Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клинико-экспериментальная и биофармацевтическая оценка оригинальных суппозитриев в комплексной терапии урогенитального кандидоза с учетом иммунного статуса

ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Клинико-экспериментальная и биофармацевтическая оценка оригинальных суппозитриев в комплексной терапии урогенитального кандидоза с учетом иммунного статуса"

На правах рукописи Я КУРЯТА СТЕЛЛА ИВАНОВНА

. ч

■о N

КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ОРИГИНАЛЬНЫХ СУППОЗИТОРИЕВ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО КАНДИДОЗА С УЧЕТОМ ИММУННОГО СТАТУСА

03.00.24 - микология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петероург, ¡999

На правах рукописи

КУРЯТА СТЕЛЛА ИВАНОВНА

КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ОРИГИНАЛЬНЫХ СУППОЗИТОРИЕВ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ УРОГЕНИТАЛЬНОГО КАНДИДОЗА С УЧЕТОМ ИММУННОГО СТАТУСА

03.00.24 - микология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург, 1999

(РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА

- гС(

Работа выполнена на кафедре кожных и венерических болезней Днепропетровской государственном медицинской академии, кафедре технологии лекарств Запорожского государственного медицинского университета и на базе Кировоградского областного кожно- венерологического диспансера.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.П.Федотов;

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Самцов Алексей Викторович;

доктор медицинских наук, профессор Антонов Виталий Борисович

Ведущее учреждение: Санкт-Петербургская государственная

медицинская академия им. И.И. Мечникова.

Защита состоится 9 апреля 1999 г. в 13 часов на заседании дисертационного совета Д 074.16.04. при Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования (193015, г. Санкт-Петербург, ул. Кирочная, Д. 41).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан 2 марта 1999 г.

Ученый секретарь совета доктор медицинских наук

А.В. Соболев

Актуальность проблемы

Проблема урогенптального кандидоза по прежнему остается чрезвычайно актуальной, что объясняется увеличением числа больных, трудностями в терапии, связанными со сложностью и неясностью многих вопросов патогенеза данного заболевания, частыми рецидивами, отсутствием отечественных высокоэффективных лекарственных форм для местного лечения (К.П. Кашкин, 1995; Ж.В. Степанова, 1995; G.J. Fischer, 1996). Причиной роста случаев урогенптального кандидоза, помимо беспорядочных половых контактов, большинство считают неадекватное применение антибактериальных антибиотиков широкого спектра действия, гормональных препаратов, цитостатиков, способствующих иммунодефициту и дисбактериозу (Г.И. Горшкова с соавт., 1994; М.А.Репина, М.М. Сафронова, 1995; N. Henseler, 1995; В. Foxman, 1996).

Частота обнаружения грибов рода Candida в гениталиях женщин, по данным различных авторов, колеблется от 10% до 78% (О.В. Писарева, 1990; А.И. Мирзабалаева, 1992; Ф.П. Романюк с соавт., 1997; В. Zdolseketal, 1995).

Дрожжевые грибы относятся к условно-патогенным грибам, поэтому для диагностики урогенитального кандидоза используется комплекс бактериоскопических, культуральных, серологических методов.

Недостаточные знания патогенеза урогенптального кандидоза способствуют определенным трудностям в его терапии (A.A. Кубанова с соавт., 1997; М.А. Гомберг, А.Л. Машкиллейсон, 1997). Лекарственный арсенал отечественной микологии ограничен в основном полиеновыми антифунгальными антибиотиками (нистатин, леворин, амфотерицин В и др.) и импортными азоловыми производными (кетоконазол, микозолон, клотримазол, дифлюкан, орунгал и др.).

Они, как правило, обладают узким спектром противогрибкового действия (В.Б. Антонов, Е.П. Баранцевич, 1997; А.К. Мирзабалаева, М.А. Кахели, 1997).

Наше внимание привлек малоприменяемый в микологии препарат ннтроксолин (5 - нитро - 8 - оксихинолин). Он обладает широким спектром антибактериальной активности. Вещее I во практически нетоксично, производится в достаточном количестве, недорогостоящее, разрешено к применению Фармакологическим комитетом МЗ СССР и РФ. Разработка лекарственных форм на основе отечественной субстанции нитроксолина для местного лечения урогенитального кандидоза представляет научный и практический интерес, позволяет расширить возможности местной терапии.

Все это и послужило предпосылкой для проведения данного клинико- экспериментального исследования.

Цель исследования

Разработать дифференцированные показания и методику комплексной терапии урогенитального кандидоза с местным использованием нитроксолина в форме суппозиториев и палочек с учетом клинических проявлений, течения заболевания, состояния иммунного статуса, и дать клинико- лабораторную оценку ее эффективности.

Для достижения цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности клинических проявлений и течения урогенитального кандидоза, а также некоторые патогенетические факторы его развития.

2. Определить в динамике наблюдения состояние иммунного статуса, неспецифических факторов защиты, а также уровень специфических ответных реакции во взаимосвязи с клиническими особенностями и течением заболевания, некоторые патогенетические факторы у пациентов, страдающих урогенитальным кандидозом, объединив больных в научно обоснованные клинико-терапевтические группы.

3. Разработать методику изготовления суппозиториев и палочек с нитроксолином, сравнительно оценив их биофармацевтические и антимикробные свойства в микробиологическом эксперименте, определить токсичность в остром и хроническом опыте, раздражающие и сенсибилизирующие свойства препарата.

4. На модели экспериментального кандпдоза предложить рациональную методику местного лечения кандидозного вульвовапшига у белых мышей с применением суппозиториев с нитроксолином, дать оценку ее эффективности на основании клинических, микроскопических, бактериологических и гистомор-фологических данных.

5. Разработать методику и дифференцированные показания комплексной терапии урогенитального кандидоза у женщин и мужчин с местным применением суппозиториев и палочек с нитроксолином, дать клинико-лабораторную оценку ее эффективности, предложить рациональные методы диспансеризации больных.

Научная новизна

Впервые на основании комплексного изучения клинических особенностей и течения урогенитального кандидоза, состояния иммунного статуса, все больные были объединены в научно обоснованные клинико- терапевтические группы: первая

характеризовалась распространенным поражением грибами кожи и слизистых оболочек, длительностью заболевания более двух лет с выраженным подавлением неспецифических факторов защиты, Т-звена иммунитета; вторая - поражением уретры, вульвы и влагалища с продолжительностью процесса менее двух лет, с незначительным угнетением неспецифических факторов защиты и снижением числа Т-лимфоцитов.

В соответствии с выделенными клинико-терапевтическими группами разработаны дифферен-цированные показания и методика комплексной терапии с дополнительным, помимо общепринятых препаратов, назначением либо циклоферона, нуклеината натрия и рибоксина (первая группа), либо спленина и оротата калия (вторая группа) с местным применением суппозиториев с нитроксолином, дана клинико-лабораторная

оценка ее эффективности.

Впервые предложен состав магистральных прописей суппозиториев и палочек, содержащих нитроксолин и другие компоненты, для местной терапии, установлены их биофармацевтические свойства и микробоцидная активность разработанных лекарственных форм при отсутствии токсических и раздражающих свойств.

Определена высокая специфическая активность суппозиториев и палочек в опытах in vivo при экспериментальном кандидозном вульвовагините, отсутствие изменений гистоморфологической структуты пораженных органов после лечения.

Практическая ценность работы

Врачам практического здравоохранения предложены дифференцированные показания, методика комплексной терапии с

местным применением нитроксолина при урогенитальном кандидозе.

Разработаны рецептура, технология изготовления, методика применения суппозиториев и палочек, содержащих нитроксолин и другие средства, для терапии урогенитального кандидоза.

Предложена методика распределения больных урогенитальным кандидозом на клинико-терапевтические группы с учетом клинических проявлений заболевания, сопутствующей патологии и состояния иммунного статуса.

Внедрение в практику

По материалам диссертации изданы и внедрены методические рекомендации:

1. Местная терапия урогенитальных заболеваний, передаваемых половым путем. - Днепропетровск, 1998. Утверждены ученым советом УНИИДиВ 7.05.1998, Протокол №6.

2. Лекарственные формы для лечения дерматофитий и кандидоза, приготавливаемые в условиях аптеки. - К., 1993. Утверждены НПО "Укрфармация" 12.06. 1992 и Минздравом Украины 14.06.1992.

Информационные письма:

1. Вапнальш супозиторн дтя комплексно'! терапп анаеробно'пнфекцн в дерматовенеролопчшй практищ. - Випуск 6 по проблем! "Фармашя". Пщстава: Р1шення РПК "Фармашя", протокол №7 вщ 28.04.1998 р., 2 с.

2. Приготовление уретральных палочек по магистраль-ным прописям для комплексного лечения кандидоза и микоплазмоза. -Запорожье, 1992.

На основании представленной нормативно-технической документации получено разрешение Фармакологического комитета МЗ

СССР и Фармакологической комиссии МЗ УССР на проведение клинических испытаний лекар-ственных препаратов "Суппозитории вагинальные с нитро-ксолином по 0,05г" ( Протокол № 10 от 10.07.1991 г.).

Результаты работы внедрены в практику работы Днепропетровского, Запорожского, Ивано-Франковского, Крымского, Львовского, Полтавского, Ривненского, Харьковского, Владивостокского и Кировоградского областных кожно-венерологических диспансеров.

Материалы диссертации внедрены в учебные процессы Днепропетровской государственной медицинской академии, Запорожского, Донецкого и Луганского государственных медицинских университетов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Нитроксолии обладает выраженной фунгицидной активностью по отношению к дрожжеподобным грибам рода Candida.

2. Препарат в виде суппозиториев нетоксичный, лишен сенсибилизирующих свойств, хорошо высвобождается из основы, проникает в глубокие слои дермы и в кровь, сохраняя длительное время фунгицидную активность при одноразовом введении.

3. Установлена высокая эффективность суппозиториев с нитроксолином в терапии экспериментального кандидозного вульвовагинита у белых мышей .

4. Для высокой эффективности терапии больных урогенитальным кандидозом пациенты подлежат распределению на две клинико-терапевтические группы на основе клинических проявлений, течения заболевания, состояния иммунного статуса, сопутствующих заболеваний, с дифференцированным назначением иммуномодуляторов и местно -суппозиториев с нитроксолином.

Апробация работы и публикации

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: - научно-практической конференции "Участие смежных медицинских служб (дерматовенерологии, акушер-гинекологии, урологии, службы СПИД и переливания крови, эпидемиологии, валеологии) в активном выявлении, лабораторной диагностике, терапии и профилактике болезней, передаваемых половым путем", (Витебск, 1-2.10.1998); -нашоналынй науково-практичнш конференцн з мгжнародною участю "Захворювання, що перелагаться статевим шляхом, в У крапп", (КиТв, 15-16.09.1998)г- научно-практическом обществе дерматовенерологов Днепропетровской области, (1997, 1998 гг.); - научно-практическом обществе дерматовенерологов Кировоградской области, (1998 г.); -м1жрегюналыий науково-практичнш конференци "Актуалып питания морфологи ! клнпчноТ медицини", (Дшпропетровськ, травень 1998 р.); - научно-практической конференции "Современные проблемы в дерматовенерологии, косметологии и управлении здравоохранением", (Харьков, апрель 1998 г).

По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методик работы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы. Работа изложена на 145 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц. Библиографический указатель включает 104 названия работ на русском и украинском языках и 78 на иностранных.

Основная часть работы выполнена лично при методической помощи кафедры кожных и венерических болезней Днепропетровской государственной медицинской академии и кафедры технологии лекарств Запорожского государственного медицинского университета.

Содержание работы

Комплексному клинико-лабораторному обследованию подвергнуто 120 женщин и 20 мужчин, больных урогенитальным кандидозом, в возрасте, преимущественно, 20 - 50 лет. Длительность инфекции до двух месяцев установлена у 25, более двух месяцев - у 115 больных. Диагноз устанавливали на основании жалоб больных, анамнестических данных, клинических проявлений, микроскопических (обнаружение ветвящихся и почкующихся форм гриба) и культуральных исследований (высев более 1000 КОЕ из 1 мм3 выделений), количественного определения дрожжеподобных клеток в стерильно взятой моче. На основании проведенных объективных исследований, пальпации и инструментального обследования у 93 женщин установлен вульвовагинит, у 7 - вульвит, у 10 - вагинит, у 20 - уретрит, у 5 -проктит, у 5-эндоцервицит. Следует отметить, что из 140 наблюдаемых больных 74,8 % регулярно жили половой жизнью , 25,2 % не имели половых связей. Из 140 больных 28 были работниками сельского хозяйства, 84 - служащими, 30 - рабочими, 6 - учащимися.

Всех пациентов подвергали комплексному клинико-лабораторному обследованию. Проводились общие анализы крови, мочи, кала и серологические исследования на сифилис. Исключали с помощью специальных методов исследования гонорейную, хламидийную, трихомонадную, уреаплазменную инфекции, гарднереллез.

Иммунологические методы включали подсчет числа Е-РОК, ЕАС - РОК, спонтанных и комплементарных розеткообразующих нейтрофилов (№ - РОК, № - РОК), нулевых лейкоцитов, нулевых нитрофилов, а также субпопуляций Т-лимфоцитов (хелперов и супрессеров), Т :Тч -индекса. Проводили постановку НСТ-теста, реакции бластной трансформации лимфоцитов с ФГА и кандида-антигеном, реакции торможения миграции лейкоцитов, связывания комплемента и пассивной гемагглютинации с грибковым антигеном, аппликационной пробы с ДНХБ. Определяли концентрацию ЦИК, уровень ^А, ^М, титр комплемента, фагоцитарное число, фагоцитарный индекс.

Проводили специальные биофармацевтические, фармакологические, микробиологические исследования. Осуществляли оценку состава, качества, специфическую активность предложенных суппозиториев с нитроксолином по магистральной прописи, а также заражение кандидозом белых беспородных мышеи и оценку результатов терапии с местным применением суппозиториев с нитроксолином.

В качестве возбудителя у 86% больных урогенитальным кандидозом выделена С.а1Ысапя, у 8 % - СлгоркаНя, у 6 % - С. кпке!.

Из перенесенных заболеваний чаще всего отмечали инфекционные, гнойно-воспалительные процессы, травмы, операции, неврит, радикулит; из сопутствующих - гинекологические заболевания, поражения желудочно-кишечного тракта, эндокринную патологию.

В общих анализах крови у 12 больных отмечено ускорение РОЭ, у 10- лейкоцитоз, при исследовании мочи - эритроциты, у 5 - следы белка, у 2 - наличие сахара за счет сопутствующих заболеваний. Серологические реакции на сифилис были отрицательными.

При изучении неспецифических факторов защиты у больных урогенитальным кандидозом зарегистрировано статистически

достоверное снижение фагоцитарной активности иейтрофилов: ФЧ равнялось 58,4 ± 3,0% против 87,2 ± 6,9 у здоровых людей (р < 0,05), а также значительное увеличение уровня ЦИК - 92,6 ± 6,2 единиц оптической плотности (в контроле 42,4 ± 3,8), особенно у лиц с сопутствующей патологией. В то же время показатели фагоцитарного индекса, а также активности комплемента существенно не отличались от таковых в группе контроля.

Изучение нейтрофильного розеткообразования показало, что у больных урогенитальным кандидозом наблюдалось статистически значимое снижение средних показателей числа спонтанных розеткообразующих иейтрофилов как в относительных, так и в абсолютных цифрах (18,2 ± 1,4% против 28,9 ± 3,9% и 0,7 ± 0,04 • 10''/л против 1,15 ± 0,05 •Ю'/л у здоровых лиц). Показатели комплементарного розеткообразования и числа нулевых иейтрофилов не отличались от лиц группы сравнения. Мы обнаружили статистически достоверное (р < 0,05) снижение активности НСТ-теста - 1,72 ± 0,04% против 2,20 ± 0,12% в контроле, особенно у пациентов с многоочаговыми поражениями кожи и слизистых, болеющих более двух лет.

Мы не смогли обнаружить статистически достоверных изменений средних показателей гуморального иммунитета (1§А и ^О, ЕАС -РОК), за исключением увеличения уровня ^М (2,2 ± 0,11 г/л при 1,21±0,17 г/л у здоровых людей), особенно у лиц, болеющих более двух лет и имеющих сопутствующие заболевания.

В отличие от этого, уровень Е - РОК у исследованных больных составил 34,4 ± 1,4% (0,91 ± 0,08* Ю'/л) в сравнении с группой контроля (58,2 ± 6,8% и 1,31 ± 0,15*109/л в контроле), а уровень Ло, наоборот, был повышен (0,92 + 0,08*107л против 0,52 ± 0.07»107л в

контроле), что было статистически значимым (р<0,05). Эти изменения были особенно наглядными у больных с многоочаговыми поражениями кожи и слизистых оболочек и при наличии сопутствующей патологии. При этом страдала и функция Т-лимфоцитов, что проявлялось снижением индекса Т:В-лимфоцитов (3,1 ± 0,09), в отличие от группы сравнения (4,3 ± 0,6). Об этом свидетельствовало и угнетение бластообразования на ФГА до 37,2 + 5,1% (61,4 ± 6,1 % у здоровых людей).

У больных урогенитальным кандидозом не изменялся уровень Тм и Т , как и их соотношение. Реакция бластной трансформации с кандида-антигеном (19,7 ± 1,3 %), как и реакция торможения миграции лейкоцитов (0,4 ± 0,09 %) были положительными у большинства больных урогенитальным кандидозом (р<0,05), в отличии от здоровых лиц (11,1 ± 1,4% и 2,0 ± 0,08 %), что свидетельствует о развитии гиперчувствительности замедленного типа. Наличие циркулирующих специфических антител подтверждалось положительными реакциями связывания комплемента с кандида-антигеном (у 16% исследованных) и пассивной гемагглютинации (у 28 % пациентов).

У больных урогенитальным кандидозом угнетался первичный иммунный клеточный ответ организма, о чем свидетельствовали отрицательные кожные реакции на аппликации ДНХВ у 48 из 74 исследованных. В то же время отрицательные результаты кожной пробы наблюдались у 7 из 42 здоровых лиц.

Таким образом, выявленные нами у больных урогенитальным кандидозом разнонаправленные изменения различных звеньев иммунитета свидетельствует о их фоновом значении в развитии инфекции. Особое место занимает нарушение реакций нейтрофилов . угнетение функции Т-лимфоцитов. В то же время кандидозная инфекция

способствует развитию ответных иммунологических реакций, что проявлялось сенсибилизацией Т-лимфоцитов, появлением циркулирующих антител.

В качестве возможного антикандидозного препарата был избран нитроксолин, который обладал минимальными токсическими, месгнораздражающими и сенсибилизи-рующими свойствами. Он 4 оказался достаточно активным в отношении дрожжеподобных грибов p. Candida, величина минимальной ингибирующей концентрации (МИК) составляла 15,56 мкг/мл. На первом этапе мы отметили in vitro низкую связываемость нитроксолина с сывороткой крови, плазмой и нативной донорской кровью, которая не зависела от концентрации и времени экспозиции. Было доказано, что фунгицидное действие нитроксолина в организме не снижается, поскольку он практически не взаимодействует с белками крови.

На втором этапе дана количественная оценка связываемости белков сыворотки крови донора человека с нитроксолином (методом равновесного диализа). Установлено, что процент взаимодействия вещества с белками крови не превышает 5,0 % и не зависит от концентрации и времени взаимодействия.

Основываясь на исследованиях связывания нитроксолина с белками сыворотки крови, была разработана и предложена методика количественного определения его в крови.

Проводился подбор состава суппозиторных основ, разработана рецептура и методика их изготовления, а также изучение стабильности мягких лекарственных форм. Для этого использовали твердый жир, полиэтиленоксид-400 и 1500, эмульгатор № 1 и другие основы. Реологические свойства суппозиториев определяли с помощью ротационного вискозиметра "Реостат-2". Также проводили изучение

динамики высвобождения нитроксолина из суппозиториев на аппарате АК-1 ("качающаяся корзина") с использованием свежепрепарированнои кишки крысы. Проведенные исследования показали, что наиболее быстрое высвобождение нитроксолина (наименьшая величина Т,0%) отмечается из композиции на полиэтиленоксидной основе. Жировые основы (твердый жир и заводская основа) обеспечивали пролонгированное высвобождение нитроксолина. В итоге для дальнейших исследований избрана основа - смесь ПЭ01500 и ПЭО-400 в соотношении 9:1. Так, через 30 минут из ПЭО-основы высвобождается 70% нитроксолина от общего количества, а из жировой основы - в 2,7 раза меньше.

При изучении фармакокинетики нитроксолина in vivo на кроликах породы шиншилла установлена хорошая распределяемость и проникновение вещества в межклеточную жидкость, а также значительно больший период пребывания в организме после его введения в суппозиториях на полиэтиленоксидной основе, по сравнению с суппозиториями на основе твердого жира.

Изучение структурно-механических свойств суппозиториев с нитроксолином показали преимущества ПЭО-основы перед жировой как более устойчивой при приложении механических воздействий.

Суппозитории с нитроксолином не вызывают раздражающего действия после нанесешь суппозиторной массы на слизистые оболочки глаз кроликов. Не установлено местнораздражающего действия суппозиториев с нитроксолином в дозе 50 мг/кг на слизистую оболочку прямой кишки.

Сенсибилизирующие свойства суппозиториев изучали на морских свинках, втирая вещество в эпилированныи участок кожи. У животных отсутствовали кожные проявления аллергии, нарушения в поведении на протяжении всего периода исследования.

Острая и хроническая токсичность изучена нами на крысах, кошках, собаках. Как показали результаты' исследований, применение суппозиториев с нитроксолнном на протяжении 12 часов не вызывало видимых отклонений от нормы основных физиологических параметров. Двухнедельное наблюдение показало, что у животных, которые получали суппозитории с нитроксолнном, и у животных контрольной группы, которые получали суппозитории - плацебо, общее состояние и пищевое поведение были практически идентичны. Животные всех групп остались активными, употребление пищи было нормальным, шерсть блестящая, чистая, потери массы не отмечалось. Показатели периферической крови, биохимические данные деятельности основных органов и систем не отличались от контрольного уровня. Изучение хронической токсичности суппозиториев с нитроксолнном свидетельствует о том, что на протяжении 3-х месяцев не наблюдалось изменений основных физиологических параметров животных. Вскрытие после окончания эксперимента показало отсутствие видимых морфологических изменений в тканях мозга, сердца, легких, почек, печени, пищеварительной и мочеполовой систем.

При изучении антифунгальной активности методом колодцев (диффузии в агар) установлено преимущество нитроксолина перед хинозолом, клотримазолом, мебетизолом. Минимальная ингибирующая активность нитроксолина не уступала клотримазолу и значительно превосходила другие антимикотики. Самой высокой противокандидозной активностью обладал состав из нитроксолина -0,05; мебетизола-0,1;борной кислоты-0,075 и буры-0,075; из него мы и рекомендовали изготовлять палочки и суппозитории на полиэтиленоксидной и жировой основах.

Заражение нелинейных белых мышей проводили по предложенной В.Л. Быковым методике с помощью циклофосфана и эстрона культурой

С.albicans от больном кандидозным вулыювагинитом. После развития клинических проявлений кандндоза у животных и подтверждения специфичности патологического процесса лабораторно все животные были разделены на три группы (по 20 мышей). Первая группа животных была опытной, ей проводилось лечение суппозиториями с нитроксолином дважды в день 6-7 дней. Вторую группу (сравнения) лечили суппозиториями с нистатином. Животным третьей группы вводили суппозиторную массу без лекарственных средств. У животных первой группы в более короткие сроки исчезали клинические проявления, наступала элиминация грибов (5-6 дни), отсутствовала смертность. Проведенные гистоморфологические исследования до начала, в процессе и после лечения с изучением структуры тканей влагалища у белых мышей установили, что суппозитории с нитроксолином, предложенные нами для местной терапии урогенитального кандндоза, не оказывали раздражающего действия. Они одновременно обладали выраженной противокапдидозной активностью, вызывали быструю элиминацию грибов, устраняли воспалительные явления, были более эффективными в сравнении с суппозиториями с нистатином.

Проведенные нами исследования послужили основанием для распределения больных урогенитальным кандндозом в конкретные научно обоснованные клинико-терапевтические группы, в зависимости от особенностей клинических проявлений и течения патологического процесса, состояния иммунного статуса.

В первой группе оказалось 100 больных опытной группы с поражением цервикального канала, уретры, кожи крупных кожных складок, реже -прямой кишки, языка, появлением левуридов, с длительностью патологического процесса более двух лет. В иммунном статусе, наряду с

угнетением неспецифических факторов защиты, отмечен рост количества ЦИК, слабовыраженные тесты торможения миграции лейкоцитов на кандида-антиген, угнетение кожных реакций на ДНХБ и реакций бластной трансформации лимфоцитов, при сохранении нормального уровня В-клеток.

Во вторую группу мы включили 40 пациентов опытной группы, больных кандидозным вульвитом, уретритом и вульвовагинитом, с длительностью заболевания до двух лет, с угнетением неспецифических факторов защиты, особенно снижением ФАЛ, и незначительным уменьшением числа Т- лимфоцитов.

Группа сравнения состояла из 100 больных урогенитальным кандидозом, которые были адекватны больным опытной группы по возрасту, полу, сопутствующим и перенесенным заболеваниям и длительности инфекции.

Все больные как опытной, так и группы сравнения получали традиционную терапию: витамины группы В, аскорбиновую кислоту, антигнетаминные препараты, метилурацил либо пентоксил, теоникол, фитин, алоэ, ФИБС.

Эти препараты назначались в различных комбинациях и в традиционных дозировках. Больным группы сравнения местно рекомендовались канестен (клотримазол) в виде жидкости и вагинальных таблеток, ванночки с 0,05 % раствором гидрокарбоната натрия, фурациллин 1:5000, 2 % водный раствор метиленовой сипи, генцианвиолетта, бура в глицерине.

Больным опытной группы назначали в течение 15 дней при остром процессе и 25 дней - при хроническом введение утром и вечером перед сном суппозиториев с нитроксолином во влагалище и в уретру по следующим прописям:

КНитроксолин - 0,05; мебетизол - 0,1; борная кислота - 0,075; бура-0,075; основа полиэтиленоксидная - до 2,2; свечи во влагалище.

2. Нитроксолин - 0,05; мебетизол - 0,025; борная кислота - 0,005; бура - 0,005; полиэтиленоксиды - 400 и - 1500 в соотношении 5:95 до получения палочки длиной - 3,5 см, диаметром - 0,35 см.

Рекомендовали отмену приема кортикостероидных препаратов, антибиотиков, антиметаболитов и цитостатиков по поводу фоновых сопутствующих заболеваний.

Больным первой группы дополнительно рекомендовали 12,5% раствор циклоферона в/м по 20 мл на 1, 2, 4, 6, 8, 11, 14, 17, 20, 23 сутки, нуклеинат натрия по 1,5 г в сутки 21 день и рибоксин по 0,2 г трижды в день 30 дней; больным второй группы - спленин по 1,0 мл 2 раза в день в/м 5-6 инъекций, оротат калия по 0,5 г 2 раза в день 20 дней.

Переносимость лечения была удовлетворительной, не отмечено аллергических реакций, местнораздражающего действия, явлений непереносимости.

Следует отметить , что п опытной группе, в отличие от группы сравнения, сократилось время пребывания на больничной койке на 5 дней, элиминация грибов - на 3,5 дня.

Выздоровление, подтвержденное клинико-лабораторными данными, наступило у 128 из 140 больных опытной группы (94,3%), а в группе сравнения - у 73 из 100 (73 %).

Отдаленные результаты изучены у 132 больных в сроки от 1 до 3 лет. Рецидивы заболевания зарегистрированы у 4,6% больных опытной группы и у 20,0% - группы сравнения.

К концу лечения у больных урогенитальным кандидозом, которые получали рекомендованные нами корригирующие иммунопрепараты и

местно суппозитории и палочки с нитроксолином, улучшался показатель ФЧ (78,2+4,2%), без достоверного изменения титра комплемента и уровня ЦИК. К концу лечения не претерпевали существенных изменений показатели гуморального иммунитета. В то же время в опытной группе к концу лечения статистически достоверно возрастало количество Е-РОК (до 45,2 ± 1,2% и 1,12± 0,05»107л), Т-хелперов (до 25,9 ± 2,0% и 0,26 ± 0,01»107л), наблюдалось снижение Ло до 0,59 ± 0.05» 107л.

К концу лечения не отмечено достоверных сдвигов РСК и РПГА с грибковым антигеном, нейтрофильных тестов, в то же время заметно активизировалась реакция лимфоцитов на ФГА (43,1 ± 2,8%). Менее показательными оказались иммунные сдвиги у больных хроническим урогенитальным кандидозом с выраженной сопутствующей патологией.

В связи с тем, что отмечены рецидивы урогенитального кандидоза, по-видимому, не происходит окончательной нормализации иммунного статуса и общего состояния, что и побудило нас рекомендовать целый комплекс диспансерных мероприятий.

Выводы

1. Нарушение иммунного статуса у исследованных больных урогенитальным кандидозом проявилось снижением числа Т-клеток, спонтанных нейтрофильных розеток, повышением уровня ^М, ЦИК. уменьшением соотношения Т: В-лимфоцитов, угнетением РБТсФГА, снижением фагоцитарного числа и НСТ-теста.

2. Нитроксолин обладает высокой антимнкотической активностью и низкой связываемостью с белками крови, что позволило включить его, наряду с мебетизолом, борной кислотой и бурой, в суппозитории и уретральные палочки на полиэтиленоксидной основе, которые

оказались достаточно стойкими к механическим факторам, обладали стабильными биофармацевтическими и антифунгальными качествами при хранении на протяжении более двух лет, а также быстрой и полной высвобождаемостыо из них лекарственных препаратов.

3. Суппозитории с нитроксолином не обладали местнораз-дражающим действием, острой и хронической токсичностью, характеризовались быстрым проникновением вещества в кровь и ткани, что позволило максимально поддерживать его фунгицидную концентрацию на протяжении 6 часов.

4. Получен благоприятный эффект в терапии экспериментального кандидозного вульвовагинита суппозиториями с нитроксолином в сравнении с контрольной группой животных, леченных местным применением традиционных средств, что проявлялось регрессом клинических проявлений на 3-4 дня быстрее и элиминацией гриба в среднем на 2,5 дня раньше, нормализацией лабораторных показателей, купированием патогистологических изменений.

5. Разработанная нами комплексная терапия урогениталыюго кандидоза, включающая в себя иммуномодуляторы (циклоферон, спленин, нуклеинат натрия, рибоксин, оротат калия), рекомендуемые в зависимости от общего состояния, особенностей клинических проявлений, его длительности, сопутствующих и перенесенных заболеваний, иммунного статуса, позволила добиться излечения у 94,3% больных кандидозом (в группе сравнения - 73%), сократить число рецидивов в 3 раза, добиться благоприятных сдвигов в иммунном статусе (повышение активности Т-системы, нейтрофильных реакций, снижение ЦИК).

Практические рекомендации

1. В целях выбора рациональной патогенетически обоснованной терапии больных урогенитальным кандидозом необходимо на основании клинических особенностей, течения инфекции, лабораторных исследований определить принадлежность пациентов к одной из двух клинико-терапевтических групп.

2. В комплексной терапии больных урогенитальным кандидозом, наряду с этиотропными препаратами, необходимо рекомендовать средства для коррекции иммунного статуса.

3. При лечении больных урогенитальным кандидозом целесообразно, наряду с общей терапией, назначать местно суппозитории и палочки, содержащие нитроксолин и другие ингредиенты, приготавливаемые по предлагаемой прописи.

4. Больные урогенитальным кандидозом после окончания лечения нуждаются в диспансеризации и назначении профилактических курсов лечения.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Курята C.I. БтфармацевтичнТ характеристики супозиторних композицш з штроксолшом для мюцевоТ терагшурогештальногакандидозу //Медичш перспективи. - Днтропетровськ, 1992.-Т.III, №2. - С. 79-81.

2. Курята С.И. Динамика показателей иммунного статуса у больных урогенитальным кандидозом в процессе комплексной терапии с использованием иммуномодуляторов и местно - оригинальных суппозиториев // Дерматовенерология, косметология, сексопатология. -

Научно-практический журнал. - Днепропетровск. - 1998.- № 1,-С. 138-141.

3. Курята C.I. Експериментальна оцшка ефективносп суппозиторпв з h'itроксолшом в иисцевш TepaniY кандидозного кольшту у мишей // 1нфекцшш хвороби. - Тернопшь, 1998. - №3. - С.35-40.

4. Курята C.I., Федотов В.П. Неспециф1чш фактори захисту у жшок, хворих на урогештальний кандидоз // Современные проблемы в дерматовенерологии, косметологии и управлении здравоохраненем (сборник научно-практических работ). 88 Выпуск 2. - Харьков, 1998.-С. 19-23.

5. Курята С.И. Количественное содержание нитроксолина в сыворотке крови и в суппозиториях // Актуальш питания дерматовенерологи (науково-практичний зб1рннк статей). Випуск 11,-Дшпропетровськ, 1998. - С. 100- 102.

6. Курята C.I. Особливост1 д1агностики i кл!н1чних прояв1в уроген1тального кандидозу у ж!нок // Актуальн1 питания морфологи i кл1|ичн01 медицини (науков1 npaqi межрег1ональноУ науково-практичноУ конференцн). - Дшпропетровськ, 1998. - С. 164-169.

7. Курята С.И. Моделирование фармакокинетики и определение биодоступности суппозиториев с нитроксолином в опытах in vitro // Актуальные проблемы неврологии. - Днепропетровск, 1998. - С. 127-128.

8. Курята С.И. Фармакокинетика и определение биологической доступности нитроксолина из суппозиториев для терапии урогенитального кандидоза // К 200-летию областной клинической больницы им. И.И. Мечникова (сборник научно-практических статей).-Днепропетровск, 1998. - С. 259-260.

9. Курята С.И., Федотов В.П. Диагностика урогенитального кандидоза // Захворювання, що передаються статевим шляхом (тези науково-практичноУ конференцн 15-16 вересня 1998 р.). - КиУв, 1998. - С. 42.

10. Курята С.И. Физико-химические, микробиологические и биофармацевтические параметры нитроксолина // Актуальш питания дермато-венерологи" (науково-практичний зб1рник статей). Випуск 11. - Днтропетровськ, 1998. - С. 166-168.

11. Курята С.И., Федотов В.П. Т и В-звено иммунитета у больных урогенитальным кандидозом II Участие смежных медицинских служб (дерматовенерологии, акушер-гинекологии, урологии, службы СПИД и- переливания крови, эпидемиологии, валеологии) в активном выявлении, лабораторной диагностике, терапии и профилактике болезней, передаваемых половым путем (тезисы научно-практической конференции 1-2 октября 1998 г.) - Витебск, 1998. - С.34-35.

12. Курята С.И., Дюдюн А.Д. Дифференцированные показания и обоснование методики комплексной терапии больных урогенитальным кандидозом // Вестник проблем биологии и медицины. Выпуск 23. -Полтава-Харьков, 1998. - С.68-72.

К|'ровоградське державно впдавшщтво Ум. друк. арк. 0,7. Обл.- вид. арк. 0,95. Формат 60x84/16. Друк офсетний. Зам. № 12002.