.albicans является показателем инфицирования организма патогенньм штаммом гриба, способные вызвать заболевание.

Таким образом, в результате проведенной работы установлено, что . при кандидозе характер гуморального иммунного ответа зависит'от формы заболевания. При ХКГ происходит созревание иммунного ответа, ха- . рактеризугащеося накоплением антител высокой авидности и узкого спектра специфичности. У больных ХККС наблюдается поликлональпая актива-' ция гуморального иммунитета с накоплением антител как высокой, так и низкой авидности и расширением спектра их специфичности к с.albicans.

У больных соматическими заболеваниями, имеющими ложноположитель-ные титры антител к с.albicans в сыворотке кропи, антитела обладают низкой авидностыо,при этом спектр специфичности антител отличается значительной широтой. Определение авидности и спектра'специфичности антител повышает значимость серологических тестов в диагностике кан-дидоза.

У части больных ХККС с проявлением кандидоза пищевода возникает аутоиммунный процесс в отношении слизистой оболочки пищевода.сопровождающийся отложением'иммунных комплексов в ткани этого органа. 'Важным фактором, способствующим отложению иммунных комплексов в тканях, является повышение проницаемости сосудов. Снижение концентрации ' промежуточных и мелких иммунных комплексов в циркуляции является по-

казателем наличия у больных аллергии, протекающей преимущественно по типу немедленной гиперчувзтштельности.

У гриба с.albicans выявлены антигены, перекрестно реагирующие с органами макроорганизма, наиболее часто поражающимися при канди-дозе; в органах, для которых поражение грибами не характерно, таких антигенов не найдено. Эти данные свидетельстйуют, что- перекрестно реагирующие антигены с.albicans являются одним из факторов патоген-ности этого гриба. На клетках с.albicans обнаружены рецепторы к тяжелой цепи ig о (но не lg М и Ig А) человека. После взаимодействия рецептора клетки гриба с lg о последний отщепляется в окружающую среду, при этом участок ig а .взаимодействующий с рецептором, блокируется.

Адгезивная активность с.albicans варьирует в широких пределах и зависит от источника выделения. У штаммов гриба, выделенных от больных кандидозом, адгезивная активность к клеткам поверхностного эпителия влагалища женщин значительно выше, чем у штаммов с.albicans, выделенных от здоровых лиц.

Высокая адгезивная активность С.albicans является показателем инфицирования организма вирулентным штаммом гриба, способным вызвать заболевание.

Полученные данные расширяют.сведения о патогенезе кандидоза,совершенствуют методы его серодиагностики и профилактики и раскрывают перспективы к подбору индивидуальной терапии заболевания.

швода

1. При кандидозэ характер гуморального иммунного ответа зависит от формы заболевания. У больных хроническим кандидозом гениталий происходит полноценное созревание гуморального иммунного ответа к с.albicans с накоплением антител узкого спектра специфичности с высокой авидностью. При хроническом кандвдозе кожи и слизистых оболочек имеет место поляклональная активация гуморального иммунитета с синтезом антител с разной специфичностью к антигену, гриба. Определение авидности антител^ и нейтрализующей дозы антигена с.albicans может быть использовано в качестве важного дополнительного критерия серодиагностики кандидоза.

2. У больных соматическими заболеваниями немикотической этиологии ложноположительные серологические тесты обусловлены накоплением в сыворотке крови антител с низкой специфичностью к С.albicans .

Определение спектра специфичности антител является надежным критерием дифференциации истинноположителышх титров антител от ложно-положительных.

3. У ряда больных хроническим кандидозом коки и слизистых обо- . лочек с проявлением кандидоза пищевода установлено участие аутоиммунного компонента в патогенезе заболевания.

Развитие аутоиммунного процесса проявляется накоплением органо-специфических антител к слизистой оболочке пищевода и отложением иммунных комплексов в ткани пораженного органа.

4. При аллергических заболеваниях, протекающих преимущественно по типу неме,дленной гиперчувствительности, наблюдается снижение концентрации промежуточных и мелких циркулирующих иммунных комплексов. Определение концентрации промежуточных и мелких иммунных комплексов в сыворотке крови может быть использовано в диагностике этих заболеваний. '

5. Наблюдается прямая взаимосвязь частоты поражения различных органов грибом с.albicans с наличием в них органоспецифических антигенов, перекрестно реагирующих с антигенами возбудителя. Ткани почки, кош, слизистых оболочек пищевода и кишечника содержат антигены, перекрестно реагирующие с с.albicans. У тканей сердда, легкого, печени,, поперечно-полосатой мышцы такие антигены не обнаружены.

6. На клетках с.albicans имеются рецепторы-к тяжелым цепям иммуноглобулина G (но не иммуноглобулинов М и А) человека. Взаимо- . действие этих рецепторов с.иммуноглобулином g приводит к десорбции последнего в окружающую среду и сопровождается блокированием локуса1 тяжелой цепи иммуноглобулина, связывающегося с рецептором клетки гриба.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ИЖ0МЕЦДА1Щ

1. С целью повышения эффективности диагностики кандидоза в комплекс серологических тестов следует включить определение авидности антител к антигену гриба и нейтрализующей активности их. Накопле- ' ние высокоавидных антител и их способность нейтрализовать высокие дозы специфического антигена являются показателями активной реакции со стороны гуморального иммунного ответа на кандидаинфекцию.

2. Для дифференциации ложноположительных титров антител от ис-тинноположительных необходимо исследовать спектр специфичности антител: преобладание; антител низкой специфичности свидетельствует о

том, что их накопление0не связано с активацией гуморального иммунного ответа антигеЬом гриба.

3. При хроническом кандидозе кожи и слизистых оболочек возможно развитие аутоиммунного компонента, усугубляющего течение основного заболевания.

Наличие органоспещкТшчеоких антител к ткани пораженного органа, в особенности в сочетания со снижением промежуточных и мелких иммунных комплексов в циркуляция, свидетельствует о возможности развития аутоиммунного процесса и является показанием для исследования иммунных комплексов в срезах биоптатного материала пораженного органа.

4. Аллергические заболевания, протекающие преимущественно по типу немедленной гиперчувствительности, сопровождаются снижением концентрации промежуточных и мелких циркулирующих иммунных комплексов. В мероприятия по неспецифической диагностике аллергических заболеваний должно быть включено определение относительной концентрации промежуточных и мелких иммунных комплексов в сыворотке крови. Этот тест не требует дорогостоящего оборудования и реактивов и более надежен, чем определение концентрации общего иммуноглобулина Е.

5. Микологическое обследование больных должно включать изучение адгезивной активности штамма с.albicans , ввделенного из патологического материала. Высокая адгезивная активность гриба является показателем инфицирования организма грибом, способным -вызвать заболевание. Особенно важно исследование адгезивной активности гри-бау кандиданосителей для выбора средств терапии и своевременной профилактики заболевания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНИЙ: ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Антигенный эритроцитарный диагяостикум для определения антител у больных кандидозом // Лаборат.дело. - I960. - J6 12. - С.620-

621.

2. Характеристика специфических антител у больных кандидознш вуль-вовагинитом // Вопросы микологии: Сб.трудов. ВыпД7. - Горький, 1981. - С.98-101.

3. К вопросу о специфическом гуморальном иммунитете у больных хан-, дидозом // Вестн.дермат. й венерол. - 1982. - №. 9. - С.22-25.

4. К вопросу О биологической активности Candida albicans// Микоти-ческая инфекция и сенсибилизация: Сб.трудов. - Л., 1982. - С. 14-17 (соавт. Караев 3.0.).

5. Способ диагностики кандидоза. Ангорское свидетельство В 342528/28-13 от 21 апреля 1982 г. , .

6. Иммунологические показатели у больных кандидозом //УП Всесоюзный съезд дермато-венерологов: Тез.докл., ч.П. - М., 1985.

- С.34 (соавт. Сардыко Н.В., Покровская О.Л., Голикова Е.А.)

7. Состояние иммунной системы у больных кандидозом // Еурн.мик-робиол., эпидемиол., иммунобиол. - 1987. - № И. - С.63-67 (соавт. Караев 3.0., Сардыко Н.В., Покровская О.Л., Голикова Е.А.).

8. Показатели специфической иммунной перестройки организма как ■ факторы диагностики и прогнозирования течения кандидоза //

Актуальные вопросы медицинской микологии: заболевании, вызванные условно-патогенными грибами": Тез.докл.Международного симпозиума. - Л.i 14-18 сентября 1987. - С.43-44 (соавт.Караев

з.0., Бабеико Г.А., Соловьева Г.И., Игнатьева С.М.).

9. Циркулирующие иммунные комплексы у больных кандидозом // Дурн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. - 1990. - № 5. - С.34-35 (соавт.Караев 3.0., Мирзабалаева А.К., Михайлова Н.А.).

10. Перекрестно реагирующие антигены Candida albicans в патогенезе кавдидоза //Дурн. микробиол., эпидешол., иммунобиол. -1990. - )Ь 10. - С.106-109 (соавт. Караев 3.0., Михайлова Н.А.).

11. Антигенный эритроцитарный диагностикум для определения антител к Candida albicans // Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии: Тез.конференции, ч.П. - Махачкала, 1990. - С.165 (соавт. Михайлова Н.А., Ильина В.Я., Могелев-,ская А.Б.).

12. Способ диагностики тенпталъпого кандидоза. Авторское свидетельство J' I6706C7 от 15 апреля 1991 г. (соавт. Караев 3.0., Михайлова Н.А., Мирзабалаева А.К.).

13. Аутоиммунный процесс у больных хроническим кандидозом кожи и -слизистых оболочек с проявлению,! кандидоза пищевода // Микозы

и.иммунодефициты": Материалы П Междунар.миколог, симпозиума. - Л., 1991.

14. Рецепторы Candida albicans для иммуноглобулина g человека. Там же (соавт. Караев 3.0.).

15. Immune disorders in Candidiasis. Current problems of opportunistic fundal infections Proceedings of the 4th International

Symposium of the Research Center for pathogenic Fungi and Microbial Toxicoses. Tokio. -Japan. - Febrary 2-3. - 1989. - P.ICB-III ( co-aut. Ksraev Z.O., Sardyko U.V., Poicrovskaya O.L. ).

16. Test sierologici nella diagnosi delle candiaosi // Micologia Dernatologica . - 1989. -V. 3 , jf> 3. - P.205-210 (co-aut. Karaev Z.O., Ignatieva S.M., wiikhailova N.A., Babenko G.A. Ilyina V.Ja. )„